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UFRRJ
INSTITUTODETECNOLOGIA
PROGRAMADEPÓS-GRADUAÇÃOEMCIÊNCIAETECNOLOGIADE
ALIMENTOS
DISSERTAÇÃO
Avaliaçãobiológicadocálciodacascadeovode
galinha(GallusGallus,L.)empóemratas(Rattus
norvegicus,Wistar)saudáveisecomosteoporose
induzida
JulianadosSantosVilar
2009
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2
UNIVERSIDADEFEDERALRURALDORIODEJANEIRO
INSTITUTODETECNOLOGIA
PROGRAMADEPÓS-GRADUAÇÃOEMCIÊNCIAETECNOLOGIA
DEALIMENTOS
AVALIAÇÃOBIOLÓGICADOCÁLCIODACASCADEOVODE
GALINHA(GallusGallus,L.)EMPÓEMRATAS(Rattusnorvegicus,
Wistar)SAUDÁVEISECOMOSTEOPOROSEINDUZIDA
JULIANADOSSANTOSVILAR
SobaOrientaçãodosProfessores
Dr.ArmandoUbirajaraOliveiraSabaaSrur
e
Dr.RuyGarciaMarques
Dissertação submetida como
re
quisitoparcialparaaobtençãodo
grau de Mestre em Ciências
, no
Programa de Pós-
Graduação em
CiênciaeTecnologiadeAlimentos,
Área de Concentração em Ciência
deAlimentos
Seropédica,RJ
Marçode2009
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636.0855
V697a
T
Vilar,JulianadosSantos,1983-
Avaliaçãobiológicadocálciodacasca
deovodegalinha(Gallusgallus,L.)empó
emratas(Rattusnorvegicus,Wistar)
saudáveisecomosteoporoseinduzida/
JulianadosSantosVilar–2009.
97f.:il.
Orientador: Armando Ubirajara Oliveira
SabaaSrur.
Dissertação (mestrado) – Universidade
Federal Rural do Rio de Janeiro, Programa
de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia
deAlimentos.
Bibliografia:f.50-64
1. Ave – Alimentação e rações – Teses.
2. Cálcio na nutrição humana - Teses. 3.
Ovos – Teses. 4. Osteoporose – Teses. I.
Srur, Armando Ubirajara Oliveira Sabaa,
1945-. II. Universidade Federal Rural do
Rio de Janeiro. Programa de Pós-Graduação
emCiênciaeTecnologiadeAlimentos.III.
Título.
4
UNIVERSIDADEFEDERALRURALDORIODEJANEIRO
INSTITUTODE
TECNOLOGIA
PROGRAMADEPÓS-GRADUAÇÃOEMCIÊNCIAETECNOLOGIADE
ALIMENTOS
JULIANADOSSANTOSVILAR
DissertaçãosubmetidacomorequisitoparcialparaobtençãodograudeMestreemCiências
,
noProgramadePós-GraduaçãoemCiênciaeTecnologiadeAlimentos,áreadeConcentração
emCiênciadeAlimentos.
DISSERTAÇÃOAPROVADAEM____/____/_______
ArmandoUbirajaraOliveiraSabaaSrur.DSc.USP
(Orientador)
RuyGarciaMarques.DSc.UFMG
(Co-orientador)
AloísiodaSilvaPinto.(DSc.)UFV
(Membro)
MariaCristinaJesusFreitas.(DSc.)UNICAMP
(Membro)
VeraLúciaMathiasdaSilva.(DSc.)UFRRJ
(Suplente)
5
DEDICATÓRIAS
Dedicoestetrabalhoaosmeuspaiseirmãsquesempreincentivaramaminhacarreira,
acreditaramnomeusonhoedividirammomentosdealegriaesacrifíciosdurantearealização
destetrabalho.
Emespecial,dedicoàminhairmãFabiana,porterparticipadoativamentedestavitória
comigo,estandoaomeulado,duranteasfasesmaisdifíceisdoensaioexperimental.
6
"Émelhortentarefalhar,
quesepreocupareveravidapassar;
émelhortentar,aindaqueemvão,
doquesesentarfazendonadaatéofinal.
Euprefironachuvacaminhar,
queemdiastristesemcasameesconder.
Prefiroserfeliz,emboralouco,
queemconformidadeviver.”
(MartinLutherKing)
7
AGRADECIMENTOS
ADeus,quesempresefezpresenteemtodososmomentosdaminhacaminhadae
concedeu-mesaúdeeféparaprosseguirdiaapósdia.
Aomeuorientador,Dr.ArmandoUbirajaraOliveiraSabaaSrur,pelapossibilidade,
pelaspalavrasqueproporcionaramânimo,portodoconhecimentoquemefoitransmitidoe
peloincentivoetempodedicadoaodesenvolvimentodestetrabalho.
AoDr.RuyGarciaMarques,meuco-orientador,quealémdedisponibilizarobiotériodo
LaboratóriodeCiênciasMédicasdaUniversidadeEstadualdoRiodeJaneiroparaa
realizaçãodoensaiobiológico,semprefoimuitoatenciosoesolícitoàsminhasdúvidase
questionamentos.
AoDr.GilsonTellesBoaventuradaUniversidadeFederalFluminensequepermitiua
utilizaçãodealgunsequipamentosdeseulaboratórioparaqueeupudesserealizara
elaboraçãodasraçõesexperimentais.
ÀindústriadealimentosSOHOVOSABBrasil-Sorocaba/SPqueforneceuamatéria-prima
essencialparaarealizaçãodestetrabalho.
AoDr.AloísiodaSilvaPintopelagentilezaemmerecebernaUniversidadeFederalde
Viçosaparacompartilharseuconhecimentoeexperiência.
AosmédicosveterináriosCarlosEduardoRodriguesCaetanoeÉricaSilvaLimaque,alémda
amizade,estiveramsempredispostosacolaborarcommuitoempenhoededicaçãonoensaio
biológico.
AoLaboratóriodeLipídes,napessoadeJoséFirminoNogueiraNetoquedisponibilizouo
laboratórioe,possibilitouassim,arealizaçãodasanálisesbioquímicasehematológicas.
ÀMarciaCristinadaSilva,queacreditounaminhacapacidadeeincentivouacontinuação
desseprocesso.
AoamigoFábiodaSilvaGomesquedisponibilizouseupreciosotempoecompartilhouseus
conhecimentosestatísticosparaanalisarosdadosdestetrabalho.
AJuarezVicente,técnicodoLaboratórioAnalíticodeAlimentoseBebidasdaUniversidade
FederalRuraldoRiodeJaneiro,peloauxílionasanálisesdecomposiçãocentesimal.
AEMBRAPA-AgroindústriadeAlimentos,naspessoasdoDr.JoséLuísAscheri,doDr.
RonoelGodoyedoSidneyPachecopeladisponibilizaçãodeequipamentoseexecuçãode
análisesimportantesparaaobtençãodealgunsresultadosdestetrabalho.
APontifíciaUniversidadeCatólicadoRiodeJaneiro,napessoadoDr.NobertMikeley,
responsáveltécnicodoLaboratóriodeQuímicadoInstitutodeQuímica,pelarealizaçãode
análisesdegrandecontribuiçãoparaestapesquisa.
8
AoCNPq,pelaconcessãodabolsadeestudos.
ÀUniversidadeFederalRuraldoRiodeJaneiro,pelaoportunidadeconcedidaparaa
realizaçãodocursoeaocorpodocentepeloensinamento.
Aosamigosqueconquisteiduranteestecurso,osquaisfaçoquestãodenomear:Carlada
SilvaTeba,CarolinaCroácia,GeisaRocha,IsabelGuimarães,JohnMartíneVanessaChagas
pelacompanhia,pelasorações,pelatorcida,peloincentivonosmomentosdecansaçoepor
todotipodeajuda.
AJuanAntonioRuanoOrtízpeloincentivo,compreensão,paciênciaecolaboraçãodurante
fasesdifíceisnodecorrerdestajornada.
Atodosquetorcerampormimepelosucessodomeutrabalhoequeporventuranão
tiveramseusnomescitadosaqui,perdoem-meafalhaeobrigadaportudo.
9
BIOGRAFIA
JulianadosSantosVilarnasceuemBonsucesso,RiodeJaneiro(RJ),nodia24deagostode
1983,filhadeAntonioFranciscoVilareJoanadosSantosVilar,concluiuoensinomédiono
ano de 2001, no Instituto de Educação Santo Antônio-RJ. Foi admitida no vestibular da
UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro(UFRJ)emsetembrode2002,ondeobteveotítulode
Nutricionistaemagostode2006.
ComoestudantedegraduaçãofoimonitoradeBromatologia,
período no qual desenvolveu atividades relacionadas com pesquisas científicas e docência.
Paralelamenteaisto,tambémdesenvolviaatividadesd
eIniciaçãoCientíficadoLaboratóriode
Análise de Alimentos do Instituto de Nutrição da UFRJ sob orientação do Dr. Armando
UbirajaraOliveiraSabaaSrur,onderealizoutrabalhos,visandoavaliaçõesquímicasefísicas
dediversasmatérias-primas,cujosresultadosforamapresentadosemcongressoseserviram
debaseparaelaboraçãodeartigocientificoesuaposteriorpublicação.Emsetembrode2006,
iniciouatividadesprofissionaisnaáreadenutrição,enquantoestudavaparaprestarexamede
seleçãoparacursodePósGraduaçãoemCiênciaeTecnologiadeAlimentosnaUniversidade
FederalRuraldoRiodeJaneiro,noqualfoiaprovadaaofimdessemesmoano.
10
RESUMO
VILAR,J.S.Avaliaçãobiológicadocálciodacascadeovodegalinha(GallusGallus,L.)
empóemratas(Rattusnorvegicus,Wistar)saudáveisecomosteoporoseinduzida.2009.
92pDissertação(MestradoemCiênciaeTecnologiadeAlimentos).InstitutodeTecnologia,
Departamentode TecnologiadeAlimentos,UniversidadeFederal Ruraldo Rio deJaneiro,
Seropédica,RJ,2009.
A casca de ovo, subproduto agro-industrial pode ser considerada potencial fonte de cálcio
paraohomem,sendoumdosingredientesdemultimisturasalimentaresdistribuídasnoBrasil
comoestratégiadecombateàdesnutrição.Afaltadeinformaçõesquímicasdacascadeovo
motivou a realização deste trabalho que visou desenvolver tecnologia para obtenção deste
produto na forma de pó, determinar o seu conteúdo de nutrientes e avaliar a utilização
biológicadafraçãodecálcioemratas saudáveise/oucomosteoporoseinduzidaatravésde
ooforectomia e glicocorticoterapia. Depois de lavadas em água corrente e imersas por 15
minutosemsoluçãocloradacontendo200ppmdeclororesiduallivre(CRL),ascascasforam
centrifugadasa2.000rpm(g=9,80),submetidasàsecagememestufacomcirculaçãodear
aquecidoa55±5ºCetransformadasempócomauxíliodeummoinhodefacas,tendosido
obtidoumrendimentode98,45±0,70%.Pesquisasdemicroorganimos:bactériasmesófilas
aeróbias,boloreseleveduras,coliformesa35°Cea45°CeSalmonellaspp.spp,mostraram
a eficiência do processo empregado. Determinações analíticas revelaram que 100g desse
produtocontinhabaixoteordeumidade(1,3490±0,0274g),resíduomineralfixoequivalente
a91,9600±0,2218gebaixoteorcalórico(30,6823±4,9069Kcal),provenientesde4,3693±
0,3977gdeproteínas,0,7837±0,0560gdelipídiose1,5379±0,7029gdecarboidratostotais,
além de 30.263,72mg de cálcio. Rações para manutenção de ratos Wistar adultos foram
preparadas (controle), nas quais a fonte de cálcio foi substituída pela casca de ovo e
suplementadas ou não com vitaminas D e K (experimentais). Ratas saudáveis ou com
osteoporoseinduzida,divididasem8gruposreceberamraçãoeáguaadlibitum,durante33
dias.Foramavaliadososparâmetrosmorfológicos,bioquímicosehematológicosdascobaias.
Asratasdo grupo 7(raçãosemvitaminaD)apresentaramfêmuressignificativamentemais
pesados do queos dos animais dogrupo 6 (ração sem vitaminaK), oquepode sugerir a
maiorimportância da vitaminaDemrelaçãoavitaminaKnoprocessodeformaçãoóssea.
Quanto ao peso dos rins, diferenças distintas entre os órgãos direito e esquerdo foram
encontradas.Amédia dos pesosdos rinsdasratas dogrupo3(ração comcálcio dacasca)
apresentou-se, significativamente, maior do que os rins dos demais animais utilizados no
experimento. Em relação ao fósforo contido nos ossos animais do grupo 6 (ração sem
vitamina K)diferiramdosanimaisdogrupocontrole,apresentandoníveisdefósforoósseo
semelhantesaogrupobasaleinferioresaosgrupos2(osteoporótico+raçãodemanutenção),
8 (ração suplementada com cálcio da casca e vitaminas D e K) econtrole. Emrelação ao
magnésio e cálcio ósseos, os animais dos grupos 2 e 8 não apresentaram diferenças
significativas quando comparadosaos animais do grupocontrole, e osanimaisdo grupo 5
(raçãosemvitaminasDeK)apresentarammenorteordecálcioósseoemcomparaçãocomos
demaisgrupos(p<0,05).Comrelaçãoaoteordecálcioretido nosossos,osteoresmédios
encontrados nosfêmuresdosanimaisdos grupos2e8 não diferiramsignificativamentedo
grupo controle. A utilização biológica de cálcio não diferiu entre os animais dos grupos
controle,2e8,mostrandoqueotratamentonoqualnãofoirealizadoaincorporaçãodacasca
deovocomofontedecálciorespondeudeformasimilaraqueleemqueasuplementaçãode
cálciofoirealizadaconcomitantementecomadasvitaminasDeK.Quandoasuplementação
11
decálciofoirealizadacomacascadeovoempóeutilizando-seasvitaminasDeKemníveis
basais,ounaausênciadessasvitaminas,oefeitoobservadofoideumautilizaçãobiológicade
cálciomenoremcomparaçãoaogrupocontrole.Osresultadosdasanáliseshematológicase
defosfatasealcalinaecálciosérico dosgruposestudados,em suamaioria,foramsimilares
aos do grupo controle. Os animais do grupo 3 (ração com casca) foram os únicos que
apresentaram resultadosquediferiramdosanimaisdo grupocontroleno quedizrespeitoa
concentraçãomédiadefósforosérico.
Palavras-chave:cascadeovo,cálcio,osteoporose.
12
ABSTRACT
VILAR,J.S.Biologicalevaluationofcalciumfromchickeneggshell(GallusGallus,L.)
powder in healthly and osteoporosis induced female rats (Rattus norvegicus, Wistar).
2009.
122p Dissertation (Master Science in Food Technology). Instituto de Tecnologia,
Departamentode TecnologiadeAlimentos,UniversidadeFederal Ruraldo Rio deJaneiro,
Seropédica,RJ,2009.
Theeggshell,agroindustrialby-productcanbeconsideredlikeapotentialsourceofcalcium
for human, being one of the ingredients of food multimixtures distributed in Brazil like a
strategytocombatmalnutrition.Thelackofchemicalinformationsabouteggshellcausedthe
realizationofthisworkthataimedtodevelopatechnologytoobtainaproductinapowder
form, determine its content of nutritious and evaluate the biological use of its fraction of
calcium in healthly female rats and/or osteorosis induced by castration and glucorticoid
therapy.Afterwashedinwaterandimmersedin200ppmsodiumhypochloritesolutionfor15
minutes,theshlleswerecentrifugatedto2.000rpm(g=9,80),driedwithheatedaircirculation
to 55 ± 5ºC and turned into a powder with a mill, obtained a profit of 98,45 ± 0,70 %.
Investigationsoftotalbacterialaerobiccounts,moldandyeasts,coliforms35°Cand45°C
and Salmonella spp., showed the efficiency of the process employed. Analytical
determinationsshowedthat100gofthisproductcontainedlowmoisture(1,3490±0,0274g),
ash equivalent to 91,9600 ± 0,2218g and low caloric value (30,6823 ± 4,9069 Kcal),
originated from 4,3693 ± 0,3977g of proteins, 0,7837 ± 0,0560g of lipídis and 1,5379 ±
0,7029g of total carbohydrates, besides 30.263,72 mg of calcium. Diet for maintenance to
adultratsWistarwereprepared(control),inwhichthesourceofcalciumwassubstitutedby
egghellpowderandsupplementedornotwithvitaminsDandK(experimentals).Healthyor
osteoporosisinducedrats,dividedinto8groupsreceiveddietandwateradlibitum,during33
days. Morphological, biochemical and hematological parameters were evaluated. Rats of
group7(withoutvitaminD)presentedfemurssignificantlymoreheavythanratsofgroup6
(withoutvitaminK),whatcouldsuggestthebiggestimportanceofthevitaminDcomparedto
vitamin K in the process of bone formation. For the kidneys were observed differences
between the rightandleft organ.These organs of group3 (dietwith calciumof theshell)
presentedaverageofweightssignificantlybiggerthantheotherexperimentalgroups.Relate
tobonecontents ofphosphorus,animalofgroup 6(dietwithoutvitaminK)were different
from the animals of control group, with similar levels to basal group and inferiors to the
groups2(osteoporosisinduced+dietofmaintenance),8(dietsupplementedwithcalciumof
theshellandvitaminsDandK)andcontrolgroup.Relatetobonecontentsofmagnesiumand
calcium,theanimalsofthegroups2and8didnotpresentsignificantdifferencescomparedto
control group, and the animals of group 5 (diet withoutvitamins D and K) presented less
contentsofcalciumintheirbonescomparedtoothergroups(p<0,05).Thecalciumpresentin
thebonesofgroups2and8didnotdefersignificantlyofthegroupcontrol.Thebiologicaluse
ofcalciumdidnotdeferbetweentheanimalsofthegroupscontrol,2and8,showingthatthe
treatmentinwhichtherewasusedeggshelllikeasourceofcalciumwassimilarthatinwhich
thesuplementationofcalciumwithvitaminsDandKweredone.Whenthesuplementationof
calcium from eggshell powder using vitamins D and K in basal levels, or without these
vitaminswasdone,thebiologicaluseofcalciumwaslowincomparisontocontrolgroup.The
results of hematological analysis, alkaline phosphatase and calcium serum of the groups
studied,inmostofallresults,weresimilartocontrolgroup.
Theanimalsofthegroup3(diet
13
withcalciumoftheshell)weretheonlyonewhopresentedresultstophosphorusserumthat
differedfromtheanimalsofcontrolgroup.
Keywords:eggshell,calcium,osteoporosis.
14
LISTADETABELAS
Tabela1.Raçõesoferecidasaosdiferentesgruposexperimentais......................................
22
Tabela2.ComposiçãocentesimaleVETdacascadeovodegalinhaempó.....................
30
Tabela3.ComparaçãodosresultadosdecomposiçãocentesimaleVETencontradosna
casca de ovo de galinha em pó com os resultados obtidos por SANT’ANA et al.
(2000)....................................................................................................................................
31
Tabela 4. Perfil de aminoácidos essenciais presentes na casca de ovo em pó e a
comparaçãocomaproteínapadrãoestabelecidapelaFAO(1985).....................................
31
Tabela5.Valoresmédiosdoteordeminerais(mg/100g)presentenacascadeovo..........
33
Tabela6.Necessidadedeconsumodecascadeovoempó(g)paraatenderasdemandas
nutricionaismagnésio,sódio,fósforoepotássioparaadultos..............................................
34
Tabela7.Concentraçõesdemineraisencontradosnacascadeovoempóecomparação
comcascasdeovoempódeorigemeslovaquianaealemã.................................................
35
Tabela8.Teoresdemetaispesadosencontradonacascadeovoempóeacomparação
comconchadeostrapequenaegrandeeoslimitesestabelecidospelalegislação..............
37
Tabela 9: Microbiologia da casca de ovo in natura, desidratada e higienizada com
soluçãoclorada.....................................................................................................................
37
Tabela10.Rendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovo......................................
38
Tabela11.Teoresmédiosdeumidadedeequilíbrio(UE)emfunçãodatemperaturae
umidaderelativa(UR)........................................................................................................
39
Tabela 12. Valores de média e desvio padrão do peso corpóreo (g) dos animais na
cirurgia,nosacrifícioeganhodepesototalnoperíodode33dias......................................
41
Tabela13.Valoresdemédiaedesviopadrãodospesosdosfêmureserinsnosgruposde
animaisexperimentais..........................................................................................................
43
Tabela14.Valores demédiae desviopadrão dosteoresde fósforo,magnésio, cálcio
ósseos, cálcio retido no fêmur e utilização biológica de cálcio nosgruposde animais
experimentais........................................................................................................................
44
Tabela15. Valoresdemédia edesviopadrãodosteoresséricosdefosfatasealcalina,
cálcioefósforonosgruposdeanimaisexperimentais.........................................................
45
Tabela 16. Valores de média e desvio padrão das análises hematológicas (série
vermelha)dosgruposdeanimaisexperimentais..................................................................
47
Tabela17.Valoresdemédiaedesviopadrãodasanáliseshematológicas(sériebranca)
dosgruposdeanimaisexperimentais...................................................................................
48
15
LISTADEQUADROS
Quadro1.Fatoresquecontribuemparaperdaóssea...........................................................
4
Quadro2.Teordecálcioemleiteederivadosem100gdealimento................................ 9
Quadro 3. Ingestão Dietética de Referência (DRI) para humanos, emdiversas faixas
etárias....................................................................................................................................
9
Quadro 4. Soluções saturadas utilizadas para a obtenção das respectivas umidades
relativas.................................................................................................................................
21
16
LISTADEFIGURAS
Figura1.Representaçãoesquemáticaparaobtençãodasumidadesdeequilíbrio................. 21
Figura2.Áreaabdominaltricotomizadadoanimalemdecúbitodorsalapósanestesia....... 24
Figura3.Aspectodolocaledimensãodalaparotomiamediana...........................................
25
Figura4.Aspectodaincisãoedissecçãodoplanomuscular.................................................
25
Figura5.Aspectodaexposiçãoeidentificaçãodosovários..................................................
26
Figura6.Aspectodopinçamentoeexcisãodoovário...........................................................
26
Figura7.AspectodaligaduradapartesuperiordatrompadeFalópio.................................
26
Figura8.Aspectodasuturanoplanoenvolvendoperitônioemusculatura...........................
27
Figura9.Aspectodasuturanoplanoenvolvendotecidosubcutâneoepele......................... 27
17
LISTADEGRÁFICOS
Gráfico1.Curvadeadsorçãoedesorção(NaOH)................................................................. 39
Gráfico2.Curvadeadsorçãoedesorção(MgCl
2
.6H
2
O).......................................................
39
Gráfico3.Curvadeadsorçãoedesorção(NaBr)...................................................................
39
Gráfico4.Curvadeadsorçãoedesorção(NaCl)....................................................................
39
Gráfico5.Curvadeadsorçãoedesorção([(NH
4
)
2
SO
4
])........................................................
40
Gráfico6.Curvadeadsorçãoedesorção(K
2
CrO
4
)...............................................................
40
Gráfico7.Distribuiçãogranulométrica,emvolume,daspartículasdacascadeovoempó. 40
18
LISTADEANEXOS
Anexo1.Tabeladotamanhodaspartículasdacascadeovoempó.......................................
60
Anexo2.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnospesosiniciaisdos
animaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais..................................................
61
Anexo3.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnospesosnosanimais,
apósamorte,entretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.........................................
62
Anexo4.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnoganhodepesoentre
todosospossíveisparesdegruposdeanimais........................................................................
63
Anexo5.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnospesosdosfêmures
direitosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais..............................
64
Anexo6.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnospesosdosfêmures
esquerdosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais..........................
65
Anexo 7. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos pesos dos rins
direitosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais..............................
66
Anexo 8. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos pesos dos rins
esquerdosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais..........................
67
Anexo9.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdefósforo
ósseo dos fêmures esquerdos dos animais entre todos os possíveis pares de grupos de
animais.....................................................................................................................................
68
Anexo 10. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
magnésio ósseo nos fêmures esquerdos dos animais entre todos os possíveis pares de
gruposdeanimais....................................................................................................................
69
Anexo11.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdecálcio
ósseo nos fêmures esquerdos dos animais entre todos os possíveis pares de grupos de
animais.....................................................................................................................................
70
Anexo 12. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças na utilização
biológicadecálciodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais............
71
Anexo13.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdecálcio
retido nos fêmures esquerdos dos animais entre todos os possíveis pares de grupos de
animais.....................................................................................................................................
72
Anexo 14. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
fosfatasealcalinaséricadosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais....
73
Anexo15.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdecálcio
séricodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.................................
74
Anexo16.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdefósforo
séricodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.................................
75
Anexo 17. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
hemáciasdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais...........................
76
Anexo 18. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
hemoglobinadosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.....................
77
Anexo 19. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
hematócritodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.......................
78
Anexo20.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeVGM
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais...........................................
79
Anexo21.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeHGM
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais...........................................
80
19
Anexo22.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeCHGM
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais...........................................
81
Anexo23.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeRDW
SDdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.....................................
82
Anexo24.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeRDW
CVdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.....................................
83
Anexo 25. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
leucócitosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais..........................
84
Anexo 26. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
linfócitos (contagem relativa) dos animais entre todos os possíveis pares de grupos de
animais.....................................................................................................................................
85
Anexo 27. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
linfócitos (contagem absoluta) dos animais entretodos os possíveis pares de grupos de
animais.....................................................................................................................................
86
Anexo 28. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
eosinófilos,basófilosemonócitos(contagemrelativa)dosanimaisentretodosospossíveis
paresdegruposdeanimais......................................................................................................
87
Anexo 29. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
eosinófilos, basófilos e monócitos (contagem absoluta) dos animais entre todos os
possíveisparesdegruposdeanimais......................................................................................
88
Anexo 30. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
neutrófilos(contagem relativa) dosanimais entretodosos possíveis paresde grupos de
animais.....................................................................................................................................
89
Anexo 31. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
neutrófilos(contagemabsoluta)dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposde
animais.....................................................................................................................................
90
Anexo 32. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
plaquetasdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais...........................
91
Anexo33.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdovolume
plaquetáriomédiodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.............
92
20
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO.......................................................................................................
1
1.1 Justificativa............................................................................................................. 2
1.2 Objetivos..................................................................................................................
2
1.2.1 Objetivogeral..........................................................................................................
2
1.2.2 Objetivosespecíficos...............................................................................................
2
2 REVISÃODELITERATURA..............................................................................
3
2.1 Tecidoósseoeosteoporose.....................................................................................
3
2.2 Fatoresderiscoparaosteoporose.........................................................................
5
2.3 Cálcio:aspectosgerais,metabolismoeadequação..............................................
8
2.4 Osteoporoseinduzidaporglicocorticóides...........................................................
13
2.5 Tratamentodaosteoporose....................................................................................
14
2.6 Biodisponibilidadedeminerais............................................................................. 15
3 MATERIAISEMÉTODOS..................................................................................
17
3.1 Materiais..................................................................................................................
17
3.1.1 Matéria-prima.........................................................................................................
17
3.1.2 Animaisdeexperimentação...................................................................................
17
3.1.3 Biotério.....................................................................................................................
17
3.2 Métodos....................................................................................................................
17
3.2.1 Manuseiodascascasdeovos..................................................................................
17
3.2.1.1 Higienizaçãodascascasdeovos............................................................................
17
3.2.1.2 Obtençãodopódecascadeovo............................................................................
17
3.2.3 DeterminaçãodaComposiçãoCentesimal...........................................................
18
3.2.3.1 Umidade...................................................................................................................
18
3.2.3.2 Resíduomineralfixo(RMF)oucinzas.................................................................
18
3.2.3.2 Nitrogêniototaleproteínabruta...........................................................................
18
3.2.3.3 FraçãoNifext...........................................................................................................
18
3.2.3.4 Extratoetéreototaloulipídios..............................................................................
18
3.2.4 Valorenergéticototal(VET).................................................................................
18
3.2.5 Perfilemaminoácidosessenciais...........................................................................
18
3.2.6 Determinaçãodoteordeminerais........................................................................
19
3.2.7 Análisemicrobiológicadacascadeovoempó.....................................................
19
3.2.7.1 Bactériasmesófilasaeróbias..................................................................................
19
3.2.7.2 Boloreseleveduras.................................................................................................
19
3.2.7.3 Coliformesa35°Cecoliformesa45°C...............................................................
20
3.2.7.4 Salmonellaspp.........................................................................................................
20
3.2.8 Avaliaçãodorendimentodacascadeovoempó.................................................
21
3.2.9 Curvadeadsorçãoedesorçãodacascadeovoempó.........................................
21
3.2.10 Tamanhodaspartículasdacascadeovoempó..................................................
22
3.2.11 Avaliaçãobiológicadocálciodacascadeovoempó.......................................... 22
3.2.11.1 Preparaçãodasrações............................................................................................
22
3.2.11.2 Modificaçõesnasmisturassalinaevitamínica.................................................... 23
3.2.11.3 EnsaioExperimental.............................................................................................. 23
3.2.11.3.1 Obtençãodosdadosbasais.....................................................................................
24
3.2.11.3.2 Induçãodaosteoporose..........................................................................................
24
3.2.11.2.3 Administraçãodasraçõesexperimentais.............................................................
28
21
3.2.11.2.4 Coletadeparâmetrosbioquímicosehematológicos............................................
28
3.2.11.3.5 Avaliaçãobiológicadocálciodacascadeovoempó.......................................... 28
3.2.12 Análiseestatísticadosdados..................................................................................
28
4 RESULTADOSEDISCUSSÃO............................................................................
30
4.1 Composiçãocentesimalevalorenergéticototal.................................................. 30
4.2 Perfildeaminoácidosessenciais............................................................................
31
4.3 Minerais...................................................................................................................
32
4.4 Microbiologia..........................................................................................................
37
4.5 Rendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovoempó.............................
38
4.6 Curvasdeadsorçãoedesorçãodacascadeovoempó.......................................
38
4.7 Tamanhodaspartículasdacascadeovoempó..................................................
40
4.8 EnsaioBiológico......................................................................................................
40
5 CONCLUSÕES.......................................................................................................
49
6 REFERÊNCIASBIBLIOGRÁFICAS................................................................. 50
7 ANEXOS..................................................................................................................
60
1
1.INTRODUÇÃO
Apesar de conter teores consideráveis de vitaminas e sais minerais, a utilização de
partes não tradicionais de matérias-primas na alimentação, geralmente desprezadas, com o
propósitodepromoveroseuusonasdietaséabasedaalimentaçãoalternativa.
Esse tipo de alimentação começou a ser utilizado para grupos que apresentavam
deficiências nutricionais, como a desnutrição energético-protéica, a anemia e as
hipovitaminoses.Algumasdessaspartesnãotradicionalmenteconsumidasdematérias-primas
comoalimentosforamdifundidaspelaalimentaçãoalternativa,comoosfarelosdetrigoede
arroz, pósdefolhademandiocaeoutrasfolhasverdes, pósdecasca deovoe dealgumas
sementes,taiscomogergelim,girassol,melancia,entreoutros.
Essas porções incluídas na alimentação alternativa por apresentarem um potencial
benéfico à nutrição humana, além de promoverem uma prática de grande importância
econômica,socialeambiental, atravésdo aproveitamentodesubprodutos,sãocomumente
utilizadasnaraçãoanimaloudescartadoscomoresíduoindustrial.
Dentre esses resíduos, merece destaque a casca de ovo de galinha, totalmente
desprezada durante as preparações culinárias, pelasUnidades de Alimentação Coletivas no
decorrerdaelaboraçãodasrefeiçõesepelasindústriasnosprocessosfabrisparaproduçãode
maioneses,ovospasteurizadosouempó.
AmédiapercaptadeconsumoanualdeovodegalinhaintegralnoBrasiléde141
unidades(UBA,2006)eaproduçãodessamatéria-primaatingiucercade20.470bilhõesde
ovosnoanode2008(IBGE,2008),oquerepresenta102,35toneladas(megagramas)decasca
deovos.
A casca de ovo é um dos ingredientes de multimisturas alimentares distribuídas no
Brasil por organizações não-governamentais, como uma estratégia de combate à fome e à
desnutrição.Apesardacarênciadedadossobreaqualidadenutricionaldacascadeovo,sabe-
sequeocálcioencontra-sepresentenaformadecarbonatodecálcionaproporçãode40%do
produto.
O cálcio é um mineral de extrema importância para o organismo, sobretudo para a
mineralização óssea. A única fonte disponível desse mineral para o organismo humano é
provenientedaalimentação,peloconsumodealimentosnaturalmentericosnessemineral,tais
comooleiteeprodutosderivados,alimentosfortificadosou,ainda,pormeiodesuplementos
dietéticos, sendo importante prover uma ingestão adequada do mineral para o completo
crescimentoematuraçãoóssea.
A ingestão inadequada de cálcio, fato muito comum entre adolescentes, idosos e
indivíduos que consomem dietas nutricionalmente desequilibradas, compromete a
mineralizaçãoeamanutençãoóssea,favorecendo,dessaforma,oprocessodeperdaósseae
subseqüentedesenvolvimentodeosteoporose,enfermidademaisprevalenteemmulheresno
período pós-menopausa e em idosas, sendo observada também entre adolescentes com
amenorréiaeemindivíduosadultosvegetarianos.
Um dos meios mais eficazes de prevenir a perda de massa óssea em idades mais
avançadaségarantirumaboaformaçãoóssea,sendoimportanteadquiriromáximodemassa
óssea durante o crescimento, uma vez que o período de maior retenção de mineral ocorre
durante a adolescência. Sendo assim, nota-se a necessidade e importância do suprimento
constantedecálciodietéticonessafasedodesenvolvimentohumanoparamaximizaremanter
o pico da massa óssea, assim como minimizar a perda óssea em fase posterior da vida.
2
A ingestãoadequadade cálciofavorece umamelhor saúde óssea, porisso, torna-se
interessantebuscarnovasalternativaseconomicamenteviáveiseeficientesparapromovero
consumodessemineraldeformaaatingirasdemandasnutricionais.Nestecontexto,acasca
de ovo de galinha, em função do alto teor de cálcio, poderia ser mais uma opção
farmacológicaoualimentarparaajudaraminimizarosteopeniae/oucontrolaraosteoporose,
já que estudos sobre o valor nutritivo do cálcio da casca de ovo, incluindo a
biodisponibilidadeequalidademicrobiológicadoproduto,sãoescassosepoucoconclusivos.
1.1Justificativa
A dificuldade de adequação das demandas nutricionais de cálcio devido a baixa
ingestão desse nutriente por meio da alimentação tradicional, torna necessária a
complementação ou suplementação desse nutriente mediante a utilização de fontes desse
mineral,sejapormeiodaingestãoalimentaroupelousodefármacos,algunsdeelevadovalor
comercialepoucoacessívelapopulaçãomenosfavorecida.
A casca de ovo, subproduto da industrialização dessa matéria-prima e que contém
elevado teor desse mineral poderia ser mais uma opção, além de ser de menor valor
comercial. Por isso, a avaliação da biodisponibilidade do cálcio da casca de ovo em pó,
inicialmente em cobaias e, posteriormente, em humanos, representaria uma importante
contribuiçãoparaaalimentaçãopreventivaeparaportadoresdeosteoporose.
1.2Objetivos
1.2.1Objetivogeral
Desenvolverprocessotecnológicoparaobtençãodecascadeovodegalinha(Gallus
gallus,L.)em póeavaliarsuautilizaçãobiológica,comofontedecálcio,emratas(Rattus
norvegicusalbinus,linhagemWistar)saudáveisecomosteoporoseinduzida.
1.2.2Objetivosespecíficos
Determinaracurvadeadsorçãoedesorçãodacascadeovoempó.
Determinaragranulometriadacascadeovoempó.
Avaliarascondiçõesmicrobiológicasdacascadeovoempó.
Determinarorendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovoempó.
Determinaracomposiçãocentesimaldacascadeovoempó.
Determinaroperfildemineraisdacascadeovoempó.
Determinaroperfilaminoácidosessenciaisdacascadeovoempó.
3
2REVISÃODELITERATURA
2.1Tecidoósseoeosteoporose
Osossossãoconstituídospormateriaisorgânicos, mineraise águaquecorresponde
cercade20%dotecidoósseo.Aparteinorgânicadamatrizóssea,quecorrespondeacercade
65%, é composta por cálcio e fosfato, que formam uma estrutura cristalina denominada
hidroxiapatita [Ca
10
(PO
4
)
6
(OH)
2
], e por outros íons, como sódio, potássio, magnésio e
carbonatoemdiferentesproporções.Aporçãoorgânica,quecorresponde35%dessetecido,é
compostaaproximadamentepor90%decolágeno,mucopolissacarídeosecélulasósseas,os
osteoblastos,responsáveispelaformaçãodamatrizóssea,ososteócitos,quesãoosteoblastos
não-funcionais presentes na matriz óssea mineralizada e os osteoclastos que são células
multinucleadas,responsáveispelareabsorçãoóssea(KALFAS,2001).
Otecidoósseoéumtipodetecidoaltamenteespecializadoedinâmico,queestáem
contínuoprocessodeformaçãoereabsorção,atividadeconhecidacomoremodelagemóssea
(KALFAS,2001).
Existem dois tipos de ossos: o cortical, que é composto por lamelas primárias,
secundáriasesistemasHaversianosquesãoresponsáveispelanutriçãoeinervaçãoósseaeo
trabecular,compostode20%demassaósseae70%devolumeósseo.Oseucompartimento
centralconsistedebarrasparalelasverticaisetransversaisdenominadastrabéculas,asquais
são preenchidas pelamedulaóssea e tecidoadiposo. Esses são encontrados principalmente
nasvértebras,colodofêmureinteriordosossoslongos(DHARMARAJANeMANALAC,
2000).
Durantetodasasfasesdavida,otecidoósseoéremodeladoeoequilíbriodoprocesso
deremodelaçãoósseapermiteamanutençãodamassaóssea.Quandoesseprocessosofreuma
alteração, modificações na massa óssea são promovidas, como por exemplo, em casos de
diminuiçãodaatividadeosteoblásticaouaumentodaatividadeosteoclástica,ocorreredução
damassaóssea(PARFITT,1988).
O processo de remodelação óssea dura três semanas, isto se dá pela ativação dos
osteoclastos,queformamumtúnelnointeriordoossocorticalounaslacunasnasuperfíciedo
osso trabecular. Essas células reabsorvem as substâncias ósseas, dissolvendo tanto a
substânciaosteóidecomoosdepósitosminerais.Ososteoclastosdesaparecemaomigrarpara
acirculaçãoeemseguida,ososteoblastossãoatraídosàscavidadesresultantesdareabsorção
ecomeçamaproduzirosteóidesquesãoposteriormentemineralizados(PEAKEetal.,2000).
Se essa ação se repete continuamente por vários meses, novo conteúdo ósseo é
depositadoemcírculosconcêntricosdecamadassucessivas(lamelas)nassuperfíciesinternas
das cavidades. Isso ocorre até que o local seja preenchido e a deposição é interrompida
quandooossocomeçainvadiroscanaisdeHavers(PEAKetal.,2000).
Nasenescência,hámenordeposiçãodeossosnosciclosderemodelação, levando a
menorespessuradasparedesósseas,especialmentenosossostrabeculares(PARFITTetal.,
1997;MANOLAGAS2000).Apesardealgumasalteraçõesocorridascomoavançodaidade
seconfundirem comdeficiênciashormonais,amenortaxade nascimentodecélulasósseas
(osteoblastos e osteoclastos), assim como o menor tempo de vida dos osteócitos são
característicos da idade avançada (JILKA et al., 1996; D'IPPOLITO et al., 1999 e
MANOLAGAS,2000).
Os dados epidemiológicos e densitométricos permitem individualizar duas doenças,
que fazem parte de um mesmo processo: a osteopenia, caracterizada por maior rarefação
ósseaemrelaçãoàidade,situaçãoqueédescritaalgumasvezes,comoosteoporosepré-clínica
4
oupré-fratura,naqualhánecessidadedeintervençãoterapêutica;eosteoporose,caracterizada
por menor densidade óssea e existência de fraturas axiais ou periféricas. A intervenção
terapêutica tem a finalidade de estabilizar ou restaurar a massa óssea prevenindo recidivas
(BORELLI,1994).
Aosteoporosepodeserdivididaemdoistipos:tipoIquecorrespondeàosteoporose
pós-menopausa,comaltareabsorçãoósseapelofatodaatividadeosteoclásticaestaracelerada
emfunçãodainsuficiênciaestrogênicanoclimatério.Avelocidadedaperdademassaósseaé
observada mais no osso trabecular que no cortical, pois o primeiro apresenta maiores
superfíciesdereabsorção,eosefeitosdessetipodeosteoporosesãomaisevidentesnacoluna
eemalguns ossosperiféricos,predispondoafraturasdaporçãoproximaldo fêmur,corpos
vertebrais e promovendo cifose dorsal. No tipo II a reabsorção é normal, ou ligeiramente
aumentada,associadaàatividadeosteoblásticadiminuída,correspondendoàosteoporosesenil
oudeinvolução,agindotantonoossotrabecularcomonocortical,podendoocorrerfraturas
emqualquerosso(KAPLAN,1995).
A osteoporose ocorre quando os osteoclastos criam uma cavidade excessivamente
profunda que não consegue ser preenchida suficientemente ou quando os osteoblastos não
conseguem preencher umacavidadedereabsorçãonormal,reduzindo a massa óssea,como
observadoemmulheresduranteamenopausa(PAPLER,1997).Assim,aosteoporoseéuma
desordem esqueléticacaracterizada pelocomprometimento da resistênciaóssea, que éuma
combinaçãoentrequalidadeedensidadeóssea,predispondoindivíduosaoriscoaumentadode
desenvolverfraturas(CDC,2001).
Existem alguns fatores que podem contribuir para a perda de massa óssea e,
consequentemente, aumento da probabilidade de desenvolver osteoporose, conforme
demonstradonoquadro1.
Quadro1.Fatoresquecontribuemparaperdaóssea.
Fatoresnãomodificáveis Fatoresmodificáveis
Idadeavançada Fumo
Sexofeminino Ingestãobaixadecálcio
Raçacaucasóideefaia(orientais) IngestãobaixadevitaminaD
Históriafamiliardeosteoporose Baixaexposiçãosolar
Históriafamiliardefraturade
quadril
Sedentarismo
Intolerânciaàlactose Índicedemassacorpóreabaixo
Desordensosteometabólicas Corticoterapia
Malignidades(mieloma,linfomas)
Depressão/estresse
Fonte:YAZBEKeMARQUES-NETO,2008
Oaumento daexpectativade vidadaspopulaçõestem feitocomqueaosteoporose
tenha uma distribuição universal, com altas estimativas de prevalência, dado que é uma
doençarelacionadaaoenvelhecimento(KALACHEetal.,1987).
Emgeral,dopontodevistaeconômicoesocial,aosteoporoseéumaenfermidadeque
atingetodosospaíses,independentedeseremdesenvolvidosounãoetrazgrandesprejuízos,
quer pela incapacitação dos pacientes, quer pelo tratamento prolongado das fraturas
decorrentesdela.Umterçodosindivíduosquefraturamocolodofêmurficamincapacitados
definitivamente paracaminhar,enquantoqueessasfraturasreduzem otempo devidaentre
10%a20%,ocorrendoamortenosprimeirosseismesesdepoisdafratura(MELTON,1988).
Aexpectativadevidadapopulaçãobrasileiraapresentada,entre1980a1985,foide
63,4 anos. Para os anos de 2020 a 2025 essa estimativa é de até 72,1 anos, incluindo-se,
5
portanto, entre estes indivíduos males associados ao envelhecimento (KALACHE et al.,
1987).
Dadosoficiaissobreaincidênciadeosteoporosenapopulaçãobrasileirasãoescassos,
porémestudosevidenciamqueapartirdos50anosdeidade,30%dasmulherese13%dos
homenssofrerãoalgumtipodefraturadevidoàosteoporose(RADOMINSKIetal.,2002).
O número de fraturas osteoporóticas aumenta particularmente em mulheres (OHE,
1990). SegundoMARQUES-NETO(2001),em umgrupo etário de50anos,foiverificado
que para cada cinco mulheres acometidas por osteoporose existia um homem com essa
doença. Essas são especialmente vulneráveis, em decorrência da progressiva redução da
função ovarianae, conseqüentemente, daprodução deseushormôniosesteróides (HALBE,
1995; ALDRIGHI, 1996). Esse processo inicia-se a partir dos 35 anos, quando a mulher
apresenta reduçãolenta de massa óssea, acentuando-se apósos 50anos, momento em que
comumenteocorreamenopausa(OMS,1996).JUNQUEIRA(2001)estimouquemaisde200
milhões demulheresno mundotenhamosteoporoseequeo númerode fraturasde quadril
decorrentes daosteoporose, que ocorrem a cada ano, irá
passar de 1,66 milhões para 6,26
milhõesem2050.
ELFFORS(1998)estimouquenosEUAacadavinteecincominutos,umamorteera
provocada pela osteoporose, com um custo financeiro direto e indireto de 7,5 bilhões de
dólares/ano.Nessemesmoestudopreviuquedasfraturasqueocorrememindivíduosacima
de45anos,70%eramrelacionadasàosteoporoseeque1/3dasmulherescomidadeemtorno
de65anosapresentariamfraturavertebral,enquantoque,aos 80anos,uma entrecadatrês
mulhereseumentrecadaseishomensdesenvolverãofraturasdequadril,dadosqueapontam
para 25 a 30 milhões de pessoas acometidas pela osteoporose naquele país. Também na
população brasileira este fenômeno está sendo observado. De 7.540 milhões de idosos
atualmente, chegar-se-á em 2020 a 17,9 milhões, dos quais, potencialmente, 20%
desenvolverãoosteoporose(IBGE,2004).
2.2Fatoresderiscoparaosteoporose
Adiminuiçãoprogressivadamassaósseaquepredispõeoindivíduoàosteoporosee
suasconseqüências,estáassociadaadiversosfatoresqueinfluenciamadensidademineral
óssea,taiscomo:idade,sexo,raça,hábitosdevida,entreoutros.
SegundoJANZ(2002),amassaósseaaumentasubstancialmentedesdeonascimento
até osprimeiros anosde vida,sendoque na puberdade,esse incrementoémais rápidoem
garotosdoqueemgarotas,sendonessafaixaetáriaquealcançamomaiorpicodemassa.
Noiníciodaidadeadulta,osossosdoesqueletoapendicularsãomaioresemhomense
eles têm um córtex ósseo mais espesso (GARN e BOECHAT, 1970). A área seccional
transversanasvértebrasé,também,25%maioremhomens(GILSANZeBOECHAT.1994).
Aformacomoamassaósseaédiminuídaparecediferirentrehomememulhertanto
no esqueleto apendicular quanto no axial, primeiramente, mulheres perdem mais osso ao
longodavidadoqueohomem,principalmente,apósamenopausa(RIGGS,2000)eocórtex
ósseodamulhertorna-semaisporoso(GARNeBOECHAT,1970).
Mesmoqueosteoporosesejamaisfreqüenteemmulheres,osmaioresfatoresderisco
para osteoporose em homens são hipogonadismo, corticoesteróides, excesso de álcool e
mielomamúltiplo(PHILIPSeBRADDON,2004).
O Instituto Nacional de Tráumato-Ortopedia, do Ministério da Saúde, divulgou os
dados do Programa de Osteoporose Masculina em 2004. O levantamento revelou que dos
homensmaioresde50anosqueprocuraramtratamento,19,5%tinhamosteoporose.Entreos
homens com 80 anos ou mais, o número percentual de pacientes acometidos pela doença
6
chegava a 36,4%, enquanto que o grupo de homens com idade entre 50 e 59 anos
apresentavam11,6%deincidência(BRASIL,2005).
Sabe-sequequantomaiorasobrevidadoindivíduo, maioréorisco dedesenvolver
osteoporose,doençaqueacometepreferencialmenteindivíduosidosos(SZEJNFELD,2001).
Fatores genéticos também são responsáveis pelas variações na massa óssea em
diferentes grupos éticos e raciais. Indivíduos da raça negra possuem maior pico de massa
ósseae,portanto,sãomenospredispostosasofreremdeosteoporosequebrancoseasiáticos
(RADOMINSKIetal.,2002).
Asmulheresbrancaspossuembaixosíndicesdepicodemassaósseanaidadeadultae
apresentammaiorprevalênciadeosteoporose.Aincidênciadefraturasdefêmuremmulheres
brancaséduasvezesmaiordoqueemmulheresnegras(SZEJNFELD,2001).
Os hormônios sexuais que mediam diretamente as ações dos osteoclastos e
osteoblastos, inibindo o recrutamento dos osteoclastos, e conseqüentemente a perda óssea,
também estão envolvidos nesse processo. O nível reduzido de estrogênio e androgênio
interferenocálciointestinaleestáassociadoaumnegativobalançodecálcio,resultandoem
umaumentonareabsorçãoóssea(HELGEeKANSTRUP,2002).
Alémdisso,oestrogêniomodulaahomeostasedocálcioemváriossítios,incluindoa
secreçãodohormônioparatireoidano(PTH),metabolismodavitaminaD,sínteseesecreção
deabsorçãointestinalerenaldecálcio(NOTELOVITZ,2002;PERRIEN,2002).
EmsituaçõesdehipocalcemiaoPTHatuasobreosossos,rinsetubodigestivo.Nos
ossos, age estimulando osteoclastos e osteócitos,que removem cálcio e fósforo através do
processo de reabsorção óssea (VIANNA, 1988; ACOSTA-MARTÍNEZ e CARTER-
BARTLETT, 1992). Nos rins, promove aumento da eliminação de fósforo e retenção de
cálcio,respectivamenteporreduçãoeaumentodareabsorçãotubular,enointestino,favorece
aabsorçãodecálcioindiretamente,viavitaminaDativa(VIANNA,1988).
Outrasituaçãorelevanteéamenopausa,queseiniciaentre45e55anosdeidade,é
evento singular que ocorre devido à deficiência estrogênica e promove uma série de
transformações ao organismo feminino (SZEJNFELD, 2001; CERQUEIRA e REZENDE,
2002).Noiníciodadeficiênciaovariana,umamulherperde3a5%demassaósseaporano
(PRIORetal.,1997).
Nestafase da vida, a perda de massa ósseanasmulheres é relacionada ao declínio
agudodaproduçãoovarianadeestrógeno,hormônioquetemaçãoprotetorasobreoosso,por
suprimirsuareabsorção,prevenindoaperdaósseaereduzindooriscodefraturas(WHEDON,
1981;SZEJNFELD, 2001e2003;NCP,2003).
Esseefeito ocorredevidoaoestrógenoque
melhoraaabsorçãodecálcionotratointestinal,alémdediminuiaperdadecálciopelaurina
(HEANEY et al., 1989), promove aumento da forma ativa de vitamina D na circulação
quandoeleestáemníveiselevadosetambémestimulaaproduçãodecalcitonina,queprevine
aremoçãodecálciodoosso(RICHARTeLINDSAY,1987).
Algunshábitosdevidapodemcontribuirparaaocorrênciadaosteoporose.Ofumo,
por exemplo, inibe a proliferação de células osteoprogenitoras (WADE, 2001;
NOTELOVITZ, 2002). Sabe-se que mulheres fumantes apresentam níveis reduzidos de
estrogênio e iniciam a menopausa mais precocemente do que mulheres não-fumantes
(SZEJNFELD,2001).
Oconsumoregulardeálcool,comoporexemplo,maisdedoisdrinquesdiários,pode
serprejudicialparaotecidoósseoparaambosossexos,poisoálcoolétóxicoaososteoblastos
eacometeocicloderemodelaçãoóssea(SZEJNFELD,2001;YUANetal.2001).
Aprobabilidadededesenvolverosteoporoseaumentatambémcomingestãodeduas
oumaisxícarasdecafépordia,quandocombinadacomumabaixaingestãodecálcio.Aalta
ingestão de cafeína de qualquer fonte (café, chá, refrigerantes e outras bebidas), acelera a
perdadecálcionaurina,aumentandooriscodefraturaóssea(NIEVES,2005).
7
Outro fator que interfere no processo de remodelação óssea e regulação de cálcio
absorvido no osso é o uso de glicocorticóides. Eles estimulam as células osteoclásticas e
inibemasosteoblásticas,reduzemaproduçãodeestrogênio,comconseqüentediminuiçãoda
deposiçãodecálcionamatrizpelososteoblastos(ISHIDAeHEERSCHE,1998),conforme
serádescritoposteriormente.
Nessecontexto,aingestãodevitaminaDtambéméimportante.Essavitaminaexerce
várias funções, tais como a absorção de cálcio pelo intestino e auxílio no controle da
deposição de cálcio no osso, além de promover o transporte ativo desse íon através do
epitélio, aumentando a formação de proteína deligação do cálcio nascélulas epiteliais do
intestino,oqueajudanaabsorçãodomineral(RAYA,etal.,2001).
A síntese de vitamina D
3
ocorre primariamente nos queracinócitos (células da
epidermedapele).Sobainfluênciadaluzsolar,o7-desidrocolesteroléfoto-convertidoàpré-
vitamina D
3
que é hidroxilada no fígado pela enzima 25-DH-D
3
, em reação dependente e
NADPH e oxigênio, e transportada do fígado para o rim, onde ocorre outra hidroxilação,
formandoa1,25(OH
2
)-D
3
,queéaformaativa,cujafunçãorelaciona-secomometabolismo
de cálcio, conforme citado anteriormente (RAYA E TORRES, 2001; BLANCHET et al.,
2002).
Outronutrientemerecedestaquenoquedizrespeitoaometabolismoósseo.Trata-se
davitaminaK,reconhecidaporseupapelnacascatadecoagulaçãosangüínea,masquevem
sendoapontadacomotendopossívelpapelnaprevençãodaperdademassaóssea(WEBER,
1997).
Existem duas proteínas que contêm o ácido gama carboxiglutâmico (Gla) que são
dependentes de vitamina K e estão associadas com a formação óssea: a osteocalcina e a
proteína-Gladamatriz(PGM).Oácidoribonucleicomensageiro(RNAm)paraPGMtemsido
encontradoemváriostecidos,incluindocondrócitos,tecidovasculareepitélio,apresentando
forteaçãoinibitóriadacalcificaçãotecidual(DORESePAIVA,2001).
A osteocalcina é sintetizada principalmente nos osteoblastos (DORES e PAIVA,
2001), representando em torno de 80% do conteúdo de Gla do tecido ósseo maduro. A
osteocalcinahumanacarboxiladacontémtrêsresíduosdeGlaqueconferemaltaafinidadeaos
íonsdecálciodamoléculadehidroxiapatita(WEBER,1997).
Alémdag-carboxilaçãodaosteocalcina,avitaminaKpareceafetaroutrosparâmetros
dometabolismoósseo,taiscomo:excreçãourinária decálcio,produçãodeprostaglandinas
E2einterleucina-6(WEBER,1997).
ApesardeestudosapontarempossívelpapeldavitaminaKnasaúdeóssea,resultados
compacientesemusodeanticoagulantesoraistendemasustentaressahipótese,jáqueouso
constantedomedicamento,mantêmumrelativoestadodedeficiênciadavitaminae,porisso,
deveriamapresentarriscosdedesordensósseas,fatoquefoiconfirmadoporCARABALLOet
al. (1999),em umestudonoqual a exposiçãoao anticoagulante oralmostrou-se associada
combaixaDMOnaregiãoultradistaldoossorádio,porémnãofoiencontradoefeitosobrea
regiãodistaldorádio,espinhalombaroufêmur.
O hábito da prática de atividades físicas promove um adequado desempenho dos
sistemascardíaco,respiratório,musculareósseo,contribuindoassim,paramelhorqualidade
de vidapara o indivíduo(RITSONe SCOTT, 2001).Apesar daexistência deintervenções
médicaspara osteoporose, atividadefísicaé altamente recomendada como fator preventivo
por reduzir a perdas e fraturas ósseas, melhorar a força muscular e prevenir quedas
(CERQUEIRAeREZENDE,2002).
Nãoestãototalmenteesclarecidososmecanismospelosquaisoesqueletorespondeà
atividade física, entretanto, sabe-se que há aumento de resistência óssea em resposta à
aplicação de cargas mecânicas, assim como a diminuição da densidade óssea mineral na
ausênciadasmesmas(CERQUEIRAeREZENDE,2002)
8
Ossos e músculos respondem bem ao estresse físico, tornando-se maiores e mais
fortes.Exercíciosfísicosprovocamtensãofísicanocorpo,ajudamaestimularocrescimento
ósseo,preservaramassaósseae,conseqüentemente,auxiliamnaprevençãoetratamentoda
osteoporose(DALSKYetal.,1988eMARCUS,etal.,1992).
2.3Cálcio:aspectosgerais,metabolismoeadequação
O cálcio é um mineral de extrema importância para o organismo, sobretudo para a
mineralização óssea.Participatambémdeinúmerosprocessosorgânicos,taiscomoreações
enzimáticas,liberaçãodehormôniosedeneurotransmissores,excitabilidadeneuromusculare
coagulaçãosangüínea(GOULDINGetal.,2001).
O corpo humano adulto contém aproximadamente 1.000 a 1.500 g de cálcio,
dependendodogênero,raçaetamanhodocorpo,dosquais99%sãoencontradosnosossosna
forma de hidroxiapatita, que confere rigidez ao esqueleto. Por essa razão, o cálcio é,
provavelmente, o nutriente mais estudado na áreadesaúdeóssea econsiderado de grande
relevância na prevenção e tratamento da osteoporose (DELMAS, 2002; ILICH e
KERSTETTER,2000).
Níveis adequados de cálcio podem retardar o desenvolvimento de osteoporose por
duas razões.
Primeiro porque o cálcio suprime a reabsorção óssea e segundo porque a
calcificaçãooumineralizaçãoósseafortaleceoosso.
Sendoassim,paraprevenirareduçãoda
massaóssea,deve-semanteroequilíbrioentreaingestãoeabsorçãodecálcioesuasperdas.
Nosprimeiros20a25anosdevida,adensidademineralóssea(DMO)aumentacoma
idade,atéqueomáximo(pico)demassaósseasejaalcançado.Opicodeaquisiçãodemassa
óssea, geneticamente determinado, se dá até os 20 anos de idade, quando 90% do total é
adquirido.Os10%restantessecompletamatéos35anosdeidade(KALACHEetal.,1987).
Normalmente a metade da massa óssea de um adulto é adquirida durante a
adolescênciae,porisso,acredita-sequeindivíduoscommaiorpicodemassaóssea,alcançado
nessa fase do desenvolvimento humano, podem apresentar menor risco de desenvolver
osteoporose (ILICH e KERSTETTER, 2000). Assim sendo, é necessário que haja um
consumoadequadodecálcioduranteadolescênciaparagarantiramassaósseamáximadentro
do perfil genético individual e a proteção dessa massa acumulada em idades avançadas
(RODRÍGUEZ-MARTÍNEZeGARCÍA-COHEN,2002).
A necessidade por uma dieta adequada em cálcio persiste mesmo depois que o
crescimentotenhacessado,hajavistaqueessemineraléperdidodiariamentepelocorpoem
quantidades consideráveis. Se essa perda não for compensada por uma quantidade
correspondente,consumidavia alimentação,o corporompe unidades deestruturaósseano
intuitodeprovercálcioparacirculação(HEANEY,2000).
Ocálcioéperdidoatravésdapele,cabelo,unhas,suor,urinaesecreçõesdigestórias,
emquantidadesquevãode4a8mmol/dia,emadultos,dependendodaatividadefísicaede
outrosconstituintesdadieta,comoosódio.Quandoocálcioabsorvidodadietadeumadulto
diminui e começa a se equilibrar com as perdas diárias, os níveis no sangue começam a
decrescer,eumacascatadeeventosocorre,começandopeloaumentodasecreçãodePTH,
quereabsorveossoeliberaosseusconstituintesnosangue(HEANEY,2000).
A inadequação da ingestão de cálcio compromete a mineralização e a manutenção
óssea, promovendo, dessa forma, o agravamento da osteoporose. Alguns estudos sobre
consumoalimentarmostramque,dosnutrientesavaliados,ocálcioéoqueapresentamaior
inadequação(GALEAZZI,etal.,1997;MONTILLAetal.,2003;SAMPAIO,1997).
Algumasfontesalimentareseasrecomendaçõesnutricionaisdecálciopara diversas
faixasetáriasestãorepresentadasnosquadros2e3,respectivamente.
9
Quadro2.Teordecálcioemleiteederivadosem100gdealimento.
Alimento Cálcio(mg)
Alimento Cálcio(mg)
Leitedevacadesnatado 124
Iogurtenatural
desnatado
226
Leiteempódesnatado 1049 Leitecondensado 262
Leiteempó
semidesnatado
982
Queijoprato 1023
Leiteempóintegral 994 Queijotipominas 685
Sorvetedeleite 137 Queijoparmesão 1357
Iogurtesemidesnatado,
Comsabordefrutas
157 Queijoprovolone 925
Fonte:FRANCO,2001.
Quadro3.IngestãoDietéticadeReferência(DRI)parahumanos,emdiversasfaixasetárias.
Fonte:IOM,2000.
Ao estudar as dietas de estudantes do período noturno de escolas do município de
SantoAndré,defaixaetáriaentre10a18anosGAMBARDELLA(1995)verificouquemais
de60%dasadolescenteseentre48%a60%dosadolescentesreferiramingerirmenosdeduas
porções de alimentos lácteos diariamente, quantidade insuficiente para alcançar as
recomendaçõesdomineral.
OestudorealizadoporLERNERetal.(2000)emadolescentesdeOsasco-SPmostrou
que apenas 6,2% dos homense2,8% das mulheresconsumo decálcio igual ousuperiora
1.200 mg/dia. Assim como no estudo realizado por JAIME et al. (1997), com jovens
universitáriospaulistasde18a27anosfoiencontradoumconsumomédiodiáriode754,08
mgdecálcio/dia,oquerepresentaapenas62,84%deadequaçãoparaessenutriente.
Um estudo feito por MONTILLA et al. (2003) revelou que um consumo de cálcio
inadequado compromete ainda mais a saúde óssea da mulher no climatério. Esses autores
verificaramaingestãodecálcioemmulheresde35-50anose51–65anoseobservaramque
14,3%e14,5%,respectivamente,conseguiramatingiraadequaçãodecálcioemsuasdietas.
Omecanismodeabsorçãodocálcioécomplexoeenvolvediversosfatores,taiscomo:
vitamina D, ATPase, fosfatase alcalina intestinal, fatores que aumentam ou diminuem sua
solubilidade,proteínaligadoradecálcionoenterócito(calbindin),proteínaligadoradecálcio
no plasma e outros (BOURDEAU e ATTIE, 1994; JOHNSON e KUMAR, 1994;
TURNBERG e RILEY, 1993). Nesse processo, podem ser consideradas três etapas:
intraluminal,intracelulareplasmática.
Faixaetária mgdecálcio/dia
Lactentes:-donascimentoaos6meses
-dos6mesesa1ano
210
270
Crianças:-1a3anos
-4a8anos
500
800
CriançaseAdolescentes:-9a18anos 1300
Adultos:-19a50anos
-acimade50anos
1000
1200
GestanteseLactantes:-<18anos
-19a50anos
1300
1000
10
A quantidade decálcioabsorvida é determinadapelaingestão e pelacapacidade de
absorçãointestinal.Seaingestãoébaixa,aabsorçãoéalta,enquantoqueemsituaçõesdealta
ingestãoaabsorçãoémenor(NORMANetal.,1981).
Tem-seaabsorçãosaturáveltranscelular,dependentedevitaminaD,eaabsorçãonão
saturávelintercelulares,queédependentedaconcentraçãodecálciointraluminal.
Nestaetapa háinterferênciadefatoresnaluzintestinal,aumentandooureduzindoa
absorção,taiscomo:
•pH
Para que o cálcio, mineral solúvel em meio ácido, mantenha-se em suspensão no
conteúdointestinal, meioalcalinoquefavoreceaprecipitaçãode cálcio,elenecessita estar
preso a ligandinas (grupo carboxil ou grupos amino de proteínas e grupos quelados em
cofatoresouenzimas).
Deve-seconsiderar,também,queemmeioalcalino,aumentaaligaçãocálcio-fosfato,
formandofosfatodecálcio,queéinsolúveleeliminadopelasfezes.Nointestinodelgado,à
medidaqueopHaumentaemdireçãoaoíleo,eleva-seaconcentraçãodofosfatointestinal,
havendoprecipitaçãodocálcioedeficiênciadaabsorção.Dessamaneira,suamaiorabsorção
sedáaoníveldeduodenoejejunoproximal(TURNBERGeRILEY,1993).
Emsituaçõesdeacidoseaumentaaconcentraçãodoíoncálcio,porhaverdiminuição
daligaçãocálcio-albumina,enquantoquenaalcaloseaumentaestaligação,comconseqüente
diminuiçãodecálcioiônico,queéfisiologicamenteativo(BOURDEAUeATTIE,1994).
•Atividadedelactase,caseinatoecitrato
Ocálcioémuitopoucosolúvelemáguaeaformaemqueéingeridoeoseugraude
solubilidade no conteúdo intestinal afetam a sua absorção. Entre 60% a 75% do cálcio
ingeridodiariamenteestãocontidosnoleitee/ouderivados.ComoopHdoleiteéalcalino,o
cálcio se mantém em suspensão pela formação de caseinato de cálcio, citrato de cálcio e
complexado à lactose (CORMAN, 1993), que é um dissacarídeo formado pelos
monossacarídeosglicosee galactose que, na bordaemescovado enterócito, sofre açãoda
lactase,desdobrando-senessesmonossacarídeoseliberandoocálcio.Essestrêscomponentes,
lactose,caseinatoecitrato,quemantêmasolubilidadedocálcionoleite,parecemexplicara
suamelhorabsorçãoemrelaçãoaocálciocontidoemoutrasformasalimentares(GRUDNER,
1997).
•Aminoácidoselipídios
Dentreosaminoácidos,alisinaeaargininafavorecemamaiorsolubilidadedocálcio,
com diminuição de formação do sal fosfato, o que favorece sua absorção (TURNBERG e
RILEY,1993).
Jáemrelaçãoaoslipídios,sabe-sequeostriglicerídeosdecadeialonga,presentesem
ovos, manteiga, carnes gordas, leite integral, óleos e gorduras, por apresentarem um
mecanismodeabsorçãomaiscomplexo,diminuemotrânsitointestinal,possibilitandomaior
tempo de contato do cálcio com a mucosa e, conseqüentemente, a sua maior absorção
(CORMAM, 1993). Em casos de pancreatites ou de doenças disabsortivas intestinais, nas
quaisadigestãodegordurasestáprejudicada,ocorreaprecipitaçãodocálcio,porformação
desaisinsolúveis(estearatodecálcio)eperdadevitaminaD,que,sendolipossolúvel,nãoé
mantidaemsuspensão(CORMAM,1993).
11
• Ácido fítico, ácido oxálico, celulose, alginatos, álcool, antiácidos, bloqueadores da
secreçãoácida,colestiraminaetetraciclina
Pormeiodareduçãodasolubilidade,essescompostosdiminuemaabsorçãodocálcio,
quer por alteração do pH, quer por formação de sais insolúveis, como fitato e oxalato de
cálcio.Oácidofíticoéencontradoemcascasdegrãoecereais,comonaaveiaesoja,ese
combinacomocálcio,formandofitatodecálcio.Jáoácidooxálico,encontradonochocolate,
na pimenta,em nozes, em algumas hortaliças, como folhas debeterraba, acelga, espinafre,
cenoura, cebola verde, batata doce, em algumas frutas, como morango, laranja, figo e em
bebidas, como chá e refrigerantes tipo “cola” (WEAVER et al.,1991; AVIOLI, 1989),
combina-se com o cálcio, formando oxalato de cálcio, que é um componente insolúvel e
eliminadonasfezes(HEANEY,2000).
No que diz respeito à etapa intracelular, sabe-se que absorção do cálcio intestinal
ocorre50%pormecanismostranscelularese50%portransferênciapassiva,atravésdoespaço
intercelular (JOHNSON e KUMAR, 1994). O transporte celular de cálcio é intenso no
duodenoejejunoproximal,ocorreemmenorquantidadenocólonproximal,epoucoacontece
nojejunodistalenoíleo,pelaausênciadesistemascarreadoresespecíficosdependentesde
1,25(OH)
2
D3 (calcitriol) e de pH adequado nesses segmentos (COLSTON et al., 1994;
KARBACH, 1994). O transporte passivo intercelular ocorre entre as células do epitélio
absortivo, é dependente de alta concentração do cálcio intraluminal e independente de
vitaminaD.
Otransportetranscelularde cálcioocorre dolúmenintestinal emdireçãoaocapilar
sanguíneo,emsuamaiorparteporprocessoativo,pordiferençadepotencialeletroquímico
transepitelial,atravésdabordaemescovadoenterócito.Devidoàaltaconcentraçãodecálcio
no lúmen intestinal, em relação ao citoplasma do enterócito, há maior negatividade
intracelular,comgrandediferençadepotencialeletroquímicofavorecendoaentradadecálcio
nacélula(LIANGetal.,1991).
Na borda em escova, o cálcio liga-se à calbindina, importante para manutenção de
cálcioemsolução,jáqueépoucosolúvelemmeioaquoso,processoreguladopelavitamina
D,independentementedetranscriçãogenética(BOURDEAUeATTIE,1994).
A vitamina D interage na membrana plasmática da borda em escova, cuja camada
lipídicatembaixapermeabilidadeaíonsbivalentesetrivalentes,abrindooscanaisdecálcio
(COLSTONetal.,1994;JOHNSONeKUMAR,1994).Issoparecedever-seaoaumentoda
síntese defosfatidilcolina,apartirdefosfatidiletanolamina,na bordaemescova, levandoa
aumentodafluidezdamembranacitoplasmáticaepermeabilidadeaocálcio.Essarespostaé
específicaparaa1,25(OH)
2
D
3
enãoaoutroslipídios(LIANGetal.,1991).
Ocálcio édeslocadonacélulaemdireçãoaointeriordasorganelas,mitocôndriase
retículo endoplasmático, onde é estabilizado e estocado em formas não cristalinas por
ligandinas,comoMg-ATPefosfocitrato(BOURDEAUeATTIE,1994).
Pela ação da neurotensina, serotonina e acetilcolina, há ativação da hidrólise do
fosfatidil-inositol(PIP2),encontradonamembranaplasmática,originandoo1,4,5 trifosfato
deinositol(IP3),quesedifundeparaointeriordacélula,estimulandoaliberaçãodocálcio
desses estoques, quando o mesmo necessita ser liberado para o exterior da célula
(BOURDEAUeATTIE,1994).
Na membrana basolateral, o cálcio é liberado para o espaço intersticial por dois
processosativos:umdependentedeCa
++
-ATPase,noqualparahidrólisedecadamoléculade
ATPháefluxodeumamoléculadecálcio,processoesteestimuladopelafosfatasealcalina
intestinal, cuja atividade é aumentada pela 1,25(OH)
2
D
3
e outro dependente de Na
+
K
+
-
12
ATPase,noqualparacadamoléculadecálcioefluídoháentradadetrêsmoléculasdesódio
nacélula(BOURDEAUeATTIE,1994;JOHNSONeKUMAR,1994).
Estes mecanismosde influxo eefluxode cálcio e sódio regulam aconcentração de
cálciointracelular.Naausênciadessesmecanismos,ascélulasnãomanteriamaconcentração
decálcioehaveriaacúmulodoíonnoambienteintracelular(BOURDEAUeATTIE,1994).
Trabalhos mostram que a absorção do cálcio pode ocorrer também no cólon, onde
foram identificados receptores para 1,25(OH)
2
D3 com características similares aos do
delgado. Essa capacidade de absorver cálcio parece representar uma reserva funcional em
situaçõesemqueháreduçãodaabsorçãoemconseqüênciaderessecçãooudoençaextensade
delgado. Em condições normais, porém, não está bem definido se o cólon contribuiria
significativamentenessaabsorção(ELSHARYDetal.,1995).
Ao entrarno capilar venoso, 45%a 50%do cálciocirculanteapresenta-se ligado à
proteína,sendoque80%está ligadoàalbuminae os20% àglobulina.Outros45%a50%
circulamemformaiônicae8%estãocomplexadosaocitrato,fosfatoesulfato(BOURDEAU
eATTIE,1994).
Nacirculaçãohátrêstiposdecálcio:cálcioligadoàalbumina,quenãoéultrafiltrável;
cálcio complexado a citrato, sulfato ou fosfato, e cálcio iônico, que são ultrafiltráveis. O
cálcioiônico,oúnicofisiologicamenteativo,conformeasnecessidadesorgânicas,passapara
ascélulasdostecidosexcitáveiseaotecidoósseo(BOURDEAUeATTIE,1994).
Anecessidadediáriadomineralenfocadonesseestudopodesersupridapelaingestão
de alimentos ricos ou suplementados com cálcio na forma biodisponível, ou através de
suplementosfarmacológicosouambos(BEDANIeROSSI,2005).
ONIHCONSENSUSCONFERENCE(1994),sobreoconsumoadequadodecálcio,
verificou que o cálcio, em doses de1.500 mg/dia, ajuda na prevençãoeno tratamento da
osteoporose,concluindoqueaadministraçãode2.000 mgdecálcioelementar/dia ésegura
paraamaioriadaspessoas.Enquantoafontepreferencialdecálciosedápeloconsumode
alimentosricosemcálcio,comooleiteeoutrosderivados,alimentosfortificadoscomcálcioe
suplementos são outros meios pelos quais o consumo ótimo do cálcio pode ser alcançado
(FISHBEIN,2004).
Os suplementos de cálcio são geralmente apresentados na forma de sais ou
combinaçõesdesais,porexemplo,carbonato,citrato,lactatoefosfato,eemmenorproporção
gluconato, glubionato, gluceptato.Taissuplementosirão variarnoconteúdodecálcio,com
maiorpercentualparacarbonatodecálcio-CaCO
3
(40%).Outrossais,comocitrato,lactatoe
gluconatofornecem21%,14%e9,3%decálcio,respectivamente(FISHBEIN,2004).
Temsidoobservadoumaumentonaeficiênciadeabsorçãodecálciopelacoingestão
deCaCO
3
comalimentosemmulheresnormaisjovenseemidosos(HEANEYetal.,1989).
2.4Osteoporoseinduzidaporglicocorticóides
Osglicocorticóidessãohormôniosdenaturezaesteróidicaqueatuamemváriosórgãos
e sistemas. O produto natural, o cortisol ou a hidrocortisona, é considerado o principal
hormônio do córtex supra renal, e, a partir de modificações em sua molécula, foram
sintetizadosinúmerosderivadoscomatividadeglicocorticóidemaioremaisprolongada,cujas
indicaçõesterapêuticassãoamplas(CORONHOetal.,2001).
Esses hormônios, além de apresentarem vários efeitos sobre a resposta imune,
propriedade antiinflamatória e imunosupressiva, quando administrados terapeuticamente,
também estão associados com a perda óssea e um subseqüente aumento de fraturas em
humanos(PATSCHANetal.,2001).
Os efeitos dos glicocorticóides sobre o tecido ósseo podem ser devido a diversos
fatores,incluindoaumentodaeliminaçãodecálciorenalediminuiçãodaabsorçãodecálcio
13
intestinal.Umbalançonegativodecálciodevidoamudançasnotransportedecálciorenale
intestinal é responsável pelo hiperparatireoidismo secundário em pacientes tratados com
glicocorticóides (BIKLE e PILLAI, 1993; KLEIN et al., 1977; LUKERT e RAISZ,1990;
REID,1997).Sabe-sequeacorticoterapiainfluencianegativamenteometabolismorenalde
cálcio, aumentando a sua excreção urinária, devido à redução da reabsorção tubular renal
(SEGALeLANE,1997).
Notratointestinal,ainfluênciamaisevidenteéadiminuiçãodesuaabsorção,através
da inibiçãodotransporte ativotranscelularsecundárioaoantagonismosobre avitamina D.
Entretanto,pareceexistirumaassociaçãoentreosníveisdeglicocorticóideseaabsorçãode
cálcio pelo duodeno, de tal forma que doses baixas aumentam, enquanto doses elevadas
reduzemsuaabsorção(SEGALeLANE,1997).
OefeitoestimulatóriodiretodeglicocorticóidessobreasínteseesecreçãodePTHtem
sido observado in vitro: administração de dexametasona aumenta a secreção de PTH de
células da paratireóide de cultura bovina e a secreção de PTH estimulada por cortisol de
culturasdeglândulasdeparatiróidederato(AU,1976).
Concentrações baixas de esteróides sexuais na circulação em mulheres após a
menopausa ou ovariectomizadas levam ao aumento da perda óssea. Entretanto, reposição
hormonalpodepreveniressasmudanças.Naausênciadereposiçãohormonal,aosteoporose
podesedesenvolvercomoumresultadodeumareduçãonaformaçãoósseaeestimulaçãona
reabsorção óssea (DUCY et al., 2000; SCHOT e SCHUURS, 1990; WEINSTEIN et al.,
2000).Oefeitoinibitóriodosglicocorticóidessobreasínteseesecreçãodehormôniossexuais
tambémcontribuiparaaosteoporoseinduzidaporglicocorticóides.
Os glicocorticóides modificam a atividade metabólica e proliferativa das células
ósseas. Eles inibem a osteoblastogênese e osteoclastogênese e reduzem a meia vida dos
osteoclastos.Elestambémsãopotentesrepressoresdafunçãoosteoblásticaeprovavelmente
estimuladores da maturação dos osteoclastos. Em conjunto, estas mudanças conduzem à
osteoporoseinduzidaporglicocorticóide,principalmentedevidoàformaçãoósseareduzida.
Umaumentonareabsorçãoósseapareceestarmenosenvolvido(PATSCHANetal.,2001).
2.5Tratamentodaosteoporose
No Brasil,somente umapessoa em três comosteoporose é diagnosticada, e destas,
somenteumaemcincorecebealgumtipodetratamento(ZABAGLIAetal.,2001).
Tanto para a prevenção como para o tratamento da osteoporose são recomendadas
dietas ricasemcálcio. Mulheres na pré-menopausa, mulheresna pós-menopausa e homens
necessitamingerircercade1000a1500mgdecálcio/dia(SZEJNFELD,2004).
MEINÃO et al. (1998) relatam que a suplementação de cálcio nas doses de 1.000
mg/diaemmulheresnapós-menopausadiminuiaperdademassaósseaematé50%.
M
ulheres
que receberam 1.000 a 2.000mg de cálcio por dia durante um ano, quando comparadas a
mulheresquereceberamplaceboapresentaramumadiminuiçãosignificativadaperdaóssea
emcolunalombar,entretantoesseefeitobenéficoseperdeunosegundoanodaterapêutica.
Além da ingestão adequada de cálcio, recomenda-se exposição solar e ingestão de
alimentosricosemvitaminaDqueasseguremomínimorecomendadode400a800UI/dia
(ZABAGLIAetal.,2001).
Na terapia de tratamento de osteoporose muitas vezes se faz necessário o uso de
fármacos,dentreestesoestrogênio,calcitonina,raloxifeno,alendronatoerisedronato.
Osestrogênios atuamnadiminuiçãodareabsorçãoóssea,previnemaperdadeosso
trabecular e cortical, reduz em 50% o risco de fratura em qualquer sítio esquelético e
aumentam a densidade óssea da coluna (5 a 6%) e fêmur (2 a 3%). Os maiores efeitos
14
ocorrem em mulheres com perda óssea recente ou acelerada. Esta terapia de reposição
hormonal(TRH)podeserutilizadaemqualquermomentoapósamenopausa,porémémais
eficaz quando ministrada a mulheres mais jovens nos primeiros anos após a menopausa
quandoaindanãoocorreugrandeperdadadensidadeóssea(ZABAGLIAetal.,2001).
Emboraexistamevidênciasdequeosestrogêniosemdosesadequadassejameficazes
notratamentodaosteoporose,temsidoestabelecidaumarelaçãoentreTRHemaiorriscode
ocorrência de câncer de pulmão e problemas cardíacos. Assim, atualmente, recomenda-se
doses baixas de TRH para reduzir sintomas próprios da menopausa e prevenir a perda de
massaóssea(YASUIetal.,2003).
A calcitonina altera a motilidade citoplasmática dos osteoclastos inibindo sua
atividade de reabsorção óssea. A calcitonina utilizada atualmente na prática clínica é um
hormônio sintético proveniente do salmão, considerado 50-100 vezes mais potente que a
calcitonina humana. Deve ser utilizada em homens ou mulheres após a menopausa com
osteoporosedecoluna,associadaounãoafraturaagudavertebral.Estudossugeremquedoses
de200UI/diadecalcitoninareduzemoriscodenovasfraturasvertebraisem30%,sem,no
entanto,qualquerefeitosobreasfraturasnãovertebrais(ZABAGLIAetal.,2001).
Outrofármacoéoraloxifenoquereduzareabsorçãoóssea,previneaperdaósseana
colunaefêmur,aumentaadensidadeósseadacoluna(1,5%)edofêmur(1,5%)ereduzem
50% o risco de fratura na coluna. Sua utilização foi aprovada apenas para a prevenção da
osteoporoseenãoparaotratamentodaosteoporoseestabelecida(ZABAGLIAetal.,2001).
Oalendronatofoioprimeirobisfosfonatolargamenteutilizadoqueapresentoudados
convincentessobre sua eficácia na redução defraturas depacientes comosteoporose. Ele
diminui o número e a atividade dos osteoclastos, inibindo a reabsorção óssea, aumenta a
densidadeósseadacoluna(3a5%)edofêmur(2a3%)ereduzaperdaósseadoantebraço
em 50%. Cerca de 86% dos pacientes apresentam algum aumento de densidade óssea
(ZABAGLIAet al.,2001).
Oalendronatoreduzsignificativamenteaincidênciadetodasas
fraturasclínicasempacientescomhistóriadefraturasvertebrais(DELMAS,2002).
Outrobisfosfonatoéorisedronatoquetambémrevelasereficaznareduçãodefraturas
de pacientes osteoporóticos.
Esse fármaco é capaz de reduzir o risco de novas fraturas
vertebraisem49%emcomparaçãocomogrupo-controleapóstrêsanosdetratamento,com
redução de 61% no primeiro ano de terapêutica. O risco de fraturas não vertebrais foi
reduzidoem33%apóstrêsanosdetratamento.Orisedronatotemaçãomaisrápidaeémais
bem tolerado que o alendronato. Ambos são contra-indicados em pacientes com doença
gastrintestinalativaoucomalteraçõesestruturaisdoesôfago(ZABAGLIAetal.,2001).
Ateriparatida,queéafração amino-terminaldohormôniodaparatireóide(PTH), é
ummedicamentoquesepropõeareverteralteraçõesesqueléticasqueocorremnaosteoporose
atravésdoestímulodiretosobreaformaçãoóssea,ativandoosteoblastosdasuperfícieósseae
prolongando a vida média dos osteoblastos ativos. Sua ação se dá tanto no osso cortical
quanto no trabecular (ZABAGLIA et al., 2001). Estudo multicêntrico que incluiu 1.637
mulheres na pós menopausa portadoras de fraturas vertebrais prévias, seguidas por um
períodode21meses,demonstrouganhodemassaósseaem10%doscasosereduçãode65%
defraturasvertebraise53%defraturasextravertebrais(NEERetal.,2001).
2.6Biodisponibilidadedeminerais
A composição dos alimentos é uma indicação muito significante do seu valor
nutritivo, contudo não é suficiente para uma caracterização completa do ponto de vista
nutritivo, isso porque raríssimos são os nutrientes que, contidos nos alimentos, tornam-se
totalmentedisponíveisaoorganismoapósasuaingestão(COZZOLINO,1997).
15
Aporçãodisponíveldequalquernutrienteéaquelaqueéabsorvidaemumaformaque
possa ser utilizada pelo organismo em seu metabolismo celular (COZZOLINO, 1997). Os
fatores mais importantes que interferem na biodisponibilidade dos nutrientes são:
digestibilidade, absorção, complexação e presença de substâncias tóxicas (SANTOS et al.,
2004).
Emrelaçãoaosminerais,existeumagrandevariaçãodedisponibilidadebiológicaque
depende,principalmentede:naturezaquímicadocompostomineral;complexaçãocomoutras
substânciascontidasnosalimentos;naturezaquímicadocompostoformado;ecompetiçãode
doisoumaiselementospelomesmosítiodeaçãooumecanismodeabsorção(SGARBIERI,
1987).
A importância da determinação da biodisponibilidade de minerais em dietas está
centralizadanoestabelecimentodasrecomendaçõesdeingestãodesseselementosemfunção
dasnecessidadesdosindivíduos.Assim,osestudosdabiodisponibilidadedenutrientesdevem
serespecíficosparacadaregião,tendoemvistaagrandediversidadededietasedeindivíduos
(COZZOLINO,1997).
Oteore abiodisponibilidade de cálciovariammuito nosdiversos alimentos, sendo
queumgrandenúmerodefatoresinfluencianoaproveitamentodesseelementopresentenas
refeições.Porexemplo,oleitedevacaederivadosseconstituemnasfontesmaisricasecom
maiorpercentualdeabsorçãodessemineral.Porém,outrosalimentos,quandoingeridosem
quantidadesadequadas,podemcontribuirconsideravelmenteparaofornecimentodecálcio,
deformaaproveitável,aosindivíduos(COZZOLINO,1997).
Diversosfatorespodemprejudicaroaporteadequadodecálcio,dentreeles,podem-secitar
as interações negativas que ocorrem entre omineral e demaiscomponentes dosalimentos,
como o ferro, proteínas, sódio e fitatos, acarretando redução de sua biodisponibilidade na
dieta(WEAVEReHEANEY,2003).
Devido à relação entre deficiência de cálcio e osteoporose, a suplementação deste
macromineraltemsidoutilizadaemmulheresad,ultascomvistasaminimizarperdasósseas
associadasàidadeeaodesenvolvimentodaosteoporose(DAWSON-HUGHESetal.,1986).
Damesmaforma,produtosalimentíciostêmsidofortificadoscomcálcio,especialmenteleite
eprodutosabasedeleite(WOODeZHENG,1997).Entretanto,umpotencialefeitoadverso
do cálcio quando oferecido com a refeição é adiminuição na absorção de minerais traços
(DAWSON-HUGHESetal.,1986).
Os efeitos da suplementação de cálcio sobre a absorção do ferro têm sido
documentadosemalgunsestudos.DAWSON-HUGHESetal.(1986)verificamosefeitosda
suplementaçãode500mgdecálcioelementar(carbonatodecálcioehidroxiapatita)sobrea
absorçãode3,6mgdeferronão-hemeemmulherespós-menopausa.Osmesmosobservaram
umareduçãode50%a60%naabsorçãodoferrodeumarefeição(cafédamanhã)marcada
extrinsecamentecomFe,contendotambém227mgdecálcio.
Damesmaforma,COOKetal.(1991)observaramumareduçãonaabsorçãodoferro
não-hemedeumarefeiçãocompostaporhambúrguerquandodasuplementaçãode600mgde
cálcionaformadecitratodecálciooufosfatodecálcio.Naformadecarbonatodecálcionão
houvereduçãonaabsorção.
AinteraçãoentrecálcioezincotambémfoiestudadaporDAWSON-HUGHESetal.
(1986). Esses autores avaliaram o efeito de suplementação de 500mg de cálcio elementar
(carbonato de cálcio e hidroxiapatita) sobre o zinco (3,62mg), porém não foi observada
reduçãonaabsorçãodestemineral.
SegundoWOODeZHENG(1997),estudossobreoassuntotêmmostradoresultados
controversos.Osmesmosautoresavaliaramoefeitodaingestãodegrandesquantidadesde
cálcio sobre a absorção do zinco em mulheres pós-menopausa que receberam uma dieta
padronizadacontendo17,6mgdezincoe890mgdecálciopordiae,após12dias,receberam
16
mais468mgdecálcionaformadeumalimentooudeumsuplemento(fosfatodecálcio).O
balanço de zinco foi significativamente reduzido durante o tratamento com altas doses de
cálcio.Emumsegundoestudo,aingestãode600mgdecálciojuntocomarefeiçãodiminuiu
aabsorçãodezincoem50%,concluindoqueasdietas comaltosteoresdecálcioparecem
aumentarasnecessidadesdezincoemadultos.
Outro mineral que está intimamente associado ao cálcio na nutrição humana é o
fósforo. Para ajudar a manter o equilíbrio normal sérico cálcio-fósforo, a quantidade de
fósforonadietadevemserequilibradasnaproporção1:1.Entretanto,suplementosdecálcio
ou mesmo elevadas ingestões de cálcio podem comprometer este equilíbrio e alterar a
absorçãodofósforo(WILLIAMS,1997).
Os efeitos do cálcio no metabolismo do fósforo foram estudados em adultos por
SPENCERetal.(1984),utilizando200,800e2000mg/diadecálcioe200e800mg/diade
fósforo.Aadiçãodediferentesquantidadesdecálciolevouaumasignificantediminuiçãona
excreçãourináriadefósforoeaumaumentonaexcreçãofecaldefósforo.
17
3MATERIAISEMÉTODOS
3.1Materiais
3.1.1Matéria-prima
Cascas de ovos de galinha (Gallus gallus, L.) oriundas de processo fabril foram
fornecidaspelaindústriadealimentosSohovosABBrasil-Sorocaba-SPparaarealização
deste trabalho. Foram coletadas, acondicionadas em caixas térmicas de Isopor® com gelo
seco e transportadas até o Laboratório de Processamento de Alimentos do Instituto de
NutriçãoJosuédeCastrodaUniversidadeFederaldoRiodeJaneiro.
3.1.2Animaisdeexperimentação
Paraarealizaçãodestetrabalhoforamutilizadas63ratasadultas(
Rattusnorvergicus),
da linhagem Wistar, variedade Albinus, ordem Rodentia mammalia, família Muridae,
provenientesdacolôniadoBiotériodoLaboratóriodeCirurgiaExperimentaldaFaculdadede
Ciências Médicas da Universidade do Estado do Rio de Janeiro (LCE/UERJ), local onde
receberam raçãoapropriadapararatoseáguaad libitum,atéatingiremopesoideal parao
iníciodoexperimento.
3.1.3Biotério
ObiotériodoLCE/UERJeradotadodesistemadeexaustãoefotoperiodismo(ciclo
claro e escuro de 12 em 12 horas), climatizado, com temperatura constante de 24 ± 2°C,
bancadasparaomanuseiodeanimaisesalapararealizaçãodeprocedimentoscirúrgicos.
3.2Métodos
3.2.1Manuseiodascascasdeovos
3.2.1.1Higienizaçãodascascasdeovos
As cascas de ovos foram inicialmente lavadas em água corrente sob pressão até a
remoçãocompletadassujidadesmacroscopicamentevisíveis.Emseguida,foramimersaspor
15minutosemáguacloradacom150ppmdeclororesiduallivre(CRL),cujopHfoiajustado
para 6comHCl. Posteriormente à drenagem daágua clorada, ascascas foram imersasem
águadecloradaatéaremoçãototaldoCRL,avaliadopelométodocolorimétricodao-tolidina
(PALIN, 1950).Apósaremoçãototal doCRL,ascascasforamcentrifugadas a2.000 rpm
durante8minutosparadrenagemmáximadaáguadeclorada.
3.2.2Obtençãodacascadeovoempó
Devidamente higienizadas, as cascas foram submetidas à secagem em estufa com
circulaçãodearaquecidoa55±5ºC.Depoisdedesidratadas,foramtrituradascomauxíliode
moinhodefacasatéqueaspartículasatravessassempeneirasdemalhas0,25mm.Opóobtido
foiacondicionadoemsacosdepolietilenocomaltabarreiraaovapord´águaearmazenadoà
temperaturaambienteenapresençadeluz.
18
3.2.3Determinaçãodacomposiçãocentesimal
Paradeterminaçãodacomposiçãocentesimalforammensuradososteoresdeumidade,
cinzas,extratoetéreototal,proteínabrutaecarboidratos,conformedetalhamentoabaixo.As
dosagensforamrealizadasemtriplicata,sendoregistradasasmédiasencontradas.
3.2.3.1Umidade
A umidadefoi determinada por gravimetria e constou de pesagens dealíquotas em
pesa-filtros. Cadapesa-filtro foi previamente tarado, adicionado da amostra e aquecido em
estufa a 105 ± 5°C até a obtenção de peso constante (IAL, 2005). Os resultados foram
expressosemgdeumidade/100gdeamostra.
3.2.3.2Resíduomineralfixo(RMF)oucinzas
Foideterminadoatravésdepréviacarbonizaçãodealíquotasatéaformaçãodecarvão
eposteriorincineraçãoemmuflaa550°Cafimdeeliminarcompletamenteocarvão(IAL,
2005).Osresultadosforamexpressosemgdecinzas/100gdeamostra.
3.2.3.2Nitrogêniototaleproteínabruta
Para determinação do nitrogênio total, alíquotas foram submetidas as etapas de
digestão, destilação e titulação deacordo com os procedimentossugeridos pelo método de
Kjeldahl(IAL,2005).Oteordeproteínabrutafoicalculadoatravésdamultiplicaçãodoteor
de nitrogênio total pelo fator de conversão 6,25.
Os resultados foram expressos em g de
proteínatotaloubruta/100gdeamostra.
3.2.3.3FraçãoNifext
AfraçãoNifextfoideterminadapeladiferençaentre100eosomatóriodosteoresdos
demais macronutrientes (IAL, 2005). Os resultados foram expressos em g de
carboidratos/100gdeamostra.
3.2.3.4Extratoetéreototaloulipídios
A extração da fração lipídica foi realizada com auxílio de um extrator de Soxhlet,
sendo utilizado éter etílico como solvente e a quantificação foi realizada por gravimetria
(IAL,2005).Osresultadosforamexpressosemgdelipídeostotais/100gdeamostra.
3.2.4Valorenergéticototal(VET)
OVETfoicalculadoatravésdasomadosprodutosdonúmerodegramasdeproteínas
e de carboidratos multiplicada por quatro (4 kcal/g), e do número de gramas de lipídios
multiplicada por nove (9 kcal/g), sendo o resultado desta soma expresso em kcal/100g de
amostra(KRAUSEeMAHAN,2002).
3.2.5Perfilemaminoácidos
AdeterminaçãodoperfildeaminoácidosfoirealizadanolaboratóriodaEMBRAPA-
AgroalimentosdoRiodeJaneirosegundoametodologiapreconizadapelaAOAC(2000).Os
19
aminoácidosforamobtidosapóshidrólisedealíquotasdecascadeovoempócomHCl6M
por 24h a 110 +
1°C em ampolas seladas a vácuo. Os hidrolisados foram evaporados em
dessecadorcontendopastilhasdeNaOHe,posteriormente,suspensosemtampãocitratopH
2,2. Então foi realizada a determinação por cromatografia líquida de alta eficiência com
detecção fluorimétrica após derivatização com 6-aminoquinolyl-N-succinimidyl carbamate,
em coluna de resina de trocacatiônica e derivatização pós-coluna com ninidrina em auto-
analisadordeaminoácidosHewlettPackard,modelo1090M,equipadodecolunade200mm
decomprimento,contendoresinadetrocaiônicadesódio,comainjeçãode25µLdaamostra
eoperandoemcondiçõesparahidrolisadosprotéicos(fluxo de 1mL/min,à temperatura de
25°C)(SPACKMANetal.,1958).Osresultadosforamexpressosemgdeaminoácidospor
100gramas(g/100g).
3.2.6Determinaçãodoteordeminerais
A determinação do perfil de minerais foi realizada no Laboratório de
espectrofotometriadoInstitutodeQuímicadaPontifíciaUniversidadeCatólica(PUC)doRio
deJaneiro.Asamostrassecas,pesando5+
0,0035g,foramcalcinadasemmuflaa550°C,por
período mínimo de 2 horas e as cinzas obtidas foram dissolvidas em HCl 2mol/L. Então
foramanalisadasporespectrometriademassacomplasmaindutivamenteacopladonomodo
semi-quantitativo, utilizando o equipamento ELAN 6000 da Perkin Elmer-Sciex (AOAC,
2000).Osresultadosforamexpressosemmgdomineralcorrespondente/100gdecascadeovo
empó.
3.2.7Análisemicrobiológicadacascadeovoempó
A casca de ovo em pó foi submetida a análises microbiológicas realizadas no
Departamento de Tecnologia de Alimentos do Instituto de Tecnologia da Universidade
Federal Rural doRiode Janeiro(UFRRJ),sendo pesquisados bactérias mesófilas aeróbias,
boloreseleveduras,coliformesa35°Cea45°CeSalmonellaspp,,conformeprocedimentos
descritosaseguir:
3.2.7.1Bactériasmesófilasaeróbias
Apesquisadebactériasmesófilasaeróbias(contagemtotalemplaca)foifeitabaseada
no método descrito no Compendium of Methods for the Microbiological Examination of
Foods(MORTON,2001).
Amostras de 10 g de casca de ovo em pó foram retiradas assepticamente das
embalagensehomogeneizadascom90mLdeáguapeptonadaparaopreparodediluiçõesaté
10
-6
. Alíquotas de 1 mL de cada diluição foram pipetadas em placas de Petriestéreis, em
duplicata.Omeiodeculturaágarpadrãoparacontagem(PCA),pH7,0,foivertidosobrea
aliquotajápipetadaehomogeneizadaemmovimentossuaves.Apósasolidificaçãodoágarà
temperaturaambiente,asplacasforamincubadasemposiçãoinvertidaa35-37°C/48horas.
Depois da incubação, somente placas de mesma diluição que apresentaram entre 25 - 250
colôniasforamconsideradasparaacontagem.OsresultadosforamexpressosemUFC/gde
cascadeovoempó.
3.2.7.2Boloreseleveduras
A pesquisa de bolores e leveduras foi realizada com base no método descrito no
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods (BEUCHAT e
COUSIN,2001).
20
Amostras de 10 g de casca de ovo em pó foram retiradas assepticamente das
embalagensehomogeneizadascom90mLdeáguapeptonadaparaopreparodediluiçõesaté
10
-6
. Alíquotas de 1 mL de cada diluição foram pipetadas em placas de Petriestéreis, em
duplicata.Omeiodeculturausadofoioágarbatatadextrose(ABD),acidificadocomsolução
esterilizadadeácidotartáricoa10%paraajustedepH,a3,5±0,1,quefoivertidoemplacas
de Petri estéreis e homogeneizadoem movimentos suaves. Após a solidificação do ágar à
temperaturaambiente,asplacasforamincubadasemposiçãoinvertida,a20-25°Cpor3a5
dias. Após incubação, foram consideradas para a contagem, somente placas de mesma
diluiçãoqueapresentassementre25-250colônias.OsresultadosforamexpressosemUFC/g
decascadeovoempó.Acontagemnãofoiexpressaseparadamenteparaboloreseleveduras
easanálisesforamfeitasemduplicata.
3.2.7.3Coliformesa35°Cecoliformesa45°C
Apesquisadecoliformesa35°Cea45°Cfoiefetuadaemmeiosdeculturalíquidos,
porcolorimetria,atravésdatécnicadonúmeromaisprovável(NMP)emduplicata,método
descrito no Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods
(KORNACKIeJOHNSON,2001).Astrêsetapasqueforamrealizadas:Testepresuntivopara
detectarapresençademicroorganismosdogrupocoliforme;Testeconfirmativoparainibiro
crescimentodebactériasquenãofossemdogrupocoliforme;eTestedecoliformesa45°C,
paradetectarapresençadecoliformesfecais.
Amostras de 10 g de casca de ovo em pó foram retiradas assepticamente das
embalagensehomogeneizadascom90mLdeáguapeptonadaparaopreparodediluiçõesaté
10
-6
. Alíquotas de 1mL de cada diluição foram pipetadas para uma sériede três tubos de
caldolaurilsulfatotriptose(LST),pH6,8.Apósahomogeneizaçãoeincubaçãodostubosa
35°C/48horasforamobservadosaproduçãodegás,sendoconsideradospositivosostubos
que assim apresentaram. Com auxilio da tabela do número mais provável (NMP) para 3
diluições com 3 tubos em cada diluição, os resultados foram expressos em NMP de
coliformes/10gdecascadeovoempó.
3.2.7.4Salmonellaspp.
ApesquisadeSalmonellaspp.foibaseadanametodologiapropostanoCompendium
of Methods for the Microbiological Examination of Foods (WALLACE et al., 2001) e
realizadaemduplicata.
Foramtransferidos,assepticamente,25gdecascadeovoempópara225mLdecaldo
lactosadoeincubadoa35-37°C,por24horas.Apósoperíododepré-enriquecimento,10
mLdessemeioforamtransferidos,assepticamente,para90mldecaldoselenito-cistina,pH
7,0 e para 90 mL de caldo tetrationato verde brilhante (Caldo TT). Após completa
homogeneização foram incubados a 42,5 °C por 24 h em banho maria. Partindo do
enriquecimentoseletivo,comauxíliodealçadeplatina,foramfeitasestriasnosmeios:ágar
verde brilhante (Ágar BG); ágar xilose lisina-desoxicolato (Ágar XLD); ágar para
enterobactériassegundoHektoen,pH7,5±0,1;ágarSalmonella-Shigella(ÁgarSS),pH7,0±
0,1eágarRambach,pH7,3±0,2a25°C.Todasasplacasforamincubadasa35-37°Cpor
24hedepoisavaliadasparaverificarapresençadecolôniascaracterísticas.
21
3.2.8Avaliaçãodorendimentodacascadeovoempó(η)
Orendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovoempófoiobtidopelarazão
entreamassadecascasdeovosempóproduzido(mf)eamassadecascasdeovosantesda
secagem(mi),calculadopelaequação01.
Equação01.Cálculodorendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovoempó.
3.2.9Curvasdeadsorçãoedesorçãodacascadeovoempó
Acurvadeadsorçãodacascadeovoempófoideterminadaapartirdaobtençãoda
umidadedeequilíbrioentreaamostraeoar.AmetodologiautilizadaestáilustradanaFigura
1esefundamentanamodificaçãodométodoestáticodosdessecadoressobvácuo,proposto
porKIMURA(1992)ejáutilizadoporPENAetal.(1994)eTOSTESetal.(1994).
Foramutilizadospotesdevidro de500mL,ecadaum deles,recebeuumasolução
saturada(Quadro4)quepropiciouaobtençãodeumidadesrelativasnafaixade7%a87%,
nasquaisasamostrasforamexpostas.
Tampa
Potede500ml
Pesa-filtro
Solução
Saturada
Amostra
decascadeovoempó
Figura1.Representaçãoesquemáticaparaobtençãodasumidadesdeequilíbrio.
Quadro4.Soluçõessaturadasutilizadasparaaobtençãodasrespectivasumidadesrelativas.
Saisutilizados Umidaderelativa(%)
NaOH 7
MgCl
2
.6H
2
O 33
NaBr 57
NaCl 75
(NH
4
)
2
SO
4
81
K
2
CrO
4
87
Fonte:KIMURA,1992;PENAetal.,1994eTOSTESetal.,1994.
η=mf/mi
22
3.2.10Tamanhodaspartículasdacascadeovoempó
Aanálisedadistribuiçãodotamanhodaspartículasdacascadeovoempóseguiuos
procedimentosdescritosporASCHERIetal.,2006.Adeterminaçãorealizadanaunidadede
dispersãolíquidadoequipamentoLaserParticleSizerAnalysette22(Fritsch,Idar-Oberstein,
Alemanha), o qual utiliza o princípio da difração a laser, produzindo laser hélio-neon no
comprimentodeondade632nm.Asfraçõesgranulométricasforamadicionadaslentamente,
usando álcool isopropílico como agente dispersor, sob agitação constante, até que 7% de
obscuridadedofeixedelaserfossealcançadaparainíciodaleitura.
3.2.11Avaliaçãodautilizaçãobiológicadocálciodacascadeovoempó
3.2.11.1Preparaçãodasrações
Foram preparadas sete rações para ratos adultos no Laboratório de Nutrição
ExperimentaldaUniversidadeFederalFluminense,tendosidoadotadocomopadrãodietético
oprotocoloparamanutençãodecobaiasdelaboratóriodoInstitutoAmericanodeNutriçãode
1993(AIN93M)(REEVESetal,1993).
Asmisturassalina ea vitamínicapara ogrupo controle (grupo1) eparaogrupo 2
seguiramospadrõesdaAIN93M,enquantoqueparaosdemaisgruposforamdiferenciadas
conformeapresentadonatabela1.
Inicialmente,paracadatipoderação,foirealizadaapesagemdetodososingredientes
queforamtransferidosaumabatedeirasobagitaçãoconstante,considerandoadensidade(do
mais leve para o mais pesado) como a seqüência de adição dos ingredientes. Ainda sob
agitação,foiacrescentadaáguaferventeaospoucosatéformarumamassacomtexturalisa
quefoipeletizadaemformatoscilíndricos.
Ospelletesobtidosforamespalhadosembandejasdeaçoinoxidáveledesidratadosem
secadordebandejas,ondeoardesecagemfoiinsufladoa55-60ºCatéaobtençãoderesidual
deumidadeemtornode5a8%.
Tabela1.Raçõesoferecidasaosdiferentesgruposexperimentais.
Gruposdeanimais Rações
Grupo1
(Controlesemosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M)
Grupo2
(Controlecomosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M)
Grupo3(comosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M),sendoo
cálciodamisturasalinasubstituídopelacascadeovoempó
atéatingironíveldecálciorecomendadopelaAIN93M.A
misturavitamínicanãosofreualterações.
Grupo4(comosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M),sendoo
cálciodamisturasalinasubstituídopelacascadeovoempó
atéatingironíveldecálciorecomendadopelaAIN93M
acrescidode50%.Amisturavitamínicanãosofreualterações.
Grupo5(comosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M),sendoo
cálciodamisturasalinasubstituídopelacascadeovoempó
atéatingironíveldecálciorecomendadopelaAIN93M
acrescidode50%.Amisturavitamínicaisentadevitaminas
DeK.
23
Continuação-Tabela1.Raçõesoferecidasaosdiferentesgruposexperimentais
Grupo6(com
osteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M),sendoo
cálciodamisturasalinasubstituídopelacascadeovoempóaté
atingironíveldecálciorecomendadopelaAIN93Macrescido
de50%.AmisturavitamínicaisentadevitaminaK.
Grupo7(comosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M),sendoo
cálciodamisturasalinasubstituídopelacascadeovoempó
atéatingironíveldecálciorecomendadopelaAIN93M
acrescidode50%.AmisturavitamínicaisentadevitaminaD.
Grupo8(comosteoporose)
Raçãodemanutençãopararatosadultos(AIN93M),sendoo
cálciodamisturasalinasubstituídopelacascadeovoempó
atéatingironíveldecálciorecomendadopelaAIN93M
acrescidode50%.Amisturavitamínicasuplementadaaté
atingirosníveisde150%darecomendaçãopelaAIN93M
devitaminasDeK
3.2.11.2Modificaçõesnasmisturassalinaevitamínica
Asquantidadesdecascadeovoempóadicionadasnasraçõesforamdeterminadasde
acordo com o teor de cálcio encontrado no produto em estudo, sendo utilizada como
substituintedafontedecálciodamisturasalina,tendocomobasearaçãodemanutençãoAIN
93M. Aquantidadedecálciona raçãodogrupo3 foisuficienteparaatender oteordesse
mineral preconizado pelo mesmo protocolo. As rações dos grupos 4,5,6,7 e 8, além da
quantidadedecasca de ovoem pó para atingir o nívelsugerido pela AIN93 M teve um
incremento,visandopromoverumasuplementaçãodessemineralaonívelde50%.
Asuplementação devitaminas Dfoi determinadacom base na recomendação dessa
vitaminaparahumanosemsituaçõesderiscoparaosteoporose.Homensemulheresdevem
ingerirde200 (até50anos)a400UI/dia(50-70anos)devitaminaD,quandoaexposição
solar for menor que 15 minutos diários (IOM, 2000). Mulheres após os 70 anos devem
receber600UI/dia(IOM,2000),ouseja3vezesamaisdoquenaidadeadulta.Aquantidade
devitaminaKadicionadaseguiuomesmoraciocínio,sendosuplementadaem3vezesamais
em relação a recomendação na fase adulta, sendo considerado nos dois casos as
recomendações da AIN 93 M (REEVES et al, 1993), visto que o ensaio experimental foi
realizadoemratas.
3.2.11.3Ensaioexperimental
Conformedescritoanteriormente,paraarealizaçãodoensaioexperimentalrealizado
no LCE/UERJ e submetido ao Comitê de Ética em Pesquisa da UFRRJ, sob o número de
protocolo 23083.6935/2008-98, foram utilizadas 63 ratas adultas que foram mantidas em
gaiolas coletivas, forradascomcamade maravalha,contendo cada gaiola seteanimaisque
receberamraçãocomercialpararatosadultoseáguaadlibitumatéatingiremopesoentre200
e230g.
3.2.11.3.1Obtençãodosdadosbasais
Ao atingirem o peso estipulado para o desenvolvimento do ensaio, sete animais,
escolhidos aleatoriamente, foram mortos por sobredose anestésica de 30mg/kg de peso
corporal de tiopental sódico, via intraperitoneal, para a determinação de cálcio, fósforo e
24
magnésio ósseo basal, além de dados hematológicos e bioquímicos basais, cujos métodos
serãodescritosposteriormente.
3.2.11.3.2Induçãodaosteoporose
Os demais animais foram submetidos ao processo de indução da osteoporose, que
consistiuemdoisprocedimentos.Oprimeirofoioprocedimentocirúrgicode ooforectomia
bilateral,noqualasratasforamanestesiadaspormeiodousodecloridratodequetamina(40
mg/mL) e cloridrato de xilazina (10mg/mL), na proporção de 1:0,5 mL, na dose de 0,1
mL/100g de peso corporal, via intramuscular. Em seguida, foram posicionadas na mesa
cirúrgicaemdecúbitodorsal,paraarealizaçãodatricotomiaabdominal,tendo-seocuidado
delimparaáreaasertricotomizadacomáguaesabãoneutroeassepsiacomiodopovidine
apósoprocedimento,comovistonafigura2.
Após o procedimento descrito, foi realizada uma laparotomia mediana (Figura 3).
Comoauxíliodobisturi,realizou-seaincisãoedissecçãodoplanomuscularefoiexpostaa
cavidadeperitonial(Figura4).Procedeu-seaidentificaçãodosováriosqueforamexpostos,
identificados (Figura 5) e excisados (Figura 6), por meio da ligadura daparte superior da
trompacomfiodeácidopoliglicólico2-0(Figura7).Aparedeabdominalfoifechadacom
sutura contínuaem doisplanos, umenvolvendo peritônio emusculatura(Figura 8)e outro
envolvendo tecido subcutâneo e pele, com fio de ácido poliglicólico 3-0 (Figura 9). Os
animaisdogrupocontroleforamsubmetidosaumaoperaçãosimulada,massemexcisãode
seusovários.Nesseprocedimento,houveocuidadodemanterosanimaiscontidospelomenor
tempopossível,tendoacontençãoquímicaeficienteporesseperíodoqueduroucercadedez
minutosparacadaanimal.
Os animais foram divididos em grupos experimentais, controle e ooforectomia +
corticoterapia,comoobjetivodeseisolaroefeitodaprivaçãohormonal.
Figura2.Áreaabdominaltricotomizadadoanimalemdecúbitodorsalapósanestesia.
25
Figura3.Aspectodolocaledimensãodalaparotomiamediana.
Figura4.Aspectodaincisãoedissecçãodoplanomuscular.
26
Figura5.Aspectodaexposiçãoeidentificaçãodosovários.
Figura6.Aspectodopinçamentoeexcisãodoovário.
Figura7.AspectodaligaduradapartesuperiordatrompadeFalópio.
27
Figura8.Aspectodasuturanoplanoenvolvendoperitônioemusculatura.
Figura9.Aspectodasuturanoplanoenvolvendotecidosubcutâneoepele.
28
Aos 15diasapóso procedimento cirúrgico, osanimaisreceberamo glicocorticóide
dexametasona(AziumSolução®-Schering-PloughS/A),porviaintramuscular,nadosede7
mg/kgdepesocorporal,umavezporsemana,durantequatrosemanas,àexceçãodosanimais
que constituíram o grupo controle e que receberam solução de NaCl à 0,9% em volume
proporcional aos demais animais, por via intramuscular. Durante esse período foram
oferecidasadlibitum,raçãocomercialpararatosadultoseágua.
3.2.11.2.4Administraçãodasraçõesexperimentais
Posteriormente ao período de indução, os animais foram distribuídos, de forma
aleatória,emoitogruposde7cobaias,sendoumgrupocontrole,compostodosquenãoforam
submetidosàooforectomiaeàaplicaçãodocorticóide,eentãodeu-seinícioaadministração
dasraçõesexperimentais.Acadadoisdias,ospesosdosratoseaingestãoderaçãoforam
registrados.
3.2.11.2.5Parâmetrosbioquímicosehematológicos
Aos 33 dias contados a partir da data de início da administração das rações
experimentais,osanimaisdecadagrupoforammortosporsobredoseanestésicade30mg/kg
depesocorporaldetiopentalsódico,porviaintraperitoneal.
Foram coletados, então, de cada animal, cerca de 4 mL de amostra de sangue, por
punção cardíaca, para a realização do hemograma completo e dosagens das concentrações
séricasdecálcio,fósforoefosfatasealcalina.Paratal,foramutilizadoskitsdesenvolvidose
padronizadospelaBIODINÂMICAProdutoseServiçosparaLaboratótiosLtda.Easanálises
executadasnoLaboratóriodeLípides(LabLip)daInstitutoPiquetCarneiro.
O hemograma foi realizado em contador hematológico automatizado KX-21N
Sysmex
®
easdeterminaçõesdecálciototal,fósforoefosfatasealcalinaforamrealizadaspor
espectrofotometriaemanalisadorbioquímicoautomatizadoA15daBioSystems
®
.
3.2.11.3.6Utilizaçãobiológicadocálciodacascadeovoempó
Osanimaisdosquaisforamcoletadasasamostrasdesangue,tiveramosrinscoletados
e os fêmures esquerdos coletados e dissecados, tendo-se o cuidado de manter a região
epifisáriasemlesões.
Osmateriaiscoletadosforamacondicionadoemsacosdepolietilenocomaltabarreira
aovapord´águaetransportadosemcaixastérmicasdeIsopor®comgelosecoatéoInstituto
de Química daPUC (RJ)para mensuraçãodo teordecálcio,fósforo emagnésio,segundo
métodopropostopeloIAL(2005).
Opercentualdeutilizaçãobiológicadocálciodacascadeovofoiestimadosegundoo
protocolodeNAVES(2003)queconsistenocálculodaproporçãodocálcioretido(teorde
cálcio no fêmurao finaldo experimentomenos ocálcioósseo basal) emfunçãodo cálcio
ingerido.
3.2.12Análiseestatísticadosdados
Os dados obtidos foram submetidos a análises estatísticas descritivas, segundo os
diferentesgruposdetratamento,incluindomédiasedesviospadrão.
Paraverificardiferençasentreosgruposdeanimaisdeacordocomumdeterminado
conjunto de variáveis analisadas simultaneamente foi adotada a Análise de Variância
Multivariada (MANOVA – Multivariate Analysis of Variance) (JOHNSON e WICHERN,
29
2002). Para avaliar os modelos de MANOVA foi utilizada a estatística de teste de Pillai-
BartlettrecomendadaporHANDeTAYLOR(1987).
Noentanto,comoessetesteidentificaapenasadiferençadeformaglobal,apresença
de maisde doisgrupos distintos,impossibilitaalocalizaçãodessa diferençaentretodosos
possíveis pares de comparação entre grupos tratamento e controle. Por essa razão, após
identificar osconjuntosdevariáveisquediferemsignificativamentesegundoosgrupos,foi
realizadaumacomparaçãomúltiplademédiaspormeiodotestedeTukey(YANDELL,1997;
ZAR,1999),calculandointervalosdeconfiançaparaasdiferençascomníveldeconfiançade
95%. Estaanálise permitelocalizaronde seencontramasdiferençassignificativasentre os
grupos.
TodasasanálisesforamrealizadasemambienteRutilizandoaversão2.6.1(R,2007).
30
4RESULTADOSEDISCUSSÃO
4.1Composiçãocentesimalevalorenergéticototal
A composição centesimal e o valor energético total (VET) da casca de ovo em pó
estãoapresentadosnatabela2.
Tabela2.ComposiçãocentesimaleVETdacascadeovodegalinhaempó.
Parâmetrosanalisados Resultados(X+
DP)
Umidade(g.100g
-1
) 1,3490+0,0274
RMF(g.100g
-1
) 91,9600+0,2218
Proteínas(g.100g
-1
) 4,3693+0,3977
FraçãoNifext(g.100g
-1
) 1,5379+0,7029
Lipídiostotais(g.100g
-1
) 0,7837+0,0560
Valorenergéticototal(Kcal.100g
-1
) 30,6823+4,9069
X:médiaeDP:desviopadrão
Osresultadosmostramque100gdesseprodutocontém1,3490+
0,0274gdeumidade,
quantidadequecontribuiparaimpediraproliferaçãodemicroorganismos,alémdepoderser
utilizadoemformulaçõesdesidratadasquesãoelaboradascominsumosdereduzidoteorde
água livre, como por exemplo, as preparações para obtenção de sopas, pós para pudins,
bebidaslácteas,encapsulados,entreoutrosprodutos.
Deve-seressaltarqueamaiorfraçãoencontradanesseprodutofoiadeRMF,91,9600
+
0,2218g/100g.Dessaforma,acascadeovoempópodeserconsideradaumadasmaiores
fontes naturais de minerais, porém, estudos devem ser realizados para avaliar a
biodisponibilidadedessesmineraisparaoshumanos.
Apesardacascadeovoempóapresentar4,3693+
0,3977g/100gdeproteínabruta,
pesquisasprecisamserrealizadaspararevelaroperfildeaminoácidoseensaiosexperimentais
para determinar o coeficente de eficácia protéica, parâmetros importantes para definir a
qualidadebiológicaeusodessafração,jáquesetratadeumresíduodenaturezaanimaleas
porçõesprotéicasdessaorigemtendemarevelarproteínasdealtovalorbiológico.
Em produtos vegetais, na fração Nifext são consideradas as fibras dietéticas e os
carboidratos totais. No caso da casca de ovo, esse conteúdo corresponde ao somatório de
substânciasquenãoestãopresentesnasfraçõesprotéicas,lipídicas,demineraiseaquosa.Por
serumprodutodeorigemanimal,quetêmcomocaracterísticanãopossuirfibras,essafração
pode ser considerada como os carboidratos totais desse produto e assim como o s demais
nutrientespresentespodesercomparadacomosresultadosencontradosporSANT’ANAet
al.(2000)naTabela3.
Osteoresdelipídeosencontradosnesseprodutopodemserconsideradosirrelevantes,
principalmente se for considerada a quantidade ingerida por dia por um indivíduo adulto
saudável.
OVETobtidoparaessepópodeserconsideradorelevanteprincipalmenteparadietas
hipocalóricasquenecessitemdecomplementaçãoousuplementaçãodeminerais.
31
Tabela3.ComparaçãodosresultadosdecomposiçãocentesimaleVETencontradosnacasca
deovodegalinhaempócomosresultadosobtidosporSANT’ANAetal.(2000).
Parâmetrosanalisados
Resultadosencontrados
(X+
DP)
Resultadosencontradospor
SANT’ANAetal.,2000
(X+
DP)
Umidade(g.100g
-1
) 1,3490+0,0274 0,63+0,01
RMF(g.100g
-1
) 91,9600+0,2218 87,71+1,75
Proteínas(g.100g
-1
) 4,3693+0,3977 4,00+0,16
Carboidratostotais(g.100g
-1
) 1,5379+0,7029 8,11
Lipídiostotais(g.100g
-1
) 0,7837+0,0560 0,09+0,01
Valorenergéticototal
(Kcal.100g
-1
)
30,6823+
4,9069 49,25
X:médiaeDP:desviopadrão
Osresultadosdacomposiçãocentesimalobtidosnessapesquisasãosemelhantesaos
encontradosporSANT’ANAetal.(2000)noquedizrespeitoaosteoresdeumidade,RMF,
proteínaselipídios,conformepodeserobservadonatabela3,masdiferenoVETemfunção
do valor de carboidratos totais encontrados por aqueles autores. Também devem ser
considerados que esses valores podem ser alterados devido a fatores que influenciam a
composiçãodoovo,taiscomo:tamanho,alimentaçãoeestadosanitáriodasaves.
4.2Perfildeaminoácidos
Ousodeumalimentocomofonteprotéicadependedefatorescomoaconcentração
totaldeproteínaseaproporçãodeaminoácidosessenciaispresentenasproteínasemquestão
(ANDRIGUETTOetal.,1999).
Para avaliar a qualidade química das proteínas presente na casca de ovo foi
determinado seu perfil de aminoácidos essenciais, cujos os resultados estão mostrados na
tabela4.
Tabela4.Perfildeaminoácidosessenciaispresentesnacascadeovoempóeacomparação
comaproteínapadrãoestabelecidapelaFAO(1985).
Aminoácidos(AA)
essenciais
gAA/100gProteína
Padrão
1
gdeAA/100gcascadeovo
empó
Histidina - 0,43
Isoleucina 4 0,295
Leucina 7,00 0,44
Lisina 5,50 0,295
Metionina - N.A.
Cisteína - N.A.
Sulfuradostotais* 3,50 N.A.
*aminoácidossulfuradostotais=metionina+cisteína
1
FAO/WHO/UNU,1985.
N.A.=nãoanalisado
32
Continuação-Tabela4.Perfildeaminoácidosessenciaispresentesnacascadeovoempóea
comparaçãocomaproteínapadrãoestabelecidapelaFAO(1985).
Aminoácidos(AA)
essenciais
gAA/100gProteína
Padrão
1
gdeAA/100gcascadeovo
empó
Fenilalanina - 0,18
Tirosina - 0,12
Aromáticostotais** 6,00 0,3
Treonina 4,00 0,39
Triptofano 1,00 N.A.
Valina 5,00 0,61
**aminoácidosaromáticostotais=fenilalanina+tirosina
1
FAO/WHO/UNU,1985.
N.A.=nãoanalisado
Todos os aminoácidos avaliados mostraram concentrações inferiores, quando
comparadoàproteínapadrãosugeridopelaFAO(1985).Dessaforma,oprodutonãodeveser
consideradocomoumaboafontedeproteínas,masdeveserestudadocomopossívelfontede
cálcioparafenilcetonúricosdevidoaobaixoconteúdodefenilalanina.
Otratamentodafenilcetonúria,noquedizrespeitoàalimentação,englobaalimitação
daingestãodeproteínasdefontesnaturaisquepossuemaltaconcentraçãoemfenilalanina.A
restriçãoprotéicanaturaldevesercompensadapelautilizaçãodeumamisturadeaminoácidos
quenãopossui,oupossuipequenaquantidadedefenilalaninaemsuacomposição.Amistura
de aminoácidos é, portanto, essencial ao tratamento adequado da doença. Sua ausência
impedeotratamento,poisocasionadeficiêncianutricionalimportante,levandoàquadrosde
desnutrição protéico-energética e de hipovitaminoses, entre outros, já que a dieta é
extremamenterestritivasobváriosaspectos(ELSASeACOSTA,1988).
O Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas para Fenilcetonúria do Ministério da
Saúde estabelece que os produtos utilizados no tratamento da fenilcetonúria são
complementosalimentares,fórmulasisentasdeaminoácidos,isentasdefenilalanina,sendoa
característicabásicadosprodutosamuitobaixaconcentraçãodefenilalanina,quenãopode
sersuperiora0,1gou100mgdefenilalaninapor100gdoproduto(BRASIL,2002),valor
próximoaoencontradonesseestudo(0,18g/100gdecascadeovoempó).
4.3Minerais
Osresultadosdoperfildeminerais(Tabela5)sugeremqueacascadeovoéumafonte
concentradade minerais que deve sernutricionalmente considerada, apesar de que estudos
sobreabiodisponibilidadedesseselementosnecessitamserrealizados.
Dentreosmineraispesquisados,ocálcioapresentouomaiorteor,alémdecontercerta
quantidadedemagnésio,sódio,estrôncio,fósforoepotássio(Tabela5).
33
Tabela5.Valoresmédiosdoteordeminerais(mg/100g)presentenacascadeovo.
Minerais
Resultados(mg/100g
-1
)
Li 0,0061
Be <0,002
Na 117,475
Mg 351,1
Al <0,5
K 41,971
Ca 30263,72
Sc <0,3
Ti 0,458
V 0,008
Cr <0,1
Mn 0,031
Fe 1,5
Co 0,052
Ni <0,0003
Cu <0,0001
Zn 0,083
Ga 0,0004
Ge 0,0479
As 0,012
Se 0,01
Rb 0,040
Sr 103,2
Y 0,001
Zr 0,0005
Nb <0,001
Mo 0,023
Ru <0,0001
Pd 0,0684
Ag <0,002
Cd <0,02
In <0,001
U <0,001
Sn <0,04
Minerais
Resultados(mg/100g
-1
)
Te 0,0008
I <0,8
Cs <0,0005
Ba 3,9739
La <0,001
Ce <0,005
Pr <0,0005
Nd <0,001
Sm 0,002
Eu 0,0018
Gd <0,0005
Tb <0,0005
Dy <0,0005
Ho <0,0005
Er <0,0005
Tm <0,0005
Yb <0,0005
Lu <0,0005
Hf <0,0005
Ta <0,0005
W <0,002
Re <0,0002
Os <0,0001
Ir <0,0003
Pt <0,0004
Au 0,0001
Hg <0,02
Tl 0,0014
Pb <0,02
Bi <0,02
Th <0,0005
P 98,2
Si <0,0004
Sb <0,001
SANT’ANAetal.(2000),emestudorealizadocomamultimistura,revelaramquea
cascadeovoapresenta30810mgdecálciopor100g,resultadosimilaraoencontradonesse
estudo(30263,72 mg.100g
-1
). Em relação ao teor de ferro, esses autores encontraram
resultadoinferioraessetrabalho(0,4mg.100g
-1
e1,5mg.100g
-1
,respectivamente).Quantoao
zinco,oteorencontradoporessesautoresfoisuperioraodopresenteestudo(0,3mg.100g
-1
e
0,08 mg.100g
-1
, respectivamente). Essas variações podem ser creditadas as metodologias
utilizadase/oualimentaçãodasaves,dentreoutrosfatores.
Alguns minerais como sódio, potássio, cálcio, fósforo, cloro e magnésio são
consideradosmacromineraisporseremnecessáriosemgrandequantidadeaoorganismo,ou
seja, 100 mg/dia ou mais. Já os demais como ferro, zinco, cobre, molibdênio, selênio,
estrôncio, iodo e flúor, por serem necessários ao organismo em pequenas quantidades são
denominadosdemicrominerais(KRAUSEeMAHAN,2002).
Aingestãodiáriadecálciorecomendadaparaadultoséde1000mgeparaindivíduos
commaisde50anoséde1200mg(IOM,2000),portanto,apenas3,30ge3,97gdecascade
ovo em pó, respectivamente, supriria as necessidades diárias de cálcio, sem considerar a
biodisponibilidadedessemineralnafonteemquestão.
Parasuprirasdemandasnutricionaisdeoutrosminerais,taiscomofósforo,magnésio,
potássioesódiohaveriaanecessidadedeconsumirgrandesquantidadesdecascadeovoem
pó(tabela6),oquenãoéinteressante,poisoconsumodeelevadasquantidadesdoproduto
promoveriaumaaltaingestãodecálcio,cujoconsumoacimadosníveisrecomendadosparece
nãocontribuir,proporcionalmente,paraadeposiçãodecálcionotecidoósseo(SILVAetal.,
2004).
Tabela 6. Necessidade de consumo de casca de ovo em pó (g) para atender as demandas
nutricionaismagnésio,sódio,fósforoepotássioparaadultos.
Minerais Recomendaçãodiária(mg)
IOM,2002
Consumodecascadeovoempó(g)
parasuprirasrecomendações
diárias
Magnésio
Homens:19-30anos:400
>31anos:420
Mulheres:19-30anos:310
>31anos:320
113,9
119,6
88,3
91,1
Sódio 1500 1276,6
Fósforo 700 712,8
Potássio 4700 11.190,5
KIMURA(2002)avaliouratosWistarqueconsumiramraçãosuplementadacomdoses
de cálcio 3 a 4 vezes superiores as recomendadas e observou redução do conteúdo ósseo
mineral, sobrecarga renal eenrijecimentoarterial. Dessaforma, sabendo-se que acasca de
ovo apresenta grande quantidade em cálcio, talvez deva ser consumida em quantidades
necessáriasparaatenderasnecessidadesnutricionais.
Éfundamentalsalientaraimportânciadesteestudo, principalmentecomrelaçãoaos
altosníveisdecálciodetectadosnesseprodutoquepossivelmentepodeatuarcomoumafonte
alternativadecálcio.Alémdoaspectoeconômicoeecológico,porsetratardeumresíduo,o
cálciodacascadeovoapresentavantagensnutricionais,poisnãoestáassociadoaelevadas
quantidadesdeproteínaesódio,comoacontece,porexemplo,nosqueijos,quepodeminduzir
aumentodaexcreçãorenaldecálcio.(IOM,1997;WEINSIEReKRUMDIECK,2000).
SegundoLERNERetal.(2000),ALBUQUERQUEeMONTEIRO(2002)eSILVAet
al.(2004),criançaseadolescentesdediferentesregiõesbrasileirasnãoconsomemquantidade
suficiente de cálcio para um desenvolvimento desejável, fato prejudicial, pois nessa faixa
etáriaserianecessáriomaioraportedessemineralparagarantirumaboaformaçãoóssea.
Aingestãodeficientedecálcionainfânciaenaadolescênciapredispõeàosteoporose,doença
de alto impacto econômico que se manifesta nos idosos (MARQUES-NETO, 2001).
Considerandoaimportânciadaingestãoadequadadessemineral,oconsumodacascadeovo
em pó poderia contribuir positivamente com a complementação do cálcio em dietas
deficientes desse mineral, prevenindo futuramente a osteoporose. Entretanto, seu consumo
34
35
devesercontrolado,paraquenãoultrapasseosníveismáximosdeingestãorecomendadospor
faixaetária.
Dentreosresultadosencontrados,outrodadoimportanteaserressaltadoéoteorde
estrôncio na casca de ovo, que juntamente com outros minerais, foram comparados aos
achadosdeSCHAAFSMAetal.(2000)natabela7.
Tabela7.Concentraçõesdemineraisencontradosnacascadeovoempóecomparaçãocom
cascasdeovoempódeorigemeslovaquianaealemã.
Minerais Resultados*
Eslovaquiana**
Alemã1**
Alemã2**
Alemã3**
Ca(mg/g) 302,6 401 385 393 387
Mg(mg/g) 3,5 4,5 3,6 3,6 3,5
P(mg/g) 0,9 0,1 1,5 0,2 1,9
Sr(µg/g)
traços 372 380 880 320
Zn(µg/g)
traços 5,13 5,0 5,0 -
Fe(µg/g)
traços 22,4 23 23 22,5
Cu(µg/g)
traços 7,7 10 13 7,5
Cr(µg/g)
traços 0,12 0,20 0,40 0,25
Se(µg/g)
traços 23,5 45 50 53
V(µg/g)
traços <0,5 <0,5 <0,5 <0,5
Pb(µg/g)
traços <0,5 1,1 1,3 0,53
Al(µg/g)
traços <5 2 2 2
Cd(ng/g) traços <50 18 24 3
Hg(µg/g)
traços <0,2 <0,2 <0,2 <0,2
*Resultadoencontradosnopresenteestudo.
**ResultadosencontradosporSCHAAFSMAetal.,2000.
Osresultadosencontradosparaoteordecálcioapresentaram-seinferioresaosobtidos
porSCHAAFSMAetal.(2000).Emrelaçãoaomagnésioacascadeovoalemãassemelhou-
semaiscomadopresenteestudoe,quantoaosteoresdefósforo,acascadeovoeslovaquiana
ealemã2apresentaramresultadosinferioresaodoestudoatual.Paraosdemaisminerais,os
resultadosencontradosforammuitoinferioresaosdaliteraturacitada.
Dessa maneira, pode-se inferir que a composição da casca apresenta grande
variabilidadequantoaoconteúdomineral,quemuitasvezeséinfluenciadopelaalimentação
dasaves.
CABRERAetal.,(1999)realizaramestudoderevisãosobreosefeitosdoestrônciono
osso de camundongos e sugerem que são dependentes da dose e, mesmo dietas de baixas
concentraçõesdeestrôncio(<4g/L),podeocasionaraumentodataxadeformaçãoósseaeda
densidadeósseatrabecular.Essaobservaçãopodeteraplicaçõesterapêuticas,particularmente
emcondições de doenças caracterizadaspor acelerado processo deremodelamentoósseo e
desmineralização. Por outro lado, uma dieta com altas doses de estrôncio (> 4g/L) pode
causar hipocalcemia pela inibição da síntese da 1,25 dihidroxivitamina D e da absorção
intestinaldocálcio,afetandoometabolismoósseo.
Caso a casca de ovo venha a ser incorporada na alimentação humana, o teor de
estrôncioencontradonãopromoveriamalefíciosàsaúdeóssea,vistoqueestefoiencontrado
embaixaconcentração.
Na terapia da osteoporose suplementos de cálcio são geralmente prescritos na
prevençãoetratamentodadoença(BAYLINKetal.,1999),sendoutilizadoscomoadjuvantes
no tratamento da osteopenia para prevenção de fraturas. No entanto, ROBERTS (1983)
36
revelouaocorrênciadealteraçõesneurológicasempacientesquefaziamusodesuplementos
de cálcio e apresentavam níveis relativamente elevados de chumbo no cabelo, mineral
contaminantecomumenteencontradonossuplementosdecálcio.
A preocupação com acontaminaçãofoi reforçadapor outros trabalhos que também
revelaram a presença de níveis preocupantes de chumbo em suplementos de cálcio
(BOURGOIN et al.,1993; WHITING, 1994; ROSS, 1993; SCELFO eFLEGAL, 2000), o
quetornaossuplementosdecálciopotentefatorderiscoparaexposiçãoaessemetal.
Noprocessometabólico,devidoagrandesemelhançaatômicaeiônicaentrecálcioe
chumbo(POPOVICetal.,2005),aoseremabsorvidoselescompetempelosmesmossítiosde
ligaçãodostransportadorespresentesnamucosaintestinal(MUSHAK,1991)e,apesardestes
apresentarem maior afinidade de ligação por chumbo, uma dieta rica em cálcio ajuda a
diminuir a sua absorção (IPCS, 1995), ou seja, a absorção gastrintestinal é inversamente
proporcionalàquantidadedecálciopresentenadieta(GOYER,1995).
Não foram encontrados trabalhos avaliando os níveis de chumbo em suplementos
comercializadosnoBrasil.AFarmacopéiaBrasileiraestabelecequeoteormáximodemetais
pesadosemcarbonatodecálcioutilizadoeminsumosfarmacêuticosemedicamentosdeveser
de0,002%.NoestadodaCalifórniaoconsumosuperiora1,5µgdechumbo/1gdecálcio/dia
éproibido(CALIFORNIAATTOENEYGENERAL´SOFFICE,1997).
Devido a importância do cálcio para o organismo humano existem diversas fontes
dessemineralnomercado,quealémdechumbo,podemconteroutrosmetaispesadosqueao
seremconsumidospodemtrazerprejuízosàsaúde.
De forma geral, os metais pesados são elementos químicos que por não serem
biodegradáveispodemseacumularnostecidosvivosaolongodacadeiaalimentarchegando
aoserhumanoprincipalmenteatravésdaalimentação.Sabe-sequeasintoxicaçõesporesses
metais freqüentementesão causadaspor alumínio, arsênio, bário, berílio, cádmio, chumbo,
mercúrioeníquel.Esseselementosalteramasestruturascelulares,asenzimasesubstituem
metaiscofatoresdeatividadesenzimáticas(MINDELLeMUNDIS,1996).
Algunsmetaispesadoscomocromo,cobreezinco,encontradosemsolos,areágua,
alémdosalimentos,sãoconsideradosmicroelementosessenciaisaometabolismodosorganis-
mos vivos. Entretanto, o excesso ou carência desses minerais pode levar a distúrbios no
organismoe,emcasosextremos,atéamorte.Essesmineraissãoessenciaisàsaúdehumanae
podem ser introduzidos nostecidos vivos através da água, alimentos, respiração eatépela
própria pele. No entanto, sabe-se que 90% da ingestão de metais pesados e outros
contaminantesocorrepormeiodoconsumodealimentos(IPCS,1992).
Natabela8,pode-seobservarqueapresençademetaispesadosnacascadeovoempó
é pequena e mostra-seadequada frente aos limites estabelecidos pelalegislação (BRASIL,
1998). Quando comparada com concha de ostra em pó, comercializada em todo território
nacionalnaformadecápsulaemuitoutilizadacomosuplementodecálcio,acascadeovo
mostra-se como uma melhor opção, visto que a primeira contém elevados conteúdos de
chumbo, níquel, cádmio,cromo e estanho, quequandoconsumidosem excesso, tornam-se
prejudiciaisàsaúdehumana.
37
Tabela8.Teoresdemetaispesadosencontradonacascadeovoempóeacomparaçãocom
conchadeostrapequenaegrandeeoslimitesestabelecidospelalegislação(BRASIL,1998).
*Resultadosdoestudoatual
**ResultadosdoIDEMA,2004.
4.4Microbiologia
Osresultadosdasanálisesmicrobiológicasnasamostrasdecascadeovoempóestão
demonstradosnatabela9.
Tabela9:Microbiologiadacascadeovoinnatura,desidratadaehigienizadacomsolução
clorada.
Microrganismos
(UFC/g
-1
)
1
Amostrain
natural
Amostra
desidratada
Amostradesidratada
higienizadacomsolução
clorada
Mesófilosaeróbios >3x10
6
>3x10
6
4,6x10
2
Coliformestotais
2
2,8 1,5 <0,3
Coliformes
Termotolerantes
2
<0,3 <0,3 <0,3
Boloreseleveduras >3x10
6
2,0x10
5
3,6x10
2
Salmonella Ausenteem25g Ausenteem25g Ausenteem25g
1
UFC:unidadeformadoradecolônia;
2
NMP:númeromaisprovável;
Pode ser observado que a casca de ovo que não foi higienizada mostrou uma
microbiota, representada por mesófilostotais e bolores e leveduras >3 x 10
6
UFC/g, por
coliformestotaisecoliformestermotolerantesde2,8e<0,3NMP/g,respectivamente.O
mesmo pode ser observado para amostras que foram desidratadas sem serem higienizadas
comsoluçãoclorada,ondeapopulaçãodemicroorganismoseratambémconstituídadeuma
populaçãodemicroorganismossemelhantesdacascainnatura.
Quando a amostra foi higienizada com solução clorada, o nível de contaminação
microbiana foimenor, com destaque para coliformes totais que foi bastante reduzido após
esse processo (< 0,3 NMP/g), mostrando a importância do processo de higienização
empregado.Apresençadessesmicroorganismosnosalimentospodeindicarcontaminaçãode
origemfecalouocorrênciadeenteropatógenos,indicadordequalidadehigiênica(FRANCOe
LANDGRAF,1999).
Não foram encontrados níveis elevados de coliformes termotolerantes nas amostras
(<0,3NMP.g-1),evidenciandoqueestasnãotiveramcontatodiretoouindiretocommaterial
fecal(VARNAMeEVANS,1991).
Em relação a bolores e leveduras, novamente é possível observar que a amostra
higienizadacomsoluçãocloradaapresentoumenorcontaminaçãomicrobiana.Alémdisso,as
Metais
Cascadeovo
(mg/Kg)*
Cascadeostra
pequena(mg/Kg)**
Cascadeostra
grande(mg/Kg)**
LimitesMáximos
(mg/Kg)**
Pb <0,1 28,17 30,43 2,0
Ni <0,003 16,73 19,75 5,0
Cd <0,2 3,05 2,91 1,0
Cr <1 8,89 9,67 0,1
Cu <0,001 1,75 8,44 30
Zn 0,8 1,64 13,64 50
Sn <0,4 2771,65 3145,26 250
38
amostras analisadas não apresentaram agentes do gênero Salmonella, responsáveis por
diversossurtosdetoxinfecçõesalimentares(ICMSF,1980).ApesquisadeSalmonellasp.é
bastanterelevante,sobretudoquandoamatéria-primautilizadaéoovoeseussubprodutos.
Anormabrasileira vigentesobrepadrõesmicrobiológicos paraalimentos(BRASIL,
2001) não estabelece padrões mínimos de tolerância para mesófilos em ovos, nem em
suplementos minerais, produtos que mais se assemelham ao analisado neste estudo.
Entretanto,aPortarianº451daAgênciaNacionaldeVigilânciaSanitária(BRASIL,1997),
revogadapelaresoluçãoRDCnº12(BRASIL,2001),preconizaolimitede10
5
UFC.g-1para
ContagemPadrãoemPlacas.Poresseparâmetro,osníveisdetectadosnasamostrasinnatura
edesidratada(3x10
6
UFC.g-1)estãoelevados.
4.5Rendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovoempó
Oprocessodeobtençãodacascadeovoempófoiconsideradodealtarentabilidade
porterapresentadoumteorelevadoderendimento(98,45%),oquefavorecepequenaperda
domaterial,contribuindoassimparamenorvolumederesíduodescartadonoambiente,caso
esseprodutovenhaaserincorporadonaalimentaçãohumana,conformeobservadonatabela
10.
Tabela10.Rendimentodoprocessodeobtençãodacascadeovo.
Pesopré-secagem
(Kg)
Pesopóseco
(Kg)
Rendimento
(%)
Média(%)
DP
0,301 0,298 99,00
0,3 0,293 97,67
0,3 0,296 98,67
98,45 0,70
DP:desviopadrão
4.6Curvasdeadsorçãoedesorçãodacascadeovoempó
Para a modelagem das curvas de umidade de equilíbrio, têm sido utilizadas relações
matemáticas semi-teóricas eempíricas, uma vez que nenhummodelo teórico desenvolvido
temsidocapazdepredizercomprecisãooteordeumidadedeequilíbriodeprodutosagrícolas
emtodasasfaixasdetemperaturaeumidaderelativadoar(BROOKERetal.,1992).
Apesar da maioria dosprodutos agrícolasjáteremsidoestudados comrelaçãoà sua
higroscopicidade, não foi encontrado na literatura consultada, relato sobre umidade de
equilíbriodecascasdeovosempódenenhumaespéciedeaves.Osdadosdatabela11foram
utilizadosparaaobtençãodascurvasdeadsorçãoedesorção(Gráficos1-6)dacascadeovo
em pó, que revelaram a estabilidade higroscópica mesmo em ambientes de alta umidade
relativa.
39
-0,06
-0,04
-0,02
0
0,02
0,04
0,06
0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h 24h
Tempo(h)
Quantidadedeáguaabsorvida(g)
25ºC 30ºC 35ºC
-0,035
-0,03
-0,025
-0,02
-0,015
-0,01
-0,005
0
0,005
0,01
0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h 24h
Tempo(h)
Quantidadedeáguaabsorvida(g)
25ºC 30ºC 35ºC
-0,3
-0,2
-0,1
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h 24h
Tempo(h)
Quantidadedeáguaabsorvida(g)
25ºC 30ºC 35ºC
-0,08
-0,06
-0,04
-0,02
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h 24h
Tempo(h)
Quantidadedeáguaabsorvida(g)
25ºC 30ºC 35ºC
Tabela11.Teoresmédiosdeumidadedeequilíbrio(UE)emfunçãodatemperaturae
umidaderelativa(UR)
EU
Solução
utilizada
UR
25
º
C 30
º
C 35
º
C
(NaOH) 7 -0,0001
-0,0037
0,0004
(MgCl
2
.6H
2
O)
33 -0,0391
0,0299
0,0010
(NaBr) 57 -0,0020
0,0464
0,0039
(NaCl) 75 0,0087
0,0556
0,0058
[(NH
4
)
2
SO
4
] 81 0,1890
0,0087
0,0118
(K
2
CrO
4
) 87 0,0154
0,0140
0,0139
Gráfico1.Curvadeadsorçãoedesorção(NaOH).
Gráfico2.
Curvadeadsorçãoedesorção
(MgCl
2
.6H
2
O).
Gráfico3.Curvadeadsorçãoedesorção(NaBr).Gráfico3.Curvadeadsorçãoedesorção(NaBr).
Gráfico4.Curvadeadsorçãoedesorção(NaCl).
40
-0,8
-0,6
-0,4
-0,2
0
0,2
0,4
0,6
0,8
0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h 24h
Tempo(h)
Quantidadedeáguaabsorvida(g)
25ºC 30ºC 35ºC
4.7Tamanhodaspartículasdacascadeovoempó
Adeterminação dotamanho daspartículasfoi realizadaparaacascadeovo empó
com intuitodeser maisum componentepara acaracterização desseproduto,equepoderá
servirdeorientaçãoparasuautilizaçãonaelaboraçãodeprodutosalimentícios.
Nafigura10,estãorepresentadososresultadosmédiosdadistribuiçãodotamanhoda
partículadacascadeovoempó.Pode-seobservarqueoprodutoapresentaumadistribuição
entre0a50(µm),commaiorconcentraçãodepartículasnafaixade20µm(ANEXO1).
DistribuiçãodoTamanhodePartícula
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00
TamanhodePartícula
VolumedeDistribuição
Gráfico7.Distribuiçãogranulométrica,emvolume,daspartículasdacascadeovoempó.
4.8EnsaioBiológico
Entreasrazõesdaescolhadoratocomoanimaldeexperimentação,nestetrabalho,
destaca-seafacilidadedeobtenção,embiotériopróprio,baixocustodemanutenção,
facilidadeparaalojamento,alimentaçãoemanuseio.Possui,também,sistemaendócrino
semelhanteaodossereshumanos,passandoporperíododemenopausa,segundoPAZetal.
(1997),HUANGetal.(2003).
0
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,014
0,016
0,018
0h 1h 2h 3h 4h 5h 6h 24h
Tempo(h)
Quantidadedeáguaabsorvida(g)
25ºC 30ºC 35ºC
Gráfico5.
Curvadeadsorçãoedesorção
([(NH
4
)
2
SO
4
]).
Gráfico6.Curvadeadsorçãoedesorção(K
2
CrO
4
).
(µm)
(%)
41
Emestudosquetenhamcomoobjetivoobservartodoociclobiológico,dainfânciaà
senilidade, o rato apresenta ciclo de vida com tempo, bastante inferior ao do ser humano,
permitindoessetipodelineamento(VOGEL,1980).
Umdosprimeiros autoresautilizaranimaispara estudarosteoporosefoiSAVILLE
(1969),queavaliouratasooforectomizadas,comvinteeumdiasdevidaeobservoumenor
quantidadedecálcioporunidadedevolumedoosso.Desdeofinaldadécadade50,segundo
CASTRO (2000), estudos comprovaram que o rato tem a capacidade de reabsorver tecido
ósseopelaaçãodososteoclastos.
Nodecorrerdopresenteexperimentoocorreramóbitosdedoisanimais,possivelmente
por complicações pós-cirúrgicas. Todos os outros animais evoluíram com ausência de
infecção no local da cirurgia. Não se observou qualquer alteração de comportamento nos
animaissubmetidosàooforectomiaoucirurgiaplacebo.
A realização da comparação simultânea das médias do conjunto de variáveis
estudadas, pormeioda MANOVA, permitiu verificar queessas diferemsignificativamente
entre osgruposdeanimaisdefinidos segundoosdistintostiposde tratamentosou controle
(p<0,01).
Natabela12estãoapresentadososvaloresdamédiaedesviopadrãodopesocorpóreo
segundo os grupos experimentais e consumo de ração, acompanhados dos resultados da
análiseestatística,detalhadanosanexos2,3e4.
Tabela12.Valoresdemédiaedesviopadrãodopesocorpóreo(g)dosanimaisnacirurgia,
nosacrifícioeganhodepesototalnoperíodode33dias.
Grupos
deanimais
Consumomédio
deração(g)
X(DP)
Peso
Inicial(g)
Peso
Sacrificio(g)
Ganho
depeso(g)
Basal N.D. 205,43
a,b
205,43
a
N.D.
N.D. (1,90) (1,90) N.D.
1 432,40 212,00
a,b
270,86
b
58,86
a
(Controle)
(0,00) (6,63) (29,37) (31,91)
2 438,57 202,67
a,b
260,33
b
57,67
a
(0,00) (2,42) (14,19)
(13,65)
3 504,19 213,71
a
265,71
b
52,00
a
(0,00) (8,28) (14,94) (18,83)
4 393,24 201,43
b
262,86
b
61,43
a
(0,00) (1,40) (33,50) (34,01)
5 154,90 204,50
a,b
272,00
b
67,50
a
(0,00) (7,74) (21,43) (22,32)
6 454,24 203,29
a,b
268,57
b
65,29
a
(0,00) (7,41) (33,42) (30,67)
7 500,86 206,29
a,b
288,00
b
81,71
a
(0,00) (5,82) (19,18) (22,90)
8 450,86 210,86
a,b
254,00
b
43,14
a
(0,00) (9,08) (30,26) (29,43)
-Nacomparaçãodoisadoisentreosgruposdeanimais;amesmaletrasobrescritaindicaqueasmédiasna
colunanãosãosignificativamentediferenteseletrasdistintasnoparindicamdiferençassignificantes(p<0,05).
-Valoresentreparêntesesrepresentamodesviopadrão.
-N.D.:nãodisponível
42
Em relação aos pesos iniciais dos animais, observou-se que apenas os animais dos
grupos 3 (ração com cálcio da casca) e 4 (ração suplementada com cálcio da casca)
apresentaramdiferençasignificativaparaesseparâmetro,sendoqueospesosnomomentodo
sacrifícioeganhodepesoforamsimilarentreosgrupos,comexceçãodogrupobasal,quefoi
sacrificadoaoiníciodoexperimento,oquenãopossibilitouseudesenvolvimentoeganhode
pesoaolongodoperíodoexperimental.
Esses resultadosdivergemdosrelatadosnaliteratura,poissabe-se queanimaiscom
privação hormonal, ou seja, ooforectomizadas, tendem a ganhar peso. TIVERON (2005)
observouaumentodepesonasratasooforectomizadas,principalmenteaosnovemesespós-
operatório quando comparadas ao placebo, porém aos doze meses essa diferença não foi
observada.
Apesar de não ter sido possível testar a diferença das médias do consumo de cada
grupoporqueovalorutilizadojáéaprópriamédia,portanto,considera-sequeoconsumodos
animaisdentrodecadagrupoéidêntico, sendoassim,avariâncianula,o queinviabilizaa
análise de comparação das médias, observa-se que os consumos médios de ração entre os
grupos apresentam valores próximo,o que representa, em média, umconsumode13,74 +
1,18gderaçãopordiaporanimal,comexceçãodogrupo5(raçãosemvitaminasDeK),que
apresentouoconsumototalde154,90gderaçãodurantetodooensaioexperimental,oque
representa,aproximadamente,apenas4,7gderaçãopordia.
Para excluiro efeito da dieta sobre o peso dasratas, BARENGOLTS et al.(1994)
forneceram apenas parte da ração para o grupo ooforectomizado em relação ao placebo e
observaramganhodepesonasratassemováriosemrelaçãoàscontrolee,concluíramassim,
queasimplesrestriçãodealimentonasratasooforectomizadasfoiinsuficienteparapreveniro
ganhodepeso.
Sendo assim, talvez o fato do ganho de peso, no experimento atual, não ter sido
estatisticamente significativo, possa ser explicado em função do tempo do experimento,
consideradopequeno,quandocomparadoaodotrabalhodeTIVERON(2005),porexemplo.
Natabela13estãorepresentadososresultadosdosaspectosmorfológicosdosanimais
dosdiversosgruposeos resultados daanálise estatísticadetalhadanosanexos5,6, 7e 8.
Pode sernotado que osanimais dogrupo 7(ração sem vitamina D)apresentaramfêmures
direito significativamente mais pesados do que os dos animais do grupo 6 (ração sem
vitamina K), sendo que para os fêmures esquerdos, este último grupo se assemelha aos
demais,masdiferedogrupocontrole,apresentandofêmuresmenospesados.Osanimaisdo
grupo6apresentarammenorespesosdosfêmuresesquerdoemrelaçãoaosgrupos7e8,oque
pode sugerir a maior importância da vitamina D em relação a vitamina K no processo de
formaçãoóssea,apesardaliteraturaconsultadanãoenfatizaressefato.
Quanto aos rins, diferenças distintas entre os órgãos direito e esquerdo foram
encontradas.Amédia dos pesosdos rinsdasratas dogrupo3(ração comcálcio dacasca)
apresentou, significativamente, maior do que os rins dos demais animais utilizados no
experimento.Ospesosdosrinsesquerdosdosanimaisdogrupo3edasratasdosgrupos4
(raçãosuplementadacomcálciodacasca)tambémdiferiram,deformasignificativa,dogrupo
basal,apresentando-semaispesados.
43
Tabela13.Valores demédiaedesviopadrão dospesos dosfêmureserins nosgrupos de
animaisexperimentais.
Gruposde
Animais
Peso
fêmurD(g)
Peso
fêmurE(g)
Peso
RimD(g)
Peso
RimE(g)
Basal 1,05
a,b
1,11
a,b
0,67
b
0,67
c
(0,15) (0,16) (0,08) (0,07)
1 1,23
a,b
1,25
b
0,80
b
0,77
b,c
(Controle)
(0,10) (0,11) (0,07) (0,05)
2 1,13
a,b
1,13
a,b
0,77
b
0,76
b,c
(0,09) (0,17) (0,12) (0,07)
3 1,20
a,b
1,13
a,b
1,16
a
1,23
a
(0,11) (0,08) (0,21) (0,19)
4 1,08
a,b
1,07
a,b
0,86
b
0,98
b
(0,13) (0,09) (0,10) (0,25)
5 1,15
a,b
1,11
a,b
0,73
b
0,75
b,c
(0,09) (0,11) (0,08) (0,08)
6 1,02
b
1,01
a
0,80
b
0,79
b,c
(0,14) (0,15) (0,19) (0,19)
7 1,31
a
1,14
a,b
0,77
b
0,77
b,c
(0,32) (0,12) (0,13) (0,13)
8 1,22
a,b
1,24
a,b
0,72
b
0,70
c
(0,10) (0,17) (0,09) (0,06)
-Nacomparaçãodoisadoisentreosgruposdeanimais;amesmaletrasobrescritaindicaqueasmédiasna
colunanãosãosignificativamentediferenteseletrasdistintasnoparindicamdiferençassignificantes(p<0,05).
-Valoresentreparêntesesrepresentamodesviopadrão.
Na tabela 14 são demonstrados os teores de fósforo, magnésio e cálcio nos ossos,
cálcioretidonosfêmureseutilizaçãobiológicadecálcio,cujosasanálisesestatísticasestão
detalhadasnosanexos9,10,11,12e13.Emrelaçãoaofósforocontidonosossos,animaisdo
grupo6(raçãosemvitaminaK)diferiramdosanimaisdogrupocontrole,apresentandoníveis
defósforoósseosemelhantesaogrupobasaleinferioresaosgrupos2(osteoporótico+ração
demanutenção),8(raçãosuplementadacomcálciodacascaevitaminasDeK)econtrole.
Emrelaçãoaomagnésioecálcioósseos(Tabela14),osanimaisdosgrupos2e8não
apresentaramdiferençassignificativasquandocomparadosaosanimaisdogrupocontrole,e
osanimaisdogrupo5(raçãosemvitaminasDeK)apresentarammenorteordecálcioósseo
emcomparaçãocomosdemaisgrupos(p<0,05).
Com relação ao teor de cálcio retido nos ossos, os teores médios encontrados nos
fêmures dos animais dosgrupos2 e 8 nãodiferiram significativamente do grupocontrole,
sendoascobaiasdogrupo3(raçãocomcálciodacasca)queapresentarammenorretençãode
cálcio ósseo,porém, osvalores eramsemelhantesaosdos animais dosgrupos 4,5, 6e 7
(p<0,05). Os animais do grupo 3 foram os únicos que não receberam a suplementação de
cálcio,queéumparâmetroassociadoaterapiadaosteoporose.
Autilizaçãobiológicadecálcionãodiferiuentreosanimaisdosgruposcontrole,2e
8,mostrandoqueotratamentonoqualnãofoirealizadoaincorporaçãodacascadeovocomo
fonte de cálcio, respondeu de forma similar aquele em que a suplementação de cálcio foi
realizadaconcomitantementecomadasvitaminasDeK,apesardogrupo8tambémterse
apresentadosemelhanteaosdemaisgruposquantoaesseparâmetro.
44
Quando a suplementação de cálcio foi realizada com a casca de ovo em pó e
utilizando-se as vitaminas D e K em níveis basais, ou na ausência das vitaminas, o efeito
observadofoideumautilizaçãobiológicadecálciomenoremcomparaçãoaogrupocontrole.
Se esses resultados forem comparadoscom os dados obtidos no estudo de NAVES
(2003),noqualratosWistar,recém-desmamados,forammantidos,durante28dias,recebendo
rações formuladas, contendo: 0% de cálcio; 50% das recomendações de cálcio para ratos,
tendocomofonteocarbonatodecálcio(CaCO
3
)comocálcio-padrãoecálciodopódacasca
deovo,notaria-sequeesseautorobteveresultadosdosteoresmédiosdecálcioósseo,bem
comodeutilizaçãobiológicadecálcio,emvaloresabsolutos,maioresdoqueosencontrados
nesteestudo.
Esse mesmo autor observou que a quantidade de cálcio presente nos fêmures dos
animaisquereceberamcálciodafontedacascadeovofoisemelhanteàquelaencontradanos
ratos que consumiram o cálcio-padrão (46,23g e 46,35g, respectivamente), o mesmo
ocorrendo com a utilização biológica do cálcio (cálcio-padrão: 3,27% e cálcio da casca:
3,48%).Essesdadoscomprovamqueocálcionacascadeovoestátãobiodisponívelquantoo
cálcio no CaCO
3
usado como padrão, e muito presente como fonte em suplementos desse
mineral.
Tabela14.Valoresdemédiaedesviopadrãodosteoresdefósforo,magnésio,cálcioósseos,
cálcioretidonofêmureutilizaçãobiológicadecálcionosgruposdeanimaisexperimentais.
Grupos
deanimais
Fósforo
ósseo(mg)
Magnésio
ósseo(mg)
Cálcio
Ósseo(mg)
Cálcioretido
nofêmurE
(mg)
Utilização
Biológica
Cálcio(%)
Basal 54,98
a
2,01
a,c
108,48
b
N.D. N.D.
(5,51) (0,21) (11,13) N.D. N.D.
1 66,32
b
2,37
b
131,38
c
26,15
b
1,21
b
(Controle)
(3,14) (0,13) (6,00) (6,00) (0,28)
2 63,90
b,c
2,27
b,c
126,26
c,e,f,g
21,03
b,c
0,96
b
(5,54) (0,22) (11,01) (11,01) (0,50)
3 56,47
a,c
1,95
a
107,76
b
2,52
a
0,10
a
(4,05) (0,11) (7,92) (7,92) (0,32)
4 55,73
a,c
1,95
a
110,43
b,d,f
5,19
a
0,18
a
(3,89) (0,13) (8,03) (8,03) (0,27)
5 58,77
a,b
1,97
a,c
1,97
a
6,58
a,c
0,57
a
(5,07) (0,22) (0,22) (9,33) (0,80)
6 58,29
a
1,92
a
110,43
b,d,g
5,20
a
0,15
a
(4,60) (0,16) (8,82) (8,82) (0,26)
7 60,98
a,b
2,02
a,c
113,87
b,d,e
8,63
a,c
0,23
a
(5,40) (0,17) (10,23) (10,23) (0,27)
8 66,73
b
2,27
b,c
124,43
c,d
19,20
b,c
0,57
a,b
(6,08) (0,21) (11,85) (11,85) (0,35)
-Nacomparaçãodoisadoisentreosgruposdeanimais;amesmaletrasobrescritaindicaqueasmédiasna
colunanãosãosignificativamentediferenteseletrasdistintasnoparindicamdiferençassignificantes(p<0,05).
-Valoresentreparêntesesrepresentamodesviopadrão.
-N.D.:nãodisponível
-Utilizaçãobiológicadecálcio=Cálcioretido
____________,sendooCálcioretidoigual
(Cálcioretido/Cálcioingerido)x100
aoteordecálcionofêmurnofimdoexperimentomenos–oteordecálcioósseobasal(NAVES,2003).
Asanálisesbioquímicas(Tabela15),comdetalhamentoestatísticonosanexos14,15e
16,revelaramquetodososanimaisdosgruposexperimentaisseassemelharamaosdogrupo
45
controle noque dizrespeitoà fosfatasealcalina,sendo asque ratasdosgrupos controle, 2
(osteoporótico + ração de manutenção), 4 (ração suplementada com cálcio da casca) e 7
(raçãosemvitaminaD)foramasquediferiramdogrupobasal.
Para os resultados dos teores médios de cálcio sérico, pode ser observado que os
animaisdosgrupos3(raçãocomcálciodacasca),7e8(raçãosuplementadacomcálcioda
casca e vitaminas D e K) não diferiram dos animais do grupo controle. Além disso, os
resultadosdogrupo8tambémnãodiferiramdogrupobasal.Osanimaisdogrupo6(ração
sem vitamina K) apresentaram a maior média de concentração de cálcio sérico em
comparaçãoaosdemaisgrupos(p<0,05),oqueécoerenteaosecompararcomosresultados
de cálcio retido nos ossos e sua utilização biológica nesse grupo, que apresentaram-se
inferioresaosresultadosdosanimaisdogrupocontrole,sugerindoassim,queocálcioósseo
pode ter sido mobilizado para tentar manter a homeostase mineral, conforme relatos da
literatura(KRAUSE,2002).
Tabela15.Valoresdemédiaedesviopadrãodosteoresséricosdefosfatasealcalina,cálcioe
fósforonosgruposdeanimaisexperimentais.
Grupos
deanimais
Fosfatase
alcalina(U/L)
Cálcio
(mg/dL)
Fósforo
(mg/dL)
Basal 84,43
a
8,26
e,f
4,49
a,b
(37,46) (0,34) (0,51)
1 367,29
b
9,59
a
3,76
b,c
(Controle)
(213,74) (0,78) (0,54)
2 418,83
b
8,57
b,d,e
5,53
a,b
(145,96) (0,20) (0,58)
3 306,86
a,b
9,43
a
6,09
a
(93,41) (0,31) (0,64)
4 391,29
b
8,44
b,d,e
4,13
b,c
(238,06) (0,21) (1,03)
5 350,17
a,b
7,97
b,f
3,97
b,c
(98,34) (0,22) (0,92)
6 335,71
a,b
10,49
c
5,53
a,c
(181,06) (0,54) (2,22)
7 368,57
b
9,21
a,d
4,60
a,b
(125,29) (0,72) (1,25)
8 313,00
a,b
8,87
a,e
5,04
a,b
(133,48) (0,33) (0,36)
-Nacomparaçãodoisadoisentreosgruposdeanimais;amesmaletrasobrescritaindicaqueasmédiasna
colunanãosãosignificativamentediferenteseletrasdistintasnoparindicamdiferençassignificantes(p<0,05).
-Valoresentreparêntesesrepresentamodesviopadrão.
Osanimaisdogrupo3(raçãocomcasca)foramosúnicosqueapresentaramresultados
que diferiram dos animaisdo grupo controle no que diz respeito a concentração média de
fósforosérico,tendomaioresteoresdessemineralnosangue,oquepodeexplicaromenor
teoreamenorretençãodecálcioósseos,alémdabaixautilizaçãobiológicadessegrupoem
comparaçãoaocontrole.
Ésabidoquesituaçõesdehipertireoidismoalteramometabolismodecálcioepodem
conduziràhiperfosfatemia.Algunsautoresafirmamqueahiperfosfatemiasedápeloaumento
dareabsorçãoósseaquecausahipercalcemia,hipoparatireoidismoeconseqüenteaumentoda
reabsorçãotubulardefósforo(AUWERXeBOUILLON,1986).Adiminuiçãodaexcreção
46
urinária defósforo provoca oaumento dofosfatoplasmático, oquepor sua vezacarreta a
diminuição do cálcio ionizado, com conseqüente elevação dos níveis de PTH (BRICKER,
1972).
Ahiperfosfatemiatambémécaracterísticanainsuficiênciarenal.Apesardenãoterem
sidorealizadasanáliseshistomorfométricasdosrins,observou-sequeosanimaisdogrupo3
apresentaram rins mais pesados em comparação aos grupos basal e controle, o que pode
sugerirumahiperplasiarenal.
OPTHeleva-seconcomitanteàinstalaçãodainsuficiênciarenal,oquecontribuipara
ohiperparatireoidismosecundário(BRICKER,1972).Ofósforopodecausaradiminuiçãoda
produção renal da vitamina D ativa e ter um possível efeito direto sobre as glândulas
paratireoideanas(LOPEZ-HILKERetal.,1990;APARICIOetal.,1993).Nafaseinicialde
instalaçãodainsuficiênciarenalcrônica,verifica-seumadiminuiçãodaatividadeda1-alfa-
OH vitamina D hidroxilase, com consequente diminuição de produção de calcitriol,
possivelmente pelo aumento do fosfato intracelular no epitélio tubular renal, sítio de
hidroxilaçãodavitaminaD(HSUetal.,1992).
AvitaminaDexerceumcontrolefeed-backnegativonas glândulasparatireoideanas
por ação direta na transcrição do RNAm do pré-pró-PTH e a transformação em PTH.
(RUSSEL, et al., 1986). Com a menor produção de vitamina D ativa, devido a
hiperfosfatemia, ocorre a diminuição dos receptores de calcitriol nas glândulas
paratireoideanas(MERKEetal.,1987)e,consequentemente,alteraçõesnaabsorçãointestinal
decálcioedamobilizaçãodocálcionotecidoósseosãoobservadas.
Osvaloresmédioshematológicosemfunçãodosdiferentestratamentosmostrouque
na série vermelha a maioria dos parâmetros analisados não apresentaram diferenças
significativasemcomparaçãoaogrupocontrole(Tabela16eAnexos17-24,32e33).
Paraahemoglobina,ogrupo7(raçãosemvitaminaD)diferiusignificativamentedo
controle, apresentando valores superiores ao mesmo, assim como, quando comparado ao
grupo 3 (ração com cálcio da casca). SANTOS et al. (2004) com o objetivo de avaliar a
influênciadeumamultimistura,quecontinhaacascadeovo,arespeitodabiodisponibilidade
mineral em ratos Wistar também não observou diferenças significativas entre os animais
suplementadoscommultimistura,noquedizrespeitoaohematócrito.
Oíndicedeanisocitose(RDW)dosgrupos3e8diferiramdosgruposcontroleebasal
(p<0,05),tendovaloresmaiores,oquesignificaqueashemáciasdessesgruposapresentaram
variaçãodetamanho.
Oleucograma(Tabela17eAnexos25-31)mostrouqueosresultadosdeleucócitosdo
grupo3foramestatisticamentemaioresemcomparaçãoaogrupocontrole,oquepodeindicar
algumtipodeinfecção.Emrelaçãoaoslinfócitostodososgruposassemelharam-seaogrupo
basal,porém,osanimaisdosgrupos6e7apresentaramresultadossignificativosmaioresdo
que o controle para a contagem absoluta (CA) e contagem relativa (CR), respectivamente.
ParaMXDtodososgruposnãoapresentaramdiferençasignificativaemcomparaçãoaogrupo
basal(p<0,05),porémgrupos3a7apresentaramresultadossignificativosmenoresdoqueo
controleparaaCRdesseparâmetro.NaCAdeMXDogrupo8tevevaloresmaioresaosdos
grupos4,5,6e7(p<0,05).
Em relação aos neutrófilos (CR) todos os grupos não apresentaram diferença
significativaemcomparaçãoaogrupocontrole,noentanto,osgrupos4,5e6apresentaram
resultadosmaioresdoqueogrupobasal.NaCAdeneutrófilosapenasogrupo6apresentou
resultadossignificativamentediferentes(maiores)aosgruposbasalecontrole(p<0,05).
Tabela16.Valoresdemédiaedesviopadrãodasanáliseshematológicas(sérievermelha)dosgruposdeanimaisexperimentais.
Gruposde
animais
Hemácias
(milhões/mcl)
Hemoglobina
(g/dl)
Hematócrito
(%)
Volume
Globular
Médio(fl)
HGM(pg)
CHGM
(g/dl)
RDW
SD(fl)
RDW
CV(%)
Plaquetas
(mil/mcl)
MPV(fL)
Basal 6,99
b
12,98
a,b,c
39,62
a
56,66
a
18,54
a
32,80
a
28,20
a
11,58
a
1149,20
a
6,78c
c
(0,19) (0,50) (2,11) (2,04) (0,48) (1,01) (0,71) (0,46) (128,82) (0,15)
1 7,32
a,b
12,87
a,c
40,10
a
54,79
a
17,59
a
32,13
a
28,84
a,c
12,87
a,c
993,43
a
7,10
a,c
(Controle) (0,45) (0,67) (2,47) (0,32) (0,34) (0,56) (0,68) (0,90) (170,38) (0,23)
2 7,41
a,b
13,73
a,b,c
41,98
a
56,68
a
18,50
a
32,73
a
30,85
b,c
13,70
a,b
1033,25
a
8,50
b
(0,15) (0,46) (1,53) (1,13) (0,54) (0,82) (1,66) (1,22) (96,32) (0,48)
3 7,25
a,b
12,70
a
39,64
a
54,74
a
17,58
a
32,08
a
31,60
b
14,82
b
856,80
a
7,48
a
(0,45) (0,48) (2,03) (1,62) (1,14) (1,55) (1,68) (1,34) (156,86) (0,22)
4 7,28
a,b
13,13
a,b,c
40,70
a
55,90
a
18,04
a
32,27
a
30,26
a,b
13,64
b,c
1025,71
a
7,00
a,c
(0,16) (0,47) (1,66) (1,57) (0,49) (0,52) (1,44) (0,93) (192,28) (0,32)
5 7,76
a
13,80
b,c
43,24
a
55,74
a
17,78
a
31,96
a
29,98
a,b
13,54
a,b
939,40
a
7,26
a,c
(0,52) (0,73) (2,59) (0,95) (0,30) (0,38) (0,94) (0,48) (152,92) (0,52)
6 7,83
a
13,73
b,c
43,34
a
55,37
a
17,54
a
31,69
a
30,63
b,c
14,14
b,c
963,86
a
7,37
a
(0,35) (0,56) (2,36) (1,32) (0,52) (0,78) (1,15) (1,23) (170,65) (0,14)
7 7,66
a,b
14,04
b
43,74
a
57,10
a
18,32
a
32,08
a
30,14
a,b
13,12
a,b
820,60
a
7,06
a,c
(0,19) (0,32) (0,94) (0,98) (0,43) (0,33) (1,34) (1,02) (59,71) (0,18)
8 7,34
a,b
13,25
a,b,c
40,67
a
55,47
a
18,07
a
32,58
a
31,15
b
14,30
b,c
1029,33
a
8,13
b
(0,36) (0,36) (1,45) (0,99) (0,56) (0,55) (1,48) (0,77) (252,56) (0,23)
-Nacomparaçãodoisadoisentreosgruposdeanimais;amesmaletrasobrescritaindicaqueasmédiasnacolunanãosãosignificativamentediferentese
letrasdistintasnoparindicamdiferençassignificantes(p<0,05).
-Valoresentreparêntesesrepresentamodesviopadrão.
HGM:hemoglobinaglobular;CHGM:concentraçãodahemoglobinacorpuscularmédia;RDW(SD,CV):índicedeanisocitose(desvio-padrão,
coeficientedevariação).;MPV:volumeplaquetáriomédio;ft:fentolitros.
47
48
Tabela17.Valoresdemédiaedesviopadrãodasanáliseshematológicas(sériebranca)dosgruposdeanimaisexperimentais.
Grupos
deanimais
LEUCÓCITOS
(mil/mcl)
LINFÓCITOS
Contagem
Relativa
(%)
LINFÓCITOS
ContagemAbsoluta
(mil/mcl)
MXD
(Eosinófilos,,Basófilos
eMonócitos)
ContagemRelativa
(%)
MXD
(Eosinófilos,,Basófilos
eMonócitos)
ContagemAbsoluta
(mil/mcl)
NEUTRÓFILOS
Contagem
Relativa(%)
NEUTRÓFILOS
ContagemAbsoluta
(mil/mcl)
Basal 4,36
c
67,60
a,b
3,00
a,b
16,72
a,b
0,76
a,b
15,68
c
0,60
b
(1,27) (5,13) (0,96) (3,15) (0,29) (6,31) (0,12)
1 3,74
a,c
53,53
a
1,99
a
22,26
b
0,84
a,b
24,21
a,b,c
0,91
b
(Controle) (0,79) (5,96) (0,38) (4,41) (0,24) (2,56) (0,29)
2 4,03
a,b,c
64,58
a,b
2,63
a,b
14,00
a,b
0,55
a,b
21,43
b,c
0,85
b
(0,52) (8,91) (0,54) (7,89) (0,34) (3,97) (0,06)
3 5,30
b
57,96
a,b
3,04
a,b
10,50
a
0,60
a,b
31,54
a,b
1,66
a,b
(1,27) (5,87) (0,78) (4,24) (0,35) (5,09) (0,32)
4 4,64
a,b
54,77
a
2,44
a
11,16
a
0,57
a
34,07
a
1,63
a,b
(2,40) (11,69) (0,94) (6,65) (0,65) (6,97) (1,10)
5 4,32
a,b,c
57,50
a,b
2,38
a
9,36
a
0,46
a
33,14
a
1,48
a,b
(1,63) (9,56) (0,61) (4,90) (0,43) (4,90) (0,79)
6 7,56
a,b
59,43
a,b
4,29
b
7,21
a
0,56
a
33,36
a
2,71
a
(2,71) (9,39) (0,90) (1,61) (0,30) (8,33) (1,64)
7 4,70
a,b,c
74,76
b
3,58
a,b
6,42
a
0,26
a
18,82
c
0,86
b
(1,51) (9,09) (1,41) (5,21) (0,18) (4,78) (0,15)
8 5,62
a,b
53,75
a
3,02
a,b
23,67
b
1,32
b
22,58
b,c
1,28
a,b
(1,45) (7,61) (0,80) (10,02) (0,53) (5,61) (0,67)
-Nacomparaçãodoisadoisentreosgruposdeanimais;amesmaletrasobrescritaindicaqueasmédiasnacolunanãosãosignificativamentediferenteseletrasdistintasno
parindicamdiferençassignificantes(p<0,05).
-Valoresentreparêntesesrepresentamodesviopadrão.
5CONCLUSÕES
Nas condiçõesnas quaisotrabalho foirealizadopôde-seobservarqueacascadeovode
galinha em pó é um material rico em minerais, especialmente no que diz respeito ao cálcio,
micronutrientebastanterelevantenasaúdeósseaedificilmenteingerido,pelapopulaçãoemgeral,
em quantidades necessárias para manuntenção da sua homeostase, o que pode contribuir para o
desenvolvimentodaosteoporose.
Comoaumentodaexpectativadevidadaspopulações,emnívelglobal,tende-seanotara
maiorincidênciadecasosdessadoença,queatualmentejápodeserconsideradacomoumproblema
desaúdepúblicadonossopaís.Alternativasquepromovemaprevençãodaosteoporoseperpassam
pelaadequaçãodaingestãodecálcio,oquepoderiaserobtidocomacontribuiçãodacascadeovo
em pó, uma fonte economicamente viável, de fácil acesso e que praticamente não contribui
energeticamentenadieta,alémdeapresentarbaixoteorprotéico,oquefazcomqueoprodutonão
sejaprejudicialaometabolismodecálcio,vistoquealtasdosesdeproteínanadietapodemacarretar
noaumentodeexcreçãorenaldecálcio.
O produto elaborado deve ser melhor estudado como uma possível fonte de cálcio para
pacientes portadores de fenilcetonúria, cujos teores de fenilalanina na alimentação tem que ser
baixos,característicaobtidanoprodutoavaliadonesseestudo.
Vale ressaltar os baixos teores de metais pesados encontrados, fato que não expõe a
população à contaminação por estes compostos a partir da utilização da casca de ovo como
complementoousuplementodecálcio.
Osresultadosencontradosnoensaioexperimentalrevelaramque,emgeral,osanimaisdos
grupos osteoporóticos que receberam a ração sem modificação da fonte de cálcio e a ração
suplementadaemcálcioevitaminasDeK,utilizando-secomofonteacascadeovo,foramaqueles
que maisse assemelharam ao grupocontrole, o que sugere que a casca de ovopode apresentar
efeito como fonte de cálcio na alimentação, porém em teores suplementados em situações da
doençajáinstalada.Animaisquereceberamraçãocontendomodificaçõesapenasnafontedecálcio
(substituída pela casca) obtiveram menores resultados de menor retenção de cálcio ósseo,
comparadosaocontrole.Talvez,otempodeestudoexperimentaltenhasidopequenoparaavaliação
maisrefinadadometabolismodecálcioprovenientedacascadeovo.
Naosteoporose,alémdaingestãoadequadadecálcio,recomenda-seingestãodealimentos
ricos em vitamina Deaexposição solar, sendoestaúltimauma atividade não realizada com as
cobaias.Também,emcondiçõesdebaixaouausênciadaproduçãodeestrogêniofaz-senecessáriaa
terapiadereposiçãohormonal,quepoderiaterconstuídomaisumgrupoexperimental.
Alémdofatoreconômico,aincorporaçãodacascadeovonaalimentação,cujoprocessode
obtençãorende,emmédia,98%egeraumprodutodegrandeestabilidadehigroscópica,favorecea
menor poluição ambiental por aproveitar um tipo de resíduo que é desperdiçado em grandes
quantidadesnoambiente.Paratal,ahigienizaçãodamatéria-primadeveseradequadaparaevitar
queumafontemineralsejaveiculadoradedoençasdeorigemalimentar.
Seria interessante continuar a pesquisa com a utilização da casca de ovo como fonte de
cálcio eavaliaçãodadensidadeósseapordensitometriaóssea,concomitantementecomousode
embasamentohistomorfométrico.
No mais, é necessário um esforço entre os profissionais da área da saúde no sentido de
estimularoaumentodoconsumodealimentosricosemcálciodeformaaprevenirouretardaro
desenvolvimentodaosteoporose.
49
50
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65
7ANEXOS
Anexo1.Tabeladotamanhodaspartículasdacascadeovoempó
TP(µm)
Freqüência
0,16 0,02
0,19 0,02
0,22 0,03
0,25 0,05
0,29 0,08
0,33 0,11
0,37 0,16
0,43 0,21
0,49 0,28
0,56 0,37
0,65 0,47
0,74 0,58
0,85 0,70
0,97 0,84
1,11 0,97
1,28 1,11
1,46 1,24
1,68 1,37
1,92 1,49
2,20 1,60
2,52 1,71
2,89 1,82
3,31 1,94
3,79 2,06
4,35 2,20
4,98 2,36
5,71 2,54
6,54 2,75
7,49 3,02
8,59 3,35
9,84 3,75
TP(µm)
Frequência
11,27 4,20
12,92 4,69
14,80 5,16
16,97 5,54
19,44 5,76
22,28 5,77
25,53 5,51
29,25 5,02
33,52 4,36
38,41 3,65
44,01 2,97
50,44 2,38
57,79 1,87
66,23 1,43
75,89 1,05
86,96 0,73
99,65 0,47
114,19 0,26
130,85 0,00
149,94 0,00
171,82 0,00
196,89 0,00
225,61 0,00
258,53 0,00
296,25 0,00
339,48 0,00
389,01 0,00
445,77 0,00
510,80 0,00
585,33 0,00
670,73 0,00
OBS:Osnúmerosdascombinaçõesdosparesdosgruposdeanimaisrepresentadodifere
dosnúmerosdegruposdistribuídosconformearaçãooferecida.Paratal,valeesclarecer
que os grupos basal e rações experimentais 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8 equivalem,
respectivamenteaosgrupos9,8,1,2,3,4,5,6e7.
Anexo 2. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos pesos iniciais dos
animaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
66
67
Anexo3.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferenças nospesosdosanimais,
apósamorte,entretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
68
Anexo4.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnoganhodepesoentre
todosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
69
Anexo5.Gráfico dosintervalos deconfiança (95%)dasdiferençasnospesosdosfêmures
direitosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
70
Anexo6.Gráfico dosintervalos deconfiança (95%)dasdiferençasnospesosdosfêmures
esquerdosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
71
Anexo7.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnospesosdosrinsdireitos
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
72
Anexo 8. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos pesos dos rins
esquerdosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
73
Anexo 9. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de fósforo
ósseo dos fêmures esquerdos dos animais entre todos os possíveis pares de grupos de
animais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
74
Anexo10.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdemagnésio
ósseo nos fêmures esquerdos dos animais entre todos os possíveis pares de grupos de
animais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
75
Anexo 11. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de cálcio
ósseonosfêmuresesquerdosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
76
Anexo12.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnautilizaçãobiológica
decálciodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
PARESDEANIMAIS
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
77
Anexo 13. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de cálcio
retidonosfêmuresesquerdosdosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
PARESDEANIMAIS
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
78
Anexo14.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdefosfatase
alcalinaséricadosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
79
Anexo 15. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de cálcio
séricodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
80
Anexo16.Gráfico dosintervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores defósforo
séricodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
81
Anexo17.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdehemácias
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
82
Anexo 18. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
hemoglobinadosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
83
Anexo 19. Gráfico dos intervalos de confiança (95%) das diferenças nos teores de
hematócritodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
84
Anexo20.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeVGMdos
animaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
85
Anexo21.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeHGMdos
animaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
86
Anexo22.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeCHGMdos
animaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
87
Anexo23.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeRDWSD
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
88
Anexo24.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeRDWCV
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
89
Anexo25.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeleucócitos
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
90
Anexo26.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdelinfócitos
(contagemrelativa)dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
91
Anexo27.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdelinfócitos
(contagemabsoluta)dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
92
Anexo28.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeeosinófilos,
basófilos e monócitos (contagem relativa) dos animais entre todos os possíveis pares de
gruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
93
Anexo29.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeeosinófilos,
basófilos e monócitos (contagem absoluta) dos animais entre todos os possíveis pares de
gruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
94
Anexo30.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeneutrófilos
(contagemrelativa)dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
95
Anexo31.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeneutrófilos
(contagemabsoluta)dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
96
Anexo32.Gráficodosintervalosdeconfiança(95%)dasdiferençasnosteoresdeplaquetas
dosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
97
Anexo33.Gráfico dosintervalosde confiança(95%)dasdiferenças nosteoresdo volume
plaquetáriomédiodosanimaisentretodosospossíveisparesdegruposdeanimais.
DIFERENÇASENTREASMÉDIAS
PARESDEANIMAIS
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