decrescentes do positivo Cry1Ac de 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,125ng/mL para a obtenção de
uma curva padrão objetivando estimar a quantidade de Cry1Ac nas amostras testadas e alíquotas
de 100µL de cada amostra por poço. A placa foi incubada em temperatura ambiente (25
o
C) por 2
horas e, então, realizado seis lavagens com PBST. Após as lavagens foi adicionado 100µL de
TMB (3,3’, 5,5’-Tetrametilbenzidina) e incubado por 15 minutos, quando então a reação foi
paralisada adicionando 50µL de ácido sulfúrico a 3M para possibilitar a leitura a 450nm.
Posteriormente, a placa foi submetida à leitura de absorvância a 450nm empregando leitora de
placa ELISA BioteK EL x 800
TM
(Absorbance Micropole Reader) (Dutton et al. 2002, Torres et
al. 2006).
Coleta do Mesêntero para Análise em Microscopia de Luz e Eletrônica de Transmissão
(MET). Foram coletados fragmentos do mesêntero de larvas de ambos os tratamentos após serem
imobilizadas a baixa temperatura (-4
o
C) por cinco minutos, fixados em seguida na solução de
glutaraldeído a 2,5% (tampão fosfato 0,1M, pH 7,2). Posteriormente foram lavados três vezes em
tampão e pós-fixados em tetróxido de ósmio (OsO
4
) a 2% em tampão fosfato 0,1 M e pH 7,2 por
1h. Em seguida procedeu-se a lavagem e a desidratação em séries crescentes de acetona por 30
min. cada, a temperatura ambiente. A infiltração foi realizada em resina EMBED812/Araldite
(Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA) e acetona em estufa a 70ºC por 48h para
polimerização. Cortes semifinos foram corados pelo azul de toluidina para análise em
microscopia de luz. Os cortes ultrafinos foram contrastados em acetato de uranila por 1h e em
citrato de chumbo por 10 min e analisado em microscópio Zeiss EM109.
Quantificação das Células Regenerativas do Mesêntero. A quantificação foi realizada
utilizando cinco secções de cortes semifinos, corados pelo azul de toluidina, obtidas da região
mediana do mesêntero de cinco lagartas. Cada lagarta correspondeu a uma repetição, sendo
utilizadas cinco repetições/tratamento. A captura de imagem foi efetuada por meio de câmera de
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