( PDF ) Antidepressivo Hypericum perforatum L. sobre o sistema reprodutivo masculino de ratos wistar

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ

AEDRA CARLA BUFALO

ANTIDEPRESSIVO Hypericum perforatum L. SOBRE O SISTEMA REPRODUTIVO

MASCULINO DE RATOS WISTAR

CURITIBA-PR

2007

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AEDRA CARLA BUFALO

ANTIDEPRESSIVO Hypericum perforatum L. SOBRE O SISTEMA REPRODUTIVO

MASCULINO DE RATOS WISTAR

Dissertação apresentada ao Curso de Pós-

Graduação em Farmacologia, Departamento de

Farmacologia, Setor de Ciências Biológicas,

Universidade Federal do Paraná, como parte das

exigências para a obtenção do título de Mestre em

Farmacologia.

Orientador: Prof. Dr. Paulo Roberto Dalsenter

CURITIBA – PR

2007

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Dedico este trabalho aos meus pais Luis Carlos e Leila, pelo

incentivo, cooperação, apoio, paciência, sacrifícios e pelo

amor que sempre me dedicaram, pois graças a esse amor

incondicional consegui vencer mais uma etapa da minha vida.

AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Paulo Roberto Dalsenter, meu orientador, pela compreensão, ajuda e

incentivo e ademais pelos conselhos que me proporcionaram adquirir mais

experiência e amadurecimento para realização deste trabalho.

À minha família, meus pais Luis Carlos e Leila, meus irmãos Alessandro e Vinícius,

minhas cunhadas Danielli e Thaysa, minhas sobrinhas Ana Carolina e Laura Maria e

meus avós Duelvo e Claricia, pelo apoio e amor incondicional em todos os momentos

da minha vida.

Ao meu namorado, Juninho, pela confiança e motivação que sempre me ofereceu

além de seu amor e sua amizade, que me deram força para conquistar mais essa

etapa.

A minha prima Alethea e seu marido Takao, pela atenção e carinho com que me

acolheram durante todo tempo do mestrado.

As minhas amigas de mestrado Ana Claúdia, Juliane, Adriana, Stéfani, Manuela,

Cris, Munisa, Jothely, Amanda e amigo Nelson, pelos momentos de alegria e ajuda

durante esses dois anos e mestrado.

Em especial a minha amiga Giuliana, pelo mútuo aprendizado de vida, durante nossa

convivência, no campo profissional e pessoal.

Aos amigos Mari, Fabi, Léa e Beto pela paciência e amizade.

Ao professores, funcionários e colegas do Departamento de Farmacologia, em

especial a Silvia, Linda, Nair e Alessandra, pelo apoio para a realização deste

trabalho.

A Prof. Dra. Rosana Nogueira de Morais, pelo auxílio na dosagem hormonal e

discussão dos resultados.

À Fundação Herbarium de Saúde e Pesquisa pela doação do extrato de

Hypericum

perforatum

utilizado neste experimento.

Ao CNPq pelo apoio financeiro e,

Á Deus,

Obrigada!

“A utilidade do saber consiste em

que a sabedoria dá vida ao que a

possui”,

Eclesiastes 7.12

RESUMO

A depressão é considerada um distúrbio afetivo que afeta grande parte da população e,

em geral, a maioria dos casos é diagnosticado como leve ou moderado. Os

medicamentos antidepressivos utilizados para o tratamento dessa doença além de

aliviarem os sintomas depressivos também provocam uma grande quantidade de

efeitos adversos, os quais são responsáveis pela descontinuidade do tratamento pelo

paciente, sem orientação médica. Dentre esses efeitos adversos, a disfunção sexual

está como um dos principais efeitos. São descritas alterações da função sexual, tanto

masculina quanto feminina, para todas as classes de antidepressivos. Dessa forma, a

população na tentativa de evitar esses efeitos procura tratamentos alternativos como a

utilização de plantas medicinais. O Hypericum perforatum L. é uma planta que vem

sendo utilizada para o tratamento de casos de depressão, principalmente, leve a

moderada. Entretanto, apesar de se relatar que esta planta provoca poucos efeitos

adversos, principalmente sexuais, não existem estudos relacionando função sexual e

Hypericum perforatum L. O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade reprodutiva

do Hypericum perforatum L em ratos machos Wistar sexualmente experientes. Para

tanto, estes animais foram tratados com diferentes doses de Hypericum perforatum L

(15, 150 e 300 mg/kg); uma dose de paroxetina (10 mg/kg), um antidepressivo

conhecido por provocar disfunção sexual e salina, por 90 dias no volume de 5 ml/kg.

Após este período de tratamento, os animais foram filmados para a avaliação do

comportamento sexual e, em seguida, sacrificados para a análise de outros parâmetros

reprodutivos. Estes parâmetros incluem: massa dos órgãos (fígado, rins, adrenais,

encéfalo, testículos, epidídimos, vesícula seminal e próstata), variação do ganho de

massa corporal, níveis hormonais de testosterona em períodos diferentes do tratamento

e avaliação da produção espemática. Os dados de comportamento sexual

demonstraram que nas doses utilizadas, o extrato de Hypericum perforatum L. não

alterou os parâmetros comportamentais avaliados em ratos Wistar sexualmente

experientes. Além disso, a paroxetina também não alterou esses parâmetros de

maneira estatisticamente significativa, apesar de ter aumentado a latência de

ejaculação e o número de penetrações até a ejaculação dos animais. Em relação às

outras variáveis analisadas, o extrato Hypericum perforatum L e a paroxetina não

demonstraram toxicidade referente a massa dos órgãos nem a massa corporal, assim

como para a avaliação espemática e dosagem hormonal. Assim, podemos concluir que,

neste experimento, utilizando ratos Wistar sexualmente experientes, o extrato de

Hypericum perforatum L. e a paroxetina não alteraram a função sexual desses animais.

Palavras-chave: Hypericum perforatum L. Antidepressivos. Paroxetina. Disfunção

sexual. Ratos Wistar. Comportamento sexual.

ABSTRACT

Depression is considered an affectionate disturbance that affects great part of the

population and, in general, most cases are diagnosed as light or moderate. The

antidepressant medicines used for the treatment of that disease, besides relieving the

depressive symptoms also promote a great amount of side effects, which are

responsible for the discontinuity of the treatment by the patient, without doctors`

orientation. Among those side effects, sexual dysfunction is one of the main effects.

Alterations of sexual function are described, both masculine as well as feminine, for all

classes of antidepressants. In an attempt of avoiding such effects the population goes in

search of alternative treatments, as the use of medicinal plants. Hypericum perforatum

L. is a plant that has been used for the treatment of cases of depression, mainly from

light to moderate. However, in spite of reports that this plant provokes few side effects,

mainly sexual, there are no studies about the relation between sexual function and

Hypericum perforatum L. The objective of this work was to evaluate the reproductive

toxicity of the Hypericum perforatum L in male Wistar rats sexually experienced. For

such, these animals were treated with different doses of Hypericum perforatum L (15,

150 and 300 mg/kg); a paroxetine dose (10 mg/kg), an antidepressant known for

provoking sexual dysfunction, and saline, for 90 days at 5 ml/kg. After this treatment

period, the animals were filmed for the evaluation of their sexual behavior and, soon

afterwards, sacrificed for the analysis of other reproductive parameters. These

parameters include: mass of the organs (liver, kidneys, adrenal glands, encephalon,

testicles, epididymis, seminal vesicle and prostate), variation of corporal weight,

hormonal levels of testosterone in different periods of the treatment, and evaluation of

daily sperm production and sperm number. The data of the sexual behavior

demonstrated that, in the used doses, the extract of Hypericum perforatum L. did not

alter the parameters appraised in the behavior of sexually experienced Wistar rats.

Besides, paroxetine did not alter those parameters in a statistically significant way in

spite of an increase in the ejaculation latency and the number of penetrations before the

animals ejaculate. In relation to the other variables analyzed, the extract Hypericum

perforatum L and paroxetina did not demonstrate toxicity regarding either mass of the

organs or corporal mass, as well as for the spermatic evaluation and hormonal dosage.

We can conclude that in this experiment, using sexually experienced Wistar rats, the

plant Hypericum perforatum L. and paroxetine did not alter the sexual function of those

animals.

Keywords: Hypericum perforatum L. Antidepressants. Paroxetine. Sexual dysfunction.

Wistar rats. Sexual behavior.

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1-

SISTEMA REPRODUTOR MASCULINO.............................................. 17

FIGURA 2-

TÚBULOS SEMINÍFEROS E CÉLULA DE LEYDIG............................. 18

FIGURA 3-

ESPERMATOGÊNESE HUMANA.........................................................

FIGURA 4-

ESPERMATOZÓIDE HUMANO............................................................ 20

FIGURA 5-

CONTROLE NEURAL DA EREÇÃO E EJACULAÇÃO.........................

FIGURA 6-

SINTESE DE HORMÔNIOS ESTERÓIDES..........................................

FIGURA 7-

ESTRUTURA QUIMICA DA AMITRIPTILINA........................................

FIGURA 8-

MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIDEPRESSIVOS TRICÍCLICOS....

FIGURA 9-

MECANISMO DE AÇÃO DOS INIBIDORES DA MONOAMINA

OXIDASE...............................................................................................

FIGURA 10-

MECANISMO DE AÇÃO DOS INIBIDORES SELETIVOS DA

RECAPTAÇÃO DE SEROTONINA.......................................................

FIGURA 11-

Hypericum perforatum L........................................................................

FIGURA 12-

MOLÉCULAS DE HIPERICINA E HIPERFORINA................................ 35

FIGURA 13-

ADMINISTRAÇÃO POR GAVAGE........................................................

FIGURA 14-

LAVADO VAGINAL............................................................................... 43

FIGURA 15-

OVARIECTOMIA EM RATAS................................................................

LISTA DE GRÁFICOS

GRÁFICO 1-

GANHO DE MASSA CORPORAL DOS ANIMAIS DURANTE 90

DIAS DE TRATAMENTO................................................................

GRÁFICO 2-

MASSA CORPORAL DOS ANIMAIS NO DIA DO SACRIFICIO.... 51

GRÁFICO 3-

NÚMERO DE ANIMAIS QUE EJACULARAM APÓS O

TRATAMENTO................................................................................

GRÁFICO 4-

LATÊNCIA DE MONTA DE ANIMAIS TRATADOS POR 90

DIAS................................................................................................

GRÁFICO 5-

LATÊNCIA DE PENETRAÇÃO DE ANIMAIS TRATADOS POR

90 DIAS...........................................................................................

GRÁFICO 6-

LATÊNCIA DE EJACULAÇÃO DE ANIMAIS TRATADOS POR

90 DIAS...........................................................................................

GRÁFICO 7-

LATÊNCIA DE PÓS-EJACULAÇÃO DE ANIMAIS TRATADOS

POR 90 DIAS..................................................................................

GRÁFICO 8-

NÚMERO DE PENETRAÇÕES ATÉ A EJACULAÇÃO..................

GRÁFICO 9-

NÚMERO DE PENETRAÇÕES TOTAIS DE ANIMAIS

TRATADOS POR 90 DIAS.............................................................

GRÁFICO 10-

DOSAGEM HORMONAL DE ANDROGÊNIOS EM FEZES DE

ANIMAIS TRATADOS POR 90 DIAS..............................................

GRÁFICO 11-

VARIAÇÃO HORMONAL DE ANDROGÊNIOS EM ANMAIS

TRATADOS COM PAROXETINA POR 90 DIAS............................

LISTA DE TABELAS

TABELA 1-

MASSA ABSOLUTA E RELATIVA DOS ÓRGÃOS DE ANIMAIS

MACHOS TRATADOS POR 90 DIAS.............................................

TABELA 2-

MASSA ABSOLUTA E RELATIVA DOS ÓRGÃOS SEXUAIS DE

ANIMAIS MACHOS TRATADOS POR 90 DIAS.............................

TABELA 3-

AVALIAÇÃO DO COMPORTAMENTO SEXUAL DE RATOS

MACHOS ADULTOS SEXUALMENTE EXPERIENTES ANTES

DO TRATAMENTO.........................................................................

TABELA 4-

AVALIAÇÃO DO COMPORTAMENTO SEXUAL DE RATOS

MACHOS ADULTOS SEXUALMENTE EXPERIENTES DEPOIS

DO TRATAMENTO.........................................................................

TABELA 5-

AVALIAÇÃO ESPERMÁTICA EM ANIMAIS EXPOSTOS AO

Hypericum perforatum E A PAROXETINA POR 90 DIAS..............

TABELA 6-

DOSAGEM HORMONAL DE ANDROGÊNIOS EM FEZES DE

ANIMAIS EXPOSTOS POR 90 DIAS.............................................

LISTA DE SÍMBOLOS E ABREVIATURAS

- Hypericum perforatum

Min -minutos

Seg -segundos

Kg -quilograma

g -grama

n -número de animais

ml -mililitro

% -percentual

-nível de significância estatística

ºC -grau Celsius

mm -milímetro

ng -nanograma

mg -miligrama

µg -micrograma

dl -decilitros

cm -centímetros

NA -noradrenalina

5-HT -serotonina

DA -dopamina

IMAO -inibidores da monoamina oxidase

ATC -antidepressivo tricíclico

ISRS -inibidores seletivos da recaptação de serotonina

GnRH -hormônio liberador de gonadotropinas

LH -hormônio luteinizante

FSH -hormônio folículo estimulante

LISTA DE SIGLAS

ICD - International Classification of Diseases

FDA - Food and Drug Administration

WHO - World Health Organization- Organização Mundial da Saúde

DSM - Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders- Manual Diagnóstico

Estatístico de Transtornos Mentais

UFPR -Universidade Federal do Paraná

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO......................................................................................

2 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA................................................................

2.1

FUNÇÃO SEXUAL MASCULINA..........................................................

2.1.1

Anatomia e Fisiologia Sexual Masculina.............................................. 17

2.1.2

Espermatogênese.................................................................................

2.1.3

Ato Sexual Masculino........................................................................... 21

2.1.3.1

Estimulação sexual............................................................................... 21

2.1.3.2

Ereção.................................................................................................. 21

2.1.3.3

Emissão e ejaculação.......................................................................... 22

2.1.4

Controle Hormonal da Função Sexual Masculina................................ 23

2.2

DISFUNÇÃO SEXUAL..........................................................................

2.3

ANTIDEPRESSIVOS............................................................................ 27

2.3.1

Antidepressivos Tricíclicos (ATC)......................................................... 27

2.3.2

Inibidores da Monoamina Oxidase (IMAO)...........................................

2.3.3

Inibidores Seletivos da Recaptação de Serotonina(ISRS)................... 31

2.3.4 Hypericum perforatum L.......................................................................

2.3.4.1

Classificação e aspectos botânicos...................................................... 32

2.3.4.2

Histórico da planta................................................................................ 33

2.3.4.3 Constituintes químicos do Hypericum perforatum...............................

2.3.4.4

Farmacocinética................................................................................... 36

2.3.4.5

Doses................................................................................................... 36

2.3.4.6

Principais atividades biológicas........................................................... 37

2.3.4.7

Efeitos Adversos................................................................................... 38

3 JUSTIFICATIVA...................................................................................

4 OBJETIVOS.........................................................................................

4.1

OBJETIVOS GERAIS........................................................................... 40

4.2

OBJETIVOS ESPECÍFICOS.................................................................

5 MATERIAL E MÉTODOS.....................................................................

5.1

ANIMAIS............................................................................................... 41

5.2

SUBSTÂNCIAS UTILIZADAS...............................................................

5.3

DOSES E TRATAMENTO.................................................................... 41

5.4

SELEÇÃO DOS RATOS MACHOS SEXUALMENTE EXPERIENTES 43

5.5

PREPARAÇÃO DAS FÊMEAS SEXUALMENTE RECEPTIVAS......... 43

5.6

DESENHO EXPERIMENTAL............................................................... 45

5.7

PARÂMETROS AVALIADOS............................................................... 46

5.7.1

Comportamento Sexual........................................................................ 46

5.7.1.1

Indução do estro em fêmeas castradas................................................

5.7.1.2

Filmagem do comportamento sexual dos machos............................... 46

5.7.1.3

Avaliação do comportamento sexual.................................................... 47

5.7.2

Determinação da Massa Corporal e Massa Absoluta e Relativa dos

Órgãos..................................................................................................

5.7.3

Contagem Espermática........................................................................ 48

5.7.4

Dosagem Hormonal.............................................................................. 49

5.8

ANÁLISE ESTATÍSTICA.......................................................................

6 RESULTADOS.....................................................................................

6.1

AVALIAÇÃO DA MASSA CORPORAL.................................................

6.1.1

Massa Corporal Durante o Tratamento................................................ 50

6.1.2

Massa Corporal no Dia do Sacrifício.................................................... 51

6.2

MASSA ABSOLUTA E RELATIVA DOS ÓRGÃOS..............................

6.3

COMPORTAMENTO SEXUAL............................................................. 54

6.3.1

Avaliação do Comportamento Sexual Antes do Tratamento................ 54

6.3.2

Avaliação do Comportamento Sexual Depois do Tratamento..............

6.4

Avaliação da Contagem Espermática...................................................

6.5

Dosagem Hormonal.............................................................................. 61

7 DISCUSSÃO.........................................................................................

8 CONCLUSÃO.......................................................................................

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................................75

1 INTRODUÇÃO

A depressão, ou mais especificamente depressão maior, é definida como um

distúrbio afetivo, no qual o indivíduo apresenta humor deprimido ou perda de

interesse por atividades que antes eram consideradas prazerosas (anedonia) (DSM-

IV, 2002). Ela é um dos mais freqüentes distúrbios encontrados na prática médica e

de acordo com a World Health Organization (WHO), ela acomete aproximadamente

121 milhões de pessoas em todo mundo e somente 25% destas tem acesso a

tratamento adequado (WHO, 2007). A depressão será responsável por um grande

número de casos de morte nos próximos dez anos e, aproximadamente, um quinto

da população mundial terá pelo menos um episódio depressivo no decorrer da vida.

Dentre esses episódios 75% são classificados de leve a moderado (BILIA et al.,

2002).

A síndrome depressiva é tratada, na maioria das vezes, com uma variedade

de medicamentos denominados antidepressivos, os quais exercem efeitos benéficos

sobre os sintomas da depressão. A maioria exerce ações importantes sobre a

neurotransmissão monoaminérgica (GOODMAN & GILMAN, 2003).

Entretanto, um efeito adverso característico da maioria das drogas

antidepressivas é a disfunção sexual, tanto masculina quanto feminina (BRILL,

2004). Vários estudos demonstram que essa alteração tem sido reportada com a

utilização de todas as classes de antidepressivos (TAYLOR et al., 2005). Dessa

forma, esses e outros efeitos adversos limitam a real eficácia e a aceitabilidade do

antidepressivo por parte do paciente que, freqüentemente, descontinua a terapia em

poucas semanas sem a orientação médica.

A planta Hypericum perforatum L., conhecida popularmente como Erva de

São João, tem sido amplamente utilizada e nos últimos dez anos, principalmente na

Europa e nos Estados Unidos, o uso dessa planta tornou-se importante como uma

terapia alternativa para o tratamento de transtornos do humor, especialmente em

casos de depressão leve a moderada (RODRÍGUEZ-LANDA & CONTRERAS,

2003).

Estudos clínicos demonstram que os principais efeitos adversos que

aparecem durante o tratamento com Hypericum perforatum L são problemas

gastrintestinais, reações alérgicas, fadiga, inquietação, fotossensibilidade e síndrome

serotoninérgica, esta quando administrado com outros antidepressivos

(RODRÍGUEZ-LANDA & CONTRERAS, 2003).

Vários trabalhos apresentam a planta como um meio alternativo para o

tratamento de depressão principalmente por esta não apresentar tantos efeitos

adversos dentre eles disfunção sexual. Todavia, relatos clínicos têm sugerido que o

Hypericum perforatum L pode também induzir disfunção sexual, incluindo disfunção

erétil e retardo do orgasmo (BHOPAL, 2001; ASSALIAN, 2000). Um estudo realizado

com Hypericum perforatum L demonstrou que ele é capaz de inibir a contratilidade

das vias deferentes de ratos e humanos (CAPASSO et al., 2005). Dessa forma,

esses dados levam a suspeita de que essa planta pode provocar algum tipo de

disfunção sobre o sistema reprodutor masculino.

Devido à falta de estudos relacionando o sistema reprodutor e Hypericum

perforatum L. este trabalho teve como objetivo avaliar os possíveis efeitos adversos

desta planta sobre o sistema reprodutor masculino de ratos (Wistar), após exposição

crônica. Para tanto, foram realizados testes comportamentais sexuais e vários outros

testes toxicológicos reprodutivos pré-clínicos complementares.

2 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

2.1 FUNÇÃO SEXUAL MASCULINA

A reprodução é um processo fundamental para a manutenção e perpetuação

das espécies (ANTUNES-RODRIGUES & FAVARETTO, 1999) e a atividade sexual

humana envolve uma interação de componentes fisiológicos, psicológicos e

comportamentais (LEVIN & RILEY, 2007). As funções reprodutivas masculina podem

ser divididas em três grupos principais: espermatogênese, ato sexual masculino e a

regulação hormonal e neural da função reprodutiva (GUYTON, 2002).

2.1.1 Anatomia e Fisiologia Sexual Masculina

O sistema reprodutivo masculino á formado por diversas glândulas e ductos

que exercem a função produzir, transportar e eliminar para o meio externo os

gametas masculinos (espermatozóides) e, também, de produzir e secretar o

hormônio sexual masculino, testosterona.

Esse sistema é formado pelos testículos, epidídimos, canais deferente, ducto

ejaculador, uretra, pênis e pelas glândulas acessórias. Estas incluem as vesículas

seminais, a próstata e as glândulas uretrais (FIGURA 1) (GUYTON, 2002).

FIGURA 1-SISTEMA REPRODUTOR MASCULINO

FONTE: http://www.sci.sdsu.edu/classes/bio100/Lectures/Lect+18/Image281.gi

Os testículos são as principais glândulas desse sistema e podem ser

divididos, funcionais e anatomicamente, em duas partes: tecido intersticial (células

de Leydig) e túbulos seminíferos (células de Sertoli), responsáveis pela

esteroidogênese (produção de testosterona) e pela espermatogênese (produção de

espermatozóides), respectivamente (FIGURA 2) (ANTUNES-RODRIGUES &

FAVARETTO, 1999).

Os túbulos seminíferos produzem diariamente em média 120 milhões de

espermatozóides. Ao serem produzidos, eles são lançados nos epidídimos onde

ficam armazenados (18 a 24 horas) e adquirem a capacidade de motilidade, embora

várias proteínas inibitórias no líquido do epidídimo ainda impeçam a motilidade final

até depois da ejaculação. Ao saírem do epidídimo, os espermatozóides caem no

canal deferente onde ficam armazenados até o momento da ejaculação.

Durante o ato sexual, os espermatozóides percorrem o canal deferente e

desembocam no ducto ejaculador que recebe, também, conteúdo das vesículas

seminais e da próstata. A primeira glândula secreta um material mucóide (líquido

seminal) que contém substâncias que são de considerável valor nutritivo para os

espermatozóides. A próstata secreta um líquido ralo e leitoso (líquido prostático) que

contem cálcio, fosfato e enzimas, o que torna esse líquido ligeiramente alcalino,

ajudando a neutralizar a acidez dos outros líquidos seminais durante a ejaculação,

aumentando, assim, a motilidade e a fertilidade dos espermatozóides.

Em seguida, os espermatozóides passam do canal ejaculador para a uretra

e, por fim, para o meio externo. A uretra é suprida por muco proveniente de um

grande número de glândulas uretrais localizadas ao longo de toda sua extensão,

principalmente, das glândulas bulbouretrais. Esse muco auxilia na motilidade dos

espermatozóides durante o ato sexual (GUYTON, 2002).

FIGURA 2-TÚBULOS SEMINÍFEROS E CÉLULAS DE LEYDIG

FONTE: http://cellbio.utmb.edu/microanatomy/Male_Reproductive/Testis_and_

ducts.htm

Túbulo seminífero Célula de Leydig

2.1.2 Espermatogênese

O processo de espermatogênese constitui um processo dinâmico que ocorre

nos túbulos seminíferos durante a vida sexual ativa do homem. Inicia-se, em média,

aos 13 anos de idade e prossegue durante a maior parte da vida diminuindo

acentuadamente na velhice. Através de várias divisões celulares, as células

epiteliais germinativas denominadas de espermatogônias, presentes nos túbulos

seminíferos, formam ao final de aproximadamente 75 dias os espermatozóides.

Durante um período de 24 horas, cada espermatogônia migra entre as

células de Sertoli, que fornecem suportes estruturais, nutricionais e regulatório para

as células germinativas, e através de várias divisões mitóticas forma mais

espermatogônias (período germinativo). Cada uma dessas células torna-se, então,

progressivamente modificada e aumentada (período de crescimento) passando a ser

chamada de espermatócito primário. Em seguida, estas células sofrem divisão

celular meiótica e formam os espermatócitos secundários, que por sua vez também

se dividem e formam as espermátides (período de maturação), que acabam se

modificando e transformando-se em espermatozóides (período de diferenciação)

(FIGURA 3) (GUYTON, 2002).

Os espermatozóides são compostos de cabeça e cauda (FIGURA 4). A

cabeça é constituída pelo núcleo condensado da célula e no lado externo dos dois

terços anteriores da cabeça existe um capuz denominado acrossoma, que é formado

principalmente por enzimas que desempenham papel importante durante a

fertilização. A cauda denomina-se flagelo e contêm um grande número de

mitocôndrias responsáveis pelo fornecimento de energia que gera o batimento do

flagelo e a motilidade dos espermatozóides. Estes se deslocam em meio líquido,

com velocidade de aproximadamente 1 a 4 mm/min (GUYTON, 2002).

Todo o processo de espermatogênese é controlado por vários hormônios

dentre eles o hormônio gonadotrópico da hipófise anterior (GnRH), o hormônio

folículo estimulante (FSH), o hormônio luteinizante (LH) e a testosterona (GUYTON,

2002), ou seja, necessita da integridade do eixo hipotálamo-hipofise-gônadas

(ANTUNES-RODRIGUES & FAVARETTO, 1999).

FIGURA 3-ESPERMATOGÊNESE HUMANA

FONTE: http://www.rincon.com.br/Imagens/ggEspermatogenese.gif

FIGURA 4-ESPERMATOZÓIDE HUMANO

FONTE: http://caibco.ucv.ve/caibco/CAIBCO/Vitae/VitaeOcho/Articulos/Actualidad/

enoma/archivosGif/espermatozoide.gif

2.1.3 Ato Sexual Masculino

A seqüência de eventos que caracterizam o ato sexual é descrita como ciclo

de resposta sexual humano. Este ciclo é identificado por quatro fases chamadas:

estimulação sexual (libido - consiste no desejo da atividade sexual), excitação sexual

(fase de estimulação associada com alterações fisiológicas), orgasmo (relacionada a

contrações rítmicas dos músculos do períneo e órgãos reprodutores) e, por fim, a

resolução (fase de relaxamento muscular e sensação de bem-estar geral) (DSM-IV,

2002). O tempo e a intensidade destas fases variam grandemente entre os

indivíduos. A excitação e a resolução são as fases mais longas e o orgasmo é

usualmente a fase mais curta. Nos homens, todo o ciclo sexual tende a ser

estereotipado com pouca variação entre os indivíduos (GREGER & WINDHORST,

1996).

2.1.3.1 Estimulação sexual

Os fatores de estimulação sexual podem ser psicogênicos ou reflexogênicos.

A estimulação sexual psicogênica é ativada por impulsos que chegam de áreas

sensoriais (visão, olfato, paladar) ou pela imaginação de fantasias sexuais em

algumas áreas cerebrais específicas. A estimulação reflexogênica surge da

estimulação direta dos órgãos genitais e/ou de áreas eróticas (mamilos e períneo)

(LEVIN & RILEY, 2007).

2.1.3.2 Ereção

A ereção constitui o primeiro efeito da excitação sexual masculino sendo o

grau de ereção proporcional ao grau de estimulação, seja ela psíquica ou física.

A ereção é causada por impulsos parassimpáticos que partem da porção

sacra da medula espinhal, através dos nervos pélvicos, até o pênis. Acredita-se que

essas fibras parassimpáticas secretem, além de acetilcolina, óxido nítrico. Este

relaxa, principalmente, as artérias e o tecido erétil (corpo cavernoso e esponjoso) do

pênis. Esse tecido erétil é formado por uma rede trabecular de fibras musculares e

por vários sinusóides que, em condições normais, estão relativamente vazios, mas

que ficam enormemente dilatados quando o sangue arterial flui para o seu interior,

sob pressão, enquanto ocorre oclusão parcial do efluxo venoso. Além disso, os

corpos eréteis são circundados por fortes túnicas fibrosas.

Assim, a pressão elevada no interior dos sinusóides provoca a expansão do

tecido erétil em grau tão acentuado que o pênis fica rígido e alongado, constituindo o

fenômeno da ereção. Os impulsos parassimpáticos, além de promoverem a ereção,

induzem também a secreção de muco pelas glândulas uretrais e bulbouretrais. Esse

muco flui pela uretra durante o coito e ajuda na lubrificação (GUYTON, 2002).

2.1.3.3 Emissão e ejaculação

A emissão e a ejaculação constituem a culminação do ato sexual masculino

e esse período é denominado de orgasmo. Quando o estímulo sexual fica

extremamente intenso, os centros reflexos da medula espinhal começam a emitir

impulsos simpáticos, que partem da região toracolombar da medula, e dirigem-se

para os órgãos genitais pelos plexos simpáticos hipogástrico e pélvico, para iniciar a

emissão, o precursor da ejaculação (GUYTON, 2002).

A emissão começa com a contração do canal deferente para causar a

expulsão dos espermatozóides para a uretra interna. A seguir, ocorrem contrações

nas paredes musculares da vesícula seminal e da próstata, que expelem seus

líquidos também para a uretra, forçando os espermatozóides para frente. Todos

esses líquidos misturam-se ao muco na uretra formando o sêmen (GUYTON, 2002).

O enchimento da uretra interna com sêmen desencadeia sinais sensoriais

que são transmitidos pelos nervos pudendos, para a região sacra da medula

espinhal, dando a sensação de súbita plenitude nos órgãos genitais internos. Além

disso, esses sinais excitam ainda mais a contração rítmica dos órgãos sexuais

internos e também produzem a contração dos músculos isquiocavernoso e

bulbocavernoso que comprimem as bases do tecido erétil peniano. Esses efeitos em

conjunto causam aumento rítmico da pressão do tecido erétil do pênis e dos ductos

genitais e da uretra, que ejaculam o sêmen da uretra para o exterior. Ao mesmo

tempo, as contrações rítmicas dos músculos pélvicos e, até mesmo, de alguns dos

músculos do tronco causam movimento de propulsão da pelve e do pênis, que

também ajudam a propelir o sêmen.

Ao seu término, a excitação sexual masculina desaparece quase por

completo dentro de 1 a 2 minutos, e a ereção peniana cessa, processo denominado

de resolução (GUYTON, 2002).

FIGURA 5-CONTROLE NEURAL DA EREÇÃO E EJACULAÇÃO

FONTE: DESPOPOULOS & SILBERNAGL (2003)

2.1.4 Controle Hormonal da Função Sexual Masculina

Os testículos secretam vários hormônios sexuais masculinos, que são

coletivamente chamados androgênios incluindo a testosterona, a diidrotestosterona

e androstenediona. A testosterona é o mais abundante e principal hormônio

masculino e, no adulto, a concentração plasmática é, em média, de 500 a 800 ng/dl

(GUYTON, 2002).

Os maiores níveis de testosterona que são secretados ocorrem no primeiro

trimestre e início do segundo trimestre de vida intra-uterina, ao nascimento, durante

a puberdade e na vida adulta do homem, diminuindo gradualmente na velhice

(SNYDER, 2006).

A testosterona é sintetizada pelas células de Leydig a partir da molécula de

colesterol (ANTUNES-RODRIGUES & FAVARETTO, 1999). O hormônio luteinizante

(LH) é o principal estímulo à produção e secreção de testosterona nos homens. Esse

hormônio é secretado pela hipófise anterior e essa secreção é regulada

positivamente pelo hormônio de liberação de gonadotropina (GnRH) e,

negativamente pela própria testosterona, por meio de uma alça de retroalimentação

negativa. O hormônio LH liga-se a receptores presentes na membrana das células

de Leydig e desencadeia através da ativação de proteínas quinases, uma série de

reações intracelulares que culminam com a síntese dos andrógenos. A secreção de

testosterona é pulsátil e diurna e as concentrações plasmáticas mais altas ocorrem

por volta das oito horas e as mais baixas por volta das 20 horas (SNYDER, 2006).

Uma vez liberados na circulação, os hormônios andrógenos têm efeitos

sobre vários tecidos andrógeno-dependentes e um dos mecanismos pelos quais são

mediados esses efeitos variados é o metabolismo da testosterona em dois outros

esteróides ativos, a diidrotestosterona e o estradiol (FIGURA 6) (ANTUNES-

RODRIGUES & FAVARETTO, 1999).

Os efeitos biológicos da testosterona podem ser considerados conforme o

receptor que ela ativa e os tecidos nos quais esses efeitos ocorrem. A testosterona

pode atuar diretamente ou indiretamente, após conversão em diidrotestosterona pela

enzima 5α-redutase, com ambos ligando-se a receptores de androgênios-NR3A. Os

principais locais onde ocorre essa conversão são a próstata, a vesícula seminal e o

epidídimo. Ou ainda, a testosterona pode atuar como um estrogênio, mediante

conversão em estradiol pela enzima aromatase, através da ligação do estradiol ao

receptor de estrogênios. Este tipo de reação ocorre principalmente no hipotálamo,

hipófise e nas mamas (ANTUNES-RODRIGUES & FAVARETTO, 1999).

Após ser secretado, o hormônio testosterona é responsável por três

principais eventos: induzir a espermatogênese, produzir os efeitos de virilização

masculina e controlar os comportamentos relacionados ao ato sexual masculino.

O comportamento sexual masculino em todos os animais vertebrados é

dependente de testosterona. Em ratos, o hormônio que ativa o comportamento

sexual é o estradiol, assim proposto pela “Hipótese da aromatização”. Este hormônio

é responsável por ativar uma cascata comportamental e contribuir para a motivação

sexual e para a realização dos reflexos genitais (HULL & DOMINGUEZ, 2007).

A testosterona é metabolizada, principalmente, no fígado em compostos

inativos, a androsterona e deidroepiandrosterona, sendo simultaneamente,

conjugada a glicuronídeos. Esses conjugados são excretados para o intestino, pela

bile hepática, ou para urina, pelos rins (ANTUNES-RODRIGUES & FAVARETTO,

1999).

FIGURA 6-SINTESE DE HORMÔNIOS ESTERÓIDES

FONTE: HENDRICK (2000)

2.2 DISFUNÇÃO SEXUAL

Disfunção sexual pode ser definida como qualquer alteração em alguma das

fases do ciclo de resposta sexual humano como inibição do desejo e da excitação

sexual; inibição, retardo ou ausência de ejaculação nos homens e nas mulheres, ou

ainda, dor durante a relação sexual.

As possíveis causas dessas alterações podem incluir tanto fatores

psicológicos, como a insatisfação com a relação interpessoal ou o aparecimento de

doenças psiquiátricas, quanto fatores fisiológicos, como desordens circulatórias que

causem disfunção erétil em homens (MONTGOMERY et al., 2002).

Na população em geral a ocorrência de disfunção sexual está longe de ser

uma doença pouco comum. Baseados em estudos de prevalência em várias regiões

dos Estados Unidos, Laumann et al., (1999) reportaram que entre as mulheres os

principais problemas sexuais incluem diminuição da libido (22%), problemas de

excitação sexual (14%) e dor durante a relação (7%), pelo menos em alguma fase

de sua vida. Já entre os homens, as maiores incidências são de ejaculação precoce

(21%), disfunção erétil (5%) e diminuição de libido (5%) (LAUMANN et al., 1999

apud MONTGOMERY et al., 2002).

No Brasil um estudo realizado através de questionários, com homens e

mulheres de 40 a 80 anos, demonstrou que o principal problema sexual entre os

homens é de ejaculação precoce (30%) seguido pela incapacidade de alcançar o

orgasmo (14%), dificuldades de ereção (13%) e falta de interesse sexual (11%).

Entre as mulheres, os problemas mais comuns foram dificuldades de lubrificação

(23%) e falta de interesse sexual (23%) (JUNIOR et al., 2005).

A prevalência de altas incidências de comprometimento da função sexual,

seja por qualquer motivo, leva a uma piora na qualidade de vida dessas pessoas

ocasionando prejuízos no âmbito social e pessoal.

Nos últimos anos vem aumentando o interesse pelo conhecimento de

disfunção sexual como um potencial efeito colateral de várias drogas. Medicamentos

como antihipertensivos e antipsicóticos são bem conhecidos por provocarem

disfunção sexual. Esse tipo de alteração é classificado pelo Manual Diagnóstico e

Estatístico de Transtornos Mentais como disfunção sexual induzida por substâncias,

a qual ocorre somente em contato com uma determinada droga e é explicada pelos

efeitos fisiológicos diretos desta (DSM-IV, 2002).

Medicamentos antidepressivos também têm sido demonstrados por

causarem disfunção sexual em uma significativa parcela de pacientes que são

tratados com esses fármacos (SAKS, 1999). O número de estudos examinando os

efeitos indesejáveis dos antidepressivos na função sexual vem aumentando de

maneira considerável (KENNEDY et al., 1999).

A disfunção sexual mais comum associada ao uso de antidepressivos é a

ejaculação tardia (MONTGOMERY et al., 2002); entretanto, vários outros tipos de

disfunção são relatados e podem ser classificadas da seguinte maneira:

- alteração do desejo sexual, incluindo diminuição ou falta de desejo;

-disfunção de ejaculação e orgasmo, incluindo anorgasmo, hiperorgasmo,

orgasmo doloroso e inibição de ejaculação;

- problemas de ereção (impotência);

-outros problemas, incluindo redução da satisfação sexual, lubrificação e

problemas de estimulação sexual (TAYLOR et al., 2005).

A disfunção sexual tem sido relatada com maior freqüência para três classes

especiais de antidepressivos; os antidepressivos tricíclicos, os inibidores seletivos da

recaptação de serotonina e os inibidores da monoamina oxidase (MONTGOMERY et

al., 2002).

2.3 ANTIDEPRESSIVOS

A neurotransmissão de monoaminas no cérebro como da serotonina,

noradrenalina e dopamina ocorrem em circuitos neurais os quais enviam projeções

para várias regiões do cérebro como o sistema límbico e o córtex cerebral e

também, projeções descendentes para o controle do sistema nervoso autônomo.

Esses circuitos controlam muitos aspectos de funções comportamentais, incluindo

respostas de humor, ansiedade e o comportamento sexual.

A principal teoria para a origem da depressão propõe ser a depressão

causada por uma deficiência na neurotransmissão monoaminérgica em certos locais

no cérebro. Assim, drogas que facilitam a ação de monoaminas, na fenda sináptica,

são utilizadas como medicamentos antidepressivos.

O aumento da atividade monoaminérgica pode ocorrer de várias formas,

incluindo diminuição na recaptação do neurotransmissor por bloqueio da proteína

transportadora, diminuição do metabolismo por inibição de enzimas de degradação e

aumentando a liberação do neurotransmissor por bloqueio de auto-receptores

inibitórios (NASH & NUTT, 2007).

Dessa forma, a maioria dos antidepressivos tem ações importantes sobre a

neurotransmissão monoaminérgica, principalmente noradrenalina, dopamina e

serotonina (GOODMAN & GILMAN, 2003; HAMON & BOURGOIN, 2006).

Os mecanismos pelos quais esses medicamentos causam disfunção sexual

envolvem complexas interações entre esses sistemas de monoaminas. Os efeitos

adversos sexuais podem ser causados central ou perifericamente e podem resultar

de mudanças na função de um ou mais neurotransmissores (TAYLOR et al., 2005).

2.3.1 Antidepressivos Tricíclicos (ATC)

A imipramina foi o primeiro composto dessa classe a descobrirem o tão

quanto ela era eficaz no tratamento da depressão. Outros exemplos incluem a

amitriptilina, clomipramina, desipramina, nortriptilina e protriptilina (RANG et al.,

2001).

Todos os compostos desse grupo apresentam uma estrutura molecular

semelhante com um núcleo molecular de três anéis, daí serem chamados de

antidepressivos tricíclicos (FIGURA 7) (GOODMAN & GILMAN, 2003).

FIGURA 7- ESTRUTURA QUÍMICA DA AMITRIPTILINA

FONTE: http://pt.wikipedia.org/wiki/Antidepressor_triciclico

O efeito antidepressivo desses medicamentos consiste em bloquear a

recaptação de noradrenalina e, em alguns casos, também de serotonina nas

terminações nervosas através de sua competição e bloqueio pelo sítio de ligação da

proteína transportadora (FIGURA 8). De maneira indireta, os tricíclicos parecem

aumentar a neurotransmissão ao bloquear, também, os receptores α2-adrenérgicos

pré-sinápticos inibitórios (RANG et al., 2001).

FIGURA 8- MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIDEPRESSIVOS TRICÍCLICOS

FONTE: http://www.medscape.com/pi/editorial/cmecircle/2001/220/slide10.gif

ATC

Além de esses medicamentos agirem aumentando a neurotransmissão

monoaminérgica eles também atuam com propriedades antagonistas em receptores

muscarínicos, histamínicos e α1-adrenérgicos promovendo ações responsáveis

pelos efeitos adversos da droga. Dentre esses efeitos incluem-se sedação,

constipação, hipotensão, ganho de peso corporal e desordens de memória (HAMON

& BOURGOIN, 2006). Alguns antidepressivos tricícliclos também podem antagonizar

receptores de serotonina 5HT

(NASH & NUTT, 2007).

Disfunção sexual também aparece como um efeito adverso de

antidepressivos tricíclicos (KENNEDY, 2006). Huang (1997) e Saks (1999) já haviam

relatado que tricíclicos como amitriptilina e imipramina podem causar efeitos sexuais

adversos. Alguns estudos demonstram que 20% dos pacientes tratados com essa

classe de antidepressivos apresentam redução de libido e que 30% tem orgasmo

prejudicado (SAKS, 1999). A clomipramina é responsável por 96% da incidência de

anorgasmo associado com o uso de antidepressivos (ROTHSCHILD, 2000). Os

tricíclicos, principalmente a clomipramina, também estão relacionados com o

aumento significativo da latência de ejaculação em pacientes que sofrem de

ejaculação precoce. Este efeito parece ocorrer como conseqüência do aumento da

neurotransmissão central de serotonina (SEO et al., 2001).

Além de agirem alterando a atividade de vários neurotransmissores

centralmente, esses antidepressivos podem promover ação periférica nos órgãos

reprodutores. Medina et al., (2002) demonstraram que a amitriptilina age na

musculatura lisa, dos ductos sexuais deferentes de humanos, inibindo a contração

destes por agir como um antagonista de receptores adrenérgicos inibindo a entrada

de cálcio.

2.3.2 Inibidores da Monoamina Oxidase (IMAO)

A enzima monoamina oxidase (MAO) é encontrada em quase todos os

tecidos e existe em duas formas moleculares: a MAO-A e a MAO-B. Estas são de

localização intracelular associada principalmente com as mitocôndrias e exercem a

função de degradar as monoaminas endógenas e exógenas em todo corpo. A MAO-

A possui preferência de substrato para a 5-HT e constitui o principal alvo dos

antidepressivos IMAO. A MAO-B possui preferência para a feniletilamina, e ambas

as enzimas atuam sobre a degradação de noradrenalina e dopamina (RANG et al.,

2001).

Historicamente, o primeiro antidepressivo usado na prática clínica foi um

IMAO. No final dos anos de 1950, a iproniazida, inicialmente utilizada para o

tratamento de tuberculose, passou a ser usada para tratar pacientes deprimidos.

Exemplos dessa classe de medicamentos incluem fenelzina e tranilcipromina,

inibidores não-seletivos da MAO, a selegilina, seletivo para a MAO-B. Todos esses

fármacos promovem inativação irreversível da enzima causando interrupção

prolongada da degradação das monoamianas que pode estender-se por até 2

semanas após a interrupção do tratamento (FIGURA 9). Atualmente, são

desenvolvidos inibidores seletivos e reversíveis da MAO-A de ação curta como a

brofaromina, a moclobemida, a toloxatona e a clorgilina (GOODMAN & GILMAN,

2003).

FIGURA 9- MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIDEPRESSIVOS INIBIDORES DA ENZIMA

MONOAMINA OXIDASE

FONTE: HUMAN PHYSIOLOGY (1999)

Da mesma forma que outros medicamentos, os inibidores da MAO também

provocam efeitos indesejáveis, os quais podem resultar diretamente da inibição da

MAO, porém alguns são produzidos por outros mecanismos. Esses efeitos incluem

IMAO

hipotensão, estimulação central excessiva, aumento do peso corporal, efeitos

colinérgicos (RANG et al., 2001) e disfunção sexual (KENNEDY, 2006).

As principais alterações sexuais as quais os inibidores da MAO estão

associados incluem diminuição de libido e diminuição do orgasmo. De acordo com

Saks (1999), esses medicamentos estão associados a 30% de diminuição de libido e

40% diminuição de orgasmo.

2.3.3 Inibidores Seletivos da Recaptação de Serotonina (ISRS)

No final da década de 80, uma nova classe de antidepressivos foi

introduzida no mercado, os chamados inibidores seletivos da recaptação de

serotonina, os quais atualmente, são os mais utilizados para o tratamento de

depressão (KENT, 2000). O primeiro inibidor desenvolvido foi a zimelidina,

entretanto, por ela estar associada com doença febril e paralisia ascendente de

Guillain-Barré, ela foi retirada do mercado. Por essa razão, a fluoxetina e a

fluvoxamina foram os primeiros inibidores da recaptação de serotonina utilizados

amplamente (GOODMAN & GILMAN, 2003).

Esses fármacos elevam a concentração de serotonina, predominantemente

na área somatodendrítica dos neurônios serotoninérgicos por bloqueio específico da

recaptação (FIGURA 10). Esses processos são responsáveis pelo aparecimento dos

efeitos terapêuticos e adversos desses medicamentos (YARIS et al., 2003).

Dentre os principais efeitos adversos causados pelos inibidores da

recaptação de serotonina estão: náusea, anorexia, insônia (RANG et al., 2001),

alterações gastrintestinais e disfunção sexual (HAMON & BOURGOIN, 2006).

Vários estudos clínicos revelam que os antidepressivos que mais provocam

riscos à função sexual, tanto de homens quanto de mulheres, são os inibidores

seletivos da recaptação de serotonina (KENNEDY, 2006).

De 30% a 40% dos pacientes tratados com ISRS desenvolvem disfunção

sexual, caracterizada principalmente por diminuição de libido, disfunção erétil,

anorgasmo e ejaculação tardia (YARIS et al., 2003).

FIGURA 10- MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIDEPRESSIVOS INIBIDORES SELETIVOS DA

RECAPTAÇÃO DE SEROTONINA

FONTE: MINNEMAN & WECKER (2006)

Os ISRS incluem, entre outras, a fluoxetina, zimeldina, paroxetina, sertralina

e o citalopram. Desses compostos, a paroxetina é um dos inibidores mais potente da

recaptação de serotonina tanto in vitro quanto in vivo. Além de agir centralmente, a

paroxetina também inibe a síntese de óxido nítrico, um mediador da ereção peniana,

podendo provocar diminuição da pressão sangüínea nos corpos cavernosos e

induzir disfunção erétil (AHN et al., 2005).

A incidência de disfunção sexual é maior para a paroxetina quando

comparada a outros ISRS (YARIS et al., 2003). Ela é administrada oralmente e a

dose efetiva no tratamento de depressão é de 20 mg/dia. Ela é facilmente absorvida

pelo trato gastrintestinal, mas grande parte é metabolizada pelo efeito de primeira

passagem hepática. O tempo de meia vida é variável dependendo da dose e

duração da administração. Após 15 dias de administração oral de paroxetina o

tempo de meia vida é aumentado por até 100% (VASWANI et al., 2003).

2.3.4 HYPERICUM PERFORATUM L.

2.3.4.1 Classificação e aspectos botânicos

-Nome científico: Hypericum perforatum L. (FIGURA 11)

ISRS

Serotonina

FIGURA 11-Hypericum perforatum L.

FONTE: BEERHUES (2006)

-Nomes populares: hipérico, orelha-de-gato, alecrim-bravo, arruda-de-São-Paulo,

arruda-do-campo, milfurada, Erva de São João e St. John`s Wort.

-Período de colheita: antes ou durante a florescência (BILIA et al., 2002).

-Partes utilizadas: as preparações farmacêuticas mais comuns são feitas a partir das

partes aéreas da planta (MENNINI & GOBBI, 2004).

-Aspectos botânicos: a planta é um arbusto perene pertencente à família das

Hypericaceae, ou também chamada Guttiferae, largamente encontrada na Europa,

Ásia, norte da África e América do Norte (GAMBARANA et al., 1999). O gênero

Hypericum é representado por 89 espécies, das quais 43 são endêmicas e a espécie

mais abundante e mais conhecida é a Hypericum perforatum L. (DAVIS, 1988 apud

ÇIRAK et al., 2006). Esta possui um tamanho médio de 60 cm. As folhas apresentam

pontos transparentes ou glândulas oleosas que secretam óleo formando uma

camada incolor sobre as folhas. As flores são amarelo-alaranjadas brilhantes. O

cálice e a corola são marcados com pontos pretos; as sépalas e as pétalas são em

número de cinco e as pétalas são salpicadas com pontos pretos (BILIA et al., 2002).

No Brasil algumas espécies encontradas, principalmente na região sul, são

Hypericum brasiliense, Hypericum myrianthum e Hypericum caprifoliatum, a qual

também apresenta atividade antidepressiva (DAUDT et al., 2000).

2.3.4.2 Histórico da Planta

Hypericum perforatum L. foi inicialmente conhecida, na antiguidade, como

uma planta que possuía propriedades sobrenaturais e, só mais tarde, como planta

medicinal. O nome “hypericum” é derivado do Grego e refere-se à suposta

capacidade da planta de fazer as pessoas voarem por poder evocar espíritos. A

palavra “perforatum” deriva do Latim “perfurado” porque as folhas, quando

submetidas à luz, revelam pontos translúcidos dando a impressão de que as folhas

são perfuradas.

A Erva de São João é tradicionalmente utilizada para muitas aplicações

terapêuticas. O uso de suas partes florais foi originalmente documentado na Grécia

antiga para vários fins terapêuticos como, por exemplo, para o tratamento de feridas,

contusões e como diurético, e, atualmente, ela tem sido muito utilizada para o

tratamento de doenças psiquiátricas como ansiedade e depressão (BILIA et al.,

2002).

2.3.4.3 Constituintes químicos Hypericum perforatum L.

Análises fitoquímicas das partes aéreas têm revelado a presença de uma

grande variedade de substâncias com atividades biológicas diversas (RODRIGUEZ-

LANDA & CONTRERAS, 2003).

GREESON et al., (2001) relacionaram esses principais constituintes:

-Naftodiantronas: hipericina e pseudohipericina (flores e brotos);

-Floroglucinóis: hiperforina e adiperforina (flores e brotos);

-Flavonóides: quercetina (folhas), hiperósido (talo), quercetrina, rutina, campferol,

mirecetina, amentoflavona, 13,118-biapegenina (brotos);

-Procianidinas: procianidina, catequina, polímeros, epicatequinas (flores e brotos);

-Tanina: ácido tanínico;

-Aminoácidos: GABA, cisteína, glutamina, leucina, lisina, ortinina, prolina, treonina;

-Óleos essenciais: terpenos e álcool;

-Fenilpropanos: ácido cafeíco, ácido clorogênico;

-Xantonas;

-Outros compostos: ácidos orgânicos, peptídeos, polissacarídeos.

As preparações de Hypericum perforatum L. são, freqüentemente,

padronizadas pela concentração de hipericina, que pode variar de 0,1 a 0,3% do

extrato alcoólico. O conteúdo de hiperforina varia de 1 a 5% e, apesar de ser um

composto instável a luz e ao ar, pode ser encontrado e mantido no extrato por

longos períodos, se bem estocado (FIGURA 12) (MENNINI & GOBBI, 2004).

Na Europa, os extratos ativos purificados do Hypericum perforatum L. são

usualmente preparados por extração dos compostos com uma mistura de etanol ou

metanol/água e são padronizados por análise de espectrofotometria UV. A

Farmacopéia Européia não aceita menos que 0,08% de hipericina por extrato. Nos

Estados Unidos, a padronização dos extratos com um valor mínimo de hipericina de

0,2% e hiperforina 3,0%, calculados por análise de HPLC.

Hipericina Hiperforina

FIGURA 12-MOLÉCULA DE HIPERICINA E HIPERFORINA

FONTE: BILIA et al. (2002)

O Hypericum perforatum L. é a única espécie, da família das Guttiferae, que

contém uma grande quantidade de hiperforina. Durante o crescimento da planta a

concentração de hiperforina continuamente aumenta de 2,5%, nos brotos jovens,

para 8,5% nos frutos verdes. Nas folhas o conteúdo é de aproximadamente 1,5% e

permanece estável (BEERHUES, 2006).

Por anos, a atividade antidepressiva da planta Hypericum perforatum foi

atribuída a hipericina Entretanto, estudos clínicos e experimentais indicam que a

hiperforina seja o composto envolvido nesta atividade. As diferentes propriedades

dos compostos bioativos e seus diferentes níveis de produção, por exemplo, alta

concentração de hipericina encontrada em temperaturas altas enquanto hiperforina

em temperaturas mais baixas podem indicar meios para o desenvolvimento de

estratégias de comercialização com produção de compostos bioativos específicos

(COUCEIRO et al., 2006).

2.3.4.4 Farmacocinética

Um estudo realizado com ratos por Biber et al., (1998) demonstrou que após

a administração oral de 300 mg/kg de extrato de Hypericum perforatum L (WS5572,

contendo 5% de hiperforina) a concentração plasmática máxima de hiperforina

estimada em 3 horas foi de 370ng/ml e o tempo de meia vida de aproximadamente 6

horas (BIBER et al., 1998 apud BHATTARAM et al., 2002).

Estudos farmacocinéticos em humanos realizados têm revelado que doses

clinicamente relevantes de hipericina (1mg/dia) atingem concentrações plasmáticas

máximas após 4-6 horas e permanecem estáveis por até 4 dias. O tempo da

absorção de hipericina é de aproximadamente 1 hora e o tempo de eliminação de 25

horas (UPTON et al., 1997; KERB et al., 1994; BROCKMOLLER et al., 1997 apud

GREESON et al., 2001).

Um outro experimento clínico investigou a farmacocinética do composto

hiperforina de um extrato contendo 300mg/kg Hypericum perforatum L (14,8mg

hiperforina) e foi demonstrado que a concentração plasmática máxima deste

composto foi de 150 µg/l em 3,5 horas, o tempo de meia vida de 9 horas e o de

eliminação de 12 horas (BIBER et al., 1998 apud GREESON et al., 2001).

Embora não ocorra acúmulo de hiperforina no plasma, a concentração

plasmática seguindo um regime terapêutico normal é uma concentração similar em

magnitude para a fluoxetina, paroxetina e fluvoxamina (GREESON et al., 2001).

2.3.4.5 Doses

A dose recomendada de Hypericum perforatum L, para o tratamento de

depressão leve ou moderada, é de 900mg/dia de extrato padronizado de 0,3%

hipericina. Altas doses de 1.200 para 1.800 mg/dia têm sido utilizadas para o

tratamento de casos de depressão severa (CASS, 2003).

2.3.4.6 Principais atividades biológicas

Atividade antidepressiva

Extratos de Hypericum perforatum L são largamente utilizados para o

tratamento de depressão. Estudos têm demonstrado que esses extratos são mais

efetivos que placebo e semelhantes a outros antidepressivos sintéticos em casos de

depressão leve e moderada (BIFFIGNANDI & BILIA, 2000; LINDE & KNUPPEL,

2005).

Inicialmente, sugeria-se que a hipericina era responsável pelo efeito

antidepressivo do Hypericum perforatum L, devido à sua propriedade de inibir a

enzima monoamina oxidase. Entretanto, este efeito só era alcançado quando se

utilizavam altas concentrações do extrato, as quais não são utilizadas clinicamente.

Mais tarde observou-se que os extratos inibiam a recaptação de serotonina,

dopamina e noradrenalina com alta potência e este efeito foi atribuído a hiperforina

(MENNINI & GOBBI, 2004).

Atividade fotodinâmica

Muitas plantas, dentre elas o Hypericum perforatum L, possuem propriedade

fotodinâmica. A terapia fotodinâmica é baseada na administração de drogas,

conhecidas como fotossensíveis, as quais são preferencialmente retidas por tecidos

com neoplasias (ZEISSER-LABOUEBE et al., 2006).

A hipericina é um composto fotossensível que demonstra atividade

antineoplásica, provavelmente por induzir a apoptose e necrose das células tumorais

(SKALKOS et al., 2006).

Atividade antibacteriana

O potencial antibiótico de hiperforina explica o tradicional uso do Hypericum

perforatum L. para o tratamento local de feridas infecciosas. A hiperforina inibe o

crescimento de bactérias gram-positivas, em concentrações bem baixas, mas não de

bactérias gram-negativas (BEERHUES, 2006). Estudo realizado por SCHEMPP et

al., em 2003,

demonstraram que o Hypericum perforatum L. é um eficiente

tratamento para dermatite subaguda, entretanto mais estudos devem ser realizados

comparando-o com outros tratamentos padronizados.

Indução do citocromo P450 e glicoproteína-P

Recentes estudos têm demonstrado que Hypericum perforatum L. e alguns

compostos isolados podem ativar ou inibir certos tipos de enzimas, principalmente as

enzimas do sistema do citocromo P450. Uma enzima ativada é a glicoproteína-P e

as isoformas 34A, 1A2 e 2C9. Esta ativação pode reduzir os níveis sanguíneos e os

efeitos terapêuticos de algumas drogas que são metabolizadas por essas enzimas

(BIFFIGNANDI & BILIA, 2000).

Os receptores pregnane X, os quais são responsáveis pela metabolização de

hormônios esteróides também são ativados por compostos presentes no extrato

(BILIA et al., 2002). Dessa forma, a co-administração de Hypericum perforatum L.

com outras drogas podem levar a uma redução, ou aumento, dos níveis plasmáticos

da droga co-administrada, alterando sua eficácia (BEERHUES, 2006).

2.3.4.7 Efeitos adversos

Os efeitos adversos mais comuns atribuídos ao Hypericum perforatum L. são:

irritação gastrintestinal, reações alérgicas, fotossensibilização, fadiga e inquietação.

Hypericum perforatum L. é considerada uma planta segura para o tratamento

de depressão por apresentar poucos efeitos adversos, principalmente reprodutivos.

Entretanto, pesquisas realizadas com Hypericum perforatum L. demonstraram que

ela inibe de forma direta a contratilidade das vias deferentes de ratos e humanos, da

mesma forma que outros antidepressivos sintéticos como a paroxetina, a qual está

associada à ocorrência de disfunção sexual masculina (CAPASSO et al., 2005).

Além disso, relatos espontâneos de pacientes que utilizaram Hypericum perforatum

L. (BHOPAL, 2001; ASSALIAN, 2000) indicam a ocorrência de efeitos adversos na

função sexual, o que leva a suspeitar que a planta Hypericum perforatum L. possa

provocar algum tipo de toxicidade reprodutiva

3 JUSTIFICATIVA

Atualmente, no Brasil e no mundo, há um grande consumo de Hypericum

perforatum L., principalmente, para o tratamento de transtornos depressivos. Assim,

esta planta é considerada, por muitos autores, uma forma segura de tratamento por

ela promover poucos efeitos adversos, inclusive não interferindo na função sexual.

Entretanto, existem poucos trabalhos que relacionam Hypericum perforatum L. com

a função sexual masculina.

4 OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GERAL

Este projeto de pesquisa teve como objetivo geral avaliar os possíveis efeitos

adversos do Hypericum perforatum L. sobre o sistema reprodutor masculino de ratos

Wistar tratados pelo medicamento por um período crônico.

4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

- Avaliar possíveis alterações nos vários parâmetros utilizados nos estudos de

comportamento sexual;

- Avaliar o peso relativo e absoluto de órgãos relacionados à reprodução (testículos,

epidídimo, próstata, vesícula seminal), assim como dos rins e do fígado para a

avaliação de possível toxicidade;

- Avaliar a produção e o número de espermatozóides;

- Avaliar a produção de testosterona, hormônio responsável pelo desenvolvimento e

manutenção do sistema reprodutor masculino.

5 MATERIAL E MÉTODOS

5.1 ANIMAIS

Para a experimentação foram utilizados ratos da linhagem Wistar (Rattus

norvergicus albinus), machos e fêmeas (com aproximadamente três meses de

idade), criados no biotério do Setor de Ciências Biológicas e mantidos no

Laboratório de Toxicologia Reprodutiva do Departamento de Farmacologia, ambos

na Universidade Federal do Paraná (UFPR). Os animais foram mantidos em sala

com temperatura controlada (20 ± 2

C), água e ração comercial ad libitum e

iluminação artificial estabelecendo um fotoperíodo de 12 horas claro e 12 horas

escuro, considerando o período de luz das 22:00 às 10:00 horas da manhã (ciclo

invertido). Todos os animais, antes do início dos experimentos, permaneceram três

semanas na sala com ciclo claro/escuro invertido para adaptação. Todos os

procedimentos experimentais realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética em

Experimentação Animal da UFPR, através do número de protocolo 0199.

5.2 SUBSTÂNCIAS UTILIZADAS

Neste experimento foram utilizados dois medicamentos antidepressivos. Um

deles o extrato de Hypericum perforatum L., doado pela Fundação Herbarium de

Saúde e Pesquisa, utilizado para a fabricação do antidepressivo fitoterápico Hipérico

padronizado com 0,38% de hipericina e 3,5% e hiperforina. O outro antidepressivo

utilizado foi o sal de paroxetina (cloridrato de paroxetina) comercializado e vendido

pela Farmácia de manipulação Vico Farma na cidade de Curitiba, Paraná.

5.3 DOSES E TRATAMENTO

As doses utilizadas do extrato de Hypericum perforatum foram determinadas

de acordo com a dose terapêutica em humanos de 15 mg/kg/dia (900 mg/dia)

(CASS, 2003). A dose de paroxetina inicial foi de 20 mg/kg, entretanto, como os

animais perderam muito peso, a partir do décimo dia de tratamento a dose foi

diminuída para 10 mg/kg. Esta foi determinada de acordo com o trabalho de Jong et

al., (2005), no qual essa dose também alterou alguns parâmetros do comportamento

sexual de ratos machos tratados com esse medicamento.

Os ratos machos foram divididos em cinco grupos de 15 animais cada:

-grupo controle (C): tratados com salina (veículo);

-grupo PA: tratados com paroxetina;

-grupo H15: tratados com Hypericum perforatum L. 15 mg/kg;

-grupo H150: tratados com Hypericum perforatum L. 150 mg/kg;

-grupo H300: tratados com Hypericum perforatum L. 300 mg/kg.

Os animais foram mantidos em caixas com 2 ou 3 animais cada, e foram

tratados via oral, gavage (FIGURA 13), com volume de 5 mL/kg de peso corporal

pela manhã durante 90 dias, estabelecendo um protocolo crônico de tratamento

(EPA, 1996). Ambos os compostos foram preparados diariamente dissolvidos em

salina e sonicados, em ultra-som, por 20 minutos.

FIGURA 13- ADMINISTRAÇÃO POR GAVAGE

FONTE: LABORATÓRIO DE TOXICOLOGIA DA UFPR (2007)

5.4 SELEÇÃO DOS RATOS MACHOS SEXUALMENTE EXPERIENTES

Para os estudos de comportamento sexual são normalmente utilizados ratos

sexualmente ativos e experientes. Assim, ratos machos com idade adulta (90 dias)

passaram por um processo de triagem para a separação desses animais.

Todos os ratos selecionados permaneceram com fêmeas em estro e foram

separados somente aqueles que ejacularam o que foi confirmado pela presença de

espermatozóides no esfregaço vaginal das ratas (FIGURA 14). Esses esfregaços

foram realizados com auxílio de micropipeta através de lavagens vaginais com 50 µl

de salina e posterior avaliação, a fresco, em microscopia ótica. Os animais

separados foram colocados na sala de ciclo claro/escuro invertido por três semanas

para adaptação, em caixas com no máximo 4 animais.

FIGURA 14-LAVADO VAGINAL

FONTE: LABORATÓRIO DE TOXICOLOGIA DA UFPR (2007)

5.5 PREPARAÇÃO DAS FÊMEAS SEXUALMENTE RECEPTIVAS

A maioria dos métodos para a avaliação do comportamento sexual em ratos

utiliza ratas fêmeas adultas ovariectomizadas tornando-as sexualmente receptivas

através de tratamento hormonal. A utilização de ratas castradas tem como objetivo

evitar uma possível prenhez durante os estudos de comportamento, o que implicaria

a utilização de um número elevado de animais.

Para a realização da cirurgia de castração, as ratas foram anestesiadas, via

intraperitoneal, com uma combinação de ketamina (Vetaset 10 ml, Fort Dodge) e

xilazina (Virbaxyl 2%, Virbac) nas concentrações de 75 mg/kg e 1,5 mg/kg,

respectivamente. Com a fêmea em decúbito dorsal foram feitas à depilação e a

assepsia, com iodopovedine, da região central do abdome. Em seguida, uma incisão

ventral de aproximadamente 1,5 cm sobre a pele e os músculos expôs a cavidade

abdominal. Os ovários foram localizados, abaixo de uma camada de gordura, e

antes de serem retirados os ovidutos foram amarrados com um fio reabsorvível

orgânico (categute simples número 0000) (FIGURA 15). Encerrada a retirada do

segundo ovário, a incisão foi suturada com fio mononylon 0 e feita à assepsia da

região.

As ratas receberam, via-subcutânea, analgésico (D-500, FortDodge 50 ml) na

dose de 66 mg/kg e antibiótico (Gentatec 10ml, Chemitec Agro-Veterinária) na dose

de 5 mg/kg e, foram mantidas em observação para recuperação pós-cirúrgica por 20

dias. Em seguida, foram colocadas na sala de ciclo invertido por três semanas para

adaptação.

FIGURA 15- OVARIECTOMIA EM RATAS

FONTE: LABORATÓRIO DE TOXICOLOGIA DA UFPR (2007)

5.6 DESENHO EXPERIMENTAL

Castração de

ratas fêmeas

Seleção dos machos sexualmente

ativos e experientes

Inversão do ciclo

claro/escuro para

habituação

Tratamento/90 dias

- grupo controle: salina

- grupo H15: Hypericum 15 mg/kg/dia

- grupo H150: Hypericum 150 mg/kg/dia

- grupo H300: Hypericum 300 mg/kg/dia

- grupo PA: paroxetina 10 mg/kg/dia

Coleta de fezes em dias alternados para

posterior avaliação hormonal

Avaliação do comportamento sexual

Sacrifício

Gavage

Parâmetros avaliados

- Massa dos órgãos (testículos,

epidídimos, vesícula seminal,

próstata, fígado, rim, adrenal,

encéfalo e músculo levantador

anal);

- Produção espermática;

Dosagem de testosterona em fezes.

Início dos

experimentos

2 semanas 4 semanas 3 semanas

2 semanas 2 semanas

5.7 PARÂMETROS AVALIADOS

5.7.1 Comportamento Sexual

A avaliação do comportamento sexual dos ratos machos foi realizada em dois

momentos distintos: antes e após o tratamento de 90 dias. O comportamento sexual

foi realizado durante a fase escura do ciclo e filmado no intervalo das 13:00 às 20:00

horas, para posterior análise. Cada macho, durante o acasalamento, permaneceu

sozinho com uma fêmea em estro em uma sala apropriada para filmagens.

5.7.1.1 Indução do estro em fêmeas castradas

Antes de cada análise de comportamento sexual, a receptividade sexual das

fêmeas foi induzida por hormônios sexuais femininos sintéticos. Aproximadamente

52 horas antes do acasalamento, as ratas receberam 17α-etinilestradiol (Sigma, E-

4876) na dose de 20 µg/rata e, quatro horas antes progesterona (Sigma, P0130) na

dose de 1 mg/rata. Ambos os hormônios foram dissolvidos em óleo de canola e

sonificados por 10 minutos, diariamente. A concentração final foi de 100 µg/ml de

17α-etinilestradiol e 5 mg/ml de progesterona. Os hormônios foram injetados

subcutaneamente em volume de 0,2 ml/rata, no dorso do animal. As fêmeas foram

usadas somente uma vez por semana (AGMO, 1997).

5.7.1.2 Filmagem do comportamento sexual dos machos

Após a indução do estro nas fêmeas, os machos acasalavam com estas em

uma caixa transparente de polipropileno (414x344x168 mm) e os acasalamentos

foram filmados utilizando uma câmera de vídeo compacta (Vídeo 8 Handycam CCD-

TR517, SONY®). Dez minutos antes do acasalamento o macho, individualmente, foi

colocado na caixa de polipropileno para exploração do ambiente, evitando a

interferência do comportamento exploratório desse animal no comportamento

sexual. Em seguida, a fêmea foi colocada na caixa com o macho e o acasalamento

filmado por 30 minutos. Foram consideradas sexualmente inativas as fêmeas que

não apresentaram receptividade sexual (lordose, vibração das orelhas) num tempo

de cinco minutos após serem colocadas com os machos. Se isso acontecesse, a

fêmea era trocada por outra.

Depois de transcorridos 30 minutos de filmagem, a fêmea foi retirada da

caixa e foi realizado o esfregaço vaginal para detecção de espermatozóides e

confirmação da ejaculação.

5.7.1.3 Avaliação do comportamento sexual

Após o término das filmagens foram analisadas as seguintes variáveis

reprodutivas (AGMO, 1997):

 Latência de monta (seg): tempo decorrido entre a introdução da

fêmea na caixa de filmagem e a primeira monta (com ou sem penetração);

 Latência de penetração (seg): tempo decorrido entre a introdução da

fêmea na caixa de filmagem e a primeira penetração;

 Latência de ejaculação (min): tempo decorrido entre a primeira

penetração e a ejaculação;

 Latência pós-ejaculação (min): tempo decorrido entre a ejaculação e

a primeira penetração após a ejaculação;

 Número de penetrações até a primeira ejaculação;

 Número de penetrações totais.

Após o tratamento e as filmagens, os animais foram sacrificados por

decapitação para a avaliação de outros parâmetros reprodutivos.

5.7.2 Determinação da Massa Corporal e da Massa Absoluta e Relativa dos

Órgãos

A determinação das massas relativa e absoluta dos órgãos e, também, da

massa corporal pode dar indicações do estado de saúde do animal e da função de

cada órgão. Com o objetivo de observar alterações nestes parâmetros, foi

monitorada a mudança de massa corporal dos animais durante o tratamento. Além

disso, após o sacrifício foram retidos os seguintes órgãos para análise: rins, fígado,

encéfalo, adrenais, os órgãos sexuais (testículos e epidídimos) e glândulas

acessórias sexuais (próstata e vesícula seminal). A pesagem de todos os órgãos foi

realizada utilizando-se balança analítica.

5.7.3 Contagem Espermática

Para a avaliação da produção espermática foram utilizados os testículos

direitos dos animais. Após a retirada e pesagem dos testículos estes foram

submetidos à excisão da túnica albugínea e homogeneizados, durante 1 minuto, em

10 ml de salina (solução de cloreto de sódio 0,9%) contendo 0,5% de Triton X-100. A

solução obtida foi diluída com salina 10 vezes e submetida à contagem microscópica

do número de espermátides em câmara hemocitométrica (câmara de Bürker),

diariamente.

O número de espermátides diárias por animal corresponde à contagem de

espermátides do testículo direito multiplicada pelo fator de correção (3 x 0,520833) e

dividido por 6,1. O divisor corresponde ao número de dias em que as espermátides

estão presentes nos estágios 17 e 19 do ciclo do epitélio seminífero. Estes estágios,

nos ratos, correspondem a 48% de um ciclo completo, o qual tem duração total de

12,75 dias (ROBB, 1978).

Para a contagem do número de espermatozóides foram utilizadas as caudas

dos epidídimos. Após estes serem pesados, fragmentados e homogeneizados em 10

ml de salina (solução de cloreto de sódio 0,9%) contendo 0,5% de Triton X-100

foram feitas as contagens de maneira semelhante aos testículos. As contagens

obtidas dos epidídimos direito e esquerdo foram somadas e multiplicadas também

pelo fator de correção (3 x 0,520833) (ROBB, 1978).

5.7.4 Dosagem hormonal

Durante o período de tratamento, especificamente a cada dois dias, foram

recolhidas amostras das fezes dos animais machos, as quais foram utilizadas para a

dosagem de hormônio sexual masculino. Este método de avaliação hormonal serviu

como um parâmetro para a observação e análise de possíveis variações dos níveis

hormonais em quatro períodos durante o tratamento: as fezes do início e final do

tratamento e fezes após 30 e 60 dias de tratamento.

A pesagem das fezes e a extração hormonal da amostra foram realizadas de

acordo com Brown et al. (2004). Em seguida, os níveis de androgênios foram

quantificados por meio de teste de ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). O

princípio deste ensaio está baseado na competição entre androgênios da amostra e

a testosterona conjugada utilizada como reagente para uma quantidade constante

de anticorpo antitestosterona.

As microplacas (NUNC Immuno TM plates, Maxisorp) utilizadas foram

cobertas com 50 µl de anticorpo anti-testosterona (R156/7; CORALIE Munro-

Universidade da Califórnia, Davis, CA, USA) diluído 1:7500 e acondicionada a 4ºC,

por pelo menos 12 horas.

A leitura dos resultados foi realizada utilizando-se dois controles,

padrões com quantidades conhecidas de testosterona e amostras, tudo em

duplicata, e ao final a quantidade de androgênios foi dada em ng/grama de fezes. Os

coeficientes de variação intra-ensaio e inter-ensaio foram < 10%.

5.8 ANÁLISE ESTATÍSTICA

Todas as variáveis foram analisadas através de análise de variância (ANOVA)

e as diferenças entre os grupos foram determinadas pelo teste de Tukey. Para a

avaliação da dosagem hormonal nas fezes e ganho de massa corporal foi utilizada

análise de variância de duas vias (ANOVA de duas vias). Para a análise do

percentual de animais que ejacularam foi utilizado o teste de qui quadrado. O nível

de significância estatístico utilizado foi de 5% (p < 0,05). Para análise estatística e

confecção dos gráficos foram utilizados os programas Graphpad Prism® versão 3.0

eStatistica.

6 RESULTADOS

6.1 AVALIAÇÃO DO PESO CORPORAL

6.1.1 Massa Corporal Durante o Tratamento

A administração diária de Hypericum perforatum L. não afetou o ganho de

massa corporal dos animais em comparação ao grupo controle. Entretanto, os

animais do grupo paroxetina apresentaram uma redução estatisticamente

significativa do ganho de massa corporal em relação ao grupo controle, e aos

demais grupos aos 10 dias de tratamento (GRÁFICO 1). Durante os 90 dias de

tratamento, um animal do grupo H15, um animal do grupo H300 e dois animais do

grupo H150 morreram devido à administração incorreta por gavage.

GRÁFICO 1-GANHO DE MASSA CORPORAL DOS ANIMAIS DURANTE 90 DIAS

DE TRATAMENTO

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

100

105

110

115

Controle (n=15)

Hypericum 15 mg/kg (n=14)

Hypericum 150 mg/kg (n=13)

Hypericum 300 mg/kg (n=14)

Paroxetina 10 mg/kg (n=15)

Dias

Ganho de massa

corporal %

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

* Significativamente diferente do grupo controle

(p<0,05)-ANOVA de duas vias. Análise pontual; Anova de uma via seguida do teste de

Tukey

6.1.2 Massa Corporal no Dia do Sacrifício

Após os 90 dias de tratamento, os animais foram filmados para a avaliação do

comportamento sexual e foram sacrificados após 7 dias, a partir da filmagem. No dia

do sacrifício, a massa corporal média dos animais não diferiu de forma

estatisticamente significativa entre os grupos (GRÁFICO 2).

GRÁFICO 2-MASSA CORPORAL DOS ANIMAIS NO DIA DO SACRIFÍCIO

Controle 15 150 300 Paroxetina

100

200

300

400

500

600

Hypericum perforatum (mg/kg) 10mg/kg

Massa corporal(g)

n=15

n=14

n=13

n=14

n=15

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via

6.2 MASSA ABSOLUTA E RELATIVA DOS ÓRGÃOS

O cálculo da média das massas absoluta e relativa dos rins, adrenais,

testículos e epidídimos foi calculado a partir da média dos órgãos direito e esquerdo.

O tratamento com Hypericum perforatum e paroxetina não afetou as massas

absoluta e relativa dos órgãos: fígado, rins, adrenais e encéfalo, em nenhuma das

doses testadas (TABELA 1).

Em relação aos órgãos sexuais, observamos que também não houve

diferença estatisticamente significativa nas médias das massas absoluta e relativa

dos órgãos testículos e epidídimos entre os grupos tratados com Hypericum

perforatum, paroxetina e o grupo controle.

O número menor de animais nos grupos H150 e paroxetina, para os órgãos

encéfalo e adrenais, é devido à perda destes órgãos no momento da retirada

durante o sacrifício.

TABELA 1-MASSA ABSOLUTA E RELATIVA DOS ÓRGÃOS DE ANIMAIS

MACHOS TRATADOS POR 90 DIAS

Hypericum perforatum (mg/kg) VARIÁVEIS CONTROLE

(salina)

15 150 300

PAROXETINA

10 mg/kg

Número de animais por

grupo

Massa corporal (g)

479 ± 9,45

467 ± 9,96

445 ± 11,06

450 ± 9,88

449 ± 5,28

MASSA ABSOLUTA

Fígado (g) 13,0 ± 0,38 12,5 ± 0,33 12,3 ± 0,33 13,0 ± 0,38 12,2 ± 0,30

Encéfalo (g) 2,12 ± 0,021 2,10 ± 0,028 2,12 ± 0,023(a) 2,08 ± 0,017 2,11 ± 0,015

Rim (g) 1,37 ± 0,030 1,37 ± 0,036 1,32 ± 0,032 1,36 ± 0,032 1,32 ± 0,025

Adrenal (mg) 24,0 ± 1,34 23,0 ± 1,24 24,0 ± 0,71 23,0 ± 1,37 24,0 ± 0,98(b)

MASSA RELATIVA

Fígado (%) 2,71 ± 0,037 2,69 ± 0,042 2,76 ± 0,056 2,88 ± 0,059 2,72 ± 0,062

Encéfalo (%) 0,45 ± 0,0092 0,45 ± 0,0088 0,48 ± 0,0092 (a) 0,47 ± 0,010 0,47 ± 0,0071

Rim (%) 0,29 ± 0,0046 0,29 ± 0,0050 0,30 ± 0,0063 0,30 ± 0,0055 0,29 ± 0,0050

Adrenal (%) 0,0048 ± 0,0003 0,0048 ± 0,0003 0,0052 ± 0,0002 0,0051 ± 0,0003 0,0050 ± 0,0003 (b)

Notas: Os resultados expressam média ± erro padrão

(a) número de animais por grupo igual a 11. (b)

número de animais por grupo igual a 14

Em relação à massa absoluta e relativa da vesícula seminal também não

foram observadas diferenças estatisticamente significativas quando comparado os

grupos tratados com Hypericum perforatum e paroxetina com o grupo controle.

Entretanto, apesar de ter havido uma diminuição das massas absoluta e

relativa da próstata para os animais dos grupos H150, H300 e paroxetina, não foi

diminuição estatisticamente significativa em relação ao grupo controle.

As médias das massas absoluta e relativa dos órgãos sexuais estão

apresentadas na TABELA 2.

TABELA 2-MASSA ABSOLUTA E RELATIVA DOS ÓRGÃOS SEXUAIS DE

ANIMAIS MACHOS TRATADOS POR 90 DIAS

Hypericum perforatum (mg/kg) VARIÁVEIS CONTROLE

(salina)

15 150 300

PAROXETINA

10 mg/kg

Número de animais por

grupo

Massa corporal (g)

479 ± 9,45

467 ± 9,96

445 ± 11,06

450 ± 9,88

449 ± 5,28

MASSA ABSOLUTA

Testículos (g) 2,02 ± 0,024 2,00 ± 0,028 2,02 ± 0,046 2,03 ± 0,036 2,01 ± 0,056

Epidídimos (g) 0,68 ± 0,0072 0,64 ± 0,0141 0,65 ± 0,0110 0,67 ± 0,0166 (a) 0,66 ± 0,0116

Vesícula seminal (g) 0,81 ± 0,042 0,81 ± 0,040 0,76 ± 0,041 0,86 ± 0,043 0,73 ± 0,026

Próstata (g) 0,48 ± 0,021 0,47 ± 0,035 0,41 ± 0,037 0,42 ± 0,017 0,40 ± 0,019

MASSA RELATIVA

Testículos (%) 0,42 ± 0,0076 0,43 ± 0,010 0,46 ± 0,012 0,44 ± 0,023 0,45 ± 0,011

Epidídimos (%) 0,14 ± 0,0028 0,14 ± 0,0027 0,15 ± 0,0040 0,15 ± 0,0041 (a) 0,15 ± 0,0025

Vesícula seminal (%)

0,17 ± 0,0068

0,17 ± 0,0076

0,17 ± 0,0090

0,19 ± 0,0113

0,16 ± 0,0065

Próstata (%) 0,10± 0,0050 0,10 ± 0,0068 0,09 ± 0,0087 0,09 ± 0,0041 0,09 ± 0,0041

Notas: Os resultados expressam média ± erro padrão

(a) número de animais por grupo igual a 13.

6.3 COMPORTAMENTO SEXUAL

6.3.1 Avaliação do Comportamento Sexual Antes do Tratamento

Os resultados da avaliação do comportamento sexual antes do tratamento

são apresentados na TABELA 3.

Nenhuma diferença estatisticamente significativa foi observada entre os

grupos, em relação as variáveis analisadas. Apesar de todos os animais serem

machos sexualmente ativos e experientes nem todos ejacularam. A percentagem de

animais que ejacularam foi de 60% (n=9) para o grupo controle, 71% (n=10) e 69%

(n=9) para os grupos H15 e H 150, respectivamente. O percentual de animais que

ejacularam do grupo H300 foi o menor sendo de 43% (n=6) enquanto o do grupo da

paroxetina foi o maior de 87% (n=13).

TABELA 3-AVALIAÇÃO DO COMPORTAMENTO SEXUAL DE RATOS MACHOS

ADULTOS SEXUALMENTE EXPERIENTES ANTES DO TRATAMENTO

Hypericum perforatum (mg/kg)

VARIÁVEIS CONTROLE

(salina)

15 150 300

PAROXETINA

10 mg/kg

Número de animais por grupo

Número de animais que ejacularam

Latência de monta (seg) 37,0 ± 5,19 29,6 ± 5,77 33,0 ± 5,24 27,6±4,82 27,9 ± 5,15

Latência de penetração (seg) 43,0 ± 5,38 33,1 ± 7,76 34,8 ± 5,02 30,2 ± 4,64 31,6 ± 6,42

Latência de ejaculação (min.) 14,4 ± 2,03 17,3 ± 2,47 16,3 ± 2,78 15,7 ± 3,01 14,0 ± 1,45

Latência de pós-ejaculação (min.) 3,54 ± 0,207 (a) 4,17± 0,380 (b) 3,86 ± 0,396 (a) 4,02± 0,327 4,23 ± 0,319

Número de penetrações

até a ejaculação

29,9 ± 3,16

37,6 ± 5,87

32,4 ± 5,23

36,3 ± 7,32

28,3 ± 3,71

Número de penetrações totais 43,9 ± 4,02 47,2 ± 5,50 41,4 ± 5,31 45,7 ± 4,59 45,5 ± 3,37

Notas: Os resultados expressam média ± erro padrão. (seg) = segundos, (min) = minutos

(a) = 8 animais /grupo; (b) = 9 animais /grupo

O número de animais dos grupos H15 e H150 foram menores para o

parâmetro latência de pós-ejaculação porque alguns animais após a ejaculação não

retornaram ao comportamento sexual dentro dos trinta minutos de filmagem.

6.3.2 Avaliação do Comportamento Sexual Depois do Tratamento

Os resultados da avaliação do comportamento sexual depois do tratamento

são apresentados na TABELA 4.

A percentagem de animais que ejacularam foi de 80% (n=12) para o grupo

controle e 71% (n=10) para os grupos H15 e H300. Os menores percentuais de

animais que ejacularam foram de 54% (n=7) para o grupo H150 e 64% (n=9) para

grupo da paroxetina. Dessa forma, após o tratamento os grupos controle e H300

apresentaram um aumento no percentual de animais que ejacularam enquanto, os

grupos H150 e paroxetina apresentaram uma redução. Entretanto, essas diferenças

não são estatisticamente significativas (GRÁFICO 3).

GRÁFICO 3-NÚMERO DE ANIMAIS QUE EJACULARAM APÓS O TRATAMENTO

Notas: n= número de animais por grupo.

Os resultados expressam percentagem de animais que ejacularam

p<0,05)-teste qui quadrado

sim não

controle (n=15)

Hypericum perforatum 15 mg/kg (n=14)

Hypericum perforatum 150 mg/kg (n=13)

Hypericum perforatum 300 mg/kg (n=14)

Paroxetina 10 mg/kg (n=15)

Ejaculação

Nº de animais

80%

71% 71%

54%

64%

TABELA 4-AVALIAÇÃO DO COMPORTAMENTO SEXUAL DE RATOS MACHOS

ADULTOS SEXUALMENTE EXPERIENTES DEPOIS DO TRATAMENTO

Hypericum perforatum (mg/kg)

VARIÁVEIS CONTROLE

(salina)

15 150 300

PAROXETINA

10 mg/kg

Número de animais por grupo

Número de animais que ejacularam

Latência de monta (s.) 12,3 ± 2,59 7,21 ± 1,07 20,8 ± 4,72 14,9 ± 2,98 17,4 ± 4,13

Latência de penetração (s.) 14,3 ± 3,43 10,5 ± 3,36 24,6 ± 6,56 15,4 ± 3,11 19,9 ± 4,35

Latência de ejaculação (min.) 16,4 ± 1,95 12,36 ± 1,05 14,5 ± 2,61 15,5 ± 1,23 18,5 ± 2,11

Latência de pós-ejaculação (min.) 4,42 ± 0,256 (a) 3,92 ± 0,279 4,30 ± 0,443 (b) 4,74 ± 0,256 4,01 ± 0,137(c)

Número de penetrações

até a ejaculação

29,1 ± 3,11

25,7 ± 2,40

29,7 ± 2,54

30,8 ± 4,32

38,1 ± 4,02

Número de penetrações totais 42,4 ± 3,54 42,3 ± 3,96 38,2 ± 4,21 47,4 ± 5,50 43,1 ± 3,60

Notas: Os resultados expressam média ± erro padrão. (seg) = segundos, (min) = minutos

(a) = 10 animais/grupo; (b) = 6 animais/grupo; (c) = 8 animais /grupo

Em relação à latência de monta, nenhum grupo tratado diferiu de forma

estatisticamente significativa em relação ao grupo controle, apesar dos animais

tratados com a dose intermediária de Hypericum perforatum (150 mg/kg) e com

paroxetina apresentarem um aumento neste parâmetro e o grupo H15 apresentar

uma redução (GRÁFICO 4).

Com relação à latência de penetração, os animais tratados com Hypericum

perforatum e paroxetina também não apresentaram diferença estatisticamente

significativa quando comparado ao grupo controle. Da mesma forma que a latência

de monta, os animais tratados com a dose de 150 mg/kg de Hypericum perforatum e

com paroxetina apresentaram uma maior latência de penetração em relação ao

grupo controle, mas essa diferença não foi estatisticamente significativa (GRÁFICO

5). Para os dois parâmetros analisados o grupo da paroxetina apresentou um

número de animais menor (n=14) porque houve falhas durante as filmagens.

GRÁFICO 4-LATÊNCIA DE MONTA DE ANIMAIS TRATADOS POR 90 DIAS

Controle 15 150 300 Paroxetina

n=15

n=14

n=13

n=14

Hypericum perforatum (mg/kg) 10mg/kg

Latência de monta (seg)

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via. A faixa cinza representa o intervalo de confiança (média ± dois erros

padrões da média) da latência de monta de ratos machos tratados com veículo (salina)

GRÁFICO 5-LATÊNCIA DE PENETRAÇÃO DE ANIMAIS TRATADOS POR 90 DIAS

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via. A faixa cinza representa o intervalo de confiança (média ± dois erros

padrões da média) da latência de penetração de ratos machos tratados com veículo (salina)

Controle 15 150 300 Paroxetina

n=15

n=14

n=13

n=14

Hypericum perforatum (mg/kg)10mg/kg

Latência de penetração

(seg)

Não foi observada diferença estatisticamente significativa na latência de

ejaculação entre os grupos tratados com Hypericum perforatum e o grupo controle.

Apesar de não ter havido diferença estatística, os animais tratados com paroxetina

apresentaram uma latência de ejaculação maior que a do grupo controle e os

animais tratados com as doses de 15 e 150 mg/kg de Hypericum perforatum

apresentaram uma redução neste parâmetro (GRÁFICO 6).

GRÁFICO 6-LATÊNCIA DE EJACULAÇÃO DE ANIMAIS TRATADOS POR 90 DIAS

Controle 15 150 300 Paroxetina

n=12

n=10

n=7

n=10

n=9

Hypericum perforatum (mg/kg)10 mg/kg

Latência de ejaculação

(min)

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via. A faixa cinza representa o intervalo de confiança (média ± dois erros

padrões da média) da latência de ejaculação de ratos machos tratados com veículo (salina)

A latência de pós-ejaculação dos grupos tratados com Hypericum perforatum

e paroxetina não foi estatisticamente significativa em relação ao grupo controle

(GRÁFICO 7).

Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos tratados com

Hypericum perforatum e o grupo controle quanto ao número de penetrações até a

ejaculação e número de penetrações totais (GRÁFICOS 8 e 9).

Os animais tratados com paroxetina apresentaram maior número de

penetrações até a ejaculação, entretanto, esse valor não diferiu significativamente

dos animais o grupo controle.

GRÁFICO 7-LATÊNCIA DE PÓS-EJACULAÇÃO DE ANIMAIS TRATADOS POR 90

DIAS

Controle 15 150 300 Paroxetina

n=10

n=6

n=10

n=7

Hypericum perforatum (mg/kg)

10mg/kg

Latência de

pós-ejaculação (min)

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via. A faixa cinza representa o intervalo de confiança (média ± dois erros

padrões da média) da latência de pós-ejaculação de ratos machos tratados com veículo

(salina)

GRÁFICO 8-NÚMERO DE PENETRAÇÕES ATÉ A EJACULAÇÃO

Controle 15 150 300 Paroxetina

n=12

n=10

n=7

n=10

n=9

Hypericum perforatum (mg/kg) 10mg/kg

Número de penetrações

p=0,0864

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via. A faixa cinza representa o intervalo de confiança (média ± dois erros

padrões da média) de ratos machos tratados com veículo (salina)

GRÁFICO 9-NÚMERO DE PENETRAÇÕES TOTAIS DE ANIMAIS TRATADOS POR

90 DIAS

Controle 15 150 300 Paroxetina

n=14 n=14

n=13

n=14

Hypericum perforatum (mg/kg) 10mg/kg

Número de penetrações

totais

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de uma via. A faixa cinza representa o intervalo de confiança (média ± dois erros

padrões da média) de ratos machos tratados com veículo (salina)

6.4 AVALIAÇÃO DA CONTAGEM ESPERMÁTICA

A produção de espermátides diária apresentou um decréscimo nos animais

expostos a maior dose de Hypericum perforatum e a paroxetina, entretanto, esses

valores não apresentaram diferenças estatisticamente significativas em relação ao

grupo controle, da mesma forma que outros grupos.

O número de espermatozóides encontrado na cauda do epidídimo também foi

menor para os animais tratados com Hypericum perforatum e paroxetina, mas,

esses valores também não diferiram do grupo controle significativamente.

Na TABELA 5 encontram-se as médias referentes à avaliação espermática

dos animais.

TABELA 5-AVALIAÇÃO ESPERMÁTICA EM ANIMAIS EXPOSTOS AO Hypericum

perforatum E A PAROXETINA POR 90 DIAS

Hypericum perforatum (mg/kg)

VARIÁVEIS CONTROLE

(salina)

15 150 300

PAROXETINA

10 mg/kg

Número de animais por grupo

15 14 13 14 15

Produção espermática diária

(x 10

/testículo)

58,3 ± 5,34 58,2 ± 4,28 55,8 ± 4,15 52,6 ± 5,03 51,2 ± 4,27

Produção espermática diária

(x 10

/g/testículo)

14,4 ± 1,30 14,7 ± 1,15 13,9 ± 1,10 13,1 ± 1,30 12,9 ± 1,15

Número de espermatozóides

(x 10

)

1146 ± 89,4 969 ± 77,9 1072 ± 46,5 1042 ± 69,0 960 ± 44,4

(p=0,0717)

Notas: Os resultados expressam média ± erro padrão

6.5 DOSAGEM HORMONAL

Analisando a variação dos níveis hormonais de testosterona ao longo do

tratamento, observamos que não houve diferença estatisticamente significativa entre

os grupos tratados com Hypericum perforatum ou paroxetina e o grupo controle

(GRÁFICO 10).

A única diferença significativa ocorreu entre os níveis hormonais dos animais

do grupo da paroxetina, que apresentaram uma redução desses níveis ao final do

tratamento (GRÁFICO 11).

GRÁFICO 10-DOSAGEM HORMONAL DE ANDROGÊNIOS EM FEZES DE ANIMAIS

TRATADOS 90 DIAS

0 30 60 90

Controle (n=6)

Hypericum 15 mg/kg (N=6)

Hypericum 150 mg/kg (N=6)

Hypericum 300 mg/kg (N=6)

Paroxetina 10 mg/kg (N=6)

Nivel hormonal de

testosterona (ng/grama

de fezes)

Dias

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

ANOVA de duas vias

GRÁFICO 11-VARIAÇÃO HORMONAL DE ANDROGÊNIOS EM ANIMAIS TRATADOS

COM PAROXETINA POR 90 DIAS

Notas: n= número de animais por grupo. Os resultados expressam média ± erro padrão

(p<0,05)- ANOVA de uma via seguido do teste de Tukey

* Significativamente diferente do grupo paroxetina no início do tratamento

0 30 60 90

Paroxetina 10 mg/kg

Tempo (dias)

Dosagem de

testosterona (ng/grama

de fezes)

Na TABELA 6 encontram-se as médias referentes à avaliação dos níveis

hormonais de androgênios em períodos diferentes.

TABELA 6-DOSAGEM HORMONAL DE ANDROGÊNIOS EM FEZES DE ANIMAIS

EXPOSTOS POR 90 DIAS

Hypericum perforatum (mg/kg)

VARIÁVEIS CONTROLE

(salina)

15 150 300

PAROXETINA

10 mg/kg

Número de animais

por grupo

6 6 6 6 6

Tempo

Início do tratamento

10,6 ± 0,467 11,3 ± 1,20 12,8 ± 1,31 13,9 ± 1,73 12,2 ± 1,02

30 dias de tratamento

9,55 ± 1,05 8,85 ± 0,399 10,2 ± 0,360 10,3 ± 0,701 9,43 ± 0,566

60 dias de tratamento 8,90 ± 0,611 8,93 ± 0,645 8,98 ± 0,725 10,9 ± 1,23 10,8 ± 1,47

90 dias de tratamento 9,87 ± 0,733 8,16 ± 0,786 11,6 ± 1,01 10,8 ± 1,06 7,97 ± 0,659

Notas: Os resultados expressam média ± erro padrão

7 DISCUSSÃO

A toxicidade reprodutiva pode ser definida como a ocorrência de efeitos

adversos no sistema reprodutivo que pode resultar da exposição a vários fatores

incluindo agentes ambientais, medicamentos, doenças em geral, ou seja, qualquer

fator que altere a função reprodutiva normal.

Para a avaliação do risco de uma substância sobre o sistema reprodutor o

mais indicado é a utilização de informações derivadas de estudos em humanos. No

entanto, na ausência destas, o conhecimento dos mecanismos que controlam a

reprodução assim como os riscos reprodutivos oferecidos por algumas substâncias

vêm do uso de dados de experimentação animal. Vários agentes têm sido

demonstrados causarem toxicidade reprodutiva tanto em humanos quanto em

animais de laboratório.

O Hypericum perforatum é um fitoterápico que vem sendo comercializado há

muitos anos. De fato, nas últimas décadas, vários extratos padronizados têm sido

aprovados na Alemanha e, em outras partes da Europa, para o tratamento de

depressão leve a moderada. Assim como na Europa, nos Estados Unidos as

preparações de Hypericum perforatum L também são vendidas livremente com

regulamentações mínimas pela Food and Drug Administration (FDA) (BILIA et al.,

2002).

No Brasil, o Hypericum perforatum está classificado entre as dez plantas que

apresentaram um aumento significativo no volume de vendas entres os anos de

1999 e 2002. Entretanto, existem poucos dados sobre a toxicidade pré-clínica desta

planta. As principais informações referem-se a fototoxicidade e experimentos em

animais revelam baixa toxicidade aguda, subaguda e crônica, bem como não

demonstram atividade mutagênica ou teratogênica para essa planta (TUROLLA &

NASCIMENTO, 2006).

Dessa forma, pela planta ser muito utilizada para o tratamento de depressão

e pela falta de estudos relacionando a planta Hypericum perforatum com a função

reprodutiva, nós utilizamos ratos machos Wistar para avaliar os efeitos desta planta

sobre vários parâmetros reprodutivos.

Durante todo o tratamento, o peso corporal dos animais foi monitorado para

coletar dados sobre a saúde desses animais e assim, obter informações que possam

ser importantes para a interpretação dos efeitos reprodutivos (EPA, 1996). Nos

primeiros 10 dias de tratamento os animais que foram tratados com paroxetina

apresentaram uma redução no ganho de massa corporal. No início do experimento,

a dose utilizada de paroxetina foi de 20 mg/kg. Uma provável explicação para

redução do ganho de massa foi aparecimento de sintomas “maníacos” decorrentes

da dose utilizada deste medicamento, os quais diminuíram quando a dose do

antidepressivo foi reduzida pela metade. Todos os outros animais mantiveram um

ganho de massa corporal constante durante todo o tratamento e não apresentaram

sinais de toxicidade, concluindo que a planta Hypericum perforatum não provocou

toxicidade geral durante os 90 dias de tratamento.

Além da massa corporal, vários órgãos também foram pesados sendo útil

também, para a avaliação da possível toxicidade do tratamento. A massa dos órgãos

pode ser apresentada como massa absoluta e massa relativa. Mudanças

significativas nesses parâmetros podem constituir um efeito adverso. A avaliação da

massa absoluta de um órgão é importante porque uma diminuição pode ocorrer sem,

necessariamente, estar relacionada com a redução da massa corporal (EPA, 1996).

Com relação aos órgãos reprodutivos que foram pesados (testículos,

epidídimos, vesícula seminal, próstata), não houveram alterações estatisticamente

significativas das massas desses órgãos quando comparado os grupos tratados com

o grupo controle. Os outros órgãos que também foram pesados (rins, adrenais,

fígado e encéfalo) e também não apresentaram alterações nas massas absoluta e

relativa. Isso indica que tanto a paroxetina quanto a planta Hypericum perforatum

não provocaram toxicidade reprodutiva relacionada aos órgãos sexuais nem

toxicidade, principalmente, aos órgãos metabolizadores.

Uma outra forma que avalia a toxicidade reprodutiva de uma substancia é

através dos testes de comportamento sexual. O comportamento sexual monitorado é

um ponto de avaliação e por ser um fenômeno complexo que envolve vários

sistemas, e qualquer alteração em algum dos parâmetros avaliados durante o teste

de comportamento sexual pode ser considerada como um efeito reprodutivo adverso

(CHAHOUD & FAQI, 1998).

Medicamentos psiquiátricos, como os antidepressivos, promovem disfunção

sexual por atuar no sistema nervoso central e periférico, em regiões específicas,

alterando a transmissão de neurotransmissores, os quais estão envolvidos com a

regulação da função sexual de homens e mulheres (HENDRICH et al., 2000).

Inúmeros trabalhos demonstram que os antidepressivos inibidores seletivos

da recaptação de serotonina, os quais são os principais medicamentos promotores

de disfunção sexual em humanos, também promovem disfunção sexual em

experimentos com animais (KENNEDY et al., 1999). Assim, avaliar o efeito desses

medicamentos na função sexual desses animais pode ajudar a identificar

substâncias nocivas a reprodução humana.

De acordo com Jong et al. (2005), o tratamento subcrônico de 22 dias com

paroxetina, na dose de 10 ou 20 mg/kg, afetou o comportamento sexual de ratos

machos Wistar sexualmente experientes. A paroxetina significativamente inibiu ou

promoveu um retardo na ejaculação desses animais quando comparado ao grupo

controle. Da mesma forma, em um outro trabalho realizado por Waldinger et al.,

(2002), ratos machos Wistar foram tratados com paroxetina, na dose de 10 mg/kg,

por um período de 15 dias e o comportamento sexual foi analisado no dia 7 e 14 de

tratamento. Os animais também apresentaram diminuição do comportamento sexual,

incluindo inibição da ejaculação, nos dois dias de análise da função sexual.

Neste trabalho, os animais tratados com paroxetina, na dose de 10 mg/kg,

apresentaram um aumento no número de penetrações até a ejaculação e na latência

de ejaculação quando comparado com o grupo controle, entretanto, essas

diferenças não foram estatisticamente significativas.

Os fármacos ISRS são conhecidos por serem os principais antidepressivos

causadores de retardo de ejaculação em homens (GIULIANO, 2006). A ejaculação é

um processo complexo que envolve um grande número de neurotransmissores

dentre eles serotonina, dopamina, óxido nítrico, adrenalina e acetilcolina. Todavia, a

inervação serotoninérgica tem papel central neste controle (GIULIANO & CLÉMENT,

2005).

A distribuição dos neurônios que contêm serotonina é muito disseminada.

Estas células formas vários agrupamentos na região da ponte e do bulbo e são

freqüentemente denominados núcleos da Rafe (RANG, 2006).

A ejaculação é um processo coordenado e integrativo, que envolve várias

estruturas cerebrais. Ela é mediada pelo circuito gerador ejaculatório espinhal, o qual

está localizado na região lombar da medula espinhal e integra os impulsos

sensoriais genitais com os impulsos motores e autônomos (GIULIANO, 2006).

O neurotransmissor serotonina, através de impulsos descendentes cerebrais,

exerce efeitos inibitórios na ejaculação. Três subtipos de receptores parecem estar

envolvidos nessa modulação (GIULIANO & CLÉMENT, 2005). A serotonina é

liberada, no momento da ejaculação, na área hipotalâmica anterior lateral diminuindo

a motivação sexual e promovendo a quiescência sexual. O período da liberação de

serotonina está relacionado ao período refratário, o qual no homem impossibilita

uma nova fase de excitação sexual, mesmo na presença de um novo estímulo

(HULL et al., 2004).

A transmissão dos neurônios serotoninérgicos, no sistema nervoso central, é

regulada por mecanismos de autorreceptores inibitórios (5-HT1) nas membranas

pré-sinápticas e também, pela presença de proteínas transportadoras que fazem a

recaptação de serotonina nesses neurônios (GIULIANO, 2006). Os inibidores

seletivos da recaptação de serotonina bloqueiam as proteínas transportadoras

levando a um aumento dos níveis de serotonina na fenda sináptica e,

conseqüentemente, ativam os autorreceptores 5-HT1. A ativação desses receptores

diminui o número de disparos dos neurônios serotoninérgicos e conseqüentemente

diminuem a liberação de serotonina (WALDINGER, 2005).

Com a administração crônica desses medicamentos ocorrem adaptações que

são relevantes para o aparecimento dos efeitos adversos sexuais. O bloqueio

contínuo das proteínas transportadoras resulta em persistente aumento dos níveis

de serotonina na fenda sináptica, levando a dessensibiliação dos autorreceptores de

serotonina em poucas semanas de tratamento e, assim, redução da inibição na

liberação de serotonina. Dessa forma, o tratamento diário com esses medicamentos

leva a uma elevada estimulação de receptores pós-sinápticos do tipo 5-HT2,

principalmente 5-HT2

e, conseqüente, enfraquecimento da ejaculação após uma ou

duas semanas de uso contínuo (WALDINGER, 2005).

Há poucos trabalhos que demonstram o papel dos receptores 5-HT2

ejaculação. Sabe-se que a administração de agonistas desses receptores suprimem

a ejaculação em ratos e, tem se postulado que a hipoatividade desses receptores

possa, em parte, esclarecer a etiologia da ejaculação precose (GIULIANO, 2006).

Todavia, o efeito inibitório destes fármacos no comportamento ejaculatório

apesar de ser muito mais evidente quando administrado cronicamente pode ser

alterado, em longo prazo, através de mudanças adaptativas celulares/moleculares

no sistema serotoninérgico, ou outros, os quais podem explicar os diferentes efeitos

entre os tratamentos (GIULIANO & CLEMENT, 2006).

Os animais tratados com paroxetina neste experimento não apresentaram

uma alteração significativa no comportamento ejaculatório talvez por adaptações

ocorridas nos sistemas que controlam a ejaculação ou, até mesmo, pela grande

variabilidade nos parâmetros comportamentais que esses animais apresentaram.

Seria necessário fazer a avaliação das alterações ocorridas no encéfalo desses

animais, principalmente no circuito serotoninérgico.

Além de provocarem retardo de orgasmo, os inibidores seletivos da

recaptação de serotonina também são conhecidos por causarem diminuição da

libido e disfunção erétil, alterações que também não foram observadas neste

experimento.

Os neurônios dopaminérgicos formam três sistemas principais. Cerca de 75%

da dopamina no cérebro ocorrem na via nigro-estriatal, cujos corpos celulares se

situam na substância negra e os axônios terminam no corpo estriado. O segundo

sistema é a via mesolímbica-cortical, com fibras que se projetam para partes do

sistema límbico, particularmente, o núcleo acumbente e o núcleo amigdalóide. Por

fim, o sistema túbero-hipofisário é um grupo de neurônios curtos que seguem seu

trajeto do núcleo arqueado do hipotálamo para a eminência mediana e hipófise,

cujas secreções são reguladas (RANG, 2001).

A dopamina é liberada antes e durante o ato sexual. Na região nigroestriatal

ela influência a atividade motora relacionada ao ato sexual; na região mesolímbica

ela contribui para a motivação sexual e, na área pré-optica medial ela controla os

todos os reflexos genitais e, também, a motivação sexual. A dopamina liberada

auxilia os mecanismos reflexos genitais facilitando a ereção e promovendo a

ejaculação, por atuarem, principamente, em receptores D1 e D2 (HULL et al., 2004).

Acredita-se que diminuição do interesse sexual que ocorre com esta classe

de medicamentos seja devido a uma redução na liberação de dopamina no núcleo

acumbente, uma região importante mesolímbica, pelos altos níveis de serotonina

(HULL et al., 2004).

Já em relação à ereção peniana, esta ocorre somente com o relaxamento

das fibras musculares lisas do tecido erétil e com a dilatação das artérias penianas.

Ambos os eventos são controlados por vários neurotransmissores dentre eles

noradrenalina, dopamina e serotonina. Durante o ato sexual, a transmissão

dopaminérgica aumenta e esta mudança em várias regiões cerebrais, especialmente

no núcleo hipotalâmico paraventricular, pode ser necessária para uma série de

respostas motoras incluindo a ereção peniana (GIULIANO & RAMPIN, 2000). Nessa

região os neurônios que liberam ocitocina são de grande importância (OLIVIER et

al., 2007).

A serotonina também parece ser um neurotransmissor capaz de provocar

ereção peniana. Agonistas de receptores 5-HT2 são capazes de induzir ereção

peniana em ratos e camundongos enquanto, agonistas 5-HT1 provocam bloqueio da

ereção. Outro neurotransmissor envolvido seria o GABA, o qual teria um efeito

inibitório sobre as aferências periféricas assim, inibindo a ereção peniana. Em

conclusão, vários neurotransmissores estão envolvidos na regulação peniana

(GIULIANO & RAMPIN, 2000) e, a desregulação desses sistemas pode provocar

disfunção erétil.

O outro medicamento antidepressivo utilizado no experimento Hypericum

perforatum, o qual foi administrado nas doses de 15, 150 e 300 mg/kg, também não

alterou de maneira estatisticamente significativa o comportamento sexual dos

animais tratados por um período crônico. Os relatos clínicos demonstram que a

planta Hypericum perforatum pode provocar alteração sexual por provocar disfunção

erétil e retardo de orgasmo, o que não foi observado.

O mecanismo de ação antidepressiva do extrato de Hypericum perforatum

ainda não é totalmente estabelecido já que o extrato é uma complexa mistura de

compostos que exercem seus efeitos terapêuticos por uma variedade de

mecanismos diferentes (Hippius, 1998). O que atualmente se conhece é que um

composto presente no extrato, a hiperforina seria a responsável pela ação

antidepressiva desse medicamento. Alguns estudos demonstraram que este

composto, com apenas uma única dose de 300 mg/kg de extrato, inibiu a recaptacão

de vários neurortransmissores. O mecanismo de ação do extrato de Hypericum

perforatum é único, sendo ele o único antidepressivo capaz de inibir a recaptacão

de serotonina, dopamina e noradrenalina com similar potência além de, inibir,

também, a recaptacão de GABA e glutamato (SCHULTE-LOBBERT et al., 2004).

O tratamento crônico com extratos de Hypericum perforatum produz, ao longo

do tratamento, mudanças adaptativas em alguns tipos de receptores como uma

menor densidade de β-receptores e um significativo aumento na densidade de

receptores pós-sinápticos 5-HT2 e receptores 5-HT1 (CHATTERJEE et al., 1998).

Vários estudos clínicos demonstram que a quantidade de hiperforina interfere

com a ação antidepressiva do extrato. Pela sua não especificidade de inibição da

recaptacão de neurotransmissores, a hiperforina medeia seu efeito antidepressivo

por um mecanismo diferente da ação de outros agentes antidepressivos. O

mecanismo é provavelmente não associado com locais de ligações específicos nas

diferentes moléculas transportadoras, mas sim, mecanismos que envolvam a

atividade de transporte de neurotransmissores em geral (DI CARLO et al, 2001).

Todas as proteínas transportadoras são propulsionadas por um gradiente de

íons sódio. Condições que diminuem o gradiente de íons sódio da membrana

neuronal, seja por diminuição de sódio extracelular ou por elevação intracelular de

sódio, são conhecidas por inibir o transporte de neurotransmissores. A hiperforina

aumenta a concentração intracelular de sódio, um efeito que pode ser devido à

ativação da bomba Na

-H

, a qual leva a um aumento na captação de íons sódio

para o interior da célula e/ou o bloqueio de canais de sódio, o qual reduz a expulsão

de sódio da célula. Apesar da ação no mecanismo de recaptacão de

neurotransmisores pela hiperforina representar o principal mecanismo de ação pelo

qual os extratos de Hipericum perforatum promovem atividade antidepressiva, outras

ações podem contribuir para sua eficácia clínica (DI CARLO et al, 2001).

Dessa forma, os resultados obtidos neste experimento em relação as

variáveis reprodutivas de comportamento sexual utilizando um extrato de Hypericum

perforatum podem ser o resultado de mecanismos compensatórios devido a grande

variedade de ações que o extrato Hypericum perforatum promove na

neurotransmissão de diversas substâncias no cérebro. Um outro fator a ser

analisado é que quantidade real de hiperforina no extrato, utilizado neste

experimento, não foi conhecida, o que não se pode saber da verdadeira atividade

desse extrato sobre a neurotransmissão central de algumas substancias.

Além disso, Thomas et al., (2007) demonstraram que um extrato de

Hypericum perforatum enriquecido de hiperforina foi capaz de reduzir os efeitos de

8-OH-DPAT (agonista 5-HT1), o qual acelera a ejaculação. Sugeriu-se que sua

atividade seja devido a sua ação no centro gerador ejaculatório espinhal ou

diretamente nos neurônios que inervam o músculo bulbocavernoso. As

concentrações utilizadas de hiperforina variaram de 5 a 80 mg/kg, o que

corresponde a 0,5 e 8,8% do extrato, respectivamente.

Outro parâmetro reprodutivo analisado foi à avaliação da produção

espermática (EPA, 1996). Para as avaliações espermáticas são utilizadas

principalmente amostras de testículos e da cauda do epidídimo. Nas amostras

testiculares foi analisado o número de espermátides enquanto nos epidídimos

analisamos o número de espermatozóides maduros.

A infertilidade masculina pode resultar de uma variedade de condições

incluindo fatores endócrinos, anatômicos, genéticos e ambientais. Na maioria dos

casos de infertilidade há a presença de espermatozóides no sêmen, entretanto, em

pequenas quantidades ou com morfologia anormal. Oligospermia, ou pequena

quantidade de espermatozóides, pode variar de leve (concentração espermática de

5 a 20 milhões/ml) a severa (abaixo de 1 milhão/ml) e teratospermia que refere-se a

espermatozóides com morfologia anormal em mais de 85% da amostra analisada ,

todas as análises realizadas em humanos (HENDRICK, 2000).

Poucos estudos têm avaliado a relação entre o uso de medicamentos

antidepressivos e fertilidade masculina. Estudos in vitro têm demonstrado que os

medicamentos imipramina, desmetilimipramina e nortriptilina promovem inibição

dose-dependente da motilidade espermática (LEVIN et al., 1981). Amostras obtidas

de pacientes tratados com clomipramina também foram anormais incluindo redução

no volume e na motilidade espermática (MAIER & KOINING, 1994).

Em estudos de relatos clínicos, a análise espermática de pacientes que

estavam sendo medicados com inibidores seletivos da recaptação de serotonina,

apresentou oligospermia, enfraquecimento da motilidade e morfologia anormal

nesses pacientes. Repetidas análises realizadas após dois meses de interrupção do

tratamento ainda demonstravam diminuição da concentração espermática

(TANRIKUT & SCHLEGEL, 2007).

Neste experimento, o número de espermátides e espermatozóides nos

animais tratados com paroxetina foi menor quando comparado com o grupo controle,

entretanto, essas diferenças não foram estatisticamente significativas. Essa redução

pode estar relacionada à diminuição dos níveis de testosterona encontrada nesses

animais ao final do tratamento. A testosterona é o principal hormônio que regula o

processo de espermatogênese. O tratamento crônico com substâncias que alterem

os níveis de testosterona, seja por alterar sua síntese ou metabolização, prejudicam

o processo de espermatogênese.

O mecanismo pelo qual os antidepressivos podem causar alterações na

função espermática resulta, principalmente, de fatores neuroendócrinos.

Medicamentos serotoninérgicos, como os inibidores seletivos da recaptacão de

serotonina aumentam os níveis de prolactina por inibirem a liberação de dopamina.

A prolactina, por sua vez, pode alterar a função espermática através da supressão

da liberação dos dois hormônios hipotalâmicos, o hormônio luteinizante e o hormônio

folículo estimulante. Estes por sua vez alteram a liberação de testosterona e

desregulam o processo de espermatogênese (HENDRICK, 2000).

Por último, nós avaliamos se os fármacos antidepressivos testados

alteravam os níveis hormonais de androgênios. Os hormônios esteróides, nos

homens em especial a testosterona, regulam o comportamento sexual,

principalmente, por intensificar a resposta do organismo a relevantes estímulos

sexuais. Para isso, alteram a síntese, a liberação e/ou os receptores para diversos

neurotransmissores em diferentes áreas cerebrais (HULL et al., 1999).

Os medicamentos antidepressivos podem também influenciar os níveis de

hormônios esteróides por alterar o metabolismo destes ou por afetar o eixo

hipotálamo-hipófise-gônodas em muitos níveis e, dessa forma, influenciar a liberação

hormonal (HENDRICH et al., 2000).

Neste trabalho nós observamos que nenhum dos fármacos antidepressivos

utilizados foi capaz de alterar de maneira estatisticamente significativa os níveis

hormonais de testosterona, medidos das fezes dos animais, durante os 90 dias de

tratamento. Somente os animais que receberam paroxetina apresentaram uma

redução dos níveis hormonais ao final do tratamento quando comparado ao início do

tratamento.

Rehavi et al., (2000) analisaram o impacto da administração por três semanas

de inibidores da recaptação de dopamina e de serotonina nos níveis plasmáticos de

hormônios esteróides, em ratos machos e fêmeas. Ambos os inibidores diminuíram

os níveis de estradiol e progesterona em ratas fêmeas e o bloqueio do transporte de

dopamina suprimiu os níveis de testosterona nos machos, enquanto os inibidores da

recaptação de serotonina induziram somente uma redução não significativa deste

hormônio.

A produção e a liberação de testosterona dependem do hormônio luteinizante,

secretado pela hipófise. A secreção de LH depende do equilíbrio entre o hipotálamo,

hipófise e gônodas, através da ação de vários neurotransmissores. O papel exato da

serotonina na secreção deste hormônio ainda permanece incerto, entretanto, vários

estudos demonstram que diferentes circuitos serotoninérgicos podem mediar efeitos

opostos na secreção de LH. Aparentemente, a dopamina parece ter um efeito

inibitório ou estimulatório na liberação de LH, dependendo das circunstâncias. A

elevação dos níveis de dopamina na fenda sináptica induzida por bloqueio das

proteínas transportadoras de recaptação inibem a liberação do GnRH. A redução do

hormônio hipotalâmico leva a uma diminuição do nível de hormônio testosterona

(REHAVI et al. 2000).

Dessa forma, nenhum dos animais tratados com os medicamentos estudados,

paroxetina e Hypericum perforatum, apresentaram alterações significativas nos

parâmetros reprodutivos avaliados neste experimento.

8 CONCLUSÃO

Neste trabalho foram avaliados os efeitos do tratamento, por 90 dias, de

Hypericum perforatum e paroxetina sobre o sistema reprodutor de ratos machos

Wistar, através de vários parâmetros reprodutivos. Dessa forma concluímos:

 Ambos os medicamentos não alteraram o comportamento sexual dos animais

em nenhum parâmetro analisado.

 A planta Hypericum perforatum e o antidepressivo sintético paroxetina não

provocaram toxicidade nos animais durante o tratamento nem nos órgãos

relacionados com a reprodução e metabolização.

 A contagem espermática e a produção espermática diária dos animais

tratados não foram diferentes dos animais tratados somente com salina

(grupo controle).

 Os fármacos também não induziram alterações nos níveis hormonais de

testosterona durante o período de tratamento.

Assim, concluímos que o extrato de Hypericum perforatum e o fármaco

paroxetina não foram tóxicos para os animais tratados por um período crônico,

entretanto, devem ser feitos novos experimentos para a avaliação das estruturas

cerebrais envolvidas com a função reprodutiva e também, testes de comportamento

sexual durante o tratamento para avaliar a função reprodutiva em outros períodos.

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