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Adriana Maria Kakehasi
GASTRITE AUTO-IMUNE E GASTRITE ASSOCIADA À INFECÇÃO PELO
HELICOBACTER PYLORI – ESTUDO HISTOLÓGICO E IMUNO-HISTOQUÍMICO
DA MUCOSA GÁSTRICA OXÍNTICA E CORRELAÇÃO COM A DENSIDADE
MINERAL ÓSSEA
Universidade Federal de Minas Gerais
2008
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2
Adriana Maria Kakehasi
GASTRITE AUTO-IMUNE E GASTRITE ASSOCIADA À INFECÇÃO PELO
HELICOBACTER PYLORI – ESTUDO HISTOLÓGICO E IMUNO-HISTOQUÍMICO
DA MUCOSA GÁSTRICA OXÍNTICA E CORRELAÇÃO COM A DENSIDADE
MINERAL ÓSSEA
Tese apresentada ao Programa de Pós-
graduação em Medicina, área de concentração
em Gastroenterologia, da Faculdade de
Medicina da UFMG, como requisito parcial à
obtenção do título de Doutor em Medicina.
Orientador: Prof. Alfredo José Afonso Barbosa
Pesquisa realizada no Laboratório de Anatomia Patológica e Medicina Legal (LPDN),
Faculdade de Medicina da UFMG, com a colaboração dos Departamentos de Clínica
Médica e Aparelho Locomotor, e do Instituto Alfa de Gastroenterologia do Hospital das
Clínicas da UFMG.
Belo Horizonte
2008
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3
UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS
REITOR Prof. Dr. Ronaldo Tadêu Pena
VICE-REITORA Prof. Dra. Heloísa Murgel Starling
PRÓ-REITORIA DA PÓS-GRADUAÇÃO
PRÓ-REITOR Prof. Dr. Jaime Arturo Ramírez
FACULDADE DE MEDICINA
DIRETOR Prof. Dr. Francisco José Penna
VICE-DIRETOR Prof. Dr. Tarcizo Afonso Nunes
CENTRO DE PÓS-GRADUAÇÃO
COODENADOR Prof. Dr. Carlos Faria Santos Amaral
CUROS DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GASTROENTEROLOGIA
COLEGIADO
Prof. Dr. Luiz Gonzaga Vaz Coelho - Coordenador
Profª Dra. Cláudia Alves Couto
Profª Dra. Teresa Cristina de Abreu Ferrari
Profª Dra. Luciana Dias Moretzsohn
REPRESENTANTE DISCENTE
Luiz Fernando Veloso
4
AGRADECIMENTOS
Profs. Aloísio Sales da Cunha, Luiz de Paula Castro e Luiz Gonzaga Vaz Coelho pelo
contínuo apoio à nossa linha de pesquisa.
Dras. Cláudia Maria de Castro Mendes e Luciana Dias Moretzsohn pela grande
disponibilidade em contribuir com esse estudo,
Colegas do LPDN - Rodolfo Lisboa, Thiago Lisboa, Helen Viana por todo o
companheirismo, assistência e amizade,
Acadêmica Ariane Vieira Carvalho pela amizade e ajuda incondicional,
Dra. Carolinne Bahia Rodrigues, pela grande ajuda e partilha na pesquisa,
Dra. Fabiana Alves Nunes, pelos mais de 10 anos de amizade e coleguismo,
Sras. Luciana e Luciene do Instituto Alfa, pela pronta e eficiente colaboração com a busca e
coleta de dados,
Sra. Roseli Alves de Oliveira, pela valiosa ajuda pela busca das referências bibliográficas,
Funcionários do Instituto Alfa, do Ambulatório Bias Fortes, do Instituto Hermes Pardini, do
Centro de Pós-graduação, que sempre apresentaram imediata disposição em colaborar com o
desenvolvimento deste estudo.
5
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
A todos os pacientes que em algum momento fizeram parte desta linha de pesquisa; ao longo
desses anos tiveram paciência e prontidão ao percorrer as etapas do estudo. À luz das
condições muitas vezes adversas em que vivemos, mostraram invejável disposição em
colaborar de maneira despretenciosa e anônima para o desenvolvimento da ciência.
Ao professor Alfredo José Afonso Barbosa, por sua dedicação à vida de pesquisador.
Às famílias Kakehasi e Saturnino, pela paciência, amor e dedicação.
6
RESUMO
A gastrite associada ao Helicobacter pylori e a gastrite de origem auto-imune são importantes
causas de atrofia da mucosa gástrica, e têm sido relacionadas a baixa massa óssea e ao
aumento do risco de câncer gástrico. O presente estudo objetiva o estudo histopatológico de
duas formas de gastrite crônica, infecciosa e auto-imune, e a correlação com a densidade
mineral óssea. Pacientes e métodos: Foram estudados 113 pacientes divididos em dois
grupos: (1) 81 pacientes assintomáticos ou dispépticos (76 mulheres), média de idade 62,1 ±
8,4 anos e, (2) 32 pacientes com gastrite auto-imune (27 mulheres), média de idade 54 ± 14,7
anos, submetidos à endoscopia digestiva alta e à densitometria óssea em coluna e fêmur pela
absorciometria com raios-X de dupla energia. Fragmentos da mucosa gástrica foram
submetidos às colorações pela hematoxilina-eosina e à imuno-histoquímica com anticorpos
monoclonais contra células parietais. A atrofia do corpo gástrico foi avaliada pela histologia
segundo a classificação de Sydney em quatro graus: ausente, discreta, moderada e acentuada.
O diagnóstico da infecção pelo Helicobacter pylori foi feito através da histologia, teste da
urease e teste respiratório com carbono marcado (
13
C). Resultados: Para os 113 pacientes
considerados em conjunto, quarenta e nove pacientes apresentaram mucosa oxíntica sem
atrofia, nove apresentaram atrofia discreta, em 14 a atrofia era moderada, e em 41, acentuada.
Nos 81 pacientes do grupo 1, densidade média de células parietais (CP/mm
2
) foi 927 ± 185
para os pacientes sem atrofia, 870 ± 180 para aqueles com atrofia leve, 683 ± 151 nos casos
de atrofia moderada e 379 ± 345 naqueles com atrofia acentuada (p<0,001). Nos pacientes
com gastrite auto-imune a atrofia foi avaliada em moderada em quatro casos e acentuada em
28 casos, sendo que em 22 casos (68,7%) a imuno-histoquímica revelou ausência de células
parietais. A média da densidade mineral óssea (g/cm
2
) na coluna lombar nos pacientes do
grupo 1 foi de 1,011±0,198 e no grupo com gastrite auto-imune foi de 1,065±0,209 (p>0,05).
A média densidade mineral óssea (g/cm
2
) no fêmur dos pacientes no grupo 1 foi de
0,908±0,153, e no grupo com gastrite auto-imune foi de 0,930±0,139 (p>0,05). A prevalência
da infecção pelo H. pylori no grupo 1 e 2 foi de 51,8% (42/81) e 9,3% (3/32),
respectivamente, p<0,001, mas a presença da infecção não se relacionou com alteração na
densidade mineral óssea. Conclusões: Atrofia da mucosa gástrica oxíntica e a presença do H.
pylori, observados em associação aos dois diferentes tipos de gastrite crônica aqui estudados,
não se constituíram como fatores de risco à diminuição da densidade mineral óssea. A imuno-
histoquímica contra células parietais permitiu avaliação objetiva da presença e grau de atrofia
da mucosa oxíntica.
7
ABSTRACT
Background and aims: Helicobacter pylori infection and autoimmune gastritis are important
causes of gastric mucosa atrophy and both have been related to decreased bone mineral
density and to an increased risk for gastric cancer. We studied the histopathological aspects of
two forms of chronic gastritis, associated to Helicobacter pylori and autoimmune gastritis,
and a possible relationship with bone mineral density. Methods: A hundred-thirteen patients
divided in two groups were studied: (1) 81 dyspeptic or asymptomatic patients (76 women),
mean age 62.1 ± 8.4 years and, (2) 32 patients with autoimmune gastritis (27 women), mean
age 54 ± 14.7 years submitted to gastroduodenal endoscopy and bone densitometry by dual
energy X-ray absorciometry. Tissue samples were submitted to hematoxilin-eosin staining for
histopathological study and to immunohistochemistry with antiparietal cell monoclonal
antibodies. Body gastric atrophy was evaluated in four degrees according to the updated
Sydney system: absent, mild, moderate and severe. Helicobacter pylori infection was
evaluated by histology, urease test and
13
C-urea breath test. Results: In the 113 patients,
forty-nine patients presented gastric mucosa without atrophy, nine had mild atrophy, 14 had
moderate atrophy, and in 41 the atrophy was severe In group 1 patients, parietal cell density
(CP/mm
2
) was 927 ± 185 for patients without atrophy, 870 ± 180 for those with mild atrophy,
683 ± 151 for moderate atrophy, and 379 ± 345 for patients with severe atrophy (p<0.001). In
the autoimmune gastritis group gastric mucosa atrophy was moderate in four cases and severe
in 28 cases, and by immunohistochemistry, parietal cells showed to be absent in 22 cases
(68.7%). Mean lumbar spine mineral density (g/cm
2
) was 1.011±0.198 in group 1 and
1.065±0.209 for autoimmune gastritis patients (p>0.05). Mean hip mineral density in group 1
and in autoimmune gastritis group was 0.908±0.153 and 0.930±0.139, respectively (p>0.05).
Helicobacter pylori prevalence was 51.8% (42/81) and 9.3% (3/32), in groups 1 and 2,
respectively, p<0.0001, but bone mineral densities were not different in patients with or
without Helicobacter pylori infection (p>0.05). Conclusions: Gastric mucosa atrophy and the
presence of H. pylori could not be considered risk factors for decreased bone mineral density.
Immunohistochemistry with antiparietal cell monoclonal antibody allowed an objective study
of the presence of gastric mucosa atrophy and identification of its different degrees.
8
SUMÁRIO
1. Introdução 13
2. Histofisiologia da mucosa gástrica 16
3. Gastrite do origem auto-imune 20
4. Gastrite crônica de origem infecciosa 23
5. Atrofia da mucosa gástrica e densidade mineral óssea 27
6. Pacientes e métodos 49
6.1 Pacientes 49
6.2 Avaliação laboratorial 51
6.3 Endoscopia digestiva alta 52
6.4 Avaliação histopatológica da mucosa gástrica 53
6.5 Avaliação da população de células parietais da mucosa gástrica 54
6.6 Avaliação da densidade mineral óssea 55
6.7 Avaliação da infecção pelo Helicobacter pylori 56
7. Análise estatística 56
8. Resultados 56
8.1 Pacientes 56
8.2 Avaliação laboratorial 58
8.3 Endoscopia digestiva alta 61
8.4 Avaliação histopatológica da mucosa gástrica 61
8.5 Avaliação da infecção pelo Helicobacter pylori 64
8.6 Avaliação da população de células parietais da mucosa gástrica 65
8.7 Avaliação da densidade mineral óssea e correlação com gastrite auto-imune e com a
densidade de células parietais 68
9. Discussão 74
10. Conclusões 85
11. Referências bibliográficas 87
12. Anexos 106
12.1 Aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa ETIC 173/00 106
12.2 Aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa ETIC 479/04 106
12.3 Declaração de Aprovação da Defesa da Tese 106
12.4 Ata da Reunião da Defesa da Tese 106
9
LISTA DE ABREVIATURAS
APUD Amine Precursor Uptake and Decarboxilation
α Alfa
CaCO
3
+ 2 HCl → CaCl
2
+ H
2
O + CO
2
CP Células parietais
Células D Células produtoras de somatostatina
Células EC Células enterocromafins
Células ECL Células enterochromaffin-like
Células G Células produtoras de gastrina
DP Desvio-padrão
DII Doença inflamatória intestinal
γ Gama
HE Hematoxilina-Eosina
H. pylori Helicobacter pylori
IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística
IMC Índice de massa corporal
LPDN Laboratório de Patologia Digestiva e Neuroendócrina
M Molar
mm Milímetros
mm
2
Milimetros quadrados
mL Mililitros
mg Miligramas
mg% Miligramas por cento
OMS Organização Mundial de Saúde
PBS-BSA Tampão fosfato com 0,1% de albumina bovina
pg Picogramas
PTH Paratormônio
SAME Serviço de Arquivo Médico
TNF Fator de necrose tumoral
UFMG Universidade Federal de Minas Gerais
VCM Volume corpuscular médio
µm Micrômetro
10
LISTA DE FIGURAS E GRÁFICOS
FIGURA 1. Divisão topográfica das regiões anatômicas da mucosa gástrica e estrutura
histológica da mucosa oxíntica normal (detalhe).
FIGURA 2. Seqüência das alterações histopatológicas da mucosa gástrica e dos fatores
relacionados ao desenvolvimento do adenocarcinoma gástrico proposta por
Pelayo Correa, 1992.
FIGURA 3. Esquema do método de contagem das células marcadas com o anticorpo
específico utilizando ocular reticulada movida perpendicularmente da partir da
base da mucosa ao epitélio superficial.
FIGURA 4. Mucosa gástrica oxíntica mostrando atrofia glandular acentuada, paciente com
gastrite auto-imune. HE, 50X.
FIGURA 5. Células parietais da mucosa gástrica oxíntica. Imuno-histoquímica, 50X
FIGURA 6. Densitometria óssea mostrando osteoporose da coluna lombar (T-escore L1-L4: -
3,6) em paciente feminino de 64 anos de idade, grupo 1.
GRÁFICO 1. Gráfico-caixa (boxplot) da densidade de células parietais (CP/mm
2
) da mucosa
oxíntica dos 81 pacientes do grupo 1, divididos conforme a presença e o grau de
atrofia segundo a classificação revisada de Sydney para estudo das gastrites.
11
LISTA DE TABELAS
TABELA 1. Valores de referência para pepsinogênio sérico, relação PGI/PGII, e
sensibilidade e especificidade dos testes utilizados em estudos sobre a relação
da atrofia gástrica com gastrite atrófica ou risco para câncer gástrico.
TABELA 2. Características clínicas dos 113 pacientes do presente estudo divididos segunda a
ausência (Grupo 1) ou presença (Grupo 2) de gastrite auto-imune.
TABELA 3. Resultados laboratoriais dos 113 pacientes do estudo, divididos segundo a
ausência (Grupo 1) ou presença (Grupo 2) de gastrite auto-imune, valores
expressos em mediana.
TABELA 4. Diagnósticos histopatológicos da mucosa gástrica em 81 pacientes do grupo
1segundo a Classificação de Sydney para o estudo das gastrites.
TABELA 5. Presença e grau de atrofia da mucosa gástrica oxíntica em 81 pacientes do grupo
1 ao diagnóstico em preparações pela hematoxilina-eosina, de acordo com a
classificação atualizada de Sydney para o estudo das gastrites.
TABELA 6. Presença de metaplasia intestinal nos 81 pacientes do grupo 1 de acordo com o
diagnóstico de atrofia da mucosa gástrica oxíntica pela classificação atualizada
de Sydney para o estudo das gastrites em preparações pela hematoxilina-eosina.
TABELA 7. Presença de metaplasia intestinal e metaplasia pseudo-antral na mucosa gástrica
dos pacientes dos grupos 1 e 2 em preparações coradas pela hematoxilina-eosina.
TABELA 8. Prevalência da infecção pelo H. pylori nos 113 pacientes do estudo, divididos
segundo ausência (Grupo 1) ou presença (Grupo 2) de gastrite auto-imune.
TABELA 9. Prevalência de atrofia da mucosa oxíntica ao estudo histopatológico definida de
acordo com a classificação atualizada de Sydney para o estudo das gastrites
segundo a infecção pelo H. pylori nos 81 pacientes do grupo 1.
12
TABELA 10. Níveis séricos (média ± DP) de marcadores do metabolismo ósseo nos 113
pacientes do estudo, segundo infecção pelo H. pylori.
TABELA 11. Densidade de células parietais na mucosa oxíntica em 81 pacientes do grupo 1
segundo o diagnóstico histopatológico de atrofia da mucosa gástrica oxíntica
pela classificação atualizada de Sydney para o estudo das gastrites.
TABELA 12. Diagnósticos densitométricos em coluna lombar e fêmur pela absorciometria de
raios-x de dupla energia para os 113 pacientes do estudo.
TABELA 13. Diagnósticos densitométricos em coluna lombar pela absorciometria de raios-x
de dupla energia dos 113 pacientes do estudo segundo a ausência (Grupo 1) ou
presença de gastrite auto-imune (Grupo 2).
TABELA 14. Diagnósticos densitométricos em fêmur pela absorciometria de raios-x de dupla
energia dos 113 pacientes do estudo segundo a ausência (Grupo 1) ou presença
de gastrite auto-imune (Grupo 2).
TABELA 15. Medidas da densitométria óssea (média±DP) de coluna lombar e fêmur
proximal pela absorciometria de raios-x de dupla energia dos 113 pacientes do
estudo segundo ausência (Grupo 1) e presença de gastrite auto-imune (Grupo 2).
TABELA 16. Medidas da densitométria óssea (média±DP) de coluna lombar e fêmur
proximal pela absorciometria de raios-x de dupla energia dos 113 pacientes do
estudo segundo a ausência ou presença de infecção pelo H. pylori.
TABELA 17. Medidas da densitométria óssea (g/cm
2
, média ± DP) de coluna lombar e fêmur
proximal pela absorciometria de raio-x de dupla energia dos 113 pacientes do
estudo segundo a ausência e grau de atrofia da mucosa gástrica oxíntica.
TABELA 18. Valores obtidos pela análise de Correlação de Spearman para averiguação de
correlação entre densidade mineral óssea (DMO) da coluna lombar, e variáveis
clínicas e laboratoriais dos 113 pacientes do presente estudo.
13
1. INTRODUÇÃO
A osteoporose, conseqüência da perda progressiva de massa óssea e deterioração da
microarquitetura do tecido ósseo, com conseqüente aumento do risco de fraturas, é a doença
osteometabólica mais comum, observada em mulheres na pós-menopausa e, com o avançar da
idade, freqüente também em homens (OSTEOPOROSIS, 2001). A deficiência estrogênica do
período do climatério é o principal fator para o aumento da perda óssea após a menopausa,
mas outras condições também se relacionam negativamente ao metabolismo ósseo, como
doenças do trato gastrointestinal. A relação entre o estômago e o metabolismo ósseo foi
descrita décadas atrás quando, através de dados epidemiológicos e estudos experimentais,
observou-se o desenvolvimento de osteoporose após a retirada cirúrgica do estômago (EDDY,
1971; HEISKANEN, 2001; PERSSON, 1989).
Foi observado que pacientes com anemia perniciosa apresentam menor densidade
mineral óssea em coluna vertebral e fêmur, e maior incidência de fraturas ósseas em punho e
vértebras (EASTELL et al, 1992; GROERSS et al, 1992). Adicionalmente, inicia-se o estudo
de possível relação entre a infecção pelo Helicobacter pylori, metabolismo ósseo e densidade
mineral óssea, embora ainda sejam poucos os estudos nessa área (FIGURA et al., 2005;
OZDEM et al., 2007).
Na gastrite auto-imune o mecanismo fisiopatológico envolve a presença de auto-
anticorpos direcionados contra a H
+
/K
+
-ATPase na membrana apical das células parietais ou
contra o fator intrínseco (TOH et al., 1997). Como resultado, ocorre atrofia progressiva do
componente glandular da mucosa gástrica oxíntica, com conseqüente acloridria,
hipergastrinemia e deficiência de fator intrínseco e pepsinogênio I. Na ausência de fator
intrínseco, desenvolve-se deficiência de vitamina B
12
, que pode manifestar-se através de
distúrbios nos sistemas hematopoiético e neurológico. Resultados de estudos in vitro
evidenciam ação direta da vitamina B
12
estimulando osteoblastos e células de linhagem
osteoblástica, o que poderia indicar um mecanismo pelo qual a anemia perniciosa se associa à
diminuição da densidade mineral óssea (STONE et al., 2004; TUCKER et al., 2005).
Em relação à infecção pelo Helicobacter pylori, alterações inflamatórias locais e
sistêmicas resultantes da presença da bactéria na mucosa gástrica poderiam influenciar
negativamente a remodelação óssea, levando à diminuição da massa óssea (ANDERSON et
al., 1997; HSU et al., 1999).
Pertencendo à linha de pesquisa sobre a relação entre a mucosa gástrica e densidade
mineral óssea, estudo que antecedeu a este realizado no Laboratório de Patologia Digestiva e
14
Neuroendócrina avaliou a densidade de células parietais em 50 mulheres na pós-menopausa,
com e sem osteoporose. Os resultados mostraram que mulheres com baixa massa óssea
apresentavam mucosa gástrica melhor preservada em relação àquelas com osteoporose e a
prevalência de infecção pelo H. pylori não foi estatisticamente diferentes entre esses dois
grupos de mulheres (KAKEHASI et al., 2007). Não conhecemos até o momento, outros
trabalhos que tenham estudado, especificamente, a relação entre atrofia da mucosa gástrica e
osteoporose.
Ainda assim, os mecanismos da associação entre estômago e metabolismo ósseo não
estão totalmente esclarecidos. Nos casos de gastrite multifocal de origem infecciosa, cujo
principal agente etiológico é o Helicobacter pylori (H. pylori), e da gastrite de origem auto-
imune, pode-se dizer que são as duas maiores causas de gastrite crônica que acometem a
mucosa oxíntica. Como ambas podem evoluir com atrofia da mucosa gástrica em graus
acentuados constituem entidades patológicas de relevância no estudo de possível influência de
alterações da mucosa gástrica sobre o metabolismo ósseo.
A atrofia da mucosa gástrica, definida como perda de tecido glandular especializado,
tem merecido atenção devido à estreita relação etiológica que se admite existir com o câncer
gástrico do tipo intestinal (SIPPONEN et al., 1985; BRINTON, 1989; HSING et al., 1993;
EL-ZIMAITY et al., 2002; WATABE et al., 2005). Representa alteração histopatológica
distinta da metaplasia intestinal e, embora sejam ambas consideradas etapas do processo
evolutivo que culmina com o aparecimento do câncer gástrico, a atrofia gástrica parece
relacionar-se à neoplasia do estômago de maneira mais consistente (NAYLOR et al., 2006;
TAKE et al., 2007). A despeito disto, não há uniformidade no reconhecimento e graduação
histológica da atrofia da mucosa gástrica entre os patologistas por ser o diagnóstico baseado
em análises subjetivas (EL-ZIMAITY et al., 1996; GUARNER et al., 1999). Resulta disso
dificuldade no estudo das relações entre atrofia da mucosa gástrica, infecção pelo H. pylori e
carcinogênese gástrica. À diminuição das células parietais na mucosa do corpo gástrico
admite-se corresponder estado de hipo-secreção ácida e de fatores de sinalização de
crescimento e diferenciação, favorecendo a proliferação de células pouco diferenciadas
possivelmente relacionados ao desenvolvimento da neoplasia (SHIOTANI et al., 2005;
CORREA et al., 2007). Como a atrofia da mucosa gástrica é considerada fator de risco para o
desenvolvimento da doença neoplásica, o estudo da população de células parietais por
métodos objetivos de mensuração pode constituir-se em ferramenta auxiliar importante na
avaliação mais acurada da perda do componente glandular.
15
Utilizada para descrever aspectos histopatológicos das gastrites, a classificação de
Sydney apresenta boa reprodutibilidade para os critérios de inflamação e metaplasia (DIXON
et al., 1996). Porém, observa-se expressiva variação inter-observador no que concerne à
avaliação da atrofia gástrica, uma vez que, ao contrário da inflamação e da metaplasia, esse
aspecto não dispõe de critérios consensuais para sua determinação e quantificação. Devido às
limitações do emprego da classificação de Sydney revisada no que se refere ao estudo da
atrofia gástrica, diferentes alternativas para a quantificação morfológica de atrofia glandular
gástrica têm sido propostas, ainda com resultados inconsistentes. A mensuração dos níveis de
pepsinogênio I e II, método não-invasivo para a pesquisa indireta de atrofia gástrica, é
utilizada largamente no programa de rastreamento de câncer gástrico no Japão, mas não existe
até o momento consenso sobre os valores de referência ou validação para seu emprego em
outros países (DINIS-RIBEIRO et al., 2004). Assim, o desenvolvimento de método de
quantificação objetiva do número de células parietais poderia auxiliar na validação dos níveis
de pepsinogênio a serem usados como marcador de atrofia gástrica em pacientes sob risco de
desenvolvimento de neoplasia gástrica em diferentes populações.
Desse modo, temos por objetivos estudar os principais tipos de gastrite crônica, auto-
imune e associada ao Helicobacter pylori, avaliar o grau de atrofia glandular da mucosa
oxíntica nestas entidades patológicas, e correlacionar os achados com a densidade mineral
óssea dos pacientes. Para a avaliação objetiva do grau de atrofia da mucosa oxíntica
planejamos utilizar anticorpos monoclonais direcionados especificamente contra os
canalículos secretores das células parietais, e assim obter dados mais exatos de sua densidade.
16
2. HISTOFISIOLOGIA DA MUCOSA GÁSTRICA
A mucosa gástrica humana pode ser dividida em três regiões e tipos histológicos
diferentes: a mucosa cárdica, restrita à zona proximal, próxima da abertura do esôfago e de
função ainda desconhecida, a mucosa oxíntica (fúndica ou do corpo), a mais extensa e rica em
células parietais responsáveis pela secreção de ácido, e a mucosa antral ou pilórica na região
distal do órgão, caracterizada pela presença de glândulas mucosas.
A estreita mucosa da região cárdica do estômago apresenta variações em seu padrão
histológico entre diferentes indivíduos e mesmo entre diferentes regiões amostradas para
exame. Possui glândulas mucosas, tipo antrais, freqüentemente com presença de numerosas
células parietais ou mesmo apenas glândulas do tipo oxíntica.
As células da mucosa gástrica se organizam em formações glandulares,
predominantemente na mucosa oxíntica, com fovéolas mucosas curtas e constituídas por
células que secretam produtos de pH neutro ou fracamento acidófilo, o mesmo acontecendo
com o epitélio mucoso de revestimento. Os tipos celulares compõem a mucosa gástrica
oxínitica são o epitélio superficial, as células mucosas, as células principais, e as células
parietais (FIGURA 1). Essas últimas apresentam características estruturais típicas,
principalmente pela riqueza de mitocôndrias e de canalículos secretores, estes responsáveis
pela produção do fator intrínseco e de íons H+ que, secretados na luz do estômago, participam
dos mecanismos digestórios locais. As células parietais são cúbicas ou cilíndricas baixas,
apresentam núcleo em posição central, e citoplasma que se cora em vermelho intenso pela
Hematoxilina-Eosina (HE). Seus canalículos secretores são canais que permitem a passagem
do ácido clorídrico para o lúmen gástrico por transporte ativo. As células parietais se
distribuem ao longo da espessura de toda a mucosa do corpo e fundo do estômago do homem,
concentrando-se mais no terço médio e sendo mais rarefeitas na base da mucosa. Nesta última
região localizam-se as células responsáveis pela secreção dos pepsinogênios, chamadas de
células zimogênias ou principais, de citoplasma mais basófilo quando coradas pelo HE.
17
FIGURA 1. Divisão topográfica das regiões anatômicas da mucosa gástrica e estrutura
histológica da mucosa oxíntica normal (detalhe).
A mucosa gástrica, do mesmo modo como a mucosa intestinal, é sede de numerosas
células endócrinas, principalmente na região das glândulas oxínticas. No final da década de
1960, com o isolamento dos primeiros hormônios gastrintestinais e a produção de anticorpos
contra os mesmos, iniciou-se a utilização e aperfeiçoamento de métodos imunocitoquímicos
para a identificação dos diferentes hormônios nos tipos específicos de células endócrinas.
Pearse verificou, estudando essas células, que elas eram capazes de descarboxilar o L-5-
hidroxitriptofano e o L-diidroxifenilalanina em suas respectivas aminas, a serotonina e a
dopamina, graças à enzima L-aminoácido descarboxilase, e passou a agrupá-las dentro de um
grupo denominado Amine Precursor Uptake and Decarboxilation (APUD) (PEARSE, 1966).
18
Entre os mamíferos, as células endócrinas do sistema digestivo estão distribuídas ao
longo da mucosa gastrintestinal, no pâncreas e vias biliares. As células endócrinas mais bem
conhecidas são as antrais, com papéis relativamente bem definidos, e facilmente identificadas
através de anticorpos específicos. As células da mucosa cárdica têm sido pouco estudadas e,
dados recentes, têm demonstrado que a maioria delas ou mesmo a única, são constituídas
pelas células endócrinas enterocromafim (EC), produtoras de serotonina (VOUTILAINEN et
al, 2002). Na mucosa oxíntica não conhecemos bem todos os tipos celulares endócrinos nem
o papel que cada uma desempenha na homeostase gástrica. O elemento predominante é a
chamada célula Enterochromaffin-like (ECL), que não mantém contato com a luz glandular,
ou seja, é fechada, muito sensível a gastrina, respondendo num primeiro momento através do
aumento da atividade da enzima formadora de histamina, a histidina decarboxilase e, num
segundo tempo, com hiperplasia celular (HAKANSON, 1971). A histamina, provavelmente o
mais importante estimulador da secreção ácida entre os mamíferos, provém de duas fontes na
mucosa do corpo gástrico, das células ECL e dos mastócitos.
A análise ultraestrutural, quantitativa e qualitativa da mucosa oxíntica humana, através
da microscopia eletrônica, mostra população mais heterogênea de células endócrinas,
classificadas de acordo com seus grânulos de secreção. As células ECL são as mais
freqüentemente encontradas (30 a 40%), seguidas pelas células P (20 a 30%) e depois as
células D (20 a 25%). As células P possuem grânulos de secreção semelhantes aqueles do
epitélio respiratório, não apresentam produto conhecido, e identificadas apenas pela
microscopia eletrônica.
Na mucosa antral ocorrem três tipos de células endócrinas, que podem ser
caracterizadas morfologicamente à microscopia eletrônica ou pela imunocitoquímica; são as
células G (60% do total), produtoras de gastrina, as células D, produtoras de somatostatina e
as células EC, que produzem serotonina.
Três mecanismos principais controlam a secreção ácida gástrica. A acetilcolina,
liberada pelas terminações do nervo vago, estimula a secreção ácida das células parietais. A
elevação do pH e a presença de conteúdo protéico alimentar no lúmen do estômago estimulam
a secreção de gastrina, que por sua vez, leva à secreção de ácido clrídrico pelas células
parietais e a proliferação dos componentes exócrinos e endócrinos da mucosa do corpo
gástrico. O terceiro mecanismo consiste na liberação de histamina pelas células ECL, que
também estimula as células parietais e leva à secreção ácida. Nas células parietais a ativação
da ação da bomba de prótons H
+
K
+
ATPase proporciona a troca dos íons K+ por H+, com
conseqüente liberação do hidrogênio para o lúmen gástrico. A H
+
K
+
ATPase é um
19
heterodímero que apresenta duas subunidades, alfa e beta, localizadas nas faces interna e
externa da membrana celular, respectivamente. Com a diminuição do pH ocasionado pela
secreção de ácido pelas células parietais, o pepsinogênio I é convertido à pepsina, por
autocatálise. O pepsinogênio I é a isoforma mais abundante das sete formas de pepsinogênio e
produzido exclusivamente pelas células principais e mucosas do corpo gástrico. Outra forma
secretada na mucosa oxíntica, mas não de forma exclusiva, é o pepsinogênio II, produzido
também pelas células mucosas da região cárdica, glândulas pilóricas e glândulas de Brunner
na mucosa duodenal (SAMLOFF, 1982). Por outro lado, quando a capacidade de
tamponamento da acidez pelo conteúdo alimentar é excedida, e o pH cai abaixo de três, as
células D antrais são estimuladas a produzir e secretar somatostatina, peptídeo inibidor da
secreção de gastrina e histamina.
A atividade secretora das células parietais para o lúmen gástrico torna a concentração
de H+ intraluminal cerca de três milhões de vezes maior do que em qualquer outro fluído
corporal. A barreira mucosa protege o estômago da auto-digestão através da presença da
camada de muco superficial, secreção de bicarbonato pelas células epiteliais, junções
celulares epiteliais, e pela rica rede capilar mucosa que assegura o acesso de nutrientes,
oxigênio e bicarbonato às células epiteliais gástricas.
20
3. GASTRITE DE ORIGEM AUTO-IMUNE
Lesões gástricas são causas freqüentes de doença clínica. Apesar disso, o termo
gastrite tem sido muitas vezes empregado de maneira equivocada. Gastrite crônica é definida
como a presença de alterações inflamatórias crônicas na mucosa gástrica, eventualmente
levando à atrofia e metaplasia, na ausência de erosões (CRAWFORD, 1999). Tem etiologia e
características anátomo-patológicas bastante diversas.
A gastrite atrófica de origem auto-imune é uma das principais causas de gastrite
crônica, respondendo por cerca de 3 a 4% do total de casos de gastrite crônica (EIDIT, 1996;
POTET, 1993). Caracteriza-se por um longo período pré-clínico, quando podem estar
presentes somente os marcadores imunológicos (auto-anticorpos), não sendo, portanto,
freqüente o diagnóstico precoce (DAVIDSON, 2001). Consiste numa doença auto-imune
órgão-específica de etiologia multifatorial, compreendendo fatores genéticos e imunológicos
e, também possivelmente, fatores ambientais. Sabe-se que 20-30% dos parentes de primeiro
grau de adultos com anemia perniciosa têm gastrite auto-imune ou apresentam auto-
anticorpos para outras doenças auto-imunes (GLEESON et al., 1991) Anticorpos direcionados
contra as células parietais estão associados com a gastrite de origem auto-imune uma vez
demonstrado que as sub-unidades α e β da bomba de prótons da enzima H+/K+-ATPase são
os alvos antigênicos desses anticorpos (GLEESON et al., 1991). A prevalência desses auto-
anticorpos na população geral é de 3-10%, enquanto a positividade em pacientes com gastrite
auto-imune e anemia perniciosa está em torno de 90 e 30-60%, respectivamente (BURMAN,
1991; CARMEL, 1992; KORSTANJE, 2006). Também relacionados à gastrite auto-imune,
os anticorpos direcionados contra o fator intrínseco bloqueiam o sítio de combinação da
vitamina B
12
e, embora sejam mais específicos, ocorrem com menor freqüência (ZITTOUN,
2001). Embora fatores ambientais não estejam relacionados de forma consistente com a
gastrite auto-imune, a evidência de que o H. pylori possa exercer papel na indução e
manutenção do processo auto-imune começa a ser mais bem estudada (PRESOTTO, 2003;
KORSTANJE, 2006). Além da demonstração da existência de mímica molecular entre o H.
pylori e a bomba de prótons H+K+ATPase, a identificação de nove diferentes proteínas da
bactéria que reagem com os epítopos da bomba protônica já instalados à nível dos linfócitos T
reativos sugere que o H. pylori possa contribuir adicionalmente para a destruição das células
parietais através da liberação de IFN-γ pelos linfócitos T (D`ÉLIOS et al., 2004).
As alterações histopatológicas da gastrite auto-imune se restringem ou são mais
conspícuas no corpo gástrico, caracterizando-se por infiltrado mononuclear na camada
21
mucosa e atrofia glandular. Esse processo patológico evolui progressivamente, e pode ser
didaticamente dividido em três estágios: precoce, florido e final (CAPELLA et al., 1999). O
infiltrado mononuclear inclui células plasmáticas e linfócitos T ocupando toda a extensão da
lâmina própria da mucosa e acompanham a degeneração e depleção parcial das glândulas
acidopépticas na região média da mucosa. As células parietais remanescentes mostram
citoplasma abundante num estado chamado de pseudo-hipertrofia reacional causado pela
hipergastrinemia, e há hiperplasia das células mucosas, chamada metaplasia pseudo-antral
(TORBENSON et al, 2002). Na fase florida da gastrite auto-imune, o infiltrado mononuclear
está distribuído difusamente e de forma mais compacta, ilhas isoladas de glândulas com
poucas células parietais e principais são vistas, e há substituição destes componentes por
células mucosas e do tipo intestinal (metaplasia intestinal). Em conseqüência do déficit na
produção ácida pela mucosa gástrica atrófica há aumento do pH intraluminal e hiperplasia
reacional das células G antrais. Como resultado, a hipergastrinemia exerce estímulo constante
às células endócrinas que por sua vez, também se tornam hiperplasiadas. Esse efeito trófico da
gastrina sobre as células endócrinas parece ser o principal fator responsável pela maior
incidência de tumores carcinóides em pacientes com anemia perniciosa (HSING et al., 1993).
Na fase final a espessura da mucosa é diminuta, podem ser encontrados pólipos hiperplásicos,
e as células parietais e principais podem estar ausentes. Da mesma forma, o infiltrado
inflamatório está minimamente presente ou ausente.
O diagnóstico histopatológico da gastrite auto-imune nas fases mais avançadas de
atrofia glandular não apresenta dificuldades, mas pode ser menos sugestivo quando ainda não
há escassez acentuada de células parietais. Além disto, nenhum dos aspectos histopatológicos
considerados isoladamente são suficientes para o diagnóstico. O estudo de TORBENSON et
al. (2002) que descreve aspectos histopatológicos da gastrite auto-imune em 40 casos mostrou
que todos os casos confirmados sorologicamente pela presença de auto-anticorpos
apresentavam hipertrofia de células ECL vista através da coloração pela cromogranina, tendo
sido classificada em linear ou nodular. Hipertrofia de células parietais remanescentes e
metaplasia intestinal ou pseudo-antral estiveram presentes em 85% e 65% dos casos.
A principal conseqüência evolutiva da gastrite auto-imune é a anemia perniciosa,
embora atualmente dê-se preferência à denominação Doença de Biermer, uma vez que o
diagnóstico pode ser feito na ausência de anemia, ou dentro do contexto de outras
manifestações auto-imunes (ZITTOUN, 2001). A diminuição da massa glandular da mucosa
oxíntica leva à deficiência de fator intrínseco, cuja conseqüência em longo prazo no último
caso é a eritropoese megaloblástica. O longo período de latência, de até vinte a trinta anos,
22
ocorre porque a reserva hepática de vitamina B
12
, que é de 2.000 a 5.000 mcg, pode demorar
até dez anos para ser totalmente depletada caso nenhuma vitamina B
12
esteja sendo absorvida
(TOH et al., 1997). Assim, estima-se que 10% dos pacientes com gastrite auto-imune
desenvolvam anemia perniciosa ao longo da vida. Existem outras causas de deficiência de
vitamina B
12
e, portanto, a definição de anemia perniciosa inclui a demonstração da presença
de maturação ineficaz na medula óssea (megaloblástica) decorrente da deficiência de vitamina
B
12
exclusivamente por falta de fator intrínseco (MARKLE, 1996).
A cobalamina atua como cofator para a síntese de DNA e metilação das bainhas de
mielina nervosa. É ainda responsável pela conversão do ácido metilmalônico em ácido
succínico, quando serve de co-fator para a enzima adenosil-mutase. Como conseqüência de
sua ausência, as células não se dividem em taxas normais e a cromatina permanece no interior
de células gigantes, processo que culmina com anemia megaloblástica. Já o defeito na
mielinização e a possível toxicidade pelo acúmulo de ácido metilmalônico levam a sintomas
neurossensoriais de parestesia, arreflexia tendinosa, distúrbios de sensibilidade profunda e
ataxia. Queixas psíquicas, como distúrbio de memória e depressão, podem chegar a quadro
demencial grave, nem sempre reversível. O tratamento é a reposição parenteral de
hidroxicobalamina na dose um miligrama por semana, durante duas semanas, seguida da
mesma dose a cada trinta dias, por tempo indeterminado.
A anemia perniciosa associa-se a outras doenças auto-imunes e tem sido relacionada à
diminuição da densidade mineral óssea, ao aumento do risco de fraturas ósseas, e é
considerada fator de risco para adenocarcinoma gástrico (BRINTON, 1989; EASTELL et al.,
1992; GROERSS et al., 1992; HSING et al., 1993; TOH et al., 1997; CAPELLA et al., 1999;
CHAN et al., 2006). Em relação a essa última associação, um estudo preconiza que pacientes
com anemia perniciosa sejam submetidos à avaliação endoscópica periodicamente
(SJOBLOM et al., 1993).
Além da anemia macrocítica por deficiência de vitamina B
12
, estima-se que expressiva
porcentagem de pacientes com anemia ferropriva sem queixas gastrointestinais tenha a
gastrite atrófica do corpo como causa etiológica para a anemia (ANNIBALE et al., 2001). O
mecanismo para essa relação causal seria a impossibilidade de mobilização do ferro alimentar
em ambiente gástrico com pH elevado, em decorrência da acloridria resultante da atrofia da
mucosa gástrica oxíntica.
23
4. GASTRITE CRÔNICA DE ORIGEM INFECCIOSA
O H. pylori infecta aproximadamente metade da população mundial e associa-se a
inúmeras afecções, como a gastrite crônica, a úlcera péptica e o câncer gástrico (ZATERKA
et al., 2007). Trata-se de bacilo gram negativo descrito por MARSHALL e WARREN (1983)
e encontrado exclusivamente na mucosa gástrica, cuja presença está universalmente associada
a achados histológicos de gastrite, mais intensa na região do antro. As alterações da mucosa
gástrica podem, com o passar do tempo, atingir o corpo gástrico, resultando em redução da
secreção ácida e, eventualmente, diminuição da população de glândulas da mucosa gástrica
(CRAWFORD, 1999). De acordo com essas possibilidades evolutivas a infecção pelo H.
pylori pode apresentar dois desfechos diferentes, tanto do ponto de vista clínico quanto
histopatológico: o acometimento predominantemente antral relacionado à ocorrência de
úlcera péptica duodenal (VALLE et al., 1996), e a gastrite multifocal, principal causa mundial
de gastrite crônica atrófica e que se associa com o câncer gástrico (NAYLOR et al., 2006).
Existem outros agentes infeciosos relacionados à inflamação crônica da mucosa gástrica e
neste trabalho a designação gastrite infecciosa será referência à gastrite crônica associada ao
H. pylori.
Apenas 10 a 20% dos indivíduos infectados desenvolvem doença clinicamente
expressiva e o desfecho clínico final da infecção pelo H. pylori é resultado da complexa
interação entre o hospedeiro e a bactéria (FOX et al., 2007). Inicialmente, a sobrevivência da
bactéria num ambiente hostil a outros microrganismos é possível graças à presença de flagelo
e à capacidade de produzir urease, enzima que converte a uréia em amônia, cuja conseqüência
é a neutralização do ácido gástrico. A aderência da bactéria ao epitélio gástrico através das
proteínas já identificadas BabA, SabA, OipA, AlpA, e AlpB, têm a finalidade de facilitar o
acesso a nutrientes e possibilitar a translocação de proteínas efetoras, sendo considerada
crucial para a evolução do processo patogênico (MAEDA, 2007). Sabe-se, por exemplo, que a
presença da proteína SabA (sialic acid-binding adhesin) facilita a aderência do H. pylori ao
epitélio gástrico, relacionando-se positivamente com o câncer gástrico e negativamente com a
doença péptica ulcerosa (YAMAOKA, 2006).
Dois importantes fatores de patogenicidade estudados são a proteína cagA e a
citotoxina vacA. A proteína CagA é um fator de virulência do H. pylori assim denominada
após a descoberta do gene que a codifica – o “cytotoxin-associated gene A”, o que, de certa
forma, está equivocado porque o gene que codifica a citotoxina é o VacA. Ao se mapear o
cromossoma do H. pylori constatou-se que o cagA está localizado na terminação de um grupo
24
de 30 diferentes genes adquiridos mais recentemente na evolução da bactéria que passou a ser
nomeado ilha de patogenicidade (pathogenicity island -PAI) (ATHERTON, 1998).
Atualmente sabe-se que esse conjunto genético codifica o sistema de secreção tipo IV,
responsável pela capacidade que o H. pylori possui de introduzir produtos bacterianos nas
células epiteliais gástricas e cujo resultado, em última instância, é a amplificação da resposta
inflamatória (WILSON, 2007). Os mecanismos pelos quais a proteína cagA contribui para a
patogenicidade do H. pylori não estão totalmente esclarecidos, mas sua presença pode
relacionar-se à atrofia da mucosa gástrica e ao câncer gástrico, por ser capaz de induzir a
alterações morfológicas e apoptose das células epiteliais gástricas e linfócitos T (CABRAL et
al., 2006; CABRAL et al., 2007; MAEDA, 2007).
Outro fator de virulência, a citotoxina vacA é capaz de causar o descolamento da
célula epitelial gástrica e, eventualmente, levar a áreas de micro-ulceração. O gene vacA que
codifica a toxina vacuolizante contém pelo menos duas porções variáveis, a região s (codifica
os peptídeos sinalizadores s1a, s1b, s1c, ou s2) e a região m (peptídeos m1 ou m2) (CHAO-
CHUAM et al., 2005). O conhecimento desses marcadores genéticos e as possibilidades de
associação desses fatores de virulência têm motivado estudos no sentido de se relacionar
determinados genótipos de H. pylori aos desfechos clínicos finais da infecção, numa tentativa
de identificação dos indivíduos com maior risco para doença péptica e neoplásica
(YAMAOKA et al., 1999). Entretanto, parece pouco provável no momento que o estudo dos
fatores de virulência permita a utilização dessas proteínas de membrana no desenvolvimento
de vacinas contra o H. pylori (WILSON, 2007).
Esses fatores até aqui relacionados dizem respeito às interações da bactéria com as
células epiteliais gástricas, através de seus fatores de virulência. Adicionalmente, o H. pylori
induz a um novo estado de modulação dos sistemas de defesa inato e adaptativo. No sistema
inato o reconhecimento inicial do H. pylori se faz através da ligação de estruturas invariáveis
da bactéria a diferentes sensores das células apresentadoras de antígenos do hospedeiro, por
exemplo, os receptores Toll-like (TLR) 2. Os receptores TLR compõem uma família de 11
membros de receptores que se encontram expressos nas células dendríticas e são responsáveis
pelo reconhecimento de estruturas que foram conservadas pelos microorganismos durante sua
evolução, como o lipopolissacáride e o ácido lipoteicóico. Através da ligação aos receptores
TLR2 e TLR4 na membrana das células mononucleares, ocorre ativação de sistemas de
sinalização, como o do fator nuclear kappa-beta (NF-KB) e das proteínas cinases ativadoras
de mitose (MAPK), do que resulta a determinação do perfil de secreção de citocina por essas
células inflamatórias (RAD et al., 2007). No caso da infecção pelo H. pylori os macrófagos
25
do hospedeiro produzem de citocinas inflamatórias, como a IL-1β e IL-6, fundamentais na
patogênese da infecção, incluindo o desenvolvimento de lesões pré-malígnas.
Quanto ao sistema imune adaptativo, a relação entre o H. pylori e o hospedeiro tem
sido estudada em modelos murinos infectados por Helicobacter ssp. mostrando que a
participação das células T é fundamental na resposta do hospedeiro. Como o H. pylori é
considerado um patógeno não invasor, seria de se esperar resposta adaptativa com padrão Th2
predominante. Ao contrário, em vigência da infecção pelo H. pylori há predominância da
ativação das células Th1, responsáveis pela produção das citocinas inflamatórias IFN-γ, Il-12,
Il-18, Il-17 e TNF-α. Por outro lado, animais com determinação genética para resposta
predominante Th2 infectados por Helicobacter ssp. se mostram resistentes ao
desenvolvimento de lesões gástricas graves (FOX et al., 2007). Crescente interesse tem sido
direcionado à função das células T reguladoras, denominadas Tregs, na infecção pelo H.
pylori. Essas células estão associadas ao controle de respostas imunes exacerbadas, como
ocorre na sensibilização a alérgenos e nas doenças auto-imunes. Estudos in vitro têm
mostrado que as Tregs podem suprimir a resposta de células T de memória e permitir a
persistência da infecção pelo H. pylori (WILSON, 2007).
Assim, do somatório da presença de fatores de virulência do H. pylori, da resposta
inflamatória do hospedeiro (em última instância inadequada), e dos mecanismos de evasão da
bactéria sobre as células do sistema imune, resulta que o organismo infectado não é capaz de
exterminar a bactéria, que persiste por longos períodos na mucosa gástrica, sendo capaz de
iniciar e perpetuar estado crônico de injúria local.
Na gastrite crônica a lesão é caracterizada por infiltração difusa da mucosa gástrica de
linfócitos, células plasmáticas, macrófagos, além de poucos eosinófilos e mastócitos.
Descreve-se como ativa na presença de polimorfonucleares nas camadas glandular e epitelial,
e podem também estar presentes agregados linfóides na mucosa, alguns com centros
germinativos. Esse quadro histopatológico é visto na região do antro gástrico de pacientes
com úlcera péptica duodenal. De outra forma, a evolução topográfica da gastrite se faz
proximalmente em direção ao fundo gástrico, caracterizando a gastrite multifocal, na qual a
persistência do processo inflamatório pode levar ao aparecimento de metaplasia e atrofia
(CORREA et al., 2007). No caso da metaplasia a mucosa gástrica é substituída em parte por
células absortivas intestinais no compartimento epitelial e também formando estruturas
glandulares rudimentares. Em alguns casos, células com características de intestino colônico
podem ser vistas. O H. pylori pode ser visto de maneira descontínua na camada superficial da
26
mucosa e entre os microvilos das células epiteliais, mas está ausente em áreas de metaplasia
intestinal. Como a extensão das áreas de metaplasia intestinal é maior após longo tempo de
evolução da gastrite multifocal, explica-se porque pode ser infrutífera a pesquisa do H. pylori
em estágios avançados de gastrite atrófica com metaplasia intestinal. A atrofia gástrica é
evidenciada pela diminuição ou rarefação do componente glandular, e comumente encontrada
em espécimes de biópsias gástrica de exames endoscópicos em indivíduos cronicamente
infectados pelo H. pylori. Ocorre em paralelo à prevalência e como resultado do longo tempo
de infecção pelo H. pylori, sendo encontrada em até 60 a 80% dos indivíduos infectados,
enquanto em indivíduos não infectados a prevalência de atrofia gástrica está em torno de
cinco a 10% (ASAKA et al., 2001). Num estudo japonês em 196 crianças, a presença de
inflamação e atrofia foi mais prevalente naquelas infectadas pelo H. pylori em relação àquelas
não infectadas, tanto na região do corpo gástrico quanto no antro, mostrando que 10% das
crianças infectadas com idade entre um e 16 anos já apresentavam sinais de atrofia antral ao
exame histológico (KATO et al., 2006).
Posteriormente na evolução da gastrite crônica as células epiteliais podem desenvolver
alterações displásicas caracterizadas por mudanças do tamanho e forma, e pela presença de
atipias nucleares. Quando o epitélio gástrico mostra displasia grave, mas ainda confinadas à
camada epitelial da mucosa, podem ser consideradas com carcinoma in situ, o que não é
sinônimo de carcinoma precoce, estádio em que as células atípicas já se estenderam até a
submucosa, porém se mantêm até esse limite.
Em relação ao efeito da infecção pelo H. pylori sobre a secreção ácida gástrica, pode-
se dizer que há correspondência com o espectro do acometimento histopatológico na mucosa
gástrica (EGAN et al., 2007). Na presença da bactéria o mecanismo de feedback negativo
exercido pela somatostatina é interrompido, com aumento da secreção ácida gástrica. O
constante estímulo ácido na mucosa duodenal é fundamental para o aparecimento da
metaplasia gástrica, local correspondente ao das lesões ulcerosas pépticas duodenais. De outra
maneira, na gastrite multifocal o processo inflamatório leva à inibição da produção ácida
pelas células parietais e, com o desenvolvimento da atrofia da mucosa gástrica, esse estado
hipossecretor se torna permanente, cujo resultado é a hipocloridria.
27
5. ATROFIA DA MUCOSA GÁSTRICA E DENSIDADE MINERAL ÓSSEA
A atrofia da mucosa gástrica é caracterizada pela diminuição de seu componente
glandular, podendo ocorrer de forma difusa ou focal e, dependendo dos fatores etiológicos
envolvidos, acometem tanto a mucosa antral quanto a mucosa do corpo, ou apenas uma dessas
regiões. As conseqüências da atrofia acentuada da mucosa gástrica sobre suas funções
secretoras são hipo- ou acloridria, ausência de secreção de fator intrínseco e pepsinogênio.
Estudos sobre o efeito do envelhecimento sobre a secreção gástrica são controversos.
Em indivíduos idosos as alterações próprias do envelhecimento podem levar à diminuição da
massa de células parietais (FARINATI, 1993, FELDMAN, 1996), resultando em diminuição
da produção ácida e elevação do pH gástrico, e queda na secreção do pepsinogênio. As
conseqüências clínicas da atrofia senil da mucosa gástrica podem ser importantes no que
concerne aos efeitos colaterais de medicamentos, diminuição da resistência a agentes
infecciosos e menor biodisponibilidade de nutrientes por prejuízo em sua mobilização das
formas complexas nos alimentos (RECKER, 1985).
A gastrite de origem auto-imune e gastrite crônica atrófica associada ao Helicobacter
pylori são duas importantes entidades patológicas que se apresentam com atrofia da mucosa
gástrica. A anemia perniciosa, resultado final da gastrite auto-imune, e a infecção pelo
Helicobacter pylori têm sido relacionadas à baixa densidade mineral óssea (EASTELL et al.,
1992; FIGURA et al., 2005). Como a atrofia da mucosa gástrica é alteração histopatológica
comum às duas situações, pode-se admitir possível elo entre a diminuição do componente
glandular gástrico e o maior risco de desenvolvimento de osteoporose.
A osteoporose, caracterizada por perda progressiva conteúdo ósseo, diminuição da
resistência e deterioração da microarquitetura do tecido ósseo, com conseqüente aumento do
risco de fraturas (OSTEOPOROSIS, 2001), é a doença óssea mais comum, observada em
mulheres na pós-menopausa e, com o avançar da idade, freqüente também em homens. Um
aspecto particular da osteoporose é a normalidade da taxa entre os componentes mineral e
orgânico da matriz óssea, que a distingue da osteomalácia, doença caracterizada por
deficiência relativa da mineralização em relação ao conteúdo colágeno do osso. A
conseqüência mais relevante da osteoporose é a ocorrência de fraturas, sendo as mais comuns,
as fraturas vertebrais, do punho e do fêmur.
O tecido ósseo é composto pela matriz extracelular, constituída principalmente de
fibras colágenas tipo I e cristais de hidroxiapatita, e pelas células responsáveis pela formação
28
e reabsorção ósseas. As células são de dois tipos, os osteoclastos, de origem hematopoética e
responsáveis pela reabsorção óssea, e os osteoblastos, provenientes de células mesenquimais,
produtores da matriz óssea. Seja no osso cortical ou trabecular, um processo contínuo de
formação acoplado à reabsorção, chamado ciclo de remodelação óssea, garante o equilíbrio na
manutenção da massa óssea em indivíduos adultos. Qualquer alteração no sentido de ruptura
deste equilíbrio é capaz de resultar em osteoporose.
O diagnóstico de osteoporose é feito através da utilização dos critérios da Organização
Mundial de Saúde (OMS): pacientes são definidos como portadores de osteoporose quando
apresentam densidade mineral óssea abaixo de -2,5 desvios-padrão em relação à média
observada na população jovem, em medidas pela absorciometria de raio-X de dupla energia
(KANIS et al., 1994). Existe uma correlação inversa entre baixa densidade óssea e risco de
fraturas, sendo que o risco de fratura vertebral é multiplicado por 2 a cada diminuição de um
DP na massa óssea (WASNICH, 1993).
Estima-se que 200 milhões de mulheres tenham osteoporose no mundo, e os custos
projetados para o ano de 2020 com essa doença somam algo em torno de 62 bilhões de
dólares (NATIONAL OSTEOPOROSIS FOUNDATION, 2002). Não existem dados precisos
sobre a prevalência da osteoporose no Brasil. De acordo com dados do último censo (ano
2000), admite-se para o Brasil uma população de 163.275.000 habitantes, dos quais 81
milhões são do sexo feminino. Vinte e seis a trinta milhões de habitantes estão acima dos 50
anos e, desses, 12 milhões têm mais de 60 anos. Considerando em 30% a taxa média relativa à
freqüência da osteoporose em mulheres após a menopausa (MELTON, 1995), pode-se
estimar em cinco milhões o número de pacientes acometidas por essa enfermidade em nosso
país. O estudo de COSTA-PAIVA (2001) avaliou retrospectivamente os dados demográficos
e densitométricos de 473 mulheres no período pós-menopausa da região Sudeste do país,
média de idade de 53,9±7,1 anos, encontrando prevalência de osteopenia e osteporose na
coluna lombar foi de 38% e 14,7%, respectivamente. No fêmur, os achados de osteopenia e
osteoporose foram de 32,7% e 3,8%, respectivamente. Esses dados mostram elevada
prevalência de baixa massa óssea, e indicaram baixa escolaridade, baixo índice de massa
corporal (IMC), menopausa precoce, menarca tardia e idade avançada como fatores de risco.
Outro estudo realizado na região Sul do país, realizado em 810 pacientes (99,1% de mulheres)
com média de idade de 59,1 ±10,7 anos, mostrou prevalência de osteoporose na coluna
lombar de 29,9% e no fêmur de 13,9% para o grupo com mais de 50 anos (ZANETTE et al.,
2003).
29
A probabilidade da ocorrência de fratura de quadril para mulheres brancas acima dos
50 anos, durante o tempo restante de vida, é estimado em torno de 17% (NATIONAL
INSTITUTE OF HEALTH, 2001). Estima-se que a prevalência de fraturas vertebrais em
mulheres com mais de 50 anos se aproxime dos 30% (MELTON, 1989) e que pelo menos
90% das fraturas de quadril em mulheres idosas possam ser atribuídas à osteoporose
(MELTON, 1996). No Brasil, no ano de 1998, as fraturas ósseas associadas à osteoporose
atingiram 94.120 fraturas vertebrais, e 37.000 fraturas de punho e fêmur, cada uma delas.
Calcula-se que os custos financeiros tenham atingido, somente em relação às fraturas de
fêmur, cerca de R$ 27.300.000,00 (CARNEIRO, 2001). Na região Nordeste, o estudo de
SILVEIRA et al. (2005) sobre a prevalência de fratura de quadril na cidade de Fortaleza,
Ceará, mostrou que a incidência dessa fratura foi maior no sexo feminino, e em pacientes
mais idosas, com taxa anual estimada em 27,7 mulheres/10 mil habitantes, menor quando
comparada a estudos realizados em outras partes do mundo. A fratura de fêmur apresenta
mortalidade de 25% no primeiro ano e 50% das pacientes necessitam de algum tipo de auxílio
definitivo após a sua ocorrência, perdendo a independência para as atividades da vida diária
(BARRET-CONNOR et al., 1995).
Um dos fatores mais importantes que determinam o aparecimento da osteoporose e
explica sua maior prevalência no sexo feminino, é a deficiência estrogênica na pós-
menopausa. Este hormônio sexual apresenta efeito antireabsortivo ósseo por diminuir a
freqüência de ativação dos ciclos de remodelação óssea, e também por diminuir a produção
local de citocinas, como as interleucinas 1 e 6, estimuladoras da reabsorção óssea (RIGGS et
al, 1998). A perda óssea em mulheres na pós-menopausa e sem terapia de reposição hormonal
é mais acentuada nos primeiros cinco a dez anos, atinge preferencialmente o osso trabecular, e
pode chegar a 4% ao ano, com uma perda aproximada de 15% em cinco anos (HEANEY,
1996). Mulheres com anorexia nervosa, atletas profissionais, e aquelas ooforectomizadas
também estão sujeitas à falência gonadal e, conseqüentemente, à perda óssea acelerada.
Idade e densidade mineral óssea se relacionam de forma estabelecida com
osteoporose, por guardarem estreita relação com a incidência de fraturas. Outros fatores de
risco se relacionam diretamente com a massa óssea e, conseqüentemente, com maior risco de
fraturas. Os fatores de risco podem ser classificados em uma das cinco categorias: idade ou
relacionado à idade, genético, ambiental, hormonal ou doenças crônicas e características
físicas ósseas (SIRIS et al., 2004). Tabagismo, baixo índice de massa corporal, e história
familiar positiva para osteoporose também são fatores de risco para osteoporose, enquanto
30
alcoolismo, uso de bebidas cafeínadas e sedentarismo na adolescência têm relação
inconsistente com a densidade mineral óssea. Doenças que diminuem os níveis de estrógeno
ou vitamina D, que prejudicam a absorção cálcio, e também aquelas que determinam processo
inflamatório sistêmico, com liberação de citocinas ativadoras dos osteoclastos, podem alterar
negativamente a remodelação óssea.
Mais especificamente em relação ao estômago, evidências experimentais e
epidemiológicas demonstram existir relação entre a mucosa gástrica e o metabolismo ósseo.
Duas importantes linhas de estudo são responsáveis pelo reconhecimento desta relação.
Na primeira delas, em estudos experimentais onde se utilizou o rato como modelo, um
grupo sueco de pesquisadores tem demonstrado a presença de um fator endócrino gástrico
atuando no metabolismo ósseo (PERSSON et al., 1989). Em verdade, esse esclarecimento
teve início na década de 1970, quando se demonstrou que a gastrina e a pentagastrina tinham
efeito hipocalcemiante em ratos e suínos (COOPER, 1971; COOPER, 1972). A princípio,
tentou-se explicar que a diminuição dos níveis séricos de cálcio em resposta à gastrina
pudesse ocorrer devido ao aumento da secreção de calcitonina pelas células C da tireóide
(COOPER, 1971). JAFFE et al. (1974) demonstraram que a queda do cálcio sérico em
resposta à gastrina ocorria mesmo em animais submetidos à retirada cirúrgica da tireóide e
paratireóide, sugerindo que não havia dependência de liberação de calcitonina para explicar a
hipocalcemia.
Posteriormente, foram realizados experimentos nos quais os animais eram submetidos
à retirada cirúrgica de segmento intestinal, do estômago, dos rins e da glândula suprarenal,
para então receberem a infusão de gastrina (KAPLAN et al., 1975) O objetivo desse estudo
era avaliar a participação de outros órgãos que não a tireóide ou paratireóide, na resposta
hipocalcemiante à administração da gastrina. Observaram que os animais continuavam a
apresentar queda da calcemia em resposta à gastrina mesmo após ablação intestinal, renal ou
suprarenal. Assim, estavam eliminadas as hipóteses de que a hipocalcemia induzida pela
gastrina fosse ocasionada por aumento da excreção renal de cálcio, ação de substância
calcitonina-like produzida pela suprarenal, ou por influência na ativação da vitamina D.
Interessantemente, em animais nos quais o procedimento cirúrgico consistiu de gastrectomia,
não foi observada a hipocalcemia esperada em resposta à gastrina, sugerindo a existência de
um outro efetor gástrico, e deixando um papel intermediário à gastrina. Estudou-se qual
porção da mucosa gástrica seria responsável por tal efeito e demonstrou-se que a retirada de
25% distais da mucosa (antrectomia) não alterava a resposta hipocalcemiante, mas com a
31
retirada da mucosa oxíntica (fundectomia), nenhuma alteração na dosagem de cálcio sérico
acontecia após a infusão da gastrina. Estava então tendo início a idéia de que o estômago
pudesse participar da homeostase do cálcio, assim como a calcitonina, o PTH e a vitamina D.
Mais uma vez, KAPLAN et al. (1976) evidenciaram a participação do estômago na
regulação do cálcio, demonstrando um efeito hipocalcemiante com a administração de
gastrina, histamina e colecistocinina que, entretanto, era perdido quando os animais
previamente eram submetidos à gastrectomia.
No estudo que utilizou o rato como modelo, PERSSON et al. (1988) observaram que a
colecistocinina, mas não a gastrina, era capaz de estimular a secreção de calcitonina pelas
células C da tireóide. Em animais submetidos à antrectomia, com conseqüente diminuição dos
níveis de gastrina, ou naqueles fundectomizados, com hipergastrinemia, o número de células
C da tireóide e a concentração sérica de calcitonina mantiveram-se semelhantes aos controles.
Com o conhecimento de que ocorria hipocalcemia em resposta à gastrina, mais
especificamente, através da mucosa oxíntica, estudos experimentais foram conduzidos no
sentido de determinar qual órgão poderia estar sendo responsável pelo acúmulo deste cátion.
Assim, a hipocalcemia em ratos, após a administração de gastrina, não pôde ser explicada
pela deposição de cálcio nos rins, fígado, músculos e pulmões (LIMLOMWONGSE et al.,
1981). Neste mesmo trabalho, a utilização de cálcio marcado (
45
Ca) sugeriu que a inibição
do efluxo de cálcio dos ossos fosse o responsável pela hipocalcemia induzida pela gastrina.
Os animais receberam o cálcio marcado e procedeu-se à retirada de uma tíbia que serviria
como controle do osso contralateral. A seguir, administrou-se gastrina intraperitoneal para
comparar, após uma hora, a quantidade de cálcio nos dois ossos. O resultado foi o achado de
que a tíbia, sob a ação da gastrina, continha 25% a mais de cálcio do que a tíbia utilizada
como controle.
Com essa descoberta, iniciava-se agora uma nova etapa nos estudos das inter-relações
entre mucosa gástrica e metabolismo ósseo que havia começado 10 anos atrás, quando
ocorreram as primeiras observações entre os níveis séricos de cálcio e gastrina. Como era
evidente a relação entre a mucosa oxíntica, com os níveis sérico de cálcio e sua retenção
óssea, PERSSON et al. (1989) apresentaram elegante trabalho tentando esclarecer a natureza
do fator hipocalcemiante da mucosa oxíntica. Utilizando extratos de mucosa oxíntica,
mostraram que sua administração a animais gastrectomizados era capaz de restaurar o efeito
hipocalcemiante de maneira idêntica ao da gastrina quando administrada a animais controles.
32
Submetendo o extrato à digestão com duas diferentes enzimas, a leucina aminopeptidase e a
tripsina, foi possível demonstrar que o fator hipocalcêmico da mucosa gástrica era de natureza
protéica e de baixo peso molecular. A ação da primeira enzima, mas não da segunda, causava
inatividade do extrato em relação ao cálcio, sugerindo a existência de peptídeo sem
aminoácidos básicos residuais. Neste mesmo trabalho, verificaram que a hipocalcemia em
resposta à gastrina não ocorria por perda gástrica ou excreção renal de cálcio, uma vez que a
queda do cálcio sérico não era acompanhada pelo aumento da quantidade deste cátion no suco
gástrico e urina dos animais. Finalmente, a administração de gastrina ou do extrato obtido da
mucosa oxíntica, mostrou aumento da captação do
45
Ca em rádio e esterno, sugerindo que
ambos, tanto o extrato quanto a gastrina, apresentam o mesmo efeito hipocalcêmico. Este
achado, somado aos conhecimentos anteriores, indicava que a gastrina teria papel de
mediadora desse efeito, ou seja, a gastrina estaria atuando sobre um fator presente na mucosa
oxíntica que seria o responsável final pela hipocalcemia. Pela primeira vez, a partir desses
achados, esse fator gástrico possivelmente responsável pela hipocalcemia, foi denominado
gastrocalcina.
PERSSON et al. (1993) mostraram em estudo experimental que a falta da produção
ácida do estômago não era responsável pela perda óssea observada em animais submetidos à
gastrectomia, uma vez que a administração de omeprazol, um potente inibidor da secreção
ácida, não ocasionava perda de massa óssea. Completando esse estudo, os autores forneceram
um suplemento parenteral de cálcio a animais gastrectomizados, garantindo o aporte do íon,
possivelmente não absorvido pela perda do ácido, resultado da retirada do estômago. Apesar
da reposição, esses animais não deixaram de perder massa óssea, que chegou a 40% após seis
semanas.
Como a mesma hipocalcemia observada quando da administração da gastrina ocorreu
com a utilização de extrato protéico de mucosa oxíntica, inclusive em animais
gastrectomizados, hipotetizou-se a existência de produto hormonal existente naquele extrato e
que as células ECL poderiam ser as responsáveis pela sua produção. Essas células contêm
numerosas vesículas e alguns grânulos densos, estocam histamina e peptídeos derivados da
cromogranina-A, como a pancreastatina, em proporções variadas, e são as células endócrinas
predominantes na mucosa oxíntica (HAKANSON et al., 1994).
Assim, em 2001, o mesmo grupo sueco demonstrou o efeito de extratos de grânulos e
vesículas derivados de células ECL na mobilização do cálcio intracelular em culturas de
osteoblastos (LARSSON et al., 2001). Os extratos causaram elevação do cálcio intracelular,
33
mas isso não se deveu à ação da histamina ou da pancreastatina. Esse efeito pôde ser abolido
pela pré-digestão pela leucina aminopeptidade, remetendo à existência de um novo hormônio
osteotrópico produzido na mucosa gástrica, implicado no aparecimento da osteopenia pós-
gastrectomia.
Levando em consideração que a perda óssea advém do desequilíbrio entre formação e
reabsorção ósseas, estudou-se a recuperação de defeito ósseo causado intencionalmente na
mandíbula de ratos previamente gastrectomizados e seus controles, sendo que os resultados
não mostraram diferenças na reparação entre os dois grupos, sugerindo que o efeito
osteopênico da gastrectomia ocorre com aumento da reabsorção óssea (ZELLIN et al., 2002).
Num segundo trabalho (ANDERSSON et al., 2002), os animais foram divididos em grupos
para serem submetidos à gastrectomia e ooforectomia. O efeito da administração de
bisfosfonato (alendronato), estrógeno ou paratormônio (PTH) foi estudado quanto à
capacidade de prevenir a osteopenia esperada após cada um desses procedimentos. Através do
estudo da densidade mineral em vértebra lombar e fêmur, constatou-se que o alendronato era
capaz de prevenir a perda óssea após a gastrectomia e ooforectomia enquanto o estrógeno e o
PTH somente demonstraram essa propriedade nos animais ooforetomizados. Este estudo,
além de discutir os diferentes mecanismos de ação destas drogas, propõe, pela primeira vez,
um diferencial terapêutico do alendronato e provavelmente de outros bisfosfonatos, no
manejo de pacientes gastrectomizados com baixa massa óssea.
Por outro lado e integrando a segunda linha de estudos sobre a relação entre estômago e
distúrbios osteometabólicos estão os estudos epidemiológicos. Sabe-se que o trato
gastrintestinal está, obviamente, associado à absorção de nutrientes críticos à saúde óssea, e
situações de enfermidade em qualquer de seus segmentos, seja pela presença de processo
inflamatório, seja pela alteração anatômica em casos de ressecções, podem fazer com que
distúrbios deles resultantes tenham influência negativa sobre a homeostase óssea. Assim,
diminuição da massa óssea pode ser encontrada em até 50% dos pacientes com doença celíaca
e em 41% dos pacientes com Doença de Crohn (SYLVESTER, 1999; SCOTT et al., 2000;
LORA et al., 2005).
Existe clara correlação entre a ocorrência de osteoporose com a retirada cirúrgica do
estômago (gastrectomia) (EDDY, 1971; BISBALLE et al., 1991; ADACHI et al., 2000).
Apesar dos resultados não serem uniformes (REJMAN, 1970;; SOUTHERLAND et al.,
2001), a gastrectomia é reconhecida como fator de risco para o desenvolvimento de
osteoporose e os pacientes submetidos ao procedimento cirúrgico apresentam maior
34
incidência de fraturas (HEISKANEN et al., 2001). Uma série de fatores, relacionados à
deficiência de absorção de cálcio e vitamina D, perda ponderal e desnutrição, podem estar
implicados na doença óssea pós-gastrectomia, mas sua etiopatogênese ainda não está
totalmente esclarecida (MARCINOWSKA-SUCHOWIERSKA et al., 1995; MAIER, et al.,
1997; ADACHI, et al., 1998).
No estudo de ADACHI et al. (1998), a incidência de osteoporose pós-gastrectomia foi
de 18% em homens e 71% em mulheres. Dados de um estudo multicêntrico envolvendo 9704
mulheres com mais de 65 anos mostraram que a cirúrgia gástrica se relacionava à baixa massa
óssea em antebraço e calcâneo (BAUER et al., 1993).
Além de relacionar-se à baixa massa óssea, a gastrectomia também se associa ao
aumento no risco de fratura. No trabalho de KANIS et al. (1999), foram estudados 730
homens com mais de 60 anos em seis países europeus e a gastrectomia foi encontrada em
3,6% dos pacientes com fratura de quadril, representando risco relativo de 1,79 (IC 95% 1,13-
2,85). Em estudo de 438 pacientes submetidos à gastrectomia por úlcera péptica, seguidos por
15,6 anos, a incidência de fratura de quadril foi de 25% com risco relativo de 2,5 (IC 95%
1,9-2,3) e a de vértebras foi de 41% com risco relativo de 4,7 (IC 95% 3,8-4,7) (MELTON et
al., 1999). As mulheres sofreram mais fraturas que os homens, mas o risco de fratura não
esteve associado ao tabagismo, alcoolismo ou índice de massa corporal. O estudo de
metanálise de ESPALLARGUES et al. (2001), identificou 80 fatores de risco para
osteoporose e classificou-os de acordo com sua força de associação. Deste total, 15% foram
considerados com de alto risco para osteoporose e a gastrectomia encontrava-se entre eles.
O tempo decorrido da cirurgia parece estar relacionado a risco aumentado para
osteoporose, pois LIEDMAN et al. (1997), não encontraram diferença na densidade mineral
óssea de pacientes após cinco anos do procedimento cirúrgico quando comparados ao grupo
controle, demonstrando que mais tempo poderia ser necessário para o aparecimento da doença
osteometabólica. Durante longo período de observação, em média 20 anos, de 165 homens e
62 mulheres gastrectomizados, evidenciou-se osteoporose em 22% e 86% dos pacientes,
respectivamente, embora neste estudo o exame diagnóstico para a osteoporose tenha sido a
radiografia convencional do segundo metacarpo direito (TOVEY et al., 1990).
ZITTEL et al. (1997) estudaram 60 pacientes de ambos os sexos durante cinco a vinte
anos após a gastrectomia, utilizando radiografia convencional e tomografia computadorizada
quantitativa da coluna lombar, além da dosagem sérica de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina.
35
A diminuição do cálcio sérico em 68% dos pacientes operados poderia explicar a prevalência
de 55% de fraturas vertebrais encontrada nesses pacientes. A causa da hipocalcemia seria a
diminuição da ingesta de leite e derivados para evitar a intolerância alimentar, a diminuição
da liberação do cálcio ligado a proteínas pela ação ineficiente das proteases em ambiente
agora alcalino, o aumento da velocidade do trânsito alimentar e a exclusão de áreas como o
duodeno e jejuno proximal, impedindo a absorção de cálcio.
Contrariando a hipótese de dificuldade na absorção de cálcio pela perda da acidez
gástrica, estudo da densidade mineral óssea em uso de drogas bloqueadoras da secreção ácida,
não demonstrou diferença significativa em relação ao grupo controle (ADACHI et al., 1998).
Um outro mecanismo passível de contribuição para a osteoporose pós-gastrectomia
seria a diminuição da absorção da vitamina D ocasionada pela esteatorréia ou pela alteração
da dieta, com menor oferta alimentar desta vitamina. Entretanto, parte da vitamina D utilizada
no organismo humano provém da ação da luz solar sobre a pele, o que seria suficiente para
suprir as necessidades diárias. MELLSTRON et al. (1993), estudaram 129 homens
submetidos à gastrectomia parcial comparando-os a um grupo controle. A média de idade dos
pacientes era 72,1 anos e o tempo médio decorrido da cirurgia foi de 28,5 anos. Os resultados
mostraram diminuição da massa óssea em pacientes operados em relação aos controles e
maior prevalência de fraturas vertebrais (19% contra 4%). Neste estudo não foram
encontradas diferenças nos níveis de cálcio, PTH ou vitamina D. De interesse, a endoscopia
digestiva alta realizada em 78 pacientes após a cirurgia evidenciou a presença de gastrite
atrófica em 76 deles, mas não foi feita referência à pesquisa do H. pylori. Além disso, no
estudo de LIEDMAN et al. (1997), os níveis de cálcio, fósforo e vitamina D também eram
normais nos pacientes gastrectomizados.
Embora a gastrectomia tenha indicação cada vez menos freqüente, mais estudos são
necessários para tentar esclarecer a etiopatogenia da doença óssea pós-gastrectomia, e as
possibilidades explicativas para a relação entre estômago e osteoporose, principalmente
aqueles que envolvam mulheres, grupo mais predisposto à ocorrência da osteoporose.
A anemia perniciosa, estágio final da gastrite auto-imune, tem sido relacionada à
menor densidade mineral óssea e ao aumento do risco de fratura óssea. EASTELL et al.
(1992) mostraram que pacientes com anemia perniciosa apresentavam uma redução de 16%
na densidade mineral óssea da coluna lombar quando comparados com controles. O estudo de
GOERSS et al. (1992) evidenciou risco 1,8 e 2,9 vezes maior para ocorrência de fratura de
36
vértebra e punho, respectivamente, em pacientes com anemia perniciosa. Em nenhum dois
trabalhos foi feita a descrição histopatológica das alterações da mucosa gástrica, trazendo
dúvidas quanto ao diagnóstico definitivo de gastrite auto-imune nestes pacientes. Em
metanálise para fatores de risco para fratura óssea (ESPARLLAGUES et al., 2001), a anemia
perniciosa foi considerada fator de alto risco para fraturas embora os autores ressaltem que as
evidências dessa relação não sejam numerosas. Como a anemia perniciosa é o resultado de
longo processo silencioso da gastrite atrófica auto-imune, e a osteoporose permanece
assintomática até que ocorram fraturas osteoporóticas, estudos sobre os mecanismos
fisiopatológicos que relacionam as duas patologias são de difícil condução. Gastrectomia,
anemia perniciosa e envelhecimento apresentam em comum elevada prevalência de
deficiência de vitamina B
12
(MELLSTROM et al., 1993, HEISKANEN et al., 2001,
CARMEL et al., 2001, ANDRÈS et al., 2004), e a partir da associação entre anemia
perniciosa e osteoporose (EASTELL, et al., 1992, GOERSS et al., 1992), foram conduzidos
estudos visando à investigação dos níveis séricos de cobalamina em pacientes com
osteoporose. Os resultados são controversos. Os estudos de STONE et al. (2004) e TUCKER
et al. (2005) mostraram relação entre baixa massa óssea em fêmur e quadril e níveis
diminuídos de vitamina B
12
, o que não ocorreu com os trabalhos de CAGNACCI et al. (2003)
e GJESTAL et al. (2006). REJNMARK et al. (2008) mostraram relação entre a ingestão de
folato e massa óssea em mulheres na pós-menopausa, mas não encontraram relação com a
quantidade diária ingerida de vitamina B
12
. Adicionalmente, DHONUKSHE-RUTTEN et al.
(2003) estudaram duas populações distintas em relação à faixa etária e encontram associação
entre diminuição do conteúdo mineral e vitamina B
12
em mulheres mas não em homens.
A vitamina B
12
poderia influenciar o metabolismo ósseo de duas maneiras. A
cobalamina é importante co-fator no metabolismo de aminoácidos, e sua deficiência leva à
elevação no nível plasmático de homocisteína, o que tem sido relacionado à osteoporose
(VAN MEURS et al., 2004) e ao aumento do risco de fraturas (McLEAN et al., 2004,
DHONUKSHE-RUTTEN et al., 2005). A cisteína, que é formada a partir do metabolismo da
homocisteína, apresenta entre suas funções a participação na manutenção estrutural de
diversas proteínas, como o colágeno. Recente estudo de BAINES et al. (2007) mostrou
associação entre níveis plasmáticos de cisteína e densidade mineral óssea, quando entre 328
mulheres na pós-menopausa, aquelas com menor massa óssea apresentaram níveis mais
baixos de cisteína. Outro possível efeito seria ação direta da vitamina B
12
sobre os
osteoblastos, uma vez que resposta proliferativa e funcional, dose-dependentes, foi observada
37
quando da estimulação de linhagens celulares derivadas de osteossarcoma pela vitamina B
12
(KIM et al., 1996).
O H. pylori, que infecta mais da metade da população mundial, parece relacionar-se a
diferentes condições patológicas, sendo o desfecho final da infecção resultado da complexa
interação entre o microorganismo e o hospedeiro. Além das conseqüências da gastrite crônica,
como a atrofia da mucosa gástrica, a infecção resulta em alterações do sistema imune. Por sua
vez, os osteoclastos podem ser ativados por citocinas produzidas em vigência de processo
inflamatório sistêmico, como as interleucinas 1, 6 e o fator de necrose tumoral. Além disso, os
osteoblastos expressam um ligante de superfície (receptor activator of NF-
κ
B ligand, ou
RANKL) capaz de se ligar a receptores ativadores de osteoclastos, o que é regulado pelas
células efetoras dos processos inflamatórios (linfócitos T e células dentríticas). Estes
poderiam ser mecanismos pelos quais as doenças inflamatórias sistêmicas influenciam
negativamente o metabolismo ósseo (ANDERSON et al.,1997; HSU et al., 1999; ). Levando-
se em consideração a produção de citocinas em resposta às alterações no sistema imune
adaptativo na infecção pelo H. pylori, poderia se considerar também possível influência dessa
entidade patológica sobre o metabolismo ósseo.
Apesar dos estudos que mostram associação do H. pylori com doenças
cardiovasculares, neurológicas e pulmonares, pouco há sobre sua relação com metabolismo
ósseo. Embora FIGURA et al. (2005) tenham demonstrado aumento da prevalência de
osteoporose em homens, OZDEM et al. (2007) relataram que a infecção pelo H. pylori não se
acompanhou de mudanças significativas em marcadores de remodelação óssea em crianças.
Em estudo desenvolvido no LPDN, onde se procedeu ao estudo da densidade de células
parietais da mucosa oxíntica em mulheres na pós-menopausa com e sem osteoporose, não foi
possível evidenciar relação entre atrofia gástrica ou infecção pelo H. pylori e densidade
mineral óssea em coluna lombar ou fêmur (KAKEHASI et al., 2007). A prevalência de
infecção pelo H. pylori não foi estatisticamente significativa entre os grupos e, em verdade, a
densidade de células parietais encontrada foi maior no grupo de mulheres pós-menopausa
com osteoporose em relação ao grupo sem osteoporose.
Todos os dados discutidos acima colocam em evidência a participação do estômago no
metabolismo do cálcio e provável relação com a densidade mineral óssea, embora por
mecanismos ainda não totalmente esclarecidos. Essa participação pode dever-se não só pela
influência na absorção do cálcio e da vitamina D, mas também pela possível produção de um
peptídeo capaz de influenciar o metabolismo ósseo, impedindo a reabsorção óssea ou
38
aumentando a incorporação do cálcio nos ossos. A diminuição da população de células
parietais, resultado final do processo inflamatório local presente na gastrite auto-imune, ou
associada à presença do H. pylori, bem como as alterações inflamatórias sistêmicas
decorrentes dessa infecção, poderiam também se associar a alterações na densidade mineral
óssea.
Outro importante aspecto do estudo da atrofia da mucosa gástrica é a relação que se
admite existir com o câncer gástrico. O câncer gástrico é o quarto tipo mais freqüente entre as
neoplasias e o segundo em número de mortes, com incidência variando de 7,5 a 95,5 casos
para cada 100.00 habitantes (KELLEY, 2003). O Japão apresenta elevada incidência deste
tipo de neoplasia (CORREA et al, 2004) e, embora os números de incidência e mortalidade
mostrem tendência decrescente no mundo, o número absoluto de casos aumenta anualmente.
Isso de deve, em parte, ao aumento populacional em países com elevada prevalência para
neoplasia gástrica, como é o caso do Brasil (PARKIN, 2001; ARAÚJO-FILHO et al., 2006).
O tipo histológico mais freqüente é o adenocarcinoma (90% dos casos), dividindo-se
em duas categorias: o tipo intestinal, mais freqüente e que mostra formação glandular à
semelhança do adenocarcinoma colônico, e o tipo difuso, que infiltra a mucosa gástrica sem
mostrar formações glandulares (LAUREN, 1965). Em qualquer dos dois casos a
sintomatologia é escassa e o diagnóstico, muitas vezes, tardio. Apesar das possibilidades
terapêuticas, a sobrevida estimada, quando as células neoplásicas ultrapassaram a camada
muscular própria, é de 20% em cinco anos (BOWLES, 2001).
Acredita-se que o desenvolvimento do carcinoma gástrico do tipo intestinal ocorra
através de processo seqüencial evolutivo de lesões precursoras, que resultam da interação
entre fatores ambientais, fatores próprios do hospedeiro, e agente infeccioso (Helicobacter
pylori) (CORREA, 2004). Entre os fatores de risco estão: idade avançada, baixo nível sócio-
econômico, presença de anemia perniciosa, pólipos adenomatosos gástricos, doença de
Ménétrier, dieta rica em alimentos em conserva ou consumo de alimentos com alto teor de
sal, e dieta pobre em frutas e vegetais frescos. História familiar, mesmo quando controlada
para a presença do H. pylori, representou ser fator de risco, sugerindo componente genético
associado à doença.
Ainda em relação ao hospedeiro, sabe-se que polimorfismos genéticos presentes em
indivíduos infectados podem determinar particularidades na resposta imune inata ao H. pylori
e com isso aumentar o risco ao câncer gástrico. Exemplos incluem a expressão aumentada das
moléculas de reconhecimento intracelular NOD1 e NOD2 (nucleotide-binding
39
oligomerization domain) e da cicloxigenase 2 (COX-2) nas células epiteliais gástricas
(MOSS, 2007). Outro polimorfismo genético associado ao câncer gástrico foi o relacionado
ao receptor de lipopolissácarides (LPS) chamado Toll 4 (TLR4) presentes nas células do
sistema inato do hospedeiro (HOLD, 2007). De interesse é o estudo sobre a produção de
interleucina 1β (IL-1β), citocina inflamatória com ação inibitória sobre a produção ácida
gástrica, evidenciando que indivíduos portadores de polimorfismo pró-inflamatório têm risco
para câncer gástrico aumentado em duas a três vezes (EL-OMAR et al., 2000). A associação
de variantes alélicos para IL-1β, IL-10, e fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa),
determinam risco 27 vezes maior para câncer gástrico (EL-OMAR et al., 2003).
Com a descoberta e associação entre H. pylori e inflamação gástrica, grande
conhecimento sobre a carcinogênese gástrica foi adquirido e, em 1994, a Agência
Internacional para Pesquisa em Câncer passou a considerar a bactéria como carcinógeno
humano (INTERNATIONAL AGENCY FOR RESEARCH ON CANCER - IARC, 1994)
(IARC, 1994). Estima-se que 20% de todas as neoplasias estejam associadas a agentes
infecciosos e deste total, o H. pylori responde por um quarto dos casos (PARKIN, 2006).
Ainda mais especificamente, este microrganismo relaciona-se a 65% dos casos de câncer
gástrico.
Desde a primeira metade do século XX estudos em espécimes de tecido gástrico
mostraram maior prevalência de inflamação em exemplares de lesões neoplásicas em relação
àqueles de indivíduos com úlcera péptica. A infecção pelo H. pylori é responsável por
aproximadamente 90% das gastrites, sendo que por volta da quinta década de vida estima-se
que mais da metade dos indivíduos apresentem achados de gastrite (SIURALA et al, 1968).
Recente estudo demonstrou que a gastrite desenvolvida em gerbils (Meriones
unguiculatus, também conhecido como esquilo da Mongólia) após a infecção por cepa de H.
pylori cagA negativa foi menos intensa do que naqueles infectados por cepas cagA positivas
(FRANCO et al., 2008). Além disso, o risco de desenvolvimento de neoplasia se relacionou
positivamente e de forma independente à infecção por cepas cagA e OipA positivas. No
Brasil, o estudo de QUEIROS et al (1998) em 119 pacientes com carcinoma gástrico e
controles, encontrou associação entre a variante cagA do H. pylori e o carcinoma distal do
estômago, tanto do tipo intestinal quanto difuso, para homens e mulheres. Outro estudo
brasileiro, de CABRAL et al. (2006) mostrou que a expressão de marcadores protéicos de
apoptose em espécimes de biópsias gástricas de indivíduos infectados por cepas H. pylori
cagA positivas era maior do que naqueles H. pylori cagA negativos, suportando a associação
40
entre a infecção por espécie cagA positiva e a possibilidade de desenvolvimento de atrofia da
mucosa gástrica e neoplasia do estômago.
O modelo de carcinogênese na gastrite multifocal associada ao H. pylori proposta por
CORREA (1992) envolve a presença de processo inflamatório crônico na mucosa do
estômago cujo resultado seria o aumento do pH luminal, redução de nitrato, recrutamento de
células tronco derivadas da medula óssea e formação de óxido nítrico, molécula implicada em
modelos de carcinogênese (FIGURA 2). Várias substâncias relacionadas ao óxido nítrico
alteram irreversivelmente o DNA celular e o funcionamento mitocondrial das células
epiteliais, e induzem alteração na proliferação celular. Discute-se ainda que o H. pylori possa
se comportar de maneira invasiva e ser capaz de induzir a mutação genética de forma
independente da presença do processo inflamatório, cujo resultado seria a diminuição de
expressão de proteínas reparadoras do DNA e o acúmulo de mutações no gene supressor p53
(MOSS, 2007).
Outra alteração possivelmente associada à carcinogênese pelo H. pylori é a metilação
de genes supressores tumorais como, por exemplo, o gene da E-caderina, cuja mutação
associa-se a perda das junções celulares e desrregulação na proliferação celular (NAKAJIMA
et al, 2006).
Histologicamente, a tradução desse processo na mucosa gástrica é a presença evolutiva
em cascata das alterações de atrofia, metaplasia, displasia, culminando com transformação
neoplásica. À perda glandular segue-se a metaplasia do epitélio remanescente por células com
fenótipo intestinal (metaplasia tipo I), nas fases iniciais com características de intestino
delgado e, posteriormente, por células de epitélio colônico (metaplasias tipo II e III).
41
FIGURA 2. Seqüência das alterações histopatológicas da mucosa gástrica e dos fatores
relacionados ao desenvolvimento do adenocarcinoma gástrico, adaptado de Pelayo Correa,
1992.
De acordo com a coloração por imuno-histoquímica para mucinas produzidas pelos
diferentes tipos celulares, a metaplasia gástrica podem ser dividida em completa e incompleta,
sendo esta última frequentemente encontrada nos arredores das espécimes de biópsias de
neoplasia gástrica. Também a presença de metaplasia pseudo-antral na mucosa oxíntica está
relacionada ao desenvolvimento de câncer gástrico, principalmente quando essas células com
fenótipo antral expressam o peptídeo espasmolítico (SPEM – spasmolitic polypeptide
expressing metaplasia) (YAMAGUCHI et al., 2002). Quando as células passam a exibir
Dieta?
Sal
Gastrite antral
Recrutamento de cˇlulas tronco Espˇcimes reativas oxida tivas
Supercrescimento bacteriano
Redu¨‹o de nitrato
Aumento pH g‡strico Perda produ¨‹o de fatores
reguladores crescimento celular
H. pylori:
Muta¨›es
Inativa¨‹o supressores tumorais
Aumento de metaloproteinases
C‰ncer g‡strico
Displasia
Metaplasia intestinal
Gastrite atr—fica
Gastrite multifocal
Inflama¨‹o cr™nica
Infec¨‹o pelo H. pylori
Mucosa g‡strica normal
42
atipias nucleares e desarranjo arquitetural, lembrando estruturas tubulares irregulares, tem-se
a displasia. Não há ainda invasão da membrana basal, a partir da qual se tornam carcinomas
invasivos.
De grande interesse no estudo da carcinogênese gástrica são as evidências do estudo
experimental de neoplasia gástrica induzida pelo H. pylori em linhagem murina C57BL/6.
Demonstrou-se que a inflamação crônica leva a injúria tecidual e atrofia mucosa, o que, com
o tempo, culmina com à falência das células-tronco periféricas em reparar danos celulares. A
isso segue-se estímulo para o recrutamento de células-tronco derivadas da medula óssea. A
permanência dessas células num ambiente com elevado nível de citocinas e fatores de
crescimento faz com que, embora mantenham sua capacidade de diferenciação, tornem-se
deficitários os mecanismos de regulação de crescimento celular, e essa linhagem primitiva se
envolve no processo metaplasia-displasia-neoplasia (CORREA et al., 2007).
Ainda que o modelo descrito acima seja atualmente considerado a evolução natural do
câncer gástrico, associando o H. pylori à neoplasia do estômago, os resultados histológicos e
conseqüências epidemiológicas da erradicação da bactéria em relação ao câncer gástrico são
temas de controvérsia (OHKUSA, 2004). O estudo de LU et al. (2005) mostrou que a
erradicação do H. pylori ocasionou reversão significativa do grau de atrofia nos pacientes
tratados, num período de seguimento de três anos e, da mesma forma, após a erradicação da
bactéria em pacientes com doença do refluxo gastroesofágico, observou-se melhora
quantitativa do componente glandular oxíntico no estudo de VAN GRIEKEN et al. (2001).
Por outro lado, o maior estudo sobre o tema, com mais de três mil indivíduos chineses sob
risco para câncer gástrico seguidos por sete anos, mostrou redução da taxa de câncer gástrico
de 2,4% para 1,7% nos indivíduos nos quais a bactéria foi erradicada, embora sem
significância estatística (YOU et al., 2006).
Além da questão sobre os resultados da erradicação do H. pylori sobre o risco de
desenvolvimento de neoplasia gástrica, a presença de atrofia gástrica parece ser essencial
como lesão precursora do câncer gástrico tipo intestinal, de forma não dependente da infecção
pela bactéria (ZAVROS et al.. 2005). O estudo randomizado de WONG et al. (2004) mostrou
que a erradicação se relacionou a menor risco de desenvolvimento de neoplasia somente nos
casos em que não estavam presentes atrofia e metaplasia gástrica. Adicionalmente, o estudo
de TAKE et al. (2007), embora utilizasse escore endoscópico para o diagnóstico e gradação
de atrofia da mucosa gástrica, relacionou o desenvolvimento de neoplasia gástrica à
intensidade da atrofia gástrica presente anteriormente ao tratamento de erradicação do H.
pylori. De maneira semelhante, o Consenso de Maastricht para o tratamento do H. pylori
43
recomenda que a erradicação da bactéria com vistas à prevenção da neoplasia gástrica tem
indicação mais valiosa quando ainda não estão presentes lesões pré-neoplásicas (atrofia,
metaplasia e displasia) (MALFERTHEINER, 2007). Consequentemente e, levando-se em
consideração que mais de 50% da população mundial está infectada, torna-se relevante todo
esforço para o estabelecimento de métodos de seleção adequada de indivíduos que se
beneficiariam da erradicação bacteriana.
Estima-se que o risco de desenvolvimento de câncer gástrico em dez anos seja de 4%
para homens e de 17% para mulheres, respectivamente, segundo a presença de atrofia grave
da mucosa gástrica oxíntica (SIPPONEN et al., 1985). As taxas anuais de progressão da
atrofia gástrica, relacionada ou não à anemia perniciosa, para neoplasia variam de 0% a 1,8%,
e estão relacionadas, entre outros fatores, à extensão da lesão atrófica na mucosa (de VRIES
et al., 2007).
Uma coorte japonesa com 6983 participantes seguidos por 4,7 anos avaliou a relação
entre atrofia gástrica, infecção pelo H. pylori e desenvolvimento de câncer gástrico. A atrofia
gástrica foi definida segundo níveis de pepsinogênio e relação pepsinogênio I/II e foram
realizadas endoscopias digestivas anualmente. Os pacientes foram agrupados em quatro
grupos segundo a presença ou ausência do H. pylori e a presença ou não de atrofia.
Evidenciou-se relação entre risco para câncer gástrico e atrofia da mucosa gástrica
independente da infecção pelo H. pylori. A incidência de câncer gástrico em pacientes com
atrofia da mucosa gástrica, H. pylori negativos foi de 1,8% ao ano para homens, enquanto
pacientes infectados pela bactéria e níveis normais de pepsinogênio mostraram menor risco
para o desenvolvimento de neoplasia gástrica, de 0,4% ao ano, semelhante ao risco do grupo
de indivíduos sem atrofia e H. pylori negativos (0,3% ao ano) (WATABE et al., 2005). Um
outro estudo, de TAKE et al. (2007) avaliou o desenvolvimento de câncer gástrico em
pacientes com doença péptica gástrica ou duodenal que foram submetidos ao tratamento para
o H. pylori, divididos em curados ou com infecção persistente. Embora utilizasse critério de
atrofia baseado num escore de achados endoscópicos, o acompanhamento mostrou que a
incidência de câncer gástrico somente ocorreu naqueles indivíduos que apresentavam atrofia
grave à endoscopia inicial, sugerindo que a erradicação da bactéria seria idealmente benéfica
em estágio anterior ao da extensão da atrofia da região antral para o corpo gástrico.
Utilizando uma linhagem de animais geneticamente deficientes na produção de
gastrina, trabalho de ZAVROS et al. (2005) também mostrou relação entre atrofia gástrica e
desenvolvimento de neoplasia gástrica. A gastrina, produzida pelas células G antrais, detém a
capacidade de estimular ambas a secreção ácida gástrica e a proliferação dos componentes
44
glandulares oxínticos. Neste modelo os animais que não produziam gastrina desenvolviam
gastrite por supercrescimento bacteriano, com conseqüente atrofia dos componentes
glandulares oxínticos e, finalmente, transformação neoplásica. Os resultados mostraram ainda
ausência de expressão do supressor tumoral RUNX3 nos tecidos neoplásicos, aumento da
expressão do marcador tumoral STAT3 fosforilado, bem como aumento da expressão de INF
gama (citocina inflamatória responsável pela ativação do STAT3), o que não pôde ser
observado nos animais controles. Sugere-se que inflamação e atrofia da mucosa gástricas
seriam responsáveis pela transformação fenotípica dos componentes celulares na progressão
ao câncer gástrico.
Assim, a atrofia gástrica, definida como perda de tecido glandular especializado,
parece relacionar-se de maneira mais consistente à neoplasia do estômago do que a metaplasia
intestinal, constituindo etapa crucial da cascata de Correa para o desenvolvimento do câncer
gástrico (CORREA, 1992). Foi demonstrado que a maioria dos casos de neoplasia intestinal
do estômago ocorrem em áreas de atrofia da mucosa gástrica que, através de uma frente de
avanço, ultrapassaram proximalmente a região do antro, atingindo o corpo gástrico (EL-
ZIMAITY et al., 2002). Como conseqüência da atrofia gástrica, a diminuição da massa de
células parietais na mucosa do corpo gástrico levaria a deficiência de secreção, por essas
células, de fatores de sinalização de crescimento e diferenciação que favorecem a proliferação
de progenitores gástricos indiferenciados possivelmente relacionados ao desenvolvimento do
câncer gástrico. Por exemplo, a proteína sonic Hedgehog, membro de uma família de
proteínas que exerce funções regulatórias sobre o crescimento e diferenciação de diversos
tipos celulares durante a embriogênese, seria um dos fatores perdidos durante a evolução da
atrofia da mucosa gástrica, uma vez que estudos animais e em humanos mostraram não
somente a expressão dessa proteína pelas células parietais como também uma menor
densidade de coloração dessa proteína utilizando-se imuno-histoquímica em indivíduos com
gastrite atrófica (SHIOTANI et al., 2005).
ZAVROS et al. (2007) mostraram que o tecido gástrico atrófico e neoplásico é
deficiente em pepsina A, responsável pela clivagem da proteína sonic Hedgehog à sua forma
ativa, levando à perda de um dos fatores que participam da manutenção fenotípica das células
secretoras de ácido da mucosa oxíntica gástrica. Além disso, a produção diminuída de ácido
clorídrico que decorre da menor densidade de células parietais, eleva o pH intragástrico,
favorecendo o supercrescimento bacteriano e a produção de nitrosamina através da conversão
de nitrato em nitrito, substância carcinogênica. O ambiente menos ácido não é favorável à
sobrevivência do H. pylori, mas torna possível o cultivo de outras espécies que podem ser
45
causa de alterações patológicas na mucosa gástrica semelhantes àquelas causadas pelo H.
pylori (FOX et al., 2007).
Outra evidência da relação entre atrofia gástrica e câncer gástrico ocorre pela
constatação de que pacientes com anemia perniciosa, cuja atrofia do corpo gástrico é
acentuada, têm risco de desenvolvimento de câncer gástrico três a cinco vezes maior do que o
da população geral (BRINTON, 1989; HSING et al., 1993). O risco para tumor carcinóide
gástrico numa coorte de 2021 homens e 2496 mulheres com diagnóstico de anemia perniciosa
e seguidos por até vinte anos, foi 13 vezes maior do que ao da população geral (HSING,
1993). Os mecanismos ainda não estão totalmente elucidados, mas a acloridria, ao favorecer a
conversão de nitratos em nitritos, e a hipergastrinemia, ao exercer influência trófica positiva
sobre as células ECL, podem desempenhar papel neste processo de carcinogênese.
Pacientes com atrofia gástrica são frequentemente assintomáticos e estão sob risco de
desenvolverem neoplasia gástrica. Os achados observados à endoscopia digestiva e a análise
histopatológica das amostras de tecido coletadas durante o procedimento são largamente
empregadas para o estudo das patologias gástricas e perto de 100% dos casos de neoplasia
gástrica podem ser diagnosticados através dessa combinação propedêutica. A despeito disso,
há dificuldade no diagnóstico e gradação em relação à atrofia gástrica, principalmente
levando-se em conta tratar-se de processo evolutivo de comportamento lento. Até o presente
momento, o método mais confiável para o diagnóstico de atrofia gástrica é a análise
histopatológica de fragmentos da mucosa gástrica coletados durante a endoscopia digestiva.
Na tentativa de melhor entender esse processo e permitir o diagnóstico individual adequado, a
classificação atualizada de Sydney (DIXON, 1996) descreve aspectos histopatológicos das
gastrites, combinando informações topográficas, etiológicas e morfológicas da mucosa
gástrica. Utiliza escala visual para gradação de variáveis: presença e intensidade do H. pylori,
polimorfonucleares (atividade), mononucleares (inflamação crônica), atrofia glandular e
metaplasia intestinal. Apresenta boa reprodutibilidade para os critérios de inflamação e
metaplasia, não ocorrendo o mesmo para a atrofia glandular (EL-ZIMAITY et al, 1996;
GUARNER et al, 1999). Apesar da diminuição a variação inter-observador ter sido uma das
finalidades da introdução da escala visual de gradação para atrofia, esse aspecto ainda não
dispõe de critérios consensuais de determinação e quantificação. Adicionalmente, diferenças
geográficas e étnicas, e variações topográficas na localização e gravidade da atrofia glandular,
podem levar a dificuldade no estudo e interpretação da atrofia. Várias alternativas de estudos
morfológicos mais objetivos têm sido propostas, mas por motivos de consumo de tempo ou
necessidade do emprego de tecnologia indisponível em escala mundial, elas ainda não têm
46
utilização corrente na prática clínica. O trabalho de VAN GRIEKEN et al. (2001) propõe
inclusive modificação na classificação de Sydney para os diferentes graus de atrofia oxíntica
ao unir os diagnósticos histopatológicos de atrofia ausente e discreta, passando a considerar
somente três classes: ausente, moderada e acentuada. Por sua vez, RUGGE et al. (2002)
acrescentam subdivisão ao item atrofia, segundo a presença ou ausência de metaplasia
intestinal. O grupo do mesmo autor (RUGGE et al., 2007), ao considerar a importância da
aplicação clínica do diagnóstico histológico das gastrites e levando-se em conta a localização
e intensidade da atrofia da mucosa gástrica, propõe a classificação das alterações
histopatológicas da mucosa gástrica através de sistema de estadiamento denominado sistema
OLGA (Operative Link on Gastritis Assessment) para o estudo das gastrites. Esse sistema de
escores intenciona fornecer informações prognósticas à prática clínica ao demonstrar que as
condições benignas permanecem agrupadas nos estádios I e II e as pré-malígnas e malignas
nos estádios III e IV.
Mesmo considerando que individualmente as conseqüências da divergência sobre o
diagnóstico da atrofia gástrica possam não ser graves, a falta de uniformidade dos estudos
compromete a validação no que se refere ao estudo da evolução das alterações atróficas da
mucosa gástrica, e suas relações com infecção pelo H. pylori e câncer gástrico. Um exemplo
da variação metodológica é o VAN GRIEKEN et al. (2001), que ao estudar a reversibilidade
da perda glandular após a erradicação do H. pylori, utiliza método morfométrico de
quantificação glandular em detrimento da classificação revisada de Sydney.
Outra medida utilizada para avaliação da presença de atrofia da mucosa gástrica é a
dosagem sérica de produtos protéicos da mucosa oxíntica. Os pepsinogênios I (PGI) e II
(PGII) são precursores da pepsina secretados na luz gástrica, sendo que apenas 1% do total
produzido é encontrado na circulação sanguínea (MUKOUBAYASHI et al., 2006).
Diferentemente do PGII, que é produzido no antro, no duodeno, e nas glândulas de Brunner, o
PGI é secretado exclusivamente pelas células principais e mucosas do corpo gástrico e sabe-
se que seus níveis séricos refletem a morfologia e função da mucosa oxíntica, como também a
presença de processo inflamatório. Na presença de atrofia glandular oxíntica acompanhada de
metaplasia intestinal, a presença da atividade da mucosa metaplásica ocasiona aumento na
produção do PGII, o que leva a diminuição da relação PGI/PGII, taxa que contitui outra
medida utilizada na avaliação de atrofia da mucosa gástrica.
A utilização da dosagem do pepsinogênio sérico como marcador de atrofia gástrica foi
introduzida em 1982 por SAMLOFF (1982) e, desde então, estudos avaliam sua utilização
isolada como método não invasivo para a detecção de atrofia da mucosa gástrica e como
47
preditor do risco de câncer gástrico (SITAS et al., 1993; YOSHIHARA et al., 1998;
BODGER et al., 2001; DINIS-RIBEIRO et al., 2004)). Assim, no Japão, desde o início dos
anos 90 a dosagem do pepsinogênio faz parte do programa de screening para o câncer
gástrico. Ocorre que, mesmo naquele país com alta prevalência de neoplasia do estômago, 30
a 40% dos casos apresentam níveis normais de pepsinogênio, e assim, considera-se que a
melhor forma de se rastrear o câncer gástrico seja utilizar a dosagem sérica do peptídeo em
associação com o exame radiográfico contrastado com bário (OHATA et al., 2005).
No estudo da atrofia da mucosa gástrica e dos níveis séricos de pepsinogênio em
relação ao risco de câncer gástrico, ainda permanecem indefinições. Como os estudos
mostram baixo valor preditivo positivo quando consideravam como resultado normal do
pepsinogênio sérico até 100 ng/ml, alguns autores passaram a utilizar valores de referência
mais baixos. Por isso são encontrados valores de ponto de corte (“cut-off values”) tão
diferentes para a dosagem do pepsinogênio I, como 50, 70 ou 100 ng/ml, o mesmo ocorrendo
para a relação PGI/PGII (SITAS et al., 1993; YOSHIHARA et al., 1998; OHATA et al.,
2005; OHATA et al., 2004; QIN et al., 2007) (TABELA 1). Questão ainda indefinida refere-
se ao fato de que a maioria dos estudos que utilizam o pepsinogênio como marcador de atrofia
da mucosa gástrica foram realizados no Japão, e a validade da utilização do pepsinogênio em
outros países não está estabelecida.
TABELA 1
Valores de referência para pepsinogênio sérico, relação PGI/PGII, e sensibilidade e
especificidade dos testes utilizados em estudos sobre a relação da atrofia gástrica com gastrite
atrófica ou risco para câncer gástrico.
Autor, ano Pepsinogênio
I
PGI/PGII Sensibilidade/Especificidade
(%)
SITAS et al., 1993 ND
≤1,5
25/94
YOSHIHARA et al., 1998
≤50 µg/l ≤3
ND
OKSANEN et al., 2000
≤28 µg/l
ND 81/99
SANDULEANU et al., 2003 ND
≤2,5
62/95
OHATA et al., 2004
≤70 µg/l ≤3
ND
OHATA et al., 2005
≤50 µg/l ≤3
69/80
CAO et al., 2007
≤82,3 µg/l ≤6
85,9/75,1
PGI/PGII: relação pepsinogênio I/pepsinogênio II, ND: não disponível
48
Como em resposta à atrofia do corpo gástrico ocorre hipergastrinemia por hiperfunção
das células G antrais, a dosagem sérica de gastrina também tem sido utilizada como marcador
de atrofia, com sensibilidade e especificidades variáveis, em geral menores do que a da
relação pepsinogênio I e II (OKSANEN et al., 2000, SANDULEANU et al., 2003).
Uma vez que a infecção pelo H. pylori, além das alterações inflamatórias e atróficas
na mucosa gástrica, é responsável por induzir a alterações inflamatórias sistêmicas, incluindo
a produção de citocinas inflamatórias, a dosagem de IL-8 também foi relacionada à presença
de atrofia gástrica. O estudo de SANDULEANU et al. (2003) mostrou que associação da
dosagem de IL-8 com a taxa PGI/PGII apresentava acurácia de 91% em identificar casos de
atrofia do corpo gástrico.
A ghrelina é um peptídeo de 28 aminoácidos, isolada inicialmente de estômagos de
ratos e posteriormente de humanos (KOJIMA et al, 1999). Está envolvida com a regulação da
secreção do hormônio do crescimento, ingestão alimentar, reserva lipídica e controle do peso
(MURRAY, 2003), e sua principal fonte produtora parece ser a célula A/X like da mucosa
oxíntica (DATE, 2000). O estreito contato dessas células com as células parietais e a
descrição da diminuição dos níveis séricos de ghrelina nos casos de gastrite atrófica por H.
pylori (SHIOTANI, 2005) levaram a investigação da possível utilização dos níveis séricos
desse peptídeo como marcador de atrofia gástrica. Assim, o trabalho comparativo de CHECCI
et al. (2007) entre ghrelina, pepsinogênio, gastrina e anticorpo anti-célula parietal em
pacientes com gastrite auto-imune mostrou que a ghrelina sérica se correlacionou
negativamente com a intensidade da atrofia da mucosa oxíntica e foi superior em
sensibilidade e especificidade em relação aos demais marcadores.
Conclui-se que, embora exista clara relação entre atrofia gástrica e risco de
desenvolvimento de neoplasia gástrica, os métodos atuais de avaliação das alterações atróficas
da mucosa gástrica não são, por variados motivos, satisfatórios. Assim, estudos que visem ao
aprimoramento do estudo da atrofia da mucosa gástrica são necessários para melhor definição
de sua evolução natural e inter-relações com as diferentes cepas H. pylori, podendo auxiliar
na construção ou validação de métodos de identificação e acompanhamento de indivíduos em
risco para câncer gástrico.
49
6. PACIENTES E MÉTODO
6.1 PACIENTES
Os pacientes incluídos neste estudo transversal foram selecionados de duas maneiras.
Grupo 1: Constituiu-se de pacientes atendidas no Ambulatório de Dispepsia do
Serviço de Gastroenterologia e no Ambulatório de Reumatologia, ambos funcionando no
Anexo Bias Fortes do Hospital das Clínicas da UFMG, situado à Alameda Álvaro Celso, 175.
Os atendimentos foram agendados conforme demanda espontânea ou por
encaminhamento médico. As queixas que motivaram as consultas e os encaminhamentos
foram a presença de dispepsia e o próprio conhecimento da realização deste estudo por parte
das pacientes. Após avaliação clínica com entrevista padronizada, análise dos critérios de
inclusão e exclusão, as pacientes foram orientadas sobre os objetivos do estudo, bem como
todos os procedimentos envolvidos em suas etapas e, em conformidade com termo de
consentimento livre e esclarecido, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital
das Clínicas da UFMG (Anexo 1), deram seu consentimento por escrito em participar da
pesquisa.
Os critérios de inclusão foram:
1. Pacientes do sexo feminino;
2. Pacientes com idade igual ou superior a 50 anos;
3. Pacientes há mais de cinco anos sem apresentar fluxos menstruais;
4. Pacientes em concordância em participar do estudo e que tivessem assinado o
Termo de Consentimento Livre e Esclarecido.
Os critérios de exclusão foram:
1. Tabagismo;
2. Etilismo;
3. Uso de terapia de reposição hormonal;
4. Uso de anticonvulsivantes;
5. Uso de medicação bloqueadora da secreção ácida gástrica;
50
6. Uso de medicação antiinflamatória não-hormonal nos últimos três meses;
7. Uso de glicocorticóide oral em dose superior à 7,5 mg, por mais de 30 dias em
qualquer época anterior ao estudo;
8. Uso de suplemento de cálcio, vitamina D ou seus metabólitos ativos (alfacalcidol
ou calcitriol);
9. História de distúrbio tireoidiano ou uso de hormônio tireoidiano exógeno;
10. Presença de úlcera péptica ativa ou em cicatrização à endoscopia digestiva alta;
11. História de doença neoplásica ou síndrome de má-absorção intestinal;
12. Uso de diurético tiazídico.
As pacientes deste grupo foram atendidas no período de março de 2002 a março de
2006 e encaminhadas inicialmente para realização de teste respiratório e endoscopia digestiva
alta, ambos no Instituto Alfa de Gastroenterologia no Hospital das Clínicas da UFMG. Após
esta etapa, as pacientes foram encaminhadas para o Instituto de Patologia Clínica Hermes
Pardini, à Rua Aimorés, no. 66, para coleta de amostra de sangue e exame de densitometria
óssea. Após a realização de todas as etapas do estudo, as pacientes foram solicitadas a
retornarem para nova consulta médica para entrega dos resultados dos exames e orientação
conforme necessário.
Grupo 2: O segundo grupo de pacientes foi constituído retrospectivamente a partir
dos arquivos de laudos do setor de Anatomia Patológica do Instituto Alfa de Gastroeterologia
– Hospital das Clínicas da UFMG que apresentavam gastrite crônica com graus variáveis de
atrofia da mucosa do corpo e mucosa antral preservada ou com alterações inflamatórias
discretas. Assim, foram selecionados 194 casos de pacientes que realizaram endoscopia
digestiva alta com biópsias gástricas do antro e corpo, entre os anos de 2004 a 2006, por
indicação de sintomas dispépticos ou para fins de propedêutica. Novos fragmentos das
biópsias endoscópicas foram novamente coradas pela hematoxilina-eosina (HE) e avaliadas
por um único patologista. Independente do sexo ou idade, os pacientes foram então
convidados a participar do estudo através da localização pelos informes obtidos no setor de
marcação de exames do Instituto Alfa ou do Serviço de Arquivo Médico (SAME) do Hospital
das Clínicas da UFMG. Os pacientes foram convidados a comparecer a uma entrevista
51
padronizada realizada no 5º. Andar do Ambulatório Bias Fortes e foram esclarecidos sobre os
propósitos da pesquisa e encaminhados, após assinarem termo de consentimento, para a
realização do teste respiratório e para a coleta de amostra de sangue e densitometria óssea.
Todos os procedimentos estavam de acordo com a autorização do Comitê de Ética em
Pesquisa da UFMG (COEP n.º 479/04 de 15/12/2004) e da Diretoria de Ensino, Pesquisa e
Extensão do Hospital das Clínicas da UFMG (DEPE n.º 01/05 de 19/05/2005) (Anexo 2).
Após a realização de todas as etapas do estudo, as pacientes foram solicitadas a retornarem
para nova consulta médica para entrega dos resultados dos exames e orientação conforme
necessário. Neste estudo, somente foram incluídos os pacientes que tiveram o diagnóstico de
gastrite auto-imune caracterizado pela presença sérica do anticorpo anti-célula parietal, além
dos achados histopatológicos da mucosa gástrica caracterizados por atrofia da mucosa
oxíntica e antro preservado.
Neste grupo foram considerados critérios de exclusão as seguintes condições:
1. Tabagismo
2. Uso de anticonvulsivantes
3. Distúrbio tireoidiano não controlado (dose estável de medicação por pelo menos seis
meses antes do início do estudo)
4. Presença de úlcera péptica ativa ou em cicatrização à endoscopia digestiva alta
5. História de doença neoplásica ou síndrome de má absorção intestinal
6. Etilismo
7. Uso de vitamina D, cálcio ou seus metabólitos ativos
8. Ausência do anticorpo anti-célula parietal pela imunofluorescência indireta
6.2 AVALIAÇÃO LABORATORIAL
Uma amostra de sangue venoso foi colhida de cada paciente no Instituto Hermes
Pardini, obedecendo doze horas de jejum.
Na amostra de sangue foram realizados os seguintes exames:
1. Paratormônio – método quimioluminescência, valores de referência: entre 8 e 80
pg/mL
2. Vitamina B
12
– método quimioluminescência, valores de referência: entre 200 e
950 pg/mL
52
3. Fosfatase alcalina óssea - método imunoensaio por captura, valores de referência:
entre 11,6 e 43,4 U/L
4. Cálcio iônico - método do eletrodo seletivo com correção automática para a
variação do pH, valores de referência: entre 1,17 e 1,32 mmol/L
5. Fósforo - método cinético U.V., valores de referência: entre 2,5 e 4,8 mg/dL
6. Anticorpo anti-célula parietal – método imunofluorescência indireta (DTS, África
do Sul), resultados foram descritos como reagente (positivo) e não reagente
(negativo), sendo o ponto de corte a diluição de 1:40.
7. Hemograma - método contagem automatizada através de citometria de fluxo e
hematoscopia.
8. Gastrina sérica - método do radioimunoensaio (I
125
, contador gamma – Wizard),
valor de referência: menor que 108 pg/mL. Realizada em todos os pacientes do
grupo com gastrite auto-imune e em 14 pacientes do grupo 1.
6.3 ENDOSCOPIA DIGESTIVA ALTA
Todos os exames endoscópicos foram realizados no Instituto Alfa de
Gastroenterologia, sempre por profissional gastroenterologista do serviço e seguindo um
mesmo protocolo. À aplicação de anestésico, para facilitar a introdução do endoscópio,
seguiu-se a administração endovenosa de 2,5 mg de midazolam. Os aparelhos utilizados
foram os endoscópios do Serviço de Endoscopia do Instituto Alfa de Gastroenterologia, das
marcas Fujinon e Olympus, utilizando pinça padrão para biópsia endoscópica.
Foram colhidos, sempre nesta ordem, três fragmentos da mucosa antral (um distal, um
proximal e um para teste da urease) e oito fragmentos da mucosa oxíntica, compreendendo
quatro da grande curvatura e quatro da parede posterior. O material foi colocado em frascos
separados contendo formol tamponado ou líquido de Bouin, segundo a identificação das
regiões do corpo ou antro, e levados para o Laboratório de Patologia Digestiva e
Neuroendócrina (LPDN) imediatamente para início do processamento.
53
6.4 AVALIAÇÃO HISTOPATOLÓGICA DA MUCOSA GÁSTRICA
No grupo 1 os fragmentos foram fixados em formol tamponado ou líquido de Bouin
por quatro a seis horas, lavados em álcool 70% e mantidos nesta solução por 18 a 24 horas até
o início do processamento para inclusão em parafina. Para esta última finalidade os
fragmentos, sempre que possível, eram orientados através de exame em lupa estereoscópica
Stemi SV 11 (Zeiss, Alemanha) para melhorar a obtenção de cortes histológicos de 4 µm
contendo todos os elementos da mucosa gástrica, quais sejam: epitélio de revestimento, região
foveolar, camada glandular e muscular da mucosa, esta última representada inteiramente ou
apenas pela presença dos feixes musculares mais superficiais localizados na base da região
glandular. No grupo 2 foram confeccionadas novas lâminas contendo os fragmentos de tecido
gástrico a partir dos blocos de parafina existentes no Instituto Alfa de Gastroenterologia.
Todas as lâminas foram rotuladas de acordo com os registros padronizados do LPDN e
separadas por região. Os cortes histológicos do antro e corpo corados pela hematoxilina e
eosina (HE) de todos os pacientes foram avaliados por patologista (AJAB) quanto à presença
e aos graus de inflamação, atrofia, metapalsias intestinal e pseudo-antral, seguindo-se as
recomendações do sistema Sydney revisado para classificação de gastrites (DIXON et al.,
1996). Esta classificação atualizada recomenda a utilização de uma escala visual para
gradação da atrofia, classificando-a em ausente, discreta, moderada ou intensa. A atrofia leve
foi definida como perda glandular oxíntica equivalente ao terço superficial da mucosa. A
rarefação glandular mais evidente, com perda de glândulas oxínticas abrangendo dois terços
da mucosa examinada, estendendo-se até o colo glandular, foi considerada atrofia moderada.
A atrofia acentuada foi definida como perda de todo ou quase todo componente de glândulas
oxínticas, atingindo toda a espessura da mucosa e adelgaçamento da mucosa oxíntica. A
avaliação da presença e intensidade de infiltrado inflamatório na mucosa antral e oxíntica
através da coloração pelo HE, foi feita considerando-se os seguintes aspectos: (a) presença de
polimorfonucleares e mononucleares na lâmina própria, graduando-se a intensidade em
discreta, moderada e intensa; (b) distribuição do infiltrado na mucosa (superficial, metade
superior, ou ocupando toda a mucosa); (c) presença de metaplasia intestinal; (d) presença da
bactéria H. pylori (DIXON et al., 1996).
54
6.5 AVALIAÇÃO DA POPULAÇÃO DE CÉLULAS PARIETAIS DA MUCOSA
GÁSTRICA
Utilizou-se para a demonstração de células parietais na mucosa oxíntica o método da
imunoperoxidase indireta com anticorpo monoclonal específico (FERREIRA et al., 1989;
BARBOSA et al., 2001). O método inclui várias etapas de incubação dos cortes com
anticorpos e, finalmente, a revelação. Entre cada uma das etapas os cortes foram lavados com
PBS 0,01 M. As diferentes etapas de incubação foram:
1. Tratamento dos cortes histológicos com soro normal de coelho, diluído a
1:50 em PBS-BSA 0,5%, para células parietais, e incubação das lâminas em
câmara úmida por 30 minutos;
2. Tratamento dos cortes histológicos com soro monoclonal (isotipo IgG2a)
5H7H8, diluído 1:8, que reage especificamente contra células parietais de
mamíferos, seguido de incubação em câmara úmida a 4°C pelo período de
18-24 horas;
3. Tratamento dos cortes histológicos com anticorpo de coelho
antitimoglobulinas de camundongo, conjugado com peroxidase (Dako
Corporation), diluído a 1:100 em PBS-BSA, e incubação em câmara úmida
por 30 minutos;
4. Três banhos consecutivos em tampão-fosfato 0,01 M, pH 7,2, por cinco
minutos cada e revelação em solução de diaminobenzidina (25 mg%) em
tampão fosfato 0,01 M, pH 7,2, com 0,03% de H
2
O
2
, por cinco minutos,
com controle ao microscópio;
5. Lavagem em tampão-fosfato 0,01 M, pH 7,2, e contra coloração com
hematoxilina diluída por 30 segundos, desidratação e montagem em bálsamo
do Canadá.
Posteriormente, o estudo da densidade glandular da mucosa oxíntica do grupo 1 foi
realizado nas lâminas coradas para células parietais, em microscópio binocular de luz, com
auxílio de ocular reticulada sempre pelo mesmo pesquisador (AMK), conforme esquema da
FIGURA 3. Em cada um dos fragmentos selecionados para a contagem de células parietais,
seguiu-se um mesmo procedimento: contagem das células marcadas com o anticorpo
55
específico dentro da abrangência de ocular reticulada que era movida perpendicularmente, a
partir da base da mucosa, em direção ao epitélio superficial, no aumento de 400X. Foram
contadas tantas colunas quantas foram possíveis, em cortes que apresentavam toda a
espessura da mucosa. A área foi então calculada considerando-se a altura da mucosa glandular
e a extensão percorrida pela ocular reticulada. Desta maneira, foi calculada a densidade de
células parietais (células/ mm
2
) em cada lâmina e, posteriormente, para cada paciente. No
grupo com gastrite auto-imune, pela intensa atrofia da mucosa gástrica, a presença das células
parietais foi avaliada pela segundo a escala padronizada no LPDN: a) presentes, numerosas;
b) presentes, pequenos aglomerados; c) presentes, raras; e d) ausentes.
Epitélio
2mm
Base
2mm
FIGURA 3. Método de contagem das células marcadas com o anticorpo específico utilizando
ocular reticulada movida perpendicularmente da partir da base da mucosa ao epitélio
superficial.
6.6 AVALIAÇÃO DA DENSIDADE MINERAL ÓSSEA
A densitometria óssea foi analisada sempre por um único profissional, tendo sido
realizada sempre no mesmo equipamento Lunar Prodigy (GE Medical System, Lunar
Radiation Corp., Madison, WI), e obtidas de todas as pacientes, medidas da densidade mineral
óssea da coluna lombar e fêmur proximal direito, expressas em g/cm
2
e em desvios-padrão em
relação à média da densidade mineral óssea da população jovem (T-score) e da população de
mesma faixa etária (Z-score). O diagnóstico de osteoporose foi feito de acordo com os
critérios da Organização Mundial de Saúde (OMS) (KANIS, 1994) que utiliza o valor do T-
escore: massa óssea normal até – 1 DP, osteopenia entre -1 e -2,5 DP, e osteoporose abaixo de
– 2,5 DP.
56
6.7 AVALIAÇÃO DA INFECÇÃO PELO HELICOBACTER PYLORI
O diagnóstico da infecção pelo H. pylori foi feito considerando-se positivos pelo
menos dois dos seguintes testes: método histológico, teste da urease (resultados: positivo ou
negativo após 48 horas) e teste respiratório (valor de referência: 4‰). A pesquisa do H. pylori
nos cortes de mucosa antral foi feita nos casos em que a mucosa apresentava sinais
inflamatórios, em locais de epitélio gástrico íntegro e sem metaplasia intestinal. Não se
encontrando a bactéria durante o exame histológico, procedeu-se a coloração pelo método
Giemsa para confirmação do resultado.
7. ANÁLISE ESTATÍSTICA
Os dados foram armazenados e analisados pelo programa estatístico SPSS 12.0
(Statistical Package for Social Sciences) para Windows, Chicago, IL, USA. Para avaliação de
diferenças entre freqüências foram utilizados os testes do qui-quadrado, Mann-Whitney e
exato de Fisher, e para avaliação de diferença entre variáveis contínuas foram utilizados os
testes T de Student e Kruskall-Wallis. Também foram utilizados os testes ANOVA e de
Spearman para a análise de correlação entre variáveis. O nível de significância considerado
foi p<0,05.
8. RESULTADOS
8.1 PACIENTES
O estudo incluiu 113 pacientes, sendo 81 (71,7%) no grupo 1 e 32 (28,3%) no grupo 2.
Os 81 pacientes do grupo 1 foram atendidas ambulatorialmente e incluídas no estudo de modo
consecutivo. Dos 194 casos selecionados a partir do laudo histopatológico de gastrite do
corpo com mucosa antral preservada, no período de março de 2004 a março de 2006, 32
pacientes que aceitaram participar e preencheram os critérios de inclusão do estudo, foram
incluídos no grupo 2. Do total, 103 (91,2%) pacientes eram do sexo feminino e 10 (8,8%)
pacientes do sexo masculino. A média de idade geral foi de 59,8 anos, variando de 26 a 79
anos. Em relação à raça, 70 (61,9%) pacientes foram classificados como faiodermas, 31
57
(27,4%) como leucodermas e 12 (10,6%) como melanodermas. Cinco pacientes do sexo
masculino, inicialmente selecionados através dos achados histopatológicos de atrofia grave da
mucosa oxíntica e antro preservado, não tiveram o diagnóstico de gastrite auto-imune
confirmado segundos os critérios estabelecidos para esse estudo, e foram alocados no grupo 1.
No grupo 1 setenta e seis pacientes (93,8%) eram do sexo feminino e a média de
idade para o grupo foi 62,1 ± 8,4 anos. Em relação à distribuição racial, 58 (71,6%) eram
faiodérmicos, 17 (21%) eram leucodérmicos, e seis (7,4%) eram melanodérmicos. Em relação
ao índice de massa corporal (IMC), a média foi de 26,8 ± 4,9 Kg/m
2
. Considerando-se que
todas as pacientes do sexo feminino tinham pelo menos cinco anos após a menopausa
segundo os critérios de inclusão, a média de idade em que ocorreu a menopausa foi de 48,4 ±
4,4 anos e a média de tempo decorrido após a menopausa foi de 14,6 ± 8,4 anos. Queixas
dispépticas estavam presentes em 47 (58%) dos pacientes. Vinte e sete (33,3%) pacientes
relataram praticar atividade física pelo menos duas vezes por semana. Quarenta (49,4%)
pacientes relataram fazer uso de pelo menos um copo de leite ao dia e 32 (39,5%) relataram
não consumir ao menos um copo ao dia. Cinco (6,1%) pacientes haviam sofrido fratura de
punho, e duas (2,4%) relataram fratura vertebral. Nenhuma paciente havia sofrido fratura de
quadril.
No grupo 2, composto por pacientes com gastrite auto-imune, vinte e sete pacientes
(84,4%) eram do sexo feminino e a média de idade para o grupo foi 54 ± 14,7 anos. Em
relação à distribuição racial, 14 (43,8%) eram faiodérmicos, 12 (37,5%) eram leucodérmicos,
e seis (18,8%) eram melanodérmicos. Em relação ao IMC, a média foi de 25,9 ± 6 Kg/m
2
.
Dezessete das 27 (63%) pacientes do sexo feminino do grupo 2 estavam no período pós-
menopausa, sendo a média de idade em que ocorreu a menopausa de 48,5 ± 4,0 anos e a
média de tempo decorrido após a menopausa de 14,2 ± 9 anos. Queixas dispépticas estavam
presentes em 16 (50%) dos pacientes, sendo a mais comum a pirose (31,3%), seguida de
empachamento pós-prandial (18,8%), e náuseas (18,8%). O diagnóstico de anemia perniciosa
havia sido feito anteriormente em 23 pacientes (72%), sendo que 24 (75%) estavam em uso de
vitamina B
12
oral ou parenteral. Dez (31,3%) pacientes tinham diagnóstico de hipertensão
arterial sistêmica, nove (28,1%) tinham hipotireoidismo, três (9,4%) tinham diabetes mellitus
(DM) tipo 2, e dois (6,3%) tinham vitiligo. Dez (31,3%) pacientes relataram fazer uso de pelo
menos um copo de leite ao dia e 17 (53,1%) relataram não consumir ao menos um copo ao
dia. Sete (21,9%) pacientes relataram praticar atividade física pelo menos duas vezes por
semana. Quatro (12,5%) pacientes estavam fazendo uso regular de medicação bloqueadora da
secreção ácida gástrica, sendo o omeprazol em um paciente e a ranitidina nos outros três.
58
Duas (6,2%) pacientes haviam sofrido fratura de punho. Nenhuma paciente relatou ter sofrido
fratura vertebral ou de quadril.
Não houve diferença entre os grupos com e sem gastrite auto-imune em relação à
ingesta de leite, atividade física, ou passado de fratura. Do mesmo modo, comparando-se os
dois grupos, não houve diferença significativa em relação ao IMC, idade da menopausa e
tempo transcorrido após a menopausa (p>0,05). Em relação à idade, os pacientes do grupo
com gastrite auto-imune eram mais jovens que os do grupo 1 (p = 0,005). Esses resultados são
mostrados na TABELA 2.
TABELA 2.
Características clínicas dos 113 pacientes do presente estudo divididos segunda a ausência
(Grupo 1) ou presença (Grupo 2) de gastrite auto-imune.
Grupo 1
(n=81)
Grupo 2
(n=32)
Sexo (feminino/masculino) * 76/5 27/5
Idade (anos)** 62,1 ± 8,4 54 ± 14,7
IMC (Kg/m
2
)* 26,8 ± 4,9 25,9 ± 6
Idade da menopausa (anos)*§ 48,4 ± 4,4 48,5 ± 3,9
Tempo após menopausa (anos)* § 14,6 ± 8,3 14,2 ± 9
Valores expressos em média ± DP, exceto variável sexo
*p>0,05, ** p=0,005, testes qui-quadrado e t de student
§ Excluídos cinco pacientes masculinos em cada grupo, e excluídas 10 pacientes do sexo
feminino na pré-menopausa do grupo 2.
8.2 AVALIAÇÃO LABORATORIAL
Íons, paratormônio e fosfatase alcalina óssea
As medianas cálcio iônico no grupo 1 e 2 foram 1,25 mmol/L (mínimo, 1,03 mmol/L ;
máximo, 1,43 mmol/L) e 1,21 mmol/L (mínimo, 1,08 mmol/L; máximo, 1,41 mmol/L),
respectivamente, p=0,020.
Em relação ao fósforo, no grupo 1 a mediana encontrada foi de 3,6 mg/dL (mínimo,
2,5 mg/dL; máximo, 5,4 mg/dL) e no grupo com gastrite auto-imune, 3,6 mg/dL (mínimo, 2,7
mg/dL; máximo, 5,1 mg/dL), p=0,504.
59
A mediana das dosagens do paratormônio para o grupo 2 foi 48,0 pg/mL (mínimo,
13,0 pg/mL; máximo, 151,0 pg/mL). Dos 32 pacientes no grupo com gastrite auto-imune,
cinco apresentaram dosagem do PTH acima do valor de referência, mas em apenas uma o
nível de cálcio iônico esteve acima do valor máximo de referência. A mediana das dosagens
do paratormônio para o grupo 1 foi 43,0 pg/mL (mínimo, 16,0 pg/mL; máximo, 82,0 pg/mL).
Em duas pacientes o nível do PTH estava acima do valor máximo de referência (menos de 1,5
vezes), mas em nenhum dos casos estiveram presentes alterações nos níveis de cálcio, fósforo
ou fosfatase alcalina. As medianas dos níveis de PTH não foram estatisticamente diferentes
entre os dois grupos (p=0,468)
Em relação à fosfatase alcalina óssea, as medianas nos grupos 1 e 2 foram 27,0 U/L
(mínimo, 15,0 U/L; máximo, 63,0 U/L) e 23 U/L (mínimo, 12,0 U/L; máximo, 66,0 U/L),
respectivamente, p=0,103.
Segundo a infecção pelo H. pylori, as medianas das dosagens de PTH foram: 43
pg/mL (mínimo, 17 pg/mL, máximo, 82 pg/mL) para os pacientes infectados e 43 pg/mL
(mínimo, 13 pg/mL, máximo, 151 pg/mL) para os não infectados, p=0,60. As medianas das
dosagens de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina também não foram diferentes entre os
pacientes infectados e não infectados.
Hemograma
A mediana da concetração de hemoglobina no grupo 1 foi 13,7 g/dL (mínimo, 7,5
g/dL, máximo, 17,3 g/dL) e no grupo com gastrite auto-imune foi 13,2 g/dL (mínimo, 8,8
g/dL, máximo, 16,0 g/dL), p=0,064. Nenhum paciente no grupo com gastrite auto-imune
apresentava volume corpuscular médio (VCM) igual ou acima que 100 fL; em duas pacientes
do grupo 1 o VCM encontrava-se maior que 100 fL (102 e 103 fL), embora nenhuma das duas
apresentasse anemia ou deficiência de vitamina B
12
.
Vitamina B
12
A mediana das dosagens séricas de vitamina B
12
no grupo 1 foi de 388,5 pg/mL
(mínimo, 157,0 pg/mL, máximo, 4408,0 pg/mL) e no grupo com gastrite auto-imune de 420,5
pg/mL (mínimo, 160,0 pg/mL, máximo, 5405 pg/mL), p = 0,752.
60
Gastrina sérica
Num subgrupo de 14 pacientes do grupo 1 com mucosa gástrica normal foi feita a
dosagem do nível sérico de gastrina e a mediana encontrada foi de 75,6 pg/mL (mínimo de
20,7 pg/mL; valor máximo de 952,0 pg/mL). Entre os 32 pacientes do grupo com gastrite
auto-imune, a mediana encontrada para as dosagens de gastrina foi de 207 pg/mL (mínimo de
41,4 pg/mL; valor máximo de 2720 pg/mL). A diferença entre os grupos 1 e 2 foi
estatisticamente significativa (p = 0,001).
Anticorpo anti-célula parietal
Em conformidade com os critérios de inclusão, todos os pacientes do grupo 1
apresentaram negatividade para a pesquisa do anticorpo anti-célula parietal e todos os
pacientes do grupo 2 apresentaram positividade para o referido anticorpo.
Os resultados dos exames laboratoriais estão mostrados na TABELA 3.
TABELA 3.
Resultados laboratoriais dos 113 pacientes do estudo, divididos segundo a ausência (Grupo 1)
ou presença (Grupo 2) de gastrite auto-imune, valores expressos em mediana (mínimo;
máximo).
Grupo 1
n=81
Grupo 2
n=32
p
Hemoglobina (g/dL) 13,7 (7,5; 17,3) 13,2 (8,8; 16,0) NS
Fósforo sérico (mg/dL) 3,6 (2,5; 5,4) 3,6 (2,7; 5,1) NS
Fosfatase alcalina (U/L)
27 (15; 63) 23 (12; 66) NS
Paratormônio (pg/mL) 43 (16; 82) 48 (13; 151) NS
Vitamina B
12
(pg/mL) 388,5 (157; 4408) 420,5 (160; 5405) NS
Cálcio iônico (mmol/) 1,25 (1,03; 1,43) 1,21 (1,08; 1,41) 0,02
Gastrina (pg/mL) 75,6 (21; 952) § 207 (41; 2720) 0,001
NS – não significativo, teste Mann-Whitney
§ pesquisa de gastrina sérica realizada em 14 pacientes com mucosa gástrica normal do grupo
1.
61
8.3 ENDOSCOPIA DIGESTIVA ALTA
A avaliação da mucosa gástrica pelo exame endoscópico nos pacientes do grupo 1
mostrava: mucosa gástrica normal em três (3,7%) pacientes, gastrite predominantemente
antral em 39 (48,1%) pacientes, pangastrite sem sinais de atrofia em 32 pacientes (39,5%),
pangastrite com sinais de atrofia em um paciente (1,2%), e gastrite atrófica do corpo em sete
(8,6%) pacientes. No grupo 2 avaliação da mucosa gástrica pelo exame endoscópico mostrou:
mucosa gástrica normal em cinco (15,6%) pacientes, gastrite predominantemente antral em
quatro (12,5%) pacientes, pangastrite sem sinais de atrofia em nove pacientes (28,1%),
pangastrite com sinais de atrofia em cinco pacientes (15,6%), e gastrite atrófica do corpo em
nove (28,1%) pacientes.
8.4 AVALIAÇÃO HISTOPATOLÓGICA DA MUCOSA GÁSTRICA
A análise histopatológica das lâminas com fragmentos de tecido da mucosa gástrica
oxíntica e antral dos pacientes do Grupo 1 mostrou os seguintes diagnósticos: mucosa gástrica
normal em 24 (29,6%) pacientes, gastrite crônica predominantemente antral em nove
(11,1%), gastrite multifocal em 46 (56,8%), e em dois (2,5%) pacientes a suspeita foi de
gastrite de origem auto-imune (TABELA 4). Nesses dois últimos casos, a suspeita não foi
confirmada laboratorialmente. Assim, 48 (59,3%) pacientes apresentavam mucosa oxíntica
com inflamação e/ou atrofia. Encontrou-se a presença de atrofia em 32 (39,5%) pacientes,
sendo leve em nove pacientes, moderada em 10 e acentuada em 13 deles (TABELA 5). Trinta
e três (40,7%) pacientes apresentavam mucosa oxíntica normal, ou seja, sem atrofia ou
inflamação. A metaplasia intestinal esteve presente em 12 (14,8%) pacientes, sendo discreta
em nove pacientes, moderada em um, e acentuada em dois casos. A metaplasia intestinal foi
mais prevalente em pacientes com atrofia acentuada da mucosa oxíntica (p=0,007) (TABELA
6). A metaplasia pseudo-antral foi encontrada em nove (11,1%) casos.
62
TABELA 4.
Diagnósticos histopatológicos da mucosa gástrica em 81 pacientes do grupo 1 segundo a
classificação atualizada de Sydney para o estudo das gastrites.
Diagnóstico histopatológico N (%)
Mucosa gástrica normal 24 (29,6%)
Gastrite crônica predominantemente antral 9 (11,1%)
Gastrite multifocal 46 (56,8%)
Gastrite auto-imune 2 (2,5%)
Total 81 (100%)
TABELA 5.
Presença e grau de atrofia da mucosa gástrica oxíntica em 81 pacientes do grupo 1 ao
diagnóstico em preparações pela hematoxilina-eosina, de acordo com a classificação
atualizada de Sydney para o estudo das gastrites.
Diagnóstico histopatológico de atrofia N (%)
Ausente 49 (60,5%)
Atrofia mucosa oxíntica 32 (39,5%)
Atrofia leve 9 (11,1%)
Atrofia moderada 10 (12,3%)
Atrofia acentuada 13 (16,0%)
63
TABELA 6.
Presença de metaplasia intestinal (MI) nos 81 pacientes do grupo 1 de acordo com o
diagnóstico de atrofia da mucosa gástrica oxíntica pela classificação atualizada de Sydney
para o estudo das gastrites em preparações pela hematoxilina-eosina.
Atrofia ausente
(%)
Atrofia
leve (%)
Atrofia
moderada (%)
Atrofia
acentuada (%)
Total
(%)
MI ausente 45 8 9 7 69 (85,2)
MI presente* 4 1 1 6 12 (14,8)
Total 49 (60,5) 9 (11,1) 10 (12,3) 13 (16,0) 81 (100)
*p=0,007, teste qui-quadrado
Nos 32 pacientes do grupo com gastrite auto-imune, 27 (84,4%) apresentaram
avaliação histopatológica compatível com gastrite de origem auto-imune e em cinco (15,6%)
o diagnóstico foi de gastrite multifocal. A atrofia gástrica da mucosa oxíntica foi avaliada
como moderada em quatro (12,5%) casos e acentuada em 28 (87,5%) casos (FIGURA 4). A
metaplasia intestinal esteve presente em 17 (53%) pacientes, sendo discreta em oito,
moderada em sete e acentuada em dois casos. A metaplasia pseudo-antral foi encontrada em
28 (87,5%) casos, sendo discreta em 13, moderada em 10 e acentuada em cinco casos. A
diferença entre a presença de metaplasia intestinal e metaplasia pseudo-antral nos grupo 1 e 2
foi estatisticamente significativa (p<0,001) (TABELA 7).
FIGURA 4. Mucosa gástrica oxíntica mostrando atrofia glandular moderada, paciente com
gastrite auto-imune. HE, 50X.
64
TABELA 7.
Presença de metaplasia intestinal e metaplasia pseudo-antral na mucosa gástrica dos pacientes
dos grupos 1 e 2, em preparações coradas pela hematoxilina-eosina.
Grupo 1(%)
n=81
Grupo 2 (%)
n= 32
p
Metaplasia intestinal 12 (14,8) 17 (53) <0,001
Metaplasia pseudo-antral 09 (11,1) 28 (87,5) <0,001
Teste qui-quadrado
8.5 AVALIAÇÃO DA INFECÇÃO PELO HELICOBACTER PYLORI
A concordância entre os dois métodos para avaliação da infecção pelo H. pylori foi de
100%. A prevalência da infecção pelo H. pylori no grupo 1 foi de 51,8% (42 pacientes no
total de 81) e no grupo 2 foi de 9,3% (3 pacientes no total de 32), p<0,0001, TABELA 8.
TABELA 8.
Prevalência da infecção pelo H. pylori nos 113 pacientes do estudo, divididos segundo a
ausência (Grupo 1) ou presença (Grupo 2) de gastrite auto-imune.
Grupo 1 Grupo 2 Total (%)
H. pylori positivo* 42 (51,8) 3 (9,3) 45 (39,8)
H. pylori negativo 39 (48,2) 29 (90,6) 68 (60,2)
Total 81 (100) 32 (100) 113 (100)
* p<0,001, teste qui-quadrado
Segundo a infecção pelo H. pylori a presença de atrofia da mucosa oxíntica foi
encontrada em 53,4% (22/42) dos pacientes infectados e em 25,6% (10/39) dos não infectados
(p=0,014). Considerando o total de 113 pacientes, as médias das dosagens de cálcio, fósforo,
PTH e fosfatase alcalina não foram diferentes entre os pacientes infectados e não infectados.
Esses dado são mostrados nas TABELAS 9 e 10.
65
TABELA 9.
Prevalência de atrofia da mucosa oxíntica ao estudo histopatológico definida de acordo com a
classificação atualizada de Sydney para o estudo das gastrites segundo a infecção pelo H.
pylori nos 81 pacientes do grupo 1.
Atrofia mucosa oxíntica H. pylori positivo
H. pylori negativo
Total
Presente * 22 (52,4) 10 (26,6) 32
Ausente
Total
20 (47,6)
42 (100)
29 (74,4)
39 (100)
49
81
* p=0,014, teste do qui-quadrado
TABELA 10.
Níveis séricos (média ± DP) de marcadores do metabolismo ósseo nos 113 pacientes do
estudo, segundo infecção pelo H. pylori.
H pylori+
(n=45)
H pylori –
(n=68)
p
Fósforo sérico (mg/dL)
3,65 ± 0,65 3,6± 0,5
0.494
Cálcio iônico (mmol/)
1,2± 0,45 1,22± 0,6
0.131
Fosfatase alcalina (U/L)
26,8± 8,0 28,8± 11,5
0.631
Paratormônio (pg/mL)
46,4± 16,8 48,3± 28,5
0.6
Teste T de Student
8.6 AVALIAÇÃO DA POPULAÇÃO DE CÉLULAS PARIETAIS DA MUCOSA
GÁSTRICA
Grupo 1
A densidade média de células parietais obtida pela coloração pela imuno-histoquímica
para o subgrupo de pacientes com mucosa gástrica normal foi 927 ± 185 CP/mm
2
. Para os
subgrupos de pacientes agrupados segundo a presença e grau de atrofia da mucosa oxíntica
pela classificação atualizada de Sydney, a densidade média de células parietais foi
66
significativamente diferente (p<0,001). Para averiguar diferença específica entre os
subgrupos, foi aplicado o teste de comparações múltiplas de Dunnett T3 e observou-se que a
diferença ocorria entre as densidades médias de células parietais do grupo sem atrofia da
mucosa gástrica em relação aos grupos com atrofia moderada e intensa. As densidades de
células parietais do grupo sem atrofia e do grupo com atrofia discreta da mucosa oxíntica não
foram estatisticamente diferentes. Esses resultados são mostrados na TABELA 11 e no
GRÁFICO 1.
TABELA 11.
Densidade de células parietais na mucosa oxíntica em 81 pacientes do grupo 1 segundo o
diagnóstico histopatológico de atrofia da mucosa gástrica oxíntica pela classificação revisada
de Sydney para o estudo das gastrites.
Diagnóstico histopatológico N (%) Densidade células
parietais (CP/mm
2
)
Atrofia ausente 49 (60,5)
927 ± 185
Atrofia leve 9 (11,1)
870 ± 180
Atrofia moderada 10 (12,3)
683 ± 151
p <0,001*
Atrofia acentuada 13 (16,0)
379 ± 345
Total 81 (100)
* Teste de Kruskal-Wallis
67
GRÁFICO 1.
Gráfico-caixa (boxplot) - densidade de células parietais (CP/mm
2
) da mucosa oxíntica dos 81
pacientes do grupo 1, divididos conforme a presença e o grau de atrofia segundo a
classificação de Sydney para estudo das gastrites.
ausente leve moderada acentuada
atrofia_corpo
0,00
200,00
400,00
600,00
800,00
1000,00
1200,00
1400,00
cp
45
59
Teste de comparações múltiplas Dunnett T3.
Grupo 2
A imuno-histoquímica confirmou atrofia da mucosa oxíntica em todos os 32 (100%)
pacientes do grupo com gastrite auto-imune e a distribuição de células parietais
remanescentes foram: presentes, numerosas em um caso (3,1%); presentes, pequenos
aglomerados em cinco casos (15,6%), presentes, raras em quatro casos (12,5%), e ausentes
em 22 casos (68,7%). A FIGURA 5 mostra células parietais coradas pela imuno-histoquímica
com anticorpo monoclonal na mucosa oxíntica gástrica.
p < 0,001
p = 0,006
NS
Grau de atrofia da mucosa oxíntica
CP/mm
2
68
FIGURA 5. Células parietais da mucosa gástrica oxíntica em pequenos aglomerados na base
da mucosa, paciente com gastrite auto-imune. Imuno-histoquímica, 50X.
8.7 AVALIAÇÃO DA DENSIDADE MINERAL ÓSSEA, CORRELAÇÃO COM
GASTRITE AUTO-IMUNE E DENSIDADE DE CÉLULAS PARIETAIS
A densitometria óssea forneceu resultados da medida da densidade mineral óssea no
fêmur e coluna lombar em números absolutos (g/cm2) e o diagnóstico de osteoporose foi feito
em acordo com os critérios da OMS (KANIS, 1994) utilizando os valores de T-escore: massa
óssea normal até – 1 DP, osteopenia entre -1 e -2,5 DP, e osteoporose abaixo de – 2,5 DP.
Foram considerados os resultados na coluna lombar (média das primeiras quatro vértebras
lombares - L1-L4), fêmur total ou colo do fêmur. Para o total de 113 pacientes, o diagnóstico
de osteoporose da coluna lombar foi feito em 26 (23%) pacientes, e no fêmur total em oito
(7,1%) pacientes. A TABELA 12 mostra distribuição dos diagnósticos densitométricos para
os 113 pacientes do estudo segundo a localização em coluna lombar e fêmur.
69
TABELA 12.
Diagnósticos densitométricos em coluna lombar e fêmur pela absorciometria de raios-x de
dupla energia para os 113 pacientes do estudo.
Sítio ósseo avaliado Normal (%) Osteopenia (%) Osteoporose (%) Total (%)
Coluna lombar 39 (34,5) 48 (42,5) 26 (23) 113 (100)
Fêmur 53 (46,9) 52 (46) 8 (7,1) 113 (100)
Grupo 1
No grupo 1 o diagnóstico de osteoporose da coluna lombar foi feito em 23 (28,4%)
pacientes (FIGURA 4), sendo que 32 (39,5%) pacientes apresentavam osteopenia e 26
(32,1%) pacientes apresentavam densidade mineral óssea normal.
FIGURA 6. Densitometria óssea mostrando osteoporose da coluna lombar (T-escore L1-L4 -
3,6) em paciente feminino de 64 anos de idade, grupo 1.
70
O diagnóstico de osteoporose do fêmur foi feito em 6 (7,4%) pacientes, sendo que 39
(48,1%) pacientes apresentavam osteopenia e 36 (44,4%) pacientes apresentavam densidade
mineral óssea normal. Os seis pacientes com osteoporose em fêmur também apresentavam
osteoporose em coluna lombar.
A média de densidade mineral óssea na coluna lombar (L1-L4) foi de 1,011g/cm
2
e no
fêmur total foi de 0,908 g/cm
2
.
Grupo 2
No grupo com gastrite auto-imune o diagnóstico de osteoporose da coluna lombar foi
feito em 3 (9,4%) pacientes, sendo que 16 (50%) pacientes apresentavam osteopenia e 13
(40,6%) pacientes apresentavam densidade mineral óssea normal. O diagnóstico de
osteoporose do fêmur foi feito em 2 (6,2%) pacientes, sendo que 13 (40,6%) pacientes
apresentavam osteopenia e 17 (53,1%) pacientes apresentavam densidade mineral óssea
normal. Os dois pacientes que apresentaram osteoporose em fêmur não tinham osteoporose
em coluna lombar associada.
Neste grupo com gastrite auto-imune a média de densidade mineral óssea na coluna
lombar (L1-L4) foi de 1,065/cm
2
e no fêmur total foi de 0,930g/cm
2
.
Não houve diferença estatisticamente significativa entre os diagnósticos
densitométricos e as médias de densidade mineral óssea da coluna lombar ou fêmur entre os
grupos com e sem gastrite auto-imune. Também não houve diferença entre as médias de Z-
escore para os dois grupos, na coluna ou no fêmur. Os resultados são mostrados nas
TABELAS 13, 14 e 15.
TABELA 13.
Diagnósticos densitométricos em coluna lombar pela absorciometria de raios-x de dupla
energia dos 113 pacientes do estudo segundo a ausência (Grupo 1) ou presença de gastrite
auto-imune (Grupo 2).
Diagnóstico densitométrico Grupo 1 (%) Grupo 2 (%) Total (%)
Normal ∗
26 (32,1) 13 (40,6) 39 (34,5)
Osteopenia ∗
32 (39,5) 16 (50) 48 (42,5)
Osteoporose ∗
23 (28,4) 3 (9,4) 26 (23)
Total 81 (100) 32 (100) 113 (100)
∗ p > 0,05, teste qui-quadrado
71
TABELA 14.
Diagnósticos densitométricos em fêmur pela absorciometria de raios-x de dupla energia dos
113 pacientes do estudo segundo a ausência (Grupo 1) ou presença de gastrite auto-imune
(Grupo 2).
Diagnóstico densitométrico Grupo 1 (%) Grupo 2 (%) Total (%)
Normal ∗
36 (44,4) 17 (53,1) 53 (46,9)
Osteopenia ∗
39 (48,1) 13 (40,6) 52 (46)
Osteoporose ∗
6 (7,4) 2 (6,2) 8 (7,1)
Total 81 (100) 32 (100) 113 (100)
∗ p > 0,05, teste qui-quadrado
TABELA 15.
Medidas da densitométria óssea (média ± DP) de coluna lombar e fêmur proximal pela
absorciometria de raios-x de dupla energia dos 113 pacientes do estudo segundo a ausência
(Grupo 1) ou presença de gastrite auto-imune (Grupo 2).
Medida densitométrica Grupo 1
(n=81)
Grupo 2
(n=32)
Densidade coluna lombar (g/cm
2
)*
1,011±0,198 1,065±0,209
Z-escore lombar*
-0,34±1,44 0,06±1,68
Fêmur total(g/cm
2
)*
0,908±0,153 0,930±0,139
Z-escore fêmur*
0,01±1,13 -0,07±0,86
* p>0,05, DP = desvio-padrão, teste T de student
Em relação à infecção pelo H. pylori, as medidas da densitométria óssea de coluna
lombar e fêmur proximal não foram entre pacientes infectados e nao infectados (TABELA
16).
72
TABELA 16.
Medidas da densitométria óssea (média ± DP) de coluna lombar e fêmur proximal pela
absorciometria de raio-x de dupla energia dos 113 pacientes do estudo segundo a ausência ou
presença de infecção pelo H. pylori.
H. pylori negativo
(n=68)
H. pylori positivo
(n=45)
Densidade coluna lombar (g/cm
2
)*
1,056 ± 0,22 0,981 ± 0,16
Z-escore lombar*
-0,06 ± 1,55 -0,52 ± 1,42
Fêmur total(g/cm
2
)*
0,922 ± 0,15 0,900 ± 0,14
Z-escore fêmur*
0,05 ± 1,04 -0,12 ± 1,08
* p>0,05, DP = desvio-padrão, teste T de student
Considerando-se o estado da mucosa gástrica, a densidade mineral óssea em coluna
lombar e fêmur nao foi diferente entre os pacientes com mucosa oxíntica sem atrofia, atrofia
leve, moderada ou acentuada (TABELA 17).
TABELA 17.
Medidas da densitométria óssea (g/cm
2
, média ± DP) de coluna lombar e fêmur
proximal pela absorciometria de raio-x de dupla energia dos 113 pacientes segundo a ausência
e grau de atrofia da mucosa gástrica oxíntica
Diagnóstico histopatológico N (%) DMO L1-L4* DMO fêmur total*
Atrofia ausente 49 (43,3)
0,996 ± 0,164 0,913 ± 0,162
Atrofia leve 9 (8)
0,997 ± 0,219 0,889 ± 0,141
Atrofia moderada 14 (12,3)
1,023 ± 0,291 0,892 ± 0,126
Atrofia acentuada 41 (36,3)
1,050 ± 0,203 0,923 ± 0,131
Total 113 (100)
*p >0,05, teste de Kruskal-Wallis
DMO: densidade mineral óssea
73
Foi feita análise para pesquisa de correlação entre densidade mineral óssea em coluna
lombar (L1-L4) com diversas variáveis clínicas e laboratoriais obtidas do total de 113
pacientes do presente estudo. Inicialmente, observou-se correlação entre a densidade óssea na
coluna e as variáveis densidade de células parietais, IMC, infecção pelo H. pylori e fosfatase
alcalina óssea (TABELA 18). Utilizando o teste de regressão linear múltipla, o modelo final
constatou que as variáveis densidade de células parietais, IMC e fosfatase alcalina óssea
mantiveram correlação com a densidade mineral óssea na coluna lombar.
Em relação à densidade mineral óssea em fêmur (colo ou total), não foi observada
correlação com qualquer das variáveis estudadas.
TABELA 18.
Valores obtidos pela análise de Correlação de Spearman para averiguação de correlação entre
densidade mineral óssea (DMO) da coluna lombar, e variáveis clínicas e laboratoriais dos 113
pacientes do presente estudo.
Pares de variáveis r p
DMO e densidade de células parietais -0,225
0,03
DMO e IMC 0,287
0,002
DMO e cálcio iônico sérico -0,16 0,11
DMO e fósforo sérico 0,03 0,78
DMO e paratormônio sérico 0,01 0,94
DMO e fosfatase alcalina óssea sérica 0,34
0,001
DMO e infecção pelo H. pylori -2,03 0,042
DMO e idade -0,091 0,34
DMO e hemoglobina sangue -0,081 0,34
DMO e vitamina B
12
sérica 0,009 0,93
DMO e gastrina sérica 0,1 0,47
DMO e tempo de climatério 0,066 0,53
Teste de Spearman, r = coeficiente de correlação
74
9. DISCUSSÃO
Trata-se o presente trabalho, de estudo transversal que envolveu dois grupos de
pacientes ambulatoriais e que pertence à linha de pesquisa do Laboratório de Patologia
Digestiva e Neuroendócrina (LPDN) sobre os aspectos morfológicos da mucosa gástrica e
suas relações com doenças extra-digestivas. Dentro dessa linha objetivou-se relacionar duas
formas freqüentes de gastrite crônica com a densidade mineral óssea. Como a osteoporose é
mais prevalente nas mulheres (CUMMINGS, 2002), formou-se um grupo (grupo 1)
constituído inicialmente por pacientes do sexo feminino. Embora um segundo grupo de
pacientes, constituído por sua vez por pacientes com gastrite auto-imune (grupo 2), não
tivesse como objetivo incluir somente pacientes do sexo feminino, ao final, 27 (84%)
pacientes do total de 32 eram mulheres. A osteoporose primária é a doença osteometabólica
mais comum, caracterizando-se pela perda de massa e alteração da microarquitetura ósseas,
com conseqüente diminuição da resistência óssea (OSTEOPOROSIS, 2001). A conseqüência
mais relevante da osteoporose é a ocorrência de fraturas, sendo as mais comuns as fraturas
vertebrais, do punho e do fêmur. Um dos fatores que explicam sua maior prevalência no sexo
feminino é a deficiência estrogênica do período pós-menopausa. Além disso, numerosas
condições que podem cursar com perda de massa óssea e contribuir para o desenvolvimento
de osteoporose secundária. O hiperparatireoidismo, o uso medicamentos como glicocorticóide
e imunossupressores, insuficiência renal, doenças inflamatórias crônicas e doenças
neoplásicas podem, por mecanismos diferentes, levar à diminuição da massa óssea. Com a
finalidade de selecionar pacientes com osteoporose primária, além da história clínica,
dosagens séricas de cálcio, fósforo, fosfatase alcalina e paratormônio foram utilizadas para
avaliação do metabolismo ósseo com vistas à identificação de causas secundárias de
osteoporose. Na osteoporose primária não são esperadas alterações nos níveis séricos de
cálcio, fósforo, fosfatase alcalina e PTH (HEANEY, 1996). Em cinco pacientes do grupo
com gastrite auto-imune o nível sérico de PTH estava elevado, todos da ordem de menos de
duas vezes a referência máxima, e em apenas um caso foi encontrada hipercalcemia
concomitante. No caso dessa paciente, não houve diagnóstico de osteoporose pela
densitometria óssea em qualquer dos sítios estudados. Duas pacientes do grupo 1
apresentaram elevação isolada do PTH, sem diagnóstico de osteoporose. Essas pacientes
foram encaminhadas à propedêutica complementar adicional para investigação de
hiperparatireoidismo, e decidiu-se não excluí-las do presente estudo.
75
O hiperparatireoidismo primário assintomático é definido como elevação discreta dos
níveis séricos de cálcio (até 1 mg para o cálcio total) e PTH (1,5 a 2 vezes o limite superior da
normalidade), com fósforo sérico e calciúria de 24 horas normais, na ausência de
manifestações clínicas como nefrolitíase e fraqueza neuromuscular proximal. Admite-se ainda
nesses casos a ocorrência de redução discreta da massa óssea principalmente em rádio distal,
onde há predominância de osso cortical, e observa-se que a massa óssea em coluna lombar
tende à melhor preservação, fato atribuído a possivel efeito protetor do PTH sobre o osso
trabecular desta região (BILEZIKIAN, 2004). Os marcadores bioquímicos do turnover ósseo,
à exceção da fosfatase alcalina óssea, não foram utilizados no presente estudo. Esses
marcadores são importantes na prática clínica por permitirem, em pacientes em tratamento
para osteoporose, comprovação da mudança do perfil do metabolismo ósseo antes que a
densitometria óssea ser capaz de fazê-lo. Para fins de diagnóstico da osteoporose, o emprego
dos marcadores bioquímicos de turnover ósseo ainda encontra limitações, como baixas
sensibilidade e especificidade (SARAIVA, 2002).
O grupo com gastrite auto-imune foi formado a partir de laudos de biópsias
endoscópicas que mostravam atrofia da mucosa do corpo com antro preservado ou com
alterações histológicas mínimas, cujo objetivo foi selecionar exclusivamente casos de gastrite
auto-imune (tipo A). Dos 194 casos selecionados a partir desse critério, entre os anos de 2004
a 2006, o número de pacientes finalmente estudados foi de 32. Como elegemos a ausência do
anticorpo anti-célula parietal como critério de exclusão para os pacientes do grupo com
gastite auto-imune, é possível que o número de pacientes neste grupo tenha sido menor, uma
vez que esse marcador pode não estar presente em 10 a 30% dos casos de anemia perniciosa
(CHAN et al., 2006). A presença do anticorpo anti-fator intrínseco, apesar de mais específico
para anemia perniciosa, não foi utilizado neste estudo, pois ocorre em menor prevalência e
sua presença parece não determinar diferenças clínicas no curso da doença (ALLEN, 2000;
ZITTOUN, 2001). O teste de Shilling também não foi utilizado para a confirmação do
diagnóstico etiológico dos casos suspeitos de gastrite auto-imune, pois necessita de amostra
de urina de 24 horas, e não é atualmente disponível na prática clínica rotineira.
Em relação às características clínicas, 50% dos pacientes do grupo com gastrite auto-
imune apresentavam queixas dispépticas variadas, e a pirose foi a mais freqüente delas.
Considerando a gravidade da atrofia gástrica neste grupo, esse achado é notável, uma vez que
a pirose se relaciona com a secreção ácida gástrica, o que não seria esperado nesses pacientes.
No trabalho de CHAN et al. (2006), que descreve 181 pacientes chineses com anemia
76
perniciosa, 10% dos pacientes apresentavam sintomas gastrintestinais embora não tenha sido
feita discriminação sobre a natureza dos sintomas.
De interesse foi o fato de que os diagnósticos endoscópicos dos pacientes do grupo
com gastrite auto-imune estiveram distribuídos em diferentes resultados, incluindo mucosa
gástrica normal, gastrite predominantemente antral e pangastrite com e sem sinais de atrofia.
Em menos de 30% dos casos a suspeita à endoscopia foi de gastrite auto-imune. Mesmo após
a avaliação histopatológica, 15,6% dos casos ainda não puderam ser confirmados como
gastrite do tipo A. Após a utilização da imuno-histoquímica para coloração de células
parietais demonstrou-se de forma objetiva a acentuada atrofia da mucosa gástrica, em quase
70% dos casos o resultado foi ausência de células na mucosa oxíntica.
A osteoporose é uma doença sistêmica silenciosa e seus sintomas se manifestam quase
exclusivamente pela ocorrência de fraturas ósseas. Estima-se que um terço das mulheres após
a menopausa terão a doença e que o risco de fratura óssea ao longo da vida após os 50 anos
seja de 14% (NATIONAL INSTITUTE OF HEALTH, 2001). A prevalência de osteoporose
na coluna lombar nesse grupo de 113 pacientes de ambos os grupos em conjunto, foi de 23%
(26/113 pacientes), resultado este compatível com aquela descrito pela literatura, cuja
estimativa é a ocorrência em 30% das mulheres após a menopausa (MELTON, 1995;
PINHEIRO, 2006).
Várias doenças gastrintestinais se relacionam a distúrbios do metabolismo ósseo
(SYLVESTER, 1999). Até 50% dos pacientes com doença celíaca e 41% daqueles com
doença de Crohn podem apresentar diminuição da massa óssea em relação à população
controle (SCOTT et al., 2000, LORA et al., 2005). Ainda em relação a causas ligadas ao tubo
digestivo, evidências experimentais, epidemiológicas e clínicas têm relacionado o estômago à
osteoporose, embora os mecanismos responsáveis pela baixa massa óssea ainda não estejam
completamente esclarecidos (EDDY, 1971, PERSSON et al., 1989, BISBALLE et al., 1991,
HEISKANEN et al., 2001, ADACHI et al., 2000). Levando-se ainda em consideração as
evidências de que a mucosa gástrica seria sede produtora de peptídeo com capacidade de
interferir favoravelmente no metabolismo ósseo (PERSSON et al., 1989), todos esses dados
motivaram o estudo da possível relação entre diferentes graus de atrofia gástrica e massa
óssea. Como a gastrite auto-imune caracteriza-se por acentuada atrofia da mucosa oxíntica
decidiu-se incluir esse grupo de pacientes no presente estudo, para que pudesse então ser
avaliada a massa óssea em pacientes com mucosa gástrica normal e com diferentes graus de
atrofia gástrica, incluindo aqueles com atrofia extrema.
77
Uma das doenças mais importantes associada à atrofia grave da mucosa do corpo
gástrico é a anemia perniciosa. Anemia perniciosa é um termo que define e se aplica
exclusivamente à presença de anemia megaloblástica causada por gastrite crônica atrófica de
origem auto-imune (TOH et al., 1997). Embora os trabalhos levantem evidências de maior
prevalência de osteoporose e fraturas ósseas em pacientes com anemia perniciosa (EASTELL
et al., 1992, GOERSS et al., 1992), deve-se ressaltar que não há descrição sobre achados
histopatológicos da mucosa gástrica desses pacientes, levantando dúvidas sobre a presença de
gastrite auto-imune. A evolução da gastrite auto-imune é lenta e assintomática, com o
aparecimento das manifestações hematológicas ocorrendo ao longo de 20 a 30 anos. Caso não
ocorram fraturas ósseas, pacientes com osteoporose também evoluem de maneira
assintomática, e, portanto, estudos que visem aos possíveis mecanismos evolutivos
relacionando as duas patologias são de difícil condução. Do nosso conhecimento, até o
presente momento, esse é o primeiro estudo que tenta relacionar a densidade mineral óssea à
gastrite auto-imune.
Apesar da deficiência do fator intrínseco resultante da atrofia gástrica de origem auto-
imune ser a principal causa de deficiência de vitamina B
12
, níveis séricos dessa vitamina
abaixo do normal não devem ser utilizados como único critério para o diagnóstico de anemia
perniciosa, pois podem ocorrer em indivíduos em dieta estritamente vegetariana, idade
avançada, má-absorção induzida por droga, deficiência de transcobalamina II (ALLEN, 2000,
COHEN et al., 2000). Por sua vez, a presença do anticorpo anti-célula parietal em títulos
abaixo de 1:10, pela imunofluorescência, também pode ocorrer em 2% dos indivíduos abaixo
de 20 anos e em até 16% daqueles acima de 60 anos, em parentes de pacientes com anemia
perniciosa, ou em indivíduos portadores de outros distúrbios auto-imunes, como a tireoidite
auto-imune (UNIVERSITY OF WASHINGTON, 1996, CAPELLA et al., 1999). O ponto de
corte para o anticorpo anti-célula parietal utilizado neste estudo foi de 1:40, tornando pouco
provável a ocorrência de falsos positivos.
Embora o critério de inclusão dos pacientes no estudo tenha sido a presença de gastrite
predominante do corpo gástrico em associação ao anticorpo anti-célula parietal sérico, e não
tenhamos utilizado o anticorpo anti-fator intrínseco, essa diferença sorológica parece não
corresponder a diferenças clínicas ou evolutivas na anemia perniciosa. Portanto, permite-se
inferir os resultados desse estudo para pacientes cujo marcador seja somente o anticorpo anti-
fator intrínseco. Deve-se ainda considerar que foram feitas análises comparativas para a
densidade mineral óssea tanto em coluna lombar quanto em fêmur, regiões que apresentam
78
diferentes suscetibilidades para perda óssea, não tendo sido encontrada diferença em qualquer
dos dois locais.
Ao contrário do que indicam os dados da literatura sobre a relação densidade mineral
óssea e anemia perniciosa, não foi possível constatar diferença estatisticamente significativa
na média de densidade mineral óssea entre os grupos 1 e 2, como também não houve
diferença entre os diagnósticos densitométricos entre os grupos. Assim, não pudemos associar
a atrofia gástrica à diminuição na massa óssea. No estudo de MELLSTRON et al. (1993), os
resultados mostraram diminuição da massa óssea em pacientes submetidos à gastrectomia
parcial em relação aos controles, e a endoscopia digestiva alta realizada em 78 pacientes após
a cirurgia evidenciou a presença de gastrite atrófica em 76 deles. O longo tempo decorrido
após a cirurgia (média de 28,5 anos) e a maior média de idade em relação aos pacientes do
presente estudo, podem sugerir que mais tempo de observação seja necessário para que
alguma influência decorrente da atrofia gástrica sobre a massa óssea possa ser detectada.
Deve ser considerado que o grupo de pacientes com gastrite auto-imune apresentava
média de idade menor do que o grupo 1 e, das 27 pacientes do sexo feminino no grupo com
gastrite auto-imune, dez ainda não tinham passado pela menopausa. Como os pacientes do
grupo gastrite auto-imune eram mais jovens que os do grupo 1, fizemos a comparação entre
os escores Z, medida que corresponde ao desvio-padrão em relação à média da densidade
óssea na população normal de mesma idade e útil para a suspeição de causas secundárias de
baixa massa óssea. Não houve diferença entre o Z-escore em fêmur ou coluna lombar entre os
grupos 1 e 2.
Devido à reserva corporal de cobalamina, as manifestações clínicas de sua deficiência
têm início após longo período de interrupção da secreção do fator intrínseco pelas células
principais do estômago. A deficiência da vitamina B
12
representa o estágio final das alterações
da mucosa gástrica na gastrite auto-imune, cujas características histopatológicas e presença
dos auto-anticorpos podem predizer a ocorrência das manifestações hematológicas. Embora
existam evidências a respeito da correlação entre deficiência de vitamina B
12
e anemia
perniciosa com diminuição da densidade mineral óssea e maior risco de fraturas, não
encontramos até o momento estudos sistemáticos sobre a possível relação entre o grau de
atrofia da mucosa gástrica e a densidade mineral óssea. Desta forma, o estudo sobre existência
de influência de alterações histopatológicas da mucosa gástrica sobre o metabolismo ósseo
poderia contribuir para a expansão do conhecimento sobre a fisiopatologia da osteoporose
secundária às doenças gástricas de um modo geral e, no futuro, possivelmente permitir o
estabelecimento de terapêutica preventiva para esses pacientes.
79
Ainda que 23 pacientes tivessem diagnóstico prévio de anemia perniciosa, sugerindo a
presença de atrofia gástrica por longo período, a massa óssea dos pacientes com gastrite auto-
imune não foi diferente dos pacientes do grupo 1. Considerando também o fato de que 24
pacientes do grupo com gastrite auto-imune estivessem em uso de reposição de vitamina B
12
,
os resultados mostraram que não houve diferença significativa entre os grupos em relação à
mediana das dosagens de vitamina B
12
e hemoglobina, embora essa última tenha sido
discretamente menor no grupo com gastrite auto-imune.
A mediana dos níveis de cálcio sérico encontrada no grupo com gastrite auto-imune
foi menor que a do grupo 1, o que poderia sugerir prejuízo da absorção deste íon em
decorrência da grave deficiência da secreção ácida. Como a densidade mineral óssea não foi
diferente entre os grupos, sugere-se que o longo período de acloridria não tenha sido capaz de
influenciar negativamente, pelo menos de forma evidente, o metabolismo ósseo. Como a
dosagem de cálcio isoladamente não é suficiente para avaliar o perfil metabólico ósseo, a
afirmação anterior encontra respaldo no fato de que as médias das medidas séricas de PTH,
fosfatase alcalina e fósforo não foram diferentes nos dois grupos. O estudo de CARMEL et al.
(1988) mostrou que os níveis de fosfatase alcalina óssea eram mais baixos em pacientes com
deficiência de vitamina B
12
quando comparados aos controles, e que os níveis dessa enzima se
elevaram após a reposição da cobalamina. Neste presente estudo envolvendo pacientes com e
sem gastrite auto-imune, não houve correlação entre os níveis séricos de fosfatase alcalina e
vitamina B
12
. Como muito pacientes estivessem em uso de vitamina B
12
exógena, também se
demonstrou que os níveis de fosfatase alcalina não foram diferentes entre os dois grupos.
Sabe-se que a anemia perniciosa demonstra associação com uma série de outras
doenças auto-imunes, como hipotireoidismo, diabetes mellitus tipo 1, vitiligo, Síndrome de
Sjogren, e hipoparatireoidismo, entre outras (CAPELLA et al., 1999). Neste grupo de
pacientes aqui estudados com gastrite auto-imune, nove (28,1%) dos pacientes apresentaram
diagnóstico de hipotireoidismo associado, e três (9,4%) tinham diabetes mellitus tipo 2. Sabe-
se que em pacientes com hipertireoidismo descompensado ou em uso excessivo de tiroxina
exógena, portanto com elevado nível circulante de hormônio tireoidiano, há perda de massa
óssea. Embora tenha sido encontrada elevada prevalência de hipotireoidismo no grupo com
gastrite auto-imune, admitiu-se como critério de inclusão e com a finalidade de minimizar
possível influência negativa sobre a massa óssea, a estabilidade da dose de tiroxina nos
últimos seis meses Em relação ao diabetes mellitus, os estudos são controversos (VAN
DAELE et al., 1995, TUOMINEN et al., 1999). A hiperglicemia e a conseqüente glicosúria
podem levar ao aumento da excreção renal de cálcio, resultando em balanço negativo do íon
80
e, ao mesmo tempo, a deficiência relativa ou absoluta de insulina poderia ocasionar perda de
seu efeito anabólico sobre o esqueleto. Por outro lado, a obesidade e a hiperinsulinemia das
fases iniciais do DM tipo 2 podem associar-se à maior massa óssea. No presente trabalho a
media do índice de massa corporal não foi significativamente diferente entre os dois grupos.
Em relação ao H. pylori, no presente trabalho, os resultados não demonstraram
associação entre infecção pelo H. pylori e densidade mineral óssea. O H. pylori infecta mais
da metade da população mundial e tem sido relacionado a um numero cada vez maior de
doenças extra-intestinais (BOHR, 2007). O resultado final da infecção é resultado da
complexa interação entre a bactéria e o microrganismo, o que tem como possível
conseqüência, além da atrofia da mucosa gástrica no estômago, alterações no sistema imune
inato e adaptativo (D′ELIOS, 2007). Considerando que a osteoporose é uma doença
sisitêmica, o desequilíbrio imunológico da infecção pelo H. pylori poderia influenciar
negativamente a remodelação óssea. Em verdade, apenas poucos estudos estão disponíveis na
literatura. Embora FIGURA et al. (2001) tenham mostrado aumento no risco de osteoporose
em homens infectados pelo H. pylori, no estudo de OZDEM et al. (2007), a infecção pelo H.
pylori em crianças não determinou alterações nos marcadores bioquímicos. Em estudo prévio
em 50 mulheres na pós-menopausa, a infecção pelo H. pylori também não se associou à
diminuição da massa óssea (KAKEHASI et al., 2007).
A possível relação entre o H. pylori e a densidade mineral óssea poderia se dar pela
produção de citocinas inflamatórias durante o curso da infecção e seus efeitos sobre a
remodelação óssea. A IL-8 é uma importante citocina inflamatória produzida em decorrência
da infecção pelo H. pylori com potenciais efeitos sobre osteoblastos e osteoclastos. O trabalho
de ANGELETTI et al. (1998) mostrou que a incubação de células da paratireóide com
moléculas recombinantes de IL-8 causava o aumento nos níveis de RNAm do paratormônio,
podendo ser essa uma das vias de ligação entre processo inflamatório e diminuição de massa
óssea. Assim considerando, pudemos observar que no presente estudo os níveis de
paratormônio não foram diferentes entre os pacientes infectados e não-infectados pelo H.
pylori.
FIGURA et al. (2005) encontraram menor nível de estradiol em homens infectados
pelo H. pylori Cag-A positivos em relação aos não infectados ou infectados pela cepa Cag-A
negativa. Apesar das evidências de que as células parietais secretam estrógeno a partir da
conversão de progesterona e testosterona (UEYAMA et al., 2002, UEYAMA et al., 2004), no
estudo experimental de UEYAMA et al. (2002), ainda que as células parietais expressassem
atividade aromatase, enzima responsável pela síntese de estrógeno, a gastrectomia não alterou
81
os níveis sistêmicos desse hormônio, sugerindo-se que não fosse esse o fator de ligação entre
a mucosa gástrica e o metabolismo ósseo.
Como gastrite auto-imune e a gastrite associada à infecção pelo H. pylori são causas
importantes de atrofia da mucosa gástrica, a comparação da densidade mineral óssea em
coluna lombar e fêmur nos pacientes com mucosa oxíntica normal e com diferentes graus de
atrofia da mucosa gástrica não mostrou diferença significativa.
Em verdade, a densidade mineral óssea se relacionou de forma inversa com a
densidade de células parietais. A análise para investigar relação entre densidade mineral óssea
na coluna lombar e no fêmur com diferentes variáveis pesquisadas nos 113 pacientes em
conjunto mostrou correlação inversa entre densidade mineral óssea na coluna lombar (L1-L4)
e densidade de células parietais. Ou seja, quanto maior a densidade de células parietais na
mucosa oxíntica, menor a densidade óssea na coluna lombar. Houve correlação direta da
densidade mineral óssea na coluna lombar (L1-L4) com a fosfatase alcalina óssea sérica e o
IMC. As outras variáveis com possibilidade de influenciar a massa óssea, como idade, sexo,
infecção pelo H. pylori, vitamina B
12
, tempo de climatério, cálcio, fósforo, e PTH foram
testadas, e os resultados não mostraram significância estatística.
Uma das possibilidades que se apresenta para explicar a correlação inversa entre
densidade de células parietais e massa óssea, seria alteração na população de células
endócrinas na mucosa oxíntica. A hiperplasia reacional de células endócrinas da mucosa do
corpo gástrico pode ocorrer em situações de hipergastrinemia, como aquela que acompanha a
gastrite atrófica auto-imune, embora o início de hipergastrinemia ou o comportamento dos
níveis séricos ao longo do tempo ainda não estejam muito claramente esclarecidos (DELLE
FAVE, 2002). Os trabalhos experimentais sobre possível fator produzido na mucosa oxíntica
gástrica com influência sobre o metabolismo ósseo, denominada gastrocalcina, trouxeram
novas possibilidades de investigação das relações entre estômago e metabolismo ósseo, uma
vez demonstrado que esse peptídeo com função hormonal osteotrópica seria produzido pelas
células ECL. Portanto, a hiperplasia células endócrinas que ocorre na gastrite atrófica auto-
imune poderia influenciar a massa óssea dos pacientes acometidos. Nesta linha de
pensamento, a massa óssea de indivíduos com hiperplasia receberia maior estímulo à
formação e a densidade mineral óssea seria, inclusive, maior neste grupo.
Do nosso conhecimento esse é o primeiro estudo que tenta correlacionar a gastrite
auto-imune à densidade mineral óssea, mas os resultados aqui apresentados não permitem
declarar os diferentes graus de atrofia da mucosa gástrica ou a infecção pelo H. pylori como
fatores associados à diminuição da massa óssea.
82
Outro resultado de interesse obtido no presente trabalho, foi a quantificação objetiva
das células parietais da mucosa oxíntica. Julgamos que a quantificação das células parietais
através da coloração pela imuno-histoquímica utilizada nesse estudo seja maneira objetiva de
avaliação do componente glandular da mucosa oxíntica, e que o método poderia também
auxiliar no estudo da relação da atrofia da mucosa gástrica com outras doenças ou condições
de impacto na saúde dos indivíduos.
A análise histopatológica é o método disponível mais acurado para o diagnóstico da
gastrite crônica, atrofia gástrica, metaplasia intestinal e neoplasia gástrica. Mesmo assim, no
diagnóstico da atrofia da mucosa gástrica ainda persistem problemas, como a variação inter-
observador (EL-ZIMAITY et al., 1996). A concordância entre observadores é satisfatória nos
graus mais graves de atrofia, mas para casos leves e moderados a discordância é grande
(RUIZ et al., 2001). Em conseqüência, inúmeros trabalhos têm sido conduzidos na tentativa
de se estabelecer consenso para o diagnóstico e gradação da atrofia da mucosa gástrica, e,
ainda mais, em busca de definições a respeito do acompanhamento e intervenção em
pacientes com maior risco para câncer gástrico. Diante das dificuldades no reconhecimento e
gradação da atrofia gástrica e uma vez que se reconhece sua relação com a neoplasia gástrica,
justifica-se o estudo de métodos que visem à identificação mais precisa dos diferentes graus
de atrofia gástrica, e que possam ser capazes de auxiliar na validação de outros métodos não
invasivos para uso em diferentes populações. Nesse trabalho, a densidade de células parietais
foi estatisticamente diferente para os grupos de pacientes com mucosa gástica normal, atrofia
moderada e acentuada, não sendo possível distinguir com significância estatística os casos
leves de atrofia da mucosa do corpo dos casos com mucosa gástrica normal. Nosso resultado
está em acordo com aquele de VAN GRIEKEN et al. (2001), que propõem, inclusive,
modificação na classificação de Sydney para os diferentes graus de atrofia oxíntica ao unir os
diagnósticos histopatológicos de atrofia ausente e discreta, passando a considerar somente três
classes: ausente, moderada e acentuada.
Com a demonstração que os níveis séricos de pepsinogênio se relacionavam com a
extensão da atrofia gástrica (BORCH et al., 1989), e quando nos anos 90 kits comerciais para
sua mensuração tornaram-se disponíveis, programas populacionais japoneses de screening
passaram a associar esse marcador sérico às doenças associadas à atrofia da mucosa gástrica,
principalmente casos precoces de câncer gástrico (OHATA et al., 2005). A utilização dos
níveis séricos de pepsinogênio como marcador de atrofia gástrica em nível rotineiro encontra
dificuldades, algumas próprias ao nosso meio. Na meta-análise de DINIS-RIBEIRO et al.
(2004), os autores declaram não ter sido possível estabelecer o melhor ponto de corte para o
83
pepsinogênio sérico em virtude da baixa concordância entre endoscopistas e patologistas em
relação à presença e gradação da atrofia gástrica.
Outra dificuldade da utilização do pepsinogênio é que pacientes em uso de medicações
que interfiram com a função gástrica, como os anti-inflamatórios não-hormonais e os
inibidores da bomba de prótons foram excluídos das análises estatísticas (OHATA et al,
2005). No estudo de SITAS et al. (1993), pacientes com diagnóstico de úlcera péptica foram
excluídos. Adicionalmente, sabe-se que a infecção pelo H. pylori eleva os níveis de PGI e
PGII, enquanto diminui a relação PGI/PGII (KUIPERS et al, 1996), explicando porque a
relação PGI/PGII apresenta maior sensibilidade e especificidade do que a medida isolada do
PGI, fato que, por outro lado, aumenta os custos da propedêutica não invasiva de atrofia da
mucosa gástrica. Adicionalmente, IIJIMA et al. (2005) mostraram que em pacientes não
infectados pelo H. pylori somente a dosagem isolada do PGI se relacionou com a taxa de
secreção ácida. Esses dados sugerem que ao utilizarmos os níveis séricos de PG I e II para
avaliação de atrofia gástrica, a presença ou ausência do H. pylori deve ser também
considerada. Em nosso meio não há disponibilidade de kit para dosagem do pepsinogênio em
escala comercial dentro de custo razoável para seu emprego em escala populacional,
característica inerente à qualquer método propedêutico quando empregado com finalidade de
rastreamento.
Vários trabalhos tiveram como objetivo associar a pesquisa para infecção pelo H.
pylori às dosagens séricas de pepsinogêno como possível marcador adicional de atrofia
gástrica (SITAS et al., 1993, WATABE et al., 2005, CAO et al., 2007), mas considerando
que mais da metade da população está infectada, e que apenas um pequeno número desses
indivíduos evoluirão para o câncer gástrico, não foi inesperado o fato de que essa
combinação, embora aumentasse a sensibilidade, acarretou grande perda na especificidade.
Além do que, a presença da infecção não determinou mudança na conduta dos indivíduos com
níveis séricos de pepsinogênio abaixo do normal, uma vez que o exame endoscópico esteve
indicado em todos pacientes com atrofia da mucosa gástrica, independente da presença da
bactéria (OHATA et al., 2004, WATABE et al., 2005).
O presente estudo avalia de maneira objetiva a população de células parietais da
mucosa oxíntica de pacientes com mais de 50 anos, em sua maioria mulheres na pós-
menopausa. Foi possível estimar a densidade de células parietais em 49 pacientes nesta faixa
etária com mucosa gástrica normal, de 927 ± 185 CP/mm
2
. Os resultados desse estudo podem
ter importante impacto ao representar o início do estudo da utilidade deste método imuno-
84
histoquímico como ferramenta para a validação do parâmetro de normalidade dos níveis
séricos de pepsinogênio em grupos populacionais.
Em relação aos demais marcadores séricos descritos para identificação de atrofia da
mucosa gástrica, como gastrina (OKSANEN et al., 2000), IL-8 (SANDULEANU et al.,
2003), ou mesmo a ghrelina (CHECCI et al.,2007), os estudos utilizaram a classificação de
Sydney para o estudo das gastrites como padrão de comparação do estado da mucosa gástrica.
Considerando a variabilidade no reconhecimento e gradação de atrofia por esse método, a
medida exata da massa de células parietais poderia ser útil como padrão mais confiável para o
estudo da aplicação e validação de medidas não invasivas do grau de atrofia da mucosa
gástrica.
De outra maneira, o método da imuno-histoquímica também pode ser útil na
determinação ou confirmação de casos suspeitos de atrofia gástrica, como demonstrado no
estudo da mucosa gástrica de pacientes com gastrite auto-imune do presente estudo, em que a
avaliação histopatológica isoladamente não havia permitido a visualização tão nítida da grave
atrofia da mucosa do corpo gástrico presente nesses indivíduos.
Concluindo, a respeito do método de quantificação das células parietais utilizado nesse
trabalho, parece ser possível um diagnóstico mais preciso dos graus de atrofia da mucosa
gástrica nas gastrites crônicas, com ênfase no fato de não ter sido possível separar casos leves
daqueles com mucosa normal. Assim, como a atrofia se relaciona ao câncer gástrico, o
método da coloração das células parietais pela imuno-histoquímica também poderá ser útil
para estudos nesta área.
85
10. CONCLUSÕES
• As densidades minerais ósseas na coluna lombar e no fêmur proximal não foram
diferentes entre os pacientes com gastrite auto-imune e com gastrite infecciosa.
• A presença de atrofia da mucosa gástrica oxíntica, não se correlacionou com
diminuição da densidade mineral óssea em coluna lombar e fêmur proximal.
• A infecção pelo Helicobacter pylori não determinou diminuição da massa óssea ou
alterações nas concentrações dos marcadores de metabolismo ósseo avaliados nos
pacientes do presente estudo.
• A densidade de células parietais obtidas pela imuno-histoquímica através da
coloração específica dessas células forneceu resultados quantitativos mais precisos
do que aqueles habitualmente observados nas preparaçções rotineiras coradas pela
Hematoxilina-Eosina.
• A imuno-histoquímica através da coloração específica das células parietais com
anticorpos monoclonais forneceu resultados objetivos da densidade de células
parietais em pacientes do sexo feminino com mais de 50 anos e com mucosa
oxíntica histologicamente normal, em média 927 ± 185 CP/mm
2
.
• Diferentemente da Classificação de Sydney utilizada em preparações histológicas
rotineiras que classifica o grau de atrofia da mucosa gástrica em ausente, leve,
moderada e acentuada, neste trabalho, a avaliação objetiva do grau de atrofia da
mucosa gástrica não mostrou diferença significativa entre as densidades de células
parietais obtidas para a mucosa não atrófica e para a mucosa gástrica com grau
discreto de atrofia.
86
11. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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National Cancer Institute, Oxford, vol.98, p.974-83, 2006.
106
12. ANEXOS
12.1 Aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa ETIC 173/00
12.2 Aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa ETIC 479/04
12.3 Declaração de Aprovação da Defesa da Tese
12.4 Ata da Reunião da Defesa da Tese
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