( PDF ) Etiologia, sensibilidade microbiana e eficácia do cefalônio anidro intramamário na secagem de ovelhas Santa Inês

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Universidade Federal da Bahia

Escola de Medicina Veterinária

Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos

ETIOLOGIA, SENSIBILIDADE MICROBIANA E EFICÁCIA

DO CEFALÔNIO ANIDRO INTRAMAMÁRIO NA SECAGEM

DE OVELHAS SANTA INÊS.

DANIELA ARAÚJO COUTINHO

Salvador – Bahia

2006

DANIELA ARAÚJO COUTINHO

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ETIOLOGIA, SENSIBILIDADE MICROBIANA E EFICÁCIA DO CEFALÔNIO

ANIDRO INTRAMAMÁRIO NA SECAGEM DE OVELHAS SANTA INÊS.

Dissertação apresentada à Escola de Medicina Veterinária da

Universidade Federal da Bahia, como requisito para a

obtenção do título de Mestre em Ciência Animal nos

Trópicos, na área de Saúde Animal.

Orientador: Prof. Dr. Joselito Nunes Costa

Salvador – Bahia

2006

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iii

FICHA CATALOGRÁFICA

COUTINHO, Daniela Araujo.

Etiologia, sensibilidade microbiana e eficácia do cefalônio anidro intramamário na

secagem de ovelhas Santa Inês./ Daniela Araujo Coutinho - Salvador, Bahia, 2006.

89 p.

Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos) – Escola de Medicina

Veterinária da Universidade Federal da Bahia, 2006.

Professor Orientador - Prof. Dr. Joselito Nunes Costa

Palavras-chave: Mastite, ovelhas, tratamento, secagem, cefalônio.

ETIOLOGIA, SENSIBILIDADE MICROBIANA E EFICÁCIA DO CEFALÔNIO

ANIDRO INTRAMAMÁRIO NA SECAGEM DE OVELHAS SANTA INÊS.

DANIELA ARAÚJO COUTINHO

Dissertação defendida e aprovada para obtenção do grau de Mestre em Ciência Animal nos

Trópicos.

Salvador, 29 de Agosto de 2006.

Comissão Examinadora:

_____________________________________________

Prof

Dr. Joselito Nunes Costa – UFBA

Orientador

_____________________________________________

Prof.

Dr. Márcio Garcia Ribeiro - UNESP

_____________________________________________

Prof

Dra. Eugênia Márcia de Deus Oliveira – UFBA

Dedico este trabalho:

À minha mãe, pelo seu amor incondicional,

apoio e incentivo nesta importante etapa da

minha vida.

AGRADECIMENTOS

À Deus por me auxiliar sempre a encontrar o caminho certo.

Ao meu orientador, Prof. Dr. Joselito Nunes Costa, pela paciência, confiança e orientação.

Ao meu co-orientador, Prof. Dr. Márcio Garcia Ribeiro, pela competência, apoio e

ensinamentos essenciais à conclusão deste trabalho.

Ao meu pai e ao Ademar, pela educação e ensinamentos.

Ao Emílio, por seu amor, companheirismo, compreensão e paciência nos muitos momentos

ausentes.

Ao meu sobrinho Guilherme, simplesmente pelo fato de existir e me fazer tão feliz.

À minha tia Gisele, pelas palavras certas na hora certa.

À Professora Maria Helena e todos os técnicos do laboratório de Inspeção e Tecnologia de

leite e derivados da UFBA, em especial ao Davino, pela contribuição no desenvolvimento

deste trabalho.

Ao Ricardo Falcão, por gentilmente ter cedido a sua propriedade e animais para o

experimento.

Aos colegas Marina, Moisés, Lucas, Márcio e Julianna por toda a dedicação, profissionalismo

e ajuda indispensáveis em todas as etapas do trabalho.

A todos os funcionários do Centro de Desenvolvimento da UFBA, pelo apoio constante.

À Schering-Plough, pelo apoio e incentivo à pesquisa.

vii

Aos amigos Juliana Resende, Vilson Simon, Alexei Castro, Kléber Carneiro, Rui Nobrega e

Fernando Heiderich, por acreditarem e contribuírem para o meu crescimento profissional.

Às amigas Cristiane Azevedo, Débora Poplaski e Leslie Scarpelli pela amizade, apoio e

contribuição neste trabalho.

Ao grande amigo e Doutor Helcimar Palhano, pelas incontáveis colaborações. As suas

palavras de carinho e incentivo foram fundamentais para que eu aqui chegasse.

Aos colegas de mestrado, em especial a: Ana Fernanda, Jorge Ribas e Sheila Magaly.

Ao Estatístico Antônio Oliveira Neto, pela sua ajuda, contribuindo com o seu conhecimento

nas análises.

E a todos que de alguma forma participaram da construção desse caminho, meu muito

obrigada.

viii

Não existem erros, apenas lições. O

crescimento é um processo de tentativa e erro:

experimentação. As experiências que não

deram certo fazem parte do processo, assim

como as bem-sucedidas. As respostas estão

dentro de você. Tudo o que tem a fazer é

analisar, ouvir e acreditar.

(Autor Anônimo)

ÍNDICE

Página

LISTA DAS FIGURAS.........................................................................................

LISTA DE TABELAS...........................................................................................

xii

LISTA DE ABREVIATURAS.............................................................................. xiv

RESUMO............................................................................................................... xv

SUMMARY.............................................................................................................. xvi

1 INTRODUÇÃO GERAL ................................................................................... 1

2 REVISÃO DA LITERATURA..........................................................................

2.1 DEFINIÇÃO....................................................................................................

2.2 ETIOLOGIA ...................................................................................................

2.3 EPIDEMIOLOGIA .........................................................................................

2.3.1 PREVALÊNCIA ..........................................................................................

2.4 FISIOLOGIA E MECANISMO DE DEFESA DA GLÂNDULA

MAMÁRIA... ........................................................................................................

2.5 PATOGENIA...................................................................................................

2.6 ASPECTOS CLÍNICOS....................................................................................

2.6.1 MASTITE CLÍNICA.....................................................................................

2.6.2 MASTITE SUBCLÍNICA.............................................................................

2.7 DIAGNÓSTICO ...............................................................................................

2.7.1 DIAGNÓSTICO CLÍNICO ..........................................................................

2.7.2 CONTAGEM DE CÉLULAS SOMÁTICAS.............................................

2.7.2.1 FATORES QUE AFETAM A CCS..........................................................

2.7.3 PROVA CALIFORNIA MASTITE TESTE (CMT)...................................

2.7.4 OUTRAS DETERMINAÇÕES................................. .................................

2.7.5 CULTURA BACTERIOLÓGICA...............................................................

2.7.5.1 CULTURA BACTERIOLÓGICA X CCS................................................

2.8 FATORES DE RISCO.......................................................................................

2.9 EFEITO DA MASTITE NA PRODUTIVIDADE............................................

2.10 RISCOS À SAÚDE PÚBLICA........................................................................

2.11 TERAPÊUTICA...............................................................................................

2.1.12 CONTROLE E PROFILAXIA......................................................................

3. ARTIGOS CIENTÍFICOS....................................................................................

3.1 ARTIGO CIENTÍFICO I....................................................................................

3.2 ARTIGO CIENTÍFICO II.................................................................................. 38

4 CONCLUSÕES GERAIS..................................................................................... 51

5 REFERÊNCIAS.................................................................................................... 52

6 ANEXOS...............................................................................................................

LISTA DE FIGURAS

Página

FIGURA 1 Conformação ideal do úbere de uma ovelha leiteira 6

FIGURA 2 Ovelha com mastite aguda

FIGURA 3 Úbere de ovelha com sinais de mastite aguda 8

FIGURA 4 Mastite gangrenosa em ovelha 9

FIGURA 5 Mastite gangrenosa em ovelha 9

FIGURA 6 Prova de Whiteside em amostra de leite ovino 15

FIGURA 7 Prova de Whiteside em amostra de leite ovino 15

FIGURA 8 Determinação do teor de cloretos em amostras de leite ovino 15

FIGURA 9 Determinação do teor de cloretos em amostras de leite ovino 15

FIGURA 10 Tetas supranumerárias em ovelha pertencente ao experimento 16

FIGURA 11 Ovelhas pertencentes ao trabalho 25

FIGURA 12 Teste da “caneca de fundo preto” para avaliação da mastite clínica 26

FIGURA 13 Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey.

FIGURA 14 Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey.

FIGURA 15 Sensibilidade microbiana in vitro

da totalidade dos microrganismos

isolados frente a nove antimicrobianos e quimioterápicos amplamente

utilizados na terapia intramamária de mastite em animais domésticos.

FIGURA 16 Desinfecção dos tetos com álcool iodado 42

FIGURA 17 Aplicação de antibiótico intramamário 43

FIGURA 18 Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey

FIGURA 19 Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey

FIGURA 20 Perfil de infecção mamária em fêmeas ovinas segundo diferentes

grupos de estudo (controle, preventivo e curativo) aos 10-15, 20-25,

30-35, 40-45 dias pós-parto.

xii

LISTA DE TABELAS

Página

TABELA 1 Aspectos clínicos da mastite em ovelhas. 10

TABELA 2 Interpretação do Califórnia Mastite Teste em ovinos. 13

TABELA 3 Resultados dos exames de Tamis e CMT realizados em 124 metades

mamárias de ovelhas da raça Santa Inês. Serra Preta, BA, 2006.

TABELA 4 Distribuição dos microrganismos isolados das 124 amostras de leite de

ovinos analisadas microbiologicamente. Serra Preta, BA, 2006.

TABELA 5 Porcentagem de sensibilidade a antibióticos e quimioterápicos dos

microrganismos isolados de amostras de leite de ovelhas com mastite

subclínica.

TABELA 6 Taxas de cura e de novas infecções em ovinos de acordo com o status

bacteriológico das metades mamárias em 3 grupos, observadas em 4

momentos diferentes.

TABELA 7 Dados individuais dos microrganismos isolados das ovelhas Santa

Inês não tratadas (controle) com cefalônio anidro intramamário, nos

diferente momentos estudados.

TABELA 8 Dados individuais dos microrganismos isolados das ovelhas Santa

Inês não tratadas (preventivo) com cefalônio anidro intramamário, nos

diferente momentos estudados.

TABELA 9 Dados individuais dos microrganismos isolados das ovelhas Santa

Inês não tratadas (curativo) com cefalônio anidro intramamário, nos

diferente momentos estudados.

xiii

TABELA 10 Dados individuais da susceptibilidade antimicrobiana in vitro dos

microrganismos isolados de ovelhas Santa Inês do grupo controle aos

90 dias pós-parto.

TABELA 11 Dados individuais da susceptibilidade antimicrobiana in vitro dos

microrganismos isolados de ovelhas Santa Inês do grupo preventivo

aos 90 dias pós-parto.

TABELA 12 Dados individuais da susceptibilidade antimicrobiana in vitro dos

microrganismos isolados de ovelhas Santa Inês do grupo curativo aos

90 dias pós-parto.

TABELA 13 Resultados individuais da interpretação do California Mastitis Test

(CMT) em ovelhas Santa Inês do grupo controle aos 90 dias pós-parto.

TABELA 14

Resultados individuais da interpretação do California Mastitis Test

(CMT) em ovelhas Santa Inês do grupo preventivo aos 90 dias pós-

parto.

TABELA 15 Resultados individuais da interpretação do California Mastitis Test

(CMT) em ovelhas Santa Inês do grupo curativo aos 90 dias pós-parto.

xiv

LISTA DE ABREVIATURAS

% - porcento

µg – micrograma

BA – Bahia

C.C.S – Contagem de Células Somáticas

CDP – Centro de Desenvolvimento da Pecuária

cél/mL – células por mililitro

CMT – Califórnia Mastite Test

CNS – Staphylococcus coagulase negativo

CR – Taxa de Cura

DNA – Ácido Desoxirribonucléico

g – grama

IBGE – Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística

Kg – kilograma

log – Logaritmo

m² – metro quadrado

mg/kg – miligrama por quilo

mL – Mililitro

NAGage – N-acetil-β- D- glucosamidanidase

NIN – Taxa de Novas Infecções

ºC – Grau Celsius

pH – potencial de hidrogênio

SAEG – Sistema de análise estatística e genética

SP – São Paulo

SPSS – Statistical Package for Social Science

UFBA – Universidade Federal da Bahia

UI – Unidade Internacional

UNESP – Universidade Estadual Paulista

COUTINHO, D.A. Etiologia, sensibilidade microbiana e eficácia do cefalônio anidro

intramamário na secagem de ovelhas Santa Inês. Salvador, Bahia, 89p. Dissertação

(Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos) - Escola de Medicina Veterinária, Universidade

Federal da Bahia, 2006.

RESUMO

Foram submetidos a exames clínicos e microbiológicos 124 metades mamárias de ovelhas da

raça Santa Inês e as suas respectivas secreções lácteas no momento da secagem aos 90 dias

após o parto. O exame de Tamis não revelou mastite clínica em nenhuma das metades

analisadas e de cada uma delas foi coletada amostra para realização de exames

microbiológicos em meios de ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar MacConkey. Os

microrganismos isolados foram submetidos ao teste de sensibilidade microbiana in vitro

frente a nove antimicrobianos. Das 124 amostras 33 (26,6%) foram positivas ao exame

microbiológico. O microrganismo isolado com maior freqüência foi Staphylococcus

coagulase negativo (19/33=57,6%), seguido por Staphylococcus aureus (5/33=15,2%),

Micrococcus sp. (5/33=15,2%), Streptococcus α-hemolítico (3/33=9%) e Streptococcus

agalactiae (1/33=3%). Dentre os antimicrobianos utilizados, o cefalônio anidro foi o mais

efetivo, visto que a totalidade dos isolados mostraram-se sensíveis à droga, enquanto os

maiores índices de resistência foram constatados com o uso da penicilina G, neomicina e

ampicilina.

A eficácia do tratamento com cefalônio anidro intramamário na secagem de ovelhas Santa

Inês visando a cura de infecções intramamárias pré- existentes e prevenir novas infecções

durante o período seco e na lactação seguinte também foi estudado no presente trabalho. Um

total de 62 ovelhas multíparas foram divididas em três grupos de acordo com seu status

bacteriológico. O grupo 1 (Controle) não recebeu nenhum tratamento no momento da

secagem , grupo 2 (Preventivo) e grupo 3 (Curativo) foram submetidos à secagem da mama

aos 90 dias após o parto e tratados com um produto comercial de vaca seca a base de

Cefalônio Anidro. Não foram observadas diferença significativa (p <0,05) nas taxas de cura

entre os grupos em todos os momentos analisados. A taxa de novas infecções (NIN) no grupo

controle, preventivo e curativo foram de 13,5, 14,7 e 5,0%, respectivamente, aos 10-15 dias

pós-parto; 16,2, 8,8 e 0%, respectivamente, aos 20-25 dias pós-parto; 13,5, 14,7 e 15,0%,

respectivamente, aos 30-35 dias pós-parto e 16,2, 5,9 e 0%, respectivamente, aos 40-45 dias

pós-parto. Foi observada diferenças significativas entre os grupos (p <0,05) aos 20-25 dias

após o parto e aos 40-45 dias após o parto. Estes resultados sugerem que o tratamento no

período da secagem com o cefalônio anidro auxiliou na prevenção de novas infecções,

contribuindo para a manutenção da saúde da glândula mamária no rebanho.

Palavras Chave

Mastite subclínica, ovelhas, tratamento, secagem, cefalônio.

xvi

COUTINHO, D.A. Aetiology, in vitro antimicrobial susceptibility and efficacy of dry

treatment in Santa Inês ewes using cefalonium intramammary. Salvador, Bahia, 89p.

Dissertation (Master’s degree) – Veterinary Medicine School, Federal University of Bahia,

2006.

SUMMARY

Clinical and microbiological exams were performed in 24 mammary-halves of Santa Ines

ewes in dry-off period, on the 90th day postpartum. The Tamis exam hasn’t showed any sign

of clinical mastitis in none of the halves analyzed. Milk samples were submitted to

microbiological culture on defibrinated sheep blood agar (5%) and MacConkey agar.

Microorganisms isolated were submitted also to in vitro susceptibility test (diffusion disk)

against nine antimicrobials. Of the 124 samples, 33 (26.6%) were bacteriologically positive.

The most-common agent found was Staphylococcus coagulase negativo (19/33=57.6%),

followed by Staphylococcus aureus (5/33=15.2%), Micrococcus sp. (5/33=15.2%),

Streptococcus α-hemolítico (3/33=9%) e Streptococcus agalactiae (1/33=3%). Among the

antimicrobials used, cephalonium was the most effective, while most frequent resistance were

observed with penicillin G, neomycin e ampicillin.

The efficacy of dry-off treatment of Santa Inês sheep using cefalonium intramammary in

curing chronic intramammary infections and preventing new ones during the dry-off period

and during the following lactation was also studied in the present work. A total of 62 Santa

Inês sheep on one farm in their second, third or more lactation were divided in three groups

according their bacteriological condition. The first group (control) didn´t receive any kind of

treatment at drying off, the second (prevent) and the third (cure) group received at drying off

intramammary treatment with a commercial cattle dry-off treatment containing cefalonium

anidrum. No significant difference (p <0.05) in the cure rates between groups in all samplings

analysed was found. New infection rates in the prevent, treated and control group were 13.5,

14.7 e 5.0%, respectively, at 10-15 days post-partum, 16.2, 8.8 e 0%, respectively, at 20-25

days post-partum; 13.5, 14.7 e 15.0%, respectively, at 30-35 days post-partum and 16.2, 5.9 e

0%, respectively, at 40-45 days post-partum. Significant difference (p <0.05) was found at 20-

25 days post-partum and at 40-45 days post-partum. These data suggested that dry-off

treatment could prevent new infections, maintaining health udders in the herd.

Keyboard

Subclinical Mastitis, sheep, treatment, dry-off, cefalonium.

1. INTRODUÇÃO GERAL

A ovinocultura é uma atividade econômica explorada em todos os continentes, estando

presente nos mais variados ecossistemas com diversos climas, solos e vegetações. Entretanto,

esta exploração apresenta expressão econômica em poucos países, já que, na maioria das

nações onde é explorada, a atividade é desenvolvida em sistemas extensivos e com baixo nível

de tecnologia (DOMINGUES & LEITE, 2004).

O Brasil possui 1,7% do efetivo mundial do rebanho ovino (ANDRADE FILHO & ALVES,

2002), com 14.556.484 animais, sendo 6 milhões na região sul, onde o Rio Grande do Sul é o

maior produtor, com 5 milhões de cabeças. O Centro-Oeste possui 650 mil cabeças, o Sudeste,

414 mil; e o Norte, 305 mil. Dentre os Estados do Nordeste, a Bahia possui o maior rebanho,

com 2,5 milhões de cabeças (IBGE, 2003).

No Nordeste, as microrregiões mais importantes na criação de ovinos estão localizadas nos

estados da Bahia e Ceará. Cerca de 50 % do rebanho de caprinos e ovinos do Nordeste estão

localizados em propriedades com menos de 30 hectares e o regime de exploração,

predominantemente, é o extensivo, com alta dependência da vegetação nativa, utilização de

raças não especializadas, uso de práticas rudimentares de manejo, assistência técnica

deficitária, baixo nível de organização e de produção (VASCONCELOS & VIEIRA, 2005).

À medida que os criadores vão introduzindo melhorias na produção, vão surgindo novos

problemas de saúde em seus rebanhos. Um deles, que vem crescendo muito e necessita de uma

específica intervenção terapêutica, é a infecção do úbere das ovelhas (NACCARI et al., 2003).

A mastite em ovelhas tem sido descrita em todos os grandes países criadores da espécie, sendo

importante economicamente devido ao descarte precoce das matrizes e ocasionalmente a sua

morte, diminuição da performance dos cordeiros que se alimentam do leite de ovelhas

infectadas e morte das crias por inanição ou por infecções advindas dos agentes causadores da

mastite (WATSON & BUSWELL, 1984; KIRK & GLENN, 1996; LANGONI, 2003). Apesar

da maior incidência em raças leiteiras, recentemente tem sido descrito o seu efeito sobre o

ganho de peso e sobrevivência dos cordeiros também em raças de carne, aumentando com isso

o interesse pelo problema (FTHENAKIS & JONES, 1990; DOMINGUES & LEITE, 2004).

Com a expansão do sistema para a produção da carne ovina, houve grande crescimento no

interesse dos produtores, principalmente por animais da raça Santa Inês no Nordeste, Centro-

Oeste, Sudeste e na região Norte do país, sendo esta raça atualmente um importante fator para

o desenvolvimento da ovinocultura (LOBO, 2004). Nesta raça, acredita-se que a elevada

incidência da doença tem como fator predisponente a aptidão leiteira, principalmente quando

há oferta de alimentos de boa qualidade (www.zebus.com.br/zootecnia340berro.htm).

Define-se mastite como a inflamação da glândula mamária, caracterizada por alterações físicas,

químicas e bacteriológicas no leite e no tecido glandular, sendo causada mais comumente pela

infecção por patógenos na glândula mamária, e, embora menos comum, por traumas,

neoplasias, reações alérgicas, fisiológicas ou hormonais (RADOSTITS et al., 2002).

Embora possa ocorrer em qualquer momento da lactação, a mastite em ovelhas é mais

freqüente ao redor da terceira e quarta semana após o parto, o que ocorre em sintonia com o

pico de produção de leite (VAZ, 1996). Mastite que se desenvolve durante o período seco ou

durante o final da lactação é freqüentemente não percebida até o próximo parto ou até quando

alguns procedimentos de manejo sejam realizados, como a tosquia (MENZIES &

RAMANOON, 2001).

Nas duas últimas décadas, observa-se um significativo aumento do conhecimento sobre

mastite ovina na literatura internacional, principalmente no que diz respeito aos agentes

infecciosos responsáveis pela infecção intramamária e na interpretação do número total de

células somáticas. Poucas informações a respeito de tratamentos apropriados para a mastite

clínica, tratamento no período seco e manejo preventivo em raças de corte e leite dificultam o

trabalho de veterinários e produtores. No Brasil, existem poucas pesquisas envolvendo a

afecção e a introdução de novas raças com aptidão leiteira nesses rebanhos pode levar a um

aumento significativo na incidência da doença.

O tratamento local ou sistêmico utilizado em ovinos fundamenta-se em informações

disponíveis a partir dos trabalhos realizados em bovinos (PUGH, 2005). O tratamento realizado

no período seco tem sido pouco utilizado em ovinos e tem como objetivo curar infecções

intramamárias pré-existentes além de prevenir novas infecções, sendo recomendado nos

programas de controle da mastite por quase trinta anos (NEAVE et al., 1966; POSTLE &

NATZKE, 1974; RADOSTITIS et al., 2002).

A perda de produção de leite representa a conseqüência econômica mais importante das

infecções intramamárias, reduzindo a produção de leite das ovelhas em 20% a 37% (TORRES-

HERNANDEZ, 1979; MCCARTHY et al., 1988; FTHENAKIS & JONES, 1990), a

concentração de lactose e elevando a CCS (MARGETIN et al., 1993; BURRIEL, 1997). A

mastite ainda é considerada uma importante causa de morte neonatal dos cordeiros, causada

pela inanição devido à diminuição ou ausência na produção de leite ou pela morte das ovelhas

(FTHENAKIS & JONES, 1990). A infecção reduz o ganho de peso diário dos cordeiros em até

20g/dia e até 4 Kg até o período da desmama (FTHENAKIS & JONES, 1990; AHMAD et al.,

1992a; LARSGARD & VABENOE, 1993).

O presente trabalho tem por objetivo geral revisar os principais aspectos da etiologia,

epidemiologia, patogenia, clínica, diagnóstico, controle e saúde pública na mastite ovina e

como objetivos específicos avaliar a etiologia e sensibilidade microbiana in vitro da mastite

subclínica em ovelhas da raça Santa Inês e a eficácia do tratamento no período seco com o uso

do Cefalônio Anidro intramamário.

2. REVISÃO DE LITERATURA

2.1 DEFINIÇÃO

A mastite é, por definição, a inflamação da glândula mamária. Esta inflamação é causada mais

comumente através da infecção por patógenos na glândula mamária, e, embora menos comum,

por traumas, neoplasias, reações alérgicas, fisiológicas e hormonais (RADOSTITS et al., 2002;

BIRGEL, 2004).

A literatura varia enormemente sobre o que é considerado um nível patogênico de inflamação

ou uma infecção significativa da glândula mamária por patógenos, porém, muitos autores

concordam que, se estes fatores afetam o nível de produção ou a qualidade dos produtos

lácteos, então é bastante significativo para a indústria ovina (MENZIES & RAMANOON,

2001).

2.2 ETIOLOGIA

As bactérias são os agentes isolados e identificados mais freqüentemente nos casos de mastite

ovina, entretanto, fungos, leveduras, algas, vírus e micoplasma também podem infectar a

glândula mamária da ovelha (DOMINGUES & LEITE, 2004).

Tanto em ovelhas quanto em cabras, Bor et al. (1989) e Ameh et al. (1994a) afirmam que

Staphylococcus aureus é o patógeno mais comumente encontrado nos casos de mastite

hiperaguda e ocasionalmente Mannheimia spp. (especialmente Mannheimia haemolytica) e

coliformes. Shoops & Myers (1984) e Watson & Buswell (1984) afirmam que Mannheimia

haemolytica é uma das mais importantes causas de mastite hiperaguda e crônica em ovelhas,

sugerindo que a fonte de infecção é proveniente da cavidade nasal e oral dos cordeiros

lactentes.

Al-Samarrae et al. (1985) e Rapoport (1989) relatam que em mais de 35% dos casos de mastite

clínica em ovelhas o isolado mais comumente encontrado é de Staphylococcus aureus.

Menzies & Ramanoon (2001) afirmam que Streptococcus spp. ambientais tem sido um isolado

raro na maioria dos levantamentos realizados em ovelhas.

Espécies de clostrídios podem ainda ser encontradas na coloração de Gram e estão presentes

como invasores secundários dos tecidos anóxicos (MENZIES & RAMANOON, 2001).

Serratia marcescens tem sido associada por alguns autores (TZORA & FTHENAKIS, 1998)

com a contaminação das teteiras das ordenhadeiras em rebanhos leiteiros. Bactérias como

Corynebacterium bovis, Micrococcus spp (MAISI et al., 1987) e Corynebacterium

camporealensis (FERNANDEZ-GARAYZABAL et al., 1998) tem sido descritas como

microrganismos freqüentemente isolados. PEREZ et al. (1999) afirmaram que Aspergillus spp.

pode estar presente na glândula mamária após tratamento com antibióticos antes do parto.

Coliformes (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumonia) são menos

isolados de cabras e ovelhas. A infecção associada a Salmonella spp. é rara. Pseudomonas

aeruginosa tem sido associada a surtos de mastite aguda em ovelhas leiteiras lactantes em

Israel (RAPOPORT, 1989).

Os patógenos mais comuns na mastite subclínica em ovelhas durante todos os estágios da

lactação, incluindo no período seco e na secagem, são os Staphylococcus coagulase negativo

Hueston et al. (1986); Watson et al. (1990); Keisler et al. (1992). De acordo com Hueston et al.

(1986); Mackie & Rogers (1986); Maisi et al. (1987); Watkins et al. (1991); Fthenakis et al.

(1994); Danków et al. (1998) um grande número destas espécies têm sido isoladas de amostras

de ovelhas com mastite subclínica, porém muitos deles apresentam uma baixa patogenicidade e

algumas espécies tem demonstrado aumentar os indicadores da resposta inflamatória como

observado nas infecções por Staphylococcus coagulase positivo.

Kirk et al. (1996) observaram em 87% de 400 ovelhas clinicamente sadias isolados primários

de Staphylococcus coagulase negativo com valores de CCS iguais ou menores que 200.000

cél/mL.

Segundo Radostits et al., (2002), Mycoplasma spp. não é comumente isolado da glândula

mamária de ovelhas e pode causar uma mastite clínica altamente contagiosa sendo transmitido

por práticas inadequadas de higiene na ordenha e/ou por tratamentos intramamários realizados

de forma errônea. Menzies & Ramanoon (2001) consideram ainda que, se os sinais clínicos da

mastite em rebanhos ovinos incluem artrite e conjutivite com ou sem pneumonia, Mycoplasma

agalactiae deve ser considerado como agente causal desta enfermidade, denominada síndrome

da agalactia contagiosa.

Fungos, leveduras (como os gêneros Candida e Cryptococcus) e algas também podem infectar

a glândula mamária das ovelhas, porém passam desapercebidos porque produzem mastite

subclínica (DOMINGUES & LEITE, 2003). O vírus Maedi-visna, também conhecido como

vírus da pneumonia progressiva ovina, também tem sido implicado em alterações da glândula

mamária ovina (CUTLIP et al., 1985). As ovelhas ao parirem apresentam o úbere endurecido e

aparentando estarem repletos de leite, porém pouco leite pode ser retirado da glândula. A

sintomatologia difere da mastite bacteriana, pois o úbere apresenta-se uniforme em tamanho e

consistência, o leite apresenta-se macroscopicamente normal e na maioria das vezes, nenhuma

bactéria é encontrada nos exames bacteriológicos (BULGIN et al., 1985).

2.3 EPIDEMIOLOGIA

Segundo Vaz (1996), existem duas situações que podem ser consideradas na epidemiologia de

mastite em ovinos: quando a ovelha está com o cordeiro ao pé ou quando a mesma está sendo

ordenhada sem a manutenção do cordeiro. No primeiro caso, a presença de M. haemolytica

pertencendo a flora normal da cavidade oral e/ou faringe dos cordeiros faz com que esta

bactéria assuma maior importância, pois é transmitida diretamente ao teto durante o ato de

mamar. Em situação oposta, em que o cordeiro é afastado da ovelha, faz com que a

importância relativa de Staphylococcus aureus cresça, atingindo uma freqüência semelhante a

que é observada na mastite bovina em situação similar. A ocorrência de mastite é favorecida

pela presença de lesões no úbere.

A ovelha desenvolve a infecção três a sete semanas após o parto, estágio máximo de produção

láctea e de maior trauma da mama pelo cordeiro lactente (FTHENAKIS, 1994). A ocorrência

de surtos pela M. haemolytica é mais comum em ovelhas amamentando cordeiros de quatro a

seis semanas de idade, devido à forte sucção exercida pelo cordeiro faminto, principalmente

em ovelhas de baixa produção leiteira. Quando criadas à pasto, podem estar relacionado com o

hábito dos ovinos dormirem, à noite, diretamente no chão (PUGH, 2005). Durante surtos de

mastite causada por M. haemolytica, podem ocorrer casos de pneumonia em cordeiros,

provocados pelo mesmo microrganismo (RADOSTITS et al., 2002).

O período de amamentação aumenta o risco da disseminação da doença, que se eleva com a

existência de cordeiros rejeitados, capazes de sugar sucessivamente úberes infectados e

saudáveis (BERGONIER & BERTHELOT, 2003).

2.3.1 PREVALÊNCIA

A prevalência da mastite em ovelhas não é tão claro quanto o observado em cabras (MENZIES

& RAMANOON, 2001). A prevalência da mastite clínica em ovelhas britânicas na sala de

matança foi de aproximadamente 13% a 50%, demonstrando que esta enfermidade é uma

importante causa de descarte de ovelhas no Reino Unido (MADEL, 1981).

Em rebanhos criados extensivamente a prevalência da mastite clínica variou de 1% a 3%,

sendo que uma maior porcentagem de úberes apresentaram cultura positiva (5% a 30%) ou

uma elevada (14% a 20%) contagem de células somáticas (HUESTON et al., 1986; WATKINS

et al., 1991; KEISLER et al., 1992).

Em rebanhos leiteiros a prevalência da mastite determinada por cultura positiva do leite foi

acima de 35% e entre 4% a 17% pela combinação de uma elevada contagem de células

somáticas e da cultura positiva do leite (FTHENAKIS, 1994).

Bulgin et al. (1985) em estudo realizado em rebanhos do ocidente dos Estados Unidos

reportaram um descarte superior a 10% de ovelhas a cada ano devido à mastite pelo vírus

Maedina-visna e uma prevalência de 19% de mortalidade de cordeiros devido a esta

enfermidade.

No Reino Unido, Radostits et al. (2002), afirmam que a mastite foi responsável por 8,4% das

mortes de ovelhas e mais de 34% das mortes de cordeiros. Citam ainda que, em uma pesquisa

realizada na Noruega relatou-se uma incidência de mastite de 2% ao ano em 6.000 ovinos.

Fthenakis (1994), em experimento realizado com 760 ovelhas no sul da Grécia, observou uma

incidência de mastite subclínica de 4,5% na primeira amostra (na desmama dos cordeiros);

11,2% na segunda amostra (2-3 semanas depois) e 16,9% na terceira amostra (6-8 semanas

após a segunda amostra).

No Brasil, Fernandes & Cardoso (1985) descreveram um surto no Rio Grande do Sul no qual

de 80 ovelhas examinadas, 10% apresentaram mastite clínica e 8,75% fibrose da glândula

mamária. Schild et al. (1994), em pesquisa realizada no mesmo Estado, observaram que a

mastite gangrenosa foi diagnosticada num rebanho de 400 ovinos das raças Texel, Ideal,

Corriedale, Romney, Marsh e Merino com uma morbidade de 10 a 20% e letalidade de 50%.

Em estudo realizado com 3.128 ovelhas, em 22 propriedades do Rio Grande do Sul e Santa

Catarina, observou-se uma prevalência média de mastite subclínica em pelo menos uma das

glândulas, de aproximadamente 5% das ovelhas (VAZ, 1996).

2.4 FISIOLOGIA E MECANISMO DE DEFESA DA GLÂNDULA MAMÁRIA

Segundo Pilar et al. (2002) o desenvolvimento mamário se inicia no final da gestação, por

volta dos 30 dias antecedentes ao parto (primeira fase da lactação) sendo precedida pelo

estabelecimento do fluxo normal do leite, no período pós-parto, com maior produção de leite

pela ovelha na quarta semana (segunda fase da lactação).

A cisterna da teta é a porta de entrada para as infecções do úbere (PERSSON et al., 1996). As

bactérias penetram por uma rota ascendente através do ducto da teta e vários metabólitos e

toxinas bacterianas nos tecidos induzem a uma resposta inflamatória. (PERSSON et al., 1997;

BERGONIER & BERTHELOT, 2003).

A fração de leite da cisterna da teta na maioria das raças de ovelhas leiteiras é maior que 50%

(CAJA et al.,1999). Portanto, uma larga fração de leite está localizada dentro da cavidade da

cisterna da glândula e abaixo do orifício do canal da teta, só podendo ser coletado durante o

processo de ordenha ou sucção exercida pelas crias (BRUCKMAIER et al., 1994;

BRUCKMAIER et al., 1997).

Para Labussière (1988) e Rovai et al. (1999), uma ovelha leiteira ideal deve possuir uma larga

cisterna e uma localização vertical das tetas, sendo que um úbere largo usualmente determina

aumento na produção de leite (Figura 1).

Figura 1. Conformação ideal do úbere de uma ovelha leiteira

Não há correlação entre o comprimento da teta e a produção de leite, enquanto um maior

volume do úbere está associado com uma desfavorável posição das tetas (ROVAI et al., 1999;

DZIDIC et al., 2004).

Segundo Park & Jacobson (1993), a glândula mamária é protegida por dois mecanismos de

defesa: os primários, que evitam a entrada de germes patogênicos na glândula (ex: camada de

queratina no canal do teto), e os secundários, que se localizam mais internamente (ex: células

de defesa e imunoglobulinas).

2.5 PATOGENIA

Atualmente a mastite pode ser classificada de acordo com as fontes de infecção e vias de

transmissão dos microrganismos em contagiosa ou ambiental, dependendo diretamente do

patógeno causador da enfermidade (RADOSTITS et. al., 2002).

Segundo Rebhun (2000), os patógenos mais comuns da mastite contagiosa são o

Staphylococcus aureus e o Streptococcus agalactiae, sendo encontrado raramente o

Mycoplasma bovis. Estes microrganismos são responsáveis por uma mastite subclínica que

resulta na diminuição da produção leiteira. O autor também afirma que as principais fontes e

vias de transmissão estão relacionadas aos procedimentos de ordenha, devido principalmente a

má higienização das mãos dos ordenhadores e dos equipamentos.

Na mastite ambiental o principal meio de transmissão e de contaminação é o manejo

inadequado do ambiente como, camas úmidas e áreas sujas destinadas à permanência dos

animais (RADOSTITS et al., 2002).

O curso da infecção intramamária por S. aureus, segundo Kingwill et al. (1970), pode ser

dividido em três fases. Na primeira, ocorre entrada da bactéria pelo ducto da teta, migração e

multiplicação no úbere. Na segunda, ocorre colonização do epitélio da cisterna da teta e

somente na terceira fase observa-se a migração pela glândula mamária.

Acland (1998), descreve dois mecanismos de defesa da glândula mamária, um não

imunológico, como a camada de queratina no canal do teto e a lactoferrina produzida pelas

células epiteliais mamárias, e outro imunomediado, composto por mecanismos celulares, como

os neutrófilos e macrófagos, e mecanismos humorais, representados pelas imunoglobulinas.

Segundo Jones et al. (2000), embora se saiba que alguns microrganismos patogênicos penetram

no organismo pela via hematógena, a grande maioria deles ingressam na glândula mamária

pela via ascendente através do canal do teto.

De acordo com Merck (2001), na mastite estreptocócica, o microrganismo penetra na glândula,

se instala no leite e na superfície dos canais lácteos e se multiplica, causando liberação de

neutrófilos, tendo como conseqüência a obstrução dos ductos, seguida de uma fibrose do tecido

alveolar, levando a perda da função secretora.

Pugh (2005), afirma que as toxinas produzidas pelo Staphylococcus aureus provocavam

trombose vascular e gangrena com desprendimento de tecidos adjacentes. A infecção por M.

haemolytica origina abscessos que podem fistular na parede do úbere.

Acland (1998), relata que na infecção pelo Staphylococcus aureus, a bactéria se liga às células

epiteliais provocando uma maior área estromal interalveolar, lesão no epitélio alveolar com

involução, redução do lúmen do alvéolo, tumefação, degeneração e ulceração em todo sistema

ductal.

Radostits et al. (2002), afirmam que a Escherichia coli ao invadir a glândula mamária, se

multiplica e produz uma endotoxina que altera a permeabilidade vascular, causando edema e

tumefação na glândula e elevação do número de neutrófilos no leite.

2.6 ASPECTOS CLÍNICOS

Quinlivan (1968) desenvolveu um sistema de classificação para a mastite clínica ovina que

ainda é aplicada atualmente, sendo dividida em quatro categorias. Na primeira categoria

observa-se uma pequena lesão fibrótica do tecido mamário com secreção sem alterações

macroscópicas. Uma lesão fibrótica mais extensa no úbere pode ser observada na segunda

categoria, com o leite variando entre normal, purulento, com coágulos ou até a sua ausência

devido a oclusão da teta pelo tecido fibroso. Na terceira categoria de sua classificação as

ovelhas apresentam um extenso edema de úbere com o leite apresentando-se entre normal,

aquoso, seroso ou purulento, sendo que o úbere pode abscedar ou romper devido a mastite

gangrenosa (mastite aguda). Na mastite hiperaguda as ovelhas apresentam um completo

envolvimento do úbere com inflamação severa, secreção serosa, fibrina e material purulento.

Os linfonodos encontram-se aumentados e a temperatura corporal elevada.

2.6.1 MASTITE CLÍNICA

A mastite clínica pode ocorrer durante qualquer estágio da lactação ou do período seco, porém

a maior incidência da mastite clínica severa ocorre aproximadamente de duas a quatro semanas

após o parto ou após a desmama. Os casos fatais atribuídos aos efeitos da toxemia na mastite

clínica variam de 30% a 40% (MENZIES & RAMANOON, 2001).

Os sinais clínicos da mastite ovina incluem aumento do volume do úbere, vermelhidão, calor e

dor a palpação, com decréscimo da secreção mamária e alterações das características químicas,

físicas e organolépticas do leite (LANGONI, 2003). As ovelhas apresentam ainda como

sintomas gerais, leve aumento da temperatura corporal, anorexia e depressão (NACCARI et al.,

2003).

Os casos de mastite aguda são caracterizados por início súbito, vermelhidão da pele do úbere,

perda de apetite, claudicação, dor, ardor, inchaço, aumento de temperatura local e redução ou

alteração do leite secretado pelo teto afetado (Figuras 2 e 3). Os aspectos clínicos mais

comumente observados na secreção láctea são a presença de grumos, coágulos, flocos ou pus

(SMITH, 1993).

Figuras 2 e 3. Ovelha com mastite aguda atendida na Clínica de Ruminantes –

Centro de

Desenvolvimento da Pecuária (CDP) – Escola de Medicina Veterinária – UFBA

Dependendo da severidade e do agente causador, casos de mastite aguda podem apresentar

envolvimento sistêmico como inapetência, desidratação e decúbito. Havendo evolução do

quadro para a forma gangrenosa, o que é comum em ovelhas, o epitélio do úbere torna-se

azulado ou escuro (negro), devido à necrose. A apresentação superaguda ou gangrenosa

ocorre, principalmente, no pós-parto recente (Figuras 4 e 5). A glândula apresenta-se

aumentada de volume (quatro a cinco vezes). O edema acentuado muitas vezes se estende pelo

abdômen até os membros anteriores. Pode observar-se febre de 40-42°C. O curso da doença é

rápido, podendo ocorrer morte da ovelha em um período desde quatro a cinco horas ou em 48-

72 horas, ou ainda, após um período clínico de até cinco dias (SMITH, 1993; VAZ, 1996;

LADEIRA, 1998; RADOSTITS et al., 2002).

Na mastite crônica a glândula afetada torna-se gradualmente menos produtiva, podendo

atrofiar. Observam-se nódulos e abscessos no parênquima mamário e úberes aumentados e

endurecidos (MERCK, 2001). De acordo com Domingues & Leite (2003) a mastite crônica é

geralmente conseqüência de mastite aguda ocorrida durante a lactação, mas que não foi

detectada.

Radostits et al. (2002), afirmam que a mastite crônica se caracteriza pelo aumento e

endurecimento da glândula mamária, pela ausência de dor e pela não elevação da temperatura

local. O endurecimento da mama depende do estágio de desenvolvimento da doença, sendo

mais palpável na cisterna da glândula e regiões inferiores do úbere. De acordo com JONES et

al. (2000) as partes fibrosadas da glândula são relativamente resistentes à reinfecção.

Figuras 4 e 5. Mastite gangrenosa em ovelha.

Fonte: PENGOV & JURCEVIC (2006)

Na tabela 1 são descritos os aspectos clínicos da mastite em ovelhas.

Tabela 1. Aspectos clínicos da mastite em ovelhas

Mastite Alterações sistêmicas Alterações locais

Mastite hiperaguda Depressão, febre inicial,

hipotermia, desidratação,

anorexia, toxemia, laminite,

abdômem avermelhado e

azulado

Coloração avermelhada a

azulada do úbere, glândula

mamária fria à palpação,

secreção serosa avermelhada

podendo conter gás, necrose,

desprendimento da glândula e

do tecido ao redor

Mastite aguda Depressão, inapetência,

desidratação e decúbito

Edema extenso do úbere,

secreção variando de normal a

aquosa, serosa ou purulenta,

abscessos e rompimento da

glândula

Mastite crônica Temperatura normal Glândula mamária dura,

fibrótica e reduzida de

tamanho. Secreção purulenta,

com grumos ou ausente

Fonte:

MENZIES & RAMANOON (2001)

2.6.2 MASTITE SUBCLÍNICA

Por definição a mastite subclínica é uma inflamação que não é detectada clinicamente, mas que

reduz a produção leiteira, sendo a forma predominante de infecção da glândula mamária em

ovelhas (CONTRERAS et al.,1999; BIRGEL, 2004).

Ruegg (2001), descreve que a mastite subclínica ocorre quando um patógeno infecta um ou

mais quartos, mas não provoca ruptura dos alvéolos do úbere deixando o leite aparentemente

normal. Radostits et al. (2002), afirmam que o leite de glândulas mamárias acometidas por

mastites subclínica se caracteriza por alcalinização do ponto hidrogeniônico (pH), aumento do

número de células somáticas e diminuição da produção.

Na mastite subclínica a reação inflamatória só é detectável por meio de testes como,

California Mastitis Test (CMT), contagem de células somáticas (CCS) e Wisconsin (MERK,

2001). Não observa-se alterações no aspecto da secreção láctea e no úbere, porém pode ser

verificado diminuição da produção, além do aumento do número de células somáticas do leite,

representadas pelas células de descamação e pelos leucócitos, principalmente neutrófilos

(GROSS et al., 1978; GREEN, 1984; SHEARER& HARRIS, 2005).

2.7 DIAGNÓSTICO

2.7.1 DIAGNÓSTICO CLÍNICO

A mastite clínica pode ser detectada pela realização do exame da glândula mamária e do leite

(QUINLIVAN, 1968). O seu diagnóstico precoce é dificultado em raças de ovelhas para carne

e lã devido à falta de inspeção rotineira do úbere, que ocorre muitas vezes apenas na parição,

na tosquia ou na secagem (MENZIES & RAMANOON, 2001).

O diagnóstico das formas hiperaguda, aguda e crônica é realizado considerando-se os sinais

clínicos, observando-se um aumento de volume da glândula mamária. À palpação verifica-se

aumento de temperatura e dor local; no caso de mastite gangrenosa o úbere se apresenta de

coloração azulada, bem como edematoso (LADEIRA, 1998).

Dirksen (1993) e Birgel (2004) afirmam que a avaliação dos aspectos macroscópicos do leite

através da inspeção dos três primeiros jatos em caneca de fundo preto (ou caneca telada), tem

grande valor no diagnóstico das mastites, podendo-se observar anormalidades nas

características físicas do leite.

Menzies & Ramanoon (2001) afirmam que a dificuldade de alguns produtores em identificar

pequenas alterações na glândula mamária durante a lactação e alterações clínicas que muitas

vezes só se tornam evidentes no período seco são fatores que afetam o diagnóstico clínico

precoce da enfermidade.

Para estabelecer-se o diagnóstico diferencial, deve-se considerar a presença do vírus da Maedi-

Visna no rebanho, que pode levar ao aparecimento de úberes endurecidos (VAZ, 1996;

RADOSTITS et al., 2002).

Diferentes métodos tem sido sugeridos por vários autores para a detecção da mastite subclínica,

como o California Mastitis Test (CMT), contagem de células somáticas (CCS), presença dos

patógenos no leite e mensuração da albumina sérica (MAISI, 1990). As alterações físico-

químicas da composição do leite também são utilizadas para diagnosticar indiretamente as

mastites (SILVA, 1999).

2.7.2 CONTAGEM DE CÉLULAS SOMÁTICAS

Em rebanhos leiteiros, a detecção da infecção intramamária subclínica é baseada na

interpretação da CCS no leite determinada mensalmente durante a lactação, sendo amplamente

utilizada nas condições de campo desde a década de 80 (SERIEYS, 1985; DOHOO & LESLIE,

1991).

A contagem de células somáticas é a mensuração do número de leucócitos e de células

epiteliais no leite e seu aumento é indicativo da inflamação da glândula mamária, sendo

freqüentemente causada por infecções bacterianas (SANCHEZ et al., 1999; BEAUDEAU et

al., 2001; SARGEANT et al., 2001). Seus valores variam de acordo com o estágio da lactação

(ROMEO et al., 1996).

Em ovelhas, 50% a 70% das células somáticas são macrófagos, 15% a 40% leucócitos

polimorfonucleares, 6% a 14% linfócitos e menos de 5% composto por células epiteliais de

descamação e eosinófilos (RANUCCI & MORGANTE, 1993).

Muitos autores já estudaram a relação entre a CCS e a mastite subclínica em ovelhas sugerindo

diferentes valores entre a glândula mamária sadia e infectada, variando de 0,25 x 10

cél/mL a

1,0 x 10

cél/mL (ARIZPABARRETA et al., 2002); 0,5 x 10

cél/mL a 1,6 x 10

cél/mL

(LAFI, 2005); alguns outros (BELTRAN DE HEREDIA & ITURRITZA, 1988; DE LA CRUZ

et al., 1994) reportaram valores muito similares aos encontrados em vacas (0,2 x 10

cél/mL e

0,3 x 10

cél/mL).

Lafi (2005) obteve em 719 amostras de leite estéreis 91% com menos de 1,0 x 10

cél/mL e

80% destas amostras apresentaram escore de CMT ≤ 2+. BERTHELOT et al. (2005)

determinaram a média geométrica de CCS considerando o status de infecção, obtendo 0,16 x

cél/mL para úberes sadios, 0,645 x 10

cél/mL para infecção unilateral e 0,853 x 10

cél/mL para infecção bilateral. MARCO MELERO (1994) observou em ovelhas da raça Latxa

uma média de 0,051 x 10

cél/mL, 0,210 x 10

cél/mL e 0,543 x 10

cél/mL para ovelhas não

infectadas, infectadas unilateral e bilateral, respectivamente.

Muitos fatores de risco têm sido descritos como associados à CCS em ovelhas, como o estágio

da lactação (BAURNGARTNER et al., 1992) e raça dos animais (NUDDA et al., 2002). Um

estudo comparando os métodos de microscopia direta e Fossomatic (GONZALO &

GAUDIOSO, 1985) e microscopia direta e Coulter (KEISLER et al., 1992) no leite de ovelhas

obteve uma correlação de 0,99 e 0,95, respectivamente. Segundo estes autores,

independentemente do método utilizado, os valores da contagem de células somáticas são

altamente confiáveis dentro de uma mesma amostra.

Valores elevados de CCS no leite prejudicam a sua qualidade, indicando que o plasma

sanguíneo contém elevados teores de proteases e lipases, especialmente plasmina, enzima não

inativada durante a pasteurização e que irá acelerar a deteriorização do leite. Como resultado,

amostras de leite de úberes com valores elevados de CCS possuem teores reduzidos de lactose,

gordura, proteína, cálcio e fósforo (POLITIS et al., 1989). Estes achados são particularmente

importantes em países onde a indústria ovina leiteira é existente, já que o leite utilizado para a

fabricação de queijos e outros derivados é essencialmente crú.

2.7.2.1 FATORES QUE AFETAM A CCS

O estágio da lactação e a infecção intramamária causada por bactérias patogênicas como o

Staphylococcus aureus são os principais fatores associados a elevação do número de células

somáticas (MENZIES & RAMANOON, 2001). Assim como em cabras, nas ovelhas ocorre um

aumento na média do número de células somáticas no final da lactação sem a presença de

infecção intramamária, embora os valores absolutos sejam inferiores aos observados em cabras

(FETHENAKIS, 1996; DANKÓW et al., 1998).

Em ovelhas, o efeito do número de lactações no número médio de células somáticas não está

tão definido quanto em cabras, onde o número médio de células somáticas aumenta com o

número de lactações independente do status bacteriológico da glândula mamária (RANDY et

al., 1988; ROTA et al., 1993; WILSON et al, 1995; ZENG & ESCOBAR, 1995). Um estudo

em ovelhas leiteiras realizado na Itália demonstrou um número médio de células somáticas

inferior a 0,057 x 10

cél/mL em glândulas sadias de ovelhas na primeira lactação

(MORGANTE et al., 1996). Gonzalo & Gadioso (1985) afirmam que o número de lactações

não é importante quando interpretamos os níveis de células somáticas do rebanho, pois este

fator é responsável por apenas 6,6% da variabilidade do log da CCS.

Fthenakis (1994) demonstrou que as amostras de leite obtidas na ordenha da manhã tinham

número total de células somáticas maiores 7% a 22% do que naquelas amostras obtidas na

ordenha da noite. Segundo Ubertalle et al. (1993) ovelhas ordenhadas manualmente

demonstraram valores menores de CCS no tanque (1,55 x 10

cél/mL) do que ovelhas

ordenhadas mecanicamente (3,0 x 10

cél/mL).

A refrigeração das amostras de leite por um período maior que sete dias pode causar um

decréscimo significativo (14%) nos valores de CCS (MENZIES & RAMANOON , 2001).

Segundo Andrade et al. (2001), dentre todos fatores que podem provocar aumento do número

total de células somáticas (CCS), as mastites bacterianas são as mais importantes.

2.7.3 PROVA CALIFÓRNIA MASTITE TESTE (CMT)

O California Mastitis Test ou Prova de Schalm é amplamente utilizado nas condições de campo

em bovinos, sendo um dos testes mais práticos e populares para o diagnóstico da mastite

subclínica (SANTOS et al., 1995).

É um método semi-quantitativo de avaliação que demonstra a qualidade da reação sem permitir

a sua exata quantificação, tendo seu princípio baseado na estimativa da contagem do número

de células somáticas no leite. Utiliza-se um detergente aniônico que atua rompendo a

membrana das células presentes na amostra de leite e liberando o material nucléico (DNA)

(SCHALM & NOORLANDER, 1957). O resultado é avaliado em função do grau de

gelatinização após mistura de partes iguais do leite e reagente em bandeja apropriada

(FONSECA & SANTOS, 2000). (Tabela 2).

Tabela 2. Interpretação do Califórnia Mastite Teste em ovinos

Negativo

Traços

Nenhum conteúdo gelatinoso é observado

Pequena quantidade de gel é formada de forma dispersa quando a raquete é agitada

Significativa quantidade de gel é formada de forma dispersa quando a raquete é agitada

O gel tende a se acumular no centro quando a raquete é agitada

3+ Mistura completamente gelatinosa e agrupada no centro quando a raquete é agitada

Fonte:

MENZIES & RAMANOON (2001)

O CMT em ovinos, segundo Menzies & Ramanoon (2001) e Bain et al., (2003) pode ser muito

útil como um teste de triagem para identificação de animais, considerando que as chances de

seleção de ovelhas infectadas são maiores quando amostras de leite com valor de CMT de 1+

ou maiores são selecionadas.

Os resultados do CMT em ovinos devem ser interpretados com muito critério devido ao tipo de

secreção do leite e de sua constituição, principalmente por terem um maior número de células

somáticas do que o observado em vacas. O resultado negativo é um bom indicador da ausência

da inflamação da glândula, os resultados ligeiramente positivos são observados em animais

sadios e podem representar até 1,5 x 10

cél/mL e os fortemente positivos indicam,

seguramente, uma reação causada por um processo inflamatório e resultam de até 5,0 x 10

cél/mL (BIRGEL, 2004).

A correlação entre o CMT e a CCS em ovelhas varia entre 0,51 a 0,82, sendo considerado boa

por muitos autores, devido a subjetividade do teste (MAISI et al., 1987; KEISLER et al., 1992;

GONZÁLES-RODRIGUEZ et al., 1995; DANKÓW et al., 1998).

Berthelot et al. (2005) e Lafi (2005) demonstraram que a sensibilidade e especificidade do

CMT e CCS em experimento realizado com 1210 amostras de leite de ovelhas excedeu 90%, o

que faz constituírem-se testes fidedignos e úteis para a identificação rápida das metades

infectadas. De acordo com Lafi (2005), na mastite, o teste ideal deve ter o máximo de

sensibilidade para minimizar a proporção de falso-negativos, enquanto que, em contraste, a

especificidade dos testes é de menor importância, devido aos resultados falso-positivos que

podem ser identificados durante o acompanhamento do teste confirmatório (cultura

bacteriológica).

Quando ocorre a presença da infecção intramamária, a especificidade do teste demonstra-se

melhor do que a sua sensibilidade, tornando-se melhor para avaliar úberes que não estejam

infectados (MENZIES & RAMANOON, 2001).

Os resultados positivos ou negativos do CMT são dependentes da prevalência da doença, o que

foi demonstrado em um primeiro estudo realizado por Hueston et al. (1986), no qual o valor

positivo esperado foi de 31% numa taxa de prevalência de 13% com quaisquer patógenos e de

13% com 4% de prevalência de patógenos maiores.

2.7.4 OUTRAS DETERMINAÇÕES

A detecção dos teores de N-acetil-β- D- glucosamidanidase (NAGase) no leite de ovelhas tem

sido proposto como uma prova mais sensível e mais específica para detecção da infecção

intramamária do que a CCS e CMT (MAISI et al., 1987).

A determinação do teor de cloretos no leite fundamenta-se na precipitação do cloreto sob a

forma de cloreto de prata, sendo a reação negativa, quando houver formação de precipitado

vermelho tijolo de cromato de prata e positiva quando a coloração for amarela (BRASIL,

1981). Nas mastites há transudação de cloreto de sódio do sangue para o leite, sendo este

cloreto responsável pelo sabor salgado do leite mamitoso (BIRGEL, 2004). (Figuras 8 e 9).

A prova de Whiteside é uma medida indireta do número total de células (leucócitos), sendo

utilizada na identificação de amostras anormais de leite (THOMAS, 1971). É caracterizado

pelo aparecimento de uma floculação produzida pela união dos íons de sódio produzidos a

partir do hidróxido de sódio adicionado e de íons de cálcio liberados do caseinato de cálcio

com a proteína dos leucócitos (KÄSTLI 1963 apud DEMETER, 1969). Em ovelhas,

WATKINS et al. (1991) consideram um teste útil e comparado com a performance do CMT,

com sensibilidade e especificidade de 48,5% e 97,6%, respectivamente (Figuras 6 e 7).

Figuras 6 e 7. Prova de Whiteside em amostra de leite ovino realizada Clínica de Ruminantes –

Centro de Desenvolvimento da Pecuária (CDP) – Escola de Medicina Veterinária –

Universidade Federal da Bahia.

Figuras 8 e 9. Determinação do teor de cloretos em amostras de leite ovino na Clínica de

Ruminantes – Centro de Desenvolvimento da Pecuária (CDP) – Escola de Medicina

Veterinária – Universidade Federal da Bahia.

2.7.5 CULTURA BACTERIOLÓGICA

Domingues & Leite (2003), afirmam que o diagnóstico etiológico pode ser realizado pelo

cultivo bacteriológico do leite em placas de Petri contendo meios de cultura como ágar-sangue

e ágar-MacConkey, incubando-se a 37°C, e realizando a leitura das placas às 24, 48 e 72 horas.

Pode-se, ainda, realizar o antibiograma para determinar o antibiótico de eleição para o

tratamento. A amostra de leite para cultivo deve ser colhida assepticamente, em frascos

esterilizados, após prévia higiene e desinfecção do óstio do teto com álcool a 70%.

Berthelot et al. (2005) em estudo realizado em 4 rebanhos com 215 ovelhas leiteiras

encontraram mais de 90% das bactérias isoladas pertencentes à família Micrococcaccae, 87,5%

Staphylococcus coagulase negativo e 0,8% Staphylococcus aureus. Foram isolados

Streptococcaccae (2%), Corynebacteria incluindo Arcanobacterium pyogenes (1,9%) e

organismos Gram negativos (1,2%).

2.7.5.1 CULTURA BACTERIOLÓGICA X CCS

Deinhofer (1993) e Ziluaga et al. (1998) afirmam que os microrganismos denominados de

patógenos maiores (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Arcanobacterium pyogenes)

estão associados a elevados valores de células somáticas. Alguns microorganismos

Staphylococcus coagulase negativo, principalmente novobiocina sensíveis (incluindo o

Staphyloccus epidermidis) também estão associados a elevados valores na CCS, enquanto

outros como Staphylococcus lentus, induzem apenas uma moderada inflamação (GONZALO et

al., 1993).

2.8 FATORES DE RISCO

O principal fator predisponente relacionado à ocorrência da mastite em ovelhas não leiteiras é o

ato da sucção dos cordeiros, especialmente os maiores que o fazem de forma agressiva,

causando lesões que eventualmente são invadidas por Mannheimia spp., organismo comum no

trato respiratório (MARSH, 1932; TUNNICLIFF, 1949; BERGONIER & BERTHELOT,

2003).

O número de cordeiros nascidos tem sido citado por Larsgard & Vaabenoe (1993) como tendo

uma correlação positiva com a incidência de infecção intramamária. Estes autores sugerem que

o dano freqüente e vigoroso da sucção destes cordeiros pode causar lesões no úbere e tetas que

predispõem a infecção intramamária.

Uma má conformação do úbere (tetas supranumerárias, tetas não convencionais e úberes mal

formados) tem um significante, porém pequeno efeito na freqüência da infecção intramamária

em ovelhas. Uma sucção inadequada dos tetos pelos cordeiros induz a um ineficiente

esgotamento do leite da glândula e a predisposição à infecção intramamária (MENZIES &

RAMANOON, 2001). (Figura 10).

Figura 10. Tetas supranumerárias em ovelha pertencente ao experimento

Watkins et al. (1991) e Fthenakis (1994) observaram que existe uma significativa associação

positiva entre a prevalência da infecção intramamária e a idade das ovelhas. Hendy et al.

(1981) relatam que um período seco maior que sessenta dias aumentam os riscos de

desenvolvimento da infecção intramamária.

Em ovelhas, Fthenakis (1994) encontrou uma maior prevalência da mastite subclínica nos

estágios avançados da lactação. Las Heras et al. (1998) e Sevi et al. (1999) citam que ovelhas

leiteiras ordenhadas manualmente tendem a ter um maior grau de infecção subclínica,

particularmente com S. epidermitis e que uma densidade maior que 2 m

/animal pode levar a

um aumento da ocorrência de mastites.

Estudo com ovelhas leiteiras realizado por Danków et al. (1998) demonstrou que animais com

elevada produção leiteira tiveram maior prevalência (48%) de mastite subclínica quando

comparado com ovelhas de baixa produção leiteira (22%). Ainda levando em consideração o

nível de produção leiteira, Larsgard & Vabenoe (1993) afirmaram que para cada 10g de ganho

de peso diário dos cordeiros existe um decréscimo de 0,09% na prevalência da mastite. Estes

autores sugerem que, a seleção para longevidade nas raças pode ser valiosa em alguns

programas de seleção, principalmente em rebanhos com elevada ocorrência de mastite.

2.9 EFEITO DA MASTITE NA PRODUTIVIDADE

Dentre as enfermidades que causam prejuízos econômicos à produção de leite em todo o

mundo, destacam-se os processos inflamatórios da glândula mamária (CASTRO et al., 2001).

A perda de produção de leite representa a conseqüência econômica mais importante das

infecções intramamárias. O efeito da infecção intramamária na produção leiteira de ovelhas

tem sido bem documentada, reduzindo a produção em 20% a 37% (TORRES-HERNANDEZ

& HOHENBOBEN, 1979; McCARTHY et al., 1988; FTHENAKIS et al., 1990), a

concentração de lactose e elevando a CCS (MARGETIN et al., 1993; BURRIEL, 1997).

Nas ovelhas primíparas estas perdas são estimadas entre 22% a 27% e de 37% nas de segunda

cria. Estes valores variam segundo as características da infecção. Nas infecções unilaterais

estas perdas situam-se em torno de 11% da produção total, enquanto que se ocorrem infecções

bilaterais as perdas podem chegar a 58% do total de leite produzido (SILVA, 1999).

Diversos estudos têm demonstrado que a mastite em ovelhas é também uma importante causa

de descarte, fato este observado em matadouros nos quais úberes com lesões são achados

freqüentes (MADEL, 1981; WATSON & BUSWELL, 1984). Johnston et al. (1980), em estudo

realizado durante três anos demonstraram que a mastite foi responsável por 8,4% das mortes

das ovelhas, assim como Watson & Buswell (1984) relatam descarte de 46% das ovelhas de

dois grandes rebanhos devido a mastite.

A mastite ainda é considerada importante causa de morte neonatal dos cordeiros, causada pela

inanição devido à diminuição ou ausência na produção de leite ou pela morte das ovelhas

(JOHNSTON et al., 1980). A infecção reduz o ganho de peso diário dos cordeiros em até

20g/dia e até 4 Kg até a desmama (FTHENAKIS & JONES, 1990; AHMAD et al., 1992a;

LARSGARD & VABENOE, 1993). Segundo Pekelder et al. (1994) cordeiros que ingeriram

leite de ovelhas infectadas apresentaram 5 quilos a menos no momento da secagem do que

cordeiros que ingeriram leite de ovelhas não infectadas.

2.10 RISCOS À SAÚDE PÚBLICA

A mastite em ovelhas é uma doença complexa, resultante da interação do animal, ambiente e

microrganismos. Os riscos à saúde pública também devem ser considerados, uma vez que a

comercialização dos produtos lácteos de animais enfermos poderá transmitir cepas portadoras

de plasmídeos de resistência a certos antimicrobianos, como também a possibilidade da

existência de bactérias produtoras de toxinas (PINHEIRO, ALVES, 2003).

A maior importância da doença reside na veiculação de microrganismos patogênicos e sua

toxinas, assim como de resíduos de antimicrobianos pelo leite. Em alguns países, o leite cru de

ovelhas é considerado um alimento saudável, porém pode conter diversos agentes

disseminadores de doenças para humanos (SILVA,1999). Staphylococcus aureus é a bactéria

mais comumente encontrada no tanque de leite desta espécie, com uma média de 2-3 unidades

formadoras de colônia/mL de leite e de até 13% no queijo (PODSTATZKY-LICHTENSTEIN

et al., 1998).

Klinger & Rosenthal (1997) isolaram em leite cru de ovelhas na Itália toxinas produzidas por

Escherichia coli 0157:H7, que também sobreviveram ao sistema de processamento de queijos

italianos. Tzora & Fthenakis (1998) isolaram Listeria monocytogenes de queijos macios e

semi-macios, do leite, de linfonodos mamários e de fezes de ovelhas com mastite subclínica .

Outros patógenos contaminantes do leite de ovelhas e que podem causar a doença em humanos

incluem Yersinia enterocolitica, Salmonella sp., Klebsiella sp., Streptococcus faecalis e E. coli

(KLINGER & ROSENTHAL, 1997; PODSTATZKY-LICHTENSTEIN et al., 1998).

2.11 TERAPÊUTICA

O uso de antimicrobianos em animais acompanha o desenvolvimento e a utilização destes em

medicina humana (MITCHELL et al., 1998). Atualmente existe grande variedade de drogas

permitidas para o tratamento da mastite em bovinos, sendo importante que sejam escolhidas

baseada na sua eficácia e na sua ação em cada agente causal da doença (NACCARI et

al.,2003). Em ovinos esta realidade é diferente, existindo pouquíssimas drogas aprovadas para

uso durante a lactação conforme indicado pelo MAPA no Brasil, Bureau of Veterinary Drugs

no Canadá e pelo Centro de Medicina Veterinária nos Estados Unidos. Da mesma forma,

pouquíssimos trabalhos existem em todo o mundo sobre o apropriado período de carência

destas drogas nestas espécies (CHAFFER et al., 2002).

Os veterinários na América do Norte estão liberados para a prescrição de drogas não

autorizadas à esta espécie de maneira extra-oficial, porém são obrigados a certificarem que os

resíduos não entrarão na cadeia alimentar (MENZIES, RAMANOON, 2001). Para tanto, é

recomendado que os profissionais consultem o período de carência das drogas e utilizem testes

para detecção de antimicrobianos no leite sempre que drogas antimicrobianas sejam utilizadas

no tratamento da mastite. Resultados falso-positivos ou falso-negativos podem ocorrer quando

são utilizados kits comerciais bovinos nestas espécies, principalmente se o leite for aquecido ou

adicionado conservante (CONTRERAS et al., 1997; ALTHAUS et al., 1998).

O tratamento antimicrobiano ideal da mastite seria aquele que pudesse controlar todos os

processos infecciosos do úbere e não deixasse resíduos no leite. O tratamento efetivo e de curta

duração depende do uso correto dos medicamentos e, portanto, depende de um sólido

conhecimento das propriedades farmacológicas dos antimicrobianos (COSTA &

WATANABE, 1999).

Os antimicrobianos mais comumente utilizados em animais de produção são divididos em

cinco classes incluindo os β-lactâmicos (cefalosporinas e penicilinas), as tetraciclinas

(oxitetraciclina, tetraciclina e clortetraciclina), os aminoglicosídeos (estreptomicina, neomicina

e gentamicina), os macrolídeos (eritromicina) e as sulfonamidas (sulfametazina) (MITCHELL

et al., 1998). O Cefalônio é uma cefalosporina semi-sintética de primeira geração com

atividade bactericida, principalmente para bactérias Gram positivas, e alto nível de eficácia

contra as principais bactérias causadoras de mastite (WILLIAMSON, 1995).

Diferentes tratamentos têm sido utilizados para combater as várias infecções bacterianas

responsáveis pela mastite em ovelhas e para limitar a ocorrência da resistência desenvolvida

por muitos microorganismos (NACCARI et al., 2003). Radostits et al. (2002), citam que

mesmo as ovelhas necessitando de doses de antimicrobianos intramamário menores que as

vacas, o tratamento é realizado com sucesso, porém os resíduos das drogas permanecem no

leite por um período mais longo que o observado em bovinos.

Schulz (1988) afirma que os animais acometidos por mastites devem ser isolados dos sadios, e

tratados com um preparado de penicilina-estreptomicina a intervalos de 24 horas,

intramamariamente, tendo o cuidado de ordenhar a mama antes da aplicação. Merck (2001),

demonstra que a eritromicina, após administração sistêmica, é encontrada em níveis mais altos

no leite que no plasma, sendo úteis nos casos agudos e superagudos.

Bocklisch & Wetzstein (1994) enfatizam que a combinação da terapia antimicrobiana

intramamária com a sistêmica apresenta uma resposta satisfatória na recuperação e

sobrevivência das ovelhas. É de vital importância que o tratamento seja iniciado imediatamente

após os primeiros sinais de inflamação, com elevadas doses de antibióticos como penicilina,

ampicilina, cloxacilina, cefalosporinas e sulfonamidas administradas intramamária ou

parenteral com intervalos de 12 a 24 horas.

Naccari et al. (2003) através de resultados obtidos in vitro e in vivo confirmam a eficácia

terapêutica da tilmicosina na mastite ovina. Uma única dose de tilmicosina de 10 mg/kg por

via subcutânea, foi usada por estes autores com eficácia e segurança na mastite bacteriana

causada por Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase negativo.

A decisão do uso da terapia intramamária de vaca seca em ovelhas deve ser baseada na

prevalência da mastite no rebanho, na facilidade do tratamento (injeção x infusão

intramamária) e nas considerações sobre o período de carência (MENZIES, RAMANOON,

2001). Esta terapia tem sido estudada por alguns autores, havendo evidências de avanços na

taxa de cura e redução do nível de novas infecções, embora os resultados variem

consideravelmente (HUESTON et al., 1989; AHMAD, 1992b; MENZIES, RAMANOON,

2001; CHAFFER et al., 2002).

2.12 CONTROLE E PROFILAXIA

Quando a finalidade da exploração é a produção de leite, as mesmas medidas higiênico-

sanitárias que são recomendadas para bovinos podem ser aplicadas para os ovinos, ou seja,

praticar uma ordenha higiênica, como o uso do pré-dipping e pós-dipping. Em situação oposta,

quando o cordeiro mama na ovelha durante 60 a 120 dias, o controle é dificultado pela

possibilidade da transmissão de agentes patogênicos pela cavidade oral do cordeiro. Assim,

deve-se evitar lesões traumáticas no úbere e/ou tetos das ovelhas, para não predispor a

contaminação por patógeno presente na boca do cordeiro, bem como no ambiente

(DOMINGUES, LEITE, 2003).

Muller (1999), afirma que quando os animais são mantidos em ambientes higiênicos, secos e

confortáveis há uma redução dos problemas relativos à mastite ambiental, tendo reflexo

indireto nos índices de mastite contagiosa.

Limpar regularmente as instalações, utilizar camas secas, evitar superlotação, substituir a

serragem e as lascas de madeira por areia para a confecção das camas e verificar

freqüentemente a saúde do rebanho, são medidas que auxiliam no controle das mastites

ambientais (RADOSTITS et al., 2002).

Em rebanhos com histórico de mastite grave, pode-se recomendar a aplicação de antimastíticos

no desmame (HUESTON et al., 1989; RADOSTITS et al., 2002) e a palpação rotineira do

úbere com posterior descarte de animais que possuam fibrose na glândula mamária, com o

intuito de eliminar as ovelhas menos produtivas e reduzir o reservatório de infecções dentro do

rebanho (SMITH,1993).

Deve-se impedir o acúmulo de leite ocasionado pela perda de cordeiros ou por ovelhas com

maior produção de leite após o desmame, restringindo água e alimento até cessar a produção

(LADEIRA, 1998).

Em ovinos criados em confinamento observa-se uma maior prevalência da mastite subclínica,

relacionando-se a influência dos cordeiros como vetores mecânicos transmissores de patógenos

de ovelhas infectadas para sadias (DOMINGUES & LEITE, 2004).

Com intuito de assegurar o bom desenvolvimento da cria, em raças de ovelhas para carne, é de

vital importância a identificação da mastite crônica antes do acasalamento, sendo que a

infecção nestes animais pode ocorrer em qualquer estágio da lactação, porém é mais freqüente

ocorrer de duas a três semanas após o parto ou logo após a secagem (MENZIES,

RAMANOON, 2001).

O uso de vacina autógena tem sido recomendada por Domingues & Leite (2004) como medida

de controle de surtos de mastite em ovinos, a partir do isolamento e identificação do agente

causal, principalmente quando se tratar de Staphylococcus aureus e Mannheimia haemolytica.

3. ARTIGOS CIENTÍFICOS

3.1 Artigo científico I

Etiologia e sensibilidade microbiana in vitro da mastite subclínica em ovelhas da raça

Santa Inês.

(Aetiology and in vitro antimicrobial susceptibility of subclinical mastitis in Santa Inês

ewes).

COUTINHO, D.A.;

COSTA, J.N.;

RIBEIRO, M.G.;

TORRES, J.A

Aluna de pós-graduação (Mestrado em Medicina Veterinária Tropical – UFBA);

Prof. Dr.

Escola de Medicina Veterinária (UFBA);

Prof. Ass. Dr. Faculdade de Medicina Veterinária e

Zootecnia - UNESP- Botucatu;

Aluna de pós-graduação (Mestrado em Medicina Veterinária

Tropical – UFBA)

e-mail: [email protected]

RESUMO

Foram submetidos a exames clínicos e microbiológicos 124 metades mamárias de ovelhas da

raça Santa Inês e as suas respectivas secreções lácteas no momento da secagem aos 90 dias

após o parto. O exame de Tamis não revelou mastite clínica em nenhuma das metades

analisadas e de cada uma delas foi coletada amostra para realização do Califórnia Mastitis

Test e exames microbiológicos em meios de ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey. Os microrganismos isolados foram submetidos ao teste de sensibilidade

microbiana in vitro frente a nove antimicrobianos. Das 124 amostras 33 (26,6%) foram

positivas ao exame microbiológico. O microrganismo isolado com maior freqüência foi

Staphylococcus coagulase negativo (19/33=57,6%), seguido por Staphylococcus aureus

(5/33=15,2%), Micrococcus sp. (5/33=15,2%), Streptococcus α-hemolítico (3/33=9%) e

Streptococcus agalactiae (1/33=3%). Dentre os antimicrobianos utilizados, o cefalônio

anidro foi o mais efetivo, visto que a totalidade dos isolados mostraram-se sensíveis à droga,

enquanto os maiores índices de resistência foram constatados com o uso da penicilina G,

neomicina e ampicilina.

Palavras Chave

Mastite subclínica, ovino, etiologia, sensibilidade microbiana.

SUMMARY

Clinical and microbiological exams were performed in 24 mammary-halves of Santa Ines

ewes in dry-off period, on the 90th day postpartum. The Tamis exam hasn’t showed any sign

of clinical mastitis in none of the halves analyzed. Milk samples were submitted to California

Mastitis Test and microbiological culture on defibrinated sheep blood agar (5%) and

MacConkey agar. Microorganisms isolated were submitted also to in vitro susceptibility test

(diffusion disk) against nine antimicrobials. Of the 124 samples, 33 (26.6%) were

bacteriologically positive. The most-common agent found was Staphylococcus coagulase

negativo (19/33=57.6%), followed by Staphylococcus aureus (5/33=15.2%), Micrococcus sp.

(5/33=15.2%), Streptococcus α-hemolítico (3/33=9%) e Streptococcus agalactiae (1/33=3%).

Among the antimicrobials used, cephalonium was the most effective, while most frequent

resistance were observed with penicillin G, neomycin e ampicillin.

Keyboard

Subclinical Mastitis, Sheep, etiology, antimicrobial susceptibility test

INTRODUÇÃO

A mastite é classicamente definida como inflamação da glândula mamária, caracterizada por

alterações físico-químicas e microbiológicas no leite e no tecido glandular mamário, podendo

destruí-lo parcial ou totalmente, dependendo do agente microbiano envolvido (LANGONI et

al, 1998).

Além dos prejuízos quantitativos e qualitativos à produção de leite, a mastite pode levar a

perda da capacidade funcional da glândula - inviabilizando a permanência destas matrizes nos

plantéis – e, ocasionalmente, a morte das fêmeas (FTHENAKIS & JONES, 1990). Em

rebanhos ovinos de corte a mastite é responsável pelo atraso no desenvolvimento dos cordeiros,

resultando num decréscimo da sua taxa de ganho de peso e aumento da mortalidade neonatal

(GROSS et al., 1978; FTHENAKIS, 1988), principalmente nos casos de mastite clínica

gangrenosa (WATKINS et al., 1991). Embora a mastite clínica seja responsável por perdas

expressivas, a mastite subclínica assume elevada importância econômica, em virtude dos

prejuízos na produção e da maior ocorrência comparativamente as formas clínicas de mastite

(GROSS et al., 1987; MARCO MELERO, 1994).

A mastite infecciosa é causada por uma ampla variedade de microrganismos, principalmente de

origem bacteriana. Com base nas fontes de infecção e características ou vias de transmissão, os

agentes da mastite são subdivididos em contagiosos e ambientais. Os contagiosos são

transmitidos fundamentalmente no momento da ordenha ou no ato de mamar do cordeiro,

causados principalmente por Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis,

Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae e Corynebacterium bovis. Por outro lado,

os ambientais são transmitidos na ordenha e entre-ordenhas, representados principalmente

pelas enterobactérias (Escherichia coli, Klesbsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes),

fungos, algas, Nocardia sp e Pseudomonas aeruginosa (SMITH & HOGAN, 1998;

RADOSTITS et al., 2002).

Nas mastites clínicas em ovelhas leiteiras e nas ovelhas destinadas à produção de carne os

principais microrganismos identificados em casos individuais ou em surtos são:

Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase negativos, Pseudomonas aeruginosa,

Mannheimia haemolytica, Escherichia coli, Corynebacterium pseudotuberculosis, Clostridium

perfringens e Aspergillus fumigatus (RADOSTITS et al., 2002; BERGONIER &

BERTHELOT, 2003).

O diagnóstico da mastite subclínica em ovelhas é baseado rotineiramente nos métodos que

identificam o aumento do número de células e no isolamento bacteriano nas amostras de leite.

A determinação quantitativa do número total de células somáticas no leite pode ser realizada

pela microscopia direta (WATSON et al., 1990; KEISLER et al., 1992) ou pela contagem

eletrônica de células somáticas (McDOUGALL et al., 2001), enquanto o diagnóstico

qualitativo pode ser obtido com o uso de testes como o Whiteside (WATKINS et al., 1991) e o

Califórnia Mastitis Test (CMT) (McDOUGALL et al., 2001; SARGEANT et al., 2001).

Diferentes antimicrobianos têm sido recomendados na terapia intramamária da mastite em

ovinos (CONTRERAS et al., 1995; NACCARI et al., 2003). Entretanto, são escassos os

estudos conduzidos na investigação do perfil de sensibilidade da mastite ovina.

Adicionalmente, não estão disponíveis produtos comerciais elaborados especificamente para o

uso na terapia de pequenos ruminantes, restanto, na prática, a alternativa de uso de anti-

mastíticos idealizados para espécie bovina.

A grande diversidade dos agentes responsáveis pela mastite subclínica ovina (DE LA CRUZ et

al., 1994; MARCO MELERO, 1994; GONZÁLEZ-RODRIGUES et al., 1995; LAFI et al.,

1998) e a crescente resistência dos microrganismos - isolados de infecções mamárias - aos

antimicrobianos convencionais, alertam para a necessidade da instituição de protocolos

terapêuticos na mastite ovina com respaldo nos testes de sensibilidade microbiana.

O presente estudo objetivou identificar a etiologia e avaliar a sensibilidade microbiana in vitro

da mastite subclínica em ovelhas da raça Santa Inês aos 90 dias após o parto.

MATERIAIS E MÉTODOS

1. Animais

Foram utilizadas 62 ovelhas da raça Santa Inês, multíparas, com bom escore corporal e peso

vivo aproximado de 40 Kg (Figura 11), pertencentes à Fazenda Tingui, localizada no

município de Serra Preta, Bahia. Os animais foram mantidos em pastagem de Brachiaria

(Brachiaria decubens) e Pangolinha (Digitaria decubens) recebendo água e sal mineral ad

libitum, sem sintomas clínicos de mastite. Estas fêmeas foram vermifugadas (moxidectina) e

receberam uma dose anual de vacina comercial contra o botulismo e outras clostridioses trinta

dias antes da coleta das amostras.

2.Delineamento experimental

Aos 90 dias após o parto todas as metades mamárias das ovelhas foram clinicamente

avaliadas por inspeção e palpação, avaliando-se o parênquima, tetos e estruturas internas

(BIRGEL, 2004). O diagnóstico de mastite clínica foi realizado após exame clínico do animal,

da glândula mamária, depositando três a quatro primeiros jatos de leite na caneca de fundo

preto (Tamis), com vistas à observação de grumos, coágulos, pús, sangue ou leite aquoso

(Figura 12) (RADOSTITS et al., 2002). O diagnóstico da mastite subclínica foi realizado

utilizando o método do California Mastitis Test - CMT (SCHALM & NOORLANDER,

1957), utilizando reagente comercial.

3.Exame microbiológico

3.1. Coleta das amostras

No dia anterior às coletas, as ovelhas - com 90 dias de lactação - foram separadas dos borregos.

Procedeu-se à coleta asséptica após a última esgota. Após a anti-sepsia das tetas com solução

desinfetante (dicloroisicianurato de sódio anidro - Agrisept® - Schering-Plough), foram

descartados os três primeiros jatos e colhidas amostras de leite, em duplicata. As amostras

foram acondicionadas em frascos esterilizados, refrigeradas (4-8°C) e, posteriormente,

congeladas (– 20°C) até o momento da sua análise.

3.2. Exame bacteriológico

As amostras de leite foram cultivadas nos meios de ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey (Figuras 13 e 14), incubadas em condições de aerobiose, a 37°C, mantidas por 72

horas, com leituras 24, 48 e 72 horas, no laboratório de Doenças Infecciosas dos Animais da

FMVZ-UNESP/Botucatu, SP. Os microrganismos foram identificados segundo as

características morfo-tintoriais, bioquímicas e de cultivo, segundo Quinn et al. (1994); Krieg

& Holt (1994) e Murray et al., (1999).

3.3. Teste de sensibilidade microbiana

A sensibilidade microbiana in vitro dos microrganismos foi realizada utilizando o método de

difusão com discos (BAUER et al., 1966), segundo recomendações Comitê Nacional de

análises clínicas laboratoriais (NCCLS, 1999), frente ao cefalônio anidro (30µg) e a outros

antimicrobianos amplamente utilizados na terapia intramamária de mastite em animais

domésticos, tais como a ampicilina (10µg), enrofloxacina (5µg), gentamicina (10µg),

neomicina (30µg), oxacilina (1µg), penicilina G (10U.I.), sulfadiazina/trimetoprim (25µg)

e tetraciclina (30µg). (Figura 15).

Figura 11. Ovelhas pertencentes ao trabalho.

Figura 12. Teste da “caneca de fundo preto” utilizado para avaliação da mastite clínica

Figuras 13 e 14. Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey.

Figura 15. Sensibilidade microbiana in vitro da totalidade dos microrganismos isolados frente a

nove antimicrobianos amplamente utilizados na terapia intramamária de mastite em animais

domésticos.

ANÁLISE ESTATÍSTICA

A análise estatística dos dados referentes a distribuição dos agentes etiológicos e sensibilidade

aos antimicrobianos foi realizada através da análise exploratória dos dados.

Das 124 amostras de leite analisadas de 62 ovelhas antes do momento da secagem, 91 (73,4%)

não apresentaram nenhum isolamento bacteriano, enquanto 33 amostras (26,6%) mostraram-se

microbiologicamente positivas. Staphylococcus coagulase negativo foi o principal

RESULTADOS

Na tabela 3 estão apresentados os resultados do exame de Tamis e do Califórnia Mastitis Test

efetuados em 124 metades mamárias de ovelhas Santa Inês.

Tabela 3. Resultados dos exames de Tamis e CMT realizados em 124 metades mamárias

de ovelhas da raça Santa Inês. Serra Preta, BA, 2006.

Tamis CMT

N Pos % N Pos %

124 0 0 124 39 31,45%

N: número de metades mamárias examinadas

Pos: número de metades mamárias que apresentaram resultados positivos

%: porcentagem de metades mamárias positivas

Na tabela 4 estão apresentados os resultados dos exames microbiológicos realizados em 124

metades mamárias (62 ovelhas).

Tabela 4. Distribuição dos microrganismos isolados em 124 amostras de leite em ovelha

s da

raça Santa Inês com mastite subclínica. Serra Preta, BA, 2006.

MICRORGANISMO ISOLAMENTO

Staphylococcus C-

19 57,6

Staphylococcus aureus

5 15,2

Micrococcus sp.

5 15,2

Streptococcus sp. 4 12

Streptococcus α hemolítico 3 9

Streptococcus agalactiae

1 3

Total de isolamento 33 26,6

NCB

91 73,4

Coagulase negativo

Nenhum crescimento bacteriano

Número de amostras

microrganismo isolado, detectado em 19 metades mamárias (57,6%). Staphylococcus aureus,

Micrococcus sp., Streptococcus α hemolítico e Streptococcus agalactiae foram isolados,

respectivamente, em 5 (15,2%), 5 (15,2%), 3 (9%) e 1 (3%) metades mamárias.

Na tabela 5 estão apresentados os resultados da susceptibilidade do Staphylococcus coagulase

negativo, Staphylococcus aureus, Micrococcus sp., Streptococcus α hemolítico e Streptococcus

agalactiae a nove antimicrobianos amplamente utilizados na medicina veterinária.

Tabela 5. Porcentagem de sensibilidade de microrganismos isolados de ovelhas da raça Santa

Inês com mastite subclínica, frente a diferentes antimicrobianos. Serra Preta, BA, 2006.

Microrganismos

Drogas

Staphylococcus

coagulase negativo

(%)

Staphylococcus

aureus

(%)

Micrococcus

sp.

(%)

Streptococcus α

hemolítico

(%)

Streptococcus

agalactiae

(%)

Ampicilina 52,6S-36,8PS-10,6R 0S-20PS-80R 40S-60PS-0R 66,7S-33,3PS-0R 100S-0PS-0R

Cefalônio 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R

Enrofloxacina

63,2S-36,8PS-0R 20S-80PS-0R 100S-0PS-0R 66,7S-0PS-33,3R 100S-0PS-0R

Gentamicina 78,9S-21,1PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R 66,7S-33,3PS-0R 100S-0PS-0R

Neomicina 47,4S-42,1PS-10,5R 0S-20PS-80R 20S-60PS-0R 66,7S-33,3PS-0R 100S-0PS-0R

Oxacilina 89,5S-10,5PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R

Penicilina G 57,9S-36,8PS-5,3R 20S-0PS-80R 80S-20PS-0R 66,7S-33,3PS-0R 0S-100PS-0R

Sulfazotrin 68,4S-5,3PS-26,3R 100S-0PS-0R 80S-0PS-20R 66,7S-0PS-33,3R 0S-0PS-0R

Tetraciclina 89,5S-5,2PS-5,3 20S-80PS-0R 80S-20PS-0R 100S-0PS-0R 100S-0PS-0R

S: Sensível; PS: Parcialmente sensível; R: Resistente.

O cefalônio anidro foi o antimicrobiano que apresentou maior efetividade dentre os

antimicrobianos utilizados, visto que a totalidade dos isolados mostrou-se sensível a esta

droga. Por outro lado, os maiores índices de resistência dos microrganismos foram observados

com o uso da penicilina (80%), ampicilina (80%) e neomicina (80%).

Das estirpes de Staphylococcus coagulase negativo isoladas, 52,6% foram sensíveis a

ampicilina, 63,2% a enrofloxacina, 78,9% a gentamicina, 47,4% a neomicina, 89,5% a

oxacilina e a tetraciclina, 57,9% a penicilina G, 68,4% ao Sulfazitrin e 100% destas estirpes

foram sensíveis ao cefalônio. 10,6% das estirpes de Staphylococcus coagulase negativo

isoladas mostraram-se resistentes a ampicilina, 10,5% a neomicina, 5,3% a penicilina G e a

tetraciclina e 26,3% ao sulfazotrin.

Das estirpes de Staphylococcus aureus isoladas, 20% foram sensíveis a enrofloxacina,

penicilina G e a tetraciclina e 100% das estirpes mostraram-se sensíveis a gentamicina,

oxacilina, sulfazotrin e ao cefalônio. 80% dos Staphylococcus aureus isolados mostraram-se

resistentes a ampicilina, neomicina e a penicilina G.

Das estirpes de Micrococcus sp. isoladas, 40% foram sensíveis a ampicilina, 20% a neomicina,

80% a penicilina G, Sulfazitrin e tetraciclina e 100% destas estirpes foram sensíveis a

enrofloxacina, gentamicina, oxacilina e ao cefalônio. As estirpes de Staphylococcus coagulase

negativo isoladas mostraram-se somente resistentes ao sulfazotrin (26,3%).

Das estirpes de

Streptococcus α hemolítico isoladas, 66,7% foram sensíveis a ampicilina,

enrofloxacina, gentamicina, neomicina, penicilina G e ao sulfazotrin e 100% destas estirpes

mostraram-se sensíveis a oxacilina, tetraciclina e ao cefalônio. 33,3% das estirpes de

Streptococcus α hemolítico isoladas mostraram-se resistentes a ampicilina, enrofloxacina,

gentamicina e neomicina.

Das estirpes de

Streptococcus agalactiae isoladas, 100% foram sensíveis a ampicilina,

enrofloxacina, gentamicina, neomicina, oxacilina, tetraciclina e ao cefalônio. Não observou-se

resistência das estirpes de Streptococcus agalactiae a nenhum dos antibióticos e

quimioterápicos analisados.

DISCUSSÃO

O sucesso de isolamento microbiano em ovelhas com mastite no presente estudo foi menor que

o observado por Clements et al. (2003), Batavani et al. (2003), Lafi (2005) e Domingues et al.,

(2005), que encontraram, respectivamente, 35%, 39%, 39,1% e 57,03% das amostras de

ovelhas microbiologicamente positivas. Por outro lado, Al-Majali & Jawabreh (2003) em

estudo similar com ovelhas da raça Awassi, observaram porcentagem menor de isolamento

microbiano comparativamente ao presente estudo, obtendo 18,3% de amostras

microbiologicamente positivas em ovelhas com mastite subclínica. O menor número de úberes

infectados nas ovelhas estudadas, provavelmente decorre das melhores práticas de manejo de

ordenha e/ou o descarte seletivo das fêmeas com mastite clínica que resultam em maior

controle da enfermidade.

Staphylococcus coagulase negativo (CNS) são consideradas as bactérias mais freqüentemente

isoladas da glândula mamária de ovelhas com mastite subclínica (HUESTON et al. ,1986;

KEISLER et al.,1992; WATSON et al.,1990; DE LA CRUZ et al., 1994; FTHENAKIS, 1994).

Esta afirmação ratifica os resultados do presente estudo e de outros similares, nos quais o CNS

foi o microrganismo mais freqüente em ovelhas com infecção intramamária subclínica.

(FTHENAKIS, 1994; LEITNER et al.,2001; BATAVANI et al., 2003; DOMINGUES et al.,

2005), provavelmente em virtude do comportamento oportunista do gênero Staphylococcus nas

infecções mamárias, favorecido pela sua manutenção como agente da microbiota da pele e

úbere de animais domésticos.

Diferentes autores têm assinalado a similaridade de linhagens de Staphylococcus sp de casos de

mastite subclínica e de estirpes isoladas no homem (KALOGRIDOU-VASSILIADOU, 1991;

MAISI & RIIPINEN, 1991; BEDIDI-MADANI et al., 1998). Esses achados indicam que o

homem deve ser considerado com eventual fonte de infecção deste grupo de microrganismos

para a glândula mamária (SILVA et al., 2004), visto que o agente pertence a microbiota normal

da pele e trato respiratório alto do homem (DEVRIESE et al., 1985).

Isolados de CNS tem sido associados a um aumento da CCS, das concentrações de NAGase,

albumina e sal, indicando que a infecção por este grupo de microrganismos provoca agravos ao

tecido glandular (MAISI et al., 1987). Alterações histológicas na glândula mamária infectada

de ovelhas e na composição do leite em animais infectados por CNS têm sido reportadas em

fêmeas ovinas com mastite (FTHENAKIS & JONES, 1990; BURRIEL, 1997). Estes dados

refletem a patogenicidade de CNS para a glândula mamária ovina, levando a casos de mastite

clínica ou subclínica, de difícil tratamento no decorrer da lactação (LAM, 1996).

Staphylococcus aureus é reconhecido como o principal agente na casuística de mastite em

vacas (LAS HERAS et al., 1998) e em ovelhas (AL-SAMARRAE et al., 1985; BOR et al.,

1989; AMEH et al., 1994). Em estudo da ocorrência de agentes de mastite ovina no Uruguai,

APOLO et al. (1999) assinalaram o isolamento de S. aureus em 46% das amostras

microbiologicamente positivas. Batavani et al. (2003) estudando ovelhas de aptidão leiteira

obtiveram 39% de prevalência da mastite subclínica, no qual 22% eram por S. aureus.

Radostits et al. (2002) estimaram a incidência de mastite de 2% ao ano em 6.000 ovinos, das

quais 86% causadas por Staphylococcus aureus. O gênero Staphylococcus também foi

encontrado como mais prevalente nas ovelhas estudadas, ratificando a importância dos agentes

contagiosos na gênese de casos de mastite subclínica em ovelhas.

Micrococcus sp. não tem sido relatado como agente prevalente na casuística de mastite em

ovinos em outros países (FTHENAKIS, 1994; AL-MAJALI & JAWABREH, 2003).

Entretanto, no sudeste do Brasil, DOMINGUES et al. (2005) observaram 3,11% de ocorrência

do agente em ovelhas com mastite. A divergência nos isolamentos do microrganismo sugere

que outros estudos sejam conduzidos para avaliar a real participação deste grupo de agentes na

mastite em ovinos.

De maneira similar ao grupo dos estafilococos, Streptococcus sp também foram isolados nos

animais estudados. Estudos em outros países (LEITNER et al., 2001; CLEMENTS et al., 2003;

BATAVANI et al., 2003) e no Brasil (DOMINGUES et al., 2005) também têm assinalado à

importância do gênero Streptococcus na casuística da mastite ovina e especialmente o

Streptococcus agalactiae, principalmente sob a forma subclínica.

Dentre os antimicrobianos estudados, penicilina G, neomicina e ampicilina foram os que

apresentaram a menor eficácia frente aos isolados. Diferentes estudos têm demonstrado a

preocupação quanto ao crescente ocorrência de multi-resistência em microrganismos isolados

de pequenos ruminantes com mastite (LIMA JÚNIOR et al.,1993; SILVA et al., 2004;

NACCARI et al., 2003). A ocorrência do aumento de linhagens resistentes isoladas de casos

de mastite em pequenos ruminantes provavelmente encontre reflexo no uso indiscriminado

e/ou inadequado de antimicrobianos na terapia, geralmente provocado pelo uso de sub-doses,

instituição de protocolos terapêuticos sem o respaldo do antibiograma, descontinuidade da

terapia, ou mesmo o uso de antimicrobianos intramamários idealizados para a espécie bovina,

resultando no aumento da pressão seletiva para microrganismos resistentes e/ou na baixa

efetividade terapêutica.

O cefalônio anidro apresentou no presente estudo alta efetividade “in vitro” frente aos isolados.

Esta droga é um derivado da penicilina, indicada para terapia principalmente de bactérias

Gram-positivas, incluindo produtoras de beta-lactamase. Esses resultados sugerem que

cefalônio anidro apresenta ótima perspectiva para elaboração de anti-mastítico comercial para a

terapia de ovelhas com mastite.

CONCLUSÃO

Este estudo demonstrou que os CNS são os agentes mais comumente envolvidos na mastite

subclínica em ovelhas.

Os resultados obtidos no presente trabalho evidenciaram a possibilidade de tratamento de

infecções subclínicas em ovelhas por CNS, Staphylococcus aureus, Micrococcus sp.,

Streptococcus hemolítico e Streptococcus agalactiae com um dos nove princípios ativos

ensaiados: ampicilina, enrofloxacina, gentamicina, cloxacilina, sulfazotrin, neomicina,

penicilina G, tetraciclina e cefalônio. Destaca-se o cefalônio como único antibiótico que

demonstrou-se 100% eficaz contra todos os cinco agentes isolados.

As diferenças observadas na eficácia dos antibióticos e quimioterápicos testados demonstram a

importância da realização de testes de identificação do agente causal e da sua sensibilidade

antimicrobiana, com o intuito de eleger o tratamento mais apropriado.

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3.2 Artigo científico II

Eficácia do cefalônio anidro intramamário na secagem de ovelhas Santa Inês.

(Efficacy of dry treatment in Santa Inês ewes using cefalonium intramammary).

COUTINHO, D.A.;

COSTA, J.N.;

RIBEIRO, M.G;

SALERNO, T.

Aluna de pós-graduação (Mestrado em Medicina Veterinária Tropical – UFBA);

Prof. Dr.

Escola de Medicina Veterinária (UFBA);

Prof. Ass. Dr. Faculdade de Medicina Veterinária e

Zootecnia – UNESP- Botucatu;

Aluna de pós-graduação (Mestrado em Saúde Animal,

Saúde Pública Veterinária e Segurança Alimentar - FMVZ-UNESP/Botucatu, SP)

e-mail: [email protected]

RESUMO

A eficácia do tratamento na secagem em ovelhas Santa Inês com a utilização do cefalônio

anidro intramamário visando a cura de infecções intramamárias pré- existentes e a prevenção

de novas infecções durante o período seco e na lactação seguinte foi estudada no presente

trabalho. Foram utilizadas 62 ovelhas multíparas divididas em três grupos de acordo com

status bacteriológico. O grupo 1 (Controle) não recebeu nenhum tratamento no momento da

secagem. O grupo 2 (Preventivo) e grupo 3 (Curativo) foram submetidos à secagem da mama

aos 90 dias após o parto e tratados com produto comercial para vaca seca a base de Cefalônio

Anidro. Não foram observadas diferenças significativas (p <0,05) nos percentuais de cura

entre os grupos em todos os momentos analisados. A taxa de novas infecções (NIN) no grupo

controle, preventivo e curativo foram de 13,5, 14,7 e 5,0%, respectivamente, aos 10-15 dias

pós-parto; 16,2, 8,8 e 0%, respectivamente, aos 20-25 dias pós-parto; 13,5, 14,7 e 15,0%,

respectivamente, aos 30-35 dias pós-parto e 16,2, 5,9 e 0%, respectivamente, aos 40-45 dias

pós-parto. Foi observada diferença significativa entre os grupos (p <0,05) aos 20-25 dias após

o parto e aos 40-45 dias após o parto. Estes resultados sugerem que o tratamento no momento

da secagem com o cefalônio anidro auxiliou na prevenção de novas infecções, contribuindo

para a manutenção da saúde da glândula mamária do rebanho.

Palavras Chave

Mastite subclínica, ovelhas, tratamento no período seco, cefalônio.

SUMMARY

The efficacy of dry-off treatment of Santa Inês sheep using cefalonium intramammary in

curing chronic intramammary infections and preventing new ones during the dry-off period

and during the following lactation was studied. A total of 62 Santa Inês sheep on one farm in

their second, third or more lactation were divided in three groups according their

bacteriological condition. The first group (control) didn´t receive any kind of treatment at

drying off, the second (prevent) and the third (cure) group received at drying off

intramammary treatment with a commercial cattle dry-off treatment containing cefalonium

anidrum. No significant difference (p <0.05) in the cure rates between groups in all samplings

analysed was found. New infection rates in the prevent, treated and control group were 13.5,

14.7 e 5.0%, respectively, at 10-15 days post-partum, 16.2, 8.8 e 0%, respectively, at 20-25

days post-partum; 13.5, 14.7 e 15.0%, respectively, at 30-35 days post-partum and 16.2, 5.9 e

0%, respectively, at 40-45 days post-partum. Significant difference (p <0.05) was found at 20-

25 days post-partum and at 40-45 days post-partum. These results suggested that dry-off

treatment could prevent new infections, maintaining health udders in the herd.

Keyboard

Subclinical Mastitis, Sheep, dry-off therapy, cefalonium

INTRODUÇÃO

A mastite é reconhecida como uma das principais causas de descarte precoce de ovelhas,

diminuição do crescimento e mortalidade neonatal em cordeiros (FTHENAKIS & JONES,

1990; LEITNER et al., 2001). A mastite subclínica em ovelhas acarreta perdas econômicas

equivalentes às observadas em vacas, causando prejuízos quantitativos e qualitativos à

produção de leite, podendo levar o animal à morte ou mesmo a perda da glândula,

inviabilizando a permanência das matrizes infectadas nos planteis (WATSON & BUSWELL,

1984).

Mastite é por definição uma alteração inflamatória da glândula mamária caracterizada por

aumento de células somáticas no leite e por alterações patológicas do tecido glandular

(RADOSTITS, 2002)

O conhecimento dos diferentes patógenos responsáveis pela mastite

subclínica em ovelhas e a sua influência sobre a quantidade e qualidade do leite, permitiu o

aperfeiçoamento das práticas de profilaxia, controle e tratamento no período seco (LEITNER et

al., 2001).

Diferentes protocolos de tratamento têm sido recomendados nas infecções bacterianas

responsáveis pela mastite em ovelhas e para limitar a ocorrência da resistência desenvolvida

por muitos microrganismos (NACCARI et al., 2003). Entretanto, grande parte do

conhecimento sobre a terapia da mastite em ovinos tem sido extrapolado dos bovinos, o que

pode gerar baixa eficiência da terapia, notadamente em virtude das peculiaridades fisiológicas,

anatômicas da glândula mamária de ovelhas, assim como nas diferenças dos agentes causais.

Atualmente existem poucas drogas aprovadas para o tratamento intramamário da mastite em

pequeno ruminantes (NACCARI et al., 2003). Da mesma forma, são escassos os estudos

conduzidos na determinação da carência destas drogas nestas espécies quando utilizadas por

via intramamária (CHAFFER et al., 2002), sendo imprescindível que estas sejam indicadas

com base em estudos específicos na espécie (NACCARI et al., 2003)

A terapia intramamária da vaca e ovelhas no momento da secagem tem sido recomendada em

rebanhos com elevada ocorrência da doença, principalmente por agentes contagiosos,

mostrando bons índices de cura e redução do nível de novas infecções (HUESTON et al.,

1989; AHMAD, 1992; MENZIES, RAMANOON, 2001; RADOSTITIS et al., 2002;

CHAFFER et al., 2002).

O presente estudo objetivou avaliar eficácia do tratamento intramamário em ovelhas da raça

Santa Inês no período seco, utilizando o Cefalônio Anidro como princípio ativo.

MATERIAIS E MÉTODOS

1. Animais

Foram utilizadas 62 ovelhas da raça Santa Inês, multíparas, com bom escore corporal e peso

vivo aproximado de 40 Kg, pertencentes à Fazenda Tingui, localizada no município de Serra

Preta – Bahia. Os animais foram mantidos em pastagem de Brachiaria (Brachiaria decubens) e

Pangolinha (Digitaria decubens) recebendo água e sal mineral ad libitum e sem sintomas

clínicos de mastite. Estas fêmeas foram vermifugadas (moxidectina) e receberam uma dose

anual de vacina comercial contra o botulismo e outras clostridioses trinta dias antes da colheita

das amostras.

3. Delineamento experimental

Aos 80 dias após o parto, as metades mamárias de todos os animais foram bacteriologicamente

avaliadas e as ovelhas divididas em três grupos, de acordo com o status bacteriológico.

Posteriormente os animais foram identificados utilizando colares coloridos numerados e brinco

na orelha. O grupo 1 – Controle (n=20) e o grupo 2 – Preventivo (n=20) foram compostos por

animais com cultura negativa nas duas metades da glândula mamária e o grupo 3 – Curativo

(n=22) foi composto pelas ovelhas com isolamento de microrganismos do leite nas duas

metades da glândula mamária.

Aos 90 dias após o parto todas as metades mamárias das ovelhas foram clinicamente avaliadas

por inspeção e palpação, avaliando-se o parênquima, tetos e estruturas internas (BIRGEL,

2004). Os três a quatro primeiros jatos de leite foram utilizados na realização do exame da

caneca de fundo preto (Tamis), visando observar a presença de alterações no leite, tais como

grumos e coágulos, pús, sangue ou leite aquoso (RADOSTITIS et al., 2002). O diagnóstico da

mastite subclínica foi realizado utilizando o método do California Mastitis Test - CMT

(SCHALM & NOORLANDER, 1957), utilizando reagente comercial. Nenhum animal

apresentou indícios de mastite clínica, e as 62 ovelhas submetidas ao procedimento de

secagem.

3.1- Secagem das ovelhas

A desmama dos cordeiros e secagem abrupta das ovelhas foi realizada 90 dias após o parto.

Neste momento foi aplicado em cada metade mamária das ovelhas pertencentes aos grupos 2

(Preventivo) e Grupo 3 (Curativo) - após prévio esgotamento e higienização dos tetos com

desinfetante clorado comercial (Agrisept® - Schering-Plough) -, uma bisnaga de produto

comercial para vaca seca a base de Cefalônio Anidro 0,25 g (Cepravin® - Schering-Plough).

A cânula do anti-mastítico foi introduzida parcialmente, reduzindo-se assim o risco de lesão na

camada de queratina do canal do teto. Após a aplicação, os cordeiros foram separados das suas

mães e as ovelhas foram submetidas à restrição hídrica e alimentar durante uma semana.

3.2- Coleta das amostras

No dia anterior as coletas, as ovelhas foram separadas dos borregos. Procedeu-se à coleta

asséptica após a última esgota, realizando-se o pré e pós-dipping das tetas imergindo 70%

delas em solução desinfetante (dicloroisicianurato de sódio anidro - Agrisept® - Schering-

Plough), secando com papel toalha descartável e individual e submetendo a anti-sepsia com

algodão embebido em álcool a 70%. As mãos do ordenhador também foram desinfectadas a

cada coleta de cada amostra. Todas as amostras foram colhidas em duplicata e as avaliações

foram realizadas em amostras individuais por metades mamárias em cinco momentos, como

descrito a seguir:

M1: no momento da interrupção da lactação (secagem), 90 dias após o parto

M2: 10-15 dias após o parto

M3: 20-25 dias após o parto

M4: 30-35 dias após o parto

M5: 40-45 dias após o parto

3.3- Exame bacteriológico

As amostras para a cultura bacteriológica (2 mL) foram acondicionadas em frascos estéries,

refrigeradas a temperatura de 4°C e posteriormente congeladas a uma temperatura de – 20°C

até o momento da sua análise no laboratório de Doenças Infecciosas dos Animais da FMVZ-

UNESP/Botucatu, SP.

No laboratório, as amostras foram cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar

MacConkey, incubadas em condições de aerobiose, a 37°C, mantidas por 72 horas, com

leituras 24, 48 e 72 horas. Os microrganismos foram identificados segundo as características

morfo-tintoriais, bioquímicas e de cultivo (QUINN et al., 1994; KRIEG & HOLT, 1994;

MURRAY et al., 1999).

Figura 16. Desinfecção dos tetos com álcool iodado

Figura 17. Aplicação de antibiótico intramamário para vaca seca

Figura 18.

Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar MacConkey.

Figura 19: Amostras cultivadas em ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar MacConkey.

ANÁLISE ESTATÍSTICA

Com o intuito de observar as diferenças entre as proporções foi utilizado o Teste z unilateral.

Toda a análise estatística foi realizada nos programas SPSS 11.0 , SAEG 9.0 , com o auxílio

do EXCEL.

RESULTADOS

Na tabela 6 estão apresentados os resultados das taxas de cura e de novas infecções nos grupos

controle, preventivo e tratamento aos 10-15, 20-25, 30-35 e 40-45 dias após o parto,

respectivamente, de acordo com o status bacteriológico das metades mamárias analisadas.

Considerou-se taxa de cura o porcentual de metades mamárias nas quais não foi obtido o

isolamento microbiano e taxa de novas infecções o porcentual de metades mamárias nas quais

foram isolados microrganismos em metades anteriormente negativas ou agentes diferentes dos

isolados em momentos anteriores.

Tabela 6. Taxas de cura e de novas infecções das metades mamárias em ovinos de acordo

com o status bacteriológico em 3 grupos, observadas em 4 momentos diferentes.

M3 M4 M5 Grupos Infecção

NIN

CR NIN CR NIN CR NIN

Controle NI-IN

- 5/37 - 6/37 5/37 - 6/37

IN-NI

3/3 - 3/3 - 3/3 - 3/3 -

TOTAL(%) 100a 13,5a 100a 16,2 a 100a 13,5a 100a 16,2a

Preventivo NI-IN - 5/34 - 3/34 - 5/34 - 2/34

IN-NI 6/6 6/6 6/6 6/6

TOTAL(%) 100a 14,7a 100a 8,8ab 100a 14,7a 100a 5,9ab

Curativo NI-IN - 1/20 - 0/20 - 3/20 - 0/20

IN-NI 24/24 - 24/24 - 22/24 - 24/24 -

TOTAL(%) 100a 5,0a 100a 0 b 91,7a 15,0a 100a 0 b

a-b: Letras iguais na mesma coluna, não diferem entre si pelo teste z para diferença entre proporções (p <0,05)

NI-IN: Não infeccionada para infeccionada

IN-NI:infeccionada para não infeccionada

CR: taxa de cura

NIN: taxa de novas infecções

M2 10-15 dias pós-parto, M3 20-25 dias pós-parto, M4 30-35 dias pós-parto e M5 40-45 dias pós-parto.

Figura 20. Perfil de infecção mamária em fêmeas ovinas segundo diferentes grupos de estudo

(controle, preventivo e curativo) aos 10-15, 20-25, 30-35, 40-45 dias pós-parto.

Aos 10-15, 20-25 e 40-45 dias após o parto (M2, M3 e M5) a taxa de cura (CR) foi de 100, 100

e 100% para os grupos controle, preventivo e curativo, respectivamente, não havendo

diferenças significativas entre os grupos (p <0,05).

Aos 30-35 dias após o parto, nenhuma mudança foi observada na taxa de cura nos grupos

controle e preventivo (100 e 100%, respectivamente), enquanto que no grupo tratado a taxa de

cura decresceu para 91,7%.

A taxa de novas infecções (NIN) no grupo controle, preventivo e curativo foi de 13,5, 14,7 e

5,0%, respectivamente, no momento 2 (M2); 16,2, 8,8 e 0%, respectivamente, no momento 3

(M3); 13,5, 14,7 e 15,0%, respectivamente, no momento 4 (M4) e 16,2, 5,9 e 0%,

respectivamente, no momento 5 (M5). Houve diferença significativa entre os três grupos (p

<0,05) aos 20-25 dias após o parto (M3) e aos 40-45 dias após o parto (M5). (Figura 20).

DISCUSSÃO

Os resultados do presente estudo mostram redução na prevalência de infecções mamárias pelos

patógenos aos 20-25 e 40-45 dias da lactação das ovelhas, após a administração da terapia

antimicrobiana intramamária, utilizando produto comercial idealizado para vacas secas, a base

de cefalônio anidro. O número de metades mamárias com novas infecções durante o período

seco foi menor no grupo tratado como curativo (5%) comparativamente aos grupos preventivo

(14,7%) e controle (13,5%), aos 10-15 após o parto. Aos 20-25 e 40-45 dias de lactação o

número de metades mamárias com novas infecções foi menor nos grupos preventivo e curativo

do que no controle. Estudos similares com ovelhas tratadas no momento da secagem utilizando

a cefapirina benzatina (HUESTON et al., 1989), penicilina e estreptomicina (HENDY et al.,

1981) e penicilina, naficilina e diidroestreptomicina (CHAFFER et al., 2002) também

resultaram em decréscimo da taxa de novas infecções. Estes resultados ratificam os resultados

10-15

20-25

30-35

40-45

Dias

Controle

Preventivo

Curativo

(%)

do presente estudo, mostrando que a terapia/profilaxia no momento da secagem foi efetiva em

prevenir novas infecções, podendo ser indicada em rebanhos com alta prevalência de mastite.

Seria esperada uma melhor taxa de cura nos grupos tratados (principalmente o preventivo) em

relação ao não tratado (controle), fato não verificado nas ovelhas estudadas. Apesar da elevada

taxa de cura (acima de 91%) nos grupos, em todos os momentos, não foram encontradas

diferenças significativas nas taxas de cura entre os grupos. A baixa infecção no grupo não

tratado (controle) poderia residir na baixa incidência de mastite subclínica no rebanho

utilizado, em virtude das boas práticas de manejo adotadas, ou mesmo que eventuais infecções

nestas metades mamárias tenham sido resolvidas pelo próprio animal, pelo processo

reconhecido como “auto-cura”. O final da lactação ou o período de repouso da glândula

mamária é, para muitas fêmeas, o momento em que se inicia o processo de “auto-cura”, que

elimina naturalmente as infecções mamárias em ovelhas em cerca de 45% (BERGONIER et

al., 1994). Langoni (2003) cita taxas de cura espontânea entre 33 e 67%. Fox et al. (1992)

demonstraram elevada taxa de auto-cura em infecções por Staphyloccoccus coagulase

negativo, com cura bacteriológica de 78,9% em cabras tratadas na secagem, utilizando

cefapirina benzatina. Mendonça et al. (2000) em estudo com ovelhas Lacaune, observaram

taxas de cura não estatisticamente significantes entre o grupo não tratado e tratado após

tratamento de ovelhas no momento da secagem com produto a base de Cloxaciclina benzatina.

Bergonier & Berthelot (2003) demonstram taxa de cura bacteriológica após tratamento

intramamário à secagem de 65,0 e 98,5%. Já em caprinos, Meirelles et al. (1998) obteve cura

microbiológica na lactação seguinte de 22 glândulas mamárias tratadas à secagem com

formulação de ampicilina e cloxacilina.

Segundo Fthenakis & Jones (1994) e Kirk et al. (1996) a constante sucção exercida pelos

cordeiros e uma média de dois ou mais cordeiros por ovelha resultam em ovelhas

frequentemente ordenhadas, que poderia justificar as altas taxas de auto-cura em pequenos

ruminantes. No mesmo estudo os autores reportam 9,5% e 21% de cura espontânea em ovelhas

entre 2-8 semanas após a secagem e até 6 semanas após o parto, respectivamente.

Embora a auto-cura deva ser considerada como importante fator nato de proteção (LONGO,

1993; MARCO MELERO, 1994), o tratamento das ovelhas no momento da secagem tem sido

crescentemente recomendável como prática sistemática em rebanhos de leite e corte, no intuito

de curar casos de mastite não resolvidos na lactação, assim como prevenir infecções para a

lactação subseqüente (HUESTON et al., 1989; AHMAD, 1992; MENZIES & RAMANOON,

2001; CHAFFER et al, 2002; DE CRÉMOUX, 1999; LAGRIFFOUL, 2000; SANCHEZ et al.,

2000; MENDONÇA et al., 2000). Neste sentido, o cefalônio anidro apresentou boa efetividade

como antimicrobiano no tocante a cura de metades mamárias infectadas, assim como na

prevenção de novas infecções, mostrando-se como droga factível de ser utilizada em

formulações comerciais para a terapia/profilaxia da ovelha no momento da secagem, vindo a

suprir a deficiência de produto eficaz e específico para esta finalidade em pequenos

ruminantes.

CONCLUSÕES

O tratamento no momento da secagem das ovelhas utilizando o cefalônio anidro por via

intramamária diminuiu significativamente novas infecções nos animais tratados (aos 20-25 e

40-45 dias de lactação), assim como mostrou boa efetividade na cura das metades mamárias

infectadas, devendo ser considerada como droga de boa perspectiva para a elaboração de

produto comercial para a terapia/profilaxia da ovelha ao secar.

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4. CONCLUSÕES GERAIS

Este estudo demonstrou que os agentes contagiosos são os mais comumente envolvidos na

mastite subclínica em ovelhas, em virtude da maior exposição destas às infecções decorrentes

de agentes da microbiota da pele, do úbere e do trato respiratório dos cordeiros.

Os resultados obtidos no presente trabalho evidenciaram a possibilidade de tratamento de

infecções subclínicas em ovelhas por CNS, Staphylococcus aureus, Micrococcus sp.,

Streptococcus hemolítico e Streptococcus agalactiae com um dos nove princípios ativos

ensaiados: ampicilina, enrofloxacina, gentamicina, cloxacilina, sulfazotrin, neomicina,

penicilina G, tetraciclina e cefalônio. Destaca-se o cefalônio como único antibiótico que

demonstrou-se 100% eficaz contra todos os cinco agentes isolados, em virtude da sua

indicação primária para Gram negativos, incluindo produtores de beta-lactamase.

As diferenças observadas na eficácia dos antibióticos e quimioterápicos testados demonstram

a importância da realização de testes de identificação do agente causal e da sua sensibilidade

antimicrobiana, com o intuito de eleger o tratamento mais apropriado.

O tratamento no momento da secagem das ovelhas utilizando o cefalônio anidro por via

intramamária diminuiu significativamente novas infecções nos animais tratados (aos 20-25 e

40-45 dias de lactação), assim como mostrou boa efetividade na cura das metades mamárias

infectadas, devendo ser considerada como droga de boa perspectiva para a elaboração de

produto comercial para a terapia/profilaxia da ovelha ao secar.

Consideramos ser necessária a realização de novos trabalhos nesta área e em raças ovinas

locais. Outras questões como custo-benefício, cânula apropriada, dose e veículo apropriado

para espécie devem ser consideradas em futuros trabalhos.

5. REFERÊNCIAS

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