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RESUMO
Camundongo mdx, modelo animal da distrofia muscular de Duchenne,
desenvolve uma miopatia inflamatória recessiva ligada ao cromossomo X
caracterizada por degeneração progressiva das fibras do músculo esquelético
e substituição por tecido conjuntivo. A ativação do receptor de acetilcolina
AChR, regula pela “via colinérgica anti-inflamatória”, a produção de citocinas
inflamatórias em diferentes modelos de inflamação. Este trabalho teve como
objetivo analisar o possível envolvimento da subunidade α7 do receptor
nicotínico de acetilcolina (AChRα7) na ativação da inflamação no músculo
esquelético gastrocnêmio de camundongos mdx com distrofia muscular do tipo
Duchenne. Foram incluídos camundongos machos mdx nas idades
correspondendo às diferentes fases da miopatia: lactentes (S2), mionecrose
(S4), regeneração (S8 e S12) e fibrose (S24 e S48). Como controle pareado
foram incluídos camundongos C57BL10 machos nas mesmas idades. Foram
utilizadas as técnicas de western blot (WB) e RT-PCR para analisar a
expressão protéica e do mRNA da AChRα7 e do fator de necrose tumoral alfa
(TNFα); zimografia para determinar a atividade local das metaloproteases
MMP-9 e MMP-2, e a técnica de imuno-histoquímica por microscopia confocal
para demonstrar e quantificar a co-localização de AChRα7 em macrófagos com
marcador F4/80 nas áreas da lesão. Neste trabalho foi possível demonstrar
pela primeira vez, a modulação na expressão da isoforma funcional AChRα7-2
nas diferentes fases da miopatia. Comparado ao controle C57, o camundongo
mdx mostrou aumento na expressão da AChRα7-2 na idade de S4 (predomínio
de inflamação / mionecrose) até a idade de S12 (predomínio de regeneração),
seguido de diminuição da expressão em S48, correspondendo à fibrose
muscular. A produção de TNFα solúvel no gastrocnêmio do mdx foi maior no
pico da inflamação (S4) quando comparado a S2 (p<0,05), então
correspondendo à inflamação, com significativa redução (p<0,0005) em S8,
S12 e S24. A expressão da isoforma protéica AChRα7-2 no músculo
gastrocnêmio do camundongo mdx era inversamente proporcional à
quantidade do TNFα solúvel presente em todas as idades, exceto no mdx
lactente (S2). A atividade da MMP-9, relacionada com a migração de células
inflamatórias e clivagem proteolítica do TNFα, estava aumentada no estágio
inicial da doença em S4 quando comparado com S12 (p<0,05). A forma inativa
pro MMP-2 estava aumentada em todas as idades, porém a forma ativa da
MMP-2 que indica remodelamento tecidual estava aumentada somente no mdx
com S8 e S12. Mdx com S12 mostrou aumento marcante (p<0,0005) de
macrófagos co-expressando AChRα7-2 nas áreas de lesão muscular. Os
resultados deste trabalho indicam um papel relevante da isoforma AChRα7-2
na fisiopatologia da lesão muscular do camundongo mdx influenciando a
migração de células inflamatórias, a produção local de TNFα e a remodelagem
tecidual através da ativação da “via colinérgica anti-inflamatória”.