( PDF ) Estudo da ação psicofarmacológica de extratos de passiflora alata dryander e passiflora edulis sims

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Universidade do Extremo Sul Catarinense

Curso de Pós-Graduação em Ciências Ambientais

ESTUDO DA AÇÃO PSICOFARMACOLÓGICA DE EXTRATOS DE

PASSIFLORA ALATA DRYANDER E PASSIFLORA EDULIS SIMS

Paulo Roberto Barbosa

Dissertação apresentada ao Programa de

Pós-Graduação em Ciências Ambientais da

Universidade do Extremo Sul Catarinense,

para obtenção do Grau de Mestre em

Ciências Ambientais.

Orientador:

Prof. Dr: João Luciano de Quevedo

Co-Orientador:

Prof. Dr: Flavio Henrique Reginatto

Criciúma, SC

2006

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ESTUDO DA AÇÃO PSICOFARMACOLÓGICA DE EXTRATOS DE

PASSIFLORA ALATA DRYANDER E PASSIFLORA EDULIS SIMS

Paulo Roberto Barbosa

Dissertação apresentada ao Programa de

Pós-Graduação em Ciências Ambientais da

Universidade do Extremo Sul Catarinense,

para obtenção do Grau de Mestre em

Ciências Ambientais.

Área de Concentração:

Ecologia e Gestão do Ambientes Alterados

Orientador:

Prof. Dr: João Luciano de Quevedo

Co-Orientador:

Prof. Dr: Flavio Henrique Reginatto

Criciúma, SC

2006

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AGRADECIMENTOS

A Deus por estar sempre presente na minha vida, e tornou tudo isso

possível;

Agradeço a minha família por todo apoio e confiança em mim depositado, o

que tornou possível a realização deste projeto;

Ao meu Orientador Professor Dr: João Luciano de Quevedo, pela

credibilidade, orientação e amizade;

Ao meu Co-Orientador Professor Dr: Flavio Henrique Reginatto, da

Universidade de Passo Fundo, pela orientação e auxílio na obtenção dos extratos;

A Drª Vanilde Citadini Zanette pelo auxílio e amizade;

Ao Professor Robson dos Santos pela ajuda necessária no momento

necessário;

A todos os professores e funcionários do Programa de Pós-Graduação em

Ciências Ambientais da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, pela

contribuição para minha formação;

A todos os colegas do Laboratório de Neurociências da UNESC, pela ajuda

nos experimentos comportamentais.

iii

RESUMO

Reconhece-se há muito tempo que substancias que ocorrem em plantas

podem possuir grande atividade farmacológica e podem agir no sistema nervoso

central. O presente estudo avaliou a atividade psicofarmacológica de extratos de

folhas de Passiflora alata Dryander e Passiflora edulis Sims, na ansiedade e no

processo de formação da memória. No modelo experimental in vivo foram utilizados

390 ratos machos Wistar com 60 dias pesando de 250 a 300g, dos quais foram

divididos em dez grupos de 13 ratos, para testes de comportamento: esquiva

inibitória, habituação em campo aberto e labirinto em cruz elevada. Estes testes

avaliam memória aversiva, memória de habituação e ansiedade, respectivamente.

Os ratos receberam tratamento intraperitonial de extratos de folhas de P. alata e P.

edulis (25, 50, 100 e 150 mg/kg), salina (1mg/kg) e diazepam (1mg/kg) fármaco

ansiolítico clássica. Quando comparado ao grupo controle (salina) no modelo de

labirinto em cruz elevada, os grupos tratados com P. alata e P. edulis apresentaram

atividade ansiolítica. No modelo de esquiva inibitória, após as sessões de

treinamento e teste, a latência indicou que extratos de folhas de Passiflora não

interferem na memória dos ratos, diferente do diazepam. No modelo de campo

aberto, após as sessões de treinamento e teste, avaliando os crossings e rearings

observou-se os mesmos resultados obtidos na esquiva inibitória. Os resultados

obtidos neste estudo indicam que os extratos de Passiflora são fontes potenciais

com atividades ansiolíticas, sem no entanto causar os efeitos na memória, como

ocorre com os grupos tratados com diazepam. Estudos adicionais investigando as

concentrações terapêuticas com capacidade ansiolítica sem dano na memória são

necessários.

Palavras-chave: Passiflora alata, Passiflora edulis, ansiedade, memória.

ABSTRACT

It has been known for a long time that certain substances, which come from

some plants, can have great pharmacological activity that can act in the central

nervous system. The present study evaluated the pharmacological activity of leaf

extracts of Passiflora alata Dryander and Passiflora edulis Sims, in anxiety and in

memory formation process. In the experimental model, in vivo, 360 sixty-day-old

male Wistar rats, weighing between 250 and 300g, were used and they were divided

into 10 groups of 13 rats each for behavior tests: inhibitory avoidance, habituation

on open field and elevated cross labyrinth in order to evaluate the aversive memory,

the habituation memory and anxiety respectively. The rats received intraperitoneal

treatment of P. alata and P. edulis leaf extracts (25, 50, 100 and 150 mg/kg), saline

(1 mg/Kg) and diazepam - a classic anxiolytic drug (1mg/kg). When compared to

control group (saline) in the elevated cross labyrinth model, the groups treated with

P. alata and P. edulis presented anxiolytic activity. In the inhibitory avoidance model,

after training and test sessions, the latency indicated that leaf extracts of Passiflora

do not interfere with the memory of the rats, contrary to diazepam. In the open field

model, after training and test sessions, evaluating crossings and rearings, the same

results that occurred in the inhibitory avoidance were observed. The results in the

study show that Passiflora extracts are potential sources with anxiolytic activities,

but without causing effects in memory such as those which occur in the groups

treated with diazepam. Further research to investigate the therapeutic

concentrations with anxiolytic capacity without damage in memory is necessary.

Keywords: Passiflora alata, Passiflora edulis, anxiety, memory.

LISTA DE FIGURAS

Figura 1:

Detalhe das flores e folhas de Passiflora alata Dryandrer. Fonte: Lorenzi

(2002).....................................................................................................11

Figura 2: Detalhe do fruto de Passiflora alata Dryander. Fonte: Lorenzi (2002)...12

Figura 3: Detalhes das folhas e flores de Passiflora edulis Sims. Fonte: Lorenzi

(2002).....................................................................................................15

Figura 4: Detalhe do fruto de Passiflora edulis Sims. Fonte: Lorenzi (2002)........15

Figura 5: Detalhe da polinização de Xylocopa sp. em P.edulis Sims. Fonte:

Lorenzi (2002)........................................................................................17

Figura 6: Xylocopa brasilanorum (A) e Xylocopa frontalis (B). Fonte: Melo

(2004).....................................................................................................18

Figura 7: Sinapse nervosa. Fonte: Maio (2002)....................................................27

Figura 8: Receptor de NMDA. Fonte: Scientific American (2004).........................28

Figura 9: Detalhe do cérebro. Fonte: Cardoso (2002). .........................................29

Figura 10: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze). Entradas nos braços

abertos e fechados, comparando salina, DZP e P. alata.......................46

Figura 11: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze). Tempo despendido

nos braços abertos e fechados. Comparando salina, DZP e P. alata...47

Figura 12: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze). Entradas nos braços

abertos e fechados. Comparando salina, DZP e P. edulis. ...................47

Figura 13: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze).Tempo despendido

nos braços abertos e fechados. Comparando salina, DZP e P. edulis..48

Figura 14: Esquiva inibitória. Latência, comparando salina, DZP e P. alata, após as

sessões de treinamento e teste.............................................................48

Figura 15: Esquiva inibitória. Latência, comparando salina, DZP e P. edulis, após

as sessões de treinamento e teste. .......................................................48

Figura 16: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Crossings,

comparando salina, DZP e P. alata, após as sessões de treinamento e

teste. ......................................................................................................49

Figura 17: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Rearings, comparando

salina, DZP e P. alata, após as sessões de treinamento e teste...........49

Figura 18: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Crossings,

comparando salina, DZP e P. edulis, após as sessões de treinamento e

teste. ......................................................................................................49

Figura 19: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Rearings, comparando

salina, DZP e P. edulis, após as sessões de treinamento e teste.........50

LISTA DE TABELAS

Tabela 1:

Manifestações Psíquicas da Ansiedade. ..............................................34

Tabela 2: Manifestações Somáticas da Ansiedade..............................................35

vii

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

AMPA - amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolpropionato

ANOVA - Analysis of Variance

AP5 - ácido D-2-amino-5-fosfonopentanóico

Ca2+ - Íons cálcio

CaMKII - cálcio-calmodulina quinase II

CCD - Cromatografia de Camada Delgada

CNQX - 6-ciano-7-nitroquinoxalino-2,3-diona

DSM - Manual diagnóstico e estatístico de transtornos mentais

DZP - Diazepam

ECA - Epidemiologic Catchement Area

EEG - eletroencefalográfico

GABA - ácido gama amino butírico

GluR1 - Receptor do glutamato

GMPc - 3,5 monofosfato de guanosina cíclico

ISMA - International Stress Management Association

LCE - Labirinto em cruz elevada

LTP - Potenciação de Longa Duração

MCPG - RS-metil-4-carboxifenil glicina

MGluRs - Receptores metabotrópico

MK-801 - 5-metil-10,11-diidro-5H-dibenzo [a,d]ciclohepteno-5,10 imina

(dizolcipina)

NIH - National Institutes of Health

NMDA - N-metil-D-aspartato

NMDAR1 - Subunidade do N-metil-D-aspartato

PET - Tomografia por emissão de pósitrons

PKA - Proteína quinase A

PKC - Proteína quinase C

PKG - Proteína quinase G

SBNeC - Sociedade Brasileira Nurociência e Comportamento

SNC - Sistema nervoso central

SPECT - Tomografia computadorizada por emissão de fóton único

TAG - Transtorno da ansiedade generalizada

TOC - Transtorno obsessivo compulsivo

UNESC - Universidade do Extremo Sul Catarinense

viii

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO ........................................................................................................1

2 JUSTIFICATIVA......................................................................................................4

2.1 Considerações sobre o maracujazeiro.................................................................4

2.1.1 Alcalóides ..........................................................................................................4

2.1.2 Polifenóis...........................................................................................................6

2.1.3 Saponinas .........................................................................................................8

2.2 Gênero Passiflora.................................................................................................8

2.2.1 Dados Farmacológicos......................................................................................9

2.2.2 Dados Fitoquímicos...........................................................................................9

3 PASSIFLORA ALATA DRYANDER.....................................................................10

3.1 Características Botânicas...................................................................................10

3.1.1 Características Reprodutivas e da Cultura......................................................11

3.2 Dados Fitoquímicos............................................................................................12

3.3 Dados Farmacológicos.......................................................................................13

4 PASSIFLORA EDULIS SIMS ...............................................................................14

4.1 Características Botânicas...................................................................................14

4.2 Dados Fitoquímicos............................................................................................15

5 FORMAS DE PROPAGAÇÃO, PROCESSOS REPRODUTIVOS E DA CULTURA

DO MARACUJAZEIRO............................................................................................17

6 EXIGÊNCIAS CLIMÁTICAS DE PASSIFLORA ALATA DRYANDER E DE P.

EDULIS SIMS ..........................................................................................................20

7 MEMÓRIA .............................................................................................................25

8 ANSIEDADE .........................................................................................................32

8.1 Epidemiologia da Ansiedade..............................................................................39

9 OBJETIVOS..........................................................................................................40

9.1 Objetivo Geral ....................................................................................................40

9.2 Objetivos Específicos .........................................................................................40

10 MATERIAIS E MÉTODOS ..................................................................................41

10.1 Testes Comportamentais .................................................................................42

10.1.1 Esquiva Inibitória (Inhibitory Avoidance Task)...............................................42

10.1.2 Habituação em Campo Aberto (Open-field Task): ........................................42

10.1.3 Modelo do Labirinto em Cruz Elevada (plus-maze) ......................................44

11 RESULTADOS....................................................................................................46

12 DISCUSSÃO .......................................................................................................51

13 CONCLUSÃO .....................................................................................................53

13.1 Toxicidade em Doses Elevadas dos Extratos de Folha de P. alata e de P.

edulis ........................................................................................................................54

14 REFERÊNCIAS...................................................................................................55

ANEXOS ..................................................................................................................68

1 INTRODUÇÃO

O emprego dos vegetais como alimento, medicamento ou cosmético, se

perde na história do homem na Terra. Os estudos da arqueologia demonstraram

que há mais de 3.000 anos as ervas eram utilizadas para esses fins. A fitoterapia

ou terapia pelas plantas, era conhecida e praticada pelas antigas civilizações.

Pode-se afirmar que o hábito de recorrer às virtudes curativas de certos vegetais é

uma das primeiras manifestações do esforço do homem para compreender e utilizar

a natureza (TESKE; TRENTINI, 2001).

São considerados medicamentos fitoterápicos aqueles cujas matérias-

primas utilizadas sejam exclusivamente originadas de plantas medicinais – folhas,

flores, caules, raízes, etc, que se constituem em drogas vegetais - ou seus extratos,

podendo ser incluídos em sua elaboração, substâncias puras inertes, como

adjuvantes. A mera inclusão de qualquer substância ativa sintética descaracteriza o

produto como fitoterápico (SONAGLIO, 2001).

O homem utiliza as plantas como fonte de alimento e busca para cura de

diferentes enfermidades. Baseado, algumas vezes, na crendice popular, essas

substituem medicamentos sintéticos sem conhecimento apurado de seus

verdadeiros efeitos. Atualmente no Brasil e em diversos outros países a utilização

de plantas medicinais vem sendo uma prática alternativa aos medicamentos

(BRESOLIN; CECHINEL FILHO, 2003).

Segundo análise feita pela Annual Reports of Medical Chemistry, cerca de

60% dos fármacos lançados no mercado norte-americano entre 1985 e 1995 são de

origem natural (BRESOLIN; CECHINEL FILHO, 2003). Considerando que o Brasil

possui a flora mais rica do mundo em matéria-prima para produção de fitofármacos

e, apenas em torno de 8% foram estudadas, é de suma importância que se busque

nestas plantas uma fonte alternativa de medicamentos, visando no futuro a

obtenção de novos fármacos, mais eficazes e específicos (BRAZ FILHO, 1999;

SIMÕES et al., 1999).

A importância da matéria-prima vegetal empregada na produção de um

fitoterápico é referente à sua natureza complexa, constituída de misturas de

substâncias químicas, cujos níveis podem apresentar variações importantes,

dependendo de fatores ambientais e/ou genéticos (NEWELL; ANDERSON;

PHILLIPSON, 1996).

As plantas são fontes importantes de compostos bioativos naturais, que

freqüentemente se constituíram em modelos para síntese de grande número de

fármacos. Segundo Oliveira (2000), certos vegetais apresentam um conjunto de

substâncias ativas, cuja ação farmacodinâmica é mais efetiva do que uma de suas

substâncias isoladas.

Entre as plantas utilizadas como medicinais, destacam-se as espécies da

Família Passifloraceae. Esta compreende 12 gêneros, dos quais 7 estão dispersos

em várias partes do globo como a África, Ásia, Ilhas do Pacífico Sul, Nova Guiné e

Nova Zelândia. Passiflora L. é o gênero mais importante da família, com cerca de

500 espécies distribuídas na flora das regiões tropicais das Américas, do Sul dos

EUA até o Brasil, sendo que 370 ocorrem somente nas Américas (REITZ, 1980).

São plantas herbáceas ou lenhosas, às vezes trepadeiras, importantes por seus

frutos comestíveis e por suas propriedades terapêuticas (COSTA, 1994).

No Brasil ocorrem quatro gêneros de Passifloraceae: Mitostemma, Dilkea,

Tetrastylis e Passiflora, que apresentam a seguinte distribuição geográfica: Dilkea,

no Amazonas e Pará; Tetrastylis, na Bahia, Minas Gerais e Rio de Janeiro;

Mitostemma, Mato Grosso, Rio de Janeiro e Rio Grande do Sul e Passiflora, em

todo o país, sendo o gênero mais freqüente registrado em Santa Catarina (REITZ,

1980).

Os maracujás pertencem ao gênero Passiflora, havendo no Brasil

aproximadamente 120 espécies nativas (COSTA, 1994). Apesar do nome popular

aplicado a todas as espécies, apenas duas são cultivadas comercialmente para a

produção dos frutos: Passiflora alata Dryander (maracujá-doce) e Passiflora edulis

Sims (maracujá-azedo). Apesar de todas as espécies produzirem frutos, nem todos

podem ser consumidos, havendo alguns que são até tóxicos.

Embora P. alata seja uma droga oficial da farmacopéia brasileira e seus

extratos serem incluídos como componentes ativos em muitas preparações

registradas no Brasil, as espécies de Passiflora foram usadas tradicionalmente na

Europa e em toda América no tratamento de ansiedade, insônia e nervosismo

(BRASSEUR, 1984).

P. alata distribui-se extensamente em toda América Latina, e seu extrato foi

usado na medicina popular de países americanos e europeus por suas

propriedades ansiolíticas similares ao diazepam (PARIS et al., 2002). Entretanto,

sabe-se do efeito amnésico do diazepam quando administrado antes da sessão da

esquiva inibitória e do campo aberto, dois instrumentos clássicos para avaliar

memória aversiva e de habituação, respectivamente.

A composição química dos extratos da folha de P. alata e P. edulis tem sido

extensamente estudada e tem revelado a presença de alcalóides (LUTOMSKI;

MALEK, 1975; OGA et al., 1984), polifenóis como um dos principais responsáveis

pelos seus princípios ativos (ULUBELEN et al., 1982; PETRY et al., 2001;

PEREIRA et al., 2004; MULLER et al., 2005) e saponinas (REGINATTO et al.,

2001; YOSHIKAWA et al., 2000a; YOSHIKAWA et al., 2000b).

O conhecimento dos componentes químicos de P. alata e de P. edulis é

importante para o desenvolvimento dos métodos e controle da quantidade destas

drogas. O propósito deste trabalho, é avaliar as atividades dos extratos de P. alata

e de P. edulis no processo de formação da memória e ansiedade em ratos Wistar.

2 JUSTIFICATIVA

2.1 Considerações sobre o maracujazeiro

Maracujá é um nome de origem indígena, das tribos Tupi e Guarani, e deriva

de “murukuia”, que significa “alimento em forma de cuia”. A utilização do

maracujazeiro pelo homem é grande e diversificada. As espécies são cultivadas por

suas características alimentícias, ornamentais e medicinais. O principal uso está na

alimentação humana, na forma de sucos, doces, sorvetes e licores. O valor

ornamental é conferido pelas belas flores e o valor medicinal, também muito

difundido, é devido às propriedades calmantes da passiflorina, um sedativo natural

encontrado nos frutos e nas folhas. É também rico em vitamina C, cálcio e fósforo

(MELETTI, 1995; SOUSA; MELETTI, 1997).

As espécies de Passiflora são distribuídas extensamente por toda a América

Latina e o extrato da folha foi usado na medicina popular de países americanos e

europeus devido a suas propriedades sedativas e ansiolíticas (ROSS, 2002).

Embora P. alata seja um fitoterápico oficial da farmacopéia brasileira e seus

extratos serem incluídos como componentes ativos em muitas preparações

registradas no Brasil, as espécies de Passiflora também foram usadas

tradicionalmente na Europa e em toda América no tratamento de ansiedade, insônia

e nervosismo (ULUBELEN, 1982). Embora estes fitofármacos e seus princípios

ativos fossem estudados extensivamente (PETRY et al., 2001), as substâncias

ativas de Passiflora não foram totalmente identificadas e testes farmacológicos

estão atualmente sendo realizados.

Grande número de espécies de Passiflora são consideradas, atualmente,

como drogas oficiais em muitas farmacopéias de diversos países. Embora os

extratos deste vegetal sejam relatados como alternativa tecnológica atual nas

preparações de produtos intermediários para formulários de dosagem farmacêutica,

há poucas investigações das propriedades e composição de Passiflora

(GONZÁLEZ ORTEGA, 1995). Entre estas destacam-se:

2.1.1 Alcalóides

Tem sido demonstrado, nos últimos anos, que os extratos de folhas de P.

alata e P. edulis apresentam baixos teores de alcalóides.

Os alcalóides são bases nitrogenadas, de alta toxicidade, derivadas de

aminoácidos, cuja função principal é a defesa da planta contra fitófagos (SIMÕES et

al., 2003).

Segundo Martins et al. (1995), os alcalóides podem ter coloração amarela,

roxa ou incolor. Nas células vegetais estão nos vacúolos. Quando na forma de sais,

encontram-se nas paredes celulares. Localizam-se nas folhas, sementes, raízes e

caules.

A medicina emprega-os normalmente em estado puro e o seu verdadeiro

valor apenas se revela quando usados adequadamente pelo médico. Segundo a

sua composição química e, sobretudo, a sua estrutura molecular, os alcalóides

podem ser divididos em vários grupos contendo: alcalóides isoquinoleicos,

indólicos, quinoléicos, pirimídicos, piperamídicos, derivados do tropano, esteróides,

fenilalaninas e harmano.

Para o autor, a concentração dos alcalóides pode variar muito durante o

ano, podendo em certas épocas, estar restrito somente a determinado órgãos,

principalmente folhas e frutos. Apenas 10 a 15 % das plantas conhecidas

apresentam alcalóides em sua constituição.

O isolamento de alcalóides do tipo β-carbonílicos derivados do grupo

harmano em espécies de Passiflora foi primeiramente descrito em folhas de P.

incarnata (POETHKE et al., 1970).

Em 1975, Lutomsk e Malek relataram a presença de harmano, harmino,

harmalina e harmanol em extrato de P. edulis sendo a concentração de alcalóides

totais do grupo harmano de 0,12 mg/100g. Para o extrato bruto de folhas de P.

alata, uma concentração de alcalóides totais de 0,217/100g, foi demonstrada por

Oga et al. (1984).

Os alcalóides formam um grupo heterogêneo de substâncias orgânicas, cuja

similaridade molecular mais significativa é a presença de nitrogênio na forma de

amina (raramente amida). Existem várias classes de alcalóides, e todas

apresentam alguma ação fisiológica, geralmente no sistema nervoso central, o que

tem sido utilizado para benefício do homem na produção de drogas medicinais,

como, por exemplo, a morfina (VICKERY; VICKERY, 1981).

2.1.2 Polifenóis

Primeiramente reconhecidos como pigmentos, os polifenóis formam um

grupo complexo de moléculas presente na maioria das frutas e vegetais, estando

envolvidos na defesa da planta contra patógenos, animais ou radiação ultravioleta.

Segundo Simões et al. (2003), polifenóis são metabólitos secundários e podem ser

classificados de acordo com sua estrutura química em ácidos fenólicos (ácidos

hidroxibenzóicos e ácidos hidroxicinâmicos) flavonóides, estilbenos e lignanas

(Anexo A)

Dentre as classes de polifenóis, os flavonóides são os compostos mais

estudados. Os flavonóides possuem um esqueleto difenilpropropano e são

divididdos em 6 (seis) subclasses: flavonóis, flavonas, isoflavonas, flavanonas,

antocianidinas e flavanóis (catequinas e proantocianidinas) (Anexo B)

A composição química dos extratos de folhas de P. alata e de P. edulis

indicam a presença de polifenóis como constituintes majoritários.

Oga et al. (1984) encontraram uma concentração elevada de flavonóides em

extrato bruto de folhas de P. alata (44,8mg/100g). Corroborando com estes autores,

Petry et al (2001), descreveram flavonóides totais de 2,9 e 4,6 mg/100g, em

extratos hidroalcoólico de folhas de P. alata e P. edulis, respectivamente.

Os flavonóides representam um dos grupos fenólicos mais importantes e

diversificados entre os produtos de origem natural. Essa classe de compostos é a

amplamente distribuída no reino vegetal. Quase ausente em algas, alguns

representantes foram identificados em briófitas, existindo somente um relato de

ocorrência em fungos. Em pteridófitas também foram encontrados, mas sua

variabilidade estrutural é pequena. Todavia estão presentes em abundância em

angiospermas, apresentando nesse grupo enorme diversidade estrutural (COSTA,

1994).

Para Simões et al. (2000), são conhecidos até o presente, mais de 4.200

flavonóides diferentes, sendo que o número de novas estruturas identificadas

praticamente dobrou nos últimos vinte anos. Os flavonóides de origem natural

apresentam-se freqüentemente, oxigenados e um grande número ocorre conjugado

com açúcares. Essa forma, chamada conjugada, também conhecida como

heterosídeo. São denominados de O-heterosídeos quando a ligação se dá por

intermédio de uma hidroxila e de C-heterosídeos quando a ligação se dá com um

átomo de carbono. Quando o metabólito (flavonóides, antraquinonas, terpenos, etc)

encontra-se sem açúcar, é chamado de aglicona ou genina, sendo freqüentemente

denominado de forma livre.

Para os autores acima citados, os heterosídeos são geralmente solúveis em

água e em álcoois diluídos, mas insolúveis nos solventes orgânicos habituais,

enquanto que as respectivas agliconas são normalmente solúveis em solventes

orgânicos apolares e, por possuírem caráter fenólico, em soluções aquosas

alcalinas. O aquecimento, mesmo em soluções diluídas, pode levar à hidrólise dos

O-heterosídeos e muitas vezes interferir na análise estrutural de flavonóides. As

hidrólises alcalina e ácida facilitam a identificação dos núcleos flavônicos, enquanto

a hidrólise enzimática rompe pontos específicos das moléculas, facilitando a

identificação dos constituintes da parte açúcar.

A espectroscopia no ultravioleta é a principal técnica tanto para a detecção

quanto para o monitoramento da pureza de derivados flavônicos durante os

processos de isolamento (SIMÕES et al., 2000).

A grande diversidade dos flavonóides sugere que eles sejam importantes

para as plantas superiores. Contudo não está claro que também o sejam para o

homem. De fato, pode-se inferir que os seres humanos ingerem muitos gramas de

flavonóides diariamente, sendo encontrados com freqüência nas frutas e em muitas

outras espécies vegetais, no vinho, em cereais e ocasionalmente em corantes

alimentares. Entretanto, não há, até o momento, comprovação evidente de que

esses metabólitos sejam imprescindíveis à alimentação humana (SIMÕES et al.,

2000).

O emprego terapêutico de P. alata e de P. edulis, contendo flavonóides é

vasto e, em muitos casos, ainda empírico. Embora alguns resultados tenham

mostrado que os flavonóides possam apresentar efeito mutagênico, em geral, são

considerados como benéficos. Alguns medicamentos são elaborados a partir de

flavonóides, em particular para o tratamento de doenças circulatórias, hipertensão e

agindo como cofator da vitamina C. Outras pesquisas sugerem que alguns

flavonóides são responsáveis por ação antitumoral considerável, podendo ainda

agir como antivirais, anti-hemorrágicos, hormonais, antinflamatórios,

antimicrobianos e antioxidantes (COSTA, 1994).

A partir da década de 80 começou-se a conhecer com maior profundidade

os flavonóides em plantas. Pôde-se demonstrar que os flavonóides administrados

por via oral potencializam a ação do hexobarbital, prolongando assim o tempo de

sono e diminuindo notoriamente a motilidade, sem provocar falta de coordenação

motora nem efeitos que relaxem a musculatura (DELLA LOGIA, 1981; SPERONI;

MINGHETI, 1988).

2.1.3 Saponinas

Estudos recentes tem também demonstrado a presença de saponinas em

extrato de folhas de P. alata e de P. edulis. De acordo com Simões et al. (2003),

saponinas são glicosídeos de esteróides ou de triterpenos amplamente distribuídos

em vegetais, cuja função é a diminuição da tensão superficial da água, agindo

deste modo como detergentes e emulsificantes.

A primeira saponina descrita para o extrato de folhas de P. edulis foi

denominada passiflorina, a qual é derivada do lanostato [éster do ácios-β-D-glicosil

(22R),(24S)-22,31-epoxi-24-metil-1α,3β,24,31-tetra-hidroxi-9,19-ciclo-9β-lanostano-

28-óico] (BOMBARDELLI et al., 1975). Em estudos recentes, outras dez saponinas

triterpênicas (ciclopassiflosideoes) foram isoladas de folhas e de caules de P.

eduilis (YOSHIKAWA et al., 2000, b). Em adição, Reginatto et al. (2001) relataram o

isolamento de quatro saponinas triterpênicas e uma saponina esteroidal em extrato

de P. alata.

2.2 Gênero Passiflora

Os maracujás pertencem à família Passifloraceae, amplamente distribuída

nos trópicos, a maioria habitante da América tropical.

Muitas das espécies de Passiflora são cultivadas pelas suas propriedades

alimentícias, ornamentais ou medicinais, mas principalmente pela qualidade de

seus frutos (MELETTI, 2000).

As plantas deste gênero, caracterizam-se por serem trepadeiras vigorosas

de caule freqüentemente sulcado. Em algumas espécies, as folhas são

arredondadas e em outras são profundamente partidas, com bordos serrados. As

flores são grandes, vistosas, de coloração que podem variar de branco-esverdeada,

alaranjada, vermelho ou arroxeada, de acordo com a espécie. O florescimento

ocorre de dezembro a abril (COSTA, 1999).

O fruto é geralmente arredondado e com casca espessa de coloração verde,

amarelada, alaranjada ou com manchas verde-claras, de acordo com a espécie.

Sementes achatadas, pretas, envolvidas por um arilo de textura gelatinosa de

coloração amarelada e translúcida. Frutifica durante o ano todo, menos

intensamente de maio a agosto.

Os frutos formam-se a partir da polinização cruzada entre duas plantas,

realizada naturalmente pelas mamangavas (Xylocopa spp.) que, por possuírem

tamanho avantajado, transportam pólen no seu dorso.

2.2.1 Dados Farmacológicos

Tradicionalmente considera-se que o maracujá apresenta as seguintes

atividades: sedativas, antiespasmódicas e ansiolíticas, confirmadas em

experiências com animais (ZUANAZZI, 2000).

2.2.2 Dados Fitoquímicos

Entre os constituintes químicos identificados estão cumarinas, ácidos

fenólicos, fitosteróis e heterosídeos cianogênicos, cerca de 0,05% de maltol (2-

metil-3-hidróxi-pirona); menos que 0,03% de alcalóides indólicos (harmana, harmol,

harmina e seus derivados di-hidrogenados), e inúmeros flavonóides (os mais

freqüentes são os di-C-heterosídeos de flavonas) (ZUANAZZI, 2000).

Na literatura são relatadas a presença de passiflorina, quadrangulosídeo, 9-

19-ciclolanosta-22,25-epoxi-3β,21,22(R)-triol-3β-O-gentiobiosídeo, 9,19-

ciclolanosta-21,24-epoxi-3β,25,26-triol-3β-O-gentiobiosídeo, ácido 3-O-soforosídeo

andoleanólico (YOSHIKAWA et al., 2000a).

3 PASSIFLORA ALATA DRYANDER

Passiflora alata Dryander (Figura 1), pertencente à família Passifloraceae,

está entre as espécies mais cultivadas como maracujá no Brasil. Suas folhas e

partes aéreas secas são utilizadas como sedativo (ZUANAZZI, 2000). É

característica da floresta pluvial da encosta atlântica no Estado de Santa Catarina,

estando distribuída neste estado, nos municípios: Araquari, Florianópolis,

Governador Celso Ramos, Itajaí, Porto Belo e São Francisco do Sul (REITZ, 1980).

P. alata é uma planta neotropical muito cultivada no Brasil, conhecida popularmente

como flor-da-paixão, maracujá, maracujá-de-refresco, maracujá-do-grande,

maracujá-grande, maracutango ou maracutão, maracujá amarelo, maracujá-mamão

(REITZ, 1980; MORS, 2000).

3.1 Características Botânicas

Planta trepadeira, perene, lenhosa, glabra de crescimento rápido e contínuo,

podendo atingir de 5 m a 10 m de comprimento. Sistema radicular pivotante ou

axial, pouco profundo, com maior taxa de crescimento ocorrendo entre 210 e 300

dias e maior volume de raízes concentrando entre 0,30 m a 0,45 m de

profundidade, em raio de 0,60 m a partir do tronco. Caule tetrangular-alado,

lenhoso, diminuindo o teor de lignina á medida que se aproxima do ápide da planta.

Folhas simples e inteiras, alternas ovadas ou ovado-oblongas e textura

membranácea, peninérvea, com nervuras salientes em ambas as face

especialmente na inferior, acuminadas no ápice, arredondadas, subcordadas ou

subcuneadas na base, de margem lisa ou finamente denticulada, com 6,0 a 21,5

cm de comprimento e 5,0 a 13,5 cm de largura: pecíolos medindo cerca de 3,0 cm

com 2 a 4 glândulas sésseis ou nectários, orbiculares, dispostas aos pares na parte

superior: estípulas persistentes de margem lisa ou serrilhada, com 1,0 a 2,0 cm de

comprimento e 0,3 a 1,0 cm de largura. Flores hermafroditas odoríferas, axilares,

geralmente isoladas, com 10,0 a 12,0 cm de diâmetro; pedúnculo trígono com 1,2 a

2,5 cm de comprimento; brácteas foliáceas, livres, inseridas junto à base da flor,

ovadas, agudas, subcordadas na base, de margem lisa ou serrilhada, com até 3 cm

de comprimento e 2,2 cm de largura; tubo calicinal curto com cerca de 1,2 cm de

diâmetro, sépalas em número de 5, carnosas, oblongas e obtusas, externamente

verdes e a face interna carmesin; pétalas normalmente em número de 5, oblongas,

obtusas e brancas ou branco-arroxeadas e internamente carmesin, com 3,8 a 5,0

cm de comprimento, por 1,5 a 2,0 cm de largura; estames em número de cinco,

presos a um androginóforo colunar; ovário oblongo, glabro, obscuramente sulcado

longitudinalmente (REITZ, 1980; COSTA, 1994). Fruta do tipo baga com tamanho e

forma variados. P. alata floresce e dá frutos entre os meses de setembro a abril

(REITZ, 1980; MEDINA et al., 1980; MANICA, 1981; KLIEMANN et al., 1986;

SOUZA, 2000; FARMACOPÉIA, 1977; COSTA, 1994).

Figura 1: Detalhe das flores e folhas de Passiflora alata Dryandrer. Fonte: Lorenzi

(2002).

3.1.1 Características Reprodutivas e da Cultura

As flores geralmente abrem-se entre 12 a 13 horas, permanecendo abertas

em torno de quatro horas (RUGGIERO et al., 1996).

O maracujazeiro amarelo P. alata (Figura 2) é dependente de polinização

cruzada, pois suas flores apresentam diferentes graus de auto-incompatibilidade. A

polinização é realizada por abelhas mamangavas (Xylocopa spp.) ou através da

polinização artificial, quando a presença dos insetos polinizadores é reduzida. Seus

frutos variam em tamanho e forma, de acordo com os diferentes estádios de

maturação, idade da cultura, latitude, condições edafoclimáticas e sistema de

manejo (MEDINA et al., 1980; FIGUEIREDO et al., 1988).

Figura 2: Detalhe do fruto de Passiflora alata Dryander. Fonte: Lorenzi (2002).

A caracterização da cultura do maracujazeiro foi realizada por Maciel et al.

(1994) que dividiu o ciclo em quatro estádios de desenvolvimento. Inicialmente a

cultura apresenta uma fase embrionária, onde a planta possui um hipocótilo ereto,

duas folhas cotiledonares e um epicótilo pouco visível. Posteriormente a planta

inicia a fase juvenil ou fase de crescimento inicial, onde apresenta caule cilíndrico

com entrenós curtos, folhas simples dispostas em filotaxia 2/5 e a presença de uma

gema axilar. Esta fase termina com o aparecimento das primeiras folhas lobadas e

gavinhas, o que ocorre no final do segundo giro filotáxico. A próxima fase,

caracterizada como de crescimento vegetativo apical, é uma fase de transição, em

que ocorrem mudanças fisiológicas e morfológicas com o aumento do comprimento

dos entrenós, mudança na forma das folhas, aparecimento de gavinhas e

crescimento do ramo principal. O crescimento vegetativo lateral, também

caracterizado como fase de transição, corresponde ao desenvolvimento de dois

ramos laterais, de onde saem os ramos produtivos. Nesta fase, a partir do 11º nó,

entre a base e a gema axilar, dá-se início ao aparecimento de gavinhas em todos

os nós, ocorrendo também o surgimento das primeiras folhas trilobadas. Com o

aparecimento de botões florais nos ramos principal e lateral, inicia-se a fase adulta

que ocorre até a paralisação do florescimento e frutificação em função da redução

da temperatura e do fotoperíodo.

3.2 Dados Fitoquímicos

A partir da maceração das folhas de P. alata usando-se etanol como líquido

extrator, foram isolados os glicosídeos 3-O-β-D-glicopiranosil-estigmasterol, ácido

3-O-β-glicopiranosil-oleanólico, ácido 3-O-β-D-glicopiranosil-(1¤ 3)-β-D-

glicopiranosil-oleanólico, ácido 3-O-β-D-glicopiranosil-(1¤ 2)-β-D-glicopiranosil-

oleanólico e 9,19-ciclolanost-24Z-en-3β,21,26-tri-hidroxi-3-26-di-O-gentiobiose. A

associação singular destes compostos em P. alata suscitou a possibilidade de sua

utilização como marcador fitoquímico para o controle de qualidade de matérias-

primas e preparações farmacêuticas a base de maracujá, o que representaria um

avanço tecnológico importante nos estudos sobre a espécie. O estudo por

Cromatografia de Camada Delgada - CCD de soluções extrativas hidroalcoólicas

das folhas de várias espécies de Passiflora encontradas no Rio Grande do Sul,

evidenciou acúmulo de saponinas apenas em P. alata (REGINATTO et al., 2001).

Foi encontrado ainda β-sitosterol em solução extrativa clorofórmica das folhas de P.

alata (STAUDT: BERTIN, 2001). Segundo COSTA (1994) a espécie apresenta C-

heterosídeos do apigenol e da luteolina, glicosídeos cianogênicos, princípios

amargos (passiflorina), estigmasterina (esterina), n-nanacosano, ácidos mirístico,

ácidos palmítico, ácidos oléico, ácidos linoleico, amilase, sacarase, taninos

condensados e hidrolizáveis, catecol, ácido gálico, açúcares, gomas e resinas.

3.3 Dados Farmacológicos

A planta apresenta ação sedativa e hipnótica. Suas folhas são muito

utilizadas na medicina popular em casos de nervosismo, histerismo, neurastenia,

perturbações da menopausa, insônia (FARMACOPÉIA, 1977; PROVENSI et al.,

2001; STAUDT; BERTIN, 2001). A solução extrativa de suas folhas é incluída em

muitas preparações farmacêuticas brasileiras, embora existam poucas

investigações acerca de seus componentes químicos e propriedades

farmacológicas. Foi demonstrado recentemente que P. alata poderia induzir alergia

respiratória (REGINATTO et al., 2001).

4 PASSIFLORA EDULIS SIMS

Conhecida popularmente como maracujá (STAUDT; BERTIN, 2001),

maracujá-de-comer, maracujá-comum, maracujá-de-doce, maracujá do mato,

maracujá-mirim, maracujá-peroba, maracujá-roxo, maracujá-de-ponche (ALMEIDA,

1993; REITZ, 1980). Cresce em terrenos tropicais (ALMEIDA, 1993) e se adapta

bem à sombra ou sob luz difusa preferindo lugares úmidos (REITZ, 1980) vivendo

geralmente de 5 a 7 anos. A planta é subtropical e prefere um clima livre do frio

intenso. Em Santa Catarina cresce exclusivamente na zona da Mata Pluvial

Atlântica, onde está vasta e expressivamente dispersa, ocorrendo desde o Norte

(Campo Alegre) até o Sul (Sombrio), encontrando-se até próximo a Porto Alegre, no

Rio Grande do Sul (REITZ, 1980).

4.1 Características Botânicas

Planta trepadeira glabra, com exceção do ovário. Folhas simples, trilobadas

com lobos elípticos ou ovado-elípticos, agudos ou acuminados, dentadas quando

adultas, com base arredondada, subtruncada ou cuneada; lâmina foliar

subcoriácea, lustrosa na face adaxial, trinervada, com 4,5 a 12,0 cm de

comprimento na nervura media e, 4,0 a 11,0 cm nas nervuras laterais; pecíolos com

até 6,0 cm de comprimento, apresentando duas glândulas sésseis, normalmente

junto ao limbo e estípulas com cerca de 1,0 cm de comprimento; flores brancas

solitárias nas axilas das folhas, com franja roxa, medindo cerca de 5,0 cm de

diâmetro; pedúnculo firme com até 6,0 cm de comprimento; sépalas alongadas,

com 3,0 a 3,5 cm de comprimento e 0,7 a 2,0 cm de largura, externamente verdes e

internamente brancas; pétalas obtusas e brancas; coroa com 4 a 5 séries

filamentosas sendo, duas séries externas com até 2,5 cm de comprimento,

encrespadas no ápice, brancos e arroxeados na base; ovário globóide ou

volumoso, tomentoso, raramente glabro (Figura 3); fruto globóide com 5,0 a 7,0 cm

de diâmetro, amarelo ou amarelo-esverdeado ou salpicado arroxeado quando

maduro (Figura 4). Floresce desde setembro até março, quando ocorre a

frutificação (REITZ, 1980; ALMEIDA, 1993).

Figura 3: Detalhes das folhas e flores de Passiflora edulis Sims. Fonte: Lorenzi

(2002).

Figura 4: Detalhe do fruto de Passiflora edulis Sims. Fonte: Lorenzi (2002).

4.2 Dados Fitoquímicos

São relacionados na literatura os ácido 22(R),24(S)-1α,3β,22,24,31-

pentahidroxi-24-metilcicloartano-28-oico (A), ácido 24(S)-1α,3β,24,31-tetrahidroxi-

24-metilcicloartano-28-oico (B), ácido 20(S),24(S)-1α,3β,21,24,31-pentahidroxi-24-

metilcicloartano-28-oico (C) e ácido 22(R)-1α,3β,22-trihidroxi-24-oxocycloartano-28-

oico (D), além de seus 28-O-β-d-glicopiranosídeos e dos 28,31-bis-O-β-d-

glicopiranosídeos dos ácidos passiflóicos B e C. Encontrou-se ainda nesta espécie

a passiflorina e o ácido passiflórico (YOSHIKAWA et al., 2000a). Triterpenos e

flavonóides estão presentes nas partes aéreas (STAUDT et al.,; BERTIN, 2001), e o

(R)-mandelonitrila α-L-rhamnopiranosil-β-d-glicopiranosídeo (β-rutosideo

cianogênico) foi isolado de frutos (CHASSAGNE; CROUZET, 2001).

5 FORMAS DE PROPAGAÇÃO, PROCESSOS

REPRODUTIVOS E DA CULTURA DO MARACUJAZEIRO

O método predominante de propagação dos maracujás é por sementes.

Devido à característica de cruzamento por polinização cruzada, há uma grande

variabilidade entre as plantas de uma população. Esta característica, relacionada

ao método de propagação, ocasiona a formação de pomares heterogêneos, com

plantas excelentes, entremeadas por aquelas de baixa produtividade (GRISI JR et

al., 1973).

Segundo o autor, o maracujazeiro é uma planta alógama por excelência. A

polinização cruzada é condicionada pelo fenômeno da auto-incompatibilidade, em

que o pólen de uma planta é incapaz de fertilizar as flores da mesma planta, e

diferentes plantas podem ou não ser compatíveis entre si. A fertilização requer a

presença de diferentes genótipos (AKAMINE; GIROLAMI, 1959; KNIGHT;

WINTERS, 1962; RUGGIERO, 1987; BRUCKNER et al., 1995) e de insetos

polinizadores (AKAMINE; GIROLAMI, 1959; CAMILO, 1987) ou de polinização

manual.

Os agentes polinizadores mais eficientes na polinização são as

mamangavas (Xylocopa spp.), por causa do tamanho (Figura 5), visto que insetos

menores coletam o néctar sem, obrigatoriamente, polinizar o estigma (MELETTI et

al., 2003). A abelha Apis mellifera tem efeito prejudicial à polinização e a ação do

vento, como agente polinizador, é nula porque o pólen dos maracujás é pesado e

pegajoso (AKAMINE; GIROLAMI, 1959; RUGGIERO et al., 1976; LEONE, 1990).

Figura 5: Detalhe da polinização de Xylocopa sp. em P.edulis Sims. Fonte: Lorenzi

(2002).

O gênero Xylocopa (Figura 6), abrange mais que 700 espécies e apresenta

distribuição cosmopolita com maior diversidade nas regiões tropicais e subtropicais

do novo e velho mundo (HURD, 1978; GERLING et al., 1989). Cerca de 200

espécies são descritas para o novo mundo, 50 do Brasil (HURD, 1955). Estas

abelhas, chamadas popularmente de mamangabas (ou mamangavas, mangangás),

constroem ninhos em árvores mortas, fazendo galerias ramificadas em troncos e

moirões e ninhos não ramificados em ramos delgados ou em caules ocos, como por

exemplo, em entrenós de bambu ou em inflorescências do "caraguatá" (Eryngium -

Apiaceae).

Figura 6: Xylocopa brasilanorum (A) e Xylocopa frontalis (B). Fonte: Melo (2004).

Em todas as espécies estudadas, as fêmeas-mães são ativas até a cria

alcançar a fase adulta (HOGENDOORN, 1994). Alimentam com néctar os jovens

depois de emergir. Este comportamento representa uma transição entre o nível

solitário e social. Em algumas espécies de Xylocopa foi observado o nível subsocial

no sentido de Michener (1974). Nestas mamangabas existe uma fêmea reprodutora

que convive com outras fêmeas não fecundadas no mesmo ninho (GERLING et al.,

1983; VELTHUIS; GERLING et al., 1995). Estas podem ser fêmeas jovens ainda

não reprodutivas ou fêmeas velhas que já passaram por uma fase reprodutiva e

continuam no mesmo ninho (HOGENDOORN; VELTHUIS, 1995).

Dependendo do clima, as mamangabas são uni, bi, ou polivoltinas

(WATMOUGH, 1974). Como outras abelhas, as fêmeas desidratam o néctar para

aumentar a concentração de açúcar. (WITTMANN; SCHOLZ, 1989) mostraram que

as fêmeas passam o néctar desidratado para seus filhos. Desta maneira, estes

conseguem ocupar um território por mais tempo, aumentando a probabilidade de

atrair uma fêmea virgem.

As informações existentes sobre relações com plantas indicam que as

espécies de Xylocopa são polifiléticas (HURD, 1978; GERLING, 1989). No entanto,

para muitas espécies, suas relações com flores ainda são pouco ou nada

conhecidas. As mamangabas são as principais polinizadoras de plantas de diversas

famílias, particularmente entre flores de várias espécies de maracujá (Passiflora,

Passifloraceae) (SAZIMA; SAZIMA, 1989; ROUBIK, 1995; GARCIA; HOC 1987).

Em flores que apresentam néctar escondido em tubos florais compridos, as

mamangabas freqüentemente perfuram o tubo floral com suas gáleas robustas pelo

lado de fora e adquirem o néctar (FAEGRI; VAN DER PIJL, 1979).

6 EXIGÊNCIAS CLIMÁTICAS DE PASSIFLORA ALATA

DRYANDER E DE P. EDULIS SIMS

A cultura do maracujazeiro, embora ser considerada uma espécie tropical,

desenvolve-se em diversas condições climáticas, variando desde as regiões

quentes dos trópicos até locais com clima subtropical (35º latitude sul). Ainda nas

diferentes latitudes, é cultivado em altitudes que variam desde o nível do mar até

3.200 m de altura (MENZEL; SIMPSON, 1988). Nessas regiões, as plantas

apresentam crescimento e desenvolvimento em taxas bem distintas, ocasionando

grandes variações no ciclo de produção da cultura, de acordo com o fotoperíodo, a

temperatura, a radiação solar e a precipitação pluviométrica (MENZEL; SIMPSON,

1988).

Nas localidades com latitudes mais altas, os ciclos de produção decrescem

proporcionalmente ao número de meses com fotoperíodos inferiores a 11 horas, e

ao decréscimo da radiação solar global incidente. O estresse hídrico, associado a

dias curtos e às baixas temperaturas do ar, restringe o crescimento e o potencial

produtivo da cultura (MENZEL et al., 1986).

De modo geral, o maracujazeiro amarelo (P. alata), é mais adaptado às

regiões de clima quente, com temperaturas médias mensais entre 21ºC e 32ºC,

com precipitação pluviométrica anual entre 800 mm e 1750 mm, baixa umidade

relativa, fotoperíodo em torno de 11 horas e ventos moderados (MEDINA et al.,

1980; RUGGIERO et al., 1996).

O primeiro estudo sobre a influência do fotoperíodo no desenvolvimento do

maracujazeiro amarelo, foi realizado por Watson e Bowers (1965) que verificaram a

maior produtividade da cultura em fotoperíodo acima de 12 horas de luz, e redução

do número de flores com o abaixamento do fotoperíodo. Ainda segundo esses

autores, o efeito do fotoperíodo sobre o crescimento vegetativo foi marcante, onde

em fotoperíodos menores que 8 horas e maiores que 16 horas, as plantas

apresentaram um aumento acentuado no crescimento (comprimento do ramo,

comprimento do entrenó e número de nós) em detrimento ao florescimento, ao

passo que plantas expostas a fotoperíodos de 12 horas apresentam menor

crescimento, porém maior número de flores.

Vasconcelos e Duarte Filho (2000), descreveram a influência do fotoperíodo

nos cultivos realizados nas diferentes regiões geográficas do Brasil, em condições

de não limitação hídrica. No Norte do país (0º latitude) as plantas crescem e

florescem continuadamente, devido a pouca variação da temperatura e fotoperíodo

ao longo do ano. Afastando-se para o Nordeste, este período começa a diminuir (10

a 11 meses) em função da latitude, uma vez que temos o aparecimento de um

inverno mais delimitado com uma pequena redução na temperatura e no

fotoperíodo. No Sudeste, o período de produção é menor em relação ao Nordeste,

variando de 10 a 9-8 meses, uma vez que nesta região no outono/inverno as

temperaturas são mais baixas e o comprimento do dia diminui mais

acentuadamente. Na região Sul, os efeitos da temperatura e fotoperíodo são fortes,

reduzindo ainda mais o período produtivo das plantas, quando comparados com a

região Sudeste.

A temperatura é outro fator climático que apresenta influência no

crescimento vegetativo e produtivo do maracujazeiro (ISHIHATA, 1983; MENZEL et

al., 1987; UTSUNOMIYA, 1992).

Em Kyoto, Japão, estudos realizados por Utsunomiya (1992), mostraram o

efeito da temperatura no crescimento , florescimento, peso médio e rendimento de

suco em plantas de maracujá roxo, sendo os maiores valores, encontrados nas

temperaturas diurna e noturna de 28ºC e 23ºC, respectivamente. O florescimento

ocorreu praticamente na mesma época em todas as combinações de temperaturas

diurnas/noturnas testadas (23/18ºC, 28/23ºC, 33/28ºC) enquanto o período final

prolongou-se por mais 7, 8 e 16 dias em temperaturas diurnas de 33ºC, 28ºC e

23ºC respectivamente. Apesar de todos os botões florais se manterem nos ramos

até a antese, em todas as temperaturas avaliadas, nas temperaturas mais elevadas

foi constatado maior queda de flores logo após a polinização, resultando em

maiores produções nas menores temperaturas. Ishihata (1983) justifica que a

queda precoce das flores está relacionada com a baixa germinação do pólen;

segundo o autor, para o maracujazeiro roxo (P. edulis), temperaturas entre 25ºC e

30ºC foram ótimas para a germinação do pólen, sendo nas temperaturas de 15ºC e

35ºC esta praticamente não ocorre.

Além disso, temperaturas mais elevadas podem provocar a queda de frutos

pela inibição da fertilidade do óvulo, ou mais tarde, por ocasião do desenvolvimento

da semente, resultando em um menor número de sementes por fruto. Portanto,

apesar do desenvolvimento vegetativo vigoroso, temperaturas superiores a 33ºC

afetam negativamente o crescimento e o peso dos frutos, além do rendimento em

volume de suco (UTSUNOMIYA, 1992).

Na região Centro-Oeste do país, Veras (1997), também constatou que

mesmo com desenvolvimento vegetativo vigoroso, temperaturas superiores a 33ºC

levam a formação de frutos pequenos com menor rendimento de suco. O peso do

fruto foi significativamente maior com temperaturas variando entre 13ºC e 28ºC em

relação a 33ºC com pequena diferença entre 23ºC e 28ºC. O peso da casca foi

maior sob baixas temperaturas, enquanto o peso do suco foi maior na temperatura

de 28ºC. O efeito no florescimento é intensificado em períodos de temperaturas

moderadamente altas, devido à interação entre temperatura e radiação solar

(MENZEL et al., 1987).

O efeito da temperatura sobre o maracujazeiro também é refletido na

absorção de nutrientes, conforme constatado por Menzel et al. (1987), quando

observaram que o acúmulo máximo de nutrientes na parte aérea das plantas

ocorreu em temperatura diurna e noturna em torno de 25ºC e 20ºC,

respectivamente. Os níveis de potássio aumentaram com o aumento da

temperatura, enquanto, nitrogênio, enxofre e magnésio reduziram.

Outra condição climática que influencia o ciclo produtivo do maracujazeiro é

a radiação solar. Para Menzel e Simpson (1988), a radiação solar é o fator

ambiental que mais contribui para as flutuações de florescimento e a formação de

frutos de maracujazeiro. Esses autores verificaram que plantas submetidas a baixas

radiações (de 2,1 a 6,3 MJ m

-2

-1

) apresentaram maior comprimento do ramo;

quando a radiação solar global incidente foi elevada para 20,9 MJ m

-2

-1

, a área

foliar, o número de botões florais, o número de flores abertas e o peso da matéria

seca aumentaram. Os autores acrescentam que períodos intermitentes de uma a

quatro semanas de forte sombreamento, durante um período de pleno sol, induzem

efeito residual sobre o crescimento, florescimento e o potencial produtivo da cultura,

e relatam que períodos de alta nebulosidade nas regiões tropicais influenciaram a

produtividade do maracujazeiro, principalmente se o sombreamento ocorrer logo

após um período de alta formação de frutos, devido à competição entre gemas e

frutos em desenvolvimento. O mesmo raciocínio é utilizado por Vasconcellos;

Duarte Filho (2000) para justificar a baixa produção por planta nos plantios

adensados, já que o sombreamento natural dos ramos diminui o ganho

fotossintético das plantas.

Devido às exigências climáticas as espécies de Passiflora estão distribuídas

em toda a América Latina. A maior ou menor concentração de seus princípios

bioativos estará condicionada a forma com que as plantas exploram com maior

eficiência o ambiente físico em que se desenvolvem. E seus extratos são utilizados

na medicina popular de países americanos e europeus devido a suas propriedades:

antitumorais, antivirais, anti-hemorrágica, hormonais, antinflamatória,

antimicrobiana, antioxidante, nervosismo, insônia, ansiedade e por extensão para a

memória.

Todos nós temos episódios ocasionais de preocupação. Isso faz parte da

vida de qualquer pessoa. Alguma ansiedade é normal, porém quando esta

ansiedade passa a interferir com a habilidade da pessoa desempenhar ações do

dia a dia, ela precisa ser tratada, pois pode também afetar a memória.

O estudo das bases neurofisiológicas e neuroquímicas do aprendizado e da

memória é um dos mais fascinantes temas em neurociências. A idéia de que a

memória está baseada em modificações dependentes do uso em conexões

sinápticas é antiga, remetendo-nos aos trabalhos de Freud (1895), Pavlov (1926),

Hebb (1949) e Ramón y Cajal (1911, 1952). Nos últimos anos, essa idéia foi

reforçada pelo estudo de fenômenos de plasticidade neuronal, entre eles a

potenciação de longa duração (LTP, do inglês long-term potentiation) (BLISS;

COLLLINGRIDGE, 1993; BLISS; LOMO, 1973).

A potenciação de longa duração é um aumento duradouro na resposta

excitatória pós-sináptica (BLISS; COLLLINGRIDGE, 1993). Descrito pela primeira

vez na formação hipocampal de coelhos em 1973 (BLISS: LOMO 1973), esse

fenômeno apresenta várias propriedades em comum com a memória: indução

rápida, manutenção por longos períodos, especificidade para um estímulo,

manutenção por longos períodos e expressão imediata quando é novamente

aplicado o estímulo original (BLISS; COLLLINGRIDGE, 1993; IZQUIERDO, 1994).

Como veremos adiante, várias correlações entre os mecanismos envolvidos na LTP

e na memória têm sido demonstradas.

Estudos em modelos animais têm mostrado que a formação da memória

envolve uma série de alterações bioquímicas em várias áreas do sistema nervoso

central (SNC), entre as quais destaca-se o hipocampo. Os eventos bioquímicos

envolvidos na formação da memória incluem, inicialmente, a ativação de receptores

glutamatérgicos dos tipos N-metil-D-aspartato (NMDA) e metabotrópico (mGluRs), e

a ativação de cascatas bioquímicas nos neurônios. Entre as proteínas cerebrais

envolvidas nessas cascatas, destacam-se a proteína quinase A (PKA), a proteína

quinase C (PKC), a proteína quinase dependente de GMPc (PKG) e a cálcio-

calmodulina quinase II (CaMKII). A expressão ou evocação da memória requer a

ativação de receptores glutamatérgicos do tipo amino-3-hidroxi-5-metil-4-

isoxazolpropionato (AMPA). Em ratos, esses eventos bioquímicos, ou alguns deles,

ocorrem no hipocampo, na amígdala e em diferentes áreas corticais quando os

animais são submetidos a um novo aprendizado. Muitos desses mecanismos

também participam da LTP e de outros modelos animais de memória em pintos, na

mosca da fruta Drosophila e no molusco Aplysia (IZQUIERDO; MEDINA, 1997).

7 MEMÓRIA

Memória é a aquisição, a formação, a conservação e a evocação de

informações. A aquisição é também chamada de aprendizagem: só se grava aquilo

que foi aprendido. A evocação é também chamada de recordação, lembrança,

recuperação. Só lembramos aquilo que gravamos, aquilo que foi aprendido.

(IZQUIERDO, 2002)

A palavra “memória” abrange desde os ignotos mecanismos que operam

nas placas do computador, até a história de cada cidade, país, povo ou civilização,

memórias individuais dos animais e das pessoas. Mas a palavra memória quer

dizer algo diferente em cada caso, porque os mecanismos de sua aquisição,

armazenamento e evocação são diferentes (IZQUIERDO, 2002).

Segundo o autor, a memória humana é parecida com dos demais mamíferos

no que concerne a seus mecanismos essenciais e às áreas nervosas envolvidas e

seus mecanismos moleculares de operação; mas não no que se refere a seu

conteúdo. Um ser humano lembra melodias e letras de canções ou como praticar

medicina; um rato não. Os seres humanos utilizam, a partir dos 2 ou 3 anos, a

linguagem para adquirir, codificar, guardar ou evocar memórias; as demais

espécies animais, não. Todavia, fora as áreas da linguagem, usamos as mesmas

regiões do cérebro e mecanismos moleculares semelhantes para construir e evocar

memórias totalmente diferentes.

Existe a memória de trabalho, uma das mais importantes, que usamos para

entender a realidade que nos rodeia e poder efetivamente formar ou evocar outras

formas de memória: a que denominamos de curta duração e que dura poucas

horas, o suficiente para que possa se formar a memória de longa duração (também

chamada memória remota), que dura dias, anos ou décadas (IZQUIERDO, 2002).

Memórias de curta duração (ou curto prazo) duram de segundos a horas e

são vulneráveis a perturbações. Por exemplo, pode ser apagada por traumatismos

cranianos ou por eletrochoque convulsivo. No entanto, esses mesmos tratamentos

não afetam as memórias de longa duração, que foram armazenadas a um longo

tempo atrás. Tais observações levaram à idéia de que as memórias seriam

armazenadas na forma de curta duração e, gradualmente, convertidas em uma

forma permanente por intermédio de um processo de consolidação da memória, o

qual, entretanto, não requer necessariamente a memória de curta duração como

intermediária; os dois tipos de memória podem existir em paralelo. Porém, nem

todas as memórias são armazenadas para longa duração (BEAR; CONNORS;

PARADISO, 2002).

A memória de trabalho depende da atividade elétrica de neurônios, do

córtex pré-frontal, localizado na frente da área motora, e não persiste, além disso.

Quando cessa a ativação dos neurônios pré-frontais, a memória de trabalho

também cessa.

Para Izquierdo (2004), os neurônios são ativados por substâncias químicas,

mas emitem suas mensagens através de atividade elétrica. Os neurônios do córtex

pré-frontal se ativam em resposta às experiências de cada momento, e sua

estimulação dura enquanto dura a experiência; somente às vezes persiste um

pouco mais.

Os neurônios têm prolongamentos, às vezes, de vários centímetros, através

dos quais estabelecem redes, comunicando-se uns com os outros. Os

prolongamentos que emitem informação em forma de sinais elétricos a outros

neurônios são denominados axônios. Os prolongamentos sobre os quais os

axônios colocam essa informação chamam-se dendritos. A transferência de

informação dos axônios para os dendritos é feita por substâncias químicas

produzidas nas terminações dos axônios, denominadas neurotransmissores. Os

pontos onde as terminações axônicas mais se aproximam dos dendritos chamam-

se sinapses (Figura 7), e são os pontos reais de intercomunicação de umas células

nervosas com as outras. Do lado dendrítico, nas sinapses, há proteínas específicas

para cada neurotransmissor, chamadas receptores. Existem muitos

neurotransmissores e muitos receptores diferentes, envolvidos nos processos de

memória. Os neurônios “recebem” terminações de axônios de muitos outros

neurônios; às vezes, tanto como 10.000 ou 100.000. Mas emitem um axônio só,

que se ramifica, no máximo, 10 ou 20 vezes. Recebem informação de muitos outros

neurônios, mas a retransmitem para uns poucos (IZQUIERDO, 2004).

Figura 7: Sinapse química. Fonte: Maio (2002)

Os receptores com os quais os neurotransmissores interagem podem ser

excitatórios ou inibitórios. Os excitatórios diminuem transitoriamente a diferença de

potencial entre o líquido interior dos neurônios e o meio que os rodeia. Os inibitórios

os produzem o efeito contrário; aumentam esse potencial. Para que um neurônio

possa produzir potenciais de ação e, assim, comunicar-se com os seguintes, ele

precisa ser despolarizado até certo nível, chamado limiar. Os efeitos excitatórios e

inibitórios das interações entre os neurotransmissores e seus receptores costumam

ser exercidos através do fluxo de íons para o interior da célula ou do interior da

célula para fora. A entrada de íons positivos ou cátions (sódio, cálcio) reduz a

diferença de potencial entre o interior e exterior da célula, que é negativo. A entrada

de íons negativos ou ânions (cloro), ou a saída de cátions (potássio) produz um

efeito contrário (IZQUIERDO, 2002).

Os axônios que liberam um ou outro tipo de neurotransmissor e os

receptores a estes existentes nos dendritos costumam ser denominados segundo o

nome do neurotransmissor: assim, os axônios que liberam glutamato (o principal

neurotransmissor excitatório) e seus receptores correspondentes são denominados

glutamatérgicos. O principal neurotransmissor inibitório é chamado GABA (gamma-

amino-butyric – ácido gama amino butírico); os axônios que o liberam e os

receptores aos quais se liga são denominados GABAérgicos (IZQUIERDO, 2002).

O glutamato é o neurotransmissor excitatório mais importante no sistema

nervoso central - SNC. O glutamato atua através da ligação a proteínas receptoras

específicas, os receptores glutamatérgicos. Estes podem ser divididos em dois

grandes grupos, de acordo com suas estruturas e mecanismos de ação: os

receptores ionotrópicos estão associados a canais iônicos e, quando ativados,

permitem a entrada de cátions na célula, causando uma despolarização de

membrana neuronal. Os receptores metabotrópicos (mGluRs) estão associados a

proteínas G, agindo através de sinalização intracelular. Os receptores ionotrópicos

são subdivididos em receptores NMDA (Figura 8), AMPA e cainato. Os receptores

NMDA são associados a canais iônicos com grande permeabilidade a íons Ca

. No

potencial de repouso, os receptores NMDA permanecem bloqueados de forma

dependente de voltagem por íons Mg

. Para que os receptores sejam ativados, é

necessário que haja uma despolarização de membrana que cause a remoção do

, e ligação de duas moléculas do agonista endógeno glutamato e do co-

agonista glicina a sítios específicos (ASCHER; JOHNSON, 1994; GASIC;

HOLLMAN, 1992; SEEBURG et al., 1994; SUCHER et al., 1996).

Figura 8: Receptor de NMDA. Fonte: Scientific American (2004).

O sinal para a indução da LTP é um rápido aumento na concentração

intracelular de Ca

na porção pós-sináptica. Na camada CA1 do hipocampo (Figura

9), esse aumento é resultado da ativação de receptores NMDA. A entrada de Ca

através do canal iônico associado ao receptor NMDA, estimula a liberação de Ca

do retículo endoplasmático, amplificando o sinal (BLISS; COLLINGRIDGE, 1993).

Em algumas áreas do SNC, a indução da LTP pode ocorrer sem a necessidade da

ativação de receptores NMDA (NICOLL; MALENKA, 1995).

A indução da LTP dependente de NMDA pode ser bloqueada por

antagonistas do receptor NMDA, como o ácido D-2-amino-5-fosfonopentanóico

(AP5) (BLISS; COLLINGRIDGE, 1993) e a 5-metil-10,11-diidro-5H-dibenzo

[a,d]ciclohepteno-5,10 imina (MK-801), também chamada dizolcipina (COAN et al.,

1987), e pelo antagonista de receptores glutamatérgicos metabotrópicos, o RS--

metil-4-carboxifenil glicina (MCPG) (BASHIR et al., 1993). A manutenção e a

expressão da LTP são bloqueadas pelo 6-ciano-7-nitroquinoxalino-2,3-diona

(CNQX), um antagonista de receptores AMPA (BLISS; COLLINGRIDGE, 1993).

Figura 9: Detalhe do cérebro. Fonte: Cardoso (2002).

Assim como a LTP, os eventos bioquímicos responsáveis pela formação da

memória da tarefa de esquiva inibitória em ratos envolvem, inicialmente, a ativação

no hipocampo de receptores NMDA, AMPA e mGluRs. Após o treino, aumentos nos

níveis das subunidades NMDAR1 do receptor NMDA e GluR1 do receptor AMPA

ocorrem no hipocampo. A administração intracerebroventricular de AP5 bloqueia o

aprendizado do labirinto aquático de Morris, uma tarefa que depende do hipocampo

(MORRIS et al., 1986; MORRIS; DAVIS, 1994). A administração sistêmica de MK-

801 bloqueia a memória de esquiva inibitória em camundongos (MONDADORI;

WEISKRANTZ, 1993) e ratos (QUEVEDO et al., 1997a), e tarefas de memória

espacial e de referência em ratos (CARAMANOS; SHAPIRO, 1994; SHAPIRO;

CARAMANOS, 1990). O bloqueio de receptores NMDA por AP5 impede a aquisição

de condicionamento em ratos (KIM et al., 1991). A infusão intra-hipocampal de AP5

(IZQUIERDO; MEDINA, 1997; IZQUIERDO et al., 1992 1997; JERUSALINSKY et

al., 1992; QUEVEDO et al., 1997b; ROESLER, 1998a, b) ou o bloqueio de mGluRs

pela infusão de MCPG (BIANCHIN et al., 1994), ou ainda o bloqueio de receptores

AMPA por infusões de CNQX três horas após o treino (JERUSALINSKY et al.,

1992), bloqueiam a memória. Na amígdala, infusões de AP5 bloqueiam vários tipos

de condicionamento aversivo (FASELOW; KIM, 1994; IZQUIERDO et al., 1992,

1997; KIM; MCGAUGH, 1992; MAREN et al., 1996; MISERENDINO et al., 1990).

Quando injetado 180 minutos após o treino no córtex entorrinal ou no córtex parietal

posterior, o AP5 bloqueia a memória de esquiva inibitória (IZQUIERDO et al., 1992,

1997). A infusão intra-hipocampal de glutamato, de um agonista de mGluRs

(BIANCHIN et al., 1993) ou a administração de drogas que facilitam a

neurotransmissão mediada por receptores NMDA agindo no sítio da glicina no

receptor (BAXTER et al., 1994; HANDELMANN et al., 1989) facilita a memória em

ratos. Drogas que facilitam a ativação do receptor NMDA agindo no sítio da glicina,

como a d-cicloserina, têm sido estudadas em ensaios clínicos e são candidatas a

agentes terapêuticos no tratamento dos déficits de memória associados à doença

de Alzheimer (DYSKEN et al., 1992; ROESLER et al., 1998c; SCHWARTZ et al.,

1991, 1996).

Em membranas sinápticas extraídas de neurônios da camada CA1 do

hipocampo, ocorre um aumento nos níveis da subunidade NMDAR1 trinta minutos

após o treino, e um aumento nos níveis da subunidade GluR1 que inicia em torno

de trinta minutos após o treino e atinge o seu pico três horas após o treino

(BERNABEU et al., 1997a) . A ligação (binding) de AMPA aos receptores AMPA

aumenta após o treino em membranas sinápticas hipocampais (CAMMAROTA et

al., 1995). Alterações semelhantes ocorrem na LTP (SERGUEEVA et al., 1993;

TOCCO et al., 1992).

A infusão de CNQX no hipocampo, na amígdala ou em áreas corticais

impede a evocação da memória de modo diferenciado ao longo do tempo. Assim,

CNQX injetado no hipocampo e na amígdala bloqueia a evocação da memória de

esquiva inibitória em ratos um dia após o treino, mas não trinta dias após o treino

(BIANCHIN et al., 1993). No entanto, a injeção de CNQX no córtex entorrinal ou no

córtex parietal posterior bloqueia a memória trinta dias após o treino (IZQUIERDO

et al., 1997). Sessenta (IZQUIERDO et al., 1997) ou 90 (ROESLER et al., 1997)

dias após o treino, o CNQX bloqueia a memória apenas se injetado no córtex

parietal posterior. Esses dados indicam que o controle da memória é transferido do

hipocampo para o córtex entorrinal e para o córtex parietal posterior trinta dias após

o treino, o que é consistente com dados de estudos clínicos que mostram uma

duração limitada da amnésia em pacientes com lesões bilaterais do lobo temporal

(CORKIN et al., 1985; MILNER, 1970).

Além dos mecanismos envolvidos diretamente na formação da memória,

esta pode ser modulada pela ação de vários neurotransmissores,

neuromoduladores e hormônios. Entre os sistemas de modulação da memória

estão os receptores GABA, colinérgicos muscarínicos, adrenérgicos, B-

noradrenérgicos, opióides, e glucocorticóides (CAHILL; MCGAUGH, 1996;

IZQUIERDO; MEDINA, 1991; IZQUIERDO et al., 1992; MCGAUGH, 1989;

ROOZENDAALL, MCGAUGH, 1996). A ação de vários neuromoduladores está

relacionada com os aspectos emocionais da memória e é mediada pelos núcleos

medial e basolateral da amígdala (CAHILL; MCGAUGH, 1996; MCGAUGH, 1989;

ROOZENDAAL; MCGAUGH, 1996).

Podemos afirmar que somos aquilo que recordamos, literalmente. Não

podemos fazer aquilo que não sabemos como fazer, nem comunicar nada que

desconhecemos, isto é, nada que não esteja na nossa memória. Não podemos usar

como base para projetar nossos futuros possíveis aquilo que esquecemos ou que

nunca aprendemos. Também não estão à nossa disposição os conhecimentos

inacessíveis, nem formam parte de nós episódios dos quais nos esquecemos ou

pelos quais nunca passamos. O acervo de nossas memórias faz com que cada um

de nós seja o que é, com que sejamos, cada um, um indivíduo, um ser para qual

não existe outro idêntico (IZQUIERDO, 2002).

8 ANSIEDADE

A ansiedade como entidade diagnóstica distinta não foi reconhecida pela

medicina até o final do século passado. Ao contrário, ela era simplesmente

considerada um aspecto comum, mas não causalmente relevante, de condições

médicas como anormalidades cardiopulmonares e gastrintestinais. A maioria dos

médicos via a ansiedade como um traço humano normal que não requeria atenção

específica.

Em 1871, Jacob Da Costa descreveu a “síndrome do coração irritável” como

um transtorno cardíaco mais freqüente, caracterizado por palpitações, síncopes e

dor torácica, síndrome precursora do transtorno do pânico. Freud ressaltou os

papeis fundamentais da ansiedade, elevando-a à categoria de síndrome,

descrevendo o conceito de “neuroses” com a psicopatologia da ansiedade,

distinguindo a ansiedade objetivada do medo, daquela objetivada de conflitos

inconscientes, devido a mecanismos de defesa que fracassaram em sua intenção

de manter o complicado equilíbrio psíquico, dando lugar a sintomas neuróticos

(SANTOS; PÉREZ; BULBENA, 2000),

Da Costa, foi o primeiro a descrever, sintomas cardíacos crônicos sem

causa orgânica aparente. Subseqüentemente: a síndrome do coração irritável ou

síndrome de Da Costa tornou-se um fenômeno freqüentemente observado entre

soldados na Guerra dos Bôers. “Neurastenia” era um termo correlato, usado mais

ou menos na mesma época para pacientes que se queixavam de uma mistura de

exaustão: ansiedade e depressão.

Na virada do século, Sigmund Freud, reconheceu o papel central da

ansiedade nesses transtornos e apresentou os primeiros estudos de casos de

pacientes com neurose de ansiedade. O termo “neurose de ansiedade”,

englobando todos os tipos e graus de ansiedade, continuou sendo usado na

psiquiatria norte-americana até a publicação da terceira edição do Manual

Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais (DSM-III) em 1980. O restante da

medicina tem sido mais lento em adotar o conceito de transtorno de ansiedade

quando move a primazia da ansiedade e não de uma anormalidade fisiológica

(KAPLAN; SADOK, 1999).

A ansiedade foi traduzida de forma errônea quando passaram os escritos de

Freud do alemão para o inglês, onde Freud trabalhava o termo que significava

medo e sua tradução deu origem a uma nova terminologia, que aborda uma

resposta orgânica e comportamental frente a um estímulo não reconhecido ou

inespecífico, de acordo com Gentil; Lotufo-Neto; Bernik (1997).

Além de que a ansiedade, como entidade diagnóstica separada, não foi

reconhecida pela medicina até o final do século XIX. Os pacientes com sintomas de

astenia, ansiedade, depressão, fobias e obsessões eram englobadas com a

denominação de “neurastenia”.

Até 1980, as divergências sobre a natureza da ansiedade produziram

nomenclaturas confusas e idiossincráticas, não apenas dentro da psiquiatria como

também em outras especialidades médicas. Pacientes ansiosos com queixas

primariamente cardiovasculares, mas sem anormalidades orgânicas, recebiam

diagnósticos de coração irritável, taquicardia nervosa e astenia neurocirculatória.

Os pacientes ansiosos com sintomas gastrintestinais proeminentes recebiam o

diagnóstico de síndrome do cólon irritável, mas a coexistência de sintomas

respiratórios e ansiedade virtualmente garantiam o diagnóstico de síndrome de

hiperventilação (KAPLAN; SADOK, 1999).

A ansiedade foi definida como um vago e incômodo sentimento de

desconforto ou temor, acompanhado por uma resposta autonômica, a fonte é

freqüentemente não específica ou desconhecida para o indivíduo, um sentimento

de apreensão causado pela antecipação de perigo. É um sinal variável que alerta

para um perigo iminente e pertinente ao indivíduo, convocando-o a tomar medidas

para lidar com a ameaça (GRAEFF; GUIMARÃES, 2001; KAPLAN; SADOCK;

GREEB, 1997; SCHWEITZER, 1995). Sendo complementado por Gentil, Lofufo-

Neto; Bernik (1997) como um estado emocional vivenciado com a qualidade

subjetiva do medo ou de emoção a ela relacionada [...], (desproporcional) a uma

ameaça reconhecível [...] (com) desconforto somático subjetivo [...] e alterações

somáticas manifestas.

Andrade e Gorenstein (1998) descrevem-na como um estado emocional que

tem componentes psicológicos e fisiológicos, que fazem parte do espectro normal

das experiências humanas, sendo propulsora do desempenho. Ela passa a ser

patológica quando é desproporcional à situação que a desencadeia, ou quando não

existe um objeto específico ao qual s0e direcione.

Segundo os autores, a diversidade de opiniões tornava quase impossível a

pesquisa e a comparação de dados. Influenciados pela psiquiatria nas duas últimas

décadas, os médicos estão lentamente desenvolvendo um consenso em relação à

abordagem ideal a pacientes com transtornos de ansiedade. Em íntima colaboração

com cardiologistas, gastroenterologistas, pneumologistas, endocrinologistas,

neurologistas e urologistas, os pesquisadores da psiquiatria têm revelado

anormalidades biológicas e psicológicas relevantes em pacientes com transtornos

de ansiedade. Pela conscientizarão do público leigo e dos profissionais, o estigma

ligados aos transtornos de ansiedade começou a enfraquecer, e uma proporção

cada vez maior de pacientes ansiosos se beneficia de melhores opções de

tratamento.

Enquanto que Lewis (1979) salienta a existência e os tipos de

manifestações corporais involuntárias mais comuns para esse fenômeno: secura da

boca, sudorese, palpitações, vômitos, arrepios, tremor, dores abdominais e outras

alterações biológicas e bioquímicas detectáveis por métodos apropriados de

investigação e ainda lista outros atributos que podem ser incluídos na descrição da

ansiedade: ser normal ou patológica, ser leve ou grave, ser prejudicial ou benéfica,

ser episódica ou persistente, ter uma causa física ou psicológica, ocorrer sozinha

ou junto com outro transtorno e, afetar ou não a percepção e a memória.

A ansiedade é uma das causas mais comuns que levam os pacientes a

procurar auxílio médico ou psiquiátrico (LAWLOR; LAZARE, 1989). Geralmente

eles apresentam combinações de manifestações somáticas e psíquicas (Tabelas 1

e 2).

Tabela 1: Manifestações Psíquicas da Ansiedade.

Agressividade Apreensão

Desejo de escapar de certas situações Despersonalização

Desrealização Ideação suicida

Impulsividade Irritabilidade

Nervosismo Medo de ficar louco ou fora de si

Medo de perder o controle Medo de morrer

Pânico Prejuízo da atenção/concentração

Preocupações desnecessárias e exageradas Sensação de desassossego, mal estar

Sensação de “estar no limite” Sensação de “estar sempre ligado”

“estimulado”

Sensação de medo de “estar assustado” Sensação de perigo eminente

Tensão

Fonte: Adaptado de Lawlor; Lazare (1998).

Tabela 2: Manifestações Somáticas da Ansiedade.

Cardiovasculares

Aumento da pressão arterial e da freqüência cardíaca/pulso

Palpitações

Extra-sistólicas

Dor/desconforto toráxico

Gastrintestinais

Boca seca

Dificuldade deglutição

Náuseas e vômitos

Diarréia

Alterações do apetite

Desconforto epigástrico

Sensação de “bola na garganta”

Geniturinários

Ausência do número de micções

Hesitação e/ou urgência miccional

Amenorréia

Otoneurológicos

Dor de cabeça

Tonturas

Tremor

Hiper-reflexia

Parestesias

Sensação de instabilidade

Reflexo de sobresalto exagerado

Midríase/visão borrada

Zumbido no ouvido

Perturbações do sono

Insônia de conciliação

Sono entrecortado e/ou pouco repousante

Respiratórios

Sensação de falta de ar/sufocamento

Aumento da freqüência respiratória

Sexuais

Diminuição da libido

Impotência

Ejaculação precoce

Dispareunia

Frigidez

Tensão motora

Tremor

Fasciculações

Tensão muscular

Inquietação

Dor muscular

Sensação de fraqueza

Vasomotores

Extremidades frias

Calafrios e/ou ondas de calor

Rubor

Sudorese

Palidez

Fonte: Adaptado de LAWLOR; LAZARE (1998).

Nardi (1998) afirma que a ansiedade possui seu lado positivo, pois é um

sinal de alerta, que permite ao indivíduo ficar atento a um perigo iminente e tomar

as medidas necessárias para lidar com uma ameaça. Assim sendo, é uma emoção

útil. Afinal, sem ela estaríamos vulneráveis aos perigos e ao desconhecido. É algo

que está presente no desenvolvimento humano normal, nas mudanças e nas

experiências inéditas.

No repertório adaptativo da maior parte dos animais, os mecanismos de

defesa ante situações de perigo têm particular importância. As reações de um

animal quando confrontado com uma ameaça à sua integridade são altamente

estereotipadas na maioria das espécies. Em um ambiente novo, potencialmente

perigoso, os animais apresentam comportamentos de avaliação do risco potencial

e, uma vez definido um perigo real, comportamentos de fuga ou luta contra o

agressor (BLANCHARD et al., 1990; BLANCHARD; BLANCHARD, 1990; GRAEFF,

1990), sendo que essas respostas comportamentais são geralmente

acompanhadas e intensas alterações neurovegetativas e hormonais (GRAEFF,

1989).

Sob esse ponto de vista, a ansiedade pode ser considerada como um

estado emocional subjetivo de apreensão ou tensão que pode ser vivenciada como

desagradável ou ameaçadora, sendo que a ameaça pode ser representada por um

qestímulo que evoca uma resposta inata ou respostas aprendidas (OLTON, 1978).

A ansiedade pode diferenciar-se do medo pelas situações nas quais é

desencadeada. Enquanto o medo seria desencadeado por situações específicas e

evidentes de perigo e ameaça, a ansiedade seria desencadeada por situações

onde o perigo é apenas potencial, vago e obscuro (GRAEFF, 1989).

Diferente das outras desordens psiquiátricas, a ansiedade é uma emoção

normal que serve como uma resposta útil à vigilância, a uma ameaça ou a um

estímulo aversivo, e pode existir tanto na forma de patologia como ser normalmente

vivenciada (NUTT, 1990).

Até um certo ponto, a ansiedade favorece o desempenho de tarefas motoras

e cognitivas e é necessária para um bom desempenho em muitas situações da

vida; entretanto, ela se torna patológica quando a resposta ao estímulo se torna

exagerada, irracional ou perturbadora e interfere com o funcionamento normal do

indivíduo (PRATT, 1992).

Os tratamentos farmacológicos da ansiedade percorrem um longo caminho

desde os primeiros com brometos e barbitúricos até o surgimento de fármacos mais

eficazes e menos tóxicos, como os benzodiazepínicos e outros ansiolíticos

seletivos.

Apesar de conhecer-se de maneira mais ou menos detalhada o modo de

ação desses fármacos ansiolíticos, não se compreende ainda a totalidade de

fenômenos fisiológicos que subjazem às reações de defesa normais ou patológicas

observadas em todas as espécies animais (GRAEFF, 1994). Sabe-se atualmente

que os mecanismos GABAérgicos estão profundamente implicados no controle da

ansiedade.

A ansiedade pode ser considerada normal ou patológica. Esta é uma

decisão arbitrária em que o observador leva em conta o contexto, os

desencadeantes e as características do indivíduo para determinar se as

manifestações são desproporcionais em intensidade, duração e interferência no

desempenho. O termo “transtorno de ansiedade generalizada” (TAG) foi

apresentado pela primeira vez no DSMIII, em 1980. Iniciou-se aí um processo

contínuo de dividir a tradicional categoria de neuroses de ansiedade em grupos

diagnósticos clinicamente significativos.

O TAG é definido na quarta edição revisada do Manual diagnóstico e

estatístico dos transtornos mentais (DSMIV-TR) como ansiedade e preocupação

excessivas, que ocorrem na maioria dos dias, por pelo menos seis meses,

acompanhada de pelo menos três dentre seis sintomas somáticos. A ansiedade é

difícil de ser controlada e causa significativo prejuízo em diferentes áreas de

funcionamento ou marcado sofrimento no paciente. O diagnóstico não é feito se a

ansiedade se deve apenas ao uso de substâncias ou é explicada por outro

transtorno psiquiátrico. Estudos epidemiológicos têm demonstrado uma incidência

anual do TAG que varia entre 3,1% a 3,6% (KAPCZINSKI; SANT'ANNA;

FONSECA, 2003).

A maioria dos clínicos já se depararam com o transtorno da ansiedade

generalizada, no entanto, até o momento foram feitos poucos estudos

neurobiológicos específicos para este transtorno (KAPCZINSKI; SCHIMTT, 2004).

Para os autores, avanços podem ser observados através de:

Neuroanatomia: os avanços recentes nas técnicas de neuroimagem, como o

aprimoramento da tomografia por emissão de pósitrons (PET) e da tomografia

computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), estão permitindo detalhar

áreas cerebrais possivelmente envolvidas no TAG;

Fluxo sanguíneo cerebral regional: pacientes com TAG, em repouso, não

demonstram alterações significativas no fluxo sanguíneo cerebral quando

comparados a controles sadios. No entanto, costumam apresentar fluxo reduzido

quando submetidos a estresse psicológicos aos mesmos controles (NUTT, 2001)

Metabolismo cerebral regional: pacientes com TAG demonstraram taxas

metabólicas nos lobos occipital, temporal e frontal, bem como no cérebro, no tálamo

e nos gânglios da base quando comparados a controles sadios. Em pacientes

deprimidos, o metabolismo cerebral costuma se apresentar diminuído nessas

mesmas áreas (NUTT, 2001). Esses dados sugerem que podem existir circuitos

cerebrais hiperativos no TAG, assim como no transtorno obsessivo compulsivo

(TOC), enquanto na depressão eles se encontram hipoativos. Existem algumas

evidências de que o tálamo esteja envolvido no processo de atenção, o que poderia

explicar a hipervigilância observada no TAG.

Neuroquímica: Os bons resultados obtidos com o tratamento farmacológico

do TAG fez com que se pesquisasse possíveis neurotransmissores envolvidos no

TAG. Há evidências crescentes de alterações em inúmeros sistemas de

neurotransmissores no TAG.

Sistema GABA/Benzodiazepínicos: a conhecida eficácia dos

benzodiazepínicos em reduzir ansiedade levou ao estudo do envolvimento do

sistema gabaérgico no TAG. Existe a hipótese de falha deste sistema, devida à

sensibilidade reduzida dos receptores ou à insuficiência do neurotransmissor.

Estudos recentes com teste de sensibilidade ao diazepam e receptores com

SPECT/PET demonstraram que tanto pacientes com TAG quanto pacientes com

pânico apresentam redução na função dos receptores benzodiazepínicos centrais

(NUTT, 2001; WITTCHEN; HOYER 2001).

Sistema noradrenérgico: o sistema nervoso simpático está implicado na

resposta ao estresse e alguns autores têm investigado alterações em catelolaminas

de pacientes com TAG.

Sistema sertoninérgico; os níveis liquóricos de serotonina em pacientes com

TAG encontram-se diminuídos em relação a controles normais. Em contrapartida,

pacientes com depressão não apresentam alterações significativas (NUTT, 2001).

8.1 Epidemiologia da Ansiedade

Rodrigues (1994) apresenta dados estatísticos de que, em um universo de

mil pessoas temos: quatro entre 18 e 24 anos, sete entre 25 e 44, seis entre 45 e

64 e, apenas uma após 65 anos. Os casos entre jovens têm aumentado muito nos

últimos anos, devido a fatores de cunho social: desintegração da família tradicional,

pressão por empregos, violência e maior exposição a estresses.

Andrade e Gorenstein (1998) trazem os transtornos de ansiedade como a

categoria mais freqüente na população geral dentre os transtornos psiquiátricos,

com prevalência de 12,5% ao longo da vida, 7,6% no ano. Além dos transtornos

serem muito freqüentes, os sintomas de ansiedade estão entre os mais comuns,

podendo ser encontrados em qualquer pessoa em determinados períodos de sua

vida.

Pereira (2001) relata que uma pesquisa realizada pela International Stress

Management Association (ISMA) feita com workholics americanos revela que

pessoas viciadas em trabalho e ansiosas demais apresentam 45% mais chances de

sofrer males cardíacos, 35% de ter câncer pulmonar e 24% de sofrer acidente

vascular encefálico. E, podem ser eficientes no emprego, mas na maioria das vezes

não lidam bem com as emoções.

Os transtornos de ansiedade estão entre os transtornos mais comumentes

observados tanto na população em geral quanto nos serviços de atenção primária à

saúde. Dados do Estudo Epidemiológico por Área de Captação (Epidemiologic

Catchement Área – ECA) nos Estados Unidos, sugerem que cerca de ¾ da

população geral apresentam um ou mais medos irracionais, ataques súbitos de

ansiedade ou nervosismo. No entanto, de acordo com esse estudo, a maioria das

pessoas não preenche critérios de gravidade ou prejuízo pessoal e social

característico dos transtornos de ansiedade (LIMA et al., 2004).

9 OBJETIVOS

9.1 Objetivo Geral

Avaliar a ação psicofarmacológica de extratos de Passiflora alata Dryander e

Passiflora edulis Sims na ansiedade e no processo de formação da memória.

9.2 Objetivos Específicos

Avaliar os efeitos dos extratos de Passiflora alata e de Passiflora edulis no

processo de formação da memória.

Avaliar os efeitos dos extratos de Passiflora alata e de Passiflora edulis no

processo da ansiedade.

10 MATERIAIS E MÉTODOS

Animais experimentais: foram utilizados 390 ratos Wistar, machos com 60

dias de vida, pesando de 250 a 300g, procedentes do biotério da Universidade do

Extremo Sul Catarinense – UNESC. Em avaliações estatísticas de comportamento

animal é aconselhável grupos de n = 15. Os animais foram acondicionados em

grupos de cinco animais por caixa, e submetidos a ciclos de claro e escuro de 12

horas (6 às 18 h) com comida e água ad libitum. O ambiente foi mantido com

temperatura em torno de 24ºC.

Foram utilizados neste trabalho três procedimentos para análise de testes

comportamentais: o primeiro, esquiva inibitória (inhibitory avoidance task), modelo

de avaliação de memória aversiva. O segundo, habituação em campo aberto (open-

field task), utilizado para avaliar memória de habituação e o terceiro, labirinto em

cruz elevada (pluz-maze) para a ansiedade.

Nos testes de esquiva inibitória e habituação em campo aberto, foram

utilizadas sessões de treinamento e teste num intervalo de 24 horas. Este, tempo

necessário para que ocorra consolidação da memória (aprendizado) pelos animais.

No teste do labirinto e cruz elevada não é realizado a sessão de treinamento.

Os dados obtidos nos modelos plus-maze e do open-field foram analisados

pelo SEM (erro padrão da média) e por ANOVA (Análise de variância) de uma via

seguido pelo teste de Ducan. No modelo open-field, as diferenças entre o

treinamento e as sessões de teste foram analisadas pelo teste-t student. A análise

dos dados obtidos no teste de esquiva inibitória, por testes não paramétricos,

porque este procedimento envolve contagem de interrupção. As diferenças do

treinamento e teste pelo teste de Wilcoxon. Os valores P menores de 0,05 foram

considerados estatisticamente significativos.

As sessões de testes foram realizadas no período da tarde entre as 14 e 16

horas, para padronização de um período, porque o comportamento pode mudar de

acordo com o ritmo circadiano dos animais. Todos os procedimentos experimentais

foram executados conforme o NIH (National Institutes of Health) utilizando o guia

para o cuidado e uso de animais de laboratório e as recomendações da Sociedade

Brasileira Neurociência e Comportamento (SBNeC) para cuidado de animais Os

procedimentos foram realizados e aprovados em conformidade com o Comitê de

Ética em Pesquisa da UNESC, conforme documento em anexo.

10.1 Testes Comportamentais

10.1.1 Esquiva Inibitória (Inhibitory Avoidance Task)

O aparelho é constituído por uma caixa medindo 50 cm de comprimento

25 cm de largura e 25 cm de altura. Parte do chão é formado por barras paralelas

de metal (1mm de diâmetro). Os espaços entre as barras medem 1 cm. Com uma

plataforma com 7 cm de largura e 2,5 cm de comprimento colocada junto à parede

esquerda do aparelho (ROESLER et al.,, 2003).

Na sessão de treino, o animal é colocado sobre a plataforma e mede-se o

tempo que ele leva para descer com as quatro patas da plataforma. Esse tempo é

denominado “latência”. Imediatamente após descer da plataforma, o animal recebe

um choque de 0,4 mA durante 2 segundos.

Na sessão de teste, o animal é novamente colocado na plataforma e medido

o tempo que ele leva para descer, porém não é administrado choque. A latência é

um parâmetro clássico de formação de memória. Os intervalos entre o treino e o

teste são de 24 horas (IZQUIERDO; GRAUDENZ,1980; QUEVEDO et al., 1997b).

A atividade cognitiva dos animais pode ser mensurada através de testes de

esquiva passiva ou inibitória (step-down), esquiva passiva (step-trough), esquiva

ativa em uma caixa de Skiner e esquiva ativa em uma shutthe box. A resposta de

esquiva pode envolver tarefas como pressionar uma barra, correr em roda, pular

para uma plataforma e transpor diversos tipos de obstáculos (NETTO; IZQUIERDO,

1995).

A tarefa de esquiva inibitória é um dos mais utilizados e consiste em inibir a

exploração do abiente pelo animal pela aplicação de choques. O aprendizado

consiste em o animal não descer da plataforma. As drogas facilitadoras da memória

fazem com que os animais se mantenham sobre a plataforma (IZQUIERDO;

MEDINA, 1997).

Foram estudados dez grupos com 13 ratos e injetado via intraperitonial:

salina, diazepam (DPZ) 1mg/kg, extrato de Passiflora alata 25mg, 50mg, 100mg e

150mg/kg, extrato de Passiflora edulis 25mg, 50mg, 100mg e 150mg/kg.

10.1.2 Habituação em Campo Aberto (Open-field Task):

Realizado em uma caixa de 40 x 60 cm delimitado por quatro paredes com

50 cm de altura, sendo três de madeira e uma de vidro transparente. O piso do

modelo de habituação em campo aberto é dividido em 12 quadrados iguais

marcados por linhas pretas (VIANNA, 2000).

Na sessão de treino, os animais foram cuidadosamente colocados no

quadrado do canto posterior esquerdo do aparelho, no qual explorará o ambiente

por 5 minutos. Imediatamente após, os animais voltaram para a caixa moradia, as

sessões de teste foram realizadas 24 horas após o treino, na qual repete-se o

procedimento do treino.

É contado quantas vezes o animal cruza a linha preta e coloca as quatro

patas no quadrado seguinte “crossings”, e o número de “reanings” atividade em que

o animal procura levantar-se. Este movimento é relacionado com o objetivo de

exploração e fuga do ambiente (VIANNA, 2000).

A atividade exploratória pode ser analisada pelo modelo do campo aberto

(open-field), utilizado para avaliação de compostos estimulantes ou depressores do

Sistema Nervoso Central, que permite observar como o animal se comporta em

amplo ambiente medindo o seu estado emocional (HO et al., 2002). O aparelho

consiste em um campo aberto cujas dimensões podem variar conforme o tamanho

animal estudado (NAHAS, 1999).

Este tipo de aparelho foi inicialmente proposto por Hall em 1941, para

avaliar o estado emocional de ratos em ambientes não familiares, utilizando como

parâmetros as taxas de ambulação e defecação. A primeira seria aferida pelo

número de setores visitados pelo animal durante o teste e a segunda pelo número

bolotas fecais eliminadas pelo animal.

A imobilidade do animal no campo aberto pode indicar altos níveis de

estresse, e pode ser acompanhadas através de um registro eletroencefalográfico

(EEG), conforme relataram Walsh e Cummins (1976).

Neste experimento são avaliados; a movimentação espontânea entre as

divisões, no centro e na periferia do campo, indicando atividades exploratórias,

sedativas e ansiolíticas; a imobilidade representando o medo e o número de vezes

que o animal levanta-se (reanings) registrados durante cinco minutos, uma hora

após os tratamentos (MONTGOMERY, 1955).

Modelos que detectem a emocionalidade dos animais são pré-requisitos

para se entender e investigar os mecanismos que são base para a ansiedade (OHI

et al.,2001), por esta razão, o campo aberto vem sendo utilizado para avaliação de

drogas ansiolíticas.

Alguns autores diferem no que diz respeito à seleção e análise dos

parâmetros utilizados no teste mencionado (CAROLA et al., 2002). As medidas de

emocionalidade através das taxas de defecação e ambulação, embora sejam

entendidas de diversas maneiras por vários autores, podem ser válidas no sentido

de que estão relacionadas a um grupo de alterações fisiológicas associadas ao

estado emocional, como a freqüência cardíaca e a pressão arterial (NAHAS, 1999).

O teste é simples de ser efetuado, consiste na colocação do animal em

estudo no aparelho sendo a fuga evitada pela parede circundante. Observa-se

então o tipo de movimento, a distancia percorrida, o tempo dispendido, as tentativas

de rearings, as tentativas de fuga, o tempo de imobilização e latência. Além disso, a

autolimpeza (grooming), ato de cheirar, coçar escavar, ranger os dentes,

vocalização e exploração visual, defecação e tempo de digestão, freqüência

cardíaca e respiratória (NAHAS, 1999). O formato do aparelho pode variar, mas o

mais utilizado é o circular (STEIN; et al., 1994). As características externas ao

campo aberto podem influenciar o comportamento do animal, e variam conforme o

grau de estresse que o pesquisador quer provocar.

Uma evolução do teste do campo aberto é a introdução ou retirada de

estímulos que permite avaliar a reação do animal à novidade. Coloca-se o animal

no campo aberto para livre exploração, introduz-se um novo estímulo, habitua-se a

esse estímulo e depois o retira, e observa-se a capacidade do animal em detectar a

diferença (NAHAS, 1999).

Foram estudados dez grupos com 13 ratos: salina 1mg/kg, diazepam

1mg/kg, extrato de Passiflora alata 25mg, 50mg, 100mg e 150mg/kg, extrato de

Passiflora edulis 25mg, 50mg, 100mg e 150mg/kg.

10.1.3 Modelo do Labirinto em Cruz Elevada (pluz-maze)

O labirinto em cruz elevada (LCE) é um método validado para explorar as

bases neurobiológicas da ansiedade (TORRES; ESCARABAJAL, 2002). Segundo

Carola et al. (2002), esse modelo e o campo aberto são rotineiramente utilizados

para o estudo da ansiedade em animais, contudo, os resultados têm sido

contraditórios, provavelmente devido às diferenças na análise e seleção dos

parâmetros comportamentais. Este modelo com o hole-board permite medidas

independentes de locomoção, exploração e ansiedade em animais de laboratório

(STEENBERGEN et al., 1991).

O aparelho consiste de dois braços abertos e dois fechados em forma de

cruz grega, os braços são conectados por uma área central, o chão deve ser preto

e as paredes de acrílico transparente e o aparelho deve estar a uma altura de

45 cm do chão. Durante o procedimento, os animais são colocados primeiramente

no campo aberto, por cinco minutos, e depois transferidos para o LCE (os dois

aparelhos devem em sala com luz vermelha).

O animal deve ser colocado na área central voltado para um dos braços

fechados para observação durante cinco minutos (HO et al., 2002). Através da

observação, deve-se anotar quanto tempo o animal permanece nos braços

fechados e abertos, bem como a freqüência de entrada neles. Posteriormente, é

feita uma análise estatística, dividindo-se a freqüência das entradas nos braços

abertos pelo total de entradas, expressando os resultados em porcentagem de

entradas no braço aberto. Procede-se da mesma maneira para calcular o tempo

gasto pelo animal em ambos os braços. São medidos também os números de

vezes que o animal levanta e emerge a cabeça (rearings e head-dippings) e

posturas de estiramento que avaliam respectivamente a atividade exploratória e

atividade ansiolítica (FILE; PELLOW, 1985).

Os resultados obtidos no LCE demonstram as diferenças individuais de

ansiedade e podem ser previstos em outros modelos de ansiedade, mas não em

testes de esforço e natação (HO et al., 2002).

O tempo de permanência na área central do aparelho evidencia uma medida

do poder de tomada de decisão e as entradas nos braços abertos e fechados

demonstram efeito ansiolítico e atividade motora, respectivamente (RODGERS et

al., 1997).

Foram estudados dez grupos com 13 ratos: salina 1mg/kg, diazepam

1mg/kg, extrato de Passiflora alata 25mg, 50mg, 100mg e 150mg/kg, extrato de

Passiflora edulis 25mg, 50mg, 100mg e 150mg/kg.

11 RESULTADOS

Os ansiolíticos são medicamentos usados no tratamento sintomático da

ansiedade e tensão resultantes do stress, dos fatores emocionais e em estados

psiconeuróticos caracterizados por tensão, ansiedade, apreensão, fadiga e

sintomas de agitação (BATISTUZZO, 2002).

O diazepam e um fármaco ansiolítico clássico, usado no tratamento da

ansiedade e sono, porém apresentam efeitos colaterais como dependência,

tolerância, problemas locomotores e amnésia.

Neste trabalho foi comparado os efeitos psicofarmacológicos de extratos de

P. alata e P. edulis em concentrações de 25, 50, 100 e 150 mg/kg, salina e

diazepam 1mg/kg na ansiedade e memória em ratos Wistar. Os modelos utilizados

para análise de testes comportamentais foram: esquiva inibitória (inhibitory

avoidance task), modelo de avaliação de memória aversiva; habituação em campo

aberto (open-field task) utilizado para avaliar memória de habituação; e labirinto em

cruz elevada (plus-maze) para avaliar ansiedade (Figuras 10 a 19).

P. alata

Open arms Closed arms Total of entries

Nunber of entrie

Saline

25 mg/kg

50 mg/kg

100 mg/kg

150 mg/kg

DZP

Figura 10: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze). Entradas nos braços

abertos e fechados, comparando salina, DZP e P. alata.

P. alata

100

150

200

250

Open arms Closed arms

Time spent (s)

Saline

25 mg/kg

50 mg/kg

100 mg/kg

150 mg/kg

DZP

Figura 11: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze). Tempo despendido

nos braços abertos e fechados. Comparando salina, DZP e P. alata.

P. edulis

Open arms Closed arms Total of entries

Nunber of entrie

Saline

25 mg/kg

50 mg/kg

100 mg/kg

150 mg/kg

DZP

Figura 12: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze). Entradas nos braços

abertos e fechados. Comparando salina, DZP e P. edulis.

P. edulis

100

150

200

250

Open arms Closed arms

Time spent (s)

Saline

25 mg/kg

50 mg/kg

100 mg/kg

150 mg/kg

DZP

Figura 13: Modelo do labirinto em cruz elevada (plus-maze).Tempo despendido nos

braços abertos e fechados. Comparando salina, DZP e P. edulis.

Inhibitory Avoidance Task

Saline 25mg 50mg 100mg 150mg DZP

Seconds

Training

Test

Passiflora alata

Figura 14: Esquiva inibitória. Latência, comparando salina, DZP e P. alata, após as

sessões de treinamento e teste.

Inhibitory Avoidance Task

Saline 25mg 50mg 100mg 150mg DZP

Seconds

Training

Test

Passiflora edulis

Figura 15: Esquiva inibitória. Latência, comparando salina, DZP e P. edulis, após

as sessões de treinamento e teste.

Crossings

Salina 25 mg/kg 50 mg/kg 100 mg/kg 150 mg/kg Diazepam

Number of Crossings

Training

Test

Passiflora alata

Figura 16: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Crossings, comparando

salina, DZP e P. alata, após as sessões de treinamento e teste.

Rearings

Salina 25 mg/kg 50 mg/kg 100 mg/kg 150 mg/kg Diazepam

Number of rearings

Training

Test

Passiflora alata

Figura 17: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Rearings, comparando

salina, DZP e P. alata, após as sessões de treinamento e teste.

Crossings

Salina 25 mg/kg 50 mg/kg 100 mg/kg 150 mg/kg Diazepam

Number of Crossings

Training

Test

Passiflora edulis

Figura 18: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Crossings, comparando

salina, DZP e P. edulis, após as sessões de treinamento e teste.

Rearings

Salina 25 mg/kg 50 mg/kg 100 mg/kg 150 mg/kg Diazepam

Number of rearings

Training

Tes t

Passiflora edulis

Figura 19: Habituação em campo aberto (Open-field Task). Rearings, comparando

salina, DZP e P. edulis, após as sessões de treinamento e teste.

Deste trabalho foi realizado em artigo e submetido ao peródico Fitoterapia

em agosto de 2006, com o título e autores abaixo.

Behavioral evaluation of aqueous extracts from P. alata and P. edulis

leaves in rats.

P.R. Barbosa1, F.H. Reginatto2, R.A. Machado1, S.S. Valvassori1, C.L.

Bordignon Júnior2, V.D. Kappel2, M.R. Martins1, J. Quevedo1.

1 - Laboratório de Neurociências, Universidade do Extremo Sul Catarinense.

2 - Laboratório de Farmacognosia, Universidade de Passo Fundo.

12 DISCUSSÃO

Atualmente, o chá das folhas de espécies de Passiflora é amplamente

utilizado em paízes da Europa e da América do Sul. No Brasil, a P. alata é uma

planta oficial da Farmacopéia Brasileira (1977), e numerosas aplicações

terapêuticas do uso de suas folhas são documentadas (PEREIRA; VILEGAS,

2000). Estas incluem o tratamento de irritação do sistema respiratório, ansiedade e

insônia.

Mais recentemente, os efeitos ansiolíticos dos extratos hidroalcóolico e

aquoso de folhas de P. alata e P. edulis foram também demonstrados por Petry et

al,. (2001) e Paris et al,. (2002), respectivamente.

No teste do labirinto em cruz elevada, modelo para avaliar ansiedade, não

foi observado aumento significativo do número de entradas nos braços abertos e

fechados entre os grupos tratados com P. alata comparados a salina (Figura 10).

Entretanto, o grupo tratado com diazepam apresentou um aumento estatisticamente

significativo, no número de entrada no braço aberto e um decréscimo de entrada no

braço fechado. (p<0,05).

Os grupos tratados com extrato de P. alata ou diazepam não demonstraram

alterações significativas, em relação ao total das entradas, tanto nos braços

fechados como abertos, em relação ao grupo controle (Figura 10).

O tempo despendido nos braços abertos foi significante nos animais

tratados com P. alata (100 e 150 mg/kg) ou DZP e apresenta uma diminuição

também significativa, nos braços fechados, nos grupos que receberam P. alata (50,

100 e 150 mg/kg) ou DZP quando comparado ao grupo controle (Figura 11).

Os animais tratados com P. edulis (50, 100 ou 150 mg/kg) ou DZP

apresentaram um aumento estatisticamente significativo no número das entradas

nos braços abertos, comparados a salina (Figura 12).

Nas entradas nos braços fechados apenas o grupo tratados com DZP

mostrou uma diminuição significativa. Não houve alterações em relação ao número

total das entradas, quando comparados os grupos tratados com P. edulis (25,

50,100 e 150 mg/kg) ou DZP com o grupo controle (Figura 12).

Os animais que receberam extratos de P. edulis (50, 100 e 150 mg/kg) ou

DZP apresentaram um aumento estatisticamente significativo no tempo de

permanência nos braços abertos em comparação com a salina (Figura 13).

Em relação ao tempo de permanência nos braços fechados, observou-se

que os animais que utilizaram DZP ou P. edulis nas concentrações (25, 50,100 e

150 mg/kg) apresentaram uma diminuição significativa em comparação ao grupo

controle (Figura 13).

No teste da esquiva inibitória, nenhuma diferença significativa foi constatada

nos grupos tratados com P. alata, nas concentrações de 25, 50, 100 e 150 mg/kg

(Figura 14), ou os grupos tratados com P. edulis nas concentrações de 25, 50, 100

e 150 mg/kg (Figura 15), quando comparado com o grupo controle. Nas sessões de

treinamento e teste, usando como parâmetro o tempo de latência.

Verificou-se, no entanto, uma diminuição estatisticamente significativa, no

tempo de permanência na plataforma, no grupo tratado com DZP em relação ao

controle, nas sessões de treinamento e teste (Figuras 14 e 15).

No modelo campo aberto, nenhuma diferença significativa foi observada no

número dos cruzamentos (crossings), e nos números de vezes que o animal

levantou-se (rearings) durante a sessão de treinamento e teste em todos os grupos

tratados com o P. alata (Figuras 16 e 17, respectivamente) ou o P. edulis (Figuras

18 e 19, respectivamente) comparado a salina. Entretanto, com o grupo tratado

com DZP foi percebido diferença significativa em ambos os parâmetros durante a

sessão do teste comparada ao controle. Na sessão do treinamento, nenhuma

diferença foi observada entre grupos.

Estudos adicionais devem ser realizados para determinar as concentrações

adequadas, juntamente com a via de administração. Para obter os mesmos

resultados observados em ratos Wistar, em seres humanos.

Verificar qual o composto ou os compostos do Passiflora e o mecanismo de

ação capaz de produzir o efeito ansiolítico.

Verificar qual o composto do Passiflora edulis e qual a sua concentração

ideal no ser humano, que favorece a formação da memória e seu mecanismo.

13 CONCLUSÃO

O teste plus-maze é um teste pré-clínico que se usa geralmente procurando

novos agentes com características ansiolíticas (PELLOW, 1985; PELLOW; FILE,

1986; KURIBARA et al., 1998). Um aumento no tempo gasto nos braços abertos é

usado geralmente como índices para agentes ansiolíticos.

P. alata em doses de 100 e 150 mg/kg e de P. edulis em doses de 50, 100 e

150 mg/kg mostraram efeito ansiolítico como o diazepam, um fármaco ansiolítico

clássica, de acordo ao modelo de cruz elevada. Estes resultados são consistentes

com os relatórios precedentes (SPERONI; MINGHETTI, 1988).

Foi demonstrado que extratos de P. alata e P. edulis, em toda as dosagens

estudadas, não interferem na formação da memória aversiva e de habituação,

avaliada nos testes de esquiva inibitória e do braço aberto, respectivamente.

Neste sentido o diazepam diminuiu a formação da memória aversiva e de

habituação, demonstrando sua capacidade amnésica.

Diversos compostos isolados de Passiflora spp. foram sugeridos como o

principal ou principais responsável para os efeitos ansiolíticos, tais como

flavonóides (como o apigenina, o vitexina, o campferol, o homorientina, o crisina),

os alcalóides do harmane (harmano, harmalina, harmalol) e os derivados de pirona

(maltol), mas até agora, os princípios ativos não foram identificados ainda

(DHAWAN et al., 2001; SOULIMANI et al., 1997; SPERONI et al., 1996) parecem,

entretanto, os elementos mais prováveis desse grupo possam ser dos flavonóides

(DHAWAN et al., 2001; SPERONI et al, 1996a)

Extratos de hidroetanol de P edulis e P. alata foram comparados a respeito

do índice e da atividade ansiolítica dos flavonóides (PETRY et al., 2001): P edulis

teve perto da concentração dobrada dos flavonóides e foi duas vezes tão ativo

quando comparado com P. alata.

Em relatório anterior, Soleimani e colaboradores não observaram as

atividades ansiolíticas de extrato padronizado de P. incarnata usando o flumazenil,

um antagonista conhecido dos receptores de benzodiazepínicos (SOULIMANI et al.,

1997), sugerindo que os efeitos de P. incarnata não estão mediados com uma ação

nos receptores de benzodiazepínicos/GABA.

Estes resultados podem ser relacionados à falta dos efeitos do P. alata . e

do P. edulis na formação da memória neste estudo. Em resumo, foi demonstrado

que P. alata e P. edulis mostraram um efeito ansiolítico como o diazepam sem

efeitos colaterais na memória.

13.1 Toxicidade em Doses Elevadas dos Extratos de Folha de P.

alata e de P. edulis

Doses elevadas em extrato bruto de folhas de P. alata (acima de 400 mg/kg,

i.p.) foram relatadas como letais por provocarem depressão profunda do SNC em

camundongos (OGA et al., 1984). Segundo estes autores, o valor estimado da DL

foi de 456 mg/kg.

Além disso, a hepatoxicidade e efeitos tóxicos no pâncreas foram

demonstrados em roedores e em humanos com a administração de extrato aquoso

de P. edulis (MALUF et al., 1991).

Contudo, Amaral et al. (2001) demonstraram ausência de toxidade

reprodutiva em roedores com o tratamento oral de 800 mg/kg tanto para o extrato

de folhas de P. alata como para o extrato de folhas de P. edulis.

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ANEXOS

ANEXO A: Estruturas Químicas das Classes de Polifenóis.

Fonte: RUDNICK (2005)

ANEXO B: Estruturas Químicas das Classes de Flavonóides

Fonte: RUDNICK (2005)

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