( PDF ) Estudo da atividade anti-inflamatória de Ricinus communis (Euphorbiaceae)

Download PDF

ads:

UNIVERSIDADE DO SAGRADO CORAÇÃO

ESTUDO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATÓRIA DE Ricinus communis

(EUPHORBIACEAE)

ADRIANA CRISTINA VALDERRAMAS

BAURU

2006

ads:

Livros Grátis

http://www.livrosgratis.com.br

Milhares de livros grátis para download.

UNIVERSIDADE DO SAGRADO CORAÇÃO

ADRIANA CRISTINA VALDERRAMAS

ESTUDO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATÓRIA DE Ricinus communis

(EUPHORBIACEAE)

BAURU

2006

Dissertação apresentada à Pró-reitoria de

Pesquisa e Pós-graduação da Universidade do

Sagrado Coração, como parte integrante dos

requisitos para obtenção do título de mestre no

Programa de Mestrado em Biologia Oral.

Área de Concentração: Fisiologia Oral

Orientador(a): Prof.ª Dr.ª Ana Claudia Bensuaski

P. Zurron

Co-orientador(a): Prof.ª Dr.ª Silvana Pasetto

ads:

DEDICATÓRIA

A DEUS

“[...] Se fez presente em todos os momentos firmes e trêmulos. E, passo a passo, pude sentir a

Sua mão na minha, transmitindo-me a segurança necessária para enfrentar meu caminho[...]

Sua presença é qualquer coisa como a luz e a vida, e sinto que, em meu gesto existe o Seu

gesto e, em minha voz, a Sua voz”.

(Vinícius de Moraes )

AOS MEUS PAIS

Ruy e Lina

“A vocês, que me deram a vida e me ensinaram a vivê-la com dignidade e deslumbrar nossos

sonhos, singelos frutos de vosso amor, não bastaria um obrigado.

Presentearam-me com a riqueza do estudo e fizeram de mim não apenas profissional, mas

sobretudo ser humano.

“A vocês, que iluminaram meus caminhos repletos de obstáculos, incentivando-me a

prosseguir sem medo e com esperança, não bastaria um muito obrigado.

“A vocês, que se doaram inteiros para que hoje eu realize esse sonho, não bastam palavras

para expressar meu mais sincero agradecimento.

“A vocês, queridos pais, a emoção me cala, ficando a certeza de que hoje lhes ofereço essa

vitória, pois tudo o que tenho feito é receber.”

A MINHA ORIENTADORA

Prof. Dr.ª Ana Claudia Bensuaski P. Zurron

“A imortalidade de que se reveste a alma humana faz o homem sempre presente, presente pela

cultura que transmite, presente pelo exemplo que legou”. A você, que mais do que orientar

meu estudo, foi capaz de tornar-se minha amiga, fez-se presente de tal forma que transmitiu

além dos ensinamentos, palavras de fé e esperança diante dos obstáculos que enfrentei em

meu caminho. A você, meu respeito, afeto e eterna gratidão”.

AO MEU IRMÃO E MINHA IRMÃ

Paulo e Silvana

Meus sinceros agradecimentos pelo apoio em todos os momentos importantes de minha vida,

pelo incentivo, pelos ensinamentos, conselhos e pela sincera amizade.

AO PROFESSOR E AMIGO

Prof. Dr. Dejair Caetano do Nascimento

Por tudo que me ensinou durante o período que fiz estágio-docência em uma das disciplinas

ministradas por ele no curso de Farmácia. Pela generosidade, paciência, pela amizade, por

estar sempre disposto a ajudar, com muita atenção e carinho. Meus sinceros e eternos

agradecimentos.

AGRADECIMENTOS

“O tempo e a distância jamais poderão apagar

de nossos corações, a lembrança daqueles

que souberam conquistar a nossa amizade”

- A minha co-orientadora Profª Silvana Pasetto, sempre presente no decorrer do trabalho. Sou

grata não só pelos ensinamentos transmitidos, mas também pela sua amizade. Tenha certeza

de que com sua participação, esse trabalho tornou-se ainda mais completo. Meu muito

obrigada pela sua valiosa ajuda.

- Agradeço ao setor de Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-graduação, PRPPG, às secretárias e

funcionários pela ajuda e informação em todos os momentos, e em especial ao Dr. Sérgio

Augusto Catanzaro Guimarães, pela grande colaboração e atenção prestada no decorrer do

curso.

- Ao companheiro de trabalho do biotério, Sérgio Henrique Pereira Moura, pela colaboração

nos experimentos com animais e principalmente durante o tratamento crônico.

- Ao companheiro de laboratório e amigo, Wilson Orsini, do laboratório de Biologia

molecular, por toda a colaboração e imensa ajuda aos alunos que passam por lá.

- Agradeço a todos os professores do nosso curso, pelos ensinamentos que fizeram parte da

minha formação em mestre em Biologia oral.

- A funcionária Maira Cristina R. Couto , do Laboratório de Histologia, responsável pela

confecção das lâminas utilizadas no trabalho, pela sua competência, excelente trabalho, sendo

sempre atenciosa e disposta a ajudar, meu muito obrigada.

- Aos amigos Gisele, Nilva, Aline, Rodrigo, André, Cristiane, Fábio, Claudia e Ísidra, pelo

companheirismo, pela amizade e troca de conhecimentos durante o curso.

- À bibliotecária Danielle Pinheiro pela valiosa ajuda na confecção deste trabalho.

RESUMO

O interesse pela pesquisa relacionada com plantas medicinais tem crescido muito nos últimos

anos. Baseado neste fato, as plantas medicinais são consideradas fontes para novos

medicamentos obtidos de produtos naturais. A espécie de planta Ricinus communis L.

(Euphorbiaceae) tem em sua composição química o ácido ricinoléico, um ácido graxo

essencial derivado do “óleo de castor” que tem ação bactericida e que apresenta um

mecanismo de ação relacionado à função citolítica. Também é descrito que o “óleo de castor”

apresenta um mecanismo de ação cicatricial no tratamento de feridas infectadas, assim como

também apresenta-se como um coadjuvante no tratamento antibacteriano. O “óleo de castor”

apresenta ações biológicas e farmacológicas ligadas à cicatrização e contra a ação de

microorganismos. Desta forma, nosso estudo avaliou a atividade anti-inflamatória crônica e

aguda de Ricinus communis em modelos animais. Ainda foi estudado o mecanismo de ação

de R. communis em testes de atividade anti-inflamatória. Finalmente foram realizados testes

de toxicidade aguda em camundongos.Nos testes do edema de orelha de camundongo, R.

communis (aplicado topicamente) mostrou um significativo efeito anti-inflamatório (p<0,001)

inibindo a inflamação em 75%. Já nos ensaios de formação de tecido granulomatoso, R.

communis mostrou seu efeito anti-inflamatório crônico, inibindo a inflamação em 62%

(p<0,001). A administração oral do polímero de R. communis inibiu 72% da inflamação

induzida por formalina (p<0,001). Em experimentos “in vitro” a enzima fosfolipase A2 do

processo inflamatório foi inibida por R. communis de maneira dose-dependente.Nos

experimentos de cicatrização de úlceras da mucosa oral induzida por NaOH 40%, R.

communis apresentou uma significativa atividade cicatrizante de aproximadamente 60%

(p<0,05).

Palavras-chave: inflamação, plantas medicinais, fosfolipase A2, ratos, Ricinus communis.

ABSTRACT

The interest for the research related to medicinal plants has been growing in the last years.

Based on this fact, the medicinal plants have been considered source for new drugs obtained

from natural products.The species of plant Ricinus communis, (Euphorbiaceae), has in its

chemical composition the ricinoléic acid, an essential fatty acid derived from “castor oil”. This

component has bactericidal action and its action mechanism is related to the citolitic function.

It is also described that the castor oil presents a healing mechanism in the treatment of

infected wounds, and also as an accomplice in antibacterial treatment.The castor oil plant

presents biological and pharmacological action linked to the healing and against the

microorganism action. Thereby our study evaluated the chronic and acute anti-inflammatory

activity of the Ricinus communis in animal models. It was also studied the action mechanism

of the R. communis in tests “in vitro” of anti-inflammatory activity. Finally tests of acute

toxicity were carried out in mice.In the test of the mouse ear edema, R. communis (topical

applied) showed a significant anti-inflammatory effect inhibiting the inflammation in 75% (p

< 0.001). In the “cotton pellet” model, R. communis presented a chronic anti-inflammatory

effect, inhibiting the inflammation in 62% (p<0.001). The oral administration of the R.

communis inhibited 72% of the inflammation induced by formaline (p < 0.001). In

experiments “in vitro”, the phospholipase A2 enzyme was also inhibited by the R. communis

in a dose dependent manner.In the experiments of oral mucosal ulcers healing induced by

NaOH 40%, the R communis showed a chronic anti-inflammatory effect, with a significant

healing activity of around 60% (p<0.05).

Word-key: inflammation, medicinal plants, phospholipase A2, rats, Ricinus communis.

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO................................................................................................................8

1.1 Plantas medicinais como alternativa terapêutica..........................................................8

1.2 O processo inflamatório e a dor...................................................................................11

1.2.1 Atividade de enzima fosfolipase A2 (PLA2).....................................................14

1.3 Drogas anti-inflamatórias não esteroidais (DAINES).................................................16

1.4 A inflamação da mucosa oral......................................................................................19

2 OBJETIVOS....................................................................................................................22

3 MATERIAL E MÉTODOS............................................................................................23

3.1 Planta utilizada.............................................................................................................23

3.2 Animais........................................................................................................................24

3.2.1 Toxicidade aguda em camundongos......................................................................24

3.3 Modelos de inflamação................................................................................................24

3.3.1 Edema de orelha de camundongo..........................................................................24

3.3.2 Formação de tecido granulomatoso (granuloma cotton pellet)..............................26

3.3.3 Edema de pata de camundongo induzido por formalina........................................27

3.3.4 Atividade fosfolipásica...........................................................................................27

3.3.5 Efeito do polímero de Ricinus communis em lesões ulceradas da mucosa bucal de

camundongos.........................................................................................................28

4 ANALISE ESTATÍSTICA..............................................................................................29

5 RESULTADOS................................................................................................................30

6 DISCUSSÃO....................................................................................................................40

7 CONCLUSÕES...............................................................................................................45

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS......................................................................46 - 54

1 INTRODUÇÃO

1.1. Plantas Medicinais como Alternativa Terapêutica

O uso de produtos naturais no tratamento de doenças é um hábito que é explicado, por

acreditar que as plantas medicinais apresentam propriedades terapêuticas, com pequeno ou

nenhum efeito colateral no organismo e com baixo custo (JORGE et al., 2004).

É conhecido que muitos compostos derivados de plantas apresentam efeito anti-

inflamatório; por esta razão, esses compostos representam moléculas em potencial para o

desenvolvimento de novas drogas, especialmente designados para o tratamento e/ou controle

de doenças anti-inflamatórias crônicas como reumatismo, asma, doença inflamatória

intestinal, arteriosclerose entre outras (CALIXTO et al., 2004).

Mesmo com o grande desenvolvimento de drogas obtidas por síntese orgânica, os

produtos naturais continuam desempenhando um papel de destaque na saúde pública. Mais de

25% dos medicamentos em uso são derivados naturais ou produtos semi-sintéticos de origem

natural. O uso popular de plantas na medicina tradicional é uma valiosa fonte para a

descoberta de novos agentes terapêuticos. No entanto, o conhecimento popular tem que estar

associado à bioensaios para comprovar a eficácia e a toxicidade dessas plantas para o uso

terapêutico (BOLDI, 2004; CLARDY & WALSH; 2004; KOEHN & CARTER, 2005).

Nos últimos anos houve um grande avanço científico envolvendo estudos químicos e

farmacológicos de plantas medicinais, os quais visam obter novos compostos com

propriedades terapêuticas (CALIXTO et al., 2003). Os mesmos autores relatam que muitos

compostos originados de produtos naturais são usados como matéria prima para o

desenvolvimento de novas drogas pela indústria farmacêutica.

Deste modo, indústrias farmacêuticas movimentam bilhões de dólares envolvendo

vegetais e substâncias extraídas dos mesmos, as quais são utilizadas diretamente como

fármacos ou que servem de base para o desenvolvimento de novos medicamentos (BRISKIN,

2000; CALIXTO, 2000; VAN WIJK, 2000).

O Brasil é o país com a maior diversidade genética vegetal do mundo, contando com

mais de 55.000 espécies catalogadas (DIAS, 1996), dentre muitas espécies, encontra-se

Ricinus communis.

A espécie de planta Ricinus communis L., mais conhecida como mamona ou

carrapateira, é uma planta arbustiva e pertencente à família Euphorbiaceae. Esta planta está

disseminada pelo Brasil, sendo cultivada em regiões tropicais e subtropicais do globo. A

existência de um grande número de variedades dessa planta, encontrada tanto no continente

africano como no asiático, impossibilita qualquer tentativa de se estabelecer sua origem

efetiva (NÓBREGA, 2003), mas sabe-se que tal planta foi trazida ao Brasil pelos portugueses.

Há relatos de que o Brasil hoje produza 82.200 toneladas de sementes de mamona, desse total,

75.700 toneladas são produzidas na Bahia. Ainda Nóbrega em 2003 relatou que o óleo de

mamona, também conhecido no Brasil como óleo de rícino, possui uma versatilidade química

dentro do ramo industrial. Extraído das sementes de um arbusto herbáceo, o óleo da mamona

foi popularmente utilizado no Brasil como laxante e vermífugo. Pelo método de decocção a

partir das folhas de R. communis, o banho tópico é indicado para hemorróidas, no entanto, o

cataplasma das folhas é usado para o tratamento de tumores.

É relatado ainda que o ácido ricinoléico, um ácido graxo essencial derivado do óleo de

mamona, tem também ação bactericida e seu mecanismo de ação está relacionado à função

citolítica. Ele é considerado um solvente ativo da quitina, substância presente na membrana

celular de todo microorganismo (CANDIDO, 2001). Ainda vale ressaltar um mecanismo de

ação cicatricial por parte do óleo de mamona no tratamento de feridas infectadas, associada

como coadjuvante da antibioticoterapia sistêmica.

Sabe-se que o ácido ricinoléico (RA) é um abundante composto químico do óleo de

castor, o qual é responsável pela ação laxativa do mesmo (STEWART et al., 1975 a). O RA

afeta a motilidade intestinal e aumenta a permeabilidade da mucosa gastrointestinal

(PHILLIPS et al., 1965). Entretanto (RA) não tem efeito direto nas preparações de músculo

liso intestinal (STEWART et al., 1975 b) e libera mediadores como PAF (MASCOLO et al.,

1996) e NO (IZZO et al., 1993).

Experimentos preliminares indicaram que o (RA) tem também indicadores de atividade

anti-inflamatória em resposta ao estímulo inflamatório endógeno e exógeno (HOLZER,

1991).

Das sementes de Ricinus communis obtém-se um óleo vegetal, do óleo vegetal por sua

vez, deriva-se um polímero de poliuretano que será nosso objeto de estudo e que atualmente

está sendo amplamente usado na regeneração óssea de diferentes enfermidades, impedindo o

aparecimento de fraturas ósseas (SIMÕES et al, 1999). Segundo os mesmos autores, este

material, pode ser chamada de biopolímero, pois o mesmo tem alta capacidade de interação

com as células do corpo humano e não provoca casos de rejeição.

Um estudo científico feito por ITO em 2003, mostrou que o biomaterial apresenta

propriedade bactericida e fungicida; atividades biológicas importantes para o tratamento de

canais dentários e tratamento de periodondites.

De acordo com CATANZARO-GUIMARÃES (2003), a ação do polímero está realmente

ligada à regeneração óssea. Num processo bioquímico ainda não totalmente explicado, o

organismo substitui o polímero por células ósseas, ou seja, o polímero vai se desmembrando e

o osso cresce no lugar. O mesmo autor usou em suas pesquisas a resina para recobrir defeitos

ósseos do crânio e da face.

1.2 O processo inflamatório e a dor

Os estágios iniciais da inflamação envolvem mudanças locais no fluxo sanguíneo

(vasodilatação, aumentando a permeabilidade das vênulas, extravasamento de fluídos e

formação de edema) combinando a migração de várias células inflamatórias (neutrófilos,

eosinófilos, células dendríticas, mastócitos e linfócitos) no local do tecido injuriado. As

alterações no fluxo sanguíneo são desencadeadas por diferentes mediadores que se originam

do plasma ou de células locais, e este processo pode ser amplificado ou modificado por

produtos liberados das células inflamatórias que migraram para o local da inflamação

(HENSON, 2005). Os mediadores químicos agem juntos ou em sequência, amplificando a

resposta inflamatória inicial e influenciando sua evolução por regular as subseqüentes

respostas vascular e celular (TRACEY & WARREN, 2004).

Os principais mediadores envolvidos nas alterações vasculares são histamina, fator

ativador de plaquetas (PAF), prostaglandinas E (PGE2) e prostaciclinas (PGI2) ou ainda o

sistema de cininas (como a bradicinina), fatores do complemento (C3a e C5a), fatores do

sistema de coagulação e/ou fibrolítico (derivados do plasma) (VANE & BOTTING, 1998;

HENSON, 2005).

A bradicinina é um mediador inflamatório liberado imediatamente após a lesão

tecidual, esta exerce efeito sinérgico sobre as prostaglandinas (PGs) e 5-HT ou serotonina, por

atuar no neurônio simpático pós-ganglionar, causando liberação de ácido araquidônico,

proveniente da membrana fosfolipídica e sua conversão em PG' s (MARKENSON, 1996).

O mesmo autor relata que em relação a 5-HT sabe-se que ela é liberada logo após a

lesão tecidual, através de uma degranulação dos mastócitos e da conseqüente liberação de

histamina e do fator ativador de plaquetas (PAF). Além disso, a 5-HT potencializa a dor

induzida por outros mediadores, atuando em receptores 5-HT

Um outro mediador inflamatório muito estudado é a histamina, que aparece para

intermediar o efeito de outros mediadores. Quando estimulados pela substância P, os

mastócitos degranulam e liberam histamina, que produziria a sensação de dor e ardência local

(MARKENSON, 1996). A interleucina 1 (IL-1) também promove a liberação de histamina,

podendo potencializar seu efeito estimulatório para liberação de PG' s e outros eicosanóides

das células endoteliais (FALUS & MERETEY, 1992).

As PGs são uns dos principais mediadores da inflamação, edema, dor e febre (VANE

& BOTTING, 2003) e são originadas pela oxidação do ácido araquidônico e pela ação das

enzimas ciclooxigenase (COX-1 e COX-2) (VANE & BOTTING, 2003; ROWLEY et al.,

2005). Também vale ressaltar que as prostaglandinas e os leucotrienos exercem um papel

fundamental na gênese da dor e podem ativar diretamente os nociceptores durante condições

inflamatórias (CARVALHO & LEMONICA, 2000).

FERREIRA (1979) já havia constatado que a prostaglandina produzia hiperalgesia; e

que a PGE e a PGI2 hipersensibilizam os nociceptores polimodais das fibras C a estímulos

mecânicos e químicos (CARVALHO, 1990 a,b).

Vários mediadores produzidos ou liberados localmente no tecido danificado ou

inflamado podem ativar as terminações nervosas sensoriais periféricas, podendo agir

diretamente (H

, ATP, glutamato, serotonina, histamina, bradicinina) ou sensibilizando as

terminações nervosas (prostaglandinas, prostaciclina, citocinas como IL 1β, IL 2, IL 6, IL 8,

TNF α) para a ação de outros estímulos. Alguns mediadores que ativam neurônios sensoriais

fazem tanto pela ativação direta nos canais de cálcio (H

, ATP, glutamato) ou pela ação em

receptores acoplados a proteína G ou ainda ativando proteínas quinases (AMPc, Ca

, IP

)

(RITTNER et al., 2005; KELLIE & VASKO, 2005).

Finalmente, o papel dos neutrófilos, que são as primeiras células efetoras a

aparecerem em sítios de inflamação. Além disso, neutrófilos acumulados podem causar dor.

Algumas classes de leucotrienos, células bacterianas ou fragmentos destas, atraem e ativam

neutrófilos que liberam eicosanóides que, por sua vez, desencadeiam o processo inflamatório

(MARKENSON, 1996).

O recrutamento de leucócitos no foco inflamatório é um fenômeno complexo que

depende da natureza do estímulo, dos mediadores quimiotáticos liberados e da expressão de

moléculas de adesão (TEDGUI & MALLAT, 2001; LUSTER et al., 2005). Dentre os fatores

quimiotáticos pode-se citar os quimioatractantes para neutrófilos e eosinófilos que podem ser

derivados de fosfolipídeos de membrana como o leucotrieno (LTB4) e o PAF. Os fatores

quimioatraentes também podem ser protéicos como o fator de necrose tumoral alfa (TNFα),

interleucina 1 e 8 (IL1, IL8), fragmento C5a do complemento e as quimiocinas que são

importantes agentes quimioatraentes para eosinófilos, sendo importantes alvos terapêuticos

em doenças alérgicas e respiratórias (OLIVEIRA & LUKACS, 2003).

BODOLAY et al., 2002 relatam que a migração dos neutrófilos observada no processo

inflamatório é mediada por vários mediadores quimiotáticos, entre eles, as citocinas TNFα,

IL1β tem função principal (BURGER & DAYER, 2002). Por outro lado, IL10 modula a

migração de neutrófilos dentro do exudato inflamatório, inibindo a migração celular

(KOTENKO, 2002).

1.2.1 Atividade da enzima Fosfolipase A2 (PLA2)

As fosfolipases A2 são uma família de enzimas que hidrolisam ligações sn-2 de

fosfolípides produzindo ácidos graxos livres e lisofosfolipídeos. Estas enzimas são detectáveis

em quase todos os tipos celulares, desempenhando papel importante na fisiologia celular

participando do metabolismo e “turn-over” dos fosfolipídeos.

Elas fazem o ciclo de desacilação e reacilação que regula a biossíntese de

fosfolipídeos e protege a membrana celular da peroxidação. As fosfolipases A2 também

produzem precursores da biossíntese de vários lipídeos biologicamente ativos, incluindo os

derivados do metabolismo do ácido araquidônico (eicosanóides) e o fator ativador de

plaquetas (PAF).

A fosfolipase A2 ativada cliva os fosfolípides de membrana de tal modo a liberar o

ácido graxo insaturado que, na membrana celular de mamíferos, é predominantemente o ácido

araquidônico (AA) ou ácido eicosatetraenóico (PAULA et al.,2003).

Figura 1: A cascata da inflamação e a atuação do polímero, DAINES e drogas

corticosteróides.

A mesma autora relata que a hidrólise dos fosfolipídeos mediada por fosfolipase A2

não é a única fonte de ácido araquidônico livre. O fosfatidilinositol é rico em ácido

araquidônico e a ação combinada da fosfolipase C e da diacilglicerollipase libera o ácido

araquidônico a partir desses fosfolipídeos.

Uma vez na forma livre, o ácido araquidônico poderá ser metabolizado por vários

complexos multienzimáticos, incluindo o da ciclo-oxigenase que se caracteriza por formar

compostos cíclicos e o da 5-lipoxigenase que forma compostos não cíclicos, com 3 duplas

ligações conjugadas (grupamento trieno).

Os produtos derivados do metabolismo do ácido araquidônico são conhecidos

coletivamente como eicosanóides.

As interpretações dos efeitos inibidores da fosfolipase A2 são também

profundamente afetadas pelo substrato e o lipídeo. A inibição da PLA2 oferece uma

oportunidade única de estudar o papel dos diferentes mediadores lipídicos, incluindo as

lipoxinas e fator modulador de integrina e do próprio ácido araquidônico na transdução de

sinal e doenças fisiopatológicas (GLASER et al.,1993).

Inibidores específicos da PLA2 têm sido procurados por uma variedade de motivos.

Inibidores competitivos com uma linha de propriedades de especificidade, solubilidade e

permeabilidade são úteis na elaboração do papel metabólico das enzimas no organismo.

Desde que a fosfolipase A2 é conhecida por controlar uma variedade de processos

incluindo a mobilização dos eicosanóides e metabolismo dos fosfolipídeos, estes inibidores da

PLA2 poderiam ser úteis no controle dos processos inflamatórios como artrite reumatóide,

asma e psoríase. A procura por inibidores específicos da PLA2 com propriedades

farmacodinâmicas adequadas tem encontrado sucesso limitado (JAIN et al.,1995).

Baseado nestes estudos, estamos testando a ação de Ricinus communis no estudo in

vitro da inflamação.

1.3 Drogas anti-inflamatórias não esteroidais (DAINES)

As DAINES estão entre as drogas mais prescritas e usadas no mundo. Estas drogas

exercem suas ações através da inibição da ciclooxigenase (COX), a enzima chave que catalisa

a conversão do ácido araquidônico em prostaglandinas e tromboxanos. Apresentam-se como

isoformes COX-1 (constitutivamente expressa nos tecidos) e COX-2 (induzida em células e

tecidos envolvidos com o processo inflamatório) (CARVALHO et al., 2004).

Os mesmos autores relatam que as prostaglandinas estão envolvidas em diversos

processos fisiológicos e patológicos; ainda na maioria dos leitos vasculares, as prostaglandinas

da família E (PGEs) são potentes vasodilatadoras. A PGI2 também é um eficiente

vasodilatador, podendo causar importante hipotensão arterial, enquanto o TXA2 apresenta

potente atividade vasoconstritora. No sangue, as prostaglandinas modulam também a função

plaquetária. A PGE1, PGD2 e a PGI2 são inibidoras da agregação plaquetária, ao passo que o

tromboxano A2 é forte indutor da agregação plaquetária. A PGI2 é sintetizada pelo endotélio

vascular, controlando a adesão de células ao endotélio e a agregação plaquetária, contribuindo

como mecanismo antitrombogênico da parede vascular intacta.

Ainda as DAINES, além de anti-inflamatórios, são analgésicos suaves sendo eficazes

somente contra dor moderada (ARNALDO, 2003). Este efeito analgésico é provavelmente

devido à prevenção da sensibilização do nociceptor, já que reduz a liberação dos mediadores

químicos.

Entretanto, as DAINES compartilham efeitos colaterais indesejáveis. É comum o

relato de que essas drogas tenham a tendência de produzir ulceração gástrica ou intestinal.

De acordo com PAULA et al., (2005), muitos estudos têm mostrado uma severa

redução no fluxo sanguíneo da mucosa gástrica após tratamento com indometacina, um típico

anti-inflamatório não esteroidal que inibe a enzima ciclooxigenase. Como resultado, ocorre

uma diminuição na produção de prostaglandinas e na circulação sanguínea da mucosa

gástrica, favorecendo o aparecimento de úlceras gástricas.

De fato, os efeitos adversos gastrointestinais das DAINES estão associados à

supressão da expressão da COX-1, resultando em lesão gástrica, hemorragia e ulceração.

Há décadas, desde que se conhece a toxicidade das DAINEs (indometacina,

naproxeno, piroxicam, diclofenaco entre outros) sobre a mucosa do tato digestivo, buscou-se

novas drogas anti-inflamatórias com menor toxicidade gastrointestinal (AABAKKEN et al.,

1992; ODDSSON et al., 1990).

No final dos anos 90 surgiram os primeiros trabalhos (FRIESEN et al., 1998)

divulgando o aparecimento de anti-inflamatórios potencialmente desprovidos de toxicidade

gástrica, nos quais se depositou uma enorme esperança (HAWKEY, 1999): os chamados

inibidores seletivos da ciclo-oxigenase 2 (COX-2).

A descoberta das duas iso-enzimas ciclooxigenase (COX-1 e COX-2), levou ao

desenvolvimento de novos medicamentos, os inibidores seletivos da COX-2. Destes, por

muitos anos se esperou menor toxicidade e manutenção da eficácia anti-inflamatória

(STICHTENOTH & FROLICH, 2003); os quais tem demonstrado redução do risco relativo de

efeitos secundários gastrointestinais.

O uso dos coxibs difundiu-se rapidamente e ganharam o estatuto de terapêutica anti-

inflamatória standard (HELIN-SALMIVAARA et al., 2005), apesar do seu elevado custo em

comparação com os anti-inflamatórios não seletivos.

Os estudos divulgados comprovaram o melhor perfil da segurança dos coxibs (YUAN

& HUNT, 2003), em termos de tolerância gastro-intestinal, mas o seu perfil geral de

segurança passou mais recentemente a ser questionado pelo fato de haver indícios de que,

alguns deles, poderiam aumentar o risco de acidentes cardiovasculares (riscos trombóticos e

aumento da pressão arterial (SOWERS et al., 2005)); levando inclusive a empresa produtora a

retirar do mercado mundial o rofecoxib no ano de 2004 (MUKHERJEE et al., 2001;

SOLOMON et al., 2004).

Já no ano de 2005, a retirada do mercado de alguns coxibs induziu incerteza e

insegurança a médicos e doentes. De acordo com os mecanismos de ação que lhes são

atribuídos, e nomeadamente com os efeitos conhecidos dos inibidores seletivos da COX-2 na

fisiopatologia vascular e no balanço entre a prostaglandian I2 (PGI2 ou prostaciclina) e o

tromboxano A2 (TXA2), é altamente provável que o risco de fenômenos trombóticos seja, de

fato, um efeito de classe inerente aos coxibs (KROTZ et al., 2005). Também os inibidores

específicos da COX-2 como o “celebra”, “vioxx” e outros medicamentos da classe dos coxibe

(celecoxibe, rofecoxibe) demonstraram maior risco de desenvolvimento de eventos

cardiovasculares trombóticos, incluindo infarto do miocárdio, angina instável, trombos

cardíacos, morte súbita, ataques isquêmicos (MUKHERJEE et al; 2001).

1.4 A Inflamação da mucosa oral

Podemos definir a úlcera da mucosa oral como uma lesão local da superfície do tecido,

mostrando perda do epitélio de revestimento com exposição do tecido conjuntivo ao meio

externo. O contato dos tecidos da mucosa com agentes físicos, tais como borda de dentes,

coroas fraturadas ou restaurações defeituosas, e ainda a superfície de aparelhos ortodônticos e

protéticos mal adaptados representam as principais fontes geradoras destas lesões na boca

(SCULLY & SHOTTS, 2000).

Como há uma perda maior de células e tecido na formação de uma lesão ulcerada, o

processo inflamatório e o reparo desta lesão acontecem por união secundária e envolvem uma

série de eventos vasculares, celulares, neurológicos e humorais (WALSH, 2003).

O mesmo autor relata que a liberação do ácido araquidônico é um evento envolvido na

regulação dos processos chaves de defesa do organismo, inflamações e alterações

hemodinâmicas, que irão liberar os eicosanóides. Estes podem se sintetizados por células do

sistema imune, especialmente por macrófagos e monócitos, que são as primeiras linhas de

defesa do organismo, principalmente contra as infecções.

Os eicosanóides são importantes agentes sinalizadores intercelulares que afetam o

comportamento das células e as interações célula a célula e são também postuladas por serem

mediadores chaves da inflamação. Vale ressaltar também que os produtos do ácido

araquidônico participam numa variedade de processos fisiológicos, e a deficiência destes

compostos resulta num dano progressivo das funções, enquanto que a produção excessiva ou

descontrolada pode resultar em inflamação, reações alérgicas, carcinogênese, asma, psoríase,

imunossupressão e outros estados fisiopatológicos (MIRZOEVA & CALDER, 1996).

Os medicamentos que são usados para diminuir as lesões inflamatórias na mucosa oral

são preferencialmente de uso tópico. Tal fato deve prevenir os efeitos colaterais e as

interações medicamentosas decorrentes do uso desses medicamentos. As drogas mais

utilizadas são os anti-inflamatórios esteroidais como os corticosteróides, os quais sendo usado

por um período de tempo reduzido, de modo tópico, acabam por minimizar os efeitos

adversos (SOARES DE LIMA et al., 2004, 2005).

A Terramicina  (Pfizer) é um antibiótico derivado das tetraciclinas que é amplamente

usado no tratamento das infecções orais. Ela age inibindo proteinases destruidoras de tecidos,

como colagenases e gelatinases, existentes em processos inflamatórios; provavelmente elas

adicionariam à ação antibacteriana esse efeito estabilizador do colágeno, promovendo a

cicatrização das lesões (GOLUB et al., 1998).

Várias são as alternativas às quais o dentista, pode recorrer para o tratamento das

lesões ulceradas, dentre elas, as preparações à base de extratos de plantas e produtos naturais.

Extratos naturais, preparados para utilização na forma de colutórios, auxiliam no processo de

reparo destas lesões e, em sua maioria, não possuem efeitos colaterais (GRÉGIO et al., 2002).

Sabendo que a grande maioria dos medicamentos são drogas anti-inflamatórias que

causam diversos efeitos colaterais, percebemos que existe uma vasta necessidade de se

descobrir novas drogas que exerçam a ação anti-inflamatória sem, no entanto, desencadear

efeitos adversos. Assim, nosso estudo teve o propósito de avaliar a atividade anti-inflamatória

de uma nova droga obtida de Ricinus communis, a qual já apresenta uma eficiente ação

bactericida e cicatrizante no processo infeccioso.

2 OBJETIVOS

Baseado no fato de que o óleo obtido das sementes de Ricinus communis apresenta ações

biológicas e farmacológicas ligadas à cicatrização e contra a ação de microorganismos, o

objetivo do nosso estudo foi avaliar a atividade anti-inflamatória crônica e aguda por parte do

polímero de poliuretano derivado do óleo de R. communis em modelos animais. Ainda foi

estudado o mecanismo de ação de R. communis presente no estudo desta atividade

antiinflamatória. Testes de toxicidade aguda foram avaliados em nosso trabalho.

3 MATERIAL E MÉTODOS

3.1. Planta utilizada

O polímero de poliuretano, utilizado em nossos experimentos, foi extraído das

sementes da espécie Ricinus communis (EUPHORBIACEAE) (Figura 1). Das sementes

obtem-se o óleo vegetal, e do óleo vegetal por sua vez, deriva-se um polímero que tem alto

poder de interação com as células do corpo humano, sem provocar rejeição.

O polímero foi extraído e purificado por parte da equipe do Prof. Dr. Gilberto

Orivaldo Chierice do Instituto de Química da Universidade de São Paulo-São Carlos-SP,

Brasil.

Figura 2: A espécie em estudo Ricinus communis (EUPHORBIACEAE). O óleo vegetal ou

óleo de rícino, é obtido das sementes desta espécie de planta. Deste óleo deriva-se um

polímero que será o objeto de nosso estudo.

3.2. Animais

Em nossos experimentos foram utilizados como animais de experimentação

camundongos Swiss (25-30 g) e ratos Wistar (200-300g). Estes tiveram acesso ad libittum à

água e NUVILAB e só foram realizados após a aprovação do Comitê de Ética em

experimentação animal da Universidade do Sagrado Coração (OLFERT et al., 1993).

3.2.1. Toxicidade aguda em camundongos

O teste para avaliação da toxicidade aguda de Ricinus communis foi realizado de acordo

com o método descrito por SOUZA BRITO (1994). Grupos de camundongos pesando entre

30 e 35g foram tratados, em dose única, com 100, 250, 500, 1000 mg/Kg de Ricinus

communis. O experimento ocorreu através de observação diária durante 14 dias consecutivos e

em seguida foram avaliadas as alterações de peso corporal, dos pêlos e mucosa, presença de

diarréia, convulsões e estado de depressão ou excitação nervosa. O número de morte de

animais em cada grupo, se alguma, seria utilizada para o cálculo e determinação de DL

(dose

letal 50%) conforme descrito por LITCHFIELD & WILCOXON (1949).

3.3 Modelos de inflamação

3.3.1 Edema de orelha de camundongo

A atividade antiinflamatória presente no polímero de poliuretano obtido do óleo de

Ricinus communis foi ensaiada através do modelo de inflamação aguda do edema de orelha de

camundongo segundo a técnica de VAN ARMAN (1974).

Em nossos experimentos foi utilizado como agente indutor da inflamação o ácido

araquidônico (AA) na concentração de 1,0 µg/orelha (PAULA et al., 2003). Este agente foi

aplicado em ambas as faces internas das orelhas do camundongo (ação inflamatória tópica),

induzindo edema e eritema, provocando assim aumento de peso da orelha.

A seguir, foi determinada a concentração efetiva do polímero (10mg/orelha) obtido de

Ricinus communis no estudo da atividade anti-inflamatória, esta concentração foi aplicada

topicamente na superfície interna da orelha esquerda do camundongo, enquanto na direita foi

aplicado somente o solvente da planta mais o AA. Após 1 hora, os animais foram sacrificados

por deslocamento cervical.

A seguir, as orelhas foram retiradas e seccionadas com um vazador de metal, em

discos circulares de 5mm de diâmetro; por fim os discos das orelhas foram pesados em uma

balança analítica e foi calculada a diferença de peso das orelhas, determinando assim o

aumento de permeabilidade vascular.

A % de inibição da inflamação foi determinada pela fórmula:

% de inibição = D-E • 100

100

Onde:

D= massa de uma secção circular da orelha, com 5mm de diâmetro, tratado com ácido

araquidônico.

E= massa de uma secção circular da orelha, com 5mm de diâmetro, tratado com a

substância irritante mais o tratamento tópico por parte do polímero de poliuretano de Ricinus

communis. Como controle positivo foi utilizado o anti-inflamatório hidrocortisona.

3.3.2 Formação de tecido granulomatoso (granuloma cotton pellet)

Algodão dental “em rolo” (Johnson & Johnson) foi cortado (5mm) e quatro conjuntos

foram pesados (160 mg aproximadamente) e esterilizados em autoclave de 120

C, por 25

minutos.

Os animais foram anestesiados com o relaxante muscular “ROMPUM” e Anestésico

“KETALAR”. Sob anestesia os “pellets” foram implantados subcutaneamente em quatro

posições simétricas do abdomem (MORE & SWINGLE, 1982) para promover a formação do

granuloma.

As administrações orais diárias de dexametasona (0,2 mg/orelha), e da concentração

efetiva da substância obtida por parte do polímero de Ricinus communis no estudo da

atividade anti-inflamatória diluída em Tween 80, foram iniciadas 2 horas após a implantação

dos “pellets” de algodão em cada animal. O tratamento teve a duração de 6 dias consecutivos.

No sétimo dia, os animais foram sacrificados por deslocamento cervical, os granulomas

removidos e secos durante a noite e em estufa à 60

C, para a determinação do peso seco. A

diferença entre o peso inicial e o peso seco final foi estimado como o peso do tecido

granulomatoso produzido.

A porcentagem de inibição da inflamação foi calculada assim:

Peso dos “pellets” controle−peso dos “pellets” tratados X 100 = % de inibição

Peso dos “pellets” controle.

3.3.3. Edema de pata de camundongo induzido por formalina

O método descrito por HENRIQUES et al., 1987, usa grupos de camundongos

machos, indometacina (30 mg/Kg s.c.) como controle positivo e a droga teste (250mg/Kg e

500mg/Kg). O pré-tratamento foi realizado 30 minutos antes da injeção de formalina 10%

(1% peso/volume em solução salina) na região subplantar da pata direita do camundongo. O

volume da pata foi medido 4h após a injeção de formalina. O peso causado pelo irritante foi

calculado pela diferença do peso da pata esquerda não tratada daquela pata direita tratada.

3.3.4. Atividade fosfolipásica

A atividade fosfolipásica da peçonha de abelha (Apis mellifera) foi verificada

medindo-se a redução de pH da mistura de incubação usando um eletrodo sensível numa

câmara de incubação fechada. Desta forma, foi verificada a atividade inibitória da fosfolipase

A2 por parte do polímero de R. communis.

O ensaio permite a verificação da mudança da concentração hidrogeniônica do meio,

através da quebra da fosfatidilcolina pela enzima fosfolipase A

, liberando ácidos graxos.

O substrato contendo 7 mM de fosfatidilcolina, 12mM de cloreto de cálcio e 4mM de

taurocolato de sódio, foi preparado de acordo com a técnica modificada de FREITAS et al.

(1984). De acordo com ROBERTS et al. (1977), na técnica do “pH stat”, o método é

executável até pH 5,0, porém no presente trabalho, o pH inicial foi 8,0 sendo este o pH

considerado ótimo para a enzima agir. O volume de incubação total foi diminuído de 2,5 ml

para 1 ml através do emprego de um microeletrodo de pH.

O teste foi acompanhado por 60 minutos, medindo-se o pH do meio a cada minuto.

A substância teste foi incubada com a enzima fosfolipase A

purificada de peçonha de

abelha, dissolvida em água destilada (0,83 µg/ml), durante 30 minutos antes de sua adição ao

substrato. No grupo controle foi incubado o solvente, água destilada (20µl), juntamente com a

enzima fosfolipase A

(20µl). No grupo tratado foi acrescentada a concentração efetiva do

polímero obtido de Ricinus communis no estudo da atividade antiinflamatória.

Para a quantificação da reação enzimática da fosfolipase A

, foi necessário anotar a

queda do pH a cada minuto observado em relação ao pH inicial, tanto nas soluções controle

como nas soluções onde o extrato estiver presente. Assim:

∆ pH (tratado/minuto) x100 = % de reação enzimática

∆ pH (controle/60 min)

3.3.5. Efeito do polímero de Ricinus communis em lesões ulceradas da mucosa bucal de

camundongos

Camundongos machos Swiss foram utilizados neste estudo. Uma lesão ulcerada foi

produzida com a aplicação tópica de NaOH (40%) na face dorsal da língua de cada animal sob

anestesia do relaxante muscular “ROMPUM” e do anestésico “KETALAR”. As lesões do

grupo experimental foram tratadas com a administração diária (via oral) do polímero de

Ricinus communis, enquanto nas lesões dos animais do grupo controle utilizou-se uma solução

de tween 80. Os animais foram sacrificados 14 dias depois (TRINDADE GREGÓRIO et al.,

2002). As lesões ulceradas foram contadas e classificadas de acordo com a severidade

apresentada (SZELENYI & THIEMER 1978).

4 ANÁLISE ESTATÍSTICA

Os dados estão apresentados como média e erro padrão da média de acordo com teste

de análise de variância (ANOVA) seguido por teste de comparação múltipla de 2 vias

Dunnett’s. Os valores de p<0,05 foram considerados significativos.

5 RESULTADOS

A administração diária (via oral) do polímero de poliuretano de R. communis em doses

crescentes (até 1000mg/Kg) nos testes de toxicidade aguda em camundongos, não mostrou

efeitos colaterais durante 14 dias de tratamento. Isso mostra que o polímero tem em sua

estrutura química, a ausência da toxicidade comumente encontrada no óleo de rícino

(toxicidade irritativa e toxicidade do trato gastrointestinal).

O estudo da atividade anti-inflamatória da espécie Ricinus communis mostrou-se eficaz

em diferentes modelos in vivo e in vitro.

No modelo experimental de edema de orelha de camundongo, o polímero de poliuretano

inibiu a inflamação tópica provocada pelo ácido araquidônico em 75% (p<0,001) (Tabela 1;

Figuras 2,3,4).

No experimento de inflamação crônica onde há a formação de tecido granulomatoso, o

polímero de poliuretano obtido de Ricinus communis mostrou-se mais uma vez eficaz em

reduzir a inflamação induzida pela implantação subcutânea do “cotton pellet”, reduzindo a

inflamação em aproximadamente 62% (p<0,001). A dexametasona usada como controle

positivo no mesmo modelo experimental inibiu 72% da inflamação (Tabela 2).

Mais uma vez em tratamento agudo, o efeito antiinflamatório de R. communis (via

oral) mostrou-se eficaz em inibir a inflamação induzida pela formalina em 72% (P<0, 001)

(Tabela 3).

Na tabela 4, o mecanismo de ação do polímero de R. communis foi detectado. Verificou-se

que a pré-incubação da droga teste (em diferentes concentrações) junto com a enzima

fosfolipase A

por 30 minutos, bloqueou de maneira concentração-dependente a atividade da

enzima fosfolipase A

do processo inflamatório (p<0,05).

Ainda em experimentos de indução de úlceras na mucosa oral de roedores por

hidróxido de sódio 40%, o polímero de poliuretano obtido de R. communis mostrou-se eficaz

em cicatrizar essas úlceras num período de tratamento tópico de 14 dias (p<0.05) (Tabela 5),

dados morfológicos confirmam essa atividade anti-inflamatória tópica (Figura 6).

TABELA 1: Efeito da administração tópica do polímero obtido do óleo das

sementes de Ricinus communis em edema de orelha de camundongo induzido

por ácido araquidônico (1,0 µg/orelha).

Tratamento Dose Inibição (%)

Controle (acetona)

Dexametasona

10 µl/orelha

0,2 mg/orelha

73,0 (**) ± 0,89

Polímero 5 mg/orelha

54,4 (**) ± 0,80

Polímero 10 mg/orelha

75,08 (**) ± 1,0

Dados referentes à média de 7 animais ± EPM, **P<0.001 comparado com o controle (Teste

de Tukey)

Observar nos vasos sanguíneos

a presença de muitos neutrófilos

Orelha tratada topicamente

só com agente irritante

(Ácido araquidônico))

Aumento original

100x

umento original

100x

Figura 3 - Figura mostrando o modelo experimental de edema de orelha de

camundongo induzido pelo ácido araquidônico. Notar a presença de numerosos

neutrófilos nos vasos sanguíneos (Aumento de 100 x, HE).

Observar nos vasos sanguíneos

a presença de muitos neutrófilos

Orelha tratada topicamente

só com agente irritante

(Ácido araquidônico)

Aumento original 100x

umento original 100x

Figura 4 - Figura mostrando novamente o modelo experimental de edema de

orelha de camundongo induzido pelo ácido araquidônico. Notar a presença de

numerosos neutrófilos nos vasos sanguíneos (Aumento de 100 x, HE).

Observar nos vasos

sanguíneos

a ausência de neutrófilos

Orelha tratada topicamente com

agente irritante (Ácido

Araquidônico) e com o polímero

de poliuretano de Ricinus

communis

umento original

40x

Aumento original

20x

Figura 5 - Figura mostrando a ação anti-inflamatória do polímero de poliuretano

obtido de Ricinus communis (500 mg) em experimento de edema de orelha de

camundongo induzido pelo ácido araquidônico (HE).

TABELA 2: Efeito da administração oral do polímero de poliuretano obtido de

Ricinus communis em experimento crônico de formação de tecido

granulomatoso.

Tratamento Dose Inibição (%)

Tween 10ml/Kg -

Dexametasona 0,2 mg/Kg

72,3 (**) ± 1,2

Polímero 250 mg/Kg

55,7 (**) ± 1,0

Polímero 500 mg/Kg

61,7 (**) ± 0,98

Dados referentes à média ± EPM de 10 animais. O tratamento com dexametasona e com a droga

teste (polímero nas doses de 250 e 500mg/Kg) foram considerados significativos, *p<0.001.

TABELA 3: Ação anti-inflamatória do polímero de poliuretano obtido de

Ricinus communis (v.o.) em experimento de edema de pata de camundongo

induzido por formalina 10%.

Dados referentes a média de 7 animais ± EPM.

**P<0.001 comparado com o controle (Teste de Tukey)

TABELA 4: Ação inibitória do polímero de poliuretano obtido de Ricinus

communis em experimento da atividade da enzima fosfolipase A

do processo

inflamatório.

Tratamento Dose Inibição (%)

Tween 10ml/Kg -

Polímero 250 mg/Kg

61,8 (**) ± 1,3

Polímero 500 mg/Kg

72,0 (**) ± 1,5

Droga Concentração

(mg/ml)

Inibição (%)

polímero 1,0

35,7 ± 1,2

polímero 1,5

67,7 ± 0,98

polímero 3,0

80 ± 1,34

polímero 5,0

84,6 ± 1,41

Dados são a média da inibição de 5 experimentos ± EPM. As concentrações de

1,0; 1,5; 3,0; 5,0 mg/ml são estatisticamente diferentes entre si.

*P<0.05 (teste de Tukey)

TABELA 5: Efeito tópico do polímero de poliuretano obtido de Ricinus

communis em ulcerações traumáticas da mucosa bucal de ratos.

Tratamento

(v.o.)

Dose Inibição (%)

Tween 10 ml/Kg

Polímero 250

35 (*) ± 1,2

Polímero 500

60 (*) ± 1,3

Dados referentes a média de 9 animais ± EPM.

*P<0.05 comparado com o controle (Teste de Tukey)

Figura 6 - Em (A) erosão traumática causada pela administração tópica de

hidróxido de sódio (40%) e tratamento com o solvente Tween (observar ruptura

do tecido epitelial) e em (B) ação cicatrizante do polímero de poliuretano de

Ricinus cummunis (500mg) frente ao agente lesivo hidróxido de sódio 40%

(observar a integridade do tecido) (HE).

aumento original 4x

aumento original 10x

aumento original 4x

6 DISCUSSÃO

Sabe-se que muitos compostos derivados de plantas apresentam efeito anti-

inflamatório. Diante de relatos da literatura o polímero derivado do óleo vegetal das sementes

de Ricinus communis se mostra ativo em estudos de regeneração óssea (CATANZARO-

GUIMARÃES, 2003) impedindo a ocorrência de fraturas no tecido ósseo (SIMÕES et al.,

1999). Também de acordo com ITO em 2003, R. communis apresenta atividade bactericida e

fungicida e é amplamente usado em tratamento de canais dentários e periodontite. Com base

nesses relatos este estudo verificou a ação anti-inflamatória do polímero de poliuretano obtido

das sementes de R. communis em modelos animais.

Assim no modelo experimental de edema de orelha de camundongo, o polímero de R.

communis inibiu a inflamação tópica provocada pelo ácido araquidônico de maneira

significativa (Tabela 1; Figuras 2,3,4). Este modelo animal relata a fase de exudação

plasmática (edema inflamatório), que pode ser usado para avaliar a atividade anti-inflamatória

de novos fármacos.

Durante a biossíntese das prostaglandinas, o ácido araquidônico é liberado pelos

fosfolipídeos de membrana a partir da enzima fosfolipase A2, o qual por sua vez é

metabolizado em eicosanóides como prostaglandinas (PGs), tromboxano (TXs) e leucotrienos

(LTs), onde C4 e D4 são os dois componentes da reação lenta da anafilaxia (BECKER et al.,

2003).

A inflamação aguda é caracterizada por uma resposta que abrange vasodilatação e

aumento da permeabilidade vascular. Este fato causa extravasamento de proteínas

plasmáticas, sais e água, levando a formação do edema (PAULA et al., 2003). Outros agentes

envolvidos na formação do edema como serotonina, histamina e bradicinina, os quais agem

diretamente em receptores específicos, estão presentes em células endoteliais de vênulas pós-

capilares.

Também outro modelo de inflamação avaliado foi o do edema de pata de camundongo

induzido por formalina. O teste da formalina é considerado um modelo válido para avaliação

da dor inflamatória (WEYERS et al., 1989). Este modelo inicialmente ativa neurônios

nociceptivos e posteriormente envolve a liberação de mediadores do processo inflamatório

como histamina, bradicinina e prostaglandinas (HUNSKAAR et al., 1987).

O pré-tratamento de animais com o polímero de Ricinus communis reduziu

significativamente o edema de pata induzido por formalina (Tabela 3). Esses dados estão

relacionados à inibição da síntese de PGs endógenas e ou outros mediadores responsáveis pela

inflamação como a histamina, bradicinina ou serotonina.

Drogas que agem de maneira significativa no teste da formalina (indutora de

inflamação e dor) sugerem uma provável ação antinociceptiva periférica (AMANLOU et al.,

2005). Este teste detecta a atividade farmacológica antiinflamatória do tipo não esteroidal,

além de agentes anti-histamínicos e anti-serotoninégicos.

Há evidências que ligam a bradicinina, prostaglandinas E2, leukotrieno B4, PAF,

interleucina 1, serotonina e histamina ao processo patofisiológico, o qual acompanha o dano

tecidual e a inflamação, especialmente na produção de dor inflamatória e hiperalgesia (DRAY

& PERKINS, 1993).

Após os dados de atividade anti-inflamatória aguda por parte do polímero obtido do

óleo das sementes de R. communis, avaliou-se a ação desta mesma droga teste em modelos de

inflamação crônica. Para tal estudo, o modelo utilizado foi a indução da formação de tecido

granulomatoso pela implantação de “cotton pellet” (MORE & SWINGLE, 1982).

Quando não há a remoção de agente lesivo com a consequente resolução do processo

inflamatório, ocorre um influxo contínuo de leucócitos, particularmente mononucleares

(monócitos e linfócitos). O aumento de fagócitos mononucleares deve ser amplificado pela

divisão local dessas células bem como pela diferenciação em células que são mais

especializadas para a sua própria função (células epitelióides secretórias e células gigantes

multinucleadas). Fibroblastos ativados sofrem mitose e armazenam colágeno encapsulado na

lesão, que fazem com que se mostrem as características de uma típica reação inflamatória

crônica (GILROY & PERRETI, 2005).

No modelo de inflamação crônica induzida pela implantação de “cotton pellet”, o

polímero de Ricinus communis mostrou-se mais uma vez eficaz em inibir o processo

inflamatório de maneira significativa (Tabela 2).

Substâncias capazes de inibir o edema induzido pelo ácido araquidônico, previnir o

edema provocado pela formalina, assim como também inibir a formação de tecido

granulomatoso, apresentam atividade anti-inflamatória inibindo enzimas do processo

inflamatório como a fosfolipase A2, ciclooxigenase e/ou lipooxigenase. Desta forma

realizamos testes in vitro da avaliação do mecanismo de ação da atividade anti-inflamatória

por parte de Ricinus communis.

Para tal ensaiou-se a técnica modificada de FREITAS et al., (1984), onde a pré-

incubação de diferentes concentrações do polímero de R. communis juntamente com a enzima

fosfolipase A2, mostrou uma inibição concentração dependente do processo inflamatório

(Tabela 4). Este fato foi registrado já que houve o bloqueio da liberação do ácido araquidônico

a partir dos fosfolipídeos da membrana por parte de Ricinus communis.

A inflamação observada neste modelo in vitro, relata a ativação da enzima fosfolipase A2.

BRESNICK et al., 1981 declarou que a PLA2 cataliza a hidrólise de fosfolipídeos de

membrana liberando ácidos graxos livres, predominantemente ácido araquidônico e

lisofosfolipídeos. Estes produtos tem atividade biológica quando metabolizado para formar

uma variedade de mediadores lipídeos pró-inflamatórios incluindo prostaglandinas,

leucotrienos, fator ativador de plaquetas (CALIXTO et al., 2004). Então a inibição da enzima

PLA2 por agentes farmacológicos levou-nos a detectar o mecanismo de ação anti-inflamatório

da espécie em estudo Ricinus communis.

Sabe-se que os fármacos anti-inflamatórios esteroidais como os glicocorticóides são

amplamente usados na supressão da inflamação de doenças crônicas. Os glicocorticóides

inibem a enzima fosfolipase A2 e consequentemente a formação de prostaglandinas e

leucotrienos, reduzindo assim o recrutamento de neutrófilos, eosinóflos e macrófagos para o

foco inflamatório (FLOWER, 2003).

A ação anti-inflamatória deve-se à ligação do glicocorticóide ao seu receptor nuclear, o

qual se liga em um gene alvo inibindo a transcrição de vários genes para citocinas, enzimas,

receptores e moléculas de adesão. Consequentemente ocorre a inibição de fatores de

transcrição como o fator nuclear κB (NF-κ B) e a proteína ativadora 1 (AP-1). Os

glicocorticóides aumentam ainda a transcrição de proteínas anti-inflamatórias como

lipocortina 1, IL-10 e antagonista do receptor de IL-1 (BELVIS et al., 2001).

Por fim, foi avaliada a ação anti-inflamatória tópica do polímero obtido do óleo das

sementes de R. communis no modelo de indução de úlcera na mucosa oral de roedores por

hidróxido de sódio 40%. Neste modelo experimental, R. communis mostrou-se eficaz em

cicatrizar essas úlceras num período de tratamento tópico de 14 dias (Tabela 5; Figura 6).

As úlceras são definidas como um defeito local da superfície de um órgão ou tecido,

sendo produzida pela perda do epitélio de revestimento com exposição do tecido conjuntivo

ao meio externo (SCULLY & SHOTTS, 2000). Como há uma perda maior de células e tecido

na formação de uma lesão ulcerada, o processo inflamatório e o reparo desta lesão acontecem

por união secundária e envolvem uma série de eventos vasculares, celulares, neurológicos e

humorais (WALSH, 2003).

Assim através deste modelo experimental pode-se verificar a ação tópica de Ricinus

communis no tratamento de lesões bucais de roedores, demonstrando que estas substâncias

favorecem os eventos anti-inflamatórios que promovem o processo de reparo de lesões

ulceradas (Figura 6, A e B).

Também a administração diária (via oral) do polímero de poliuretano em doses crescentes

(até 1000mg/Kg) nos testes de toxicidade aguda em camundongos, não mostrou efeitos

colaterais durante 14 dias de tratamento. Isso mostra que o polímero tem em sua estrutura

química, a ausência da toxicidade comumente encontrada no óleo de rícino (toxicidade

irritativa e toxicidade do trato gastrointestinal), assegurando seu uso terapêutico como um

produto natural.

Com os dados anteriores levantados em literatura de ação bactericida, com os

significativos resultados de atividade anti-inflamatória aguda e crônica por parte de Ricinus

communis encontrados neste estudo, assim como também com a detecção do mecanismo de

ação envolvido nesta atividade farmacológica e ausência de toxicidade, pode-se dizer que a

espécie em estudo forneceu dados científicos que comprovam sua eficácia na prevenção e no

tratamento da inflamação.

7 CONCLUSÕES

Em nosso estudo foi possível detectar uma potente e significativa atividade

antiinflamatória crônica e aguda por parte do polímero de poliuretano derivado do óleo de R.

communis em modelos animais. Ainda foi estudado in vitro o mecanismo de ação do polímero

obtido de R. communis e detectou-se o envolvimento desta nova droga na inibição da enzima

fosfolipase A

. Testes de toxicidade aguda em camundongos foram realizados em nosso

trabalho e não houve a apresentação de efeito colateral em 14 dias de observação.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

AABAKKEN, L.; et al. Gastroduodenal lesions associated with two different piroxicam

formulations. An endoscopic comparison. Scandinavian Journal of Gastroenterology 27(12):

p.1049-54, 1992.

AMANLOU, M.; et al. An anti-inflammatory and anti-nociceptive effects of hydroalcoholic

extract of Satureja khuzistanica Jamzad extract. Journal of Pharmacy & Pharmaceutical

Sciences 8(1): p. 102-106, 2005 .

ARNALDO, C. Remédios: cuidado com a overdose. American Journal of Medicine 80: p. 29-

33, 2003.

BECKER, H.M.G.() Uso de analgésicos e antiinflamatórios em pacientes portadores de

polipose nasossinusal eosinofilica tolerantes e intolerantes à aspirina. Revista Brasileira de

Otorrinolaringologia 69(3):p. 312-316, 2003.

BELVIS, M.G.; et al. New Glicocorticosteroids with an Improved Therapeutic Ratio?

Pulmonary Pharmacology & Therapeutics 14, p. 221-227, 2001.

BODOLAY, E.; Angiogenesis and chemokines in rheumatoid arthritis and other systemic

inflammatory rheumatic diseases. Journal of Cellular and Molecular Medicine

6(3): p. 357-

376, 2002.

BOLDI, A.M. Libraries from natural product-like scaffolds. Current Opinion in Chemical

Biology 8: p. 281-286, 2004.

BRESNICK, E.; et al. Phospholipase activity in skin after application of phorbol esters and 3-

methylcholanthene. Carcinogenesis,

2: 1119-1122, 1981.

BRISKIN, D.P. Medicinal Palnts and Phytomedicines. Linking plant biochemistry and

physiology to human health. Plant Physiology 124: p.507-514, 2000.

BURGER, D. ; DAYER, J.M. Cytokines, acute-phase proteins and hormones: IL-1 and TNF-alpha

production in contact-mediated activation of monocytes by T lymphocytes. Annals.of the New

York Academy of Science, 966: p.464-473, 2002.

CALIXTO, J.B. Efficacy, safety, quality control, marketing and regulatory guidelines for herbal

medicines (phytotherapeutic agents) Brazilian Jouranl of Medical and Biological Research

33: 170-

189, 2000.

______ Anti-inflammatory compounds of plant origin. Part II. Modulation of pro-inflammatory

cytokines, chemokines and adhesion molecules. Planta Medica

69: p. 973-983, 2003.

______ Anti-inflammatory Compounds of Plant Origin. Part II. Modulation of Pro-Inflammatory

Cytokines, Chemokines and Adhesion Molecules. Planta Medica, 70:93-103, 2004.

CANDIDO, L.C. Nova abordagem no tratamento de feridas. São Paulo: Editora SENAC-SP, 2001.

CARVALHO, W.A. Mecanismos de ação de drogas anti-inflamatórias não-esteróides. I. Ações

farmacológicas das prostaglandinas e leucotrienos. Mediators of Inflammation

100: p.37-44, 1990

______. Mecanismos de ação de drogas anti-inflamatórias não-esteróides. II. Ações analgésicas,

anti-inflamatórias e antipiréticas. Mediators os Inflammation 100: 111-122, 1990b.

______; LEMONICAL, L. Mecaniasmo Celulares e Molecualres da Dor Inflamatória.

Modulação Periférica e Avanços Terapêuticos, In: : BRAZ, J.R.C; CASTIGLIA, Y.M.M .

Temas de Anestesiologia. Curso de Graduação em Medicina. 2ed. São Paulo: Artes Médicas:

p.265-280, 2000.

CARVALHO, W.A.; SALES CARVALHO, R.D.; RIOS-SANTOS, F. Analgésicos Inibidores

Específicos da Ciclooxigenase-2: Avanços Terapêuticos. Revista Brasileira de Anestesiologia

54(3): p.448-464, 2004.

CATANZARO-GUIMARÃES, S.A. Citing online sources: advice on online citation formats

[online]. Disponivel em: Available from http://revistapesquisa.fapes.br [cited September

2003]. Acesso em 20 fev. 2003.

CLARDY, J. ; WALSH, C. Lessons from natural molecules. Nature 432

: p.729-837, 2004.

DIAS, B.F.S. A implementação da convenção sobre diversidade biológica no Brasil

: desafios e

oportunidades. Campinas: André Tosello, 1996, 10p.

DRAY, A. ; PERKINS, M. Bradykinin and inflammatory pain. Trends in Neurosciences 16(3): 99-

104, 1993.

FALUS A.; MERETEY K. Histamine: an early messenger in inflammatory and immune reactions.

Immunology Today, 13(5): p 154-6, 1992.

FERREIRA, S.H. ; VANE, J.R. Mode of Action of Anti-Inflammatory agents which are

Prostaglandin Synthetase Inhibitory, in: Vane, J.R., Ferreira, S.H- Anti-Inflammatory Drugs. New

York, Springer-Verlag: p.348-398, 1979.

FLOWER, R.J. Studies on the mechanism of action of anti-inflammatory drugs. A paper in honour

of John Vane. Thrombosis Research 110

: p.259-263, 2003.

FREITAS, J. C. In vitro inactivation of the neurotoxic action of β-bungarotoxin by the marine

natural product, manoalide Experientia 40

: p.864-886, 1984.

FRIESEN, R.W.; 2-Pyridinyl-3-(4-methylsulfonyl) phenylpyridines: selective and orally active

cyclooxigenase-2 inhibitors. Bioorganic Medicinal Chemisty Letters 8 (19):

p.2777-82, 1998.

GILROY, D.W.; PERRETI, M Aspirin and steroids: new mechanistic findings and avenues

for drug discovery. Current Opinion Pharmacology 5: p. 405-411, 2005.

GLASER, K.B.; et al. Phospholipase A2 enzymes: regulation and inhibition. Trends in

Pharmacological Sciences 14 (3): p. 92-98, 1993.

Golub, L.M.; et al. Tetracyclines inhibit connective tissue breakdown by multiple non-

antimicrobial mechanisms. Adv Dent Res Washngton, D.C. 12: p.12-26, 2002.

GRÉGIO, A.M.T.; et al. Efeito da propilos mellifera sobre o processo de reparo de lesões

ulceradas na mucosa bucal de ratos-análise morfológica. In: SEMINÁRIO DE INICIAÇÃO

CIENTÍFICA, 10, MOSTRA DE PESQUISA DA PUCPR, 4, 2002. Curitiba.

HAWKEY, C.J. COX-2 Inhibitors. Lancet 353(9149): p. 307-314, 1999.

HELIN,-SALMIVAARA, A.; et al. Adoption of celecoxib and rofecoxib: a nationwide

database study. Journal of Clinical Pharmacy and Therapeutics 30(2): p.145-52, 2005.

HENRIQUES, M.G.M.O.; et al. PAF-induced oedema in mice. Journal of ethnopharmacology, 8

p.243-249, 1987.

HENSON, P.M. Dampening inflammation. Nature Immunology 6: p. 1179-1181, 2005.

HOLZER, P. Capsaicin: cellular targets, mechanisms of action, and selectivity for thin

sensory neurons. Pharmacological Reviews 43

: p.143-201, 1991.

HUNSKAAR, S.; Hole, KThe formalin test in mice: dissociation between inflammatory and non-

inflammatory pain. Pain, 30(1): p.103-114, 1987.

ITO, I.Y. Citing online sources: advice on online citation formats [online]. Disponivel em:

Available from http://revistapesquisa.fapes.br [cited September 2003]Acesso em 20 fev 2003

IZZO, A.A.; et al. Inhibitors of nitric oxide synthase enhance rat ileum contraction induced by RA

in vitro. European Journal of Pharmacology 243: p.87-90,1993.

JAIN, M.K.; et al. Specific competitive inhibitor of secreted phospholipase A2 from berries of

Schinus terebinthifolius. Phytochemistry 39: p.537-547, 1995.

JORGE, R. M; et al. Evaluation of antinociceptive, anti-inflammatory and antiulcerogenic

activities of Maytenus ilicifolia. Journal of Ethnopharmacolgy 94: p. 93-100, 2004.

KELLIE, A.P. ; VASKO, M.R. Lipid mediators of sensitivity in sensory neurons. Trends in

Pharmacological Science 26: p.571-577, 2005.

KOEHN, F.E.; CARTER, G.T. The envolving role of natural products in drug discovery. Nature

Reviews Drug Discovery 4: p.206-220, 2005.

KOTENKO, S.V. The family of IL-10 related cytokines and their receptors:related, but to what

extent? Cytokine Growth Factor Review 13: p. 223-240, 2002.

KROTZ, F.; et al. Selective COX-2 Inhibitors and Risk of Myocardial Infarction. Journal of

Vascular Research 42 (4): 312-324, 2005.

LITCHFIELD, J.T. ; WILCOXON, F. A simple method of evaluating dose-effect

experiments. Journal Pharmaceutical and Experimental Therapeutic 95

: p.99-113, 1949.

LUSTER, A.D; ALON, R.; VON ANDRIAN, U.H. Immune cel migration in inflammation:

present and future therapeutic targets. Nature Immunology 6

: 1182-1190, 2005.

MARKENSON, J.A. Mechanisms of chronic pain. The American J. Med, 101 (Suppl. 1A): 1A-

7S,1996.

MASCOLO, N.; et al. Relation-ship between nitric oxide and platelet-activating factor in castor-oil

induced mucosal injury in the rat duodenum. Naunyn Schmiedeberg’s Arch Pharmacol 353: p.680-

684, 1996.

MIRZOEVA, O.K. ; CALDER, P.C. The effect of propolis and its components on eicosanoid

production during the inflammation response. Prostaglandin Leukotrienes and Essential Fatty Acids

55(6): 441-9, 1996.

MOORE, G.G.I; SWINGLE, K.F. 2,6-Di-ter-butyl-4-(2´-thenoyl) phenol (R-380): a novel

nonsteroidal anti-inflammatory agent with antioxidant properties. Agents Actions 12: p.674-683,

1982.

MUKHERJEE, D.; NISSEN, S.E.; TOPOl, E.J. Risk of cardiovascular events associated with

selective COX-2 inhibitors. JAMA 286(8): p.954-9, 2001.

NOBREGA, M.B. Citing online sources: advice on online citation formats [online].

Disponivel em: Available from http://revistapesquisa.fapes.br [cited September 2003],

Acesso em 20 fev 2003 .

ODDSSON, E.; GUDJONSSON, H.; Thjodleifsson, B. Endoscopic findings in the stomach and

duodenum after treatment with enteric-coated and plain naproxen tablets in healthy subjects.

Scandinavian Journal of Gastroenterology

25 (3):p. 231-4, 2003.

OLFERT, E.D.; CROSS, B.M.; MC WILLIAM, A.A. Guide to the Care and use of Experimental

Animals. Canadian Council on Animal Care, vol1, 213p., 1993.

OLIVEIRA, S.H. ; LUKACS, N. W. The role of chemokines and chemokine receptors in

eosinophil activation during inflammatory allergic reactions. Brazilian. Journal of Medical and

Biological Research 36: p.1455-1463, 2003.

PAULA, A.C.B.; HAYASHI, L.S.S; FREITAS, J.C. Anti-inflammatory and antispasmodic activity

of Ipomoea imperati (Vahl) Griseb (Convolvulaceae) Brazilian Journal of Medical and Biological

Research 36(1):105-112, 2003.

PAULA, A.C.B; et al. Is gastric ulceration different in normal and malnourished rats? British

Journal of Nutrition 93:

47-52, 2005.

PHILLIPS, R.A.; et al. Cathartics and the sodium pump. Nature 206: p.1367-1368, 1965.

RITTNER, H.L.; MACHELSKA, H.; STEIN, C. Leukocytes in the regulation of pain and

analgesia. Journal of Leukocyte Biology 78: p.1215-1222, 2005.

ROBERTS, M. F; DEEMS, R. A.; DENNIS, E. A. Spectral perturbations of the histidine and

tryptophane in cobra venom phospholipase A

upon metal ion and mixed binding The Journal of

Biological Chemistry 252: p. 6011-6017, 1977.

Rowley, A.F.; Vogan, C.L.; Taylor, G.W.; Clare, A.S. (2005) Prostaglandins in nos-insectan

invertebrates: recent insights and unsolved problems. The Journal Experimental Biology 208

:p 3-14,

2005.

SCULLY, C.; Shotts, R. Mouth ulcers and others causes of orofacial soreness and pain. British

Journal of Medicine 321: p162-5, 2000.

SIMÕES, C.M.O.; et al. Aceites vegetales de interes farmacêutico & Mamona ou carrapateira

Farmacognosia da planta ao medicamento. Santa Catarina: Editora da Universidade Federal de

Santa Catarina, 1999, 891p.

SOARES DE LIMA, A. A.; População de mastócitos em ulcerações bucais de ratos tratados

com extrato etanólico de propólis. Revista Brasileira de Patologia Oral. Disponível em:

www.patologiaoral.com.br. Acesso em: 20 fev 2004.

_______; et al. Tratamento de ulcerações traumáticas bucais causadas por aparelhos

ortodônticos. Review Dental Press Ortodontic Ortopedic Facial 10(5): p. 30-36, 2005.

SOLOMON, D.H.; et al. Relationship between selective cyclooxygenase-2 inhibitors and

acute myocardial infarction in older adults. Circulation 109 (17):

p.2068-73, 2004.

SOUZA BRITO, A.R.M. Manual de Ensaios Toxicológicos in vivo

. Campinas: Editora

UNICAMP, 1994, 122p.

SOWERS, J.R.; et al. Celecoxib Rofecoxib Efficacy and Safety in Comorbidities Evaluation

Trial (CRESCENT) Investigators The Effects of cyclooxigenase-2 inhibitors and nonsteroidal

anti-inflammatory therapy o 24-hour blood pressure in patients with hypertension,

osteoarthritis and type 2 diabetes mellitus. Archives of Internal Medicine, 165(2): p. 161-8,

2005.

STEWART, J.J; GAGINELLA, T.S; BASS, P. Actions of RA and structurally related fatty

acids on the gastrointestinal tract. I. Effects on smooth muscle contractility in vitro. The

Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 195:p. 347-354, 1975 a.

STEWART, J.J; et al. Inhibitory actions of laxatives on motility and water and electrolyte

transport in the gastrointestinal tract. The Journal of Pharmacology and Experimental

Therapeutics 192: p.458-467,1975 b.

STICHTENOTH, D.O.; FROLICH, J.C. The second generation of COX-2 inhibitors: what

advantages do the newesr offer? Drugs 63 (1):

p.33-45, 2003.

SZELENYI, I. ; THIEMER, K Distention ulcer as a model for testing of drugs for ulcerogenic

side effects. Archive Toxicology 41: p. 99-105, 1978.

TEDGUI, A.; MALLAT, Z. Anti-inflammatory mechanisms in the vascular wall. Cir. Res.

88: p. 877-87, 2001.

TRACEY, K.J. ; WARREN, H.S. An inflammatory issue. Nature 429 (6987): p.35-36, 2004.

TRINDADE GREGÓRIO, A.M; et al. Efeito da própolis em lesões ulceradas da mucosa bucal de

ratos. In: REUNIÃO ANNUAL DA FEDERAÇÃO DE SOCIEDADES DE BIOLOGIA

EXPERIMENTAL, 16, 2002. Salvador-Bahia, Brasil , p 206.

VAN ARMAN, C. G. Antiinflammatory drugs Clinical Pharmacology and Therapeutics 16:

p. 900-904, 1974.

VANE, J.R. ; BOTTING, R. M. Anti-inflammatory drugs and their mechanism of action.

Inflammation Research 47 (2): S2-S17, 1998.

______. The mechanism of action of aspirin. Thrombosis Research 110: p.255-258, 2003.

VAN WIJK. Phytobusinenn requires social chemistry. Phytochemistry 55: p. 93-95, 2000.

WALSH, L.J Mast cells and inflammation. Critical Reviews Oral Biology and Medicine 14

(3): p.188-98, 2003.

WEYERS, W.; BRODBECK, B.W. Skin absorption of volatile oils. Pharmacokinetics.

Journal of the American Pharmaceutical Association 18(3): p. 82-86, 1989.

YUAN, Y.; HUNT, R.H. Assessment of the safety of selective cyclo-oxigenase-2 inhibitors:

where are we in 2003? Inflammopharmacology

11(4): p. 337-54, 2003.

Valderramas, Adriana Cristina

V144e

Estudo da atividade anti-inflamatória de

icinus

communis (EUPHORBIACEAE) /Adriana Cristina Valderramas --

2006.

54 f.

Orientadora: Prof. Dra Ana Claudia Bensuaski P.

Zurron e Prof. Dra. Silvana Pasetto.

Dissertação de Mestrado (Fisiologia Oral) -

Universidade do Sagrado Coração - Bauru - SP.

1.Inflamação 2.Plantas medicinais 3. Fosfolipase A2

4.Ratos 5. Ricinus communis I.Zurron, Ana Claudia

Bensuaski II. Pasetto, Silvana III.Título.

Livros Grátis
( http://www.livrosgratis.com.br )
 
Milhares de Livros para Download:
 
Baixar livros de Administração
Baixar livros de Agronomia
Baixar livros de Arquitetura
Baixar livros de Artes
Baixar livros de Astronomia
Baixar livros de Biologia Geral
Baixar livros de Ciência da Computação
Baixar livros de Ciência da Informação
Baixar livros de Ciência Política
Baixar livros de Ciências da Saúde
Baixar livros de Comunicação
Baixar livros do Conselho Nacional de Educação - CNE
Baixar livros de Defesa civil
Baixar livros de Direito
Baixar livros de Direitos humanos
Baixar livros de Economia
Baixar livros de Economia Doméstica
Baixar livros de Educação
Baixar livros de Educação - Trânsito
Baixar livros de Educação Física
Baixar livros de Engenharia Aeroespacial
Baixar livros de Farmácia
Baixar livros de Filosofia
Baixar livros de Física
Baixar livros de Geociências
Baixar livros de Geografia
Baixar livros de História
Baixar livros de Línguas

Baixar livros de Literatura
Baixar livros de Literatura de Cordel
Baixar livros de Literatura Infantil
Baixar livros de Matemática
Baixar livros de Medicina
Baixar livros de Medicina Veterinária
Baixar livros de Meio Ambiente
Baixar livros de Meteorologia
Baixar Monografias e TCC
Baixar livros Multidisciplinar
Baixar livros de Música
Baixar livros de Psicologia
Baixar livros de Química
Baixar livros de Saúde Coletiva
Baixar livros de Serviço Social
Baixar livros de Sociologia
Baixar livros de Teologia
Baixar livros de Trabalho
Baixar livros de Turismo
 
 