( PDF ) Estrutura e ontogênese de órgãos reprodutivos de Connarus Suberosus Planch. (Connaraceae e Oxalis Cytisoides Zucc. (Oxalidaceae)

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UNESP - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

CAMPUS DE BOTUCATU

INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS

ESTRUTURA E ONTOGÊNESE DE ÓRGÃOS REPRODUTIVOS DE CONNARUS

SUBEROSUS PLANCH. (CONNARACEAE) E OXALIS CYTISOIDES ZUCC.

(OXALIDACEAE)

JOÃO DONIZETE DENARDI

BOTUCATU - SP

- 2008 -

Tese apresentada ao Instituto de

Biociências, Campus de Botucatu, UNESP,

para obtenção do título de Doutor em

Ciências Biológicas (Botânica), AC:

Morfologia e Diversidade Vegetal.

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UNESP - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

CAMPUS DE BOTUCATU

INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS

ESTRUTURA E ONTOGÊNESE DE ÓRGÃOS REPRODUTIVOS DE CONNARUS

SUBEROSUS PLANCH. (CONNARACEAE) E OXALIS CYTISOIDES ZUCC.

(OXALIDACEAE)

JOÃO DONIZETE DENARDI

PROFª DRª DENISE MARIA TROMBERT OLIVEIRA

ORIENTADORA

PROF. DR. ÉLDER ANTÔNIO SOUSA PAIVA

CO-ORIENTADOR

BOTUCATU - SP

- 2008 -

Tese apresentada ao Instituto de

Biociências, Campus de Botucatu,

UNESP, para obtenção do título de

Doutor em Ciências Biológicas

(Botânica), AC: Morfologia e Diversidade

Vegetal.

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FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉCNICA DE AQUISIÇÃO E TRATAMENTO

DA INFORMAÇÃO

DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CAMPUS DE BOTUCATU - UNESP

BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: SELMA MARIA DE JESUS

Denardi, João Donizete.

Estrutura e ontogênese de órgãos reprodutivos de Connarus Suberosus

Planch. (Connaraceae e Oxalis Cytisoides Zucc. (Oxalidaceae) / João Donizete

Denardi. – Botucatu : [s.n.], 2008.

Tese (doutorado) – Universidade Estadual Paulista, Instituto de

Biociências de Botucatu 2008.

Orientador: Denise Maria Trombert Oliveira

Co-orientador: Élder Antônio Sousa Paiva

Assunto CAPES: 20303009

1. Anatomia vegetal 2. Morfologia vegetal 3. Flores 4. Frutos 5. Se-

mentes

CDD 581.46

Palavras-chave: Connaraceae; Flor; Oxalidaceae; Pericarpo; Semente;

Tricoma glandular

Dedico à minha família.

iii

AGRADECIMENTOS

À Profª Drª Denise Maria Trombert Oliveira, a quem devoto sincera admiração,

agradeço por toda a atenção dedicada a minha formação acadêmica, pelo apoio e incentivo

constantes na realização deste trabalho, pela confiança e tratamento acolhedor.

Ao Prof. Dr. Élder Antônio Sousa e Paiva e Profª Drª Sheila Zambello de Pinho, pela

orientação em temas específicos neste trabalho e pela generosidade com que a fizeram.

Aos Professores do curso de Pós-graduação em Ciências Biológicas (Botânica), pelas

suas contribuições a minha formação acadêmica.

Aos taxonomistas Luciano C. Milhomens e Pedro Fiaschi, pela identificação das

espécies estudadas neste trabalho.

Aos funcionários do Departamento de Botânica, especialmente Clemente José

Campos, pelo auxílio nas coletas, e Kleber A. Campos, pela prontidão em me auxiliar nas

atividades laboratoriais.

Aos funcionários da Biblioteca Marlene e Braz, pela simpatia e empenho em atender

às solicitações de artigos via COMUT.

Aos meus queridos amigos Juliana Marzinek e Orlando Cavalari de Paula pelo

companheirismo e convívio acadêmico tão proveitoso.

Aos amigos Shirlayne S. U. de Barros, Daniela D. Pinto e Marco Antônio G. Martins,

pela cordialidade com que me receberam em Botucatu e pelo apoio.

À Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul (UEMS) por me incluir no Programa

de Qualificação Docente.

Aos queridos amigos da UEMS: Emília Maria Silva, Francisco C. E. González, Olga

T. Matsuno, César Y. Fujihara e Rosemary Mocchi, por todo o apoio que recebi.

À CAPES pela concessão de bolsa PICDT.

SUMÁRIO

RESUMO ............................................................................................................................. 1

ABSTRACT ......................................................................................................................... 3

INTRODUÇÃO .................................................................................................................... 5

REVISÃO BIBLIOGRÁFICA .............................................................................................. 8

Connaraceae e Oxalidaceae: relações interfamiliares e classificação ordinal .......................... 8

Família Connaraceae ............................................................................................................. 9

Família Oxalidaceae ............................................................................................................ 12

Considerações sobre as espécies estudadas .......................................................................... 13

Anatomia floral .................................................................................................................... 16

Heterostilia ......................................................................................................................... 19

Morfologia dos frutos .......................................................................................................... 21

Morfologia da semente ........................................................................................................ 21

CAPÍTULO I – Tricomas glandulares em Connarus suberosus (Connaraceae): distribuição,

organização estrutural e prováveis funções ........................................................................... 24

Resumo ............................................................................................................................... 26

Introdução ........................................................................................................................... 27

Material e métodos .............................................................................................................. 28

Resultados .......................................................................................................................... 29

Discussão ............................................................................................................................ 31

Literatura citada .................................................................................................................. 34

Ilustrações ........................................................................................................................... 38

CAPÍTULO II – Existem variedades de Connarus suberosus? Evidências morfoanatômicas da

heterostilia e dioicia ............................................................................................................ 42

Resumo ............................................................................................................................... 44

Introdução ........................................................................................................................... 44

Material e métodos .............................................................................................................. 46

Resultados .......................................................................................................................... 47

Discussão ............................................................................................................................ 52

Referências ......................................................................................................................... 57

Ilustrações ........................................................................................................................... 59

CAPÍTULO III – Morfoanatomia e desenvolvimento do pericarpo e da semente de Connarus

suberosus Planch. (Connaraceae) ........................................................................................ 67

Introdução ........................................................................................................................... 69

Material e métodos .............................................................................................................. 70

Resultados .......................................................................................................................... 71

Discussão ............................................................................................................................ 78

Literatura citada .................................................................................................................. 84

Ilustrações ........................................................................................................................... 89

CAPÍTULO IV – Morfologia e anatomia floral de Oxalis cytisoides Zucc. (Oxalidaceae) . 102

Resumo ............................................................................................................................. 104

Introdução ......................................................................................................................... 104

Material e métodos ............................................................................................................ 106

Resultados ........................................................................................................................ 106

Discussão .......................................................................................................................... 112

Referências bibliográficas ................................................................................................. 115

Ilustrações ......................................................................................................................... 118

CAPÍTULO V – Morfoanatomia e ontogênese do pericarpo e semente de Oxalis cytisoides

Zucc. (Oxalidaceae), com ênfase no peculiar mecanismo de deiscência ............................. 125

Resumo ............................................................................................................................. 127

Introdução ......................................................................................................................... 127

Material e métodos ............................................................................................................ 129

Resultados ........................................................................................................................ 130

Discussão .......................................................................................................................... 134

Referências bibliográficas ................................................................................................. 138

Ilustrações ......................................................................................................................... 140

CONSIDERAÇÕES FINAIS ............................................................................................ 146

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................... 147

DENARDI, J.D. ESTRUTURA E ONTOGÊNESE DE ÓRGÃOS REPRODUTIVOS DE

CONNARUS SUBEROSUS PLANCH. (CONNARACEAE) E OXALIS CYTISOIDES

ZUCC. (OXALIDACEAE). 2008. 155 P. TESE (DOUTORADO) – INSTITUTO DE

BIOCIÊNCIAS, UNESP – UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA, BOTUCATU.

RESUMO - Considerando que Connaraceae e Oxalidaceae constituem um clado de

Oxalidales bem representado na flora brasileira e pouco estudado relativamente à estrutura de

órgãos reprodutivos, este trabalho aborda a morfoanatomia e a ontogênese de flores, frutos e

sementes de Connarus suberosus (Connaraceae) e Oxalis cytisoides (Oxalidaceae), a fim de

avaliar a existência de padrões estruturais comuns a essas espécies. O processamento das

amostras para microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão e de varredura

seguiu as técnicas usuais. Verificou-se que, estruturalmente, C. suberosus possui heterostilia

dimórfica, caracterizada pelas formas brevi- e longistila, as quais se mostraram

funcionalmente masculina e feminina, respectivamente. Alguns caracteres morfológicos

peculiares a cada forma floral, provavelmente estão associados à evolução da dioicia, como

dimensões de sépalas e pétalas e distribuição de tricomas glandulares. Nesta análise, provou-

se que esses caracteres, aliados às diferenças de tamanho dos verticilos de estames das formas

florais, foram utilizados equivocadamente na delimitação de C. suberosus var. fulvus e C.

suberosus var. suberosus, que correspondem às formas brevistila e longistila,

respectivamente. Independentemente da forma floral, houve variação no número de sépalas,

pétalas e estames e tendência à restrição do tecido nectarífero aos setores antepétalos do tubo

estaminal. A vascularização carpelar mostrou-se derivada em relação ao padrão descrito para

Connaraceae, devido à formação de um complexo ovular mediante união parcial de traços

ovulares àqueles derivados de feixes alas. O desenvolvimento do pericarpo e da semente, que

pode ocorrer apomiticamente, não é concomitante, visto que a diferenciação seminal inicia-se

após a expansão do pericarpo, quando este alcança comprimento e largura finais. Ao término

da diferenciação seminal, ocorre a maturação pericárpica, caracterizada pela expansão radial

das células do mesocarpo externo que, provavelmente, causa a deiscência do folículo. A

semente madura é arilada, hemítropa e vascularizada por um complexo rafeal e outro pré-

rafeal; o tégmen é parcialmente absorvido. Diferentemente de outras Connaraceae, a endotesta

e o exotégmen são multiplicativos; o mesotégmen mostra-se esclerificado. O endosperma, que

é núcleo-celular, persiste como estrato irregularmente multisseriado, adnato ao tegumento.

Como parte do indumento de C. suberosus, relatou-se a ocorrência de tricomas glandulares,

que consistem de pedúnculo multicelular, unisseriado, e de uma porção glandular multicelular

que, na fase secretora, apresenta acúmulo de compostos pécticos, amido e gotas lipídicas, as

quais ocupam grande parte do volume celular. No citoplasma das células secretoras,

predominam mitocôndrias, plastídios e dictiossomos. Na fase secretora, observa-se hidrólise

do amido presente nos plastídios, redução na densidade do estroma plastidial e fusão de

plastídios com vacúolos. A ocorrência desses tricomas glandulares nas superfícies expostas de

órgãos em desenvolvimento, associada à natureza química dos produtos de secreção e reserva,

sugere que estas estruturas possam atuar como corpos de alimentação. Oxalis cytisoides

apresenta tristilia e morfologia floral típica de Oxalidaceae, destacando-se que as pétalas

expandem-se apenas após a diferenciação dos demais verticilos, sendo livres na base e no

ápice, conatas em pequena extensão. O retarde no desenvolvimento da corola sugere que a

obdiplostemonia é primária. Anatomicamente, o que mais se destaca é similaridade entre o

mesofilo de sépalas e carpelos, ambos preenchidos, em grande parte, por volumosas células

aqüíferas. O pericarpo de O. cytisoides passa por pequenas alterações durante o

desenvolvimento, mantendo estrutura geral similar à parede ovariana, com exocarpo e

endocarpo unisseriados e mesocarpo com dois estratos, o externo composto por parênquima

aqüífero, que mantém a turgescência do fruto até próximo da deiscência, e o interno, que é

clorofiliano. As sementes desenvolvem ambos os tegumentos, com espessa cutícula na

exotesta, mesotesta multiplicativa que acumula amido até próximo da maturidade, endotesta

cristalífera e exotégmen unisseriado, composto por células paliçádicas espessadas. São

sementes albuminosas, com amplo endosperma formado de modo núcleo-celular. Ocorre

deiscência loculicida no fruto, a partir da desidratação do mesocarpo externo, que contrai o

pericarpo; tricomas endocárpicos lignificados alavancam as sementes, lançando-as

balisticamente; como a testa se rompe na camada cristalífera, as sementes são dispersadas

revestidas pelo exotégmen e resíduos da endotesta. As espécies estudadas compartilham

vários caracteres e tendências morfológicas, os quais incluem ocorrência e função de tricomas

glandulares em partes florais; restrição de áreas nectaríferas aos setores antepétalos;

desenvolvimento assimétrico dos frutos, os quais apresentam estômatos exo- e endocárpicos e

tricomas internos; desenvolvimento núcleo-celular do endosperma; entre outros.

Palavras-chave – Connaraceae, Oxalidaceae, flor, pericarpo, semente, tricoma glandular

DENARDI, J.D. STRUCTURE AND ONTOGENY OF THE REPRODUTIVE ORGANS

OF CONNARUS SUBEROSUS PLANCH. (CONNARACEAE) AND OXALIS

CYTISOIDES ZUCC. (OXALIDACEAE). 2008. 155P. DR THESIS – BIOSCIENCES

INSTITUTE, UNESP – SÃO PAULO STATE UNIVERSITY, BOTUCATU.

ABSTRACT – Connaraceae and Oxalidaceae constitute a clade of Oxalidales that is well

represented within the Brazilian flora although relatively poorly studied in terms of the

structure of their reproductive organs. The present work examined the morphology, anatomy

and ontogeny of the flowers, fruits, and seeds of Connarus suberosus (Connaraceae) and

Oxalis cytisoides (Oxalidaceae) in order to evaluate the existence of structural patterns

common to both species. Preparation of plant samples for viewing under light and electron

microscopy followed established techniques. Connarus suberosus demonstrated dimorphic

heterostyly, characterized by the brevi- and longistylous morphs, which were observed to be

functionally masculine and feminine respectively. Some of the peculiar morphological

characteristics of each floral form are probably associated with the evolution of dioecy, such

as the dimensions of the sepals and petals and the distribution of the glandular trichomes. The

present analysis indicated that these characters, allied to differences in the sizes of the verticils

of the two floral forms, had been equivocally used in delimiting C. suberosus var. fulvus and

C. suberosus var. suberosus, which correspond to thrum and pin morphs respectively.

Independent of the floral form, variation in the numbers of sepals, petals, and stamens were

observed, as well as a tendency for the nectary tissues to be restricted to the epipetalous

sectors of the staminal tube. Carpel vasculature was observed to be derived in relation to the

pattern described for Connaraceae due to the formation of an ovular complex resulting from

the partial union of ovular traces derived from wing bundles. The development of the

pericarps and seeds, which can occur in an apomixic manner, is not concomitant; the seed

differentiation initiates after the expansion of the pericarp when this organ attains its final

length and width. The pericarp matures when seminal differentiation ends, and is

characterized by radial expansion of the outer mesocarp cells, which provokes the dehiscence

of the follicles. The mature seed is arillate, hemianatropous, and is vascularized by a raphal

bundle complex as well as a pre-raphal bundle complex; the tegmen is partially absorbed.

Different from other Connaraceae, the endotesta and exotegmen are multiplicative; the

mesotegmen is sclerified. The endosperm, which is nuclear-cellular, persists as an irregular

multiseriate layer adnate to the seed coat. Glandular trichomes make up part of the indument

of C. suberosus, these having uniseriate multicellular peduncles with multicellular glandular

portions that accumulate pectic compounds, starch, and lipidic drops, which take up a large

portion of the cellular volume in their secretory phase. Mitochondria, plastids, and

dictiosomes predominate in the cytoplasm of the secretory cells. Hydrolysis of the starch

present in the plastids was observed in the secretory phase, as well as a reduction in the

density of the plastid stroma and the fusion of plastids with vacuoles. The occurrence of

glandular trichomes on the exposed surfaces of the developing organs in association with the

chemical nature of the secretion and reserve products, suggests that these structures act as

food bodies. Oxalis cytisoides demonstrates the tristyly and floral morphology typical of the

Oxalidaceae, especially in terms of its petals, that expand only after the differentiation of the

other verticils, are free at the base and at the apex, and connate only for short extensions. The

slow development of the corolla suggests that the obdiplostemony is primary. The anatomical

factor that most stands out is the similarity between the mesophyll of the sepals and carpels,

both of which are mostly filled by large water-storing cells. The pericarp of O. cytisoides

undergoes only small alterations during development, maintaining the general structure

similar to the ovarian wall. The exocarp and endocarp are uniseriate, and the mesocarp has

two layers – an outer layer composed of watery parenchyma, which maintains the fruit turgid

until near dehiscence, and an inner photosynthetic layer. The seeds develop both

integuments, with a thick exotesta cuticle, a multiplicative mesotesta that accumulates starch

almost to maturity, and a crystalliferous endotesta and uniseriate exotegmen composed of

thick palisade cells. The seeds are albuminous, with ample endosperm formed in a nuclear-

cellular mode. Loculicidal dehiscence occurs in the fruit by dehydration of the outer

mesocarp, contracting the pericarp; lignified endocarp trichomes propel the seeds outwards at

high speeds. As the testa is torn along the crystalliferous layer the seeds are covered by the

exotegmen and vestiges of the endotesta after dispersal. The species studied have various

characteristics and morphological tendencies which include: the occurrence and functioning

of glandular trichomes on floral parts; restriction of nectary areas to the epipetalous sectors;

asymmetric development of the fruits, which have stomata on the exo- and endocarp and

internal trichomes; the development of a nuclear-cellular endosperm; among others.

Key words – Connaraceae, Oxalidaceae, flower, pericarp, seeds, glandular trichomes

INTRODUÇÃO

Estudos recentes sobre sistemática de angiospermas promoveram um

reagrupamento de taxa superiores, com base em análises cladísticas de seqüências de DNA,

em particular dos genes 18S rDNA, rbcL e atpB (Chase et al., 1993; Savolainen et al., 2000;

Soltis et al., 2000). Desta forma, uma nova classificação para as famílias de angiospermas foi

proposta pelo “Angiosperm Phylogeny Group” (APG, 1998; 2003).

Uma associação inesperada de famílias resultou na circunscrição da ordem

Oxalidales, a qual, de acordo com APG (2003), constitui-se das famílias Brunelliaceae,

Cephalotaceae, Connaraceae, Cunoniaceae, Elaeocarpaceae (incluindo Tremandraceae) e

Oxalidaceae. Em classificações tradicionais (por exemplo: Cronquist, 1981; Takhtajan, 1997;

Thorne, 2000), essas famílias estavam alocadas em diversas ordens, nem todas relacionadas

estritamente ou inclusas em uma mesma subclasse. Na classificação de Cronquist (1981),

constavam na subclasse Rosidae as seguintes ordens e respectivas famílias: Rosales

(Brunelliaceae, Cephalotaceae, Connaraceae e Cunoniaceae), Geraniales (Oxalidaceae) e

Polygalales (Tremandraceae). Elaeocarpaceae, em contraste, estava na subclasse Dilleniidae

(ordem Malvales). Na classificação de Takhtajan (1997), embora colocadas nas mesmas

subclasses, o número de ordens para essas famílias aumentou. Em Rosidae, consistiam de

Cunoniales (Brunelliaceae e Cunoniaceae), Cephalotales (Cephalotaceae), Connarales

(Connaraceae), Oxalidales (Oxalidaceae) e Vochysiales (Tremandraceae). Elaeocarpaceae foi

mantida em Dilleniidae, mas acomodada em sua própria ordem, Elaeocarpales. Na

classificação de Thorne (2000), considerou-se em Rosidae apenas Brunelliaceae,

Cephalotaceae e Cunoniaceae, as quais foram agrupadas na ordem Cunoniales. As famílias

restantes foram distribuídas em Dilleniidae: Violales (Elaeocarpaceae), Rutales (Connaraceae)

e Geraniales (Oxalidaceae e Tremandraceae).

Zhang e Simmons (2006) sugeriram a inclusão de Huaceae em Oxalidales,

tendo em vista que, em suas análises, esses taxa figuram como grupos irmãos com suporte

moderado (valores jacknife superiores a 80%). Em estudos anteriores (Nandi, Chase e

Endress, 1998; Savolainen et al., 2000; Soltis et al., 2000), não se obteve suporte suficiente

para se realizar a classificação ordinal dessa família.

De acordo com Stevens (2007), Connaraceae e Oxalidaceae são grupos irmãos,

assim como Brunelliaceae e Cephalotaceae, e Tremandraceae está embebida em

Elaeocarpaceae. No entanto, com exceção do par Connaraceae/Oxalidaceae, as relações entre

as demais famílias (Brunelliaceae, Cephalotaceae, Cunoniaceae, Elaeocarpaceae incluindo

Tremandraceae) apresentam-se variáveis, devido à resolução conferida pelos dados até agora

considerados na análise filogenética (Davies et al., 2004; Savolainen et al., 2000; Soltis et al.,

2005; Zhang e Simmons, 2006). A interpretação da estrutura floral (Matthews e Endress,

2002, 2006), por outro lado, corroborou as relações mencionadas por Stevens (2007).

No sistema APG II (APG, 2003), Oxalidales, Malpighiales e Celastrales

constituem um grande subclado de eurosídeas I, cujas relações permanecem não resolvidas.

Stevens (2007) reconheceu como sinapomorfia para essas ordens a ocorrência de exotégmen

fibroso. Matthews e Endress (2005) descreveram, com base na morfoanatomia floral,

caracteres que evidenciam a associação entre Celastrales e Malpighiales, bem como as

potenciais sinapomorfias e tendências apomórficas entre Oxalidales, Malpighiales e

Celastrales.

Matthews e Endress (2002) relacionaram diversos caracteres de Oxalidales

menos comumente encontrados em outras ordens de rosídeas e consideraram que, pelo menos

parte desses, poderiam representar sinapomorfias para Oxalidales ou, talvez, para eurosídeas I

sensu APG (1998).

Stevens (2007) reconheceu como sinapomorfia para eurosídeas I o endosperma

escasso. Para Oxalidales, o autor mencionou os seguintes caracteres: ocorrência de células de

mucilagem, micrópila formada por ambos os tegumentos, estigma secretor, tegumento do óvulo

multiplicativo, endotesta cristalífera e paliçádica, e exotégmen fibroso ou traqueoidal.

Tendo em vista que: 1) na flora brasileira, a ordem Oxalidales sensu APG

(2003) e Stevens (2007) está representada pelas famílias Connaraceae, Cunoniaceae,

Elaeocarpaceae e Oxalidaceae (Souza e Lorenzi, 2005); 2) há uma maior afinidade

filogenética entre Connaraceae e Oxalidaceae, conforme evidenciam as análises baseadas em

dados moleculares; e 3) os trabalhos relativos à morfoanatomia de órgãos reprodutivos dessas

duas famílias são escassos, ao contrário da situação levantada principalmente para

Cunoniaceae (Bensel e Palser, 1975; Dickison, 1975a, 1975b, 1984; Doweld, 1998; Godley

1983; Govil e Saxena, 1976; Kennedy e Prakash, 1981; Lopez Naranjo e Huber, 1971; Moody

e Hufford, 2000; Webb e Simpson, 1991); considerou-se oportuna a realização de um estudo

sobre a estrutura e a ontogênese de órgãos reprodutivos de Connaraceae e Oxalidaceae.

As espécies escolhidas para o presente estudo foram Connarus suberosus

Planch. (Connaraceae) e Oxalis cytisoides Zucc. (Oxalidaceae), em função de sua ocorrência

na região de Botucatu, Estado de São Paulo. No processo de seleção, consideraram-se

também os seguintes aspectos:

- Em 170 levantamentos florísticos rápidos da flora lenhosa de cerrado lato sensu, realizados

nos Estados da Bahia, Ceará, Goiás, Maranhão, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas

Gerais, Piauí, Rondônia e Tocantins, Ratter, Bridgewater e Ribeiro (2001) avaliaram, entre

587 taxa inventariados (463 identificados até o nível de espécie), C. suberosus

(Connaraceae) como uma das espécies mais freqüentes, ocorrendo em 75% dos

levantamentos.

- Oxalis cytisoides inclui-se no subgênero Thamnoxys, cujas espécies evoluíram

principalmente nos campos e cerrados do Brasil (Lourteig, 1994) e para as quais não foram

empreendidas abordagens anatômicas envolvendo órgãos reprodutivos.

O objetivo principal deste estudo foi realizar uma análise morfoanatômica dos

órgãos reprodutivos de C. suberosus e O. cytisoides, a fim de avaliar a existência de padrões

estruturais comuns a essas espécies. Os objetivos específicos consistiram em:

- Descrever a anatomia e a vascularização floral, a estrutura e ontogênese de frutos e

sementes nas referidas famílias, bem como analisar a variabilidade estrutural desses

órgãos.

- Comparar os resultados obtidos àqueles disponíveis na literatura para as demais famílias de

Oxalidales e grupos filogeneticamente relacionados de acordo com o sistema APG II.

- Verificar a existência de caracteres estruturais de ocorrência comum às plantas dos

ambientes de origem das espécies selecionadas.

REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

Connaraceae e Oxalidaceae: relações interfamiliares e classificação ordinal

Várias interpretações taxonômicas foram apresentadas a respeito das afinidades

de Connaraceae com outras famílias. Hutchinson (1969) classificou Connaraceae em

Dilleniales por considerá-la derivada do mesmo estoque ancestral de Dilleniaceae, com a qual

compartilha gineceu apocárpico e sementes ariladas. No entanto, Dickison (1971, 1972,

1973a, 1973b, 1979) não encontrou evidências na morfologia de órgãos reprodutivos ou

vegetativos para o estabelecimento dessa associação.

Dickison (1972) concluiu que os caracteres estruturais do lenho indicam uma

posição avançada de Connaraceae dentro de Rosales ou uma relação mais estreita com

Sapindales, conforme propôs Heimsch (1942) em um estudo anatômico do lenho de Gruinales

e Terebinthales. Cronquist (1968) incluiu Connaraceae em Sapindales devido, principalmente,

à anatomia avançada do lenho e à presença de arilo e órgãos secretores comuns a

Sapindaceae. Contudo, esse autor ressaltou as similaridades entre Connaraceae e Rosales.

A relação de Connaraceae com Leguminosae e Rosaceae foi indicada em

diversos estudos, dentre os quais se destacam aqueles conduzidos por Dickison (1971, 1972,

1973a, 1973b) a respeito da vascularização carpelar, anatomia nodal, morfoanatomia foliar e

anatomia do lenho de Connaraceae. Cronquist (1981), subsidiado pelos trabalhos realizados

por Dickison, optou por classificar Connaraceae em Rosales, em função de suas folhas

exestipuladas, gineceu freqüentemente apocárpico e frutos usualmente do tipo folículo, que a

distinguiria de Fabales; porém destacou que essa família encontra-se em uma “área nebulosa”

que provê a conexão entre Rosales, Fabales e Sapindales. Posteriormente, trabalhos

envolvendo filogenia de Leguminosae revelaram que essa família possui o mesmo padrão de

espessamento endotecial de Connaraceae, Rosaceae, Sapindaceae e Chrysobalanaceae

(Manning e Stirton, 1994) e o mesmo arranjo de ceras epicuticulares observado em

Connaraceae (Ditsch, Patha e Barthlott, 1995).

Corner (1976), em seus estudos sobre as sementes das dicotiledôneas, sugeriu

uma aliança entre Connaraceae e as demais famílias que apresentam exotégmen fibroso,

especialmente Meliaceae. Segundo o autor, não há evidências de afinidades entre Connaraceae,

Rosaceae e Leguminosae, quando se considera a estrutura das sementes e o sistema de

vascularização dos carpelos.

A inclusão de Connaraceae em qualquer uma das ordens citadas anteriormente,

leva à incompatibilidade de parte de seus caracteres com aquela posição. Assim, Takhtajan

(1969, 1997) criou a ordem Connarales para abranger, exclusivamente, essa família.

Segundo Forero (1983), alguns autores clássicos como Endlicher, Planchon,

Bentham e Hooker relacionaram Connaraceae com Oxalidaceae. Entretanto, na maioria das

classificações tradicionais, incluiu-se Oxalidaceae em Geraniales (Cronquist, 1981, 1988;

Thorne, 1992, 2000). Dahlgren (1989), por outro lado, acomodou essa família em Linales,

enquanto Takhtajan (1997) preferiu tratá-la em uma ordem própria: Oxalidales. Behnke

(1982) considerou possível a associação citada no início desse parágrafo, ao verificar que

Connaraceae (Connarus) e alguns membros de Oxalidaceae (Averrhoa, Oxalis) apresentam

plastídios de elementos crivados do tipo P, sendo que Connarus e Averrhoa compartilham a

mesma forma (Pcs’). Recentemente, Connaraceae e Oxalidaceae aparecem como famílias-

irmãs nas análises filogenéticas realizadas por Hufford e Dickison (1992), a partir de dados

morfológicos e químicos, bem como em estudos filogenéticos baseados em seqüências

gênicas (Davies et al., 2004; Savolainen et al., 2000; Soltis et al., 2000, 2005; Zhang e

Simmons, 2006) ou na combinação de dados moleculares e morfológicos (Nandi, Chase e

Endress, 1998). Dessa forma, essas famílias são classificadas atualmente na ordem Oxalidales

(APG, 1998, 2003).

De acordo com Stevens (2007), os seguintes caracteres são comuns a

Connaraceae e Oxalidaceae: plantas com construção simpodial; presença da benzoquinona

rapanona, destituídas de ácido elágico; raízes diarcas; lenho com raios unisseriados; plastídios

de tubo crivado com cristalóides protéicos; drusas ausentes; plaquetas de cera epicuticular

arranjadas como rosetas; folhas imparipinadas ou trifolioladas ou unifolioladas (condição

menos comum), folíolos articulados, margens inteiras, nervuras secundárias pinadas a

palmadas, sem estípulas; corola unida pós-genitalmente próximo à base, com pêlos

glandulares unisseriados; nectário extra-estaminal; dois verticilos de estames de diferentes

comprimentos, os quais portam pêlos glandulares unisseriados; heterostilia di ou trimórfica;

fruto com cálice persistente e exotesta mais ou menos carnosa.

Família Connaraceae

Connaraceae consta de espécies arbóreas, arbustivas ou lianas com ampla

distribuição nas regiões tropicais. No Neotrópico, é encontrada desde o México e Cuba até o

Estado de Santa Catarina, no sul do Brasil. Ocorre desde o nível do mar até 1.000 metros de

altitude, em florestas ombrófilas e ripárias, nos cerrados e na vegetação sobre restinga. No

Brasil, que é considerado o centro de diversificação da família na região Neotropical, ocorrem

64 espécies, classificadas nos gêneros Bernardinia (1), Connarus (29), Pseudoconnarus (3) e

Rourea (31). No Estado de São Paulo, a família está representada por Bernardinia, Connarus

e Rourea, abrangendo oito espécies e três variedades (Forero, 1983; Forero e Costa, 2002).

Os estudos taxonômicos sobre Connaraceae, como aqueles conduzidos por

Schellenberg (1938), Leenhouts (1958) e Breteler (1989), compilados no Quadro 1, revelaram

divergências consideráveis na delimitação dos taxa em níveis infrafamiliares. Os tratamentos

realizados por Leenhouts (1958) e Breteler (1989) caracterizam-se por uma substancial

redução dos números de gêneros e espécies em relação àqueles reconhecidos por Schellenberg

(1938). Leenhouts revisou o trabalho de Schellenberg (1938), quando preparava sua

contribuição para “Flora Malesiana”. Nessa obra, Leenhouts (1958) referiu-se a seis gêneros

e 36 espécies de Connaraceae para a Malásia, em contraste aos nove gêneros com 142

espécies reportados, anteriormente, por Schellenberg (1938) para a Ásia e áreas adjacentes.

Um resultado similar foi obtido na revisão das espécies africanas (Breteler, 1989): uma

redução de 154 espécies em 16 gêneros, segundo Schellenberg (1938), para 49 espécies em 10

gêneros. No entanto, o tratamento empreendido para espécies americanas não levou à

diminuição do número de taxa. De acordo com Schellenberg (1938), cinco gêneros com 89

espécies ocorrem na América, enquanto que Forero (1983) registrou 101 espécies alocadas

nos mesmos gêneros. Desta forma, a América exibe, atualmente, a maior diversidade de

espécies. Na opinião de Breteler (1989), esse resultado provavelmente reflete um conceito

diferente de espécie.

Em seu estudo, Leenhouts (1958) reconheceu 16 gêneros para Connaraceae e

não aceitou a subdivisão da família, proposta por Schellenberg (1938), principalmente por

considerar a delimitação de tribos, com base na posição da inflorescência, insustentável na

prática. Breteler (1989) encontrou apoio em análises filogenética e de similaridade total para o

estabelecimento de quatro tribos: Connareae, Jollydoreae, Manoteae e Cnestideae. Essas

classificações (filogenética e por similaridade total) basearam-se nos gêneros e em seus

caracteres diferenciais. Segundo o autor, Connaraceae abrange 12 gêneros e cerca de 110 a

200 espécies, dependendo do conceito de espécie adotado.

Forero (1983) fez uma síntese dos usos de espécies de Connaraceae, os quais se

relacionam, principalmente, à medicina popular e a efeitos tóxicos sobre animais. Estudos

fitoquímicos recentes comprovaram os benefícios terapêuticos e, algumas vezes, a toxicidade

de sustâncias ativas e extratos obtidos de diversas partes de plantas dessa família. Por

exemplo, Otshudi et al. (2000) relataram atividades antidesentérica e bactericida para extratos

Quadro 1 – Comparação de tratamentos taxonômicos infrafamiliares de Connaraceae

SCHELLENBERG (1938)

LEE

NHOUTS (1958)

BRETELER (1989)

Subfam. I. JOLLYDOROIDEAE

Cnestis

Juss.

Tribo 1.

Jollydoreae

Jollydora

Pierre

Agelaea

Soland. ex. Planch

. (inclui

Agelaea e Castanola sensu Schellenberg,

Jollydora

Pierre

Subfam. II. CONNAROIDEAE

1938)

Tribo 2.

Manoteae

Trib

Cnestideae

Subgê

nero

Troostwykia

Manotes

Soland.

Cnestis

Juss. Subgênero

Agelaea

Tribo 3.

Connareae

Trib

Agelaeeae

Roureopsis

Planch.

(inclui

Burttia

Bak. F. Exell.

Manotes

Soland.

Roureopsis e Taeniochlaena sensu

Connarus

Hemandradenia

Stapf

Schellenberg, 1938)

Ellipanthus

Hook. f.

(inclui

Agelaea

Soland.

Rourea

Aubl.

(inclui Rourea,

Ellipanthus, Pseudoellipanthus, sensu

Trib

Byrsocarpeae

Byrsocarpus, Jaundea, Santaloides,

Schellenberg, 1938)

Pseudoconnarus

Raldlk.

Santaloidella, sensu Schellenberg, 1938)

Hemandradenia

Stapf

Burttia

Bak. F. Exell.

Ellipanthus

Hook. f.

(inclui

Vismianthus

Mildbr.

Vismianthus

Mildbr.

Ellipanthus, Pseudoellipanthus,

Tribo 4.

Cnestideae

Bernardinia

Planch.

Hemandradenia sensu Schellenberg, 1938)

Agelaea

Soland. ex. Planch.

(inclui

10.

Spiropetalum

Gilg.

nnarus

Agelaea e Castanola sensu Schellenberg,

11.

Roureopsis

Planch.

Cnestidium

Planch.

1938)

12.

Paxia

Gilg.

Schellenbergia

Parkinson

Secçã

Troostwykia

13.

Santaloidella

Schellenb.

Paxia

Gilg.

Secçã

Agela

14.

Santaloides

(L.) O. Ktze.

10.

Spiropetalum

Gilg.

Cnestis

Juss.

Subgênero

Dalbergioidea

11.

Bernardinia

Planch.

10.

Cnestidium

Planch.

Subgênero

Afrosantaloides

12.

Vismianthus

Mildbr.

11.

Pseudoconnarus

Raldlk

Subgênero

Mimosoidea

13.

Burttia

Bak. F. Exell.

12.

Rourea

Aubl.

(inclui Rourea,

15.

Byrsocarpus

Schum. et Thonn.

14.

Pseudoconnarus

Raldlk.

Bernardinia, Byrsocarpus, Jaundea,

Subgênero

Eubyrsocarpus

15.

Manotes

Soland.

Paxia, Roureopsis, Santaloidella,

Subgênero

Pseudojaundea

16.

Jollydora

Pierre

Spiropetalum, Santaloides, Taeniochlaena,

16.

Jaundea

Gilg.

sensu Schellenberg, 1938)

Trib

Castanoleae

Secçã

Bernardinia

17.

Taeniochlae

Hook. f.

Secçã

Byrsocarpus

18.

Castanola

Llanos

Secçã

Rourea

19.

Schellenbergia

Parkinson

Secçã

Roureopsis

20.

Ellipanthus

Hook. f.

Secçã

Santaloides

21.

Pseudoellipanthus

Schellen

Trib

Connareae

22.

Cnestidium

Planch.

23.

Rourea

Aubl.

24.

Connarus

Subgênero

Connarellus

Subgênero

Neoconnarus

Subgênero Euconnarus

de raízes de Roureopsis obliquifoliolata; Kuwabara et al. (2003) estudaram uma substância

(“tricin”) com potente efeito anti-histamínico, extraída de folhas de Agelaea pentagyna;

Jiménez et al. (2001) constataram que extratos de folhas e ramos de Connarus lambertii

apresentam uma forte ação sobre a atividade cardiovascular de animais experimentais,

causando-lhes a morte, bem como são efetivos na inibição da enzima glucose-6-fosfatase, que

catalisa a reação final da neoglicogênese e glicogenólise. Taveira et al. (1988) investigaram os

efeitos de extratos da casca de Connarus fulvus (= Connarus suberosus) em camundongos,

uma vez que essa planta é consumida em chás e garrafadas devido a uma suposta ação sobre

as funções cardíacas. Os resultados obtidos não confirmaram esta atividade, mas indicaram

ações analgésica, anticonvulsivante e anticurarizante, além da toxicidade desses extratos.

Apesar dos indícios sobre o potencial farmacológico de muitas espécies de

Connaraceae (Forero, 1983; Jongkind, 1989), poucos estudos (Aiyar et al., 1964; Jeannoda et

al., 1985; Kuwabara et al., 2003; Le et al., 2005) trataram da identificação das substâncias

responsáveis por seus efeitos terapêuticos.

Família Oxalidaceae

Oxalidaceae é constituída por cinco gêneros e cerca de 800 espécies; Oxalis é o

maior gênero com aproximadamente 700 espécies (Stevens, 2007). São, em geral, ervas

bulbosas, raramente arbustos ou árvores, com distribuição tropical e subtropical. No Brasil,

ocorrem dois gêneros (Biophytum e Oxalis) com cerca de 150 espécies (Souza e Lorenzi,

2005). No Estado de São Paulo, está representada apenas por Oxalis, no entanto Averrhoa

carambola é muito cultivada em função dos frutos comestíveis (Fiaschi e Conceição, 2005).

Economicamente, Oxalis destaca-se por incluir espécies invasoras de culturas

(Lorenzi, 2000), espécies ornamentais (Ingram, 1958, 1959), e pela “oca” (Oxalis tuberosa),

cujos tubérculos comestíveis são cultivados na região andina (Alvarez, 1960; Trognitz e

Hermann, 2001). Várias espécies são mencionadas em estudos etnobotânicos (Albuquerque e

Andrade, 2002; Guarim Neto e Morais, 2003; Rodrigues e Carvalho, 2001), mas há poucos

ensaios laboratoriais voltados à comprovação de suas propriedades farmacológicas. Em um

desses, Egly et al. (2003) isolaram, a partir de O. erythrorhiza, compostos que se mostraram

ativos contra Trypanossoma cruzi, Leishmania amazonensis e L. donovani.

O gênero Oxalis consiste de quatro subgêneros: Oxalis, Thamnoxys, Monoxalis

e Trifidus. O subgênero Oxalis caracteriza-se pelo hábito herbáceo e por suas folhas

trifolioladas digitadas, enquanto os representantes de Thamnoxys são arbustivos ou

subarbustivos e apresentam folhas trifolioladas pinadas. Os demais subgêneros abrangem

apenas duas espécies cada um (Lourteig, 1994, 2000).

Estudos taxonômicos a respeito do gênero Oxalis foram conduzidos por vários

autores. Knuth (1930), por exemplo, dedicou-se à descrição e à determinação de espécies

africanas e sulamericanas, considerando 37 seções, numerosas subsecções e séries. Denton

(1973) realizou uma monografia sobre as espécies da seção Ionoxalis da América do Norte.

Lourteig (1975, 1979) revisou as seções Thamnoxys e Corniculatae, respectivamente, no

âmbito das espécies extra-austroamericanas. Em publicações subseqüentes, a autora

apresentou a descrição do subgênero Trifidus (Lourteig, 1995) e os resultados de tratamentos

taxonômicos efetuados para os subgêneros Thamnoxys (Lourteig, 1994), Monoxalis, Oxalis e

Trifidus (Lourteig, 2000).

Considerações sobre as espécies estudadas

Connarus suberosus é uma espécie que se desenvolve em áreas de cerrado,

sendo encontrada nos seguintes estados: Pará, Maranhão, Piauí, Bahia, Goiás (incluindo o

Distrito Federal), Mato Grosso, Minas Gerais e São Paulo. Forero e Costa (2002)

caracterizaram-na como árvore de pequeno porte, 1,5-7(-12)m; casca espessa, suberosa;

ramos tortuosos, os jovens densamente ferrugíneo-tomentosos. Folhas 5-9(-13) folioladas,

folíolos elípticos, ovais ou suborbiculares, coriáceos, face adaxial tomentosa quando jovem,

passando a glabrescente ou glabra, face abaxial tomentosa quando jovem passando a glabra,

exceto na nervura central. Inflorescência paniculada (Fig. 1), terminal ou axilar, densamente

ferrugíneo-tomentosa; sépalas com pontos glandulosos inconspícuos, tomentosa

externamente, glabra internamente; pétalas com pontos glandulosos presentes ou ausentes,

margem com ou sem tricomas glandulosos; estames unidos na base, com ou sem tricomas

glandulosos; estilete tomentoso, geralmente com tricomas glandulosos; ovário tomentoso.

Fruto estipitado (Fig. 2), densamente ferrugíneo-tomentoso quando jovem, mais tarde

irregularmente pubérulo externamente, esparsamente pubescente internamente.

Forero (1983), revisando Connaraceae neotropicais, concluiu que era

impossível manter Connarus suberosus e C. fulvus como entidades separadas. Desta forma,

procedeu à nova combinação, reconhecendo para C. suberosus as variedades suberosus e

fulvus. Para a identificação das mesmas, propôs a seguinte chave:

- sépalas 3,5 mm; pétalas 4x1,5 mm; pontos glandulosos ausentes ou inconspícuos; estames

maiores 2,5 mm, menores 1,5 mm, sem tricomas glandulosos nos filetes, tricomas

glandulosos presentes no ápice do conectivo e no estilete ............ C. suberosus var. suberosus

- sépalas 2,6 mm; pétalas 5-5,5x2 mm, pontos glandulosos conspícuos; estames maiores 4

mm, menores 3 mm, com tricomas glandulosos nos filetes, tricomas glandulosos ausentes no

ápice do conectivo e no estilete ......................................................... C. suberosus var. fulvus

Embora mencione a existência de estados intermediários em caracteres como

pilosidade dos filetes, ocorrência de pontos glandulosos nas pétalas, forma e pubescência dos

folíolos, entre outros, Forero (1983) considerou possível distinguir certas tendências que

justificariam a referida classificação.

Milhomens e Proença (2002), mediante a análise de 42 exsicatas, das quais 17

foram selecionadas a partir da monografia de Forero (1983), concluíram que não há

correlação entre os caracteres diagnósticos estabelecidos por este autor e as respectivas

variedades de C. suberosus, uma vez que esses mostraram um gradiente de estados ou não

diferiram expressivamente entre as variedades. Resultados similares foram obtidos quando se

construíram gráficos de dispersão, utilizando-se outros caracteres que se apresentavam

variáveis entre exsicatas escolhidas ao acaso. Verificou-se, contudo, que realmente existem as

tendências morfológicas citadas por Forero (1983). Segundo Milhomens e Proença (2002),

em se tratando de densidade e persistência de pilosidade, essas tendências estariam

relacionadas à variação fenotípica ou genotípica, mas sem caracterizar a especialização de

linhagens. Parte da variação encontrada no tamanho das peças florais foi atribuída a diferentes

níveis de sexualidade das flores, visto que 50% das flores dissecadas apresentavam androceu

normal e pistilos reduzidos (sem óvulos e com estilete curto a ausente). Desta forma, os

autores recomendam que a variedade fulvus seja sinonimizada à variedade típica.

Em sua contribuição para “Flora fanerogâmica do Estado de São Paulo”,

Forero e Costa (2002) mantiveram a distinção entre C. suberosus var. suberosus e C.

suberosus var. fulvus; entretanto, não relacionaram a presença ou ausência de tricomas

glandulosos no estilete ou no ápice do conectivo como parte dos caracteres para sua

identificação.

A outra espécie selecionada para esse estudo, Oxalis cytisoides (Fig. 3), ocorre

em campos e locais úmidos até 950 m de altitude, desde o Ceará até o Rio Grande do Sul e na

Argentina. Segundo Fiaschi e Conceição (2005), essa espécie consiste de subarbustos eretos,

com até 1m, folhas espiraladas, trifolioladas pinadas; subopostas ou com entrenós até 6 cm;

pecíolo canaliculado, piloso; peciólulos pilosos. Os folíolos são glabros a esparsamente

pubescentes na face adaxial e densamente pubescentes na abaxial; lâmina terminal

estreitamente ovada a lanceolada ou rombo-ovada, ápice agudo a atenuado, base aguda;

lâminas laterais oblongas a ovadas, simétricas a levemente assimétricas, ápice agudo a obtuso,

base aguda a arredondada. Inflorescências maiores que a folhagem, consistindo de cimeiras

dicasiais. Sépalas pubescentes; corola rosa, filetes maiores apendiculados e pilosos, menores

glabros; estiletes pilosos. Cápsulas elipsóides a globosas, glabras; carpelos glabros e lóculos

trisseminados. Lourteig (1994), porém, mencionou a ocorrência de pilosidade em ambas as

superfícies da cápsula e duas a três sementes por lóculo.

Oxalis cytisoides assemelha-se muito a O. barrelieri, sendo as duas espécies

reconhecidas com base em pequenas diferenças no formato e pilosidade dos folíolos (Fiaschi

e Conceição, 2005).

Anatomia floral

As flores de Connaraceae são bissexuadas, actinomorfas, heterostilas; cálice

pentâmero na maioria das espécies, sépalas livres ou conatas, geralmente pubescentes; corola

também pentâmera, pétalas livres ou conatas acima da base, usualmente glabras, pontos

glandulosos podem ocorrer nas pétalas de Connarus, Manotes e Vismianthus; dez estames

unidos a partir da base em um tubo de extensão variável, os estames antessépalos são maiores

que os demais; os filetes têm algum tipo de indumento em Connarus, Ellipanthus,

Hemandradenia e Manotes; gineceu formado por um ou cinco carpelos livres, biovulados,

parcial ou totalmente pubescentes na maioria das espécies (Forero, 1983; Jongkind, 1989).

De acordo com Matthews e Endress (2002), a anatomia floral de Connaraceae

é pouco conhecida; no entanto, em seu trabalho, produziram uma relação de caracteres

estruturais potencialmente úteis na determinação das afinidades interfamiliares dentro de

Oxalidales, não se apresentando descrições detalhadas da anatomia das peças florais, à

exceção da vascularização. Os autores consideraram que Connaraceae e Oxalidaceae

compartilham alguns caracteres que são únicos para Oxalidales, sendo alguns deles raros em

eudicotiledôneas. Essas sinapomorfias florais estão entre aquelas citadas por Stevens (2007).

Matthews e Endress (2002) notaram, ainda, similaridades entre os sistemas de

vascularização floral de Connaraceae e Brunelliaceae. Segundo Dickison (1971), o padrão

vascular prevalecente em carpelos de Connaraceae assemelha-se àquele descrito para algumas

espécies de Rosaceae (Sterling, 1953, 1969), Leguminosae (Rao, Sirdeshmukh e Sadar,

1958), Brunelliaceae e Cunoniaceae (Eyde, 1970), consistindo de cinco feixes principais.

Desses, um é o feixe dorsal, dois são feixes ovulares e os outros dois são feixes alas. Os feixes

ovulares vascularizam os óvulos, enquanto alas e dorsal continuam através do estilete. Em

Connarus culionensis var. culionensis e C. punctatus os traços ovulares fundem-se no

ginóforo, de modo que apenas um cordão ovular estende-se a partir da base do carpelo. Em

Cnestidium guianense, Agelaea borneensis e nas espécies de Cnestis estudadas, os carpelos

são vascularizados por um feixe dorsal e dois ventrais. No entanto, em Agelaea sp, os traços

ventrais dividem-se na base do lóculo, originando feixes alas e ovulares.

Sterling (1953, 1963, 1964a, 1964b, 1964c, 1965a, 1965b, 1965c, 1966a,

1966b, 1966c, 1969), por meio de uma série de estudos de morfologia comparada do carpelo

em Rosaceae, concluiu que o padrão vascular ancestral caracteriza-se por feixes alas e

ovulares livres. Padrões mais avançados derivaram da fusão entre feixes alas e ovulares, em

extensões variáveis, para formar os feixes ventrais, sendo esta geralmente relacionada ao

fechamento do carpelo.

Rao, Sirdeshmukh e Sadar (1958), em um trabalho extenso sobre a anatomia

floral de Leguminosae, examinaram várias espécies cuja vascularização carpelar consiste de

cinco traços principais ou é derivada desta condição; porém, não apresentaram uma

interpretação sobre a filogenia do carpelo nessa família.

Corner (1976) considerou a similaridade na vascularização carpelar de

Connaraceae, Rosaceae e Leguminosae como um “exemplo de convergência por meio de

simplificação neotênica”.

Eyde (1970), ao discutir as relações filogenéticas de Brunelliaceae, tomou as

semelhanças observadas na vascularização dos carpelos de Brunellia (Brunelliaceae) e

Acsmithia densiflora (Cunoniaceae) como um dos parâmetros que unem as duas famílias. No

entanto, Dickison (1975b) verificou que somente os carpelos de Acsmithia e Spiraeanthemum

recebem cinco traços vasculares, enquanto que, nos demais gêneros de Cunoniaceae, a

vascularização carpelar principal é derivada de três traços. Ao contrário de Rosaceae e

Connaraceae, não há estádios intermediários entre esses padrões vasculares. Essa e outras

disparidades anatômicas levaram o referido autor a sugerir a remoção de Acsmithia e

Spiraeanthemum de Cunoniaceae.

Em Oxalidaceae, as flores são bissexuadas, radiais, usualmente heterostilas;

com cinco sépalas livres; cinco pétalas distintas ou muito levemente conatas, geralmente

convolutas; freqüentemente dez estames; filetes conatos basalmente, sendo os externos mais

curtos que os internos; grãos de pólen geralmente tricolpados ou tricolporados; usualmente

cinco carpelos conatos; ovário súpero, mais ou menos lobado, com placentação axial;

geralmente cinco estiletes distintos; estigmas freqüentemente capitatos ou punctiformes; em

geral, vários óvulos por lóculo; néctar produzido pela base dos filetes ou por glândulas que se

alternam com as pétalas (Judd et al., 1999).

Estelita-Teixeira (1984) investigou a morfologia floral de Oxalis latifolia, O.

oxyptera e O. corymbosa. Sauer (1933) destacou que a anatomia do carpelo em Oxalidaceae é

similar àquela das sépalas. Matthews e Endress (2002) consideraram que o mesofilo das

sépalas das Oxalidaceae, constituído por células especialmente grandes, representa uma

autapomorfia para Oxalidales.

Estudos sobre a vascularização floral de Oxalidaceae conduzidos por Al-

Nowaihi e Khalifa (1971), Narayana (1966), Kumar (1976) e Estelita-Teixeira (1980a)

evidenciaram uma tendência à redução dos feixes carpelares dorsais. Em algumas famílias,

como Meliaceae (Nair, 1963) e Malpighiaceae (Lorenzo, 1981), ocorre um processo evolutivo

similar. Segundo Estelita-Teixeira (1980a), em Oxalis latifolia, O. oxyptera e O. corymbosa,

observa-se a fusão de traços marginais de carpelos adjacentes, assim como de traços ventrais.

Nos espécimes de Oxalis examinados por Al-Nowaihi e Khalifa (1971), Narayana (1966) e

Kumar (1976), esses traços vasculares mostram-se conatos desde sua origem. Tendo em vista

que os feixes ventrais apresentam orientação invertida em relação ao eixo floral, logo acima

da base do ovário, Estelita-Teixeira (1980a) concluiu que há uma tendência à substituição da

placentação parietal (Narayana, 1966; Kumar, 1976) pela axial.

A emissão de traços estaminais antepétalos em um nível inferior àquele de

traços de estames antessépalos foi considerada uma confirmação anatômica da

obdiplostemonia em Oxalidaceae (Al-Nowaihi e Khalifa, 1971; Narayana, 1966; Kumar,

1976; Estelita-Teixeira, 1980a). No entanto, Al-Nowaihi e Khalifa (1971) mencionam que,

em O. cernua, o androceu obdiplostêmone somente é reconhecido do ponto de vista

morfológico, pois os traços estaminais separam-se do cilindro central no mesmo nível. Ronse

Decraene e Smets (1995) relataram que, em taxa obdiplostêmones, os traços de estames

antepétalos divergem em um nível inferior, equivalente ou superior àquele dos traços

antessépalos; portanto, não há uma correlação entre vascularização e obdiplostemonia.

O androceu obdiplostêmone representa uma interrupção da seqüência usual de

alternância dos verticilos florais, devido à posição oposta às pétalas do verticilo externo de

estames. Eames (1977) agrupou em três teorias as diversas interpretações sobre a

obdiplostemonia, as quais explicam a sua origem pela adição de um novo verticilo de estames

(teoria da intercalação), pela perda de um verticilo externo de estames (teoria da redução) ou

pelo deslocamento ontogenético (teoria do deslocamento).

Recentemente, vários estudos sobre a ontogenia floral de taxa obdiplostêmones

revelaram que os estames surgem na seqüência centrípeta usual. Desta forma, a

obdiplostemonia foi interpretada como um fenômeno secundário causado pelo crescimento

diferencial e deslocamento dos primórdios de estames. Esses resultados corroboram a teoria

do deslocamento, proposta originalmente por Čelakovský em 1875 (Ronse Decraene e Smets,

1995; Weberling, 1992).

A partir da observação de casos de obdiplostemonia que não se ajustam às

premissas de um deslocamento, Ronse Decraene e Smets (1995) propuseram a distinção entre

três vias de desenvolvimento da obdiplostemonia: “obdiplostemonia primária” (os estames

antepétalos surgem antes dos estames antessépalos e não há deslocamento secundário),

“obdiplostemonia secundária” (as partes florais iniciam-se na seqüência acrópeta normal, mas

os primórdios de estames antepétalos são deslocados para uma posição externa àquela dos

estames antessépalos durante a ontogenia) e “obdiplostemonia centrífuga” (os primórdios de

estames antepétalos surgem após os primórdios antessépalos e constituem o verticilo externo).

Em termos evolutivos, admite-se que a obdiplostemonia é uma condição

intermediária na transição entre a diplostemonia e a haplostemonia ou, menos freqüentemente,

na transição entre diplostemonia e obhaplostemonia (Ronse Decraene e Smets, 1995, 1997).

Heterostilia

Matthews e Endress (2002) citaram a ocorrência de heterostilia dimórfica e

trimórfica em Connaraceae e Oxalidaceae e ressaltaram que o compartilhamento de

heterostilia trimórfica é especialmente significante, visto que é conhecida para poucas

famílias de angiospermas. Contudo, Vuilleumier (1967), Ganders (1979) e Barrett (2002)

consideraram que a heterostilia originou-se claramente em diversas ocasiões, especialmente

em famílias com um grau intermediário de avanço evolutivo, as quais não formam um grupo

estritamente relacionado.

Os relatos sobre heterostilia abrangem cerca de vinte e oito famílias de

angiospermas. A maioria delas apresenta heterostilia dimórfica (distilia), enquanto que a

heterostilia trimórfica (tristilia) é mais rara, sendo conhecida apenas em seis famílias (Barrett

et al., 2000).

As espécies portadoras de distilia caracterizam-se pela existência de plantas

brevistilas e longistilas em suas populações, enquanto aquelas com tristilia têm populações

constituídas por plantas brevistilas, medistilas (ou mesostilas) e longistilas. Em ambos os

casos, há uma correspondência recíproca entre as posições de anteras e estigmas das formas

florais. No entanto, os padrões morfológicos que distinguem as formas florais podem incluir

outros polimorfismos.

Em Biophytum sensitivum (Mayura Devi, 1966), Oxalis tuberosa (Gibbs, 1976)

e O. squamata (Marco e Arroyo, 1998), os grãos de pólen maiores são produzidos pelos

estames longos, o pólen de tamanho intermediário pelos estames médios e os grãos menores

pelos estames curtos. Entretanto, esse trimorfismo é pouco característico em Oxalis alpina

(Weller, 1976).

Em várias espécies tristilas, os estames médios e curtos não diferem entre si

quanto à produção de pólen e os verticilos longos produzem quantidades consideravelmente

menores; tais relações foram descritas para O. squamata (Marco e Arroyo, 1998). Em O.

alpina, Weller (1976) verificou que os estames curtos produzem mais pólen que os médios e

estes produzem mais que os longos.

Os estigmas das formas florais podem diferir na forma, tamanho ou, mais

comumente, no tamanho das papilas estigmáticas. Em Oxalis tuberosa, os estigmas das três

formas florais distinguem-se quanto a estes três parâmetros (Gibbs, 1976).

Marco e Arroyo (1998) registraram diferenças no comprimento de cálice e

corola e pubescência estilar de O. squamata, as quais representam polimorfismos pouco

comuns em plantas heterostilas.

Ao conjunto de caracteres morfológicos que distinguem as formas florais,

associa-se um sistema de auto-incompatibilidade dialélico que previne fertilizações após

autopolinizações ou polinizações entre anteras e estigmas situados em níveis diferentes

(polinizações ilegítimas). Desta forma, o estabelecimento de sementes decorre, em geral, de

polinizações entre formas com anteras e estigmas em níveis equivalentes (polinizações

legítimas) (Ganders, 1979). Em espécies distilas, com dois verticilos de estames em cada

forma floral, geralmente não há nenhuma diferenciação funcional entre eles (Ornduff, 1972).

Apenas autopolinizações e polinizações entre flores da mesma forma floral são ilegítimas em

populações com essa característica (Weller, 1976).

A reação de auto-incompatibilidade, no entanto, varia em diferentes taxa

(Ganders, 1979). Em Oxalidaceae, as relações de incompatibilidade foram estudadas em

Biophytum sensitivum (Mayura Devi, 1964), Sarcotheca celebica (Lack e Kevan, 1987),

Oxalis suksdorfii (Ornduff, 1964), O. priceae (Mulcahy, 1964), O. alpina (Weller, 1976,

1981, 1986) e O. squamata (Marco e Arroyo. 1998). Em Oxalis seção Corniculatae (Ornduff,

1972), particularmente, quase toda estratégia evolutiva leva à ruptura da incompatibilidade

trimórfica e, em alguns casos, ao desenvolvimento da distilia, semi-homostilia e quase-

homostilia.

Em Connaraceae, as relações de incompatibilidade foram estudadas somente

em Byrsocarpus coccineus (Baker, 1962), apesar da diversidade de tipos de heterostilia

descritos por Lemmens (1989). Segundo este autor, a heterostilia em Connaraceae parece

seguir duas tendências filogenéticas a partir da tristilia: uma delas leva as espécies com cinco

carpelos à homostilia; a outra, atuando nas Connaraceae com gineceu unicarpelar, resulta na

dioicia. Em ambas as vias, a distilia representa um estádio intermediário.

Morfologia dos frutos

Os frutos de Connaraceae desenvolvem-se de gineceu unicarpelar ou

apocárpico. Neste último caso, geralmente apenas um frutíolo é produzido. O pericarpo é seco

ou mais ou menos carnoso, deiscente pela sutura ventral ou indeiscente em Jollydora e

Hemandradenia (Jongkind, 1989). Externamente, os frutos são pubescentes a glabros. Em

Cnestis e em muitas espécies de Connarus, o endocarpo é piloso. Neste último gênero, os

tricomas podem ser glandulares, não-glandulares ou de ambos os tipos (Dickison, 1971;

Corner, 1976; Forero, 1983; Jongkind, 1989; Forero e Costa, 2002). Segundo Jongkind

(1989), em todas as espécies de Connarus, o desenvolvimento da semente é incipiente até a

completa expansão do folículo. Um padrão similar de desenvolvimento foi observado em

Leguminosae (Oliveira e Beltrati, 1993).

Informações sobre a anatomia dos frutos de Connaraceae restringem-se a

algumas observações realizadas por Corner (1976), por ocasião do estudo das sementes de

espécies dessa família.

Em Oxalidaceae, a estrutura do pericarpo de várias espécies de Oxalis foi

descrita por Sauer (1933) e Estelita-Teixeira (1980b). O fruto de Oxalis é uma cápsula rimosa,

a qual se caracteriza pela deiscência loculicida, sem a formação de valvas (Barroso et al.,

1999). Sua superfície pode ser glabra ou pilosa e várias espécies desenvolvem tricomas

endocárpicos (Lourteig, 1975, 1994, 2000; Fiaschi e Conceição, 2005). A anatomia do fruto

de Averrhoa, classificado como um campomanesoídeo (Barroso et al., 1999) foi analisada por

Dave, Patel e Rupera (1975), Kumar (1975) e Rao e Kothagoda (1984).

Morfologia da semente

As sementes de Connaraceae derivam de óvulos hemítropos (Corner, 1976;

Jongkind, 1989; Matthews e Endress, 2002), anátropos (Jongkind, 1989) ou quase ortótropos

(Matthews e Endress, 2002), bitegumentados e crassinucelados (Corner, 1976). Há dois

óvulos colaterais por carpelo, mas na maioria das espécies somente um deles desenvolve-se

em semente (Jongkind, 1989).

Uma característica comum a todas as Connaraceae é a suculência, pelos menos

parcial, do tegumento (Jongkind, 1989). Esse tecido carnoso usualmente se desenvolve da

rafe-calaza, estendendo-se como uma margem livre sobre parte da testa. Corner (1976)

referiu-se a ele como um complexo arilo-sarcotesta calazal, considerando a base dessa

excrescência de natureza sarcotestal e a sua porção livre, um arilo. Jongkind (1989) preferiu

empregar o termo sarcotesta por entender que esse tecido é contínuo e derivado da testa. Esses

pontos de vista refletem a controvérsia existente sobre a terminologia aplicada a apêndices

carnosos de sementes, a qual foi revisada por Corner (1976), Kapil, Bor e Bouman (1980),

entre outros. Em alguns gêneros, como Jollydora, Hemandradenia e Manotes, quase toda a

testa torna-se carnosa.

Segundo Corner (1976), a semente de Connaraceae é uma das mais distintas

entre dicotiledôneas. Suas principais características são a forma pré-rafeal, a qual se

caracteriza por um grande distanciamento entre a micrópila e o hilo, a testa preta com

paliçada exotestal firme mas não lignificada, o exotégmen fibroso, a presença de feixe

vascular pré-rafeal, o arilo calazal, o embrião grande e o aroma semelhante ao de feijão

exalado por tecidos triturados. O autor examinou a anatomia das sementes de dez espécies de

Connaraceae, sendo este estudo a única referência sobre o assunto.

Jongkind (1989) destacou que a estrutura da semente com relação ao

endosperma e cotilédones é muito variável. Em Manotes e algumas espécies de Cnestis, os

cotilédones achatados, finos e pequenos estão envoltos por endosperma abundante, enquanto

que as sementes exalbuminosas de Agelaea, Connarus, Jollydora e Rourea apresentam

cotilédones plano-convexos. Combinações intermediárias ocorrem em Burttia,

Pseudoconnarus e algumas espécies de Cnestis, que possuem cotilédones achatados, um tanto

carnosos, embebidos em endosperma abundante, e em Cnestidium, Ellipanthus,

Hemandradenia e Vismianthus com cotilédones plano-convexos e endosperma escasso.

De acordo com Corner (1976), as reservas das sementes de Cnestis palala e

Connarus grandis consistem de óleos. Forero (1983) mencionou o acúmulo de taninos e óleos

(Rourea) e proteínas e outras secreções características (Connarus) em sementes

exalbuminosas. Na semente de Pseudoconnarus, o endosperma abundante continha óleos. Em

Cnestidium, o endosperma, com espessura de duas camadas de células, e os cotilédones

armazenaram amido.

As sementes das Oxalidaceae desenvolvem-se de óvulos anátropos,

bitegumentados e tenuinucelados (Corner, 1976). A testa mucilaginosa é freqüentemente

confundida com um arilo (Stevens, 2007). Em vários gêneros, podem ocorrer ruminações nos

tegumentos que podem atingir o endosperma (Corner, 1976; Boesewinkel, 1985).

Em Oxalis e Averrhoa, as ruminações da semente são produzidas pela

atividade mitótica de grupos de células da mesotesta; em Biophytum, são derivadas,

exclusivamente, da expansão radial das células desse tecido (Boesewinkel, 1985; Werker,

1997).

Em Biophytum e Oxalis, ocorre um mecanismo incomum de dispersão das

sementes, que envolve a ruptura brusca da testa e a ejeção da parte interna. A separação do

tegumento externo é atribuída ao estiramento circunferencial da espessa membrana cuticular,

durante o desenvolvimento da semente, e à turgescência elevada do parênquima mesotestal,

resultante da degradação enzimática de amido pouco antes da maturação da semente. A tensão

gerada por esses processos causa o rompimento das paredes das células com cristais, que

constituem a endotesta, e a liberação balística da semente, revestida pelo tégmen e,

parcialmente, pela endotesta (Corner, 1976; Werker, 1997). Com exceção de Biophytum, os

demais gêneros de Oxalidaceae apresentam exotégmen fibroso. Corner (1976) sugeriu que

Oxalidaceae relaciona-se filogeneticamente a outras famílias portadoras desse caráter, entre as

quais Connaraceae.

O endosperma é formado por divisões nucleares livres, mas algumas espécies

possuem sementes exalbuminosas (Corner, 1976). Salter (1952) mencionou que várias

espécies de Oxalis da África do Sul não apresentam endosperma na semente madura. Barroso

et al. (1999) classificaram o embrião de Oxalis como espatulado. Corner (1976) e

Boesewinkel (1985) relataram que as reservas da semente consistem de óleos. Jones e Earle

(1966) quantificaram o conteúdo de amido, óleos e proteínas das sementes de Oxalis

europaea. Como resultado obteve-se 0; 47,6 e 21,9% dessas substâncias, respectivamente.

CAPÍTULO I

Trabalho elaborado segundo as normas da Revista de Biologia Tropical

Tricomas glandulares em Connarus suberosus (Connaraceae): distribuição, organização

estrutural e prováveis funções

JOÃO DONIZETE DENARDI

, DENISE MARIA TROMBERT OLIVEIRA

e ELDER

ANTONIO SOUSA PAIVA

4,5

Título resumido: Tricomas glandulares em Connarus suberosus

. Parte da tese de doutorado do primeiro autor, Programa de Pós-graduação em Ciências

Biológicas (Botânica), Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências, Câmpus de

Botucatu.

. Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul, Unidade Universitária de Coxim, Rua

Pereira Gomes, 355, Vila Santa Maria, 79.400-000, Coxim, MS, Brasil.

. Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de

Botânica, Avenida Antonio Carlos, 6627, Pampulha, Caixa Postal 486, 31.270-901, Belo

Horizonte, MG, Brasil.

. Autor para correspondência: epaiv[email protected]fmg.br

Resumo

Connarus suberosus Planch., Connaraceae típica de cerrado, apresenta inflorescências e

ramos vegetativos jovens densamente revestidos por tricomas dendróides. Como parte do

indumento desta espécie, relata-se, neste estudo, a ocorrência de tricomas glandulares (TGs),

os quais foram analisados quanto à localização, origem e estrutura, por meio de técnicas

usuais de microscopia de luz, microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Os TGs

ocorrem na face abaxial de folíolos, bractéolas e sépalas, assim como na superfície de

pecíolos, ráquis foliares, caules, eixos de inflorescências e frutos, durante os estádios juvenis

destes órgãos. Os TGs consistem de pedúnculo multicelular, unisseriado, cujas células se

mostram fenólicas, e de uma porção glandular multicelular que, na fase secretora, apresenta

acúmulo de compostos pécticos, amido e gotas lipídicas. O acúmulo de óleo na forma de

gotas dispersas no citosol é expressivo, ocupando grande parte do volume celular. As células

secretoras possuem paredes delgadas, citoplasma denso e núcleo volumoso com nucléolo

evidente. No citoplasma destas células predominam mitocôndrias, plastídios e dictiossomos.

Na fase secretora, observa-se hidrólise do amido presente nos plastídios, redução na

densidade do estroma plastidial e fusão de plastídios com vacúolos. Observam-se, ainda,

indícios da conversão de plastídios em vacúolos. Testes histoquímicos indicam presença de

secreção de natureza péctica, tanto no citosol quanto no espaço subcuticular, entretanto, em

pequenas quantidades. Nos estádios finais de atividade dos TGs, os quais são caducos,

observou-se escurecimento protoplasmático em algumas células secretoras, o que sugere a

ocorrência de morte celular programada. Em C. suberosus, a ocorrência de TGs nas

superfícies expostas de órgãos em desenvolvimento, associada à natureza química dos

produtos de secreção e reserva, sugere que estas estruturas possam atuar como corpos de

alimentação. Estudos ecológicos são necessários para esclarecer o papel destes tricomas

nestas supostas interações.

Palavras-chave: Cerrado, Connaraceae, corpos de alimentação, secreção, tricoma glandular,

ultra-estrutura celular

Introdução

Os tricomas, projeções de natureza exclusivamente epidérmica, apresentam uma

enorme diversidade morfológica tendo, assim, grande valor taxonômico (ver Solereder, 1908).

Segundo Werker (2000), os estudos de ontogênese são importantes para a correta

denominação destas estruturas, sobretudo pela similaridade morfológica observada entre

tricomas e emergências.

Diversos autores separam os tricomas em dois grandes grupos: glandulares e não

glandulares. Para os tricomas não glandulares ou tectores, a distinção entre diferentes tipos é

feita, sobretudo, com base em caracteres morfológicos. Para os tricomas glandulares, a

classificação leva em consideração, dentre outros aspectos, a composição química da

secreção, seu modo de produção, a posição do tricoma no corpo vegetal e aspectos estruturais

e funcionais (Werker 2000). Tricomas glandulares estão envolvidos na síntese de diversos

compostos, tais como óleos, açúcares, sais, enzimas digestivas e outros, desempenhando

importantes papéis na interação planta-ambiente (Fahn 1979).

Os tricomas, tanto na forma isolada quanto em agrupamentos, podem constituir

estruturas secretoras diversas, como nectários, elaióforos e glândulas de sal (Fahn 1979).

Outras estruturas envolvidas nas interações planta-ambiente, tais como coléteres (Renobales

et al. 2001, Paiva e Machado 2006a) e corpos de alimentação ou similares (Rickson e Risch

1984) são, em algumas espécies, caracterizados como tricomas.

Estruturas secretoras podem ocupar várias posições nas diferentes partes do corpo

do vegetal e podem ocorrer em todos os seus órgãos, em alguns destes ou, então, se restringir

a apenas um órgão (Solereder 1908). Por vezes, diferentes estruturas secretoras estão

presentes em diferentes partes de uma mesma planta (Fahn 1979, Metcalfe e Chalk 1979) e

são de grande valor taxonômico, como ocorre com os tricomas glandulares (Solereder 1908).

No Brasil, considerado o centro de diversificação de Connaraceae nos

Neotrópicos, há cerca de 64 espécies da família, sendo 30 pertencentes a Connarus (Forero

1983, Forero e Costa 2002). Segundo Ratter et al. (2001), Connarus suberosus Planch. é uma

das espécies mais freqüentes da flora lenhosa de cerrado senso lato, ocorrendo em 75% dos

levantamentos florísticos que os autores realizaram em dez estados brasileiros. Forero (1983)

relatou que C. suberosus apresenta caracteres comumente encontrados em plantas de cerrado,

como a casca espessa e suberosa, ramos tortuosos e pilosidade densa. De acordo com o autor,

ramos vegetativos jovens, inflorescências e frutos em estádios iniciais de desenvolvimento

mostram indumento ferrugíneo-tomentoso, denso, e tricomas glandulares que podem estar

presentes em pétalas, estames e estilete.

No presente estudo, são descritos a localização, desenvolvimento, estrutura e

aspectos ultra-estruturais e histoquímicos dos tricomas glandulares em C. suberosus,

buscando dados que possam auxiliar na compreensão da função destas estruturas.

Material e métodos

Coleta de material para estudos morfológicos

As coletas foram realizadas em indivíduos adultos de Connarus suberosus Planch.

ocorrentes na região de Botucatu, São Paulo (22º 53’ 11,4”S, 48º 26’ 07,8”W), em diferentes

fases fenológicas. Foram coletados ápices vegetativos e reprodutivos, folhas e frutos em

diferentes etapas de desenvolvimento, botões florais e flores em antese. As amostras foram

estudadas ao microscópio estereoscópico para caracterização dos padrões de distribuição e

ocorrência.

Microscopia de luz

Para ontogênese e caracterização anatômica, foram coletadas amostras de ápices

caulinares e folhas em diferentes fases de desenvolvimento. O material foi fixado em solução

de Karnovsky (Karnovsky 1965) por 24 horas, transferido para álcool etílico 70% (Jensen

1962), desidratado em série etílica (Johansen 1940) e submetido a pré-infiltração e infiltração

em metacrilato (Leica®), segundo métodos usuais. Cortes transversais e longitudinais (5 µm)

foram obtidos em micrótomo rotativo, montados em lâmina e corados com azul de toluidina

0,05% pH 4,7 (O’Brien et al. 1964).

Testes histoquímicos

Foram utilizados material fixado e a fresco. Para a caracterização histoquímica,

foram empregados os seguintes testes, com os respectivos controles: Sudan black B para

lipídios em geral (Pearse 1980); lugol para identificação de amido (Johansen 1940); solução

aquosa de vermelho de rutênio a 0,02% para detecção de substâncias pécticas (Jensen 1962).

Microscopia eletrônica de transmissão

Amostras foram fixadas em mistura de Karnovsky (Karnovsky 1965) por 24

horas, pós-fixadas em tetróxido de ósmio (1%, tampão fosfato 0,1 M, pH 7,2) e processadas

segundo métodos usuais (Roland 1978). As secções ultra-finas foram contrastadas com

acetato de uranila e citrato de chumbo e examinadas em microscópio de transmissão Philips

CM 100 a 60 KV.

Microscopia eletrônica de varredura

Amostras foram fixadas em glutaraldeído 2,5% (tampão fosfato 0,1 M, pH 7,2),

desidratadas em série etílica, submetidas à desidratação em ponto crítico com CO

metalizadas com camada de 10nm de ouro (Robards 1978). As amostras foram examinadas

em microscópio eletrônico de varredura Quanta 200 (Fei Company), sendo as imagens obtidas

digitalmente.

Resultados

Distribuição e ontogênese

As folhas de Connarus suberosus são compostas e, quando jovens, apresentam

folíolos conduplicados. Os tricomas glandulares (TGs) ocorrem na face abaxial de folíolos,

bractéolas e sépalas, assim como na superfície de caules, eixos de inflorescências e frutos,

durante os estádios juvenis destes órgãos. Folhas jovens apresentam numerosos TGs na face

abaxial de folíolos, especialmente na região ao longo da nervura mediana; essas estruturas

secretoras também ocorrem, embora em menor número, na superfície do pecíolo e da ráquis,

principalmente na face abaxial. Em caules jovens e eixos de inflorescências, a presença de

TGs parece ser ocasional. Freqüentemente, os TGs encontram-se ocultos em meio a tricomas

dendróides (fig. 1A-C), que conferem ao indumento o aspecto ferrugíneo-tomentoso.

O desenvolvimento do tricoma glandular inicia-se com a expansão distal de uma

célula epidérmica, produzindo uma saliência globosa na superfície do órgão. Como resultado

da divisão periclinal da célula inicial, delimita-se a célula basal do TG e uma célula apical

(fig. 2A). A célula basal, de formato afunilado, completa seu processo de diferenciação nesta

fase. Da divisão periclinal da célula apical, forma-se, no sentido proximal, a célula inicial do

pedúnculo, mantendo-se no ápice a inicial da porção secretora (fig. 2B). Da célula inicial do

pedúnculo formam-se, por sucessivas divisões periclinais, o pedúnculo multicelular e

unisseriado (fig. 2C). Neste estádio, a célula inicial da porção secretora permanece em

interfase, reiniciando as divisões após a formação de pedúnculo. Desta célula, por divisões em

planos diversos, resulta uma porção apical, secretora, multicelular (fig. 2D-F).

Aspectos estruturais e histoquímicos

As células do pedúnculo são curtas, de formato cilíndrico (fig. 2D-F); a parede

anticlinal é cuticulada e impregnada por substâncias de natureza lipídica. Nos TGs maduros,

as células do pedúnculo são vacuoladas, ficando o restante do citoplasma restrito a uma

estreita faixa comprimida junto à parede celular. Não há, nestas células, acúmulo de

compostos de reserva e o vacúolo encerra grande quantidade de compostos de natureza

fenólica.

As células secretoras estão dispostas de modo compacto e apresentam paredes

delgadas, citoplasma denso e núcleo volumoso com nucléolo evidente (fig. 2E-F). Durante a

fase secretora, observou-se, no citoplasma destas células, a presença de compostos pécticos,

amido e gotas lipídicas. Nas etapas finais de desenvolvimento dos TGs, observou-se aumento

do vacuoma e escurecimento protoplasmático de algumas células secretoras, o qual evolui

para as células vizinhas, culminando no encerramento da atividade secretora e na morte dos

TGs, os quais são caducos.

O acúmulo de óleo nas células secretoras é expressivo em TGs maduros,

ocorrendo na forma de gotas dispersas no citosol e ocupando grande parte do volume celular.

Testes histoquímicos indicam presença de secreção de natureza péctica, tanto no citosol

quanto no espaço subcuticular, entretanto, em pequenas quantidades. Nas observações em

campo e laboratório, não foram encontrados sinais de extravasamento da secreção.

Ultra-estrutura e secreção

As células secretoras apresentam-se justapostas, com citoplasma denso, núcleo

volumoso e nucléolo conspícuo (fig. 3A-B). No citoplasma de células secretoras ativas,

observam-se mitocôndrias, dictiossomos, plastídios e ribossomos, tanto livres quanto

associados a segmentos de retículo endoplasmático. As mitocôndrias possuem cristas bem

desenvolvidas e, algumas vezes, encontram-se justapostas a plastídios (fig. 3C-D). O retículo

endoplasmático aparece em estreita associação com os plastídios e, também, localizado muito

próximo à membrana plasmática (fig. 3C).

Os plastídios, de formas variadas, apresentam sistema de membranas inconspícuo,

estroma elétron-lucente e grãos de amido. Nos TGs maduros há evidências de hidrólise do

amido, quando o estroma torna-se mais elétron-denso e floculado (fig. 3C). A ocorrência de

fusões de plastídios com vacúolos foi observada em células secretoras (fig. 3E).

Observam-se indícios de ruptura da membrana interna dos plastídios, associada à

redução da densidade do estroma e hidrólise dos grãos de amido. Os vacúolos, de tamanho

similar ao dos plastídios, apresentam conteúdo amorfo que se assemelha ao estroma plastidial

(fig. 3C).

Os dictiossomos constituem-se de quatro a sete cisternas, cujas porções periféricas

liberam vesículas pequenas, pouco densas, que se dispersam na matriz citoplasmática. Outros

aspectos ultra-estruturais que se destacam referem-se à presença de corpos lipídicos no

citoplasma, ao vacuoma pouco volumoso, ao espaço periplasmático bem desenvolvido e ao

desprendimento de trechos da cutícula, originando pequenos espaços subcuticulares (fig. 3B).

Ainda nas células secretoras, observa-se a presença de corpos vesiculares e indícios de

secreção no espaço periplasmático.

Em muitos TGs, ao final do estágio secretor, as células exibem citoplasma denso e

escuro, aumento da quantidade de retículo endoplasmático rugoso e dictiossomos ativos (fig.

3F-G). Nestas células os vacúolos apresentam inclusões membranares.

Discussão

Em Connarus suberosus, o indumento denso formado pelos tricomas dendróides

parece constituir uma vantagem adaptativa, exercendo proteção contra a dessecação, função

normalmente atribuída a este tipo de indumento (Fahn e Cutler 1992). Para órgãos em

desenvolvimento, ainda não fotossintetizantes, o transporte de água pelo xilema não é

eficiente (Nobel et al. 1994), o que os torna particularmente vulneráveis à dessecação. No

caso de C. suberosus, esta vulnerabilidade é ainda mais relevante, uma vez que a espécie é

típica de ambientes de cerrado, onde o clima é sazonal, com períodos de baixa umidade

relativa, temperatura elevada e alta luminosidade (Franco 2002), o que parece favorecer a

seleção de defesas estruturais contra a dessecação.

Estudos prévios sobre Connaraceae demonstraram a ocorrência de tricomas

glandulares (TGs) em Pseudoconnarus (Schellenberg 1938), Connarus, Rourea (Forero 1983,

Jongkind 1989), Manotes (Dickison 1973, Jongkind 1989), Cnestis e Jollydora (Jongkind

1989). Apesar destes relatos, pouco se sabe a respeito da organização estrutural destes

tricomas, sendo que aspectos ultra-estruturais, a biologia da secreção, composição química da

secreção e possíveis envolvimentos em interações planta-ambiente são absolutamente

desconhecidos.

A presença de compostos de natureza lipídica na parede anticlinal das células do

pedúnculo, como observado nos TGs de C. suberosus, é característica de tricomas envolvidos

em processos secretores (ver Fahn 1979); além de atuar impedindo o refluxo de secreção,

indica que os precursores da secreção não chegam até as células secretoras pela rota

apoplástica. Considerando-se os aspectos estruturais e histoquímicos das células do pedúnculo

e a hidrólise do amido observada nas células secretoras, é possível inferir que o amido

constitui uma fonte de energia para a secreção, tal como observado em outras estruturas

secretoras, onde o amido é a forma predominante de reserva energética (Fahn 1979, Paiva &

Machado 2008).

A grande quantidade de mitocôndrias, como se observou no TG de C. suberosus,

é uma característica marcante de células secretoras (Fahn 1988), estando relacionada a

atividade metabólica intensa (Horner e Lersten 1968, Mohan e Inamdar 1986). Segundo Paiva

e Machado (2008), a justaposição de mitocôndrias e amiloplastos pode evidenciar o

requerimento de energia durante a hidrólise do amido. Na espécie aqui estudada, este processo

parece fornecer precursores para a síntese de polissacarídeos, que ocorre nos dictiossomos

(Andreeva et al. 1998). As vesículas que se desprendem dessas organelas, possivelmente,

realizam o transporte dos produtos de secreção até a membrana plasmática; no entanto, os

espaços periplasmático e subcuticular não apresentaram acúmulo desses materiais.

A observação da fusão de plastídios com vacúolos, verificada nas células

secretoras dos TGs, e a similaridade entre o conteúdo vacuolar e o estroma plastidial, sugere a

ocorrência de conversão de plastídios em vacúolos, como reportado para outros tipos de

células secretoras (Paiva e Machado 2008). Pode-se inferir que este processo culmina na

ampliação do vacuoma, outro fato marcante em diversos tipos de células secretoras (Fahn

1979). Deve-se ressaltar que esta conversão de plastídios é observada nos estágios finais de

atividade celular e parece constituir-se num dos primeiros sinais de morte celular programada

(MCP) que verificamos ocorrer nestas células.

Também o escurecimento protoplasmático, observado em algumas células

secretoras dos TGs, parece constituir evidência de MCP, conforme descreveram Mohan e

Inamdar (1986), Zer e Fahn (1992) e Paiva e Machado (2006a).

A morte celular observada nas células secretoras do TG não pode ser interpretada

como apoptose, uma vez que características marcantes deste processo tais como vesiculações

na carioteca e presença de corpos apoptóticos não foram observadas. Por outro lado, segundo

Greenberg (1996), muitas das características da apoptose estão ausentes nas células vegetais

que sofrem MCP. A co-existência de células em diferentes estádios de morte celular com

células íntegras e de aspecto saudável reduz as possibilidades destas observações serem

decorrentes de artefatos de técnica ou problemas de fixação e demonstra ser um processo

normal no desenvolvimento destes TGs. A ocorrência de MCP em tricomas foi reportada por

Paiva e Machado (2006a) em coléteres de Hymenaea stigonocarpa (Fabaceae).

Os folíolos jovens de C. suberosus, ainda não expandidos, apresentam limbo

conduplicado, deixando apenas a face abaxial exposta, o que parece explicar o padrão de

distribuição de tricomas glandulares. Similarmente, bractéolas e sépalas, que constituem o

invólucro protetor de botões florais em diferentes estádios da ontogênese, apresentam a face

abaxial exposta. Assim, a localização dos TGs nesta espécie parece corroborar a interpretação

da função de proteção de órgãos em desenvolvimento (Mueller 1985, Thomas 1991), visto

que ocorrem em superfícies expostas ao ambiente, as quais são revestidas também por

tricomas tectores dendróides. Algumas das funções atribuídas a tricomas tectores e

glandulares relacionam-se à regulação da temperatura, ao aumento da reflexão luminosa e à

redução da transpiração (Wagner et al. 2004). O fato destes TGs ocorrerem apenas na fase

juvenil dos órgãos, os tornam similares a coléteres, de acordo com os conceitos adotados por

Thomas (1991).

Segundo Thomas (1991), o termo coléter é empregado para designar estruturas

secretoras de origem mista, ou seja, formadas com a participação tanto da protoderme quanto

do meristema fundamental. Renobales et al. (2001) consideraram que os tricomas de

Gentiana podem ser interpretados funcionalmente como coléteres, pois embora se

desenvolvam exclusivamente da camada dérmica, sua secreção é mucilaginosa. Há, na

literatura, relatos da ocorrência de coléteres de origem exclusivamente protodérmica

(Renobales et al. 2001, Paiva e Machado 2006a).

Os TGs presentes nos órgãos aéreos de C. suberosus, embora mostrem grande

similaridade estrutural com coléteres e apresentem compostos pécticos e lipídicos comumente

reportados nestas estruturas secretoras (Mohan e Inamdar 1986, Thomas e Dave 1989,

Appezzato-da-Glória e Estelita 2000, Klein et al. 2004), não reúnem todos os atributos para

serem considerados com tal, uma vez que não foi observado o extravasamento de secreção. A

liberação, pelo coléter, de secreção péctica ou resinosa é fundamental para que ocorra a

proteção contra dessecação e a lubrificação de órgãos em desenvolvimento. Fica, ainda, a

possibilidade de se tratar de estrutura com perda de função ou, do ponto de vista oposto, de

estrutura com processo evolutivo em curso; tendo por base esses aspectos, os TGs de C.

suberosus poderiam ser considerados coléteres não funcionais. Estudos adicionais e

prospecção de estruturas similares em Connaraceae são importantes para ajudar a elucidar

estas hipóteses.

Em C. suberosus, a ocorrência dos TGs restrita à fase juvenil dos órgãos,

associada à quantidade e natureza química dos compostos de reserva, constitui evidência de

que estas estruturas atuam na proteção dos órgãos em desenvolvimento, função atribuída a

corpos de alimentação em diversas espécies vegetais (O’Dowd 1980). A presença de reserva

predominantemente lipídica é reportada para corpos de alimentação (O’Dowd 1980), embora

outros compostos ricos em energia ou proteína sejam oferecidos nestas estruturas (O’Dowd

1982).

A quantidade de óleo acumulado nos TGs de C. suberosus faz destas estruturas

recursos alimentares interessantes. Assim, é possível que estes TGs atuem como mediadores

de interações entre a planta e formigas, as quais exercem proteção contra herbivoria, como

observado em diversas espécies vegetais portadoras de corpos de alimentação (Rickson 1980,

Heil et al. 1998). Sabe-se que corpos de alimentação atuam na manutenção de relação

mutualística entre planta e formigas, as quais beneficiam a planta por oferecerem proteção

contra herbívoros (O’Dowd 1980, 1982).

A restrição temporal de oferta dos TGs de C. suberosus, os quais são limitados à

fase juvenil dos órgãos, é característica de outras estruturas envolvidas em interações com

formigas que oferecem proteção, como em nectários extraflorais (Paiva e Machado 2006b),

além de corpos de alimentação. No caso dos nectários extraflorais, os órgãos jovens são

protegidos por formigas nos estágios de maior vulnerabilidade à herbivoria, quando as defesas

químicas e estruturais ainda não estão plenamente desenvolvidas (Paiva e Machado 2006b).

Diante destas considerações, observações em campo e estudos das interações

planta-ambiente, bem como a análise química dos compostos de reserva são imprescindíveis

para elucidar o possível envolvimento dos TGs, presentes em C. suberosus, como recompensa

alimentar.

Agradecimentos – A Luciano C. Milhomens, por realizar a identificação da espécie, e à

FAPESP (Programa BIOTA, proc. n

00/12469-3), pelo apoio financeiro. João D. Denardi

agradece à CAPES pela concessão da bolsa PICDT e D.M.T. Oliveira ao CNPq, pela bolsa de

produtividade em pesquisa.

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Ilustrações

Figura 1. Limbo de Connarus suberosus observado ao microscópio eletrônico de varredura,

destacando tricomas glandulares (TGs). A. Face abaxial do limbo foliolar, mostrando TGs

(seta) em meio a tricomas tectores dendróides. B. Detalhe de TG jovem; notar aspecto laxo da

cutícula, sugerindo formação de espaços subcuticulares. C. TG maduro, com porção secretora

em forma de clava.

Figura 2. Desenvolvimento e estrutura dos tricomas glandulares (TGs) em Connarus

suberosus. A. Estágio inicial de desenvolvimento, mostrando célula basal vacuolada e célula

apical densamente citoplasmática (seta). B. Primeira divisão da célula apical, dando origem à

célula inicial do pedúnculo e célula inicial da porção secretora (seta). C. Formação do

pedúnculo; notar célula apical única, sem indícios de divisão. D-E. Estágio de divisões para

formação da porção secretora. F. TG maduro, com células secretoras distintas daquelas do

pedúnculo. (ca – célula apical, pe – pedúnculo).

Figura 3. Organização ultra-estrutural das células secretoras dos tricomas glandulares (TGs)

de Connarus suberosus. A. Aspecto geral da porção secretora do TG; notar células de

citoplasma denso e núcleo volumoso (setas indicam células com escurecimento de

protoplasto, ao lado de outras sem esta característica). B. Detalhe de célula periférica; notar a

presença de cutícula e formação de espaço subcuticular (setas). C. Detalhe do citoplasma,

mostrando plastídio com resíduo de grão de amido; neste estádio, a membrana interna mostra

sinais de descontinuidade. D. Região citoplasmática, mostrando elevado número de

dictiossomos. E. Detalhe de célula, mostrando fusão de plastídio com vacúolo (setas). F-G.

Células com protoplasto escurecido, ao lado de células sem esta característica; em F, as setas

indicam grãos de amido, associados a plastídios indistintos. (am – amido; di – dictiossomo;

mi – mitocôndria; nu – núcleo; pl – plastídio; re – retículo endoplasmático; va – vacúolo).

CAPÍTULO II

Trabalho elaborado segundo as normas de Plant Systematics and Evolution

Existem variedades de Connarus suberosus? Evidências morfoanatômicas da heterostilia

e dioicia

JOÃO DONIZETE DENARDI

, DENISE MARIA TROMBERT OLIVEIRA

4,5

e SHEILA

ZAMBELLO DE PINHO

. Parte da tese de doutorado do primeiro autor, Programa de Pós-graduação em Ciências

Biológicas (Botânica), Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências, Câmpus de

Botucatu.

. Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul, Unidade Universitária de Coxim, Rua

Pereira Gomes, 355, Vila Santa Maria, 79.400-000, Coxim, MS, Brasil.

. Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de

Botânica, Avenida Antonio Carlos, 6627, Pampulha, Caixa Postal 486, 31.270-901, Belo

Horizonte, MG, Brasil.

. Autor para correspondência: dmtol[email protected]fmg.br

. Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Instituto de Biociências,

Departamento de Bioestatística, Distrito de Rubião Jr., s/n, Caixa Postal 510, 18.618-000,

Botucatu, SP, Brasil.

Resumo

Connarus suberosus Planch. é uma espécie típica do cerrado, cuja morfologia

floral tem propiciado diferentes interpretações taxonômicas. Desta forma, investigou-se a

morfoanatomia floral, visando, principalmente, a analisar a variabilidade estrutural em função

dos tratamentos taxonômicos conferidos à espécie e identificar tendências morfológicas

associadas à heterostilia e à dioicia. Do ponto de vista estrutural, C. suberosus possui

heterostilia dimórfica, caracterizada pelas formas brevi- e longistila, as quais se mostraram

funcionalmente masculina e feminina, respectivamente. Alguns caracteres morfológicos

peculiares a cada forma floral, provavelmente estão associados à evolução da dioicia, como

dimensões de sépalas e pétalas e distribuição de tricomas glandulares, que possivelmente

atuam na atração de polinizadores. Nesta análise, provou-se que esses caracteres, aliados às

diferenças de tamanho dos verticilos de estames das formas florais, foram utilizados

equivocadamente na delimitação das duas variedades, C. suberosus var. fulvus e C. suberosus

var. suberosus, que correspondem às formas brevistila e longistila, respectivamente. Entre as

duas populações estudadas, ocorre certa variabilidade fenotípica intra-formas florais, relativa

às dimensões das partes florais; independentemente da forma floral, foram constatadas

variações no número de sépalas, pétalas e estames e uma tendência à restrição do tecido

nectarífero aos setores antepétalos do tubo estaminal. A ocorrência de cavidades secretoras

nas pétalas também não se correlacionou às formas florais, mas parece ter sido influenciada

pela localidade.

Palavras chave: anatomia, Connarus, Connaraceae, dioicia, fragrância floral, heterostilia,

nectário, tricoma.

Introdução

Connarus suberosus Planch. é uma Connaraceae arbórea de pequeno porte, que se

desenvolve exclusivamente em áreas de cerrado de oito Estados brasileiros (Forero 1983,

Forero e Costa 2002). Em 170 levantamentos florísticos rápidos da flora lenhosa de cerrado

senso lato, realizados por Ratter et al. (2001), C. suberosus figura como uma das espécies

mais freqüentes, ocorrendo em 75% das áreas inventariadas.

De acordo com Schellenberg (1938), C. suberosus distingue-se de Connarus

fulvus devido à ausência de tricomas glandulares e pontos glandulares (cavidades secretoras)

nas pétalas. Forero (1983), em sua revisão sobre Connaraceae neotropicais, concluiu que era

impossível manter essas espécies como entidades separadas, em virtude da existência de

estados intermediários dos caracteres diagnósticos e de outros, como pilosidade dos filetes,

forma e pubescência dos folíolos, entre outras; no entanto, considerou possível distinguir

certas tendências. Desta forma, procedeu a nova combinação, reconhecendo para C.

suberosus as variedades suberosus e fulvus. Para a identificação das mesmas, o autor propôs

os seguintes caracteres: 1. Connarus suberosus var. suberosus: sépalas 3,5mm; pétalas

4x1,5mm; pontos glandulares ausentes ou inconspícuos; estames maiores 2,5mm, menores

1,5 mm, sem tricomas glandulares nos filetes, tricomas glandulares presentes no ápice do

conectivo e no estilete; 2. Connarus suberosus var. fulvus: sépalas 2,6mm; pétalas 5-

5,5x2mm, pontos glandulares conspícuos; estames maiores 4mm, menores 3mm, com

tricomas glandulares nos filetes, tricomas glandulares ausentes no ápice do conectivo e no

estilete.

Milhomens e Proença (2002), mediante análise de exsicatas determinadas por

Forero, constataram que realmente existem as tendências morfológicas citadas por este autor,

contudo a análise de gráficos de dispersão produzidos a partir dos caracteres diagnósticos não

permitiu validar a divisão em variedades; assim sendo, recomendaram que a variedade fulvus

fosse sinonimizada à variedade típica.

Forero (1983) e outros autores, como Schellenberg (1938) e Leenhouts (1958),

que empreenderam importantes estudos taxonômicos sobre Connaraceae, dedicaram pouca

atenção à ocorrência de heterostilia na família. Esse tema é tratado minuciosamente por

Lemmens (1989), que identificou oito tipos de heterostilia em Connaraceae, baseado na

análise de espécies africanas principalmente. Em Connarus, verificou-se a ocorrência de dois

tipos de heterostilia dimórfica, ambos apresentando as formas medistila e longistila; contudo,

o autor ressaltou que, nas espécies americanas deste gênero, a forma brevistila ainda está

presente. Lemmens (1989) também mencionou que, nas espécies americanas de Connarus,

parece ocorrer uma tendência em direção à dioicia.

Considerando que: 1) há poucos trabalhos sobre a morfologia floral de

Connaraceae, os quais foram conduzidos por Baker (1962), Dickison (1971), Lemmens

(1989), Matthews e Endress (2002); 2) em C. suberosus, a variação morfológica proveniente

da heterostilia não é conhecida; 3) observações das flores de C. suberosus, realizadas no

início desta investigação, apontaram possíveis incongruências nos tratamentos taxonômicos

conferidos à espécie, além de haver indícios de dioicia funcional; os objetivos deste trabalho

consistiram em descrever a morfoanatomia floral de C. suberosus, analisar a variabilidade

estrutural em função dos tratamentos taxonômicos propostos por Forero (1983) e Milhomens

e Proença (2002) e identificar tendências morfológicas associadas à evolução da dioicia.

Material e métodos

As coletas de material botânico e o acompanhamento do período reprodutivo

foram realizados entre 2004 e 2006, em vinte espécimes de C. suberosus Planch. da Fazenda

Palmeira da Serra, Município de Pratânia, Estado de São Paulo, Brasil (P1) e de doze

indivíduos localizados à margem da rodovia municipal (Estrada do Roberto) que liga a área

urbana do Distrito de Vitoriana ao Rio Bonito Campo e Náutica, Município de Botucatu,

Estado de São Paulo, Brasil (P2). Ramos férteis herborizados foram incorporados à coleção

do Herbário “Irina Delanova Gemtchujnicov” (BOTU), do Departamento de Botânica,

Instituto de Biociências da UNESP, Câmpus de Botucatu, sob o número 24.415.

Para a realização do estudo anatômico, foram preparadas lâminas permanentes de

botões florais em diversos estádios de desenvolvimento e flores em antese, a partir de

amostras de ambas as formas florais fixadas em FAA 50 (Johansen 1940) e preservadas em

etanol 70% (Jensen 1962), as quais foram submetidas à desidratação em série etanólica,

incluídas em metacrilato Leica, conforme o protocolo do fabricante, e seccionadas

transversal e longitudinalmente no micrótomo rotativo com aproximadamente 8µm de

espessura. As séries obtidas foram coradas com azul de toluidina 0,05%, pH 4,7 (O’Brien et

al. 1964) e montadas em resina sintética. Os resultados da análise do laminário foram

registrados digitalmente por meio de câmera Olympus C7070WZ acoplada a microscópio de

luz Olympus BX41.

Testes qualitativos foram empregados para detecção de polissacarídeos ácidos,

lipídios totais, amido e compostos fenólicos (Johansen 1940), mediante tratamento de secções

semi-finas com vermelho de rutênio, Sudan IV, lugol e cloreto férrico, respectivamente. Os

sítios de emissão de fragrâncias florais foram localizados pela exposição de flores intactas ao

vermelho neutro (Pridgeon e Stern 1983).

Para microscopia eletrônica de varredura, flores em antese de ambas as formas

florais foram preparadas conforme os procedimentos descritos por Robards (1978), os quais

consistem na fixação da amostra em glutaraldeído 2,5%, pós-fixação em tetróxido de ósmio

1%, desidratação em série etanólica, secagem em ponto crítico usando CO

e na metalização

com camada de ouro. As observações foram realizadas em microscópio eletrônico de

varredura Quanta 200 (Fei Company), obtendo-se imagens digitais.

Para a análise morfométrica, flores conservadas em etanol 70% foram dissecadas

sob estereomicroscópio, em meio contendo a mesma solução; as medidas das partes florais

foram tomadas indiretamente, com auxílio de câmara clara e régua milimetrada, e calculadas

mediante aplicação de regra de três. Para quantificar o número e as dimensões de sépalas e

pétalas, foram amostradas oito flores de cada uma de três plantas de cada forma floral,

selecionadas ao acaso de P1 e P2 (n = 24 flores/forma/localidade). O comprimento de estames

e gineceu foi mensurado em cinco flores retiradas de cada uma de seis plantas de cada forma

floral de P1 e de três plantas de cada forma floral de P2. Considerando que apenas os dados

relativos a flores com dez estames foram utilizados para análise estatística, n equivale a 19

flores brevistilas e a 22 longistilas para P1, enquanto n corresponde a 13 flores brevistilas e a

12 longistilas para P2. O teste t de Student foi usado para comparar as dimensões de sépalas,

pétalas, estames e gineceu entre as formas florais de uma mesma localidade (comparações

inter-formas florais) e entre plantas de uma mesma forma floral de localidades distintas

(comparações intra-formas florais). Aplicou-se, também, o referido teste nos seguintes casos:

para confirmar a ocorrência de heterostilia, mediante a comparação entre os verticilos de

estames curtos e longos e entre estes e o gineceu, em cada forma floral; para avaliar a

reciprocidade entre as posições dos estigmas e um dos conjuntos de anteras, entre formas

florais opostas de uma mesma localidade. As variações observadas no número de peças florais

foram expressas em porcentagem, independentemente da forma floral e da localidade. As

variações de caracteres qualitativos, como cavidades secretoras, foram tratadas

percentualmente considerando sua presença ou ausência em cada forma floral de P1 e P2.

Resultados

Connarus suberosus apresenta heterostilia dimórfica, caracterizada pelas formas

brevi- e longistila (Figs. 1-4), cujas flores, em geral, consistem de cinco sépalas, cinco pétalas

e dez estames dispostos em dois verticilos; o gineceu, invariavelmente, é unicarpelar e

unilocular. Em ambas as formas florais, o número de elementos do cálice e da corola varia de

quatro a seis. Determinou-se que 15, 73 e 12% das flores possuem, respectivamente, quatro,

cinco e seis sépalas, enquanto que 9, 90 e 1% delas apresentam quatro, cinco e seis pétalas,

respectivamente. No androceu de ambas as formas florais, as alterações numéricas referem-se

à supressão de um a quatro estames em cerca de 27% das amostras; no entanto,

eventualmente, observaram-se flores com onze ou doze estames. É relativamente freqüente, a

ocorrência de um a dois estaminódios, a qual independe do número de estames que compõem

o androceu.

Análise anatômica

No início do desenvolvimento, cada botão floral exibe uma bractéola decídua, que

confere proteção aos órgãos internos; nos estádios seguintes, o cálice, que tem prefloração

imbricada (Figs. 5-6), desempenha essa função. Na epiderme da face abaxial das sépalas,

ocorrem estômatos (Fig. 7) e um revestimento ferrugíneo de tricomas dendróides (Figs. 5-6)

que apresentam conteúdo fenólico e paredes septais comumente lignificadas e pontoadas; em

botões florais, observam-se ainda tricomas glandulares, constituídos por pedúnculo

multicelular, unisseriado e cabeça multicelular, que produzem mucilagem e lipídios. Essas

estruturas secretoras, com certa freqüência, também são observadas na superfície abaxial de

brácteas. As células epidérmicas comuns são cubóides e fenólicas na face abaxial, enquanto

que, adaxialmente, mostraram-se alongadas no sentido longitudinal e, muitas vezes,

destituídas de substâncias fenólicas ao longo da região mediana da sépala (Fig. 7).

O mesofilo é parenquimático, com espaços evidentes e substâncias fenólicas

acumulando-se principalmente nos estratos adjacentes à face abaxial da epiderme; o sistema

vascular consiste de feixes colaterais envoltos por bainha parenquimática pouco diferenciada

(Fig. 7). No mesofilo das sépalas de ambas as formas florais podem ocorrer cavidades

secretoras delimitadas por uma camada de células epiteliais. Tanto o conteúdo quanto o

epitélio dessa estrutura secretora produzem reação positiva para lipídios. Em material fresco e

sob estereomicroscópio, essas cavidades são visualizadas como pontos glandulares vermelhos

dispersos na superfície de sépalas e também de pétalas. A análise anatômica revelou que elas

podem ser formadas nos demais órgãos florais (Fig. 10), inclusive em bractéolas, ginóforo,

receptáculo e pedicelo.

A corola, que é amarelo-esverdeada, possui prefloração aberta (Fig. 6). Na região

basal das pétalas de ambas as formas florais, as margens apresentam células epidérmicas e

fundamentais com núcleo proeminente e citoplasma denso, isentas dos depósitos fenólicos,

que ocorrem nas demais células comuns da epiderme e são usuais no mesofilo (Fig. 8). Na

face abaxial, a epiderme é estomatífera. O mesofilo é parenquimático e lacunoso ao longo da

maior parte da pétala, exceto na região basal, onde os espaços intercelulares são menos

evidentes; o sistema vascular consiste de feixes colaterais envoltos por bainha parenquimática

pouco evidente (Figs. 9-10). Sob estereomicroscópio, as cavidades secretoras presentes no

mesofilo das pétalas mostram-se mais conspícuas que as das sépalas.

As flores brevistilas apresentam tricomas glandulares, multicelulares e

unisseriados ao longo das margens das pétalas, nos filetes, nas anteras e, freqüentemente, no

estilete (Figs. 11-16). Nas flores longistilas, eles sempre ocorrem no estilete; as pétalas e os

filetes são desprovidos desses tricomas que, eventualmente, podem ser vistos nas anteras. Os

tricomas glandulares de qualquer um desses órgãos coram-se intensamente quando expostos

ao vermelho neutro, o que também ocorre com grãos de pólen e estigmas.

Os estames são conatos congenitamente na base (Fig. 20) e arranjados em dois

verticilos (Figs. 12, 17). O verticilo externo consiste de estames antessépalos, que são mais

longos e espessos que os antepétalos (Fig. 17); no tubo estaminal, entretanto, os setores

antepétalos são os mais largos (Fig. 21). A base do tubo estaminal apresenta-se adnata ao

ginóforo, às pétalas e às sépalas; a porção externa da parede é nectarífera e se constitui de

epiderme fenólica e de células fundamentais com núcleo volumoso e citoplasma denso,

permeadas por células fenólicas e cavidades secretoras (Figs. 20-22). Na região nectarífera

ocorrem estômatos, mas não há terminações vasculares; o parênquima subjacente a ela

contém cavidades secretoras e muitas células fenólicas, principalmente no entorno dos feixes

estaminais (Figs. 20-21), que são anficrivais. A epiderme interna do tubo compõe-se de

células fenólicas, um pouco mais volumosas que aquelas da epiderme externa (Fig. 21). Na

região distal do tubo, apenas os setores antepétalos mostram-se nectaríferos (Fig. 21); por

outro lado, nos setores antessépalos, os caracteres secretores são suprimidos a diferentes

alturas. Acima das áreas nectaríferas e na porção livre dos filetes, não há estômatos; células

fenólicas encontram-se principalmente na epiderme e no entorno do feixe estaminal (Fig. 23).

As anteras são cordadas (Fig. 18), dorsifixas e versáteis; na fase em que

apresentam megasporocitos, os estratos parietais consistem de protoderme, camada precursora

do endotécio, duas camadas médias e camada precursora do tapete; o conectivo exibe um

cordão procambial envolto por várias camadas fenólicas (Fig. 24). Quando se formam as

tétrades de micrósporos, as camadas médias apresentam-se mal definidas e o tapete

diferenciado, os demais estratos pouco se modificam (Fig. 25). Os eventos seguintes da

ontogênese diferem entre as formas florais. Em flores brevistilas, o desenvolvimento do

microgametofito ocorre normalmente e é acompanhado das seguintes modificações na parede

dos microsporângios: diferenciação da epiderme e das células do endotécio, que geralmente

apresentam espessamentos parietais filiformes e lignificados, dispostos reticuladamente;

reabsorção das camadas médias, do tapete (Figs. 26-27) e do septo que isola os dois

microsporângios de cada teca. A antera madura é introrsa; a deiscência das tecas ocorre

longitudinalmente, pela ruptura do estômio (Figs. 14, 27).

Em flores longistilas, o desenvolvimento do microgametofito é interrompido em

ambos os verticilos, visto que os microsporos são reabsorvidos logo que se separam das

tétrades (Fig. 28). Nos eventos seguintes da diferenciação da parede dos microsporângios, é

notável a persistência do tapete, apesar da progressiva desorganização e colapso dessa

camada, que, na antese, mostra-se parcialmente absorvida (Fig. 29). Outros caracteres da

antera que se destacam, ao final da maturação, referem-se ao espessamento irregular do

endotécio, à diferenciação e persistência das camadas médias (Fig. 29), à dissociação

geralmente parcial do septo entre microsporângios adjacentes e a freqüente indeiscência das

tecas.

O gineceu, que se dispõe sobre ginóforo curto, é ascidiado na região basal, a qual

equivale a cerca de um quinto do comprimento do ovário; no nível da inserção ovular (Figs.

30-31) ou imediatamente abaixo desta ocorre a transição para a região plicada, onde as duas

camadas epidérmicas coerentes delimitam a região sutural até o ápice do estilete.

Externamente, a sutura é distinguível por uma reentrância (Figs. 30-33) que se prolonga até o

ginóforo, onde é menos evidente.

O indumento do ovário consiste de tricomas dendróides (Figs. 15, 30-33),

similares aos das sépalas, que lhe conferem aspecto ferrugíneo-tomentoso; eventualmente, os

tricomas distribuem-se esparsamente ao longo do estilete, acompanhando os tricomas

glandulares já referidos (Figs. 15-17, 19). Além de tricomas, a epiderme externa do gineceu

possui estômatos; as células comuns contêm substâncias fenólicas, que também ocorrem nos

demais tecidos, abrangendo camadas inteiras, como aquelas adjacentes à epiderme externa e a

epiderme interna, ou células dispersas no mesofilo (Figs. 30-35). As células suturais e as

adjacentes da epiderme interna raramente se mostram fenólicas (Fig. 33).

O mesofilo ovariano compreende três regiões (Fig. 34), distintas quanto ao

número de camadas, formato e dimensões das células fundamentais, entre outros aspectos. O

mesofilo externo tem cinco a oito camadas parenquimáticas, onde ocorrem cavidades

secretoras geralmente separadas da epiderme por uma ou duas camadas de células. O mesofilo

médio é vascularizado por um feixe dorsal (Fig. 35), por cordões e faixas procambiais que

percorrem as paredes laterais e, na face ventral, por um par de feixes alas, por diversos feixes

marginais secundários e pelo complexo ovular que emite os traços que suprem os óvulos (Fig.

31). Acima da placenta, feixes marginais secundários e alas constituem os complexos

vasculares ventrais (Fig. 33). O mesofilo interno possui um número menor de camadas,

comparado a outras regiões do mesofilo, e não se estende até a linha de fusão carpelar (Figs

32-. 33). Ao longo da região dorsal, geralmente não é possível diferençar as camadas internas

do mesofilo médio daquelas do mesofilo interno.

A epiderme interna do ovário é formada por uma camada de células menos

volumosas que aquelas da epiderme externa (Fig. 34), algumas dispostas transversal e outras

longitudinalmente.

No estilete, o mesofilo é relativamente homogêneo, apresentando cavidades

secretoras, que se distribuem aleatoriamente; a vascularização compreende apenas o feixe

dorsal e os dois complexos ventrais. O estilete não mostra tecido de transmissão,

reconhecendo-se o canal estilar delimitado por epiderme (Figs. 36-37). As flores brevistilas

aparentemente apresentam tendência à redução do estilete, pois em vários espécimes ele se

mostra vestigial. Os estigmas diferem entre as formas florais quanto às dimensões e à forma.

As flores brevistilas têm estigmas puntiformes (Fig. 15), menores que aqueles das flores

longistilas, que são fendidos e volumosos (Fig. 17).

No ovário das flores longistilas, há dois óvulos colaterais, bitegumentados (Figs.

30, 32, 35) e hemítropos, arranjados em placentação sutural. Freqüentemente, os óvulos

diferem quanto às dimensões (Figs. 30, 32) e, eventualmente, um deles mostra-se abortado.

As flores brevistilas, em geral, não apresentam óvulos, tendo em vista que o

desenvolvimento destes é inibido anteriormente ao surgimento dos primórdios de tegumento.

Desta forma, na antese, o lóculo ovariano abriga apenas duas emergências da placenta, que

recebem suprimento vascular (Fig. 38). Do grupo de plantas brevistilas acompanhadas durante

o período reprodutivo, apenas um espécime produziu frutos e sementes; nos demais houve

abscisão das flores algum tempo depois da antese.

Morfometria

O comprimento e a largura das sépalas de flores longistilas variam

significativamente entre as localidades amostradas (p < 0,05), enquanto que as sépalas da

forma brevistila são significativamente mais curtas que aquelas da forma longistila em P2 (p <

0,0001) (Tabela 1).

As dimensões das pétalas das flores brevistilas são significativamente maiores que

aquelas das flores longistilas, quando comparadas as médias de comprimento obtidas das

amostras de P1 (p < 0,0001) ou aquelas relativas à largura, determinadas para as flores de P2

(p < 0,05). Entre as localidades, as pétalas de flores longistilas diferem quanto a ambos os

parâmetros (p < 0,05) (Tabela 1).

Cavidades secretoras ocorrem nas pétalas de ambas as formas florais. Em P1, elas

ocorrem em mais de 50% das flores brevi- e longistilas, enquanto, em P2, verifica-se a

situação contrária.

Em P1 e P2, o comprimento dos verticilos de estames apresenta variações intra-

formas florais significativas (p < 0,0001) (Tabela 2). Entre as formas florais, as médias de

estames curtos e longos das flores brevistilas são maiores que as respectivas médias das flores

longistilas (p < 0,0001); as variações entre diferentes verticilos também se mostram

significativas (p < 0,001), exceto na comparação de estames curtos de flores brevistilas e

estames longos de flores longistilas de P2 (p = 0,37) (Tabela 2). Entre as localidades

amostrais, as diferenças intra-formas são significativas (p < 0,0001), menos entre estames

curtos de flores longistilas (p = 0,07) e entre estames curtos e longos de flores brevistilas (p =

0,16) (Tabela 2).

As flores brevi- e longistilas diferem significativamente quanto ao comprimento

do gineceu (p < 0,01), em cada uma das localidades. A comparação intra-forma das médias

das amostras de P1 e P2 revela variação significativa apenas entre flores brevistilas (p <

0,001) (Tabela 2).

Independentemente da localidade, em cada forma floral, o comprimento médio do

gineceu difere estatisticamente daquele de estames curtos (p < 0,0001) e longos (p < 0,0001)

(Tabela 2). Em P1 e P2, as variações inter-formas florais relacionadas às médias de gineceu e

estames de cada verticilo são significativas (p < 0,05), com exceção daquela entre gineceu de

flores brevistilas e estames curtos de flores longistilas, ambas de P2 (p = 0,07) (Tabela 2).

Discussão

O cálice de C. suberosus apresenta prefloração imbricada, que é usual em

Connaraceae (Schellenberg 1938). No entanto, é registrada certa variação no gênero, já que as

espécies de Connarus examinadas por Jongkind (1989) possuem cálice mais ou menos valvar

e, em C. conchocarpus, ele é quincuncial (Matthews e Endress 2002).

A prefloração aberta da corola de C. suberosus é singular na família, cujo padrão

é imbricado (Jongkind 1989). Em Cunoniaceae, que é filogeneticamente afim (APG 2003), a

prefloração aberta foi relacionada às dimensões reduzidas das pétalas (Matthews e Endress

2002); na espécie aqui estudada, atribui-se esse tipo de prefloração à expansão tardia da

corola, que ocorre no início da antese.

Matthews e Endress (2002) não encontraram estômatos nas pétalas de

Connaraceae e das demais Oxalidales analisadas, com exceção de Crinodendron

(Elaeocarpaceae). Não obstante, em C. suberosus a epiderme mostra-se estomatífera

abaxialmente, enquanto em Oxalidaceae, família estritamente relacionada a Connaraceae, há

registro de estômatos na superfície adaxial da corola de várias espécies de Oxalis (Estelita-

Teixeira 1984).

Os caracteres das margens, observados na região basal das pétalas de C.

suberosus, são similares àqueles de C. conchocarpus, os quais constituem indício de atividade

meristemática ou secretora (Matthews e Endress 2002). Neste trabalho, assume-se que os

mesmos relacionam-se à atividade secretora.

No tubo estaminal, a distribuição do tecido nectarífero de C. suberosus difere das

Connaraceae até agora estudadas. Em C. conchocarpus, que possui apenas cinco estames

antessépalos, as áreas nectaríferas ocupam integralmente os setores antepétalos; em Cnestis

ferruginea, o tecido nectarífero restringe-se às regiões interestaminais do tubo, que é muito

curto (Matthews e Endress 2002). Em C. suberosus, a porção externa do tubo é inteiramente

nectarífera; entretanto, a extensão das áreas nectaríferas dos setores antepétalos é

notavelmente maior que aquela dos setores antessépalos. Desta forma, parece existir uma

tendência que leva à restrição do tecido nectarífero aos setores antepétalos, conforme acontece

em C. conchocarpus e também em várias Oxalidaceae (Kumar 1976, Estelita-Teixiera 1980,

Matthews e Endress 2002).

As anteras das flores brevistilas, cujo desenvolvimento transcorre normalmente,

apresentam endotécio com espessamento reticulado, conforme se observou em Oxalidaceae

(Denardi e Oliveira, neste volume); no entanto, em outras Connaraceae, os espessamentos têm

formato de U como em Leguminosae, Rosaceae e Sapindaceae (Manning e Stirton 1994), que

foram considerados grupos relacionados nas classificações pré-cladísticas (Cronquist 1981).

As flores longistilas possuem anteras estéreis, visto que o desenvolvimento dos

microsporos é interrompido precocemente. De acordo com Frankel e Galun (1977), esta

interrupção na microsporogênese deve-se a uma falha na deposição da primexina sobre os

microsporos. Os autores consideraram a seqüência de eventos da maturação dos microsporos

como um dos estádios da formação do microgametofito mais susceptíveis a processos

abortivos. Nessa fase, os distúrbios que levam à esterilidade masculina foram relacionados à

persistência do tapete. Nas flores longistilas aqui analisadas, além desse desenvolvimento

anormal do tapete, ocorrem diferenciação e persistência das camadas médias e espessamento

irregular do endotécio.

Considerando que pelo menos um dos óvulos das flores longistilas de C.

suberosus é viável, essa forma floral é funcionalmente feminina. As flores brevistilas

mostram-se funcionalmente masculinas, uma vez que o desenvolvimento dos óvulos é

interrompido precocemente; contudo, em P2, uma das plantas brevistilas coletadas produziu

flores funcionalmente bissexuais. Portanto, nessa localidade, a população de C. suberosus

pode ser classificada como polígama, enquanto aquela de P1 apresenta-se funcionalmente

dióica. Segundo Lemmens (1989), que considera rara a dioicia em Connaraceae, Ellipanthus

beccarii é uma espécie inquestionavelmente dióica, na qual também podem ocorrer flores

bissexuais.

Diferentemente de outros grupos heterostilos, em muitas Connaraceae, os

polimorfismos estigmáticos não se relacionam às formas florais, exceto nas espécies com

flores funcionalmente unissexuais (Lemmens 1989), caso de C. suberosus, cujos estigmas das

formas florais variam nas dimensões e no formato. Nesta espécie, a ocorrência de tricomas

glandulares também está associada à diferenciação de gêneros entre as formas florais, visto

que, invariavelmente, distribuem-se pelas superfícies de estames e carpelo férteis, onde atuam

na emissão de compostos voláteis, que, possivelmente, estimulam a visitação desses órgãos,

conforme sugerem Young et al. (1984), Werker (2000) e Effmert et al. (2005). Na corola, tais

tricomas podem sinalizar a existência de recompensa na base das pétalas, que apresenta

características secretoras, e/ou indicar a região nectarífera na face abaxial do tubo estaminal, o

que explicaria a redução da área de tecido nectarífero nos setores antessépalos. No entanto,

essas hipóteses subentendem diferenças na capacidade secretora das formas florais, ainda que

não estabelecidas na população, tendo em vista que as pétalas das flores longistilas são

glabras; além disso, é lógico admitir que a supressão de tricomas glandulares das pétalas dessa

forma floral foi posterior à redução das áreas nectaríferas nos setores antessépalos. Também

não é claro o significado da conservação de tricomas glandulares nos carpelos da maioria das

flores brevistilas, os quais freqüentemente se mostram estéreis.

As diferenças relativas à distribuição de tricomas glandulares em C. suberosus

foram interpretadas taxonomicamente por Schellenberg (1938) e, posteriormente, por Forero

(1983), que as utilizou como um dos caracteres diagnósticos na delimitação de C. suberosus

var. suberosus e C. suberosus var. fulvus. No entanto, em sua contribuição para “Flora

fanerogâmica do Estado de São Paulo”, Forero e Costa (2002) desprezaram as variações

referentes à ocorrência de tricomas glandulares no estilete ou no ápice do conectivo da chave

de identificação dessas variedades. Milhomens e Proença (2002) atribuíram à variação

fenotípica ou genotípica certas tendências relacionadas à pilosidade de folíolos e de partes

florais dessas variedades, as quais consideram insuficientes para caracterizar a especialização

de linhagens.

As dimensões de sépalas e pétalas assinaladas por Forero (1983) para a

identificação das variedades indicam que C. suberosus var. suberosus apresenta sépalas

maiores e pétalas menores que a variedade oposta. No presente estudo, essas relações

aplicam-se às flores longistilas e brevistilas, respectivamente, embora esses parâmetros

tenham diferido estatisticamente em localidades distintas. Esses resultados evidenciam que as

variações no tamanho do cálice e da corola, possivelmente, estão associadas à funcionalidade

sexual dessas flores, visto que esses caracteres não se encontram totalmente fixados nas

populações analisadas. A comparação das médias de comprimento das pétalas entre as formas

florais de P1 corrobora observações que indicam que o tamanho da corola das flores

masculinas geralmente é maior que o das femininas (Bell 1985, Delph 1996). As flores

longistilas, por sua vez, tendem a apresentar cálice maior, provavelmente, em função de sua

persistência no fruto, conferindo-lhe proteção no início do desenvolvimento.

A ocorrência de cavidades secretoras nas pétalas não se correlacionou às formas

florais, mas parece ter sido influenciada pela localidade. Milhomens e Proença (2002)

relataram que, em 80% das exsicatas de C. suberosus var. fulvus, as três flores examinadas

por exsicata apresentavam pétalas com cavidades secretoras; enquanto em 66% das exsicatas

de C. suberosus var. suberosus pelo menos duas flores por exsicata portavam esse caráter;

assim, consideraram que a variedade fulvus tende a apresentar pétalas pontoadas por

cavidades secretoras.

Nas análises aqui apresentadas, os verticilos de estames de flores brevistilas

mostraram-se maiores que os equivalentes das longistilas, tanto em P1 quanto em P2. Essas

relações são condizentes com as dimensões de estames curtos e longos de C. suberosus var.

fulvus e C. suberosus var. suberosus, descritas por Forero (1983). Considerando que, em

ambas as formas florais, os verticilos de estames diferem significativamente entre si, bem

como do gineceu, C. suberosus possui heterostilia dimórfica do ponto de vista estrutural;

contudo, não há correspondência recíproca do comprimento dos estames e do gineceu entre as

formas florais, exceto entre gineceu de flores brevistilas e estames curtos de flores longistilas,

ambas de P2. Nas espécies africanas e asiáticas de Connarus, Lemmens (1989) descreveu a

ocorrência de heterostilia dimórfica caracterizada por formas florais com um estilete longo ou

médio e dez estames férteis, além de um tipo provavelmente derivado deste, cujas formas

florais apresentam um estilete longo ou médio, cinco estames férteis e cinco estames

rudimentares.

A argumentação aqui apresentada parece suficiente para demonstrar que o

reconhecimento de duas variedades de C. suberosus (Forero, 1983) consistiu de um equívoco

ocasionado pelos caracteres peculiares das formas florais, os quais freqüentemente aparecem

associados à evolução da dioicia. Entretanto, é notável que, na chave proposta para a distinção

das variedades, as dimensões dos verticilos de estames de cada uma delas não expressem

variações decorrentes da heterostilia, apesar de Forero (1983) considerá-la “um caráter

comum em todas as Connaraceae”.

Os resultados dessa investigação confrontados com os caracteres diagnósticos de

C. suberosus var. fulvus e C. suberosus var. suberosus (Forero 1983) revelam que as ditas

variedades correspondem às formas brevistila e longistila, respectivamente. Portanto,

recomenda-se que a espécie não seja tratada em nível varietal. Milhomens e Proença (2002)

propuseram que a variedade fulvus seja sinonimizada à variedade típica, visto que não

constataram correlação entre os caracteres diagnósticos estabelecidos por Forero (1983) e

respectivas variedades de C. suberosus, os quais mostraram um gradiente de estados ou não

diferiram expressivamente entre as variedades; contudo, os autores não associaram esses

resultados à ocorrência de heterostilia e à evolução da dioicia na espécie.

A comparação de parâmetros quantitativos entre as populações de P1 e P2 revelou

variações intra-formas florais significativas nas dimensões de sépalas e pétalas de flores

longistilas e de estames de ambas as formas florais, com exceção dos casos já mencionados.

Interessantemente, Forero (1983) descreveu considerável variabilidade de forma, tamanho e

pubescência de folíolos, observada em cada variedade. Assim sendo, pode-se considerar que

ocorre certa variabilidade fenotípica intra-formas florais envolvendo órgãos vegetativos e

reprodutivos; entretanto, não é claro se a evolução da dioicia ou modificações do número de

peças florais influenciaram as variações nas dimensões de sépalas e pétalas de flores

longistilas e de estames de ambas as formas florais. Certamente, a evolução da dioicia é a

causa determinante da variação de comprimento do gineceu de flores brevistilas, observada

entre as localidades amostrais, tendo em vista que se verificou uma tendência ao

encurtamento do estilete nessa forma floral funcionalmente masculina.

Agradecimentos: Nós somos gratos a Luciano C. Milhomens, por realizar a identificação da

espécie, e à FAPESP (Programa BIOTA, proc. nº 00/12469-3), pelo apoio financeiro. João D.

Denardi agradece à CAPES pela concessão da bolsa PICDT e D.M.T. Oliveira ao CNPq, pela

bolsa de produtividade em pesquisa.

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Young A. M., Schaller M., Strand M. (1984) Floral nectaries and trichomes in relation to

pollination in some species of Theobroma and Herrania (Sterculiaceae). Am. J. Bot. 71:

466-480.

Ilustrações

Figs. 1-4. Connarus suberosus. Figs. 1-2. Flor longistila. Figs. 3-4. Flor brevistila. Barras =

3mm (1-4).

Figs. 5-11. Connarus suberosus. Secções transversais de botões florais e do perianto da flor

em antese. Figs. 5-6. Botões florais em estádios sucessivos de desenvolvimento. Fig. 7.

Detalhe da sépala. Fig. 8. Detalhe do bordo da pétala. Figs. 9-10. Detalhes da pétala em áreas

intervenais. Fig. 11. Tricoma glandular. (sc = cavidade secretora; vb = feixe vascular; seta =

estômatos na epiderme da face abaxial de sépala e pétala; ponta de seta = epitélio da cavidade

secretora). Barras = 100 µm (5); 200 µm (6); 25 µm (7, 9-11); 10 µm (8).

Figs. 12-19. Connarus suberosus. Estames e carpelo de flores brevistilas (Figs. 12-16) e

longistilas (Figs. 17-19), em microscopia eletrônica de varredura. Fig. 12. Aspecto geral. Fig.

13. Detalhe do filete. Fig. 14. Detalhe da antera. Fig. 15. Detalhe do carpelo. Fig. 16. Detalhe

do estilete. Fig. 17. Aspecto geral. Fig. 18. Detalhe de estames. Fig. 19. Detalhe do estilete.

(Asterisco = estame longo; estrela = estame curto). Barras = 1 mm (12, 17); 100 µm (13); 250

µm (14-16); 500 µm (18); 200 µm (19).

Figs. 20-29. Connarus suberosus. Secções transversais da base floral e do androceu. Fig. 20.

Base floral, mostrando fusão do tubo estaminal a peças do perianto e ao ginóforo. Fig. 21.

Detalhe do tubo estaminal, ilustrando a extensão dos setores antepétalos e antessépalos e a

distribuição de tecido nectarífero. Fig. 22. Detalhe da área nectarífera observada na figura

anterior; notar epiderme com estômatos. Fig. 23. Detalhe do filete. Fig. 24. Detalhe da antera

com microsporocitos (ponta de seta). Fig. 25. Detalhe da antera na fase em que se observam

tétrades de microsporos; notar tapete desenvolvido (asterisco). Figs. 26-27. Detalhes de

anteras de flores brevistilas, ilustrando estádios sucessivos da diferenciação dos

microsporângios. Figs. 28-29. Detalhes de anteras de flores longistilas mostrando,

respectivamente, a degeneração dos microsporos e a diferenciação atípica da parede do

microsporângio, que encerra resquícios do tapete. (co = conectivo; en = endotécio; ep =

epiderme; gi = ginóforo; ml = camada média; nt = tecido nectarífero; pb = feixe estaminal

antepétalo; pe = pétala; sb = feixe estaminal antessépalo; sc = cavidade secretora; se = sépala;

so = estômio; st = tubo estaminal; vb = cordão procambial). Barras = 200 µm (20-21); 100 µm

(22); 25 µm (23-29).

Figs. 30-38. Connarus suberosus. Secções transversais do gineceu da flor longistila (Figs. 30-

37) e brevistila (Fig. 38). Fig. 30. Aspecto geral do ovário, no nível das inserções dos dois

óvulos colaterais. Fig. 31. Detalhe da figura anterior, ilustrando a vascularização e a transição

da zona ascidiada para plicada. Fig. 32. Aspecto geral do ovário na região plicada. Figs. 33-

35. Respectivamente, detalhes das regiões ventral, lateral e dorsal do ovário visto na Fig. 32.

Figs. 36-37. Aspecto geral e respectivo detalhe do estilete, no qual se destaca a vascularização

e o canal estilar (ponta de seta). Fig. 38. Detalhe do ovário de flor brevistila, mostrando

emergências placentárias vascularizadas. (db = feixe dorsal; ee = epiderme externa; em =

mesofilo externo; ie = epiderme interna; im = mesofilo interno; mb = feixe marginal

secundário; mm = mesofilo médio; ot = traço ovular; sc = cavidade secretora; sl = faixa

procambial lateral; vc = complex vascular ventral; wb = feixe ala). Barras = 100 µm (30,32);

50 µm (31, 33, 35-36, 38); 25 µm (34, 37).

Tabela 1. Médias de comprimento e largura de sépalas e pétalas de ambas as

formas florais (em mm), amostradas em P1 e P2, e respectivos valores de desvio-

padrão, mostrados entre parêntesis.

P1 (Pratânia) P2 (Vitoriana)

Brevistila Longistila Brevistila Longistila

Comprimento

de sépalas

2,79 (0,50) 2,71 (0,34) 2,51 (0,26) 2,86 (0,32)

Largura de

sépalas

1,32 (0,21) 1,37(0,16) 1,23 (0,14) 1,23 (0,17)

Comprimento

de pétalas

4,20 (0,49) 3,73 (0,43) 4,13 (0,27) 4,39 (0,70)

Largura de

pétalas

1,87 (0,18) 1,78 (0,23) 1,84 (0,21) 1,64 (0,19)

Tabela 2. Médias de comprimento de estames e gineceu de ambas as formas florais

(em mm), amostradas em P1 e P2, e respectivos valores de desvio-padrão,

mostrados entre parêntesis.

P1 (Pratânia) P2 (Vitoriana)

Brevistila Longistila Brevistila Longistila

Estames

curtos

4,02 (0,59) 1,97 (0,31) 3,01 (0,55) 2,21 (0,39)

Estames

longos

5,28 (0,33) 2,52 (0,31) 4,23 (0,44) 2,94 (0,36)

Gineceu

2,95 (0,88) 3,60 (0,56) 1,97 (0,21) 3,85 (0,27)

CAPÍTULO III

Trabalho elaborado segundo as normas do periódico Annals of Botany.

Morfoanatomia e desenvolvimento do pericarpo e da semente de Connarus suberosus

Planch. (Connaraceae)

JOÃO DONIZETE DENARDI

E DENISE MARIA TROMBERT OLIVEIRA

2

Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul, Unidade Universitária de Coxim, Rua

Pereira Gomes, 355, Vila Santa Maria, 79.400-000, Coxim, MS, Brasil.

Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de

Botânica, Avenida Antonio Carlos, 6627, Pampulha, Caixa Postal 486, 31.270-901, Belo

Horizonte, MG, Brasil.

 Justificativa e objetivos Connarus suberosus é espécie de Connaraceae típica do cerrado,

sobre a qual poucos dados estruturais estão disponíveis. Está incluída no subclado das

eurosídeas I, no qual muitas relações permanecem não resolvidas. O presente trabalho foi

realizado visando descrever, estrutural e ontogeneticamente, os frutos e sementes de C.

suberosus, discutindo os resultados em comparação com grupos irmãos.

 Métodos Botões florais, flores em antese e frutos e sementes em várias fases de

desenvolvimento foram caracterizados morfologicamente e analisados em preparações

permanentes e semipermanentes, segundo as técnicas usuais.

 Resultados principais A vascularização carpelar mostra-se derivada em relação ao padrão

descrito para Connaraceae, devido à formação de um complexo ovular mediante união parcial

de traços ovulares àqueles derivados de feixes alas. O desenvolvimento do pericarpo e da

semente, que pode ocorrer apomiticamente, não são concomitantes, visto que a diferenciação

seminal inicia-se após a expansão do pericarpo, que alcança comprimento e largura finais. Ao

término da diferenciação seminal, ocorre a maturação pericárpica, caracterizada pela

expansão radial das células do mesocarpo externo e deiscência do folículo. A semente madura

apresenta arilo que se desenvolve da região rafe-calazal, é hemítropa e vascularizada por um

complexo de feixes que irriga as regiões rafeal e pré-rafeal; o tégmen é parcialmente

absorvido. Diferentemente de outras Connaraceae, a endotesta e o exotégmen são

multiplicativos; o mesotégmen mostra-se esclerificado, embora restrito à calaza. O



Para correspondência. Email:dmtoliv[email protected]g.br

endosperma, que é núcleo-celular, persiste como estrato irregularmente multisseriado,

fortemente adnato ao tegumento, o que não é usual em Connarus.

 Conclusões Diversos aspectos estruturais observados são compartilhados com outras

espécies de Oxalidales, especialmente de Oxalidaceae, família irmã de Connaraceae.

INTRODUÇÃO

Connaraceae é uma família pantropical, que abrange espécies arbóreas, arbustivas e

lianas, caracterizadas por folhas alternas, imparipinadas, exestipuladas; gineceu formado por um

ou cinco carpelos livres, pubescentes, bi-ovulados; fruto simples ou múltiplo, com uma ou duas

sementes por cavidade seminal, as quais apresentam testa pelo menos parcialmente carnosa. No

Brasil, considerado o centro de diversificação da família na região Neotropical, ocorrem 64

espécies, classificadas nos gêneros Bernardinia, Connarus, Pseudoconnarus e Rourea (Forero,

1983; Forero e Costa, 2002).

Os estudos taxonômicos sobre Connaraceae, realizados por Schellenberg (1938),

Leenhouts (1958) e Breteler (1989) revelaram divergências consideráveis na delimitação dos

taxa em níveis infrafamiliares. Também, várias interpretações taxonômicas foram apresentadas

a respeito de suas relações interfamiliares (Heimsch, 1942; Hutchinson, 1969; Takhtajan, 1969,

1997; Dickison, 1971, 1972, 1973a,b; Corner, 1976; Cronquist, 1981; Behnke, 1982).

Recentemente, Connaraceae e Oxalidaceae constituíram um clado da ordem

Oxalidales (APG, 2003), definido nas análises filogenéticas realizadas por Hufford (1992), a

partir de dados morfológicos e químicos, bem como em estudos filogenéticos baseados em

seqüências gênicas (Davies et al., 2004; Savolainen et al., 2000; Soltis et al. 2000; Zhang e

Simmons, 2006) ou na combinação de dados moleculares e morfológicos (Nandi et al., 1998).

No sistema APG (APG, 2003), Oxalidales, Malpighiales e Celastrales constituem

um grande subclado de eurosídeas I, cujas relações permanecem não resolvidas. Stevens (2007)

reconheceu como sinapomorfia para eurosídeas I o endosperma escasso. Para Oxalidales, o

autor mencionou os seguintes caracteres relativos às sementes: micrópila formada por ambos os

tegumentos, tegumento do óvulo multiplicativo, endotesta cristalífera e paliçádica, e exotégmen

fibroso ou traqueoidal.

No presente trabalho, os frutos e sementes de C. suberosus, nas várias fases do

desenvolvimento, são descritos morfoanatomicamente, discutindo-se os resultados em

comparação com grupos irmãos de Connaraceae, em especial Oxalidaceae.

MATERIAL E MÉTODOS

Botões florais, flores em antese, frutos e sementes de Connarus suberosus em

vários estádios de desenvolvimento foram coletados em espécimes ocorrentes na Fazenda

Palmeira da Serra, Município de Pratânia, Estado de São Paulo, Brasil, e em espécimes

localizados à margem da rodovia municipal (Estrada do Roberto) que liga a área urbana do

Distrito de Vitoriana ao Rio Bonito Campo e Náutica, Município de Botucatu, Estado de São

Paulo, Brasil. Ramos férteis herborizados foram depositados no Herbário “Irina Delanova

Gemtchujnicov” (BOTU), do Departamento de Botânica, Instituto de Biociências da UNESP,

Câmpus de Botucatu, registrados sob o número 24.415.

Os caracteres morfológicos de frutos e sementes foram analisados sob

estereomicroscópio Leica®, a partir de 75 unidades de material fresco. As dimensões e o peso

fresco de frutos e sementes foram determinados com auxílio de paquímetro e balança de

precisão. Para cada parâmetro, calculou-se a média aritmética e o desvio padrão. A terminologia

para descrição dos frutos e sementes baseou-se em Martin (1946), Corner (1976), Roth (1997) e

Barroso et al. (1999).

O laminário permanente foi preparado a partir de amostras fixadas em FAA 50

(Johansen, 1940) e preservadas em etanol 70% (Jensen, 1962), as quais foram desidratadas em

série etanólica e incluídas em metacrilato Leica, conforme o protocolo do fabricante. Secções

transversais e longitudinais com aproximadamente 8 µm de espessura, obtidas no micrótomo

rotativo, foram coradas com azul de toluidina 0,05%, pH 4,7 (O’Brien et al., 1964);

alternativamente secções do pericarpo maduro foram tratadas com este corante e, em seguida,

com solução aquosa de vermelho de rutênio 0,02%. Na montagem das lâminas utilizou-se

resina sintética. A documentação dos resultados foi realizada digitalmente por meio de câmera

Olympus C7070WZ acoplada a microscópio de luz Olympus BX41.

Nos testes histoquímicos, secções de materiais frescos foram expostas a lugol para

evidenciar amido, Sudan IV para realçar substâncias lipídicas, vermelho de rutênio para detectar

polissacarídeos ácidos, cloreto férrico para verificar a ocorrência de compostos fenólicos

(Johansen, 1940), azul mercúrio de bromofenol para indicar a presença de proteínas (Mazia et

al., 1953), floroglucinol acrescido de ácido clorídrico para detectar estruturas lignificadas (Sass,

1951).

Pericarpos maduros, após remoção do endocarpo e mesocarpo interno, foram

diafanizados segundo a técnica proposta por Fuchs (1963). Em outro ensaio, o pericarpo

maduro foi dividido ao longo do limite externo do mesocarpo interno, sendo as duas partes

maceradas separadamente, conforme os procedimentos descritos por Franklin (1945) e

modificados como descrito por Kraus e Arduin (1997).

RESULTADOS

O fruto de C. suberosus desenvolve-se de ovário súpero, unicarpelar e unilocular,

disposto sobre ginóforo curto (Fig. 1A). Em botões florais, as margens carpelares são

inicialmente livres (Fig. 1B), exceto na região basal do ovário, que é fechada congenitamente

(Fig. 1C) e equivale a cerca de um quinto do comprimento desse órgão. Posteriormente, os

bordos se unem mediante adesão cuticular. Assim, as duas camadas epidérmicas, coerentes

ontogeneticamente, mantêm-se distintas até o ápice do estilete, delimitando a região sutural

(Fig. 1D-E, G). Entretanto, no nível da inserção dos dois primórdios ovulares ou imediatamente

abaixo dessa, ambos os processos de fusão concorrem para o fechamento do carpelo (Fig. 1C).

Em toda sua extensão, a sutura é acompanhada externamente por uma reentrância (Fig. 1G) que

se prolonga até o ginóforo, onde é menos evidente.

Na flor em antese, o ovário apresenta epiderme externa unisseriada, composta por

estômatos e células comuns cubóides, revestidos por cutícula inconspícua (Fig. 1F-H).

Tricomas dendróides (Fig. 1I) conferem o aspecto ferrugíneo-tomentoso ao ovário e inserem-se

entre as demais células epidérmicas por meio de uma base constrita (Fig. 1H). As células desses

tricomas contêm substâncias fenólicas e suas paredes septais são comumente lignificadas e

pontoadas.

Na parede ovariana, há deposição de substâncias fenólicas em camadas inteiras,

como a epiderme externa, camadas adjacentes e epiderme interna, ou localizada em células

dispersas no mesofilo (Fig. 1E-H). As células suturais e as adjacentes da epiderme interna

raramente acumulam essas substâncias (Fig. 1G).

No mesofilo ovariano, distinguem-se três regiões (Fig. 1E-H). O mesofilo externo

consiste de células fundamentais de formato poligonal que, na face ventral, organizam-se em até

oito camadas (Fig. 1G). Nesse tecido, ocorrem cavidades secretoras delimitadas por epitélio

uniestratificado, as quais se separam da epiderme por uma ou duas camadas de células ou,

menos freqüentemente, são subepidérmicas (Fig. 1F, H). Em material fresco e sob

estereomicroscópio, a secreção dessas cavidades exibe coloração vermelha; em seu lume, assim

como no epitélio, foram detectados lipídios.

O mesofilo médio é formado por cerca de oito camadas de células poligonais,

menores que aquelas do mesofilo externo. Sua metade externa é ocupada, principalmente, por

procâmbio, com elementos vasculares pouco diferenciados (Fig. 1E-H). O sistema vascular

consiste de um feixe dorsal, de cordões e faixas procambiais que percorrem as paredes laterais

(Fig. 1F, H); na face ventral, observa-se um par de feixes alas, diversos feixes marginais

secundários e um par de faixas procambiais ovulares parcialmente fundidas (Fig. 2B). Estas se

formam no ginóforo, a partir de feixes próximos do dorsal, fundem-se pelas extremidades e

migram para a face ventral desse órgão, deslocando para lá a vascularização lateral e deixando

uma lacuna parenquimática subjacente ao lóculo ovariano (Fig. 2A-B). No ovário, o ponto de

fusão das faixas procambiais ovulares alinha-se à reentrância ventral e a ele se unem faixas

procambiais derivadas dos feixes alas, logo abaixo da placenta. Desse complexo vascular

partem os cordões que suprem os óvulos (Fig. 2C-D). Os feixes marginais secundários derivam

da vascularização lateral que foi deslocada para a região ventral do ginóforo durante a emissão

das faixas procambiais ovulares (Fig. 2A-D). Acima da placenta, feixes marginais secundários e

feixes alas constituem os complexos vasculares ventrais (Fig. 2B).

O mesofilo interno constitui-se de duas a três, eventualmente até cinco camadas de

células alongadas periclinalmente, variavelmente dispostas nos sentidos horizontal e vertical, as

quais não se estendem até a linha de fusão carpelar (Fig. 1E, G); contudo, o mesofilo interno

tende a aumentar sua extensão em níveis sucessivamente superiores do ovário, no sentido

ventral. Ao longo da região dorsal, a distinção entre as camadas de mesofilo médio subjacentes

ao feixe dorsal e o mesofilo interno não é clara, ocorrendo células poligonais a arredondadas, de

tamanho reduzido (Fig. 1F); porém, na base do ovário, é possível discernir uma ou mais

camadas típicas do mesofilo interno. A epiderme interna é unisseriada e apresenta células

estreitas e alongadas periclinalmente, dispostas transversal ou longitudinalmente, e menos

volumosas que aquelas da epiderme externa. Ao longo da região ventral, a epiderme interna

mostra células com parede periclinal externa convexa.

O lóculo ovariano encerra dois óvulos colaterais, hemítropos (Fig. 3B), em

placentação sutural (Fig. 1D-E). Freqüentemente, um dos óvulos é menor (Fig. 1E) e,

eventualmente, mostra-se abortado (Fig. 3A).

Os óvulos são bitegumentados, com micrópila definida pelo exóstoma e endóstoma

(Fig. 3B). Na antese, o tegumento externo possui cerca de oito camadas de células, com

epiderme externa unisseriada, coberta por cutícula delgada, constituída por células com

conteúdo fenólico e formato cubóide ou poliédrico alongado tangencial ou radialmente. No

mesofilo, as células são poliédricas e justapostas, de dimensões variáveis, algumas acumulando

substâncias fenólicas (Fig. 3B-C). Tanto na rafe quanto na pré-rafe, há ampliação do número de

camadas fundamentais em torno do cordão procambial (Fig. 1E, G; 3A). A epiderme interna

caracteriza-se por células cubóides, menores que as da epiderme externa e com citoplasma mais

denso que as células dos tecidos adjacentes. Nesta camada, podem-se observar divisões

periclinais esparsas. O limite entre os tegumentos externo e interno é definido por cutícula

delgada, porém evidente (Fig. 3B-C).

O tegumento interno consiste de cinco camadas de células. Destas, a epiderme

externa e o mesofilo apresentam células pouco diferenciadas, enquanto a epiderme interna

constitui o endotélio, cujas células, alongadas radialmente, apresentam impregnação de

substâncias fenólicas na parede celular, as quais se encontram também em pequenos vacúolos

(Fig. 3C).

Os óvulos são crassinucelados, estando o megasporocito separado da epiderme

nucelar por duas camadas parietais (Fig. 3D). Entretanto, o nucelo é consumido em um estádio

próximo à antese.

Em alguns botões florais em pré-antese, observou-se endosperma em início de

desenvolvimento, sem a ocorrência de fecundação, visto que nos mesmos botões as anteras

encontram-se fechadas e os megasporos estão sendo absorvidos (Fig. 3E-G).

O desenvolvimento do pericarpo, independentemente do processo que o induziu,

caracteriza-se, inicialmente, por uma fase em que predomina a atividade meristemática, no

entanto as divisões são precedidas de certo grau de vacuolização das células (Fig. 4A). A

atividade meristemática é mais intensa na face ventral, determinando seu maior

desenvolvimento. Embora haja aumento significativo das dimensões do fruto, o estípite

continua pouco distinto.

O exocarpo é unisseriado, visto que as células dividem-se apenas no plano

anticlinal; há formação de estômatos e tricomas dendróides (Fig. 4A-D), além de tricomas

glandulares providos de pedúnculo multicelular, unisseriado, e cabeça multicelular, os quais

acumulam numerosas gotas lipídicas.

No mesocarpo externo e médio, células vacuoladas dividem-se aleatoriamente,

ampliando o número de camadas desses tecidos (Fig. 4A-B). No mesocarpo externo, nota-se,

ainda, o desenvolvimento de cavidades secretoras similares àquelas do mesofilo ovariano,

geralmente localizadas próximas ao exocarpo (Fig. 4C). O sistema vascular encontra-se em

diferenciação. As faixas procambiais ovulares e aquelas derivadas dos feixes alas dão origem a

feixes que percorrem longitudinalmente diferentes extensões da região ventral acima da

placenta (Fig. 4D), à exceção do complexo vascular ovular, cujos feixes dirigem-se para os

funículos. Os feixes proximais, derivados da vascularização ala, são os mais longos, enquanto

aqueles originados das faixas procambiais ovulares extinguem-se gradativamente logo acima da

placenta. No mesocarpo interno, ocorrem apenas divisões anticlinais que acomodam essa região

ao crescimento do pericarpo (Fig. 4B-E).

O endocarpo mantém-se unisseriado, à exceção de alguns trechos em que mostra

espessura de duas ou, algumas vezes, três células e extensão raramente superior à de cinco

células dispostas lado a lado (Fig. 4E). Contudo, o endocarpo destaca-se por apresentar tricomas

glandulares em desenvolvimento, constituídos por pedúnculo multicelular, unisseriado, com

célula basal afunilada e cabeça multicelular ainda pouco diferenciada (Fig. 4F).

No estádio seguinte da ontogênese, ocorre abscisão das estruturas florais, com

exceção das sépalas, e o pericarpo atinge comprimento e largura típicos do órgão maduro,

inclusive com alongamento do estípite. Nesta fase, prevalece a expansão celular; no entanto,

observam-se divisões aleatórias no mesocarpo externo e médio, cuja freqüência diminui

gradativamente. Em todas as camadas pericárpicas as células, em geral, concentram substâncias

fenólicas (Fig. 5A-E).

No exocarpo, há senescência e queda dos tricomas glandulares e redução da

densidade de tricomas dendróides, em função do alongamento das células comuns desse tecido.

Estômatos são freqüentes, acompanhados por câmara subestomática inconspícua (Fig. 5A-B).

A expansão celular no mesocarpo restringe-se às regiões média e interna, visto que

o volume das células do mesocarpo externo é pouco alterado, principalmente nas camadas

periféricas (Fig. 5A-C). O sistema vascular mostra-se bem desenvolvido, porém ainda há

elementos vasculares em diferenciação (Fig. 5C-D).

No endocarpo, estômatos desprovidos de câmara subestomática tornam-se

evidentes (Fig. 5E) e tricomas glandulares iniciam a atividade secretora (Fig. 5F), ao lado de

outros que principiam o seu desenvolvimento. Na fase secretora, estes tricomas possuem

pedúnculo longo, cujas células acumulam substâncias fenólicas, e cabeça multicelular distinta.

Em frutos frescos, a secreção produzida é vermelha, ao passo que o pedúnculo se mostra

hialino. Os testes realizados não foram suficientes para precisar a natureza da secreção.

Simultaneamente, a semente encontra-se em atividade meristemática, que lhe

proporciona um crescimento incipiente em comparação ao pericarpo. Na maioria das vezes,

apenas uma semente se desenvolve. A exotesta é unisseriada e fenólica. A mesotesta é a região

mais ampla do tegumento e consiste de células vacuoladas, com ou sem conteúdo fenólico, que,

inicialmente, dividem-se aleatoriamente, em planos variados (Fig. 6A-C). Posteriormente, a

camada subexotestal divide-se periclinalmente, com freqüência maior que as demais, mostrando

células pouco volumosas (Fig. 6B-C).

Na região rafe-calazal, a proliferação de células mesotestais dos estratos situados

entre a exotesta e o complexo vascular rafeal dá origem a um arilo com margem lobada e

crenada. Esta emergência possui epiderme fenólica, portadora de estômatos; eventualmente,

ocorrem pequenos tricomas tectores não ramificados. À medida que o arilo se desenvolve, as

células fundamentais assumem arranjo radial, com fileiras parcialmente fenólicas (Fig. 6D-E).

Considerando a origem mista do suprimento vascular do óvulo, a vascularização da

semente consiste de um complexo vascular que percorre o funículo e irriga a mesotesta nas

regiões rafeal e pré-rafeal. O complexo vascular rafeal emite ramificações curtas, que se

estendem para as laterais da semente e das quais partem traços que migram para a região

proximal do arilo (Fig. 6D-E). O complexo pré-rafeal alcança o terço micropilar sem se

ramificar (Fig. 6F).

A endotesta também é multiplicativa, mas sua atividade inicia-se tardiamente.

O tégmen é absorvido parcialmente (Fig. 6B-C; F-G). O exotégmen torna-se

pontualmente bisseriado (Fig. 6G), mas em alguns trechos ele se desorganiza. No mesotégmen,

há ampliação do número de camadas nas extremidades da semente (Fig. 6C), seguida da

supressão desse estrato tegumentar (Fig. 6B), exceto nas regiões calazal e micropilar (Fig. 6G-

H). O endotégmen persiste como uma camada vestigial, devido ao colapso e à absorção de suas

células (Fig. 6C-F). Um estrato péctico amorfo, que se apresenta bastante espesso próximo à

micrópila, interpõe-se entre o tégmen e o endosperma nuclear. Após esse evento, o embrião

progride rapidamente para o estádio globular; perifericamente, inicia-se, a citocinese do

endosperma (Fig. 6H). Nessa fase, a semente, cujo comprimento aproxima-se de 5 mm, ocupa

uma cavidade seminal ampla, visto que o pericarpo alcança comprimento e largura finais.

À expansão do pericarpo segue-se a diferenciação de tecidos, não obstante no

mesocarpo externo este processo seja parcial. No exocarpo, a cutícula torna-se espessa,

apresentando flanges entre as células; sobre os estômatos, projeções elevadas recobrem

incompletamente o ostíolo (Fig. 7A-B). Os tricomas dendróides mostram-se frágeis à ação

mecânica, rompendo-se durante os procedimentos. As células epidérmicas comuns acumulam

antocianina, que confere cor vermelho-alaranjada à superfície do fruto. As demais regiões do

pericarpo são pardacentas, conservando os compostos fenólicos já relatados; entretanto, células

esclerenquimáticas e aquelas do mesocarpo médio podem ser desprovidas desse conteúdo (Fig.

7A-D).

O mesocarpo externo exibe as seguintes alterações: deterioração do epitélio que

reveste as cavidades secretoras, formação de calotas de fibras gelatinosas na região ventral,

contíguas ao tecido de separação (Fig. 7C-D), o qual foi originado pela epiderme sutural;

diferenciação de esclereídes e fibroesclereídes, geralmente cristalíferas, isoladamente ou em

pequenos grupos entre as demais células (Fig. 7B).

No mesocarpo médio, completa-se o desenvolvimento do sistema vascular.

Percebe-se que as faixas procambiais laterais foram derivadas de cordões marginais secundários

distais aos alas, visto que, lateralmente, a vascularização consiste de ramos, emitidos pelos

feixes marginais secundários distais, percorrendo diagonal e ascendentemente o mesocarpo

médio, os quais se ramificam profusamente nesse trajeto e constituem ampla rede vascular (Fig.

7E-F). Os feixes vasculares são envoltos por bainha de fibras gelatinosas septadas (Fig. 7G-H),

à exceção daqueles derivados da vascularização ala e ovular (Fig. 7C-F). Essas bainhas são

mais espessas voltadas para o floema e comumente interruptas na porção que circunda o xilema

(Fig. 7H). Freqüentemente, há continuidade entre as bainhas que margeiam os feixes alas e as

calotas de fibras adjacentes ao tecido de separação. Muitas vezes, as fibras gelatinosas

associadas a este tecido e a feixes vasculares contêm substâncias fenólicas (Fig. 7C-D).

Na face ventral, parte do mesocarpo médio consiste de parênquima colenquimatoso,

com células de paredes pouco e irregularmente espessadas, que se dispõem ao longo do tecido

de separação, das fibras gelatinosas adjacentes a ele e de parte dos feixes vasculares provindos

dos feixes alas (Fig. 7C). O restante desse estrato distingue-se como um parênquima com

espaços intercelulares pequenos, porém evidentes. Nas demais regiões do pericarpo, o

mesocarpo médio é formado somente por esse tipo de tecido parenquimático, onde se

observam, algumas vezes, esclereídes isoladas e células com cristais prismáticos. Nas

proximidades do feixe dorsal, esse parênquima exibe redução gradual das dimensões celulares

(Fig. 8A-C).

O mesocarpo interno diferencia-se como estrato esclerenquimático, composto por

fibras de paredes espessas, pontoadas e lignificadas, que freqüentemente apresentam conteúdo

fenólico ou cristais prismáticos. A maioria das fibras dispõe-se obliquamente, embora haja

orientações variadas (Fig. 8A-D).

No endocarpo, as principais mudanças relacionam-se à deposição de material

péctico nas paredes celulares delimitantes da cavidade seminal, que se tornam levemente

espessadas (Fig. 8C), e à obstrução dos estômatos.

A maturação completa do pericarpo ocorre durante os eventos finais da

diferenciação da semente e caracteriza-se pelo alongamento radial das células parenquimáticas

do mesocarpo externo, que lhe confere espessura igual ou superior à do restante do pericarpo

(Fig. 8D).

O fruto maduro é um folículo estipitado (Fig. 9A-C), irregularmente pubérulo

externamente e com tricomas esparsos internamente, que apresenta coloração alaranjada a

vermelha e cálice persistente. O ápice é oblíquo e mucronado (Fig. 9A) e a deiscência ocorre ao

longo do tecido de separação (Fig. 9B). As dimensões e o peso da matéria fresca encontram-se

na tabela 1.

A maturação dos tecidos seminais inicia-se quando o pericarpo se encontra

parcialmente diferenciado. A semente madura tem testa preta e arilo amarelo, que recobre de

um quarto a um terço da semente a partir da região rafe-calazal. É hemítropa, com hilo sub-

basal e micrópila voltada para o ápice (Fig. 9D-E). As dimensões e o peso da matéria fresca são

apresentados na tabela 2.

Na exotesta, as células expandem-se radialmente, constituindo uma paliçada curta,

revestida por cutícula delgada. As paredes tangenciais externas dessas células tornam-se

consideravelmente espessadas; nas paredes radiais, ocorre espessamento discreto. Compostos

fenólicos impregnam as paredes celulares e são acumulados em vacúolos das células da exo- e

mesotesta, que se torna aerenquimática (Fig. 10A-C).

No arilo maduro, a epiderme mantém-se fenólica; muitas vezes, no entanto, esse

conteúdo apresenta aspecto floculado e reação menos intensa que a observada na estrutura

jovem. Os estômatos mostram-se obliterados; tricomas tectores não foram encontrados nessa

fase. No tecido fundamental, as células fenólicas avolumam-se e exibem dimensões geralmente

maiores que as células com reservas (Fig. 10D-E), que contêm amido, lipídios e proteínas;

contudo, a proporção destas é maior.

A atividade meristemática tardia na endotesta persiste por algum tempo, tornando-a

irregularmente multisseriada, com espessura de uma a três células parenquimáticas

aproximadamente (Fig. 10A, F). Na anti-rafe e adjacências, as células da camada interna desse

tecido apresentam cristais prismáticos; nas demais regiões, a presença de cristais é menos

comum (Fig. 10G). No tegumento maduro, a distinção entre endo- e mesotesta muitas vezes não

é clara, devido à ausência dos cristais, a interrupções nas camadas endotestais e à deposição de

compostos fenólicos nas paredes e vacúolos de suas células. Entretanto, é possível delimitar as

camadas endotestais, pela sua posição, dimensões celulares geralmente menores que as de

células mesotestais e menor volume de espaço intercelular (Fig. 10C).

O exotégmen, que é descontínuo (Fig. 10F), exceto na base do arilo, distingue-se

como uma camada de fibras lignificadas, dispostas longitudinalmente. Em alguns pontos, o

exotégmen é bisseriado. O mesotégmen persiste apenas na calaza, constituindo-se de duas a três

camadas de esclereídes. O endotégmen é absorvido completamente (Fig. 10H).

Após o embrião atingir o estádio globular, o endosperma celulariza-se rapidamente.

A epiderme deste tecido destaca-se das demais camadas por apresentar células com citoplasma

denso. Estas células e aquelas das camadas subjacentes próximas dividem-se periclinalmente,

produzindo arranjos radiais. Freqüentemente, os núcleos das células do endosperma são

volumosos (Fig. 11A-C) e exibem dois a três nucléolos. Durante o desenvolvimento do

embrião, o endosperma é consumido, com exceção da epiderme, que se mostra fortemente

adnata ao tegumento. Na semente madura, o endosperma é pontualmente descontínuo, com

espessura de uma a três células que possuem formatos variáveis, paredes pécticas e pequenos

vacúolos com conteúdo fenólico (Fig. 10A-C).

O embrião tem coloração esverdeada e consiste de dois cotilédones plano-convexos,

unidos pelo eixo hipocótilo-radícula espesso e curto (Fig. 11D, G), cujo ápice radicular

apresenta primórdio de coifa (Fig. 11D-E) e posiciona-se no canal micropilar; a plúmula é

rudimentar (Fig. 11F). A protoderme é revestida por cutícula evidente, acumula substâncias

fenólicas e gotas lipídicas e, eventualmente, desenvolve alguns tricomas dendróides abaixo da

inserção dos cotilédones (Fig. 11G). No meristema fundamental, ocorrem cavidades secretoras

similares àquelas observadas no pericarpo (Fig. 11D, G-H). As células fundamentais possuem

paredes impregnadas por compostos fenólicos, que também podem ser depositados em

vacúolos, sobressaindo-se às reservas lipídicas e protéicas. As células predominantemente

fenólicas constituem uma ou mais camadas contíguas à protoderme ou se encontram mais ou

menos dispersas entre as células que armazenam lipídios e proteínas (Fig. 11H). No eixo

embrionário, observam-se três traços vasculares divergindo do cilindro procambial em direção a

cada cotilédone e deixando uma lacuna. Entretanto, dois traços adjacentes fundem-se quando

começam a se separar do cilindro vascular. Desta forma, cada cotilédone recebe dois traços

vasculares (Fig. 11G) que se ramificam na inserção deste órgão.

DISCUSSÃO

O fechamento ontogenético das margens carpelares, conforme se observou em C.

suberosus, ocorre em outras Connaraceae (Dickison, 1971), Rosaceae (Sterling, 1969),

Brunelliaceae (Eyde, 1970), Cunoniaceae (Dickison, 1975) e Fabaceae (Tucker e Kantz, 2001).

Nestas famílias, com exceção de Cunoniaceae, a vascularização carpelar aparentemente evoluiu

a partir de um padrão que consiste de um feixe dorsal, um par de feixes ovulares e um par de

feixes alas, mediante fusão entre feixes ovulares e alas, em extensões variáveis, para formar os

feixes ventrais, condição esta geralmente relacionada ao fechamento dos primórdios carpelares

(Sterling 1953, 1969; Eyde, 1970; Dickison 1971). Em Connaraceae, os avanços evolutivos

raramente conduziram à fusão entre feixes ovulares e alas; entretanto, em algumas espécies, a

fusão entre os ovulares resultou em três feixes principais na região ventral (Dickison, 1971).

Diferentemente, C. suberosus apresenta um complexo ovular formado pela união parcial de

faixas procambiais ovulares àquelas derivadas dos feixes alas, imediatamente abaixo da

placenta.

A reentrância externa, que se estende ao longo da sutura até o ginóforo, em outros

taxa, geralmente não é observada na porção do carpelo fechada congenitamente. Matthews e

Endress (2002) referem-se a essa reentrância na zona de fusão congênita dos carpelos de

Connaraceae, Brunelliaceae e Acsmithia (Cunoniaceae); também destacam que essa

característica foi uma das quais subsidiou a associação anterior entre Connaraceae e Fabaceae.

Em C. suberosus, assim como nas demais Connaraceae e Brunelliaceae (Jongkind,

1989; Matthews e Endress, 2002), há dois óvulos colaterais por carpelo. A micrópila é formada

por ambos os tegumentos, o que é usual em Connaraceae (Corner, 1976); no entanto, C.

conchocarpus apresenta micrópila endostomal (Matthews e Endress, 2002). Na maioria das

Connaraceae, apenas um óvulo desenvolve-se em semente; contudo, excepcionalmente,

espécies unisseminadas podem apresentar duas sementes por fruto (Jongkind, 1989), conforme

também se observou em C. suberosus. Aparentemente, parte das sementes desta espécie pode se

originar por apomixia, visto que, em alguns botões florais em pré-antese de plantas longistilas,

as quais se mostraram funcionalmente femininas (Denardi e Oliveira, Cap. II, neste volume),

observou-se endosperma em início de desenvolvimento; porém não foram realizados

experimentos de campo para avaliar a importância desse processo no sucesso reprodutivo da

espécie.

O desenvolvimento inicial do pericarpo de C. suberosus decorre principalmente da

atividade meristemática; no entanto, a maior freqüência de divisões celulares na face ventral

resulta em crescimento assimétrico, que coloca o estilete em posição quase horizontal. Eyde

(1970) verificou desenvolvimento similar nos frutos de Brunellia spp. (Brunelliaceae), cujo

apículo mostra-se horizontal, divergente ou reflexo.

Durante a expansão do pericarpo, os tricomas endocárpicos iniciam a atividade

secretora. Embora este tipo de tricoma tenha sido observado em várias espécies de Connarus

(Corner, 1976; Forero, 1983; Jongkind, 1989; Forero e Costa, 2002), nenhuma investigação foi

empreendida a respeito de suas funções. Considerando que, em C. suberosus, eles são formados

durante todo o período que antecede à diferenciação das demais células do endocarpo,

mostrando-se ativos concomitantemente à redução da densidade dos tricomas exocárpicos e à

expansão da cavidade seminal, sugere-se que tais tricomas internos conferem alguma proteção à

semente em desenvolvimento contra microrganismos patogênicos ou a instalação de larvas de

insetos. Em várias famílias, tricomas glandulares externos, muitas vezes, associam-se à defesa

química de partes vegetais (Werker, 2000; Wagner et al., 2004), o que corrobora a hipótese aqui

apresentada.

A ocorrência de tricomas internos de natureza glandular, aparentemente, é rara;

outros registros obtidos referem-se a tricomas intra-ovarianos em Araceae (French, 1987), os

quais podem funcionar como obturador ou tecido de transmissão especializado, e em

Elaeocarpaceae, filogeneticamente relacionada a Connaraceae (Matthews e Endress, 2002). Em

Oxalidales sensu APG (2003), tricomas não-glandulares foram observados na epiderme interna

do ovário de espécies de Oxalidaceae (Sauer, 1933; Estelita-Teixeira, 1984; Matthews e

Endress, 2002), Elaeocarpaceae e Tremandraceae (Matthews e Endress, 2002); assim como no

endocarpo de algumas Oxalis (Sauer, 1933; Lourteig, 1994; Fiaschi e Conceição, 2005; Denardi

e Oliveira, Cap. V, neste volume) e Connarus (Dickison, 1971; Forero, 1983; Jongkind, 1989;

Forero e Costa, 2002).

Outro caráter endocárpico compartilhado por estes dois gêneros refere-se à

ocorrência de estômatos em C. suberosus, relatada neste estudo, e em algumas espécies de

Oxalis (Sauer, 1933; Denardi e Oliveira, Cap. V, neste volume). Em C. suberosus, os estômatos

somente foram detectados a partir da expansão do pericarpo, mostrando-se obliterados na

maturidade deste órgão; assim, sua atividade, aparentemente, relaciona-se ao período de maior

crescimento da semente, que se inicia após a expansão do pericarpo, durante o qual tais

estruturas provavelmente promovem as trocas gasosas da cavidade seminal.

Segundo Jongkind (1989), em todas as espécies de Connarus, o desenvolvimento

da semente é incipiente até a completa expansão do pericarpo. Esse padrão aplica-se a C.

suberosus, com a ressalva que o mesocarpo externo alonga-se integralmente apenas na fase de

maturação do pericarpo. Também em algumas Fabaceae, como Inga fagifolia (Oliveira e

Beltrati, 1993), Acacia paniculata (Souza, 1993) e Pterocarpus violaceus (Nakamura e

Oliveira, 2005), o desenvolvimento do pericarpo e da semente não são concomitantes, e a

diferenciação seminal ocorre após a maturação do pericarpo. Segundo Nitsch (1953), a

alternância entre o crescimento pericárpico e seminal indica que estes processos competem por

nutrientes; Souza (1993) atribuiu essa defasagem à inexistência de um sistema estruturalmente

adequado do pericarpo jovem de A. paniculata para proteger suas sementes imaturas, o qual só

se constitui com a maturação dos tecidos esclerenquimáticos. O pericarpo de C. suberosus

dispõe de barreiras mecânicas e químicas que conferem alguma proteção à semente em

desenvolvimento; assim a hipótese apresentada por Nitsch (1953) parece mais adequada a esta

espécie, que ocorre em áreas de cerrado, onde os solos geralmente são distróficos.

Diferentemente das espécies de Fabaceae referidas acima, a maturação dos tecidos

seminais de C. suberosus ocorre quando o pericarpo encontra-se parcialmente diferenciado, o

qual reassume o crescimento, mediante expansão radial das células parenquimáticas do

mesocarpo externo, ao término da diferenciação embrionária. A retomada do alongamento

pericárpico após a maturação da semente é típica de frutos carnosos, especialmente os

drupáceos (ver Roth, 1977).

Segundo Fahn e Zohari (1955), a deiscência ativa de frutos de Fabaceae requer a

disposição cruzada de células esclerenquimáticas e/ou de suas micelas de celulose e a presença

de um tecido de separação estendendo-se, na região de sutura, da epiderme interna à externa.

Considerando que C. suberosus apresenta a maioria das fibras do mesocarpo interno e aquelas

associadas aos feixes vasculares orientadas diagonalmente em relação ao eixo longitudinal do

folículo, é provável que a expansão radial do mesocarpo externo represente parte de um

mecanismo de turgor, que determina a deiscência do pericarpo. Os apontamentos sobre a

anatomia do pericarpo de algumas Connaraceae, apresentados por Corner (1976),

aparentemente indicam a ocorrência deste mecanismo na família, visto que o folículo de C.

monocarpus é desprovido de um estrato esclerenquimático, enquanto Jollydora duparquetiana,

cujos frutos são indeiscentes, possui mesocarpo interno não-especializado e a porção externa do

mesocarpo esclereificada.

As observações realizadas por Corner (1976) parecem revelar a existência de uma

estrutura pericárpica fundamental em Connarus, representada por seis estratos: epiderme

externa unisseriada; córtex externo parenquimático, com numerosas células pétreas e

grupamentos dispersos de células contendo resina; uma faixa estreita de numerosos feixes

vasculares revestidos por fibras; córtex interno aerenquimatoso; endocarpo fibroso ou não-

especializado; e epiderme interna. Tomada a devida cautela quanto à terminologia utilizada pelo

autor, pode-se inferir que C. suberosus ajusta-se ao referido padrão.

Corner (1976) destacou que a semente das Connaraceae é uma das mais distintas

entre dicotiledôneas. Suas principais características são a forma pré-rafeal, a testa preta com

paliçada exotestal firme mas não lignificada, o exotégmen fibroso, a presença de feixe vascular

pré-rafeal, o arilo calazal, o embrião grande e o aroma semelhante ao de feijão exalado por

tecidos triturados.

Segundo Corner (1976), a semente pré-rafeal está em via de se tornar ortótropa;

assim, a construção hemítropa observada em C. suberosus, a qual preserva a vascularização pré-

rafeal, parece representar um estádio transicional posterior à forma pré-rafeal. Corner (1976)

referiu-se à semente de C. semidecandrus como hemítropa e vascularizada por vigoroso feixe

pré-rafeal. Interessantemente, C. suberosus possui semente vascularizada por um complexo de

feixes que irriga as regiões rafeal e pré-rafeal.

A excrescência carnosa da semente de C. suberosus, a qual se desenvolve sobre a

rafe e calaza, foi tratada neste trabalho como arilo, que é um termo aplicado genericamente a

apêndices carnosos de sementes, por autores como Corner (1976) e Kapil, Bor e Bouman

(1980); em Connaraceae, no entanto, tais estruturas foram indistintamente consideradas como

complexos arilo sarcotesta-calazal (Corner, 1976), arilóides (Forero, 1983) ou sarcotestas

(Jongkind, 1989). Cabe destacar que as espécies estudadas por Corner (1976) não apresentaram

arilo vascularizado; em C. suberosus, ele recebe terminações vasculares na região proximal.

Segundo Corner (1976), as sementes de Connaraceae são exotestais, com

exotégmen mais ou menos desenvolvido; o mesofilo de ambos os tegumentos é multiplicativo,

mas o tégmen é reabsorvido durante o desenvolvimento, com exceção do exotégmen, que se

mantém como uma camada, às vezes interrupta, de fibras lignificadas, dispostas

longitudinalmente. Nas sementes de C. suberosus, além destas características, observou-se que

a endotesta e o exotégmen são multiplicativos, diferenciando-se, respectivamente, como um

extrato parenquimático, irregularmente multisseriado, e uma camada de fibras lignificadas,

descontínua e pontualmente bisseriada. Ainda de acordo com Corner (1976), o exotégmen

fibroso relaciona Connaraceae a famílias como Oxalidaceae, ambas pertencentes a Oxalidales;

Boesewinkel (1985) apontou, ainda, a ocorrência de endotesta cristalífera em ambas as famílias,

característica também verificada neste trabalho.

Connarus suberosus também difere das espécies examinadas por Corner (1976),

devido à ocorrência de camadas mesotégmicas esclerificadas e à adnação da epiderme

endospérmica ao tegumento.

Na região rafe-calazal, os estratos esclerenquimáticos apresentam-se mais

conspícuos que em outras partes da semente de C. suberosus, constituindo-se de exotégmen

contínuo e comumente bisseriado, subtendido na calaza, por esclereídes de origem

mesotégmica. Considerando que o arilo tem origem rafe-calazal, a presença de tecido mecânico

nesta região reduz a vulnerabilidade do embrião.

Corner (1976) e demais autores referidos neste trabalho não mencionaram o tipo de

desenvolvimento do endosperma de Connaraceae. Em C. suberosus, observou-se que a

formação do endosperma progride, inicialmente, de forma nuclear, sendo ampliado, após a

citocinese, mediante atividade meristemática que se instala nas células epidérmicas e derivadas

próximas. As divisões periclinais dessas células determinam o arranjo radial observado na

porção externa deste tecido. Este tipo de endosperma, denominado núcleo-celular, foi

recentemente descrito por Oliveira (2007) e também ocorre em Oxalis cytisoides (Denardi e

Oliveira, Cap. V, neste volume).

Freqüentemente, as células endospérmicas de C. suberosus exibem núcleos

volumosos, com dois a três nucléolos. Vijayaraghavan e Prabhakar (1984) e Werker (1997)

relataram que o aumento de tamanho dos núcleos endospérmicos geralmente é ocasionado por

poliploidia, mediante endorreduplicação, inibição mitótica no decorrer da prófase ou metáfase,

entre outros processos; contudo, o número de nucléolos não constitui um índice do nível de

ploidia. Os autores evidenciaram, também, que a endopoliploidia é um mecanismo controlado

geneticamente, que aumenta a síntese de macromoléculas, principalmente proteínas e

carboidratos, requeridas para o desenvolvimento do endosperma e do embrião.

Quase todo endosperma de C. suberosus é consumido, durante o desenvolvimento

do embrião, exceto a epiderme, que se torna fortemente adnata ao tegumento. O estrato péctico

amorfo, observado na fase precedente à celularização dos núcleos endospérmicos,

provavelmente, é responsável por essa concrescência. Na semente madura, as células do

endosperma possuem paredes pécticas, pequenos vacúolos com conteúdo fenólico e nenhum

depósito de material nutritivo. Segundo Werker (1997), em certos taxa, o endosperma

relaciona-se à proteção física do embrião ou favorece a embebição da semente, dependendo,

respectivamente, da natureza rígida ou mucilaginosa do espessamento parietal. Em C.

suberosus, parece pouco provável que este tecido tome parte importante na absorção de água

durante a germinação, tendo em vista que as paredes celulares não apresentam espessamento

significativo e a natureza hidrofóbica dos compostos fenólicos acumulados nos vacúolos. A

ocorrência de camadas endospérmicas em sementes de Connarus não foi relatada em estudos

prévios e a ausência delas foi interpretada por Forero (1983) como um dos caracteres que

distinguem Connarus de Cnestidium. É possível que o endosperma residual esteja presente em

outras espécies de Connarus, mas sua observação seja prejudicada pela junção entre ele o

tegumento.

O embrião de C. suberosus é plano-convexo, do tipo invaginado, e apresenta

radícula posicionada no canal micropilar. Jongkind (1989) relatou que, em parte das espécies de

Rourea e Connarus, a radícula localiza-se mais ou menos ventral ou dorsalmente, enquanto a

micrópila é apical, como nas demais Connaraceae. Em C. staudtii e C. congolanus, o autor

observou a radícula no centro da semente, envolta por cotilédones peltados.

Alguns caracteres estruturais de C. suberosus, observados neste estudo, como a

ocorrência de tricomas, compostos fenólicos e cavidades contendo resinas, são considerados

xeromorfos (Fahn e Cutler, 1992); assim possuem valor adaptativo em condições como as do

cerrado. Os tricomas dendróides que revestem sépalas, ovário e fruto são típicos de Connarus,

no âmbito das Connaraceae (Dickison, 1973a). O arranjo compacto desses tricomas,

especialmente na superfície do ovário e frutos jovens, sugere que atuem como uma barreira

mecânica contra herbívoros e patógenos, excesso de luminosidade, temperaturas extremas e

transpiração excessiva (Werker, 2000; Wagner et al., 2004). Os compostos fenólicos, os quais

se mostraram amplamente distribuídos nos tecidos pericárpicos e seminais durante o

desenvolvimento, fornecem proteção contra fungos e bactérias, mas também representam

importantes dissuasores alimentares de herbívoros (Swain, 1979). A presença de tais

substâncias em vacúolos e paredes celulares do tegumento seminal maduro, conforme se

observou em C. suberosus, confere-lhe, além da coloração enegrecida, dureza e

impermeabilidade à água (Werker, 1997). O número elevado de cavidades contendo resina, as

quais ocorrem em todos os órgãos estudados, pode se relacionar à redução de perdas hídricas

(Fahn e Cutler, 1992), ou à defesa química (Farrell et al., 1991). No pericarpo, a retenção de

água também é assegurada pela cutícula espessa (Fahn e Cutler, 1992) e por fibras gelatinosas

(Paviani, 1978) associadas a feixes vasculares ou ao tecido de separação.

AGRADECIMENTOS

Nós somos gratos a Luciano C. Milhomens, por realizar a identificação da espécie, e à

FAPESP (Programa BIOTA, proc. nº 00/12469-3), pelo apoio financeiro. João D. Denardi

agradece à CAPES pela concessão da bolsa PICDT e D.M.T. Oliveira ao CNPq, pela bolsa de

produtividade em pesquisa.

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Ilustrações

Fig. 1. Ovário de botões florais e flores em antese de Connarus suberosus. Secção

longitudinal (A); secções transversais (B-H). (A) Detalhe do ginóforo e região basal do ovário

na antese. (B-D) Ovário de botões florais mostrando, respectivamente, margens carpelares

livres, parcialmente fundidas congenitamente e completamente fechadas ontogeneticamente.

(E) Aspecto geral do ovário, cujos óvulos diferem quanto às dimensões. (F-H) Detalhes das

regiões dorsal, ventral e lateral do ovário, respectivamente; notar que a cavidade secretora é

delimitada por epitélio. (I) Detalhe de um tricoma dendróide. (db, feixe dorsal; ie, epiderme

interna; im, mesofilo interno; ls, cordão vascular lateral; mm, mesofilo médio; oe, epiderme

externa; om, mesofilo externo; sc, cavidade secretora; ponta de seta, sutura; seta, reentrância).

Barras de escala = 100 µm (A, E); 25 µm (B, F, H); 50 µm (C-D, G, I).

Fig. 2. Diagramas de secções transversais do ginóforo (A) e ovário (B-E) de flor longistila de

Connarus suberosus no início da antese, ilustrando a vascularização destes órgãos. (A)

Emissão de traços ovulares a partir de feixes próximos do dorsal, originando uma lacuna

parenquimática no cilindro vascular. (B) Região basal do ovário, onde se observa o início da

diferenciação do lóculo, acima da lacuna parenquimática, ampliada em decorrência da

migração dos traços ovulares para a região ventral, que também é vascularizada pelos traços

alas e traços de feixes marginais secundários. (C) Região basal do ovário, abaixo da placenta,

ilustrando a emissão de traços vasculares, a partir dos feixes alas (seta). (D) Ovário

seccionado no nível das inserções ovulares, destacando o complexo ovular resultante da fusão

das faixas ovulares àquelas derivadas dos feixes alas. (E) Ovário seccionado acima das

inserções ovulares, mostrando os complexos vasculares ventrais produzidos pela fusão de

feixes alas aos feixes marginais secundários. (db, feixe dorsal; dt, traço dorsal; lo, lóculo; ls,

faixa procambial lateral; mb, feixe marginal secundário; mt, traço marginal secundário; oc,

complexo vascular ovular; ot, traço ovular; ov, óvulo; pl, lacuna parenquimática; vc,

complexo vascular ventral; wt, traço ala). Barras de escala = 100 µm (A-E).

Fig. 3. Botões florais e flores em antese de Connarus suberosus. Secções transversais (A, C,

E-G) e longitudinais (B, D). (A) Aspecto geral do ovário de flor em antese, apresentando um

óvulo abortado. (B-C) Detalhes de óvulos férteis. (D) Detalhe de um primórdio ovular,

mostrando o megasporocito. (E) Aspecto geral de um botão floral, mostrando anteras cujo

pólen foi absorvido e ovário com óvulo apresentando endosperma em desenvolvimento. (F-G)

Respectivamente, detalhes de uma antera e do óvulo com núcleos endospérmicos, vistos em

(E). (en, endóstoma; eu, núcleo endospérmico; ex, exóstoma; nu, nucelo; oe, tegumento

externo; oi, tegumento interno; rb, feixe rafeal). Barras de escala = 100 µm (A-B, E); 25 µm

(C, G); 10 µm (D); 50 µm (F).

Fig. 4. Secções transversais do pericarpo de Connarus suberosus em atividade meristemática.

(A) Detalhe da região dorsal; notar tricomas dendróides em desenvolvimento no exocarpo e

divisões anticlinais das células comuns; no mesocarpo externo, notar inúmeras divisões em

planos aleatórios. (B) Detalhe da região lateral. (C) Detalhe do exocarpo e mesocarpo externo.

(D) Detalhe da região ventral, logo acima da inserção da semente; notar feixes vasculares

derivados da vascularização ala (seta escura) e das faixas ovulares (seta clara). (E) Detalhe do

mesocarpo médio, mesocarpo interno e endocarpo, no qual se observa um trecho

multisseriado (ponta de seta). (F) Tricoma endocárpico em desenvolvimento. (dm, mesocarpo

médio; is, mesocarpo interno; om, mesocarpo externo; sc, cavidade secretora). Barras de

escala = 50 µm (A-B); 25 µm (C-E); 100 µm (D); 10 µm (F).

Fig. 5. Secções transversais do pericarpo de Connarus suberosus parcialmente expandido. (A)

Aspecto geral da região lateral. (B) Detalhe do exocarpo e mesocarpo externo, com ampla

cavidade secretora; notar estômato, com projeções cuticulares recobrindo parcialmente o

ostíolo. (C) Detalhe do mesocarpo médio e estratos subjacentes; notar feixes laterais

parcialmente diferenciados. (D) Região ventral do pericarpo. (E) Detalhe das camadas

internas do mesocarpo médio, mesocarpo interno e endocarpo com estômato (seta). (F)

Tricoma endocárpico em fase secretora. (dm, mesocarpo médio; lb, feixe lateral; om,

mesocarpo externo; sc, cavidade secretora; vc, complexo vascular ventral). Barras de escala =

100 µm (A); 25 µm (B, E); 50 µm (C); 100 µm (D); 10 µm (F).

Fig. 6. Semente de Connarus suberosus em fase inicial de desenvolvimento, com predomínio

de atividade meristemática. Secções transversais (A-C, F-G) e longitudinais (D-E, H). (A-B)

Detalhes ilustrando a progressão da atividade meristemática na testa e a reabsorção do

tégmen. (C) Detalhe da região calazal, onde o mesotégmen é multiplicativo; notar divisões

periclinais na camada subexotestal (ponta de seta clara) e endotégmen colapsado (seta escura).

(D) Aspecto geral do arilo rafe-calazal; notar arranjo radial de células fenólicas. (E) Detalhe

do arilo, com terminações vasculares (seta clara) na porção proximal. (F) Detalhe do

tegumento na região do complexo pré-rafeal; notar tégmen parcialmente colapsado e

reabsorvido, onde se reconhece o exotégmen, algumas células colapsadas do mesotégmen e

resquícios fenólicos do endotégmen, margeados internamente pelo endosperma nuclear. (G)

Detalhe do tegumento na região calazal, no qual se evidencia um pequeno trecho bisseriado

do exotégmen. (H) Detalhe da região micropilar, mostrando o estrato péctico (asterisco) que

se interpõe entre o tégmen e o endosperma. (cr, complexo rafeal; eg, exotégmen; em,

embrião; eo, endotesta; ep, endosperma; et, exotesta; mg, mesotégmen; mt, mesotesta; pc,

complexo pré-rafeal; te, testa; tg, tégmen). Barras de escala = 25 µm (A-B); 50 µm (C); 100

µm (D-E); 50 µm (F); 25 µm (G-H).

Fig. 7. Pericarpo de Connarus suberosus parcialmente diferenciado. Secções transversais (A-

D, H); secções diagonais (F-G). (A) Aspecto geral da região lateral. (B) Detalhe do exocarpo,

estômato (ponta de seta), mesocarpo externo e das fibras gelatinosas associadas a feixes

vasculares. (C) Detalhe da região ventral; notar tecido de separação (dupla ponta de seta) e

feixes derivados da vascularização ala (asterisco). (D) Detalhe das calotas de fibras

gelatinosas que ladeiam o tecido de separação; notar conteúdo fenólico em várias fibras. (E)

Aspecto do pericarpo diafanizado; observar disposição diagonal dos feixes laterais. (F)

Detalhe da vascularização na região basal do pericarpo, evidenciando a origem de um feixe

lateral, a partir do feixe marginal secundário distal; notar feixes derivados da faixa ovular

(seta). (G) Detalhe de feixe lateral, com fibras gelatinosas septadas. (H) Detalhe de feixe

lateral. (cf, calota de fibras; dm, mesocarpo médio; el, esclereídes; is, mesocarpo interno; lb,

feixe lateral; mb, feixe marginal secundário; om, mesocarpo externo; sf, fibra gelatinosa

septada; vc, complexo vascular ventral). Barras de escala = 100 µm (A, C); 25 µm (B, H); 50

µm (D, G); 3 mm (E); 200 µm (F).

Fig. 8. Secções transversais do pericarpo maduro de Connarus suberosus. (A) Detalhe do

mesocarpo médio e camadas subjacentes na região próxima ao feixe dorsal; notar esclereídes

dispersas no tecido parenquimático (ponta de seta). (B-C) Detalhes das camadas internas do

mesocarpo médio, mesocarpo interno e endocarpo; notar fibras com conteúdo fenólico (seta) e

endocarpo pontualmente bisseriado (asterisco). (D) Aspecto geral da região lateral, alongada

em comparação com a fase anterior (ver Fig. 7A). (dm, mesocarpo médio; is, mesocarpo

interno; om, mesocarpo externo). Barras de escala = 50 µm (A-B); 25 µm (C); 100 µm (D).

Fig. 9 Aspectos gerais do fruto (A-C) e da semente (D-E) maduros de Connarus suberosus.

(A) Vista lateral. (B) Vista ventral do pericarpo após a deiscência. (C) Secção longitudinal

mediana, expondo a semente. (D) Vista lateral; notar micrópila voltada para o ápice, hilo sub-

basal e arilo rafe-calazal. (E) Vista hilar. Barras de escala = 10 mm (A-E).

Tabela 1. Dimensões médias (cm) e peso fresco (g) do fruto de C. suberosus,

seguidos dos respectivos valores de desvio-padrão e da amplitude de variação de

cada parâmetro.

Média Desvio padrão

Amplitude de

variação

Comprimento

2,67 5,81 1,42-3,47

Largura

1,41 2,95 0,95-1,93

Espessura

1,26 2,00 0,95-1,66

Peso

1,53 0,48 0,71-2,27

Tabela 2. Dimensões médias (cm) e peso fresco (g) da semente de C. suberosus,

seguidos dos respectivos valores de desvio-padrão e da amplitude de variação de

cada parâmetro.

Média Desvio padrão

Amplitude de

variação

Comprimento

1,50 2,06 1,09-1,97

Largura

0,79 0,64 0,58-0,90

Espessura

0,58 0,45 0,50-0,70

Peso

0,49 0,07 0,29-0,65

100

Fig. 10. Semente de Connarus suberosus em diferenciação (A-B, F-G) e madura (C-E, H).

Secções transversais (A-C, E-H) e longitudinal (D). (A-C) Detalhes do tegumento e tecidos

subjacentes, ilustrando sucessivas modificações estruturais; notar camadas endospérmicas

adnatas ao tegumento (B-C), indicadas pela seta clara. (D-E) Respectivamente, aspecto geral e

detalhe do arilo. (F) Detalhe de camadas mesotestais, endotesta multiplicativa, exotégmen e

camadas endospérmicas. (G) Aspecto geral da semente sob luz polarizada, mostrando cristais

prismáticos na endotesta (seta escura), principalmente na anti-rafe e adjacências; as cavidades

secretoras dos cotilédones e o xilema também se mostram refringentes. (H) Detalhe do

tegumento na região calazal, abrangendo camadas mesotestais, complexo vascular rafeal,

exotégmen, mesotégmen e camadas endospérmicas adnatas (seta clara). (co, cotilédone; eg,

exotégmen; eo, endotesta; ep, endosperma; et, exotesta; mg, mesotégmen; mt; mesotesta).

Barras de escala = 50 µm (A-B, H); 25 µm (C, E-F); 200 µm (D); 400 µm (G).

101

Fig. 11. Semente em diferenciação (A-C) e embrião maduro (D-H) de Connarus suberosus.

Secções transversais (A-C, G-H) e longitudinais (D-F). (A-B) Detalhe de estratos

tegumentares internos e endosperma, com células dispostas radialmente (A), em função de

divisões periclinais; notar a ocorrência de mitose (ponta de seta). (C) Detalhe de células

endospérmicas, evidenciando distintos tamanhos de núcleos. (D) Aspecto geral do eixo

embrionário e inserção dos cotilédones. (E-F) Detalhes do ápice radicular e plúmula,

respectivamente. (G) Detalhe do nó cotiledonar, mostrando a emissão de traços vasculares

(setas). (H) Detalhe de cotilédone. (po, primórdio de coifa; sc, cavidade secretora). Barras de

escala = 25 µm (A, C, E, G); 10 µm (B); 200 µm (D); 50 µm (F); 100 µm (H).

CAPÍTULO IV

Trabalho elaborado segundo as normas da Revista Brasileira de Botânica.

103

Morfologia e Anatomia Floral de Oxalis cytisoides Zucc. (Oxalidaceae)

JOÃO DONIZETE DENARDI

e DENISE MARIA TROMBERT OLIVEIRA

4,5

Título resumido: Morfoanatomia floral de Oxalis cytisoides

. Parte da tese de doutorado do primeiro autor, Programa de Pós-graduação em Ciências

Biológicas (Botânica), Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências, Câmpus de

Botucatu.

. Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul, Unidade Universitária de Coxim, Rua

Pereira Gomes, 355, Vila Santa Maria, 79.400-000, Coxim, MS, Brasil.

. Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de

Botânica, Avenida Antonio Carlos, 6627, Pampulha, Caixa Postal 486, 31.270-901, Belo

Horizonte, MG, Brasil.

. Autor para correspondência: dmtolive[email protected]fmg.br

104

RESUMO - (Morfologia e anatomia floral de Oxalis cytisoides Zucc. (Oxalidaceae)). Oxalis

é o maior gênero de Oxalidaceae, sendo o único com ocorrência natural no estado de São

Paulo. Poucas espécies do gênero tiveram as flores estudadas morfoanatomicamente, embora

tais dados sejam relevantes para a compreensão de relações filogenéticas nas Oxalidales. Com

o objetivo de descrever a anatomia floral de O. cytisoides com ênfase na vascularização,

botões florais e flores em antese foram fixados e incluídos em metacrilato, produzindo-se

laminário permanente pelas técnicas usuais. Oxalis cytisoides apresenta tristilia, com flores

muito similares, que diferem apenas na posição relativa de estames e carpelos. A morfologia

floral é típica de Oxalidaceae, destacando-se que as pétalas expandem-se apenas após a

diferenciação dos demais verticilos, sendo livres na base e no ápice, conatas em pequena

extensão. Na base do androginóforo, cinco nectários antepétalos são observados, o que

constitui uma variação dos padrões referidos na literatura para a família. Da análise da

vascularização, destaca-se que a flor apresenta traços de estames antepétalos emitidos

previamente aos antessépalos, de modo que existe obdiplostemonia primária.

Anatomicamente, o que mais se destaca é similaridade entre o mesofilo de sépalas e carpelos,

ambos com ampla extensão ocupada por volumosas células aqüíferas; também chama a

atenção a presença, nos quatro verticilos, de tricomas tectores e glandulares. Os óvulos são

anátropos, bitegumentados e tenuinucelados, típicos de Oxalidaceae.

Palavras chave – anatomia, flor, heterostilia, morfologia, Oxalis, tristilia

Introdução

As eurosídeas I constituem um amplo subclado incluindo Oxalidales,

Malpighiales e Celastrales que, segundo o APG (2003), apresenta muitas relações não

resolvidas. Matthews & Endress (2005) descreveram, com base na morfoanatomia floral,

caracteres que evidenciam a associação entre Celastrales e Malpighiales, bem como

potenciais sinapomorfias e tendências apomórficas entre as três ordens de eurosídeas I.

Na flora brasileira, Oxalidales (sensu APG 2003, Stevens 2007) está representada

pelas famílias Connaraceae, Cunoniaceae, Elaeocarpaceae e Oxalidaceae (Souza & Lorenzi

2005). Oxalidaceae é constituída por cinco gêneros e cerca de 800 espécies; Oxalis é,

expressivamente, o maior gênero, abrangendo aproximadamente 700 espécies (Stevens 2007).

São, em geral, ervas bulbosas, raramente arbustos ou árvores, com distribuição tropical e

subtropical. No Brasil, ocorrem dois gêneros (Biophytum e Oxalis) e cerca de 150 espécies

105

(Souza & Lorenzi 2005). No Estado de São Paulo, está naturalmente representada apenas por

Oxalis, embora Averrhoa carambola seja muito cultivada em função dos frutos comestíveis

(Fiaschi & Conceição 2005).

O gênero Oxalis encontra-se dividido em quatro subgêneros: Oxalis, Thamnoxys,

Monoxalis e Trifidus. O subgênero Oxalis caracteriza-se pelo hábito herbáceo e por suas

folhas trifolioladas digitadas, enquanto os representantes de Thamnoxys são arbustivos ou

subarbustivos e apresentam folhas trifolioladas pinadas. Os demais subgêneros abrangem

apenas duas espécies cada um (Lourteig 1994, 2000).

Em Oxalidaceae, as flores são bissexuadas, radiais, usualmente heterostilas, com

cinco sépalas livres e cinco pétalas distintas ou muito levemente conatas, geralmente

convolutas; freqüentemente, ocorrem dez estames com filetes conatos basalmente, os externos

mais curtos que os internos; observa-se a produção de néctar pela base dos filetes ou por

glândulas que, usualmente, se alternam com as pétalas; encontram-se cinco carpelos conatos;

o ovário é súpero, mais ou menos lobado, com placentação axial; distinguem-se, geralmente,

cinco estiletes e os estigmas são freqüentemente capitatos ou puntiformes; em geral, ocorrem

vários óvulos por lóculo (Judd et al. 1999).

Estudos sobre a morfologia e anatomia floral de espécies de Oxalidaceae são

escassos, podendo-se referir os trabalhos de Sauer (1933), Estelita-Teixeira (1984) e

Matthews & Endress (2002). Aspectos da vascularização floral de espécies da família foram

relatados por Narayana (1966), Al-Nowaihi & Khalifa (1971), Kumar (1976) e Estelita-

Teixeira (1980).

Para o presente estudo, selecionou-se Oxalis cytisoides Zucc., espécie que ocorre

em campos e locais úmidos até 950 m de altitude, desde o Ceará até o Rio Grande do Sul e na

Argentina. De acordo com Fiaschi & Conceição (2005), são subarbustos eretos, com até 1 m,

folhas trifolioladas e pinadas; as inflorescências são cimeiras dicasiais; as sépalas são

pubescentes e a corola é rosa; os filetes maiores são apendiculados e pilosos, e os menores são

glabros; os estiletes são também pilosos; os carpelos são glabros e formam-se cápsulas

elipsóides a globosas, glabras, com três sementes por cavidade seminal. Lourteig (1994),

porém, mencionou a ocorrência de pilosidade em ambas as superfícies da cápsula e duas a três

sementes por cavidade seminal.

Oxalis cytisoides inclui-se no subgênero Thamnoxys, cujas espécies evoluíram

principalmente nos campos e cerrados do Brasil (Lourteig, 1994) e para as quais não foram

empreendidos estudos anatômicos com os órgãos reprodutivos. A espécie foi escolhida em

função de sua ocorrência na região de Botucatu, estado de São Paulo, Brasil, e o trabalho foi

106

desenvolvido visando a descrever a anatomia floral de O. cytisoides com ênfase na

vascularização, comparando com o relatado na literatura para as Oxalidales.

Material e métodos

As coletas de material botânico foram inicialmente realizadas em um fragmento

de mata seca à margem da rodovia municipal (Estrada do Roberto) que liga a área urbana do

Distrito de Vitoriana ao Rio Bonito Campo e Náutica, Município de Botucatu, Estado de São

Paulo, Brasil. Considerando a vulnerabilidade desta área de ocorrência de Oxalis cytisoides

Zucc. (Oxalidaceae) ao pisoteio por bovinos, sementes maduras foram coletadas e colocadas

para germinar em sacos de plantio contendo substrato do local de coleta, os quais foram

irrigados e mantidos em casa de vegetação coberta por sombrite 50%, possibilitando o

acompanhamento diário dos eventos da reprodução. Ramos férteis foram herborizados e

registrados no Herbário “Irina Delanova Gemtchujnicov” (BOTU), do Departamento de

Botânica, Instituto de Biociências da UNESP, Câmpus de Botucatu, sob o número 24.172.

Lâminas permanentes de botões florais em diversos estádios de desenvolvimento

e flores em antese foram preparadas a partir de amostras das três formas florais fixadas em

FAA 50 (Johansen, 1940) e conservadas em etanol 70% (Jensen, 1962). As amostras foram

desidratadas em série etanólica, incluídas em metacrilato Leica, conforme o protocolo do

fabricante, e seccionadas transversal e longitudinalmente em micrótomo rotativo com

aproximadamente 8 µm de espessura. As séries obtidas foram coradas com azul de toluidina

0,05%, pH 4,7 (O’Brien et al., 1964) e montadas em resina sintética.

Para se verificarem os sítios de emissão de fragrâncias florais, flores intactas

foram expostas ao vermelho neutro, conforme indicado por Pridgeon & Stern (1983). Testes

histoquímicos foram realizados para detecção de polissacarídeos ácidos, lipídios totais e

compostos fenólicos (Johansen 1940), tratando-se secções semi-finas com vermelho de

rutênio, Sudan IV, lugol e cloreto férrico, respectivamente.

Os resultados obtidos foram registrados digitalmente, utilizando-se câmera

Olympus C7070WZ acoplada a microscópio de luz Olympus BX41.

Resultados

Morfologia – As flores de O. cytisoides são pentâmeras, actinomorfas (figura 1) e diclamídeas

(figura 2). O cálice apresenta prefloração quincuncial (figura 11) e protege os verticilos

internos durante a maior parte da ontogênese floral; é constituído por sépalas verdes a

107

arroxeadas, com base larga e ápice agudo. A prefloração da corola é contorta; durante o seu

desenvolvimento, as pétalas tornam-se conatas (figura 13), mas a base (figuras 11-12), que é

estreita, e a metade superior (figuras 1-2) permanecem livres; a coloração é rósea, salvo a

porção interna do tubo, que é amarela.

Na espécie, ocorrem flores longistilas (figura 3), medistilas (figura 4) e brevistilas

(figura 5), mas as três formas florais não exibem diferenças estruturais marcantes, exceto pela

posição relativa de estames e carpelos.

O androceu e o gineceu são adnatos em curta extensão, produzindo um

androginóforo, onde se reconhecem dez traços estaminais e a vascularização carpelar (figuras

11-12). Acima da região adnata, o androceu exibe os dez estames conatos na base (figura 13)

e dispostos em dois verticilos (figuras 2-6). O verticilo externo compreende os estames

antepétalos, que possuem nectários basais na região externa do androginóforo (figuras 11-12).

Os estames antessépalos, mais longos e calibrosos que os antepétalos (figuras 2-6, 15),

exibem um apêndice não vascularizado, formado abaxialmente na porção livre dos filetes. As

anteras são dorsifixas (figura 15), versáteis e mudam da posição introrsa para extrorsa na

antese; a deiscência das tecas é dada por fenda longitudinal.

O gineceu é formado por cinco carpelos antepétalos, unidos congenitamente pelos

bordos ventrais, de tal modo que o ovário se mostra pentalocular (figura 13); entretanto, na

região apical deste órgão, os carpelos tornam-se individualizados e uniloculares (figura 15).

Observa-se um cômpito apical (figura 14), restrito ao ovário de botões florais. Ao longo da

porção livre de cada carpelo, a sutura (região ventral) é conspícua, exceto na parte superior do

estilete. Externamente, a sutura é acompanhada por uma reentrância que se estende até o

estigma, que é bilobado e papiloso, reagindo intensamente ao vermelho neutro. Nas flores

brevi- e medistilas, as extremidades estigmáticas são decurrentes (figuras 4-5), enquanto são

confluentes nas longistilas (figura 3). Em cada carpelo, há dois ou três óvulos anátropos,

inseridos ao longo da região axial.

Vascularização – Na base do receptáculo, o sistema vascular organiza-se como um

sifonostelo, do qual se separam cinco traços medianos de sépalas (figura 7) e, alternando-se

com estes, cinco projeções que se bifurcam para constituir os traços laterais de sépalas

adjacentes (figura 8); portanto, cada sépala recebe três traços vasculares, que ainda podem se

ramificar durante a migração para a periferia (figura 9). De regiões intercaladas às sépalas,

divergem cinco complexos vasculares (figura 9), dos quais resultam cinco traços externos de

pétalas e cinco traços internos de estames antepétalos (figuras 9-10). Em seguida, o cilindro

108

vascular emite cinco traços de estames antessépalos (figuras 10-11), um pouco menos

conspícuos que os antepétalos e, logo a seguir, os cinco traços dorsais dos carpelos, que se

mostram muito pequenos (figuras 11, 19).

Na base do ovário, simultaneamente à formação dos lóculos, o sistema vascular

apresenta o contorno estrelado com cinco pontas (figura 12). De cada uma destas, deriva um

traço que penetra nas margens laterais concrescidas de carpelos adjacentes. Internamente a

esses traços laterais, o restante do sistema vascular organiza-se em cinco traços ventrais

intercalados aos laterais, alguns deles subdivididos em duas unidades (figuras 12, 20). Acima

deste ponto, a vascularização ventral de cada carpelo torna-se unitária e o feixe ventral de

cada carpelo migra, posicionando-se radialmente ao lateral intercarpelar (figuras 13, 21). No

ovário, os feixes ventrais ramificam-se para suprir óvulos de carpelos contíguos e não se

estendem além da placenta. Ao longo da parede ovariana, os feixes laterais originam cordões

que se ramificam em direção aos feixes dorsais.

Na região apical do ovário, onde o cômpito pode ser observado (figura 22), a

vascularização ovariana é composta pelos cinco feixes dorsais e dez laterais (figura 14),

formados pela subdivisão e divergência para carpelos vizinhos; nesta altura, os filetes estão

individualizados, sendo mais calibrosos nos estames antessépalos (figura 14). Mais ao ápice,

os carpelos também se individualizam e os feixes laterais, dois por carpelo, constituem os

feixes mais evidentes; neste ponto, podem ser vistas as anteras dos estames curtos (figura 15).

Nos estiletes, esses feixes laterais secundários aproximam-se gradativamente do

dorsal (figuras 16-17, 23), fundindo-se a ele e constituindo um complexo (figura 18) que se

estende até o estigma.

Cálice – As sépalas apresentam epiderme coberta por cutícula inconspícua, constituída de

células cubóides a poligonais (figuras 24-26), alongadas longitudinalmente, com parede

periclinal externa convexa (figuras 25-26), que exibem raros cloroplastos; aquelas da face

abaxial mostram-se mais volumosas e possuem paredes periclinais externas levemente

espessadas (figura 25). Estômatos ocorrem em ambas as superfícies (figura 25), enquanto

tricomas restringem-se à abaxial; estes são unicelulares, com paredes lignificadas, providas de

ornamentações verrucosas (figura 26) e conteúdo fenólico; mais raramente, ocorrem tricomas

glandulares, multicelulares e unisseriados (figura 27). Estes tipos de tricomas também

ocorrem em outros órgãos florais, distribuindo-se conforme será indicado. Independentemente

do órgão em que se localizam, os tricomas glandulares coram-se intensamente quando

tratados com vermelho neutro.

109

O mesofilo das sépalas consiste de parênquima clorofiliano lacunoso, cujas

células, aproximadamente cilíndricas, envolvem total ou parcialmente os feixes vasculares

colaterais, e de uma a duas (raro três) camadas de parênquima aqüífero abaxial, formado por

células volumosas, de formato poligonal (figura 25), alongadas no sentido longitudinal e

dispostas compactamente (figuras 24, 26). No mesofilo, observam-se cristais prismáticos de

oxalato de cálcio principalmente no estrato parenquimático frouxo.

Corola – A corola inicia sua diferenciação após os demais órgãos (figura 24), mas se expande

rapidamente, pouco antes e no decorrer do alongamento dos verticilos internos, tornando-se o

invólucro protetor de botões em pré-antese.

A epiderme das pétalas compõe-se de células cubóides (figuras 27-30), alongadas

longitudinalmente, possuindo paredes periclinais externas convexas (figuras 27-30),

levemente espessadas e revestidas por cutícula inconspícua. Na face adaxial do tubo, há

muitas papilas (figuras 28-29) e estômatos elevados (figura 30). Tricomas ocorrem

predominantemente na face adaxial, contudo a maior parte deles é glandular (figura 27).

O mesofilo é representado por parênquima de células de formatos irregulares, com

espaços intercelulares evidentes, e parênquima aqüífero, de células menores que as ocorrentes

nas sépalas, as quais são adjacentes à epiderme de ambas as faces (figuras 28-29). Cristais

prismáticos de oxalato de cálcio apresentam-se dispersos no mesofilo. Ocorrem feixes

vasculares colaterais, nos quais o floema é mais abundante que o xilema, rodeados por bainha

parenquimática (figuras 29-30).

Estames – Os filetes possuem células epidérmicas cubóides a poligonais (figuras 31-32),

alongadas longitudinalmente, cujas paredes periclinais externas, levemente convexas, exibem

espessamentos pécticos (figura 32); no entanto, esses se mostram pouco conspícuos na antese,

exceto na porção distal deste órgão. O mesofilo é parenquimático, com pequenos espaços

entre as células, que são volumosas (figura 32) e alongadas no sentido longitudinal. Estas

envolvem o feixe vascular anficrival e, eventualmente, contêm cristais prismáticos.

Os nectários são observados na base dos estames antepétalos e consistem de

epiderme estomatífera e células fundamentais que se caracterizam pelo citoplasma denso,

núcleo proeminente e menor tamanho em relação às células do parênquima adjacente. Uma ou

duas camadas de células separam o feixe estaminal do tecido nectarífero (figura 33).

O apêndice dos estames antessépalos consiste de emergências recobertas pela

epiderme característica dos filetes e preenchidas por parênquima.

110

Tricomas tectores e glandulares restringem-se aos estames antessépalos e à região

acima da inserção dos apêndices estaminais.

As anteras têm quatro microsporângios, arranjados aos pares em duas tecas

equivalentes, unidas entre si e ao filete pelo conectivo (figuras 34, 36). Inicialmente, a parede

da antera consiste de quatro estratos parietais: protoderme, camada precursora do endotécio,

camada média e camada precursora do tapete; nesta fase, observa-se que todos os

microsporocitos encontram-se em contato direto com o tapete (figura 34). O conectivo

apresenta um cordão procambial (figura 34) e muitas células com pequenos cristais

prismáticos, dispostos em aglomerados similares a drusas (figuras 36-37).

Durante a ontogênese, a camada mediana desintegra-se (figura 35), em estádio

intermediário àqueles em que se observam microsporocitos e tétrades de microsporos; o

tapete mostra-se vestigial, logo que os microsporos tornam-se livres no interior dos

microsporângios (figura 36).

Paralelamente à microgametogênese, as células do endotécio tornam-se mais

volumosas e tendem a cubóides; são células com grande densidade citoplasmática e núcleo

evidente (figura 36). Posteriormente, o endotécio forma espessamentos parietais filiformes

lignificados, dispostos reticuladamente (figuras 37-39); no conectivo, observa-se a

diferenciação do feixe vascular e o endotécio multiplica-se irregularmente, exibindo mais de

uma camada de espessura (figuras 36). Neste período, o grão de pólen já apresenta a parede

bastante espessada e a célula generativa englobada pela vegetativa; esta é grande, vacuolada e

apresenta núcleo globoso, enquanto aquela tem pequeno tamanho, formato elipsóide e núcleo

também muito evidente (figura 38).

Próximo à deiscência da antera, há reabsorção do septo que isola os dois

microsporângios de cada uma das tecas (figura 39). A parede da antera madura apresenta

epiderme formada por células de contorno irregular e endotécio constituído por células mais

alongadas tangencialmente, com os espessamentos parietais e o núcleo bastante evidentes; no

estômio, apenas a epiderme fica diferenciada (figura 39). No interior dos microsporângios,

próximos às paredes tangenciais internas do endotécio ou a resquícios do tapete, encontram-se

os corpos de Ubisch, que reagem similarmente à exina na coloração com azul de toluidina

(figuras 38-40). Os grãos de pólen têm o vacuoma muito reduzido, mostrando grande

densidade celular próximo à deiscência (figuras 39-40); deste modo, fica prejudicada a

observação das demais características internas. Os grãos de pólen também se coram

intensamente quando expostos ao vermelho neutro.

111

Gineceu – A parede ovariana consiste, inicialmente, de quatro estratos parietais (figura 41),

dos quais derivam a epiderme externa, o mesofilo e a epiderme interna. Na antese, a epiderme

externa do ovário é unisseriada, coberta por cutícula inconspícua, formada por células

cubóides, com citoplasma denso e núcleo proeminente (figuras 42-43). Ao longo da

reentrância entre carpelos adjacentes e, em menor extensão, da região dorsal, ocorrem

idioblastos fenólicos (figura 43). Na região apical do ovário, o segmento epidérmico que se

estende da reentrância aos flancos do carpelo constitui-se de células mais volumosas que as

demais. Essas relações de volume são mantidas na porção unilocular do ovário, a partir da

sutura ventral (figura 44). No estilete, as dimensões celulares tornam-se uniformes. A

epiderme deste órgão é composta por células comuns, que possuem parede periclinal externa

convexa, estômatos e tricomas, tanto tectores (figura 45) quanto glandulares.

O mesofilo ovariano compreende duas regiões morfologicamente distintas, na

extensão que abrange das laterais à região dorsal (figura 43). O estrato externo consiste de

células relativamente volumosas, alongadas longitudinalmente, que apresentam paredes

levemente sinuosas e conteúdo hialino. Eventualmente, observam-se divisões aleatórias nessa

camada. A porção interna é formada por pequenas células poligonais, que se dividem

principalmente no plano periclinal, acomodando cordões procambiais. Na região do feixe

dorsal, que é formado por apenas alguns elementos vasculares, geralmente pouco

diferenciados, o mesofilo constitui-se de células de dimensões reduzidas.

Na parede ovariana próxima aos curtos septos, o mesofilo é homogêneo,

consistindo de duas a três camadas de células poligonais (figura 43); algumas dessas com

cristais prismáticos; nessa porção é incomum a ocorrência de divisões celulares.

Ramificações vasculares estendem-se até as proximidades do feixe dorsal, permeando o

mesofilo (figura 43).

Nos septos e na região axial, o mesofilo constitui-se de células cilíndricas a

poligonais alongadas longitudinalmente, que apresentam dimensões variáveis e pequenos

espaços entre si, ocorrendo acúmulo de compostos fenólicos. No septo, ainda se observa um

feixe lateral e um ventral invertido, pouco diferenciados, alinhados radialmente (figura 46).

Ao longo da região individualizada dos carpelos, o mesofilo aos poucos se mostra

relativamente homogêneo, sendo composto por células de contorno poligonal a arredondado,

alongadas longitudinalmente, que apresentam volumes variáveis e pequenos espaços

intercelulares.

112

No ovário, a epiderme interna é formada por células cubóides achatadas

periclinalmente, menores que àquelas da epiderme externa. Compostos fenólicos estão

presentes nas células que delimitam ventralmente o lóculo (figura 43).

Os óvulos são tenuinucelados (figura 47) e bitegumentados (figuras 47, 49), com

micrópila em ziguezague, pressionada contra a placenta (figura 49), e um pequeno apêndice

calazal, composto por células pequenas e densas do tegumento externo (figura 48). Este

tegumento é constituído por três camadas de células (figura 49). A epiderme externa consiste

de células cubóides, com paredes tangenciais externas pécticas e levemente espessadas,

núcleo proeminente e citoplasma denso. No mesofilo, as células são semilunares e apresentam

conteúdo hialino e núcleo arredondado e evidente. Na rafe, onde há ampliação do número de

camadas fundamentais em torno do feixe rafeal, as células são poligonais e menores. A

epiderme interna caracteriza-se por células cubóides alongadas transversalmente, densas e

com conteúdo péctico.

O tegumento interno compreende três a quatro camadas de células com citoplasma

denso e núcleo evidente. As células epidérmicas externas são cubóides e alongadas

longitudinalmente, enquanto no mesofilo há uma ou duas camadas de células com esse

formato, alongadas transversalmente. A epiderme interna constitui o endotélio, com células

cubóides volumosas, um pouco achatadas periclinalmente, que apresentam paredes

tangenciais internas pécticas e levemente espessadas. O nucelo escasso é consumido em

estádios que precedem à antese (figura 49).

Discussão

A característica floral mais marcante de O. cytisoides é a ocorrência de heterostilia

trimórfica. Relatos sobre heterostilia abrangem cerca de vinte e oito famílias de angiospermas;

a maioria das espécies apresenta heterostilia dimórfica, também denominada distilia, enquanto

que a heterostilia trimórfica ou tristilia é mais rara, sendo conhecida em apenas seis famílias

(Barrett et al. 2000). Matthews & Endress (2002) citaram a ocorrência de heterostilia

dimórfica e trimórfica em Oxalidaceae e Connaraceae, ambas pertencentes a Oxalidales (APG

2003), ressaltando que o compartilhamento de heterostilia trimórfica é especialmente

significante, visto que é conhecida para poucas famílias de angiospermas.

A análise da morfologia floral de O. cytisoides revela características típicas da

família, como as relatadas por Judd et al. (1999), podendo-se destacar pequenas

peculiaridades. Além da heterostilia, verificou-se que as pétalas, que no grupo podem ser

113

distintas ou muito levemente conatas segundo os referidos autores, chamam a atenção na

espécie estudada. Oxalis cytisoides inicia tardiamente a diferenciação das pétalas, mas estas se

expandem rapidamente, tornando-se o invólucro protetor de botões em pré-antese; além disso,

ocorre conação em pequena extensão, embora tanto a região proximal quanto a distal sejam

livres.

Também cabe destacar que, em O. cytisoides, as cinco regiões nectaríferas são

formadas nas porções antepétalas do androginóforo, conforme se observou em O. latifolia, O.

oxyptera, O. corymbosa (Estelita-Teixeira 1980, 1984) e O. ortgiesii (Mattews & Endress

2002); no entanto, em O. pescaprae, toda porção externa do androginóforo constitui-se de

tecido nectarífero (Kumar, 1976). Judd et al. (1999) afirmaram que, nas Oxalidaceae, o néctar

pode ser produzido pela base dos filetes ou por glândulas que se alternam com as pétalas.

Matthews & Endress (2002) consideraram que o mesofilo das sépalas das

Oxalidaceae, constituído por células especialmente grandes, representa uma autapomorfia

para Oxalidales. Em O. cytisoides, a estrutura das sépalas é essencialmente similar à das

espécies estudadas por Estelita-Teixeira (1984) e Matthews & Endress (2002).

No tubo da corola, destaca-se a ocorrência de estômatos elevados em relação às

demais células da face adaxial da epiderme. É provável que a umidade relativa no interior do

tubo seja muito elevada, tanto em função da retenção de água nas sépalas, que ajuda a manter

a turgescência floral, quanto pela secreção de néctar, que se acumula no interior do tubo,

favorecendo o estabelecimento de caracteres hidromórficos como este.

Avaliando-se a vascularização floral de O. cytisoides, nota-se que ocorre a

emissão dos traços estaminais antepétalos em nível inferior ao dos traços de estames

antessépalos. Durante muito tempo, esta foi considerada uma confirmação anatômica da

obdiplostemonia em Oxalidaceae (Al-Nowaihi & Khalifa 1971, Narayana 1966, Kumar 1976,

Estelita-Teixeira 1980). No entanto, Al-Nowaihi & Khalifa (1971) mencionaram que, em O.

cernua, o androceu obdiplostêmone somente é reconhecido do ponto de vista morfológico,

pois os traços estaminais separam-se do cilindro central no mesmo nível. Ronse Decraene &

Smets (1995) relataram que, em taxa obdiplostêmones, os traços de estames antepétalos

podem divergir em um nível inferior, equivalente ou superior àquele dos traços antessépalos;

não há, portanto, uma correlação entre vascularização e obdiplostemonia.

O androceu obdiplostêmone representa uma interrupção da seqüência usual de

alternância dos verticilos florais, devido à posição oposta às pétalas do verticilo externo de

estames. Eames (1977) agrupou em três teorias as diversas interpretações sobre a

obdiplostemonia, as quais explicam a sua origem pela adição de um novo verticilo de estames

114

(teoria da intercalação), pela perda de um verticilo externo de estames (teoria da redução) ou

pelo deslocamento ontogenético (teoria do deslocamento).

Recentemente, vários estudos sobre a ontogenia floral de taxa obdiplostêmones

revelaram que os estames surgem na seqüência centrípeta usual. Desta forma, a

obdiplostemonia foi interpretada como um fenômeno secundário causado pelo crescimento

diferencial e deslocamento dos primórdios de estames. Esses resultados corroboram a teoria

do deslocamento, proposta originalmente por Čelakovský no século XIX e referida por

Weberling (1992) e por Ronse Decraene & Smets (1995).

A partir da observação de casos de obdiplostemonia que não se ajustam às

premissas do deslocamento, Ronse Decraene & Smets (1995) propuseram a distinção entre

três vias de desenvolvimento da obdiplostemonia: “obdiplostemonia primária” (os estames

antepétalos surgem antes dos estames antessépalos e não há deslocamento secundário),

“obdiplostemonia secundária” (as partes florais iniciam-se na seqüência acrópeta normal, mas

os primórdios de estames antepétalos são deslocados para uma posição externa àquela dos

estames antessépalos durante a ontogenia) e “obdiplostemonia centrífuga” (os primórdios de

estames antepétalos surgem após os primórdios antessépalos e constituem o verticilo externo).

Em O. cytisoides, provavelmente, a obdiplostemonia é primária, visto que existe correlação

entre a mesma e o retarde no desenvolvimento de pétalas, conforme assinalou Ronse

Decraene & Smets (1995), inclusive para Oxalidaceae. O retarde no desenvolvimento de

pétalas também foi relacionado pelo autor à ocorrência de complexos de vasculares dos quais

divergem os traços de estames antepétalos e de pétalas, como observado neste estudo e em

Averrhoa carambola (Al-Nowaihi & Khalifa 1971).

Matthews & Endress (2002) consideraram a ocorrência de tricomas glandulares

em órgãos florais de Oxalidaceae e Connaraceae como um dos caracteres estruturais que

aproximam filogeneticamente estas famílias. No presente estudo, constatou-se que tais

tricomas são responsáveis pela emissão de compostos voláteis, os quais, possivelmente,

atraem polinizadores (Young et al.1984, Werker 2000, Effmert et al. 2005).

Sauer (1933) destacou que a anatomia do carpelo em Oxalidaceae é similar àquela

das sépalas. De fato, a espécie estudada mostra esta situação, pouco comum em outras

famílias. Em ambas as peças florais de O. cytisoides, o mesofilo exibe poucas camadas de

células pequenas adjacentes à face adaxial da epiderme e células amplas e muito vacuoladas

voltadas para a face abaxial, ocupando a maior proporção do órgão; entre as duas faixas,

inserem-se os feixes vasculares. Dentre os quatro verticilos florais, cálice e gineceu

normalmente apresentam estruturas mais diferenciadas, inclusive recebendo vascularização

115

mais expressiva que corola e androceu, os quais, como visto na espécie em estudo,

usualmente recebem um traço único por peça. O investimento nos carpelos é facilmente

compreendido, tendo em foco a formação do pericarpo e a proteção das sementes. Também as

sépalas desempenham importante papel de proteção, tanto no botão jovem, antes do

alongamento das pétalas e diferenciação dos verticilos férteis, quanto durante parte do

desenvolvimento do fruto, já que o cálice é persistente nesta espécie.

Quanto aos óvulos, encontrou-se a condição característica de Oxalidaceae, já que

se observou que eles são anátropos, bitegumentados e tenuinucelados (Corner 1976).

A análise da morfologia e anatomia floral de O. cytisoides evidenciou aspectos

interessantes da espécie, muitos deles típicos das Oxalidaceae, os quais são importantes para

se entenderem relações filogenéticas entre a família e as demais Oxalidales. Aspectos mais

peculiares da espécie podem ser úteis para se reconhecer relações intrafamiliares, desde que

um maior número de espécies venha a ser detalhadamente estudado.

Agradecimentos – Ao M.Sc. Pedro Fiaschi, pela identificação da espécie, e à FAPESP

(Programa BIOTA, proc. n

00/12469-3), pelo apoio financeiro. À CAPES, pela concessão da

bolsa PICDT de João D. Denardi e ao CNPq, pela bolsa de produtividade em pesquisa de

D.M.T. Oliveira.

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118

Ilustrações

119

Figuras 1-6. Morfologia floral de Oxalis cytisoides Zucc. 1. Aspecto geral de flor longistila. 2.

Flor longistila em corte longitudinal mediano. 3-5. Androceu e gineceu das formas longistila,

medistila e brevistila respectivamente. 6. Detalhe do androceu, mostrando a presença de

tricomas glandulares e apêndice estaminal (seta) nos estames mais longos. (ec = estame curto;

el = estame longo; es = estilete; pe = pétala; se = sépala).

120

Figuras 7-18. Diagramas mostrando a vascularização floral de Oxalis cytisoides Zucc.,

analisada em botão em pré-antese. Secções transversais. 7-9. Receptáculo. 7. Início da

emissão dos traços medianos de sépala. 8. Traços de sépala emitidos, ainda próximos ao

estelo. 9. Início de separação das sépalas, cujos traços encontram-se mais periféricos;

simultaneamente, emissão dos cinco complexos pétala-estame antepétalo. 10. Sépalas quase

totalmente isoladas, na altura em que se observa a separação do traço de pétala e estame

antepétalo. 11. Bases livres das pétalas, separadas do androginóforo; neste, observam-se os

nectários e traços dos dez estames; cinco pequenos traços dorsais encontram-se bem emitidos

e inicia-se a emissão dos traços laterais de carpelos. 12. Traços laterais de carpelos mais

isolados e início da formação dos cinco lóculos; observar, também, traços ventrais unitários

ou subdivididos em dois por carpelo. 13. Pétalas parcialmente justapostas ao tubo estaminal,

mostrando os limbos concrescidos; ovário distinto, destacando os feixes ventrais concrescidos

entre carpelos e alinhados radialmente aos feixes laterais; notar a presença dos óvulos. 14.

Ápice do ovário, mostrando o cômpito unindo os carpelos; notar os feixes laterais

subdivididos entre carpelos adjacentes; os filetes encontram-se individualizados, sendo mais

calibrosos nos estames antessépalos. 15-18. Seqüência mostrando a fusão dos feixes laterais e

dorsal de cada carpelo; enquanto os estames maiores ainda exibem os filetes, os menores

exibem as anteras, que não estaão mais visíveis na última figura. (an = antera; co = complexo

pétala-estame antepétalo; es = estilete; fc = filete de estame curto; fe = feixe lateral; fl = filete

de estame longo; fv = feixe ventral; ne = nectário; pe = pétala; se = sépala; tc = traço vascular

de estame curto; td = traço dorsal; tl = traço vascular de estame longo; tp = traço de pétala; tr

= traço lateral; ts = traço de sépala; tu = tubo estaminal; tv = traço ventral). Barra = 80 µm (7-

18).

121

Figuras 19-23. Vascularização floral de Oxalis cytisoides Zucc. Secções transversais. 19.

Detalhe da figura 11, mostrando o androginóforo, em que se reconhecem cinco nectários e

dez traços de estames, os mais calibrosos curtos e antepétalos; notar, ainda, os pequenos

traços dorsais já bem emitidos. 20. Detalhe da figura 12, com os traços laterais emitidos e

ventrais parcialmente individualizados (dois por carpelo). 21. Detalhe do ovário, representado

na figura 13, com feixes ventrais fundidos dois a dois e alinhados radialmente com os laterais.

22. Detalhe da figura 14, mostrando o ápice do ovário com o cômpito (asterisco); notar a

divisão dos feixes laterais, irrigando as margens dos carpelos. 23. Detalhe de estiletes vistos

na figura 17, mostrando diferentes graus de fusão entre os feixes laterais e o dorsal dos

carpelos. (fd = feixe dorsal; fe = feixe lateral; fv = feixe ventral; ld = complexo feixe lateral-

dorsal; lo = lóculo; ne = nectário; ov = óvulo; pe = pétala; tc = traço vascular de estame curto;

td = traço dorsal; tl = traço vascular de estame longo; tr = traço lateral; tt = tecido de

transmissão; tv = traço ventral). Barras = 100 µm (19), 25 µm (20), 50 µm (21-23).

122

Figuras 24-30. Oxalis cytisoides Zucc. Secções transversais. 24. Aspecto geral de botão

jovem, mostrando as pétalas pouco desenvolvidas. 25-29. Flor em antese. 25. Aspecto geral

da sépala. 26. Detalhe de tricoma tector, observado em sépalas e estames. 27. Detalhe de

tricoma glandular, ocorrente em sépalas, pétalas, estames e estiletes. 28. Aspecto geral da

pétala. 29. Detalhe da pétala, destacando papilas, tricoma glandular e feixes vasculares. 30.

Detalhe da pétala de botão em pré-antese, com estômatos elevados (ponta de seta). (an =

antera; fl = filete de estame longo; pe = pétala; se = sépala). Barras = 100 µm (24), 25 µm (25,

29-30), 10 µm (26-27), 50 µm (28).

123

Figuras 31-40. Oxalis cytisoides Zucc. Secções transversais. 31. Detalhe do botão floral,

mostrando a diferença de calibre entre filetes de estames longos e curtos. 32. Detalhe do filete

com feixe vascular único. 33. Detalhe do nectário com estômato (ponta de seta); notar amplo

cordão procambial próximo ao nectário. 34. Aspecto geral da antera com microsporocitos

distintos. 35. Detalhe de microsporângio com microsporos jovens já individualizados. 36.

Aspecto geral de antera mais desenvolvida, ainda com endotécio pouco diferenciado e tapete

presente; notar cristais no endotécio (seta). 37. Detalhe de antera ainda com os quatro

microsporângios distintos, mostrando endotécio com espessamentos diferenciados e ausência

do tapete. 38. Detalhe da figura anterior, destacando microgametofitos e a presença de corpos

de Ubisch (seta). 39. Detalhe da antera próxima da deiscência, após fusão dos dois

microsporângios de cada teca; notar a presença de corpos de Ubisch (seta). 40. Detalhe de

grãos de pólen maduros; observar os espessamentos reticulados do endotécio e os corpos de

Ubisch (seta). (cg = célula generativa; cv = célula vegetativa; en = endotécio; et = estômio; fc

= filete de estame curto; fl = filete de estame longo; fo = floema; ta = tapete; xi = xilema).

Barras = 100 µm (31), 25 µm (32-34, 36-37, 39), 10 µm (35, 38, 40).

124

Figuras 41-49. Oxalis cytisoides Zucc. Secções transversais (41-46). Secções longitudinais

(47-49). 41. Aspecto geral de ovário muito jovem, com quatro estratos parietais e óvulos em

início de formação. 42. Aspecto geral do ovário diferenciado, ainda em botão floral, na altura

em que se inicia a separação de carpelos. 43. Detalhe de ovário e óvulo durante a antese

(ponta de seta = idioblasto fenólico). 44. Detalhe do ápice do ovário, onde os carpelos

encontram-se individualizados. 45. Detalhe do estilete com amplo tecido de transmissão;

notar a presença de tricoma. 46. Detalhe do eixo central do ovário, mostrando os feixes

ventrais e alguns laterais. 47. Detalhe do óvulo no início da ontogênese; notar o nucelo com

evidente megasporocito, bem como os primórdios dos tegumentos interno e externo. 48.

Detalhe dos tegumentos, destacando o apêndice calazal (asterisco). 49. Detalhe do óvulo

durante a antese; notar micrópila em ziguezague (seta = exóstoma; dupla ponta de seta =

endóstoma). (fe = feixe lateral; fo = floema; fr = feixe rafeal; fv = feixe ventral; me =

megasporocito; nu = nucelo; te = tegumento externo; ti = tegumento interno; tt = tecido de

transmissão; xi = xilema). Barras = 25 µm (41-42, 45-46, 48), 50 µm (43-44, 49), 10 µm (47).

CAPÍTULO V

Trabalho elaborado segundo as normas da Revista Brasileira de Botânica.

126

Morfoanatomia e Ontogênese do Pericarpo e Semente de Oxalis cytisoides Zucc.

(Oxalidaceae), com ênfase no peculiar mecanismo de deiscência

JOÃO DONIZETE DENARDI

e DENISE MARIA TROMBERT OLIVEIRA

4,5

Título resumido: Fruto e semente de Oxalis cytisoides

. Parte da tese de doutorado do primeiro autor, Programa de Pós-graduação em Ciências

Biológicas (Botânica), Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências, Câmpus de

Botucatu.

. Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul, Unidade Universitária de Coxim, Rua

Pereira Gomes, 355, Vila Santa Maria, 79.400-000, Coxim, MS, Brasil.

. Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de

Botânica, Avenida Antonio Carlos, 6627, Pampulha, Caixa Postal 486, 31.270-901, Belo

Horizonte, MG, Brasil.

. Autor para correspondência: dmtol[email protected]fmg.br

127

RESUMO - (Morfoanatomia e ontogênese do fruto e semente de Oxalis cytisoides Zucc.

(Oxalidaceae), com ênfase no peculiar mecanismo de deiscência). Oxalis cytisoides pertence

ao subgênero Thamnoxys, cujas espécies evoluíram principalmente nos campos e cerrados

brasileiros; ocorre em campos e locais úmidos até 950 m de altitude, do Ceará até o Rio

Grande do Sul e Argentina. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de descrever

a morfoanatomia e desenvolvimento do fruto e semente de O. cytisoides, relacionando a

estrutura observada ao seu processo de dispersão. O material foi processado e incluído em

metacrilato, produzindo-se lâminas permanentes; testes histoquímicos usuais foram

realizados. O pericarpo de O. cytisoides passa por pequenas alterações durante o

desenvolvimento, mantendo estrutura geral similar à parede ovariana, com exocarpo e

endocarpo unisseriados e mesocarpo com dois estratos, o externo composto por parênquima

aqüífero, que mantém a turgescência do fruto até próximo da deiscência, e o interno, que é

clorofiliano. As sementes desenvolvem ambos os tegumentos, com espessa cutícula na

exotesta, mesotesta multiplicativa que acumula amido até próximo da maturidade, endotesta

cristalífera e exotégmen unisseriado, composto por células paliçádicas espessadas e

impregnadas por compostos fenólicos. São sementes albuminosas, com amplo endosperma

formado de modo núcleo-celular. Ocorre deiscência loculicida no fruto, a partir da

desidratação do mesocarpo externo, que contrai o pericarpo; tricomas endocárpicos

lignificados alavancam as sementes, lançando-as balisticamente; como a testa se rompe na

camada cristalífera, as sementes são dispersadas revestidas pelo exotégmen e resíduos da

endotesta. Os eventos observados no tegumento foram previamente descritos para outras

Oxalidaceae, mas a função do pericarpo, especialmente do endocarpo, na dispersão é relatada

pela primeira vez neste trabalho.

Palavras chave – anatomia, dispersão, morfologia, pericarpo, tegumento

Introdução

No sistema APG II (APG 2003), Oxalidaceae pertence a Oxalidales, ordem do

subclado de eurosídeas I, cujas relações permanecem não resolvidas. Stevens (2007)

reconheceu como sinapomorfias para o subclado a ocorrência de exotégmen fibroso e

endosperma escasso, fato que destaca a relevância da compreensão da estrutura seminal para

o grupo. Diretamente para Oxalidales, o autor mencionou os seguintes caracteres

reprodutivos: ocorrência de células de mucilagem, micrópila formada por ambos os

128

tegumentos, tegumento do óvulo multiplicativo, endotesta cristalífera e paliçádica, e

exotégmen fibroso ou traqueoidal.

Das cerca de 800 espécies que compõem as Oxalidaceae, aproximadamente 700

são de Oxalis (Stevens 2007), único gênero da família que ocorre naturalmente no estado de

São Paulo (Fiaschi & Conceição 2005). Em Oxalidaceae, as flores são bissexuadas e,

usualmente, heterostilas; é comum a ocorrência de cinco carpelos conatos, com ovário súpero,

mais ou menos lobado e placentação axial, em geral com vários óvulos por lóculo; geralmente

há cinco estiletes distintos e os estigmas são, freqüentemente, capitados ou puntiformes (Judd

et al. 1999).

Oxalis cytisoides Zucc. inclui-se no subgênero Thamnoxys, cujas espécies

evoluíram principalmente nos campos e cerrados do Brasil (Lourteig 1994) e para as quais

não foram encontradas análises anatômicas de órgãos reprodutivos. A espécie ocorre em

campos e locais úmidos até 950 m de altitude, desde o Ceará até o Rio Grande do Sul e na

Argentina, e consiste de subarbustos eretos, com até 1 m, com folhas trifolioladas e pinadas

(Fiaschi & Conceição 2005). Segundo os autores, os frutos são cápsulas elipsóides a globosas

e glabras, com cavidades trisseminadas. Lourteig (1994), porém, mencionou a ocorrência de

pilosidade em ambas as superfícies da cápsula e duas a três sementes por lóculo.

A estrutura do pericarpo de várias espécies de Oxalis foi descrita por Sauer (1933)

e Estelita-Teixeira (1980). O fruto de Oxalis é uma cápsula rimosa, a qual se caracteriza,

segundo Barroso et al. (1999), pela deiscência loculicida, sem a formação de valvas. Sua

superfície pode ser glabra ou pilosa, e várias espécies desenvolvem tricomas endocárpicos

(Lourteig 1975, 1994, 2002, Fiaschi & Conceição 2005).

De acordo com Corner (1976), as sementes das Oxalidaceae desenvolvem-se de

óvulos anátropos, bitegumentados e tenuinucelados. A testa mucilaginosa é freqüentemente

confundida com um arilo (Stevens 2007). Em vários gêneros, podem ocorrer ruminações nos

tegumentos, as quais podem atingir o endosperma (Corner 1976, Boesewinkel 1985). Em

Oxalis, as ruminações da semente são produzidas pela atividade mitótica de grupos de células

da mesotesta; em Biophytum, são derivadas, exclusivamente, da expansão radial das células

desse tecido (Boesewinkel 1985, Werker 1997).

Com relação a O. cytisoides, não foram encontradas análises estruturais dos

órgãos reprodutivos, com exceção do trabalho de Denardi & Oliveira (Cap. IV, neste volume),

que descreveram a morfoanatomia floral, enfatizando sua vascularização. Sobre o gineceu, os

autores destacaram que é sincárpico, pentacarpelar e pentalocular, com carpelos conatos pelos

bordos ventrais, os quais são livres e uniloculares no ápice. Em cada carpelo, há dois ou três

129

óvulos anátropos, dispostos axialmente. Segundo os autores, na parede ovariana, a epiderme

externa e interna são unisseriadas e o mesofilo apresenta células volumosas e hialinas

externamente e células pequenas e poligonais na porção interna.

Diante da relevância das características seminais para o subclado, da necessidade

de dados que favoreçam o esclarecimento de relações filogenéticas entre as eurosídeas I e

levando em conta o relato de Corner (1976) e Werker (1997) de um peculiar mecanismo de

dispersão de sementes em certas Oxalidaceae, tornou-se oportuno o presente trabalho, que

tem por objetivos: descrever a morfologia, anatomia e o desenvolvimento do fruto e semente

de O. cytisoides, e relacionar a estrutura observada ao processo de dispersão da espécie.

Material e métodos

Sementes maduras de dez indivíduos de Oxalis cytisoides Zucc. (Oxalidaceae)

foram coletadas em um fragmento de mata seca à margem da rodovia municipal (Estrada do

Roberto) que liga a área urbana do Distrito de Vitoriana ao Rio Bonito Campo e Náutica,

Município de Botucatu, Estado de São Paulo, Brasil; foram colocadas para germinar em casa

de vegetação coberta por sombrite 50%, em sacos de plantio contendo substrato do local de

coleta. Após o florescimento, as plantas foram observadas diariamente, coletando-se frutos e

sementes nas diversas fases do desenvolvimento. Exsicatas de indivíduos férteis foram

inseridas no Herbário “Irina Delanova Gemtchujnicov” (BOTU), do Departamento de

Botânica, Instituto de Biociências da UNESP, Câmpus de Botucatu, registradas sob o número

24.172.

Inicialmente, foram realizadas observações morfológicas sob estereomicroscópio

Leica, utilizando-se amostras de cerca de 50 unidades, ilustrando-se o fruto e a semente na

maturidade. Apesar da espécie apresentar tristilia, Denardi & Oliveira (Cap. IV, neste

volume) relataram que não há diferenças morfológicas e anatômicas entre as três formas

florais, com exceção do comprimento do estilete. Deste modo, os frutos foram coletados

independentemente de sua origem em flores brevistilas, medistilas ou longistilas.

O estudo anatômico foi realizado a partir de lâminas permanentes, preparadas a

partir de amostras fixadas em FAA 50 (Johansen 1940) e preservadas em etanol 70% (Jensen

1962). As amostras passaram por desidratação em série etílica e inclusão em metacrilato

Leica, conforme o protocolo do fabricante, sendo obtidas séries transversais e longitudinais

com cerca de 8 µm de espessura em micrótomo rotativo. As lâminas foram coradas com azul

de toluidina 0,05%, pH 4,7 (O’Brien et al. 1964) e montadas com Entellan®.

130

Foram realizados os seguintes testes histoquímicos de cunho qualitativo,

utilizando-se secções de material fresco e incluído em metacrilato: vermelho de rutênio, para

a detecção de polissacarídeos ácidos; Sudan IV, para verificação de lipídios totais; lugol, para

localizar amido; e cloreto férrico, para verificar a presença de compostos fenólicos (Johansen,

1940); azul mercúrio de bromofenol para indicar a presença de proteínas (Mazia et al., 1953).

Em secções de material fresco, aplicou-se floroglucinol acrescido de ácido clorídrico, para

detecção de estruturas lignificadas (Sass 1951).

A descrição do desenvolvimento foi feita a partir da estrutura do ovário e óvulo

apresentada por Denardi & Oliveira (Cap. IV, neste volume). Este trabalho considera fruto

jovem desde a estrutura observada a partir da abscisão das primeiras peças florais até a fase

pré-deiscência, quando as características do fruto maduro podem ser vistas.

O laminário foi analisado e os resultados foram fotografados em microscópio de

luz Olympus BX41 com câmera digital Olympus C7070WZ acoplada.

Resultados

Fruto jovem – O primeiro estádio da ontogênese do pericarpo de O. cytisoides é caracterizado

pela atividade meristemática, que se inicia após a fecundação, acompanhada pela

diferenciação dos estratos celulares. Nesse período, as laterais provenientes de cada carpelo

expandem-se, formando flancos e estreitando as reentrâncias entre eles (figuras 1-2). A

porção dorso-apical do ovário desenvolve-se além da base dos estiletes e as dimensões do

fruto aumentam significativamente em relação ao ovário.

Um carpóforo é constituído pelo androginóforo, o qual se mantém inconspícuo. Observa-se

que o início do desenvolvimento do fruto coincide com a abscisão da corola e dos estames,

embora estames antessépalos persistam por algum tempo (figura 1). Os estiletes são

persistentes, assim como o cálice, que continua a se desenvolver (figura 1).

O exocarpo é unisseriado (figuras 2-5), constituindo-se de células papilosas

(figuras 3-5) com cloroplastos, nos quais é evidenciada a presença de amido (figura 3).

Ocorrem, também, estômatos e tricomas glandulares, unisseriados, formados por três a quatro

células, esparsamente distribuídos; a célula apical destes apêndices é mais alongada que as

demais, contém granulações citoplasmáticas finas e sua extremidade mostra-se levemente

dilatada (figura 5). Nas reentrâncias entre flancos adjacentes, o exocarpo não apresenta

superfície papilosa, estômatos ou tricomas, consistindo de células achatadas periclinalmente,

131

com acúmulo de substâncias fenólicas, exceto naquelas situadas próximo à superfície; as

dimensões celulares variam ao longo da área da reentrância, conforme se observa na figura 2.

No mesocarpo, as células hialinas e vacuoladas (figura 3) dividem-se

aleatoriamente, muitas vezes de forma assimétrica, ocasionando a expansão dos flancos que,

em secção transversal, assumem aspecto deltóide (figura 2). A espessura deste tecido pode

chegar a seis células, reduzindo-se o número de camadas e as dimensões celulares em direção

à região dorsal. Trata-se de um parênquima aqüífero, que consiste de células com formato e

volume variáveis, paredes levemente sinuosas e finas, conteúdo hialino (figuras 2-6),

alongadas longitudinalmente e dispostas em fileiras diagonais.

Subjacente ao parênquima aqüífero, o mesocarpo consiste de parênquima

clorofiliano com espaços intercelulares pequenos mas evidentes, sem ampliação do número de

camadas registrado para esta região na parede ovariana. Em direção ao septo, o mesocarpo é

formado por até três camadas de células parenquimáticas alongadas periclinalmente,

destituídas de cloroplastos, entre as quais raramente ocorrem espaços (figura 2).

Nos septos e na região axial (figura 7), o mesocarpo constitui-se de parênquima

colenquimatoso, cujas células apresentam paredes pécticas e tendem ao formato cilíndrico,

muitas delas acumulando compostos fenólicos e amido, as quais delimitam espaços

intercelulares pequenos e evidentes. O amido encontra-se depositado em todos os tecidos

pericárpicos, especialmente nos cloroplastos (figura 3), mas é pouco comum no parênquima

aqüífero e no endocarpo. Cristais de oxalato de cálcio ocorrem com maior freqüência em

células parenquimáticas dos septos e região axial do fruto, bem como próximos a elementos

traqueais, especialmente em feixes de maior calibre. O sistema vascular, embora bem

desenvolvido, ainda apresenta poucos elementos condutores diferenciados, tanto nos feixes

dorsais (figura 4), quanto nos laterais (figuras 3, 6-7) e ventrais (figura 7). Na região do feixe

dorsal, que é inconspícuo, o mesocarpo possui espessura de duas a três camadas de células

pequenas e arredondadas, constituindo a região de maior fragilidade do pericarpo (figura 4).

No endocarpo, que permanece unisseriado como a epiderme interna do ovário que

o originou, há formação de tricomas unicelulares com paredes espessadas (figura 8) e

lignificadas, de conteúdo fenólico, orientados em direção à base da cavidade seminal; nas

adjacências da região dorsal, desenvolvem-se numerosos estômatos (figura 4).

No decorrer desse período de desenvolvimento do pericarpo, as modificações

observadas na semente resultam da atividade meristemática e expansão celular, que

determinam aumento significativo de suas dimensões.

132

A semente desenvolve-se mantendo as características gerais do óvulo (figura 9),

sendo anátropa e bitegumentada, com a presença de um pequeno apêndice calazal.

Na exotesta, após divisões anticlinais, as células tornam-se mais vacuoladas e um

tanto mais altas que largas (comparar as figuras 9 e 11); exibem paredes pécticas, núcleo

proeminente e citoplasma granular, e são recobertas por cutícula muito espessa (figuras 10-

14). A mesotesta é multiplicativa, porém a atividade mitótica é irregular e produz ruminações

nos tegumentos, a intervalos mais ou menos regulares, resultando em ondulações observáveis

tanto externa quanto internamente (figuras 10-11), acentuadas durante o desenvolvimento

(figuras 12-13). A vascularização seminal restringe-se ao feixe rafeal (figuras 10, 12),

originado no cordão procambial presente na estrutura em pós-antese (figura 9). A endotesta,

inicialmente composta por células pouco mais densas que a mesotesta (figura 9), desenvolve-

se como uma camada cristalífera, cujas células apresentam formato cubóide a poligonal,

núcleo volumoso, conteúdo péctico e cristal prismático depositado próximo à parede

periclinal interna (figura 13).

Com relação ao tegumento interno, destaca-se, em relação à estrutura inicial vista

na figura 9, o alongamento anticlinal das células do exotégmen e a ampliação do número de

camadas do mesotégmen (figuras 13-14); o endotégmen continua unisseriado, com células

proporcionalmente menores que no início do desenvolvimento (comparar as figuras 9 com as

13-14). No entanto, logo após a expansão celular, meso- e endotégmen começam a se

desintegrar.

Como estas sementes são provenientes de óvulos tenuinucelados, desde a fase

inicial não se observam nem resíduos do nucelo. O endosperma apresenta núcleos livres

(figuras 11-14) e o embrião alcança o estádio globular, mostrando pequeno suspensor (figura

15).

Fruto pré-maturação – Neste estádio, o pericarpo atinge as dimensões finais mediante o

aumento de volume celular, que ocorre principalmente no parênquima aqüífero (figuras 16-

17), e o estiramento dos demais tecidos (figura 18), à exceção da região axial, que não exibe

alterações estruturais visíveis (figura 16). No mesocarpo, completa-se o desenvolvimento dos

feixes vasculares. A expansão do pericarpo permite a acomodação da semente em

desenvolvimento, que também alcança o tamanho característico, ao término dos eventos de

diferenciação. A semente diferenciada apresenta sarcotesta translúcida e ruminações que se

estendem dos tegumentos à periferia do endosperma (figura 19).

133

Na exotesta, nota-se a cutícula muito espessa, porém as células acabam

comprimidas e, portanto, não podem ser facilmente identificadas (figuras 20-21). A mesotesta

é parenquimática, constituída por células volumosas, com paredes pécticas delgadas (figura

20) e reservas de amido (figura 21); as camadas externas mostram-se mais comprimidas

(figuras 20-21). O feixe rafeal encontra-se diferenciado, com pequeno calibre e pouco

evidente. Nas células da endotesta, ocorre espessamento da parede periclinal interna, que

apresenta impregnação fenólica (figura 21); em seguida, observa-se a formação de depósitos

pécticos no protoplasto (figura 23), possivelmente por meio de coalescência de pequenos

vacúolos contendo substâncias dessa natureza, que delimitam, com a parede periclinal interna,

uma câmara onde se aloja o cristal prismático (figura 24). No restante da célula, novos

acréscimos pécticos preenchem a maior parte do lúmen, restringindo o protoplasto a pequenos

tabiques no interior deste tampão péctico (figuras 20, 24).

O exotégmen diferencia-se como camada de células alongadas longitudinalmente,

dispostas em paliçada, que apresentam lúmen estreito delimitado por paredes espessadas

(figuras 20-24) não lignificadas, mas impregnadas por compostos fenólicos e outras

substâncias cuja natureza não pôde ser determinada nos testes realizados. O mesotégmen é

completamente absorvido, enquanto o endotégmen desenvolve-se como uma camada de

células achatadas periclinalmente, com paredes finas (figuras 25-26) e conteúdo fenólico;

posteriormente, ele é reabsorvido e reduzido a um estrato fenólico amorfo que se interpõe

entre o exotégmen e o endosperma.

Depois que o embrião atingiu o estádio globular, inicia-se centripetamente a

citocinese do endosperma. Entretanto, na região central, este tecido continua a se desenvolver

mediante a atividade meristemática que se instala nas últimas camadas formadas (figura 25);

algumas vezes, observam-se mitoses em células localizadas mais perifericamente (figura 26).

Freqüentemente, as células do endosperma exibem núcleos volumosos, com dois a três

nucléolos (figura 27).

Na semente já desenvolvida, o endosperma é abundante (figura 28) e acumula

lipídios e proteínas. Estas reservas também ocorrem no embrião, que tem formato espatulado

(figura 29) e coloração esbranquiçada. Este consiste de dois cotilédones achatados, maiores

que o eixo hipocótilo-radícula embora tão longos quanto, cada um recebendo um traço

vascular, que se ramifica constituindo cordões procambiais de calibres variados (figura 30). O

eixo embrionário apresenta plúmula rudimentar (figura 31) e ápice radicular revestido por

primórdio de coifa (figura 32). Desta forma, a distribuição dos tecidos meristemáticos

primários é típica.

134

Fruto maduro – Na fase pré-deiscência, o fruto maduro é uma cápsula túrgida, ovada a

globosa, com estiletes persistentes (figura 33), que ocupam posição subterminal em virtude do

desenvolvimento da região dorso-apical do pericarpo (figuras 33-34). Os estames antessépalos

e cálice (figuras 33, 35) também subsistem. O carpóforo não mostra sinais de alongamento

desde o início do desenvolvimento, de modo que só pode ser observado sob

estereomicroscópio e após a remoção do cálice.

O fruto, pêndulo durante o desenvolvimento, assume posição ereta durante a

maturação. O pericarpo torna-se membranáceo, em função da desidratação do parênquima

aqüífero (comparar as figuras 34 e 36), após o quê se dá a ruptura dorsal (figuras 35-36),

caracterizando a deiscência loculicida, que expõe de duas a três sementes por cavidade. A

pilosidade relatada em estádios anteriores mantém-se no pericarpo maduro; entretanto, os

tricomas endocárpicos apresentam-se voltados para o ápice do pericarpo, após a deiscência.

Na fase pré-deiscência (figura 37), a semente exibe a porção externa túrgida, pela

presença integral da testa. Simultaneamente à desidratação e deiscência do pericarpo, ocorre

degradação das reservas de amido no parênquima mesotestal, seguida da ruptura da testa, ao

longo da anti-rafe até o apêndice calazal, e liberação balística da porção interna da semente.

Após a dispersão (figura 38), o envoltório seminal consiste apenas do tégmen e da parede

periclinal interna fenólica da endotesta (figura 39), que se rompe na porção cristalífera,

provocando o desprendimento da porção carnosa da testa. O tegumento remanescente confere

coloração castanho-clara à semente.

Discussão

O pericarpo de O. cytisoides passa por pequenas alterações durante o seu

desenvolvimento, mantendo a estrutura geral similar à observada na parede ovariana durante a

antese (Denardi & Oliveira, Cap. IV, neste volume). A região mais ampla e evidente do

pericarpo é o mesocarpo externo, composto por parênquima aqüífero, que mantém a

turgescência do fruto até próximo da deiscência. Roth (1977) descreveu dois mecanismos de

deiscência, o higroscópico e o de turgor. Segundo a autora, o mecanismo higroscópico é o de

maior importância para a deiscência de frutos, sendo fundamentado na capacidade de

distensão e retração de paredes celulares, a qual é dependente da estrutura micelar,

usualmente de células mortas na maturidade; já o mecanismo de turgor depende de um tecido

de expansão, composto por células túrgidas, que exercem considerável pressão de turgor

sobre tecidos vizinhos.

135

Na maturidade do fruto de O. cytisoides, o parênquima aqüífero mesocárpico

passa por intensa desidratação, de modo que a deiscência é resultante da contração das demais

camadas celulares observadas nos flancos do fruto. A deiscência não é relacionada à

contração de paredes de células mortas, como é comum em frutos com mecanismo

higroscópico, mas apenas de células vivas, tanto parenquimáticas quanto epidérmicas. Trata-

se, portanto, de um mecanismo higroscópico peculiar, que não produz deiscência muito ativa

ou explosiva, já que estas são dependentes de estratos esclerenquimáticos diferenciados, como

os relatados por Fahn & Zohary (1955) para pericarpos de leguminosas. Os autores

destacaram que a tendência derivada é a redução do estrato esclerenquimático até o extremo

da completa ausência deste.

Além de tecidos relacionados à produção da força que leva à deiscência,

pericarpos deiscentes apresentam regiões de fragilidade, usualmente compostas por células de

paredes delgadas (Roth 1977), nas quais se dá a ruptura pericárpica. Oxalis cytisoides forma

cápsulas rimosas e, portanto, abre-se dorsalmente; como esta é a região mais delgada do

pericarpo da espécie, abrangendo somente de quatro a cinco camadas celulares, e o próprio

feixe dorsal tem tamanho reduzido, a fragilidade estrutural é responsável pelo local de

abertura do fruto, não se reconhecendo camadas especiais de separação.

Analisando a constituição do pericarpo e considerando que a deiscência em O.

cytisoides é passiva, sem estrato esclerenquimático nem tecido de separação distintos, pode

causar estranheza o relato de liberação balística das sementes. De acordo com Corner (1976) e

Werker (1997), algumas Oxalidaceae dos gêneros Oxalis e Biophytum apresentam um

mecanismo incomum de dispersão das sementes, que envolve a ruptura brusca da testa e a

ejeção da parte interna. A separação do tegumento externo é atribuída pelos autores a duas

características da testa: ao estiramento da cutícula, durante o desenvolvimento da semente, e à

elevada turgescência do parênquima mesotestal, resultante da degradação enzimática de

amido pouco antes da maturação da semente. Para os autores, a tensão gerada por esses

processos causa o rompimento das paredes das células cristalíferas da endotesta, provocando a

liberação balística da semente, revestida pelo tégmen e, parcialmente, pela endotesta.

A estrutura seminal de O. cytisoides corrobora os relatos de Corner (1976) e

Werker (1997). Contudo, ambos os trabalhos detiveram-se apenas à semente, não analisando

em conjunto o pericarpo; deste modo, explicaram detalhadamente como a porção carnosa da

testa é separada do restante da semente, mas não esclareceram os motivos de sua liberação

balística do fruto. Neste trabalho, analisando-se em conjunto a estrutura pericárpica e seminal,

pode-se reconhecer importante participação do endocarpo no processo de dispersão seminal.

136

Quando o pericarpo desidrata e se contrai, gera a força que produz as aberturas dorsais do

fruto; quando esta contração atinge o endocarpo, os tricomas longos e lignificados,

diferenciados com as extremidades voltadas para a base, são repuxados e estirados, sendo

observados voltados para o ápice após a dispersão. Como as sementes preenchem a cavidade

seminal, o movimento dos tricomas endocárpicos da base para o ápice alavanca as sementes

que, com a maior parte da testa desprendida do tégmen, são lançadas bruscamente. A

mudança de posição do fruto da espécie estudada, passando de pêndulo, durante todo o

desenvolvimento, a ereto, à época da deiscência, favorece a eficiência da liberação balística

das sementes.

Embora a correlação entre tricomas endocárpicos e a dispersão seja apresentada

pela primeira vez neste trabalho, encontra-se o registro de que várias espécies de Oxalis

desenvolvem esses tricomas (Lourteig 1975, 1994, 2002, Estelita-Teixeira 1980, Fiaschi &

Conceição 2005). Estelita-Teixeira (1980), considerou que a disposição dos tricomas no

interior da cavidade seminal sugere a sua participação no mecanismo de deiscência; no

entanto, não apresentou detalhes sobre esse processo. Sauer (1933), por sua vez, ressaltou que

a dispersão das sementes é efetuada exclusivamente pela camada externa do envoltório

seminal.

A estrutura do pericarpo de diversas espécies de Oxalis, descrita por Sauer (1933)

e Estelita-Teixeira (1980), apresenta características similares às aqui registradas.

Certamente, a espécie mais mencionada de Oxalidaceae é Averrhoa carambola,

espécie muito apreciada em função dos frutos comestíveis. O fruto de Averrhoa pode ser

classificado como campomanesoídeo (Barroso et al. 1999) e sua anatomia foi analisada por

Dave et al. (1975), Kumar (1975) e Rao & Kothagoda (1984). Por ser um fruto carnoso e

indeiscente, apenas aspectos estruturais gerais são comuns às espécies de Oxalis.

Dentre as sinapomorfias apontadas por Stevens (2007) para as eurosídeas I, a

ocorrência de exotégmen fibroso é considerada constante em Oxalidaceae, exceto em

Biophytum. Mesmo muito antes das análises moleculares atuais, Corner (1976) sugeriu que

Oxalidaceae relaciona-se filogeneticamente a outras famílias portadoras deste caráter, entre as

quais Connaraceae, hoje reconhecida como também pertencente a Oxalidales (APG 2003,

Stevens 2007).

Ainda com relação ao exotégmen, a denominação de “fibroso” não se aplica

perfeitamente a O. cytisoides, visto que a expressão induz à interpretação da presença de

camada lignificada, como são as fibras. Na espécie estudada, o exotégmen é formado por

células paliçádicas espessadas, impregnadas por compostos fenólicos, mas sem lignina

137

detectável pelos testes histoquímicos realizados. Funcionalmente, não há nenhuma

divergência, visto que a camada é resistente e protetora da semente, como são as camadas

lignificadas em tegumentos seminais.

A ontogênese tegumentar de Oxalis revela muitos aspectos peculiares que

merecem ser destacados. A semente desenvolve-se bitegumentada até a maturidade, mas,

observando-se apenas o diásporo, somente o tégmen é persistente. Também chama a atenção a

diferenciação da endotesta como camada cristalífera, típica de Geraniaceae e Oxalidaceae

(Werker 1997), à qual se associam conspícuos tampões pécticos. Análises ultra-estruturais

futuras são relevantes para se entender a formação destes tampões e favorecer a interpretação

de seu significado no processo de ruptura da testa.

Em O. cytisoides, a presença de ruminações é evidente, verificando-se que

abrangem ambos os tegumentos e a metade externa do endosperma. Werker (1997) destacou

que as ruminações podem atingir ou não o endosperma, sendo causadas por divisões

localizadas, como o verificado na mesotesta da espécie em estudo, ou pelo alongamento

desigual de uma única camada de células. Segundo a autora, ambos os padrões foram

relatados para Oxalidaceae, o primeiro para espécies de Oxalis e o segundo para Biophytum.

O endosperma, presente nas sementes maduras de O. cytisoides, difere do

esperado para as eurosídeas I que, segundo Stevens (2007), possuem endosperma escasso. A

semente estudada possui embrião axial e espatulado (Martin 1946, Barroso et al. 1999),

ocupando aproximadamente um quarto da semente, considerando-se a classificação de Martin

(1946). O endosperma é, portanto, a porção mais volumosa desta semente na maturidade,

sendo rico em lipídios e proteínas. Corner (1976) e Boesewinkel (1985) relataram que as

reservas da semente de Oxalidaceae consistem apenas de óleos. Contudo, Jones & Earle

(1966) quantificaram as reservas seminais de O. europaea, encontrando 47,6% de óleos,

21,9% de proteínas e ausência de amido, corroborando os resultados dos testes histoquímicos

aqui apresentados. Corner (1976) mencionou que a presença de endosperma é variável na

família e Salter (1952) registrou que várias espécies de Oxalis da África do Sul não

apresentam endosperma na maturidade.

A característica mais marcante do endosperma de O. cytisoides, contudo, é seu

modo de formação. Inicialmente, o endosperma é nuclear, coincidindo com a generalização de

Corner (1976) para as Oxalidaceae. Após a fase inicial, entretanto, mitoses completas,

incluindo a cariocinese e a citocinese, ocorrem nas camadas endospérmicas recém

celularizadas, sendo responsáveis pela intensa proliferação deste tecido. A literatura

reconhece apenas três padrões de formação de endosperma, nuclear, celular ou helobial

138

(Werker 1997), padrões que não permitem enquadrar O. cytisoides. O desenvolvimento

analisado nesta espécie é um tipo misto, núcleo-celular, que foi anteriormente relatado apenas

para espécies de Manihot (Euphorbiaceae) por Oliveira (2007).

Agradecimentos – Ao M.Sc. Pedro Fiaschi, pela identificação da espécie, e à FAPESP

(Programa BIOTA, proc. n

00/12469-3), pelo apoio financeiro. À CAPES, pela concessão da

bolsa PICDT de João D. Denardi e ao CNPq, pela bolsa de produtividade em pesquisa de

D.M.T. Oliveira.

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140

Ilustrações

141

Figuras 1-8. Pericarpo jovem de Oxalis cytisoides Zucc. Secções transversais (1-7). Secção

longitudinal (8). 1. Aspecto geral do fruto jovem, mostrando cinco filetes e cálice persistentes;

notar os flancos expandidos, estreitando o espaço entre as laterais provenientes de carpelos

contíguos (seta). 2. Detalhe da figura 1, mostrando o pericarpo com flancos. 3. Detalhe do

pericarpo reagido com lugol (ponta de seta = cloroplasto com amido). 4. Detalhe da região

dorsal; observar o feixe dorsal diminuto e a presença de estômato endocárpico (seta). 5.

Detalhe do pericarpo, mostrando tricoma exocárpico. 6. Detalhe do mesocarpo e endocarpo,

destacando um feixe lateral. 7. Aspecto dos septos, unidos à região axial do fruto; notar feixes

laterais e ventrais alinhados radialmente. 8. Detalhe do endocarpo com tricoma. (en =

endocarpo; ex = exocarpo; fd = feixe dorsal; fi = filete; fs = feixe lateral secundário; fv =

feixe ventral; me = mesocarpo; pa = parênquima aqüífero; pc = parênquima clorofiliano; pe =

pericarpo; se = semente; sp = sépala). Barras = 200 µm (1), 25 µm (2, 5-6, 8), 100 µm (3, 4),

50 µm (7).

142

Figuras 9-15. Semente jovem de Oxalis cytisoides Zucc. Secções transversais (9-13). Secção

longitudinal (14-15). 9. Início do desenvolvimento da semente, observado na fase

imediatamente pós-antese. 10. Aspecto geral da semente preenchendo a cavidade seminal do

fruto jovem, mostrando o contorno ondulado; notar o endosperma nuclear. 11. Detalhe da

figura anterior. 12. Vista geral semente, com ruminações mais pronunciadas. 13-14. Detalhes

da semente, na fase evidenciada na figura 12. 15. Detalhe da semente com embrião globular.

(cp = cordão procambial; eg = exotégmen; em = embrião; et = exotesta; fr = feixe rafeal; mg

= mesotégmen; mt = mesotesta; ng = endotégmen; nt = endotesta; pe = pericarpo; su =

suspensor; te = testa; tg = tégmen; asterisco = cutícula espessa; ponta de seta = núcleo livre;

dupla ponta de seta = cristal na endotesta). Barras = 25 µm (9, 11-15), 50 µm (10).

143

Figuras 16-28. Pericarpo e semente de Oxalis cytisoides Zucc., próximos à maturidade.

Secções transversais (16-18, 20-24). Secções longitudinais (19, 25-28). 16. Fruto expandido,

mostrando ampla cavidade seminal (a semente foi excluída). 17. Detalhe da figura anterior,

mostrando o flanco. 18. Detalhe do pericarpo, próximo ao curto septo (entre setas). 19.

Semente pré-dispersão, em secção transmediana. 20. Detalhe do tegumento reagido com

vermelho de rutênio, destacando os tampões pécticos na endotesta; notar a espessura da

cutícula (asterisco). 21. Detalhe do tegumento reagido com lugol; notar numerosos grãos de

amido na mesotesta. 22. Detalhe do tegumento em maturação; notar a endotesta cristalífera

com células densas, o exotégmen com paredes espessadas e o meso- e endotégmen ainda

presentes como resquícios (dupla ponta de seta). 23-24. Detalhes com a seqüência de

formação dos tampões pécticos na endotesta, indicados pela coloração mais densa nesta

camada. 25. Detalhe de semente, mostrando o endosperma em formação, já celularizado, onde

divisões celulares são freqüentes (ponta de seta). 26. Detalhe da figura anterior, em região

próxima à ruminação, destacando os resquícios do meso- e endotégmen (dupla ponta de seta)

e mitoses endospérmicas (ponta de seta). 27. Detalhe endosperma jovem com núcleos

volumosos com mais de um nucléolo (seta). 28. Detalhe endosperma, destacando as reservas.

(cr = cristal; cs = cavidade seminal; ed = endosperma; eg = exotégmen; em = embrião; mt =

mesotesta; nt = endotesta; tp = tampão péctico). Barras = 200 µm (16, 19), 100 µm (17-18),

25 µm (20-22, 26-28), 10 µm (23-24), 50 µm (25).

144

Figuras 29-32. Embrião de semente madura de Oxalis cytisoides Zucc. Secções longitudinais

(29, 31-32). Secção transversal (30). 29. Diagrama da secção transmediana do embrião. 30.

Detalhe dos cotilédones, justapostos ao endosperma. 31. Detalhe da plúmula. 32. Detalhe do

ápice da radícula (asterisco = primórdio de coifa). (co = cotilédone; cp = cordão procambial;

ed = endosperma; pl = plúmula; pr = procâmbio). Barras = 100 µm (29), 25 µm (30-32).

145

Figuras 33-39. Fruto e semente maduros de Oxalis cytisoides Zucc. Aspecto externo (33, 35,

37-38). Secções transversais, nas posições indicadas, respectivamente, nas figuras anteriores

(34, 36, 39). 33-34. Fruto pré-deiscência; notar a ocorrência de estilete subterminal. 35-36.

Fruto em deiscência. 37. Semente pré-dispersão, com a testa presente. 38-39. Semente

dispersada, revestida pelo tégmen e resquício da endostesta, indicado na figura 39 (seta). (ac =

apêndice calazal; co = cotilédone; cs = cavidade seminal; ed = endosperma; eg = exotégmen;

es = estilete subterminal; ra = região axial). Barras = 3 mm (33, 35), 200 µm (34, 36), 1 mm

(37-38), 100 µm (39).

146

CONSIDERAÇÕES FINAIS

À análise estrutural apresentada neste trabalho, cabem as seguintes considerações:

 As espécies estudadas compartilham vários caracteres e tendências morfológicas, que

incluem:

 pétalas com epiderme estomatífera, caráter que nas demais Oxalidales foi observado

somente em Crinodendron (Elaeocarpaceae);

 ocorrência de tricomas glandulares em pétalas, filetes e estiletes, os quais emitem

compostos voláteis;

 restrição de áreas nectaríferas aos setores antepétalos do tubo estaminal;

 espessamento endotecial reticulado;

 endotélio, que persiste como um estrato fenólico amorfo (O. cytisoides) ou é

completamente absorvido durante o desenvolvimento seminal (C. suberosus);

 crescimento assimétrico dos frutos, ocasionado por atividade meristemática mais intensa

na face ventral (Connarus suberosus) ou dorso-apical (Oxalis cytisoides) do pericarpo;

 pericarpo com estômatos exo- e endocárpicos e tricomas internos;

 presença de estrutura carnosa no tegumento seminal, que consiste de arilo rafe-calazal em

C. suberosus e sarcotesta em O. cytisoides;

 endotesta cristalífera; tégmen multiplicativo, mas parcialmente absorvido durante o

desenvolvimento; exotégmen constituído por células com parede espessas, alongadas

longitudinalmente;

 endosperma endopoliplóide, com desenvolvimento núcleo-celular.

 A estrutura dos órgãos reprodutivos de O. cytisoides, espécie do subgênero Thamnoxys, é

muito similar àquela de espécies classificadas no subgênero Oxalis.

 Em Connaraceae, as descrições morfológicas apontam certa variabilidade da construção

pericárpica e seminal; desta forma, novos trabalhos de cunho estrutural podem auxiliar no

refinamento das análises infra- e interfamiliares e evidenciar as tendências evolutivas

relacionadas aos frutos e sementes de Connaraceae.

 Não há relatos prévios sobre a ocorrência de apomixia, de tricomas glandulares, que atuam

como corpos de alimentação, e de mecanismo de deiscência por meio de turgescência em

Connaraceae; desta forma, são pertinentes estudos adicionais voltados diretamente a

esclarecer esses aspectos.

147

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