( PDF ) 5-Trialometil-4,5-Diidro-1h-1-(carbonilpiridil)pirazóis: Síntese e atividade biológica frente ao Mycobacterium tuberculosis

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CIÊNCIAS NATURAIS E EXATAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM QUÍMICA

5-TRIALOMETIL-4,5-DIIDRO-1H-1-(CARBONILPIRIDIL)PIRAZÓIS:

SÍNTESE E ATIVIDADE BIOLÓGICA

FRENTE AO Mycobacterium tuberculosis

DISSERTAÇÃO DE MESTRADO

JUSSARA NAVARINI

Santa Maria-RS, Brasil

2008

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5-TRIALOMETIl-4,5-DIIDRO-1H-1-(CARBONILPIRIDIL)PIRAZÓIS:

SÍNTESE E ATIVIDADE BIOLÓGICA

FRENTE AO Mycobacterium tuberculosis

ELABORADA POR

JUSSARA NAVARINI

SANTA MARIA

2008

Dissertação apresentada como requisito parcial à

obtenção do Grau de Mestre em Química ao

Curso de Mestrado do Programa de Pós-

Graduação em Química da Universidade Federal

de Santa Maria - RS.

Orientador: Prof. Dr. Helio Gauze Bonacorso

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iii

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM QUÍMICA

A Comissão Examinadora, abaixo assinada, APROVA a Dissertação de Mestrado

5-TRIALOMETIl-4,5-DIIDRO-1H-1-(CARBONILPIRIDIL)PIRAZÓIS:

SÍNTESE E ATIVIDADE BIOLÓGICA

FRENTE AO Mycobacterium tuberculosis

ELABORADA POR:

JUSSARA NAVARINI

como requisito parcial para a obtenção do Grau de

MESTRE em QUÍMICA.

COMISSÃO EXAMINADORA:

____________________________________________

Prof. Dr. Helio Gauze Bonacorso – Orientador – UFSM

____________________________________________

Prof. Dr. Alex F. C. Flores-UFSM

____________________________________________

Prof. Dr. Sydney Hartz Alves-UFSM

Santa Maria-RS, agosto de 2008

Dedico esta dissertação à minha família, pelo

carinho, incentivo, apoio e amor dedicados

sempre.

A vocês, eternos amores da minha vida, meu

muito obrigado.

A minha mãe Giacomina Navarini (“in memorian”).

Ausente na matéria, mas presente no espírito.

Ao professor Dr. Helio Gauze

Bonacorso, os meus sinceros

agradecimentos pela dedicação,

incentivo, paciência e apoio durante

todo o trabalho desenvolvido,

através de sua competente

orienta

ão.

vii

Ao Fábio de Oliveira pelo carinho, apoio e paciência,

que tem dedicados.

Te adoro.

viii

AGRADECIMENTOS

Não importa a ordem da lembrança, o motivo, a relevância do auxílio prestado...

Todos foram importantes...

Aqueles que lembrei, deixo transcrito neste papel os meus sinceros agradecimentos....

Aqueles que por um lapso não fiz jus a esta seção, fica consignado em meu coração, o

sentimento de gratidão...

A Deus, por estar sempre guiando meus passos, iluminando meu caminho.

Aos colegas de laboratório, Cleber, Liliane, Guilherme, Gisele e Michelle Budke os meus

sinceros agradecimentos pelos ensinamentos, pela amizade, apoio e convivência durante

estes anos.

A Liliane e aos seus pais, pela atenção e carinho que sempre tem dedicado nas horas difíceis.

Ao Cleber, pelos conselhos, pela amizade, pelos ensinamentos profissionais e pelo

companheirismo.

Ao Guilherme, pela paciência e compreensão, por estar sempre pronto para ajudar.

A Fernanda, Laetícia, Juliana companheiras de apartamento, pela força e paciência.

A Fernanda pelo carinho e força que sempre tem dedicado desde a graduação, e por sempre

estar pronta a ajudar.

Ao Cláudio, pelo incentivo e por fazer acreditar na minha capacidade.

A pequena Luíza, pela alegria e brincadeiras durante suas vindas ao laboratório.

Aos alunos de iniciação científica, Ronan, Fábio, Michele, Marcelo, Rosália e Everton,

obrigado pela ajuda durante o trabalho desenvolvido.

Aos professores Alex Flores e Sydney H. Alves pela colaboração no processo de qualificação

e defesa.

Aos Professores Dr. Pedro da Silva e Daniela Ramos e a aluna Tatiane Coelho, do

Departamento de Microbiologia da FURG pela realização dos ensaios biológicos.

Aos funcionários do Departamento de Química, Valéria Velásquez e Ademir Sartori pela

eficiência, presteza, educação e amizade.

À Coordenação do curso de Pós-Graduação em Química e o órgão fomentador CAPES.

A todos, muito obrigada...

“De nada nos valerá o conhecimento de todas as ciências do mundo,

de tudo o que está fora de nós, se não conhecermos a nós mesmos.”

“Que a felicidade não dependa do tempo,

Nem da paisagem, nem da sorte,

Nem do dinheiro.

Que ela possa vir com toda a simplicidade,

De dentro para fora, de cada um para todos.

Que as pessoas saibam calar, falar,

E acima de tudo ouvir.

Que tenham amor, ou sintam a falta de não tê-lo.

Que tenham ideal e medo de perdê-lo.

Que amem o próximo e respeitem a sua dor,

Para que tenhamos a certeza

De que viver vale a pena!...

(autor desconhecido)

ÍNDICE

LISTA DE FIGURAS................................................................................................... xvi

LISTA DE TABELAS.................................................................................................. xx

RESUMO...................................................................................................................... Xxi

ABSTRACT.................................................................................................................. xxii

INTRODUÇÃO E OBJETIVOS........................................................... 1

REVISÃO DA LITERATURA............................................................. 6

2.1.

Síntese de 4-alquil[aril(heteroaril)]-4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-

onas..............................................................................................................

2.2.

Síntese de 4,5-diidro-1H-pirazóis a partir de 1,3-dieletrófilos trialometil-

substituídos e hidrazinas..............................................................................

2.3.

Tuberculose..................................................................................................

2.3.1.

Agente etiológico.........................................................................................

2.3.2.

Agentes antimicobacterianos.....................................................................

2.3.2.1. Isoniazida (INH)........................................................................................... 20

2.3.2.2.

Rifampicina..................................................................................................

2.3.2.3.

Pirazinamida (PZA).....................................................................................

2.3.2.4.

Etambutol (EMB).......................................................................................

xii

2.4. Compostos Derivados da Isoniazida............................................................ 24

APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS.................... 27

3.1. Numeração e Nomenclatura dos Compostos............................................... 28

3.2. Síntese de Acetais........................................................................................ 38

3.3.

Síntese de 1,1,1-trialo-4-alquil[aril(heroaril)]-4-alcoxi-3-alquen-2-onas

substituídas (1a-i) e (2g-i)...........................................................................

3.4.

Síntese de 5-hidroxi-3-alquil[aril(heteroaril)]-5-trifluor(cloro)metil-4,5-

diidro-1H-1-(isonicotinoil)pirazóis (3a-i) e (4g-i).......................................

3.5.

Síntese de 5-hidroxi-3-alquil(aril)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-

cloroisonicotinoil)pirazóis (7a, 7d-g)..................................................... ...

3.5.1.

Síntese de 2-cloro isonicotinoilhidrazina (6)...............................................

3.5.2.

Identificação Espectroscópica dos Compostos (7d-g)...............................

3.5.2.1. RMN

H e

C {H}....................................................................................... 44

3.5.2.2. Espectrometria de Massas............................................................................ 47

3.6.

Síntese de 5-hidroxi-3-alquil(aril)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazóis (8a, 8c-g).....................................................................

3.6.1. Identificação Espectroscópica dos Compostos (8a, 8c-g)............................ 50

3.6.1.1. RMN

H e

C {H}....................................................................................... 51

3.6.2. Espectrometria de Massas............................................................................ 55

3.7.

Mecanismo Proposto para a obtenção de 3-aquil[(aril/heteroaril)]-5-

trifluor(cloro)metil-4,5-diidro-1H-1(carbonilpiridil)pirazóis(3, 4, 7 e 8)....

xiii

3.8.

Avaliação Biológica dos Compostos...........................................................

3.8.2.

Triagem dos compostos frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)..

3.8.3.

Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos compostos frente ao M.

tuberculosis ATCC 27294(H37Rv).............................................................

MATERIAL E MÉTODOS...................................................................... 64

4.1. Reagentes e Solventes Utilizados................................................................ 64

4.1.1. Reagentes..................................................................................................... 64

4.1.2. Solventes..................................................................................................... 64

4.2. Aparelhos Utilizados................................................................................... 65

4.2.1. Espectroscopia de RMN.............................................................................. 65

4.2.2. Ponto de Fusão............................................................................................ 65

4.2.3. Cromatrografia Gasosa-HP-CG/MS............................................................ 66

4.2.4. Análise Elementar........................................................................................ 66

4.3. Procedimentos Experimentais Sintéticos..................................................... 66

4.3.1. Síntese de Acetais. ...................................................................................... 66

4.3.2.

Síntese de 1,1,1-trialo-4-alquil[aril(heroaril)]-4-alcoxi-3-alquen-2-onas

substituídas (1a-i) e (2g-i)...........................................................................

4.3.3. Síntese de metil 2-cloro isonicotinoato (5)..................................................

xiv

4.3.4.

Síntese de 2-cloro isonicotinoil hidrazina (6)..............................................

4.3.5.

Síntese de 5-hidróxi-5-trialo-3-alquil[aril(heteroaril)]-4,5-diidro-1H-

pirazóis substituídos (3, 4, 7 e 8)................................................................

4.4.

Procedimentos Experimentais para a avaliação da atividade biológica.......

4.4.1. Microorganismos.......................................................................................... 68

4.4.2. Manutenção dos microrganismos................................................................ 68

4.4.3. Preparo das soluções.................................................................................... 68

4.4.3.1. Compostos sintéticos.................................................................................... 68

4.4.4.

Teste de suscetibilidade do M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv) aos

compostos pirazolínicos trialometilados......................................................

4.4.4.1. Suspensão bacteriana................................................................................... 68

4.4.4.2.

Preparação da placa para a triagem da atividade antimicobacteriana pelo

método REMA frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)...............

4.4.4.3.

Preparação das placas de CIM com o M. tuberculosis ATCC

27294(H37Rv). .................................................................................

4.4.5. Leitura dos ensaios de triagem e determinação das CIMs. ......................... 70

CONCLUSÃO............................................................................................ 71

BIBLIOGRAFIA........................................................................................ 72

ANEXO I.................................................................................................... 79

ANEXO II.................................................................................................. 92

ANEXO III.................................................................................................. 99

xvi

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 –

Estrutura molecular da Isoniazida (INH)................................................

Figura 2 –

Estrutura molecular de 1-isonicotinoil-2-nonanoil hidrazina..................

Figura 3 – Estrutura dos precursores 1,3-dieletrófilos trialometil substituídos........

Figura 4 –

Exemplos de compostos derivados da piridina......................................

Figura 5 –

Estrutura de 4,5-diidro-1H-pirazol (2-ou Δ

-pirazolina) e 1H-

pirazol.....................................................................................................

Figura 6 –

Mycobacterium tuberculosis...................................................................

Figura 7 –

Estrutura molecular da Rifampicina.......................................................

Figura 8 –

Estrutura molecular da Pirazinamida (PZA)..........................................

Figura 9 – Estrutura molecular do etambutol (EMB).............................................. 23

Figura 10–

Estrutura de 5-aril-1-isonicotinoil-3-(piridin-2-il)-4,5-diidro-1H-

pirazol......................................................................................................

Figura 11–

Estrutura de N

-nicotinoil-3-(4’-hidroxi-3’-metilfenil)-5-[(aril)-fenil]-

2-pirazolinas............................................................................................

Figura12– Estrutura de derivados do isonicotinoil hidrazida................................... 26

Figura 13–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-

trifluormetil-4,5-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d), em DMSO-

.............................................................................................................

Figura 14–

Espectro de RMN

C {H} a 100,61 MHz 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-

5-trifluormetil-4,5-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d), em

DMSO-d

.................................................................................................

xvii

Figura 15–

Espectro de massas de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-

1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d)..................................................

Figura 16–

Epectro de RMN

H a 200,13 MHz de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-

trifluormetil-4,5-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d), em DMSO-d

...............

Figura 17–

Espectro de RMN

C {H} a 100,61 MHz 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-

5-trifluormetil-4,5-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d), em DMSO-d

............

Figura 18–

Espectro de massas de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-

1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d)..................................................................

Figura 19–

Concentração Inibitória Mínima dos compostos trifluormetilados e

triclorometilados......................................................................................

Figura 20–

Variações das CIMs frente ao M.tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)

em função dos substituintes na posição 3 do anel pirazolínico...............

Figura 21–

Variações das CIMs frente ao M.tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)

em função da varição da posição do nitrogênio e presença de

substituinte no anel da piridina...............................................................

Figura22–

Distribuição dos compostos na microplaca para a triagem da atividade

antimicobacteriana..................................................................................

Figura 23–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz de metil 2-cloro isonicotinoato

(5), em clorofórmio-d

............................................................................

Figura 24–

Espectro de RMN

C {

H} a 100,61 MHz de metil 2-cloro

isonicotinoato (5), em DMSO-d

............................................................

Figura 25–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 2-cloro isonicotinoilhidrazida (6), em DMSO-d

...............................

Figura 26–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloro

isonicotinoil)pirazol (7d), em DMSO-d

................................................

xviii

Figura 27–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloro

isonicotinoil)pirazol (7e), em DMSO-d

.................................................

Figura 28–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-flúorfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-

cloroisonicotinoil)pirazol (7f), em DMSO-d

........................................

Figura 29–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloro

isonicotinoil)pirazol (7g), em DMSO-d

.................................................

Figura 30–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8a),

em clorofórmio- d

..................................................................................

Figura 31–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(fenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8c), em DMSO-d

6...........................................................................

Figura 32–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8d), em DMSO-d

6. ........................................................................

Figura 33–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8e), em DMSO-d

6............................................................................

Figura 34–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-flúorfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8f), em DMSO-d

6.............................................................................

Figura 35–

Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz

de 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8g), em DMSO-d

....................................................

Figura 36– Espectro de Massas de metil 2-cloro isonicotinoato (5)......................... 93

Figura 37– Espectro de Massas de 2-cloroisonicotinoilhidrazida (6) ..................... 93

Figura 38–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d)............

xix

Figura 39–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7e) ...........

Figura 40–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-flúorfenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7f).............

Figura 41–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7g) ...........

Figura 42–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-

1H-1-(nicotinoil)pirazol (8a) ..................................................................

Figura 43–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(fenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8c) .............................................

Figura 44–

Espectro de massas de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil-5-trifluormetil-4,5-

1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d) .................................................................

Figura 45–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8e) ...........................

Figura 46–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8f).............................

Figura 47–

Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8g)............................

LISTA DE TABELAS

Tabela 1– Numeração e Nomenclatura dos Compostos 1- 8................................ 28

Tabela 2– Propriedades Físicas dos Compostos 5 e 6............................................ 41

Tabela 3–

Condições testadas para a obtenção do composto 7a..............................

Tabela 4–

Propriedades Físicas dos compostos 7d-g ..............................................

Tabela 5–

Dados de RMN de ¹H e ¹³C {¹H} dos compostos 7d-f...........................

Tabela 6–

Otimização da síntese de 5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol 8a..............................................................................

Tabela 7–

Propriedades Físicas dos compostos 8a, 8c-f.........................................

Tabela 8–

Dados de RMN de ¹H e ¹³C {¹H} dos compostos 8a, 8c-f.....................

Tabela 9–

Avaliação da atividade antimicrobiana de compostos pirazolínicos

(100 μg/ml) conforme a variação nos radicais X, R

, Z frente ao M.

tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)........................................................

Tabela 10–

Determinação da CIM dos compostos pirazolínicos conforme a

variação nos radicais X, R

, Z frente ao M.tuberculosis ATCC

27294(H37Rv).........................................................................................

xxi

RESUMO

5-TRIALOMETIL-4,5-DIIDRO-1H-1-(CARBONILPIRIDIL)PIRAZÓIS:

SÍNTESE E ATIVIDADE BIOLÓGICA

FRENTE AO Mycobacterium tuberculosis

Autor: Jussara Navarini

Orientador: Dr. Helio Gauze Bonacorso

O presente trabalho descreve a síntese de séries de 5-hidroxi-3-alquil(aril/heteroaril)-

5-trifluor[cloro]metil-4,5-diidro-1H-1-(carbonilpiridil)pirazóis, obtidas a partir de reações de

1,1,1-trialo-4-alquil(aril/heteroaril)-4-alcoxi-3-alquen-2-onas [CX

C(O)CH=CR

OR, onde R

= Me, Et; R

= H, Ph, 4-ClPh, 4-BrPh, 4-FPh, 4-MePh, 2-Furil e 2-tienil e X = F, Cl] com

hidrazinas (NH

NHC(O)Z, onde Z = 4-piridil, 2-cloro-4-piridil e 3-piridil), em bons

rendimentos ( 50-89%).

Os compostos sintetizados foram avaliados quanto à atividade biológica in vitro

frente ao de Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294(H37Rv), onde verificou-se que

compostos trifluormetilados são mais ativos que seus análogos triclorometilados. Além disso,

a posição do átomo de nitrogênio e o substituinte cloro no anel piridínico influenciaram na

atividade destes compostos. Os pirazóis sintetizados com substituintes R

= H e X=F (3a) e

= 4-MePh e X=F (3g) apresentaram melhor ativade contra as cepas testadas, mencionadas

acima.

Os compostos foram caracterizados a partir dos dados de RMN de

H, RMN de

{

H} e por Espectrometria de Massas, e sua pureza comprovada por Análise Elementar.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CURSO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM QUÍMICA

DISSERTAÇÃO DE MESTRADO EM QUÍMICA

SANTA MARIA, AGOSTO-2008

xxii

ABSTRACT

5-TRIHALOMETHYL-4,5-DIHYDRO-1H-1-(CARBONYLPYRIDYL) PYRAZOLES:

SYNTHESIS AND BIOLOGICAL ACTIVITY AGAINST

Mycobacterium tuberculosis

Author: Jussara Navarini

Advisor: Dr. Helio Gauze Bonacorso

This work describes the synthesis of series of 5-hydroxy-3-[alkyl(aryl/heteroaryl)]-5-

trifluoro[chloro]methyl-4,5-dihydro-1H-1(carbonylpyridyl)pyrazoles, obtained from the

reactions of 1,1,1-trihalo-4-[alkyl(aryl/heteroaryl)]-4-alkoxy-3-alken-2-ones

[CX

C(O)CH=CR

OR, where R = Me, Et; R

= H, Ph, 4-ClPh, 4-BrPh, 4-FPh, 4-MePh, 2-

Furyl, 2-Thienyl and X= F, Cl] with hidrazines (NH

NHC(O)Z), where Z = 4-pyridyl, 2-

chloro-4-pyridyl and 3-pyridyl, in good yields (50-89%).

The obtained compounds were evaluated for their in vitro biological activities against

Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294 (H37Rv) strains, where it was found that

trifluoromethylated compounds were more active than their trichloromethylated analogues.

Moreover, the position of the atom of nitrogen and the chloro substituent in the ring of

pyridine influences the activity of these compounds. The synthesised pyrazoles with

substituints R

= H and X=F (3a) and R

=4-MePh and X=F (3g) showed the best activity

against the tested strains above mentioned.

The compounds were characterized by analytical

H and

C NMR and of Mass

Spectrometry (GC-MS), and its purities they were determined by Elementary analysis

analysis.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

POST-GRADUATE COURSE IN CHEMISTRY

MASTER DISSERTATION IN CHEMISTRY

SANTA MARIA, AUGUST - 2008

1. INTRODUÇÃO

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

1. INTRODUÇÃO

A tuberculose (TB) é uma doença causada pela bactéria Mycobacterium tuberculosis,

e consiste em uma infecção crônica que tem afligido a humanidade durante muito tempo e

continua sendo um grande problema de saúde pública

. Segundo dados da Organização

Mundial da Saúde (OMS), estima-se uma incidência anual de 9 milhões de novos casos de TB

e que ocorram 2 milhões de óbitos na população mundial, em decorrência desta patologia

O surgimento de cepas de M. tuberculosis multirresistentes aos fármacos conhecidos

tem aumentado em diversos lugares do mundo, devido ao declínio de condições sócio

econômicas e a propagação do vírus HIV (Vírus da Imunodeficiência Humana). Estes fatores

dificultam o controle desta doença e a cada ano 424 mil pessoas desenvolvem um tipo de TB

multirresistente que não responde ao tratamento padrão

3, 4

Devido à falta de uma vacina eficaz contra TB, o tratamento constitu-se na principal

ferramenta de controle desta doença. Entretanto, algumas características dos bacilos da TB

devem ser consideradas, tais como: o crescimento lento, impermeabilidade do envelope

celular, habilidade para entrar em estágio de latência e localização intracelular, a qual dificulta

o tratamento. O tratamento padrão tem longo período, aproximadamente de 6 a 12 meses

Na busca por fármacos mais potentes, com poucos efeitos colaterais, baixa toxicidade e

aos quais a M. tuberculosis não apresente resistência, pesquisadores têm desenvolvido novas

rotas sintéticas baseadas em protótipos bioativos, destacando a Isoniazida (INH), sintetizada

em 1952 e usada desde então, apresentando excelente atividade tuberculostática (MIC = 0,02-

0,05 μg/mL)

6, 7

. Devido a sua importância farmacológica, a molécula de INH têm sido

incorporada a diversos núcleos como, por exemplo, pirazolinas

e hidrazonas

, apresentando

atividades satisfatórias frente ao M. tuberculosis sensíveis e resistentes a INH (Figura 1).

NHNH

Figura 1: Estrutura molecular da Isoniazida (INH)

1. INTRODUÇÃO

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Alguns derivados hidrofóbicos da INH, como o 1-isonicotinil-2-nonanoil hidrazina

(Figura 2) mostraram reforçada atividade antimicobacteriana contra M. tuberculosis H37Rv.

Desta forma, pode se dizer que grupos químicos ligados a INH ajudam na penetração da

mesma na célula bacteriana o que tornam cepas M. tuberculosis mais vulneráveis a esta

droga

10, 11

NHNHC(CH

)

Figura 2: Estrutura molecular de 1-isonicotinoil-2-nonanoil hidrazina

Compostos heterocíclicos são amplamente usados em muitos campos da química

moderna, pois apresentam uma grande variedade e complexidade estrutural. Sendo assim, uma

série ilimitada de novas estruturas, com larga faixa de propriedades físicas, químicas e

biológicas, com grande espectro de reatividade e estabilidade são desenvolvidas

. Entre os

heterociclos, aqueles que apresentam como substituintes grupos halogenados têm mostrado um

papel importante, tanto do ponto de vista sintético atuando como intermediários químicos ou

do ponto de vista biológico apresentando atividade farmacológica.

Pesquisadores do Núcleo de Química de Heterociclos (NUQUIMHE) da Universidade

Federal de Santa Maria (UFSM) têm possibilitado a introdução de átomos de flúor em

compostos heterocíclicos, através do emprego de precursores 1,3-dieletrófilos trifluormetil

substituídos originários de reação de haloacilação de enoléteres

13-16

ou acetais

17-22

com anidrido

trifluoracético (Figura 3).

C R

O OR

X = F, Cl

Figura 3: Estrutura do precursor 1,3-dieletrófilos trialometil substituídos

Dos inúmeros heterociclos conhecidos, podem-se destacar as piridinas e os pirazóis.

Embora a piridina não seja encontrada livremente na natureza, seus derivados são encontrados

1. INTRODUÇÃO

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

em abundância como produtos naturais (nicotinamida, vitamina B6 e a nicotina). Os derivados

da piridina possuem várias aplicações químicas, destacando-se principalmente os polímeros e

os corantes, e também são utilizados na área farmacêutica como analgésicos, anestésicos e

medicamentos psicofarmacológicos

(Figura 4).

NHO

Nicotinamida Nicotina Vitamina B

NHO

Nicotinamida Nicotina Vitamina B

Figura 4: Exemplos de compostos derivados da piridina

Os pirazóis apresentam uma posição de destaque na química dos compostos

heterocíclicos, devido a sua grande aplicabilidade. São compostos aromáticos de cinco

membros com dois átomos de nitrogênio nas posições 1 e 2 do anel contendo ligações

polarizadas em suas estrutura. Nesta classe de compostos, um dos principais representantes

são as 2-pirazolinas com ampla aplicação farmacológica como antitumorais, bactericidas,

antifúngicos, antivirais, antiparasiticos, antituberculares bem como agentes inseticidas

24-32

Entretanto, rotas sintéticas para obtenção de 1H-pirazóis parcialmente saturados (2-

pirazolinas ou 4,5-diidropirazóis) são pouco pesquisadas

33-34

. A metodologia convencional

para a obtenção de pirazóis consiste na reação direta de β-dicetonas e derivados com

hidrazinas. Por outro lado, em muitos casos 5-hidroxi-4,5-diidro-1H-pirazóis tem sido

isolados quando o anel pirazolínico é substituído com grupos fortemente retiradores de

elétrons, impedindo assim, a eliminação de água e subseqüente aromatização anelar

. Em

particular, o potencial sintético de vinil cetonas trialometiladas para obtenção de séries de

novos 4,5 diidro-1H-pirazóis trialometilados tem sido explorado e descrito pelo nosso

grupo.

Como substituinte de compostos heterocíclicos, o grupo trifluormetil tem levado a

uma mudança acentuada na reatividade do anel. A alta eletronegatividade do flúor, por

exemplo, capacita ao grupo trifluormetil diminuir a densidade de elétrons e a basicidade da

molécula, como também acentuar a eletrofilicidade dos grupos vizinhos. Em muitos

sistemas, a substituição do grupo metil por um grupo trifluormetil, resulta em um acréscimo

1. INTRODUÇÃO

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

de lipofilicidade (π

CF3

=1,07 versus π

CH3

= 0,5). Esta lipofilicidade proporciona uma maior

permeabilidade nas membranas celulares, o que pode levar uma maior e mais fácil absorção,

e transporte dessas moléculas dentro do sistema biológico e, portanto, melhorar as

propriedades farmacocinéticas das drogas. Estas propriedades têm feito com que compostos

organo-fluorados, sejam muito utilizados na Química Medicinal

35-37

A inclusão de um átomo de flúor em uma droga pode influenciar a sua conformação e

a sua interação com o alvo farmacológico. Por exemplo, o efeito da presença de átomos de

flúor nas forças intermoleculares e intramoleculares afetam interações com ligantes e assim

introduzem uma seletividade em subtipos de receptores colinérgicos e adrenérgicos e tem

sido atualmente melhor compreendido

38-40

. A presença de átomos de flúor pode apresentar

um efeito profundo na conformação de uma droga, em termos de distribuição e liberação nos

tecidos

. O estudo de mudanças como estas podem ser usadas construtivamente por

químicos sintéticos e medicinais para aperfeiçoar a segurança e a eficácia no uso de novas

drogas fluoradas.

Considerando que 2-pirazolinas são compostos que possuem ampla aplicação, a

presença de grupos trialometilados e que a INH apesar dos efeitos adversos e limitado

espectro tem reconhecida atividade contra o M. tuberculosis, compostos pirazolínicos

contendo estes substituintes tornam-se objetos de interesse para testes biológicos frente à ao

M. tuberculosis, uma vez que estes até então possuem atividades biológicas pouco

exploradas. Portanto, diante da necessidade de novos fármacos para o combate aos bacilos

responsáveis pela TB e da simplificação do tratamento que é longo e complexo, esse

trabalho tem por objetivo:

1. INTRODUÇÃO

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

OBJETIVO:

1. Sintetizar o sistema poliheterociclos trifluor(cloro)metilpirazol-1-il-piridil-cetona,

a partir de reação de ciclocondensação entre 4-alquil(aril/heteroaril)-1,1,1-

trifluor(cloro)-3-alquen-2-onas e piridilhidrazidas (Esquema 1 e 2 ).

Esquema 1

=H, alquil, aril, heteroaril

X= F,Cl

NHN

1, 2

3, 4

OMe(Et)

Z= 4-piridil

Z= 3-piridil

Esquema 2

O OH

O OMe

O NHNH

=H, aril

OMe(Et)

2. Avaliar a atividade biológica in vitro dos compostos sintetizados frente ao

Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294 (H37Rv).

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

Esta revisão da literatura tem por objetivo abordar as principais referências

relacionadas à pesquisa desenvolvida. Inicialmente será discutida, resumidamente, a síntese

de 4-alquil[aril(heteroaril)]-4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-onas a partir de acilação de

acetais e enoléteres. Posteriormente, serão enfocados os principais métodos para a síntese de

2-pirazolinas trialometiladas, além de uma breve revisão sobre a tuberculose. Também serão

discutidos alguns compostos que possuem em sua estrutura o grupo INH, relacionando-os à

atividade biológica contra TB.

2.1 Síntese de 4-alquil[aril(heteroaril)]-4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-onas

O potencial sintético de 4-alquil[aril(heteroaril)]-4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-onas

está relacionado à diferença de reatividade nos dois centros eletrofílicos destes compostos: o

carbono carbonílico e o carbono-β. Esta diferença de reatividade tem conduzido, muitas

vezes, a reações regiosseletivas ou regioespecíficas de ciclocondensação com diferentes

dinucleófilos.

C R

O OR

X = F, Cl

Desde a década de 70, pesquisas têm sido publicadas sobre a síntese de 4-alcóxi-1,1,1-

trialo-3-alquen-2-onas. A reação de enoléteres e acetais com agentes acilantes derivados de

ácidos haloacéticos foi inicialmente publicada por Effenberger et al.

14, 15

e a seguir por e Hojo

et al.

17,18

A partir da década de 80, o Núcleo de Química de Heterociclos (NUQUIMHE) da

Universidade Federal de Santa Maria e outros grupos internacionais têm aplicado de maneira

sistemática o método de acilação de enoléteres via acilantes halogenados. Reações de acilação

de enoléteres foram otimizadas para preparação de 4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-onas com

alto grau de pureza, em quantidades molares.

Assim, foram obtidas 4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-onas com altos rendimentos,

reagindo uma série de enoléteres com anidrido trifluoracético, cloreto de tricloroacetila ou

cloreto de dicloroacetila. As reações de enoléteres com o cloreto de tricloroacetila ou de

dicloroacetila, foram realizadas usando diclorometano como solvente; e nas reações de

enoléteres com anidrido trifluoracético foi usado éter etílico como solvente

13, 42

(Esquema 2).

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 2:

CHCl

CCl

R R

Et H H

Me H Me

Et Me H

-(CH

)

- H

-(CH

)

- H

-(CH

)

- Me

80-95%

O OR

i =R

COZ, piridina, 10-25ºC, 16h

A metodologia desenvolvida por Hojo et al.

17, 18

foi ampliada e sistematizada pelo

NUQUIMHE a partir da acilação direta de acetais derivados de acetofenonas

propiofenonas

p-substituídas

e alquilcetonas

20, 45

com excelentes rendimentos (Esquema 3 ).

Esquema 3:

OMe

MeO

OMe

45-90%

X Z

Cl Cl

F CF

i = CX

COZ, Piridina, CHCl

0-70° C, 5-24 h.

R R

Et H

Pr H

i-Pr H

i-Bu H

t-Bu H

-(CH

)

OMe H

Ph H, Me

4-MePh H, Me

4-MeOPh H, Me

4-FPh H, Me

4-ClPh H, Me

4-BrPh H, Me

4-NO

Ph H, Me

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Em 2002, foram realizadas acilações regioespecíficas de acetais derivados de

heteroaril cetonas (Esquema 4) para obtenção de 4-heteroaril-4-metoxi-1,1,1-trialo-3-buten-2-

onas, derivadas do tiofeno e furano

Esquema 4:

OMe

84-87%

80-85%

79-85%

W=O, S; X=F, Cl; Z= CF

COO, Cl

i: CX

COZ, C

N, CHC

, -10-30ºC, 12 h ii: H

1M, 50ºC, 5h

O OH

O OMe

Bonacorso et al.

em 2005, obtiveram o 1-metoxi-2-trifluoracetil-3,4-diidro-

naftaleno, através da acilação da α-tetralona, sem isolar o acetal, com rendimento de 75 %

(Esquema 5). Neste mesmo ano, mais dois trabalhos do grupo envolvendo acilação de novos

acetais foram publicados, um demonstra a acilação de uma série de cicloalcanonas (Esquema

6) e outro a acilação de 4-acetilbifenil e 1-acetilnaftaleno

(Esquema 7), com anidrido

trifluoracético

. Para uma revisão detalhada sobre metodologias de síntese e reatividade das

4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-onas consultar também os reviews publicados por Martins et

al.

49a

e por Balenkova et al.

49b

Esquema 5:

OMe O

i, ii

75%

i: (CH

CH, MeOH, Cat. TsOH, 60ºC, 24h

ii: (CF

CO)

O, Piridina, CHCl

, 0-50ºC, 48 h

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 6:

(n)

MeO OMe

(n)

OMe

70-82%

57-68%

i = (MeO)

CH, MeOH, Cat.TsOH, t.a., 24 h.

ii = (CF

CO)

O, Piridina, CHCl

0-45° C, 16 h.

22 2

2348

6-Me 4-Me 4-t-Bu

HHH

Esquema 7::

OMe

i, ii

i: (CH

CH, MeOH, Cat.TsOH, t. a., 24h

ii: (CF

CO)

O,Piridina, CHCl

, 0-45°C, 16h.

80-81%

Nos últimos anos, os pesquisadores do NUQUIMHE têm desenvolvido diversas rotas

sintéticas para a obtenção de heterociclos de cinco, seis e sete membros, contendo grupos

trialometila a partir de vinil cetonas trialometiladas

de forma regioespecifica

, como por

exemplo, isoxazóis

13, 20, 50-55

, pirazóis,

56-64

pirimidinas

65-68

pirimidinonas

, piridinas

70, 71

benzodiazepinos

72, 73

entre outros. Além disso, o NUQUIMHE em parceria com outros grupos

de pesquisa vem desenvolvendo estudos sobre atividade biológica para algumas classes de

compostos.

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

2.2 Síntese de 4,5-diidro-1H-pirazóis a partir de 1,3-dieletrófilos trialometil-substituídos

e hidrazinas

Os pirazóis são compostos heterocíclicos com anéis de cinco membros, que contêm

apenas átomos de nitrogênio e carbono em sua estrutura, e que denominam-se 4,5-diidro-

1H-pirazóis quando possuem uma ligação saturada entre os carbonos C4-C5 do anel. Estes

compostos também são conhecidos como 2-pirazolinas ou Δ

-pirazolinas (Figura 5).

2-pirazolina 1H-pirazol

Figura 5: Estrutura de 4,5-diidro-1H-pirazol (2-ou Δ

-pirazolina) e 1H-pirazol.

As rotas sintéticas de compostos heterocíclicos podem ser classificadas a partir das

características dos reagentes utilizados. A grande maioria dos compostos pirazolínicos têm

sido sintetizadas a partir de ciclocondensações de dois conjuntos de átomos, sendo um

dieletrófilo, geralmente 1 1,3-dieletrófilo e um outro 1,2-dinucleófilo.

A síntese de pirazóis a partir da condensação de 1,3-dicarbonílicos trifluormetil

substituídos com hidrazinas tem sido estudada por vários grupos de pesquisa

. Selivanov e

Ershov

foram os primeiros a caracterizar os intermediários 3,5-diidroxipirazolidinas e 5-

hidroxi-4,5-pirazóis usando experimentos de RMN. Elguero e Yranzo

74j

foram os primeiros a

isolar uma 3,5-diidroxipirazolidina a partir da 1,1,1,5,5,5-hexafluorpentan-2,4-diona e

hidrazina. Já em 2002, Singh, Elguero et al.

propuseram que o passo de desidratação do 5-

hidroxi-4,5-diidropirazol até o pirazol aromático envolve um intermediário catiônico do tipo

V (Esquema 8). Isso explica o fato de que quando R

é um grupo retirador de elétrons o passo

de desidratação é dificultado e algumas vezes não ocorre. O mecanismo descrito (Esquema 8)

tem sido proposto tendo em vista experimentos com RMN a baixas temperaturas e alguns

resultados qualitativos, geralmente ele é aceito para a síntese de pirazóis

Bonacorso et al.

, também comprovam que a presença de grupos retiradores de

elétrons na posição 1 do anel dificulta a desidratação de 2-pirazolinas aos pirazóis

correspondentes, devido ao efeito de grupos retiradores de elétrons que estabilizam o

intermediário formado, o qual possui uma carga parcial positiva.

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 8:

RNH-NH

III

Os resultados obtidos nas condensações de β-dicetonas perfluoralquil substituídas com

hidrazinas demonstram que essas reações são regiosseletivas, formando principalmente os

produtos com o grupo perfluoralquil na posição 5 do pirazol, conforme demonstrado por

Singh et al.

74a

(Esquema 9). Além disso, o substituinte perfluoralquil na posição 5 e um

substituinte retirador de elétrons na posição 1 são fatores que estabilizam os respectivos 5-

hidroxi-4,5-diidropirazóis (Esquema 8).

Entretanto, alguns autores, nos estudos sobre a regiosseletividade das condensações

entre β-dicetonas trifluormetil substituídas e hidrazinas monosubstituídas tem afirmado que é

difícil racionalizar a razão entre os isômeros 3-trifluormetil - ou 5-trifluormetil-substituídos

76,

. Analisando o esquema abaixo, observa-se que a regiosseletividade está relacionada ao

isolamento da pirazolina, pois sempre que a mesma é isolada o isômero 5-trialometil

substituído é obtido.

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 9:

OEt CF

NaOMe

50%

a,b: i

c-e: ii

f,g:iii

72-84%

a,b: iv

c-e: v

f: vi

g: vii

i: N

, EtOH; ii: N

, EtO

; iii: R

NHNH

, EtOH, 40ºC; iv: AcOH, EtOH, refluxo

v: H

conc, EtOH, refluxo; vi: HCl, EtOH, refluxo; vii: AC

O, AcOH, 50ºC

4-NO

Em 1993, Threadgil et al.

estudaram a reação do composto 1,3-bis-trifluormetil-1,3-

dicarbonílico com hidrazinas e isolaram os 5-hidroxi-3,5-trifluormetil 4,5-diidro-1H-pirazóis

com bons rendimentos (Esquema 10).

Esquema 10:

C CF

O O

77-96%

i: NH

NH-R, EtOH, refluxo, 5h.

R: COPh, Ph, 4-NO

Ph, 2,4-(NO

)

Em 1999, Bonacorso et al.

sintetizaram duas séries de de 3-alquil(aril)-5-hidroxi-4,5-

diidro-1H-pirazóis a partir da reação de 4-alcoxi-1,1,1-tricloro-3-alquen-2-onas com

cloridrato de semicarbazida e tiosemicarbazida, em metanol(3:1) (Esquema 11).

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 11:

64-89%

71-91%

i:NH

NHCONH

.HCl, MeOH/H

O, 20-85 ºC, 16-20 h

ii: NH

NHCSNH

, MeOH, 20-45 ºC, 24 h.

R: H, Me, Ph, 4-MePh, 4-BrPh, 4-NO

Ph,

: H, Me,

: Me, Et

Em 2000, Pashkevich et al.

também sintetizaram séries de 4,5-diidro-1H-

carboxamida(tiocarboxamida)pirazóis a partir da reação de compostos polifluoralquil-1,3-

dicarbonilicos com cloridrato de semicarbazida e tiosemicarbazida (Esquema 12).

Esquema 12:

Z: O, S

NHC(Z)NH

: Ph, Me, Et, t-Bu, 4-BrPh, CF

, C

, 2-tienil

: CF

, C

Em 2003, Bonacorso et al.

sintetizaram uma série de cloretos de 3-aril-5-

trifluormetil-5-hidróxi-4,5-diidro-1H-1-piconoilpirazóis em passo reacional único e com bons

rendimentos, a partir da reação entre 4-metóxi-1,1,1-triflúor-3-buten-2-onas e 2-

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

piridinocarboxiamida, utilizando uma solução de etanol e ácido clorídrico como solvente

(Esquema 13).

Esquema 13:

OMe O

HCl.

i: EtOH/HCl, 78 ºC, 2,5 h.

: Ph, 4-MePh, 4-FPh, 4-ClPh, 4-BrPh

82-89%

Em 2005, Bonacorso et al.

64b

propuseram a síntese de 1-(2-tenoil)-, 1-(2-furil)- e 1-(2-

isonicotinoil)-3-alquil(aril)-5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-pirazóis a partir da reação

de ciclocondensação de 4-alcoxi-1,1,1-trifluormetil-3-buten-2-onas com tenoilhidrazina,

furanoilhidrazina e isonicotinoilhidrazina, respectivamente. As três séries de compostos foram

obtidas utilizando uma relação molar de 1:1 entre hidrazinas e enonas, usando como solvente

metanol, levando a obtenção dos produtos de maneira regioespecífica, em passo reacional

único com rendimentos moderados a bons (Esquema 14).

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 14:

OMe O

i: NH

NHCOC

Z, MeOH, t.a., 48 h; ou 60-65 ºC

ii: NH

NHCOC

N, MeOH, t.a.; ou 60-65 ºC, 16h

: H, Me, Ph, 4-MePh, 4-MeOPh, 4-ClPh, 4-Br-Ph, 4-NO

: H, Me

53-91%

63-89%

Em 2006, Martins et al.

publicaram recentemente trabalho demonstrando a utilização

de energia proveniente da irradiação de microondas na síntese de uma série de 5-hidroxi-5-

triclorometil-4,5-diidro-1H-carboximetilpirazóis. A reação entre as 4-alcoxi-1,1,1-tricloro-3-

buten-2-onas e carboximetilhidrazina foi realizada em forno de microondas doméstico sem a

necessidade do uso de solvente. A mistura foi aquecida por 6 minutos fornecendo 4,5-diidro-

1H-1carboximetilpirazóis com bons rendimentos. O uso desta metodologia reduziu

drasticamente o tempo reacional, de 24h em refluxo de metanol no método tradicional, além

disso, aumentou os rendimentos em aproximadamente 10% (Esquema 15).

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 15:

OMeO

70-98%

i: NH

NHCO

Me, 45 W, 50-55ºC, 6 min

: H, Me. Et, Pr, i-Pr, i-Bu, t-Bu, 4-NO

, 4-NO

: H, Me

R: Me, Et

Em 2006, Bonacorso et al.

64b

sintetizaram uma série de 4-fenil-3-alquil(aril)-5-

hidroxi-4,5-diidro-1H-1-tosilpirazóis a partir da ciclocondensação das 4-alcoxi-1,1,1-trifluor-

3-buten-2-onas com p-tosilhidrazina, em tolueno como solvente. Os compostos sintetizados

tiveram suas atividades avaliadas in vitro contra fungos e bactérias, os quais evidenciaram alta

atividade frente a bactérias gram-positivas. O composto 3-(4-flúorfenil)-5-trifluormetil-5-

hidroxi-4,5-diidro-1H-tosilpirazol apresentou uma atividade promissora nos ensaios

realizados, por conferir alta sensibilidade das bactérias ao composto em estudo (Esquema 16).

Esquema 16:

NHNH

S OO

58-92%

i: tolueno, refluxo, 4h.

: H, Me, 4-MePh, 4-MeOPh, 4-BrPh, 4-ClPh, 4-FPh

: H, Ph;

R: Me, Et

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Em 2007, Martins et al.

sintetizaram 5-hidroxi-3-alquil/aril-5-trifluormetil-4,5-

diidro-1H-1-(2-hidroxibenzoil)pirazol, utilizando 4-alcoxi-4-alquil(aril)-1,1,1-triflúor-3-

buten-2-ona e salicil hidrazina. Os compostos obtidos apresentaram rendimentos bons a

ótimos (Esquema 17).

Esquema 17:

i: MeOH(EtOH), refluxo, 16h.

R: Me, Et; R

: H, Me, Ph, 4-MePh, 4-BrPh, 4-FPh

Em 2008, na dissertação de Porte

, foi sintetizada uma série de 4,5-diidro-1H-pirazóis

contendo uma função aldeído protegida sob a forma de acetal, a partir da 4,6,6-trimetoxi-

1,1,1-trifluorhex-3-en-2-ona com diferentes hidrazinas, em ótimos rendimentos (Esquema18).

Esquema 18:

i: NH

NHR, EtOH, 4-20 h, refluxo

R: 2-furanoil, C

COOMe, COMe, Nicotinoil

O OMe

OMe

90-97%

OMe

Também em 2008, na dissertação de Paim

, foi sintetizada uma série de novas 2-[3-

alquil(aril/heteroaroil)-5-hidroxi-5-trialometil-4,5-diidro-1H-pirazol-1-il]-5-[3-

alquil(aril/heteroaril)-5-hidroxi-5-trialometil-4,5-diidro-1H-pirazol-1-il-1-carbonil]piridinas,

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

obtidas a partir da reação de ciclocondensação de 1,1,1-trialo-4-[alquil(aril/heteroaril)]-4-

alcoxi-3-alquen-2-onas com hidazida 6-hidrazino nicotínica em bons rendimentos ( Esquema

19).

Esquema 19:

67-97%

i: EtOH, refluxo, 4h

R: H, Me, Ph, 4-OMePh, 4-NO

Ph, 4,4'-BiPh, naft-1-il, fur-2-il, tien-2-il

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

2.3 Tuberculose

2.3.1 Agente etiológico

Micobactérias são bacilos de forma alongada, aeróbicas, não esporuladas e imóveis,

com um revestimento céreo que lhes confere a propriedade de resistir à descoloração quando

tratadas com álcool-ácido resistente (BAAR). Evolutivamente, encontram-se entre as

bactérias e os fungos, por isso o nome dado à família a qual pertence, Mycobactereace. O

gênero de maior importância, Mycobacterium, engloba bacilos patogênicos de interesse

clinico, como M. tuberculosis, M. leprae e M. bovis, além do complexo M. avium-

intracellulare, patógenos oportunistas principalmente em pessoas imunodeprimidas como

indivíduos portadores do vírus HIV

O M. tuberculosis, principal agente causador da tuberculose, foi descoberto por Robert

Koch em 1882 (Figura 6). Em homenagem ao cientista alemão, o bacilo ficou conhecido

como bacilo de Koch

Figura 6: Mycobacterium tuberculosis

Duas espécies de bactérias causam tuberculose: o complexo M. tuberculosis e M.

bovis. O complexo M. tuberculosis é transmitido, principalmente, por perdigotos produzidos

durante a tosse, espirro ou fala do indivíduo infectado pelo bacilo. As pequenas gotículas

espalhadas são suficientes para alcançar os alvéolos pulmonares, onde o bacilo inicia sua

multiplicação no macrófago alveolar. Já o M. Bovis é transmitido através do leite de vacas

infectadas que, quando ingerido, produz primeiramente lesões intestinais e amigdalianas

85, 86

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

O complexo M. avium-intracellulare constitui-se de duas espécies de micobactérais

intimamente ligadas, com virulência muito baixa em hospedeiros normais, mas que causam

infecções disseminadas em pacientes com vírus HIV

. Podem também infectar pessoas com o

pulmão debilitado pelo tabagismo prolongado, por tuberculose pulmonar, bronquite, efisema

ou outras doenças. Contrariamente à tuberculose causada pelo M. tuberculosis, a infecção por

M. avium-intracellulare não é transmitida de uma pessoa para outra

2.3.2 Agentes Antimicobacterianos

Na década de 40 a quimioterapia da TB foi baseada em um número limitado de

antibióticos (estreptomicina) e drogas sintéticas (ácido p-amino benzóico). Após a descoberta

da estreptomicina, novos fármacos foram utilizados com sucesso, destacando-se a isoniazida

(INH) em 1952; a Rifampicina (RMP) em1956; Etambutol (EMB) sintetizado em 1960, e

empregado somente em 1968; e a Pirazinamida (PZA) sintetizada em 1936, e usada apenas

em 1970

Estes fármacos são chamados de primeira escolha, pois é a primeira opção no

tratamento podendo ser empregados com sucesso na grande maioria dos pacientes. Os

fármacos ditos como de segunda escolha são utilizados em casos de falência aos fármacos de

primeira escolha, tais como, cicloserina, canamicina, ácido p-aminosalicílico (PAS),

amicacina, etionamida, tiocetazona, clorofazimina e terizidona, além da potente classe de

fluorquinolonas

2.3.2.1 Isoniazida (INH)

A INH é o principal e mais potente antimicobacteriano no tratamento da tuberculose

(Figura 1). Este fármaco foi descoberto em 1952 por Fox e Gibas (1952), durante a síntese de

tiosemicarbazona, quando estes notaram que as reações eram afetadas por uma modificação

no percurso da síntese e se depararam com um intermediário isonicotinoilidrazínico. A partir

deste intermediário foram realizados ensaios, sendo que os resultados apresentados foram

superiores aos da estreptomicina, melhor antimicrobiano até então

A INH é ativada dentro da célula bacteriana pela enzima catalase-peroxidase (KatG).

Da reação da INH com a enzima resulta uma variedade de radicais orgânicos tóxicos que

atacam múltiplos alvos da célula bacteriana

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

A INH é uma pró-droga que possui atividade bactericida principalmente contra o

microorganismo em replicação, e parece ser apenas bacteriostática contra aqueles em fase de

latência

. Como o M. tuberculosis em presença de INH mostra diminuição de seus ácidos

graxos presentes na parede celular, pode-se deduzir que o mecanismo de ação da INH ocorre

através da inibição destes ácidos graxos que são componentes da parede celular.

A resistência a INH pode estar associada a mutações que afetam um ou mais genes,

como os que codificam a catalase-peroxidase(KatG)-enzima ativadora do fármaco, as enzimas

enoil-ACP-redutase (inhA) e β-cetoacil ACP sintase (KasA) envolvidas na biossíntese do

ácido micólico, e a alquil hidroperóxido redutase (ahpC) envolvida na resposta celular ao

estresse oxidativo

90, 91

A INH é absorvida rapidamente pela administração oral, que pode ser alterada pela

alimentação concomitante ou uso de antiácidos sendo, portanto, recomendada a administração

em jejum. O fármaco é amplamente distribuído pelos tecidos. O uso contínuo de INH mostra

alta hepatotoxicidade, sendo que, portadores de hepatopatias devem ser clinicamente

monitorados

2.3.2.2 Rifampicina

A Rifampicina é um antibiótico semi-sintético produzido pelo Streptomyces

meditarranei

. É um fármaco lipofílico altamente ativo que se difunde rapidamente através do

envelope hidrofóbico das micobactérias (Figura 7). Foi introduzida para uso na terapia contra

a tuberculose no início de 1970 e é, atualmente, um dos mais importantes componentes da

terapêutica, sendo capaz de diminuir o tempo de tratamento

O mecanismo de ação envolve a inibição da atividade da enzima RNA polimerase

DNA dependente (RPDD), uma metaloprotease, ligando-se a uma subunidade β da enzima,

tornando-se altamente ativo contra bacilos em divisão, tanto intra como extracelular. A

inibição da RPDD leva ao bloqueio da formação da cadeia do RNA

2. REVISÃO DA LITERATURA

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Figura 7: Estrutura molecular da Rifampicina

A administração de Rifampicina é via oral, sendo absorvida rapidamente pelo

intestino, deve ser administrada sem o uso concomitante de outros antimicrobianos e em

jejum, devido a interferência na atividade

2.3.2.3 Pirazinamida (PZA)

A atividade antituberculosa da PZA foi descoberta em 1970 e, atualmente, é a terceira

droga mais importante no combate à tuberculose

(Figura 8).

A PZA é bactericida para micobactérias latentes, reduz o tempo total de tratamento

destruindo os bacilos que permanecem em pH baixo e que, normalmente, não seriam afetados

por outras drogas antituberculosas

Figura 8: Estrutura molecular da Pirazinamida (PZA)

Possui atividade antimicobacteriana contra M. tuberculosis, mas desenvolve a

resistência rapidamente sendo recomendada, portanto, a terapia combinada, uma vez que esse

2. REVISÃO DA LITERATURA

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tipo de terapia reduz essa possibilidade. A atividade da PZA parece ser inativa em pH

neutro

É utilizada na primeira fase do tratamento quando a infecção encontra-se ainda como

granulomatosa, pelo fato deste fármaco atravessar facilmente a membrana do macrófago e

atuar muito bem em pH ácido. A importância da PZA reside, então, na sua capacidade de

destruir bacilos no interior dos macrófagos, complementando a ação da INH e da RIF

O mecanismo de ação deste fármaco é desconhecido. Uma hipótese proposta por

Cynamom et al. em 1992, é que a PZA pode ser parcialmente ou totalmente ativada como um

fármaco. A PZA é ativada apenas no pH ácido do ambiente intramacrofágico, mas não é

ativada simplesmente pelo pH. Este ambiente pode induzir componentes bacterianos que

ativam PZA, provavelmente uma amidase específica à pirazinamidase. Organismos

suscetíveis produzem pirazinamidase, que é responsável pela conversão a ácido pirazinóico.

Cepas resistentes não produzem esta amidase, devido a mutase no gene associado (pncA),

sugerindo que a forma ácida do fármaco é a forma ativa. A PZA seria um pró-fármaco do

ácido pirazinóico ativo contra M. tuberculosis

92a, b

2.3.2.4 Etambutol (EMB)

O EMB (Figura 9) é um composto sintético, que possui atividade bacteriostática.

Possui baixa solubilidade em água e é absorvido rapidamente após a administração oral

Apesar da modesta atividade antitubercular, o EMB é usado em combinação com

outros fármacos contra a TB devido ao seu sinergismo com estes e sua baixa toxicidade. É

amplamente utilizado no esquema primário de tratamento da tuberculose, pois atua

diretamente sobre a síntese de arabinose em M. tuberculosis e outras micobactérias. Seu

mecanismo de ação está relacionado à inibição da incorporação do ácido micólico, essencial

para a formação da parede celular da micobactéria

Figura 9: Estrutura molecular do etambutol (EMB)

2. REVISÃO DA LITERATURA

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2.4 Compostos Derivados da Isoniazida

A INH (Figura 1) apresenta uma estrutura bastante simples e interessante, na qual está

contido um anel de piridina e a função hidrazida que são essenciais para atividade contra M.

tuberculosis

. Devido a isso a sua importância farmacológica, muitos compostos foram

sintetizados tendo como um dos precursores a INH ou derivados da mesma.

Em 2001 Mamolo et al.

94a

descreveram a síntese e atividade antimicobacteriana de

uma série de 5-aril-1-isonicotinoil-3-(piridin-2-il)-4,5-diidro-1H-pirazol. Os compostos

sintetizados foram testados contra cepas de M. tuberculosis H37Rv e H4. Os resultados

demonstraram atividades antimicobacteriana in vitro e seus valores de CIM estão entre 8 e 16

μg/ml.

Neste estudo, os autores demonstraram que a atividade dos compostos depende da

liberação de INH no meio biológico. Esta liberação de INH é favorecida devido à presença do

substituinte 2-piridil na posição C-3 da pirazolina, quando comparada com compostos

descrito na literatura

94b

, nos quais estes apresentam como substituite orto hodróxi fenila nesta

posição. Estes autores atribuem que a falta de atividade destes compostos é devido à ligação

de hidrogênio que ocorre entre a hidroxila e o nitrogênio da posição C-2 da pirazolina que

impede a liberação da INH.

R: H, 2-Cl, 3-Cl, 4-Cl, 2-Br, 3-Br, 4-Br, 2-F, 3-F, 4-F, 2-CH

, 3-CH

, 4-CH

Figura 10: Estrutura de 5-aril-1-isonicotinoil-3-(piridin-2-il)-4,5-diidro-1H-pirazol

Já em 2006, Shaharyar et al.

sintetizaram uma série de N

-nicotinoil-3-(4’-hidroxi-3’-

metilfenil)-5-[(aril)-fenil]-2-pirazolinas pela reação entre chalconas e isonicotinoil hidrazina.

Estes compostos foram testados frente M. tuberculosis H37Rv e M. tuberculosis INH-

2. REVISÃO DA LITERATURA

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resistentes. Os valores de CIM variaram entre 0,26 a 16,13 μM para cepas M. tuberculosis

H37Rv e a 0,23 a 8,05μM para cepas INH-resistentes.

Entre os compostos testados, os autores descrevem que compostos que possuem grupo

fenila substituídos com átomos de halogênio e furil são ativos que a INH para cepas de M.

tuberculosis H37Rv. Já para cepas M. tuberculosis INH-resistentes, todos os compostos

demonstram melhores valores CIM quando comparadas a INH.

R: 4-MeOPh, 4-ClPh, Ph, 3,4-MeOPh, 2,3,4-MeOPh, Furil, 4-FPh, 2-ClPh, 2,6-ClPh, 3-NO

Figura 11: Estrutura de N

-nicotinoil-3-(4’-hidroxi-3’-metilfenil)-5-[(aril)-fenil]-2-

pirazolinas

Sinha et al.

em 2005 realizaram a síntese e atividade antimicobacteriana de uma série

de derivados da isonicotinoil hidrazina VII, as hidrazonas. A atividade foi testada frente a

cepas de M. tuberculosis.

Segundo os autores, observou-se que quando o anel fenila é substituído por cloro com

variação nas posições orto, para e meta, os compostos exibiram atividade semelhantes à INH.

Porém quando ocorre substituição do átomo de cloro pelos substituintes nitro e metoxila

ocorreu uma redução na atividade. Além disso, sugere-se que grupos volumosos ou

dissubstituição no anel da fenila não são favoráveis.

Alguns destes compostos foram submetidos à reação de redução, resultando em uma

nova série de compostos VIII que foram avaliadas as atividades antimicobacterianas. Estes

compostos demonstraram aumento na atividade. Isto ocorre devido ao grau de liberdade da

ligação dos substituintes fenila, permitindo melhor interação a um receptor levando a

atividade inibitória (Figura 12).

2. REVISÃO DA LITERATURA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

N Ph

Ar: 3-ClPh, 4-ClPh, 3-NO

Ph, 4-MeOPh, 2-ClPh, 2,3-Cl

Ph, 2-furil, 3-MeO-4-OHPh, 2-OH-MeOPh, 3-PhOPh

VII

VIII

Figura 12: Estrutura de derivados da isonicotinoil hidrazida

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Neste capítulo será apresentada a numeração e a nomenclatura dos compostos

sintetizados os quais foram submetidos a testes de atividade biológica contra o

M.tuberculosis.

A identificação dos compostos foi feita por Cromatografia Gasosa acoplada a

Espectroscopia de Massas (CG-MS) e Ressonância Magnética Nuclear (RMN)

C {H} e

suas purezas foram comprovadas por análise elementar.

Na primeira etapa, será descrita a síntese dos precursores 4-alcoxi-1,1,1-trialo-3-

alquen-2-onas 1a-i e 2g-i a partir da reação de acilação de enoléteres e acetais, conforme

metodologia desenvolvida por Hojo et al.

17, 18

e sistematizada por Martins et al.

Na sequência, serão discutidas as reações de 4-alcóxi-1,1,1-trialo-3-alquen-2-ona 1a-i

e 2g-i com isonicotinoil, 2-cloro isonicotinoil e nicotinoil hidrazinas.

Por fim, serão discutidos os testes destes compostos contra o M.tuberculosis, através

da realização de ensaios in vitro.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

3.1 Numeração e Nomenclatura dos compostos

A numeração dos compostos adotada neste trabalho e a nomenclatura segundo o

Chemical Abstract, estão representadas na Tabela 1.

Tabela 1 - Numeração dos compostos 1-8

Compostos Nomenclatura

O OEt

4-etoxi-1,1,1-trifluor-3-buten-2-ona

OMe

4-metoxi-1,1,1-trifluor-3-penten-2-ona

O OMe

4-fenil-4-metóxi-1,1,1-trifluor-3-buten-2ona

O OMe

4-(4-clorofenil)-4-metóxi-1,1,1-trifluor-3-buten-2-ona

O OMe

4-(4-bromofenil)-4-metóxi-1,1,1-trifluor-3-buten-2-ona

O OMe

4-(4-fluorfenil)-4-metóxi-1,1,1-trifluor-3-buten-2-ona

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

O OMe

4-(4-metilfenil)-4-metóxi-1,1,1-trifluor-3-buten-2-ona

O OMe

4-(2-furil)-4-metóxi-1,1,1-triflúor-3-buten-2-ona

O OMe

4-(2-tienil)-4-metóxi-1,1,1-triflúor-3-buten-2-ona

O OMe

4-(4-metilfenil)-4-metóxi-1,1,1-tricloro-3-buten-2-ona

O OMe

4-(2-furil)-4-metóxi-1,1,1-tricloro-3-buten-2-ona

O OMe

4-(2-tienil)-4-metóxi-1,1,1-tricloro-3-buten-2-ona

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro -1H-1-

(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-metil-5-trifluormetil-4,5-diidro -1H-1-

(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-fenil-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(isonicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro-1H-1-(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro 1H-1-(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-fluorfenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro 1H-1-(isonicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro- 1H-1-(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(2-furil)-5-trifluorometil-4,5- diidro-

1H-1-(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(2-tienil)-5-trifluormetil-4,5- diidro-

1H-1-(isonicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-triclorometil-4,5-

diidro-1H-1-(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(2-furil)-5-triclorometil-4,5- diidro-

1H-1-(isonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(2-tienil)-5-triclorometil-4,5- diidro-

1H-1-(isonicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

OMe

metil 2-cloroisonicotinoato

NHNH

2-cloro isonicotinoilhidrazina

5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-

4,5diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-3-(4-fluorfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-

1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-

1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol

5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-3-fenil-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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Tabela 1 - Numeração dos compostos 1- 8

Compostos Nomenclatura

5-hidroxi-3-(4-fluorfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-

1-(nicotinoil)pirazol

5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-

1-(nicotinoil)pirazol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

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3.2 Síntese de Acetais

A reação de obtenção dos acetais (Esquema 20) foi realizada de acordo com técnica

descrita por Martins et al.

, a partir de acetofenonas com ortoformiato de trimetila e

quantidades catalíticas de ácido p-tolueno sulfônico, em metanol anidro. O tempo reacional é

de 24 horas em repouso, à temperatura ambiente (25 ºC). Após neutralização com carbonato

de sódio anidro, filtrado e solvente removido por rota evaporação. Os acetais foram obtidos na

sua forma pura através de destilação a pressão reduzida. Os pontos de ebulição, bem como os

rendimentos estão de acordo com a literatura

17-19, 48

Esquema 20:

45-90%

= TsOH, HC(OMe)

, t.a., 24h

MeO OMe

c d e f g h i

R Ph 4-ClPh 4-BrPh 4-FPh 4-MePh 2-furil 2-tienil

3.3 Síntese de 1,1,1-Trialo-4-alquil[aril(heroaril)]-4-alcoxi-3-alquen-2-onas Substituídas

(1a-i) e (2g-i)

17-19,42,48

A síntese dos compostos 1a-i e 2g-i foi baseada na metodologia desenvolvida pelos

pesquisadores do NUQUIMHE.

A reação de acilação foi realizada adicionando-se anidrido trifluoracético ou cloreto de

tricloroacetila a mistura de acetal ou enoléter, piridina e clorofórmio anidro em banho de gelo

e sob agitação magnética. A mistura foi deixada durante 16 horas, a 45 ºC para os acetais

derivados das acetofenonas e 16 horas a temperatura ambiente para os enoléteres adquiridos

comercialmente. Os produtos foram purificados por meio de destilação à pressão reduzida. A

literatura cita rendimentos, na faixa de 80-90%, nossos trabalhos levaram a rendimentos

similares aos descritos (70-90%) (Esquema 21).

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Para que ocorra acilação de acetais são necessários dois equivalentes do acilante e da

piridina. Isto porque o mecanismo da reação envolve primeiro a utilização de uma molécula

do acilante na formação do enóleter, in situ, com conseqüente saída do trifluoracetato de

metila. A seguir, uma segunda molécula do acilante reage com o enoléter para formar a vinil

cetona desejada. A piridina no meio reacional funciona como base para a neutralização do

ácido trifluoracético resultante das duas etapas reacionais.

Esquema 21:

OMeMeO

C R

1a-i

2f-h

70-90%

80-95%

i= CX

COZ, piridina, CHCl

, 0-25ºC, 24h

ii= CX

COZ, piridina, CHCl

, 25-70ºC, 5-16h

COO

a b c d e f g h i

R H Me Ph 4-ClPh 4-BrPh 4-FPh 4-MePh 2-furil 2-tienil

Et Me Me Me Me Me Me Me Me

3.4 Síntese de 5-Hidroxi-3-alquil[aril(heteroaril)]-5-trifluor(cloro)metil-4,5-diidro-1H-

1-(isonicotinoil)pirazóis (3a-i e 4g-i)

Neste tópico serão relatadas as reações de 1,1,1-trialo-4-alquil[aril(heteroaril)]-4-

alcoxi-3-alquen-2-onas com isonicotinoilhidrazina segundo metodologia descrita por

Bonacorso et al.

62a,b

(Esquema 22). Todas as reações foram realizadas em metanol com tempo

reacional variando de 16 à 48h e temperatura de 20-65ºC. Após do término do tempo

reacional, todos os compostos apresentaram-se na forma de sólidos e foram recristalizados em

metanol ou acetona.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 22:

O OMe(Et)

NHNH

i=MeOH, 20-65ºC, 16-48h

1a-i

2g-i

48-85 %

3a-i

4g-i

F Cl

1,3 2,4

1-4 a b c d e f g h

H Me Ph 4-ClPh 4-BrPh 4-FPh 4-MePh 2-Furil 2-Tienil

A identificação dos compostos 3a-i e 4g-i foi realizada por RMN

H, espectrometria

de massas e ponto de fusão. Os espectros foram registrados em DMSO-d

, utilizando

tetrametilsilano (TMS) como referência interna. Os dados encontrados experimentalmente

concordaram com os dados descritos na literatura

62a, b

3.5 Síntese de 5-Hidroxi-3-alquil(aril)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-

cloroisonicotinoil)pirazóis (7a, 7d-g)

3.5.1 Síntese de 2-cloro isonicotinoilhidrazina (6)

Considerando o fato de que nem todas as hidrazinas derivadas do ácido isonicotínico

são disponíveis comercialmente, foi necessário realizar a síntese do composto 6 através de

metodologias previamente descritas na literatura

. Neste trabalho foi obtida a 2-cloro

isonicotinoilhidrazina em dois passos reacionais, onde primeiramente foi realizada a reação de

esterificação do ácido 2-cloro isonicotínico e em seguida a síntese da hidrazina utilizando a

metodologia de Khan

(Esquema 23).

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 23:

NHNH

OMe

i= CH

éter, t.a

ii= NH

O, EtOH, refluxo, 12h

90% 70%

A Tabela 2 mostra os dados de rendimento e ponto de fusão dos compostos isolados 5

e 6.

Tabela 2: Propriedades Físicas dos Compostos 5 e 6.

Composto Rend. (%) P.F. (°C)

Fórmula Molecular

(g/mol)

OMe

Óleo

(52-56)

[a]

ClNO

(171,01)

NHNH

70 168-170

ClN

( 171,02)

[a] Ref. 97

A identificação dos compostos 5 e 6 foi realizada por RMN

H e

C {H} e

espectrometria de massas. Os espectros foram registrados em clorofórmio-d

para o composto

5 e DMSO-d

para o composto 6 utilizando tetrametilsilano (TMS) como referência interna

(espectros estão no anexo I e II desta dissertação).

No Esquema 24 serão relatadas as reações de 1,1,1-trifluor-4-alquil(aril)-4-alcoxi-3-

alquen-2-onas substituídas com 2-cloroisonicotinoilhidrazina, a qual permitiu o isolamento de

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

uma nova série de 5-hidroxi-3-(aril)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-

cloroisonicotinoil)pirazóis (7d-g).

Esquema 24:

O OR

NHNH

i= MeOH, 60-65ºC, 20 h

1a, d-f

7d-f

51-62 %

1,7 a d e f g

R Et Me Me Me Me

H 4-ClPh 4-BrPh 4-FPh 4-MePh

Para realizar a ciclocondensação [3+2] foram testadas várias condições reacionais a

partir de dados experimentais já publicados

62b

. A melhor condição foi em metanol, e tempo

reacional de 20 horas, sob temperatura de refluxo, com rendimentos de 51-62%.

Na tentativa de obter o composto 7a, foram realizadas várias condições reacionais

(Tabela 3), porém não foi possível isolar este composto, obtendo como produto final mistura

complexa de produtos de partida e impurezas que dificultaram até mesmo a identificação.

Vale salientar que todas as condições reacionais testadas foram acompanhadas por

Cromatografia em Camada Delgada (CCD).

Tabela 3: Condições testadas para a obtenção do composto 7a.

Reação solvente T (ºC) Tempo (h) Rendimento (%)

1 MeOH t.a 24 a

2 MeOH t.a 48 a

3 MeOH 40 16 a

4 MeOH 50 24 a

[a]mistura complexa de material de partida e impurezas

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Os compostos 7d-g foram isolados do meio reacional como sólidos brancos, estáveis e

de alta pureza e foram recristalizados em metanol ou acetona a temperatura de 0 -10ºC.

A identificação destes compostos foi feita através de RMN de

H e

C {H},

Cromatografia Gasosa Acoplada a Espectrômetro de Massas, análise elementar e pontos de

fusão.

A Tabela 4 mostra os dados de rendimento, ponto de fusão análise elementar dos

compostos isolados 7d-g.

Tabela 4- Propriedades Físicas dos compostos 7d-g.

Composto

Rend.(%)

[a]

P.F (ºC)

[b]

Fórmula

Molecular

(g/mol)

Análise Elementar

Cal./Exp

C H N

4-ClPh 53 174-176 C

(404,17)

47,75 2,59 10,30

47,67 2,46 10,33

4-BrPh 58 162-164 C

ClBrF

(448,62)

42,13 2,30 9,19

42,08 2,22 9,37

4-FPh 62 145-147 C

BrF

(387,72)

49,67 2,57 10,88

49,78 2,48 10,67

4-MePh 51 152-154 C

ClF

(383,75)

53,21 3,41 10,95

52,81 3,11 10,72

[a] Rendimentos dos compostos recristalizados. [b] Pontos de fusão não corrigidos

3.5.2 Identificação Espectroscópica dos Compostos 7d-g

A identificação dos compostos (7d-g) foi realizada por RMN

H e

C {H}. Os

espectros foram registrados em DMSO-d

, utilizando tetrametilsilano (TMS) como referência

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

interna. A atribuição de sinais para os compostos, citados na Tabela 4, foram baseados a partir

da interpretação dos dados do composto (7d), e em dados contidos na literatura para

compostos similares.

3.5.2.1 RMN

H e

C {H}

O espectro de RMN de

H em DMSO-d

, para o composto 7d (Figura 13) mostrou um

sinal em 8,59 ppm referente a um hidrogênio do anel piridínico; na região de 7,66-7,52 ppm

multipletos referentes a 2 hidrogênios piridínicos e 4 hidrogênios do anel fenila; um singleto

em 8,5 ppm, referente ao deslocamento do hidrogênio da hidroxila ligada ao C-5 do anel

pirazolínico; dubletos em 4,04 e 3,67 ppm, referente aos hidrogênios diasterotópicos ligados

ao C-4 do anel pirazolínico com constante de acoplamento J=19Hz.

Figura 13: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d), em DMSO-d

O espectro de RMN de

C {H} do composto 7d (Figura 14), em DMSO-d

, mostrou

um sinal em 163,4 ppm, referente ao carbono carbonílico; C-3 em 150 ppm; 5 sinais em

152,6; 150,1; 145,9; 122,8 e 121,8 ppm referentes aos 5 carbonos piridínicos. Os sinais

observados em 135,6 e na região de 128-127 ppm são referentes aos seis carbonos da fenila; o

sinal do CF

aparece na forma de um quarteto com

C-F

=285 Hz na região de122, 5 ppm. O

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

sinal em 92,1 ppm foi atribuído a um quarteto com

J=34 Hz para o C-5 e o sinal da metilena

em 44,1 ppm foi atribuído ao C-4 do 4,5-diidro pirazol.

Figura 14: Espectro de RMN

C {H} a 100,61 MHz 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d), em DMSO-d

Os dados de RMN ¹H e

C {H} dos compostos 7d-g estão descritos na Tabela 5. Os

demais espectros destes compostos encontram-se no Anexo I desta dissertação.

Tabela 5: Dados de RMN de ¹H e ¹³C {¹H} dos compostos 7d-g.

Composto

RMN

δ J

(Hz)

RMN

δ J

(Hz)

8,59 (d, J= 5 Hz, 1H,

Py); 8,5 (s, OH); 7,71-

7,64 (m, 2H, Py; 2H,

Ph); 7,54 (m, 2H, Ph);

4,04 (d, 1H, J=19,

1H); 3,66 (d, 1H,

J=19, 1H)

163,4 (C=O); 152,6; 150,1; 145,9

(3C, Py); 150,2 (C-3); 135,6 (1C,

Ph); 128,9; 128,5; 128,40 (5C,

Ph); 122,9 (q, CF

J=285,) 122,8;

121,8 (2C, Py); 92,1 (q,

J=34 , C-

5); 44,1 (C-4)

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Tabela 5: Dados de RMN de ¹H e ¹³C {¹H} dos compostos 7d-g. Continuação.

Composto

RMN

δ J

(Hz)

RMN

δ J

(Hz)

8,58 (d, 1H, Py); 8,51

(s, 1H, OH); 7,71-7,54

(m, 2H, Py; 4H, Ph);

4,03 (d, 1H, J=19,

1H); 3,65 (d, 1H, J=19

, 1H)

163,4 (C=O); 152,7; 150,1 (2C,

Py); 150,2 (C-3); 145,9 (1C, Py);

131,8; 128,8; 128,6 (5C, Ph);

124,5 (1C, Ph); 122,8; 121,8 (2C,

Py); 125,1 (q, CF

J=285); 92,3

(q,

J=34, C-5); 44,0 (C-4)

8,59 (d, 1H, Py); 8,50

(s, 1H, OH); 7,72-7,64

(m, 2H, Py; 2H, Ph);

7,28-7,37 (m, 2H, Ph);

4,09 (d, 1H, J=19, 1H);

3,67 (d, 1H, J=19,

1H)

163,4 (C=0); 163,5; (d, Ph, JCF=

249); 152,6; 150,1 (2C, Py); 150,1

(C-3); 146,0 (1C, Py); 129,2 ( d,

Ph, JCF=9); 126,3 (d, Ph,

JCF=2,3); 115,9 (d, Ph, JCF=22);

122,9; 121,8 (2C, Py); 122,9 (q,

J=285); 92,1 (q,

JCF=34);

44,2 (C-4)

8.54 (d, 1H, Py); 8,50

(s, 1H, OH); 7,67 (m,

2H, Py); 7,56; 7,27 (m,

4H, Ph); 4,0 (d, 1H,

J=19, 1H

); 3,60 (d,

1H, J=19, 1H ); 2,33

(s, Me)

163,3 (C=O); 153,4; 150,1; 146,0

(3C, Py); 141,0 (1C, Ph); 129,3;

126,5; 126,6 (3C, Ph); 122,9;

121,9 (2C, Py); 123,0 (q, CF

J=285); 91,95 (q, J=34, C-5); 44,2

(C-4); 20,9 (Me)

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

3.5.2.2 Espectrometria de Massas

O espectro de massa do composto 7d apresenta uma série de fragmentos ionizados,

utilizando uma energia de 70eV, nos quais podemos identificar o íon molecular (M

). O

provável mecanismo de fragmentação está representado no Esquema 25 e Figura 15. Os

principais fragmentos são (Esquema 25): o íon relativo a perda do anel pirazolínico com

substituinte fenila (m/z=140), fragmento relativo ao anel da piridina (m/z=112), o íon relativo

a perda do CF

(m/z= 334) e o íon relativo a perda do substituinte do anel pirazolínico

(m/z=292).

Esquema 25:

m/z=292

m/z=140

m/z=334

m/z=112

404,01 g/mol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 15: Espectro de massas de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d).

3.6 Síntese de 5-Hidroxi-3-alquil(aril)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazóis (8a, 8c-g)

O Esquema 26 apresenta a reação de ciclocondensação entre as 1,1,1-trifluor-3-

alquil(aril)-4-alcoxi -3-buten-2-onas com nicotinoilhidrazina para a síntese dos compostos

(8a, 8c-g)

Esquema 26:

O OR)

NHNH

i= MeOH, 60-65ºC, 16 h; 40-45ºC,20h

1a, c-g

8a, c-g

63-75 %

1,8 a c d e f g

R Et Me Me Me Me Me

H Ph 4-ClPh 4-BrPh 4-FPh 4-MePh

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Inicialmente foram determinadas as condições envolvendo o composto 1d e

nicotinoilhidrazida conduzindo à formação e isolamento do composto 5-hidróxi-3-(4-

clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-(nicotinoil)pirazol (8d)

As condições reacionais utilizadas para os compostos 8d-g foram metanol à

temperatura de 60-65 ºC por 16 horas.

Para o composto 8a foi necessário testar algumas condições reacionais, visto que ao

término da reação ainda havia material de partida. Então foram testadas 3 condições

reacionais (Tabela 6), partindo de condições já conhecidas e descritas

62b

. A reação 3, a qual

foi executada em metanol à temperatura de 40-45 ºC por 20 horas, foi a melhor uma vez que

todo material de partida foi consumido e obtendo o produto desejado em bom rendimento

(63%).

Tabela 6: Otimização da síntese de 5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8a).

Reação solvente T (ºC) Tempo (h) Rendimento (%)

1 MeOH t.a 24 a

2 MeOH t.a 48 a

3 MeOH 40-45 20 63

[a] mistura de material de partida e produto

Todas as reações, logo após a adição dos reagentes, apresentavam-se como soluções

límpidas que em seguida começavam a precipitar um sólido branco, com exceção do

composto 8a que apresentou-se como um óleo após a retirada do solvente por rota

evaporação.

A identificação destes compostos foi feita através de RMN ¹H e e

C {H},

Cromatografia Gasosa Acoplada a Espectrômetro de Massas, análise elementar e pontos de

fusão.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

A Tabela 7 mostra os dados de rendimento, ponto de fusão e análise elementar dos

compostos.

Tabela 7: Propriedades Físicas dos compostos 8a e 8c-g.

Composto

Rend.

(%)

[a]

P.F (ºC)

[b]

Fórmula

Molecular

(g/mol)

Análise Elementar

Cal. /Exp

C H N

H 63 óleo C

(259,18)

46,43 3,11 16,21

46,98 3,22 15,93

Ph 75 137-139 C

(335,00)

57,41 3,69 12,68

57,30 3,61 12,74

4-ClPh 67 170-172 C

ClF

(369,95)

52,23 3,26 11,36

51,98 3,13 11,45

4-BrPh 72 154-156 C

BrF

(414,18)

46,94 2,84 10,42

46,85 2,91 10,38

4-FPh 65 186-188 C

(353,27)

54,38 3,26 11,98

54,42 3,09 12,01

4-MePh 71 142-144 C

(349,31)

58,62 4,13 12,15

58,41 4,20 12,01

[a] Rendimentos dos compostos recristalizados. [b] Pontos de fusão não corrigidos

3.6.1 Identificação Espectroscópica do Composto 8a e 8c-g

Os compostos 8a e 8d-g apresentaram em seus espectros de RMN

H e

C {H} sinais

característicos, visto que apenas o substituinte na posição 3 do anel pirazolínico foi

modificado no decorrer da série. Para interpretação destes sinais foi utilizado como base o

composto 8d.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

3.6.1.1 RMN

H e

C {H}

O espectro de RMN de

H do composto 8d (Figura 16), mostrou um sinal em 8,92

ppm referente a um hidrogênio do anel piridínico; um dubleto em 8,72 ppm de J = 3 Hz

referente a um hidrogênio do anel piridínico; multipleto em 8,15 ppm referente ao hidrogênio

piridínico; multipleto em 7,73-7,69 ppm referente a dois hidrogênios do anel da fenila;

multipleto na região 7,55 ppm referente a 2 hidrogênios da fenila e um hidrogênio piridínico;

um singleto em 8,40 ppm, referente ao deslocamento do hidrogênio da hidroxila ligada ao C-5

do anel; dubletos em 4,02 e 3,65 ppm, referente aos hidrogênios diasterotópicos ligados ao C-

4 do anel pirazolinico, os quais apresentam constantes de acoplamento J=19,0 Hz .

Figura 16: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d), em DMSO-d

O espectro de RMN de e

C {H} do composto 8d (Figura 17), em DMSO-d

, mostrou

um sinal em 164,9 ppm, referente ao carbono carbonilico; em 151,9; 149,5 ppm referentes a

dois carbonos da piridina; em 151,5 ppm um sinal referente ao C-3; em136,8 ppm um sinal

referente a um carbono da piridina. Os sinais observados em 135,8 e na região de 128 ppm

são referentes aos seis carbonos da fenila; o CF

aparece na forma de um quarteto com

C-F

285

Hz em

123,0 ppm. Em 92,0 ppm observou-se um quarteto com

J= 34 Hz para o C-5 e em

44,12 ppm um sinal referente ao C-4.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 17: Espectro de RMN

C {H} a 100,61 MHz 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d), em DMSO-d

Os dados de RMN

H e

C {H} dos compostos 8a e 8c-g estão descritos na Tabela 8.

Os demais espectros destes compostos encontram-se no Anexo I desta dissertação.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Tabela 8: Dados de RMN de ¹H e ¹³C {¹H} dos compostos dos compostos 8a e 8c-g.

Composto

RMN

δ J

(Hz)

RMN

δ J

(Hz)

9,09 (s, 1H, Py); 8,74 (d,

1H, Py); 8,18 (d, 1H, Py);

7,38 (t, 1H, Py); 7,03 (s,

OH); 3,45 (d, 1H, J= 19);

3,23 (d, 1H, J=19).

168,5 (C=O); 152,1; 150,68

(2C, Py); 145,5 (C-3); 137,5;

129,0; 124,5 (3C, Py); 123,1

(q, CF

J=285); 90,9 (q,

J=34); 44,4 (C-4).

8,93 (s, 1H, Py); 8,73 (d,

1H, Py); 8,34 (s, OH);

8,16 (m, 1H, Py); 7,70 (m,

2H, Ph); 7,56 (m, 1H,

Py); 7,50-7,44 (m, 3H,

Ph); 4,00 (d, 1H, J=19,

H); 3,66 (d, J=19, H)

164,9 (C=O); 152,8; 145,5

(2C, Py); 151,4 (C-3); 136,8;

130,9 (2C, Py); 130,8; 129,8

(2C, Ph); 128,8; 126,6 (4C,

Ph); 123,2 (q, CF

J=285);

92,12 (q,

J=33,6 ); 44,1 (C-

8,92 (s, 1H, Py); 8,72 (d,

1H, Py); 8,34 (s, OH);

8,15 (m, 1H, Py); 7,71 (m,

2H, Py); 7,55 (m, 2H, 1H,

Ph); 4,09 (d, 1H, J=19,

H); 3,65 (d, J=19, H)

164,9 (C=O); 151,9; 149,5

(2C, Py); 151,5 (C-3); 136,8

(1C, Py); 135,8 (1C, Ph);

130,8 (1C, Py); 128,9; 128,7;

128,4 (5C, Ph); 123,1 (1C,

Py); 123,0 (q, CF

, J=285);

92,2 (q,

J=34); 44,1(C-4)

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Tabela 8: Dados de RMN de ¹H e ¹³C {¹H} dos compostos dos compostos 8a e 8c-g.

Continuação.

Composto

RMN

δ J

(Hz)

RMN

δ J

(Hz)

8,92 (s, 1H, Py); 8,72 (d,

1H, Py); 8,40 (s, OH);

8,15 (m, 1H, Py); 7,67-

7,53 (m, 4H, Ph; 1H, Py);

4,02 (d, J=19, H); 3,65 (d,

J=19, H)

164,9 (C=O); 152; 151 (2C,

Py); 149,5 (C-3); 136,8 (1C,

Ph); 131,8 (2C, Ph); 130,8;

129,1 (2C, Py); 128 (2C, Ph);

124,3 (1C, Py); 123,1 (1C, Ph);

123,4 (q, CF

,J=285) 92,2 (q,

J=34 , C-5); 44,0 (C-4).

8,92 (s, 1H, Py); 8,72 (d,

1H, Py); 8,34 (s, OH);

8,15 (m, 1H, Py); 7,77-

7,74 (m, 2H, Ph); 7,57-

7,54 (m, 1H, Py); 7,34-

7,29 (m, 2H, Ph); 3,99(d,

J=19, H); 3,68 (d, J=19,

164,8(C=O); 163,4 (d, Ph,

J=249); 151,9; 149,5 (2C, Py);

151,4 (C-3); 136,8; 130,8 (2C,

Py); 129,0; (d, Ph, J= 8); 126,5

(d, Ph, J=3 Ph); 123,0 (1C,

Py); 115,9 (d, Ph, J=22); 123,1

(q, CF

J= 285); 92,2 (q,

J=34, C-5); 44,2 (C-4).

8,92 (s, 1H, Py); 8,73 (d,

1H, Py); 8,30 (1H, OH);

8,14 (m, 1H, Py); 7,59-

7,54 (m, 2H, Ph; 1H, Py);

7,26 (d, 2H, Ph); 3,96 (d,

J=19, 1H); 3,61 (d, J=19,

1H); 2,34 (s, 3H, Me).

164,8 (C=O); 152,7; 149,5

(2C, Py); 151,4 (C-3); 140,7

(1C, Ph); 136,8 (1C, Py);

130,7; 128,7; 126,6 (5C, Ph);

123,0 (1C, Py); 123,2 (q, CF

J= 285,); 92,0 (q,

J=34, C-5);

44,1 (C-4); 20,9 (Me)

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

3.6.2 Espectrometria de Massas

O espectro de massa do composto 8d apresenta uma série de fragmentos ionizados,

utilizando uma energia de 70eV, nos quais podemos identificar o íon molecular (M

). O

provável mecanismo de fragmentação está representado no Esquema 27 e Figura 18. Os

principais fragmentos (Esquema 27) são: íon relativo perda do anel pirazolínico com

substituinte (m/z=106), o fragmento relativo do anel de piridina (m/z=78), o íon relativo a

perda do CF

(m/z= 300) e o íon relativo a perda do substituinte do anel pirazolínico

(m/z=258)

Esquema 27:

m/z=78

m/z=258

m/z=106

m/z=300

369,73g/mol

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 18: Espectro de massas de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8d)

3.7 Mecanismo Proposto Para a Obtenção de 3-Aquil(aril/heteroaril)-5-

trifluor(cloro)metil-4,5-diidro-1H-1-(carbonilpiridil)pirazóis (3, 4, 7 e 8)

Considerando que as 1,1,1-trialo-4-(aril)-4-alcoxi-3-alquen-2-onas substituídas (1 e 2)

possuem dois centros eletrofílicos com reatividade diferenciada e o carbono olefínico C-4 é

um centro eletrofílico mais reativo que o carbono carbonílico, e que, por sua vez, as

hidrazinas possuem dois centros nucleofílicos diferenciados devido aos N-substituintes, que

demonstram alta reatividade em presença de carbonos eletrofílicos, concluiu-se que o

primeiro passo da reação foi o ataque nucleofílico do nitrogênio ao carbono olefínico (C-4)

com posterior saída do grupamento metoxila. A seguir, ocorre o ataque nucleofílico do

segundo nitrogênio da hidrazina ao carbono carbonílico, formando o anel de cinco membros.

A partir das considerações anteriores, podemos propor o mecanismo para as

ciclocondensações que levam a obtenção de 5-hidroxi-4,5-diidro-1H-1-pirazóis (Esquema

28).

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Esquema 28:

OMe

NHC(O)-Z

OMe

NHNHC(O)-Z

OMe

C O

C(O)-Z

-MeOH

1, 2

NHC(O)-Z

4-piridil, 2-cloro-4-piridil, 3-piridil

X: F, Cl

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

3.8 Avaliação Biológica dos Compostos

Os compostos sintetizados neste trabalho foram submetidos a avaliação biológica

frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv). Os testes foram realizados no Departamento

de Microbiologia da FURG.

A metodologia utilizada foi baseada nos estudos de Palomino et al.

com pequenas

modificações. Os compostos foram solubilizados em DMSO 99,5% e utilizando resazurina

como indicador de viabilidade celular. Os compostos 3, 4, 7 e 8 foram testados a fim de

avaliar o efeito dos substituintes e do grupo INH ligados ao anel pirazolínico na atividade

frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv).

Primeiramente foram testados compostos pirazolínicos trialometilados isonicotinoil

substituídos (3 e 4) frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv). Os resultados obtidos

demonstraram que compostos trifluormetilados não substituídos e substituídos por alquil e aril

na posição 3 do anel pirazolínico apresentavam melhor atividade, compostos estes já

sintetizados e publicados

62b

A partir destes resultados foram sintetizados novos compostos trifluormetilados 7 e 8

com variação da posição do nitrogênio no anel da piridínico e diferentes substituintes na

posição 3 do anel pirazolínico.

3.8.2 Triagem dos compostos frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)

Dos vinte e dois compostos citados neste trabalho, dezenove destes tiveram suas

atividades testadas frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv). Através de uma triagem,

foi avaliada a sensibilidade ou a resistência do M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv),

utilizando uma concentração fixa de 100 μg/ml. Com isso, foram obtidos os resultados abaixo

(Tabela 9).

Neste estudo, observou-se que apenas quatro compostos (3d, 3h, 8c e 8e) não

apresentaram atividade a 100 μg/ml, o que demonstra que estes não foram eficazes frente ao

M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv).

Os demais compostos (3a-c, 3e-g, 3i, 4g-i, 7d-g e 8d) que demonstraram atividade

este teste foram submetidos a uma nova avaliação antimicrobiana.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Tabela 9: Avaliação da atividade antimicrobiana de compostos pirazolínicos(100 μg/ml)

conforme a variação nos radicais X, R

, Z frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv).

Composto X R

Z Suscetibilidade

F H 4-piridil sensível

F Me 4-piridil sensível

F Ph 4-piridil sensível

F 4-ClPh 4-piridil resistente

F 4-BrPh 4-piridil sensível

F 4-FPh 4-piridil sensível

F 4-MePh 4-piridil sensível

F 2-furil 4-piridil sensível

F 2-tienil 4-piridil resistente

Cl 4-MePh 4-piridil sensível

Cl 2-furil 4-piridil sensível

Cl 2-tienil 4-piridil sensível

F 4-ClPh 2-cloro-4-piridil sensível

F 4-BrPh 2-cloro-4-piridil sensível

F 4-FPh 2-cloro-4-piridil sensível

F 4-MePh 2-cloro-4-piridil sensível

F Ph 3-piridil resistente

F 4-ClPh 3-piridil sensível

F 4-BrPh 3-piridil resistente

3.8.3 Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos compostos frente ao H37Rv

De acordo com a triagem, os quinze compostos selecionados (3a-c, 3e-g, 3i, 4g-i, 7d-g

e 8d) com atividade a 100 μg/ml, foram avaliados quanto a Concentração Inibitória Mínima

(CIM) frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv). As concentrações analisadas foram

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

entre 100 e 0,20 μg/ml. Foi determinada também a CIM da INH sendo como 0,20 μg/ml

(Tabela 10).

Tabela 10: Determinação das CIMs dos compostos pirazolínicos conforme a variação nos

radicais X, R

, Z frente ao M.tuberculosis ATCC 27294(H37Rv).

Composto X R

Z CIM

F H 4-piridil 0,39μg/ml

F Me 4-piridil 1,56 μg/ml

F Ph 4-piridil 3,12μg/ml

F 4-BrPh 4-piridil 6,25μg/ml

F 4-FPh 4-piridil 1,56μg/ml

F 4-MePh 4-piridil 0,39μg/ml

F 2-furil 4-piridil 6,25μg/ml

Cl 4-MePh 4-piridil 25μg/ml

Cl 2-furil 4-piridil 25μg/ml

Cl 2-tienil 4-piridil 25μg/ml

F 4-ClPh 2-cloro-4-piridil 6,25μg/ml

F 4-BrPh 2-cloro-4-piridil 3,12μg/ml

F 4-FPh 2-cloro-4-piridil 6,25μg/ml

F 4-MePh 2-cloro-4-piridil 1,56μg/ml

F 4-ClPh 3-piridil 12,5 μg/ml

INH 0,20 μg/ml

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Foi observado que compostos pirazolínicos trifluormetilados apresentaram melhor

atividade que os respectivos compostos triclorometilados. Por exemplo, o composto 3g (CIM

=0,39 μg/ml) é cerca de 60 vezes mais ativo que o análogo triclorometilado 4g (CIM =25

μg/ml). A mesma tendência pode ser observada para o composto 3h (trifluormetil substituído

CIM =6,25 μg/ml) e seu análogo triclorometilado 4h (C I M= 25 μg/ml) (Figura 19).

Figura 19: Concentração Inibitória Mínima dos compostos trifluormetilados e

triclorometilados.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Outro resultado importante foi demonstrado para os compostos com diferentes

substituintes na posição C3 do anel pirazolínico. Os compostos com esta posição não

substituída ou substituída por alquil e aril demonstram significativa atividade frente ao M.

tuberculosis H37Rv (Figura 20). Esses resultados mostraram que mudanças na estrutura dos

compostos induz a diferenças significativas na atividade.

Figura 20: Variações das CIMs frente ao M.tuberculosis ATCC 27294(H37Rv) em função

dos substituintes na posição 3 do anel pirazolínico.

Nos compostos 3a e 3g, a atividade foi mantida na mesma concentração (CIM

=0,39μg/ml), indicando que a presença de um substituinte tolueno na posição 3 do anel

pirazolínico do composto 3g não aumenta sua atividade em relação ao 3a, o qual é constituído

apenas por INH e pirazol.

3. APRESENTAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Também observou-se que a presença de substituinte na posição 2 do anel da piridínico

e a variação da posição do átomo de nitrogênio neste anel influenciam na atividade avaliada.

Os compostos 3 e 4 que possuem o nitrogênio na posição 4 do anel pridínico demonstraram

ser mais ativos que os compostos 7 cloro substituídos na posição 2 e nitrogênio na posição 4,

e estes por sua vez foram mais ativos que compostos 8 que apresentam nitrogênio na posição

3 (Figura 21).

Figura 21: Variações das CIMs frente ao M.tuberculosis ATCC 27294(H37Rv) em função da

varição da posição do nitrogênio e presença de substituinte no anel da piridina.

Sabe-se que a CIM da INH é de 0,20 μg/ml frente ao M. tuberculosis H37Rv, o que

corresponde a uma concentração molar de 1,45 μM. No entanto, foi observado que a CIM do

composto 3a(0,39 μg/ml) apresenta uma concentração semelhante à INH, com 1,50 μM. Por

outro lado, apesar da CIM do composto 3g ser igual ao 3a, e também maior que da INH, é

necessária uma concentração menor (1,12 μM) para inibir o crescimento bacteriano em

relação à INH. As demais moléculas apresentaram concentração molar significativamente

superior a esse fármaco.

4. MATERIAL E MÉTODOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

4. MATERIAL E MÉTODOS

4.1 Reagentes e Solventes Utilizados

Os reagentes e solventes utilizados para a síntese dos compostos em estudo

apresentaram qualidade técnica ou P.A., e/ou foram purificados segundo procedimentos

usuais de laboratório

. Os reagentes e solventes utilizados, estão descritos abaixo:

4.1.1 Reagentes

• Isonicotinoilhidrazina (Sigma)

• Ácido 2-cloro isonicotinoil (Aldrich)

• Cloreto de tionila

• Trimetil ortoformiato (Aldrich)

• Ácido p-toluenosulfônico dihidratado (Aldrich)

• Acetais sintetizados e purificados conforme técnicas descritas

• Anidrido trifluroacético (Vetec)

• Cetonas

• Etil viniléter

• Piridina (Merck): destilada sob KOH

• Carbonato de sódio anidro

• Diazometano

4.1.2 Solventes

• Álcool etílico P.A.(Vetec): destilado sob magnésio e iodo

• Álcool metílico P.A.(Vetec): destilado sob magnésio e iodo

• Clorofórmio P.A. (Vetec): destilado sobre P

• Éter dietilico: seco com sódio metálico

4. MATERIAL E MÉTODOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

4.2 Aparelhos Utilizados

4.2.1 Especroscopia de RMN

Os espectros de RMN de

H e

C foram registrados em dois Espectrômetros:

BRUKER DPX-200, que opera a 200,13 MHz para

H e 50,32 MHz para

C e BRUKER

DPX-400, que opera a 400,13 MHz para

H e 100,61 MHz para

Os dados de

H e

C, obtidos no aparelho BRUKER DPX-200, foram realizados em

tubos de 5 mm na temperatura de 300K, em Dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-d

)

utilizando tetrametilsilano (TMS) como referência interna. As condições usadas no

espectrômetro BRUKER DPX-200 foram: SF 200,13MHz para

H e 50,32MHz para

C; lock

interno pelo

D; largura de pulso 9,9μs para (

H) e 19,5μs para (

C), tempo de aquisição 3,9s

para (

H) e 2,8s para (

C); janela espectral 2400Hz para (

H) e 11500Hz para (

C); número

de varreduras de 8 a 32 para (

H) e 2000 a 20000 para (

C); dependendo do composto,

número de pontos 65536 com resolução digital Hz/ponto igual a 0,128875 para (

H) e

0,17994 para (

C). A reprodutibilidade dos dados de deslocamento químico é estimada ser de

mais ou menos 0,01ppm.

Os dados de

H e

C, obtidos no aparelho BRUKER DPX-400, foram realizados em

tubos de 5mm na temperatura de 300K, em Dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-d

) utilizando

tetrametilsilano (TMS) como referência interna. As condições usadas no espectrômetro

BRUKER DPX-400 foram: SF 400,13MHz para

H e 100,61MHz para

C; lock interno pelo

D; largura de pulso 8,0μs para (

H) e 13,7μs para (

C); tempo de aquisição 6,5s para (

H) e

7,6s para (

C); janela espectral 2400Hz para (

H) e 11500Hz para (

C); número de

varreduras de 8 a 32 para (

H) e 2000 a 20000 para (

C); dependendo do composto, número

de pontos 65536 com resolução digital Hz/ponto igual a 0,677065 para (

H) e 0,371260 para

(

C). A reprodutibilidade dos dados de deslocamento químico é estimada ser de mais ou

menos 0,01ppm.

4.2.2 Ponto de Fusão

Os pontos de fusão foram determinados em aparelhos KOFLER REICHERT-

THERMOVAR e Electrothermal Mel-Temp 3.0. (Pontos de fusão não corrigidos).

4. MATERIAL E MÉTODOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

4.2.3 Cromatografia Gasosa – Espectrometria de Massas (CG/MS)

As análises por cromatografia gasosa foram efetuadas em um Cromatógrafo gasoso da

HP 6890 acoplado a um espectrômetro de Massas HP 5973 (CG/MS), com Injetor automático

HP 6890. Coluna HP-5MS (Crosslinked 5% de PH ME Siloxane)- Temperatura máxima de

325ºC - (30mx0.32mm., 0.25μm). Fluxo de gás Hélio de 2mL/min, pressão de 5.05psi.

Temperatura do injetor 250ºC; Seringa de 10μL, com injeção de 1μL; Temperatura inicial do

forno de 70 ºC por 1 min e após aquecimento de 12ºC por min até 280ºC. Para a fragmentação

dos compostos foi utilizado impacto de elétrons de 70ev no espectrômetro de Massas.

4.2.4 Análise Elementar

As análises elementares foram realizadas em um analisador Perkin Elmer 2400 CHN,

no Instituto de Química, USP, São Paulo.

4.3 Procedimentos Experimentais Sintéticos

4.3.1 Síntese de acetais

A uma solução da cetona respectiva (667 mmol) e ortoformiato de trimetila (84,8g,

800 mmol) em metanol anidro (50 mL), adicionou-se ácido p-tolueno sulfônico (0,19g, 1

mmol). Após ter ficado em repouso por 24h à temperatura ambiente, o meio reacional foi

neutralizada com carbonato de sódio anidro (30g), e filtrada a pressão ambiente. O metanol e

o ortoformiato de trimetila (excesso) foram retirados em rota-evaporador e o respectivo acetal

foi então destilado a pressão reduzida.

4.3.2 Síntese 1,1,1-trialo-4-alquil[aril(heteroaril)]-4-alcoxi-3-alquen-2-onas (1a-i e 2g-i)

Método A: A partir de Enoléteres

A uma solução do enoléter (30 mmol) e piridina (30 mmol) em clorofórmio (30 ml),

em banho de gelo à 0

C e sob agitação magnética, foi adicionado anidrido trifluoracético (30

mmol). A mistura foi deixada sob agitação durante 24 horas à temperatura ambiente. A

mistura foi lavada com uma solução de ácido clorídrico 0,1M (3× 15 ml) e água (1×, 15mL).

4. MATERIAL E MÉTODOS

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A fase orgânica foi desidratada com sulfato de magnésio anidro. O solvente foi removido por

rota-evaporação e os produtos 1a-b purificados através de destilação sob pressão reduzida.

Método B: A partir de Acetais

A uma solução de acetal (30 mmol) e piridina (60 mmol) em clorofórmio (30 ml), em

banho de gelo à 0

C e sob agitação magnética, foi adicionado anidrido trifluoracético ou

cloreto de tricloacetila (60 mmol). A mistura foi deixada durante 16 horas, a 45

C. A seguir,

a mistura foi lavada com uma solução de ácido clorídrico 0,1M (3×, 15mL) e água (1×,

15mL). A fase orgânica foi desidratada com sulfato de magnésio anidro e o solvente removido

por rota-evaporação. Os produtos 1c-i e 2g-i purificados através de destilação sob pressão

reduzida.

4.3.3 Síntese metil 2-cloro isonicotinoato (5)

Em um balão de 100mL contendo éter etílico (20mL) foi adicionado ácido 2-cloro

isonicotinoil (3mmol) e agitou-se vigorosamente. Depois de dissolvido, adicionou-se

diazometano (9ml) gota à gota. A mistura reacional foi deixada por 2h em repouso e o

solvente retirado por rota evaporação obtendo-se o produto desejado.

4.3.4 Síntese de 2-cloro isonicotinoil hidrazina (6)

Em um balão reacional munido de agitação magnética e condensador de refluxo,

contendo metil 2-cloro isonicotinoato (2 mmol) em etanol (10 ml), foi adicionado hidrato de

hidrazina (4 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 78 °C por 12 horas. Após o tempo

reacional o solvente orgânico foi evaporado obtendo-se um sólido branco com alta pureza.

4.3.5 Síntese de 5-hidróxi-5-trialo-3-alquil[aril(heteroaril)]-4,5-diidro-1H-pirazóis

substituídos (3, 4, 7 e 8)

Em um balão reacional munido de agitação magnética e condensador de refluxo,

contendo 1,1,1-trialo-4-alcoxi-3-alquen-2-onas (2 mmol) diluído em metanol (10 mL) sob

agitação magnética e temperatura ambiente, foi adicionada isonicotinoilhidrazida, 2-cloro

isonicotinoilhidrazida ou nicotinoilhidrazida (2 mmol). A mistura reacional ficou sob

4. MATERIAL E MÉTODOS

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

agitação magnética por 20h à 60-65 ºC (7d-g); 16h à 60-65 ºC (8c-g e 3c-g); 20h à 40-45 ºC

8a; 48h à 20-25ºC (3a-b) e 24h à 20-25ºC (3g-i e 4g-i). Após o tempo reacional houve a

precipitação de um sólido, o qual foi filtrado e recristalizado em metanol ou acetona. O

composto 8a apresentou-se na forma de óleo.

4.4 Procedimentos Experimentais para a avaliação da Atividade Biológica

4.4.1 Microorganismos

Foi utilizada a cepa de M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv), virulenta e que

apresenta sensibilidade às principais drogas administradas no tratamento da tuberculose.

4.4.2 Manutenção dos microrganismos

As cepas foram mantidas em meio sólido de Ogawa-Kudoh em estufa bacteriológica a

37 ºC. Essas eram utilizadas no experimento com até 14 dias de crescimento.

4.4.3 Preparo das soluções

4.4.3.1 Compostos sintéticos

Foram testados dezenove compostos pirazolínicos. Todos os compostos foram

estocados na geladeira, solubilizados em DMSO 99,5% (Sigma), numa concentração de 10

mg/ml. Para o experimento, estes foram diluídos em água destilada estéril até obter-se a

concentração de 400μg/ml, para que, dessa forma, a concentração nos testes de suscetibilidade

bacteriana fosse de 100 μg/ml no primeiro poço.

4.4.4 Teste de suscetibilidade do M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv) aos compostos

pirazolínicos trialometilados

4.4.4.1 Suspensão bacteriana

Foram utilizados tubos de ensaio com tampa de rosca, estéreis contendo pérolas de

vidro e pesados, individualmente, em balança de precisão. A seguir, com o auxílio de alças

descartáveis, porções da colônia de microrganismos eram transferidas para tubos previamente

pesados. Realizava-se outra pesagem para a determinação da massa bacteriana incluída em

cada tubo. A seguir, adicionavam-se volumes de 1ml para cada 0,001g de massa bacteriana,

tendo-se o cuidado de fracionar este volume em 2 alíquotas de 500ml, para a obtenção de uma

4. MATERIAL E MÉTODOS

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suspensão bacteriana bem homogênea. A suspensão final era padronizada pela turvação

equivalente ao tubo 1,0 da escala de Mac Farland.

O inóculo bacteriano foi preparado a partir dessa suspensão, em uma proporção de

1:20 em meio 7H9 líquido .

4.4.4.2 Preparação da placa para a triagem da atividade antimicobacteriana pelo

método REMA frente ao M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)

A metodologia foi baseada nos estudos de Palomino et al.

100

, com pequenas

modificações. Os dezenove compostos sintéticos foram testados frente ao M. tuberculosis

ATCC 27294(H37Rv), onde foi avaliada a sensibilidade ou a resistência do microrganismo

utilizando uma concentração fixa de 100μg/ml. Foi utilizada uma microplaca de 96 cavidades

em fundo U (figura 22). Nas cavidades periféricas eram adicionados 200μl de água destilada

estéril, para evitar a evaporação do meio líquido quando incubado na estufa. Nos poços de

teste, eram adicionados 100μl de meio 7H9 enriquecido com OADC (ácido oléico albumina

dextrose catalase), 100μl do composto e 100 μl do inóculo. Assim, a concentração do

composto em cada poço era de 100μg/ml, devido a sua diluição no meio e no inóculo.

Posteriormente, a placa era incubada na estufa a 37ºC, sob atmosfera de aerobiose e sem

agitação durante sete dias.

Figura 22: Distribuição dos compostos na microplaca para a triagem da atividade

antimicobacteriana.

4. MATERIAL E MÉTODOS

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4.4.4.3 Preparação das placas de CIM com o M. tuberculosis ATCC 27294(H37Rv).

Volumes de 200 μl de água destilada estéril eram depositados nos poços da periferia

com o propósito de evitar a evaporação do meio líquido 7H9. Em seguida, em todos os poços,

eram adicionados 100 μl do meio 7H9 enriquecido com 10% de OADC, 100 μl do composto

partindo-se de uma concentração de 100μg/ml no primeiro poço (microdiluição 1:2) e 100μl

do inóculo bacteriano em todos os poços. A seguir, a placa era incubada em estufa a 37ºC por

sete dias.

4.4.5 Leitura dos ensaios de triagem e determinação das CIMs.

Decorrido o tempo de incubação (sete dias), eram adicionados 30μl de resazurina a

0,02% a cada poço, incubando-se por mais dois dias na estufa a 37°C. O corante age como um

indicador da viabilidade celular. A leitura é baseada na mudança de cor do azul para o rosa,

devido a oxi-redução do corante; esta mudança de cor do corante indica o crescimento

bacteriano, os poços que mantinham a cor azul eram interpretados como inibição do

crescimento bacteriano.

5. CONCLUSÃO

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

5. CONCLUSÃO

A partir dos resultados obtidos nesta pesquisa as seguintes conclusões podem ser

apresentadas:

a) A ciclocondensação entre 1,1,1-trialo-4-alquil[(aril/heteroaril)]-4-alcoxi-3-

alquen-2-onas e piridil hidrazinas ocorre de forma regioespecífica, levando a

formação de 4,5-diidro-1H-pirazol (3 e 4) conforme metodologia descrita

na literatura, e também a formação de 4,5-diidro-1H-pirazol( 7 e 8) inéditos

na literatura em bons rendimentos.

b) Os resultados dos ensaios in vitro para determinação da atividade dos

compostos frente ao Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294(H37Rv)

demonstraram que:

• Com base nas CIMs os compostos pirazolínicos trifluormetilados

foram mais ativos do que os triclorometilados.

• As posições do átomo de nitrogênio bem como o substituinte cloro

influenciam na atividade antimicobacteriana dos compostos em estudo.

• Os compostos 3a e 3g demonstram excelente atividade

antimicobacteriana (CIM= 0,39 μg/ml), porém nenhum composto

mostrou atividade superior a INH.

• Compostos pirazolínico com posição C-3 do anel não substituída ou

substituída por alquil, aril e hetroaril apresentam atividade inibitória

frente às cepas testadas. Todavia alguns compostos com substituinte

aril e heteroaril nesta posição evidenciaram perda da atividade

antimicobacteriana.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

6. BIBLIOGRAFIA

1. Silva, P. Farmacologia, 7ª Ed., Guanabara koogan, Rio de Janeiro, 2006, 1050.

2. World Health Organization WHO Report 2007- global Tuberculosis control - Surveilance,

Planing, financing, Geneva. Disponível em

<http://www.who.int/tb/publications/global_report/en/> Acessado em 22/05/2007.

3. World Health Organization. The global MDR-TB & XDR-TB response plan, 2007-2008.

Disponível em http://libdoc.who.int/hq/2007/> Acessado em20/06/2008.

4. Wolfart, M.; Brth, A. L.; Willers, D.; Zavaski, A.P. Transactions of the Royal Society of

Tropical Medicine and Hygiene 2008, 102, 421.

5. Silva, P.A.; Aínsa, J.A. Drugs and drug interaction. Tuberculosis 2007. Disponível em:

<http://www.amedeochallenge.org/ac/tb.htm.> Acessado em 18/06/2008.

6. Vilchèse, C.; Jacobs, W. R. Annu. Rev. Microbiol. 2007, 61, 35.

7. Janin, J.Y. Bioorg & Med. Chem. 2007, 15, 2479.

8. Shaharyar, M.; Siddiqui, A. A.; Ali, M. A.; Sriram, D.; Yogeeswari, P. Bioorg. Med. Chem.

Lett. 2006, 16, 3947.

9. Cocco, M.; Congui, C.; Onnis, V.; Pusceddu, M.; Schivo, M.; De Logu, A. Eur. J. Med.

Chem. 1999, 34, 1071.

10. Maccari, R, Ottana, R.; Vigorita, M. G. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 2509.

11. Mohamad, S.; Ibrahim, P.; Sadikun, A. Tuberculosis, 2004, 84, 56.

12. Lednecer, D. and Mitcher, L. A. Organic Chemistry of Drugs Synthesis, A Wiley-

Interscience Publication, John Wiley & Sons, N Y, 1997, Vol. 1-3. b) Arriba, A. F.; Gómez-

Casajús, L. A.; Cavalcante, F.; Almansa, C.; García-Rafanell, J. Eur. J. Pharmacol. 1996,

318, 341.

13. Martins, M. A. P.; Zoch, A. N.; Flores, A. F. C.; Clar, G.; Zanatta, N.; Bonacorso, H. G. J.

Heterocycl. Chem. 1995, 32, 739.

14. Effenberger, F.; Maier, R.; Schonwalder, K. H.; Ziegler, T. Chem. Ber. 1982, 115, 2766.

15. Effenberger, F.; Schonwalder, K. H. chem. Ber. 1984, 117, 3270.

16. Kamiori, Y.; Hojo, M.; Masuda, R.; Fujitani, T.; Kosbuschi, T. Synthesis, 1986, 4, 340.

17. Hojo, M. Masuda, R.; Okada, E. Synthesis, 1986, 12, 1013.

18. Hojo, M.; Masuda, R.; Kokuryo, Y.; Shioda, H.; Matsuo, S. Chem. Lett. 1976, 499.

19. Siqueira, G. M.; Flores, A. F. C.; Clar, G.; Zanatta, N.; Martins, M. A. P. Quim. Nova

1994, 17, 24.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

20. Martins, M. A. P.; Bastos, G. P.; Bonacorso, H. G.; Zanatta, N.; Flores, A. F. C.; Siqueira,

G. M. Tetrahedron Lett. 1999, 40, 4309.

21. Bonacorso, H. G.; Martins, M. A. P.; Bittencourt, S. R. T.; Lourega, R. V.; Zanatta, N.;

Flores, A. F. C. J. Fluorine Chem. 1999, 99, 177.

22. Flores, A. F. C.; Siqueira, G. M.; Freitag, A. R.; Zanatta, N.; Martins, M. A. P. Quim.

Nova, 1994, 17, 298.

23. Park, P. Y.; Lee, M. J.; Kim, J. N. Tetrahedron Lett. 2005, 46, 8799.

24. Taylor, E. C.; Patel, H.; Kumar, H. Tetrahedron, 1992, 48, 8089.

25. Roelfvan, S. G.; Arnold, C.; Wellnga, K. J. Agric. Food Chem. 1997, 13, 143.

26. Kedar, R. M.; Vidhale, N. N.; Chincholkar, M. M. Orient. J. Chem. 1997, 84, 143.

27. Singh, A.; Rathod, S.; Berad, B. N.; Patil, S. D.; Dosh, A.G. Orient. J. Chem. 2000, 16,

315.

28. Katri, H. Z. Vunii, S. A. J. Ind. Chem. Soc. 1981, 58, 1968.

29. Das, N. B.; Mittra, A. S. Ind.J. Chem. 1978, 58, 638.

30. Azarifar, D.; Shaebanzadeh, M.; Molecules, 2002, 7, 885.

31. Holla, B. S.; Akaberali, P. M.; Shivanada, M. K. Farmaco, 2000, 55, 256.

32. Palaska, E.; Aytemir, M.; Tayfun, I.; Erol, K.; Dilek, E. Eur. J. Med. Chem. Chim. Ther.

2001, 36, 539.

33. Katritzky, A. R, Rees C.W.; Scriven E. F. In Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,

eds. Pergamon Press, Oxford, 1996, Vol. 3.

34. Singh, S. P, Kumar D.; Batra H.; Naithani, R.; Rozas, I.; Elguero, J. Can. J. Chem. 2000;

78,1109.

35. Lin, P.; Jiang, J. Tetrahedron, 2000, 56, 3635.

36. Arnone, A.; Berbardi, R.; Blasco, F.; Cardillo, R.; Resnati, G.; Gerus, I.I.; Kukhar, V.P.

Tetrahedron, 1998, 54, 2809.

37. Filler, R. Organofluorine Chemicals and Their Industrial Applications, Banks, R.E. (ed),

Ellis Horwood, London, 1979.

38. Bravo, P.; Resnati, G.; Angeli, P.; Frigerio, M.; Viani, F.; et al. J. Med. Chem. 1992, 35,

3102.

39. Lu, S. F.; Herbert, B.; Haufe, G.; Laue, K. W.; Padgett, W. L.; et al. J. Med. Chem. 2000,

43, 1611.

40. Tewson, T. J.; Stekhova, S.; Kinsey, B.; Chen, L; Wiens, L.; et al. Nucl. Med. Biol. 1999,

26, 891.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

41. Park, B. K.; Kitteringham, N. R. Drug Metab. Rev. 1994, 26, 605.

42. Martins, M. A. P.; Colla, A.; Clar, G.; Fischer, P.; Krimmer, S. Synthesis, 1991, 483

43. Siqueira, G.M.; Flores, A.F.C.; Clar, G.; Zanatta, N.; Martins, M. A. P. Quím. Nova 1994,

17, 24.

44. Bonacorso, H.G.; Lopes, I. S.; Wastowski, A.D.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P. J. Fluorine

Chem. 2003, 120, 29.

45. Bonacorso, H. G.; Martins, M. A. P.; Bittencourt, S. R. T.; Lourega, R. V.; Zanatta, N.;

Flores, A. F. C. J. Fluorine Chem. 1999, 99, 177

46. Flores, A. F. C.; Brondani, S.; Zanatta, N.; Rosa, Adriano; Martins, M. A. P. Tetrahedron

Lett. 2002, 43, 8701.

47. Bonacorso, H. G.; Drekener, R. L.; Rodríguez, I. R.; Vezzosi, R. P.; Costa, M. B.;

Martins, M. A. P., Zanatta, N. J. Fluorine Chem. 2005, 126, 1384.

48. (a)Bonacorso, H. G.; Costa, M. B.; Moura, S.; Pizzuti, L.; Martins, M. A. P.; Zanatta, N.;

Flores. A. F. C. J. Fluorine Chem. 2005, 126, 1396. (b) Bonacorso, H. G.; Cechinel, C. A.;

Costa, M. B.; Oliveira, M. R.; Martins, M. A. P.; Zanatta, N.; Flores. A. F. C. J. Heterocycl.

Chem. 2005, 42, 1055.

49. (a) Martins, M. A. P.; Cunico, W.; Pereira, C.M.P.; Sinhorin, A.P.; Flores, A. F. C.;

Bonacorso, H. G.; Zanatta, N. Curr. Org. Synth. 2004, 1, 391. (b) Druzhinin, S.V.;

Balenkova, E.S.; Nenajdenko, V.G. Tetrahedron, 2007, 63, 7753.

50. Colla, A.; martins, M.A.P.; Clar, G.; Krimmer, S.; Fischer, P. Synthesis, 1991,483

51. Martins, M.A.P., Siqueira, G. M.; Bastos, G.P.; Bonacorso, H.B.; Zanatta, N. J.

Heterocycl. Chem. 1996, 33, 1619.

52. Martins, M.A.P.; Flores, A.F.C.; Bastos, G.P.; Bonacorso, H.G.; Zanatta, N. Heterocycl.

Chem. 1999, 41, 293.

53. Martins, M.A.P.; Freitag, R.; Flores, A.F.C.; Zanatta, N. J. Heterocycl. Chem. 1996, 33,

1223.

54. Grünanger, P.; Vita-Finzi, P. in Weinssenberger and Taylor. The Chemistry of

Heterocyclic compounds, Isoxazoles, Part 1, Willey-Interscience, New York, 1991.

55. (a)Martins, M.A.P.; Flores, A.F.C.; Bastos, G.P.; Bonacorso, H.G.; Zanatta, N.; Sinhorin.

A. P. Tetrahedron Lett. 2000, 41, 293. (b) Martins, M.A.P.; Beck, P.; Cunico, W.; Pereira,

M.P.P.; Sinhorin. A. P. ; Blanco, R.F.; Peres R.; Bonacorso, H.G.; Zanatta, N. Tetrahedron

Lett. 2002, 43, 7005. (c) Martins, M. A. P.; Sinhorin. A. P.; Zimmermann, N.E.K.; Zanatta,

N.; Bonacorso, H.G.; Bastos, G. Synthesis, 2001, 13, 1959.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

56. Martins, M.A.P.; Freitag, R.; Flores, A. F. C.; Zanatta, N. Synthesis, 1995, 12, 1491.

57. Bonacorso, H.G.; Oliveira, M. R.; Wastowski, A.D.; Wentz, A.P.; Oliveira, A. B.; Hörner,

M.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P. Tetrahedron, 1999, 55, 345.

58. Braibante, M.E.F.; Clar, G.; Martins, M.A.P. J. Heterocycl. Chem. 1993, 30, 1159.

59. Gerus, I. I.; Gorbunova, M. G.; Vdovenko, S. I.; Vagupolskii, Y. I.; Kukhour, V. P. Zh.

Organicheskoi Khimii, 1990, 26, 1877. (versão em inglês 1991, 1623).

60. Martins. M.A.P.; Freitag, R.A.; Rosa, A.; Flores, A.F.C.; Zanatta, N.; Bonacorso, H.G. J.

Heterocycl. Chem. 1999, 36, 217.

61. (a) Flores, A.F.C.; Martins, M.A.P.; Rosa, A.; Flores, D.C.; Zanatta, N.; Bonacorso, H. G.

J. Synth. Commun. 2002, 32, 1585. (b) Martins, M.A.P.; Pereira, M.P.P.; Beck, P.; Machado,

P.; Moura, S.; Teixeira, M.V.M.; Bonacorso, H.G.; Zanatta, N. Tetrahedron Lett. 2003, 44,

6669. (c) Bonacorso, H.G. ; Lang, E.S.; Lewandowski, H.; Martins, M.A.P.; Peppe, C.;

Zanatta, N. Inorg. Chem. Commun. 2003, 6, 646.

62. (a) Bonacorso, H.G.; Oliveira, M.R.; Costa, M.B.; Silva, L.B.; Zanatta, N.; Martins,

M.A.P.; Flores, A.F.C. J. Braz. Chem. Soc. 2005, 16, 868. (b) Bonacorso, H.G. ; Oliveira,

M.R.; Costa, M.B.; Silva, L.B.; Wastowski, A.D.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P. J.

Heterocycl. Chem. 2005, 42, 631.

63. Martins, M.A.P.; Beck, P.; Machado, P.; Brondani, S.; Moura, S.; Zanatta, N.;

Bonacorso, H.G.; .; Flores, A.F.C. J. Braz. Chem. Soc. 2006, 17, 408.

64. (a) Bonacorso, H.G. ; Oliveira, M.R.; Costa, M.B.; Drekener, R.L.; Silva, L.B.; Zanatta,

N.; Martins, M.A.P. Heteroatom Chem. 2006, 17, 685. (b) Bonacorso, H.G. ; Wentz, A.P.;

Lourega, R.V.; Cechinel, C.A.; Moraes, T.S.; Coelho, H.S.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P.;

Höerner, M.; Alves, S.H. J. Fluorine Chem. 2006, 127, 1066.

65. Zanatta, N.; Pachoski, I, L.; Faoro, D.; Bonacorso, H.G.; Martins, M.A.P. Synth. Commun.

1991, 31, 8, 355.

66. Zanatta, N.; Madruga, C.C.; Clereci, E.; Martins, M.A.P. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32,

735. (b) Zanatta, N.; Cortelini, M.F.M.; Carpes, M.J.S.; Bonacorso, H.G.; Martins, M.A.P. J.

Heterocycl. Chem. 1997, 34, 509.

67. (a) Zanatta, N.; Madruga, C.C.; Marisco, P.C.; Flores, D.C.; Bonacorso, H.G.; Martins,

M.A.P. J. Heterocycl. Chem. 2000, 37, 1213. (b) Zanatta, N.; Pacholski, I.L.; Faoro, D.;

Bonacorso, H.G.; Martins, M.A.P. J. Synth. Commun. 2001, 31, 2855. (c) Bonacorso, H. G. ;

Wentz, A. P. ; Zanatta, N. ; Martins, M. A. P. Synthesis, 2001, 10, 1505.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

68. Zanatta, N.; Flores, D.C.; Madruga, C.C.; Flores, A.F.C.; Bonacorso, H. G.; Martins,

M.A.P. Tetrahedron Lett. 2006, 47, 573.

69. (a) Pascholski, I.L.; Blanco, I.S.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P. J. Braz. Chem. Soc. 1991,

2, 118. (b) Bonacorso, H. G.; Lourega, R. V.; Wastowski, A. D. ; Flores, A. F. C. ; Zanatta, N.

; Martins, M. A. P. Tetrahedron Lett. 2002, 43, 9315. (c) Bonacorso, H. G. ; Lopes, I.S.;

Wastowski, A.D.; Zanatta, N.; Martins, M. A. P. J. Fluorine Chem. 2003, 120, 29. (d)

Bonacorso, H. G. ; Costa, M.B.; Lopes, I.S.; Oliveira, M.R.; Drekener, R.L.; Martins, M.A.P.;

Zanatta, N.; Flores, A.F.C. Synth. Commun. 2005, 35, 3055.

70. Fagundes, M. B.; Ellenshon, R.;Marques, M.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P. J. Heterocycl.

Chem. 1998, 35, 451.

71. Zanatta, N.; Barichello, R.; Bonacorso, H.G.; Martins, M.A.P. Synthesis, 1999, 765.

72. Bonacorso, H.G.; Bittencourt, S.T.; Wastowski, A.D.; Wentz, A.P.; Zanatta, N.; Martins,

M.A.P. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 9155.

73.(a) Bonacorso, H.G.; Bittencourt, S.T.; Wastowski, A.D.; Wentz, A.P.; Zanatta, N.;

Martins, M.A.P. J. Heterocycl. Chem. 1999, 36, 45. (b) Bonacorso, H.G.; Marques, L.M.L.;

Zanatta, N.; Martins, M.A.P. Synth. Commun. 2002, 32, 3225.

74. a) Singh, S. P.; Kumar, D.; Jones, B. G.; Threadgill J. Fluorine Chem. 1999, 94, 199. b)

Karp, G. M.; Samant, D.; Mukhopadhyay, S.; Condon, M. E.; Kleemann, A. Synthesis, 2000,

8, 1078. c) Sloop, J. C.; Bumgardner, C. L.; Loehle, W. D. J. Fluorine Chem. 2002, 118, 135.

d) Bravo, P.; Diliddo, D.; Resnati, G. Tetrahedron, 1994, 50 (29), 8827. e) Burgart, Y. V.;

Fokin, A. S.; Kuzueva, O. G.; Chupakhin, O. N.; Saloutin, V. I. J. Fluorine Chem. 1998, 92,

101. f) Bumgardner, C. L.; Sloop, J. C. J. Fluorine Chem. 1992, 56, 141. g) Foces-Foces, C.;

Trofimenko, S.; López, C.; Santa María, M. D.; Claramunt, R. M.; Elguero, J. J. Mol.

Structure 2000, 526, 59. h) Denisova, A. B.; Sosnovskikh, V. Y.; Dehaen, W.; Toppet, S.;

Van Meervelt, L.; Bakulev, V. A. J. Fluorine Chem. 2002, 115, 183. i) Röschenthaler, G.V.;

Sevenard, D. V.; Khomutov, O. G.; Kodess, M. I.; Pashkevich, K. I.; Loop, I.; Lork, E.; Can.

J. Chem. 2001, 79, 183. j) Elguero, J.; Yranzo, G. I. J. Chem. Res. Synop. 1990, 120.

75. Zefirov, N. S.; Kozhushkov, S. I.; Kuznetsova, T. S.; Ershov, B. A.; Selivanov, S. I.

Tetrahedron, 1986, 42, 709

76. Singh, S. P.; Kumar, D.; Batra, H.; Naithani, R.; Rozas, I.; Elguero J.; Can. J. Chem.

2000, 78, 1109.

77. Threadgill, M. D.; Sing, S. P.; Kapoor, J. K.; Kumar, D. J. Fluorine Chem. 1997, 83, 73.

78. Threadgill,M.D.; Herr, A.K.; Jones, B.G. J. Fluorine Chem. 1993, 65, 21.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

79. Pashkevic, K.I.; Khomutov, O.G.; Sevenard, D. V.; Russ. J. Org. Chem. 2000, 36, 1144.

80.Bonacorso,H.G.;Lewandwski, H.; Drekener, R.L.; Costa, M..B.; Pereira, C.P.P.;

Wastowski, A.D.; Peppe, C.; Martins,M.A.P.; zanatta, N. J. Fluorine chem. 2003, 122, 159

81. Machado, P.; Rosa, F.A.; Rossato, M.; Sant’Anna, G.; Sauzem, P.D.; Silva, M.S.; Rubin,

M.A.; Ferreira, J.; Bonacorso, H.G.; Zanatta, N.; Martins, M.A.P AKIVOC, 2007,(XVi), 281.

82. Liliane Medianeira Favero Porte, Dissertação de Mestrado, UFSM, 2008, resultados não

publicados.

83. Gisele Rocha Paim, Dissertação de Mestrado, 2008, resultados não publicados.

84. Jawetz, E.; Melnick, J.L.; Aldeberg, E.A. Microbiologia Médica, 10 ed., Guanabara

Koogon, Rio de Janeiro, 1974, 190.

85. Souza, M.V.N.; Vasconcelos, T. R.A.; Quím. Nova, 2005, 28, 4, 678.

86. Murray, P.; Rosenthal. K.; Kobayashi, G.; Pfaller, M. Microbiologia médica, 4 ed.,

Guanabara Koogon, Rio de Janeiro, 2004, 345.

87. Watanabe, K; Fujimura, M; Kashara, K; Yasui, M; Myou, S; Watanabe, A; Nakao, S.

Respiratory Medicine, 2003, 43, 654.

88. Merck. The Manual – second Home Edition. Infection tuberculosis. Disponível em :<

http://www.merck.com/mmhe/sec17/ch193a.html >Acessado em:21/06/2008.

89. Fox, H.H.; Gibas, J.T.; Jornaul of Organic Chemistry, 1952, 20, 1952.

90. Cardoso, F.R.; Cooksey, R.C.; Morlock, G.P.; Barco, P.; Cecon, l.; Forestiero, F.; Leite,

C.Q.F.; Sato, D.; Shikama, M.L.; Mamizuka, E.; Kirota, R.; Kirota, M. Antimicrob. Agents

and Chemother. 2004, 48, 9, 3378.

91. Cunha, F.A.; Frota, C.C. Revista Brasileira de Analises Clinicas, 2005, 37, 3, 157.

92.a)Cynamom, N.H.; Gimi, R.; Gyenes, F.; Sharpe, C.A.; Bergman, K.E.; Han, H.J.;

Gregor,L.B.; Rapow, R.; Luciano, G.; Welch, J.T. Journal of Medicinal Chemistry, 1995, 38,

3902. b) Cynamom, M.H.; Klemes, S.P.; Journal of Medicinal Chemistry, 1992, 35, 1221.

93. Sreevatsan, S.; Stockbauer, K.; Pan, X.; Kreiswirth, B.N.; Moghazeh, S. L.; Jacobs

R.W.JR.; Telenti, A.; Musser J. Antimicrob. Agentes and Chemother., 1997, 41, 8, 1677.

94.a)Mamolo, G.M.; Zampieri, D.; Falagiani, V.; Vio, L.; Banfi, E. Il Farmaco, 2002, 56,

593. b) Srivastava, Y. K.; Sukhwal, S.; Ashawa, A.; Verma, B. L. J. Indian Chem. Soc. 1997,

74, 573

95. Sinha, N.; Jain, S.; Tilekar, A.; Upadhayaya, R.S.; Kishore, N.; Sinha, R.K.; Arora S.K.

ARKIVOC, 2005,(ii) 9.

6. BIBLIOGRAFIA

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

96. Khan, K. M.; Rasheed, M.; Ullah.-Z.; Hayat, S.; Kaukab, F.; Stewart, J.J.P. J. Am Chem.

Soc.. 1990, 107, 3902.

97. Adger, B. M; Bannister, R; Lewis, N. J; and O´Farrell, C. J. Chem. Soc. Perkin. Trans I,

1988, 2785.

98.Perrin, D.D.; Armarego, L.F. Purification of Laboratory Chemicals, 2

Edition, Pergamon

Press, São Paulo, SP.1980.

99. Takao, E. K. H.; Nocchi S. R.; Siqueira, V. L. D.; Cardoso, M. A.; Perón, M. L. D.;

Callefi, K. R.; Cardoso, R. F. Acta Sci. Health Sci .2005, 27, 2, 183.

100. Palomino, J. C.; Martin, A.; Camacho, M.; Guerra, H.; Swings, J.; Portaels, F.

Antimicrob. Agents and Chemother. 2002, 46, 8, 2720.

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

7. ANEXO I

Espectros de RMN de

H e

H} dos compostos obtidos e citados na dissertação

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 23: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz de metil 2-cloro isonicotinoato (5), em

clorofórmio-d

Figura 24: Espectro de RMN

C {

H} a 100,61 MHz de metil 2-cloro isonicotinoato (5), em

DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 25: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 2-cloro

isonicotinoilhidrazida (6), em DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 26: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d), em DMSO-

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 27: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7e), em

DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 28: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-flúorfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7f), em DMSO-

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 29: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7g), em DMSO-

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 30: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8a), em clorofórmio- d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 31: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(fenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol(8c), em DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 32: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol(8d), em DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 33: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-bromofenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol(8e),em DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 34: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-hidroxi-

3-(4-flúorfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol(8f),em DMSO-d

7. ANEXO I

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 35: Espectro de RMN

H a 200,13 MHz e RMN

C {

H} a 100,61 MHz de 5-

hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol(8g), em DMSO-

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

8. ANEXO II

Espectros de MASSAS dos compostos obtidos e citados na dissertação

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 36: Espectro de Massas de metil 2-cloro isonicotinoato (5).

Figura 37: Espectro de Massas de 2-cloroisonicotinoilhidrazina (6).

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 38: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-clorofenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7d).

Figura 39: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7e).

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 40: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-flúorfenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7f).

Figura 41: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(2-cloroisonicotinoil)pirazol (7g).

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 42: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-

(nicotinoil)pirazol (8a).

Figura 43: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(fenil)-5-trifluormetil-4,5-

diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8c).

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 44: Espectro de massas de 5-hidroxi-3-(4-clorofenil-5-trifluormetil-4,5-diidro-

1H-1-(nicotinoil)pirazol (8d).

Figura 45: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-bromofenil)-5-

trifluormetil-4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8e).

8. ANEXO II

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

Figura 46: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8f).

Figura 47: Espectro de Massas do composto 5-hidroxi-3-(4-metilfenil)-5-trifluormetil-

4,5-diidro-1H-1-(nicotinoil)pirazol (8g).

9. ANEXO III

Dissertação de Mestrado - Jussara Navarini-UFSM-2008

9. ANEXO III

Artigo publicado

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