( PDF ) Constituintes químicos das cascas das raízes de Tabernaemontana hystrix (apocynaceae)

CONSTITUINTES QUÍMICOS DAS CASCAS DAS RAÍZES DE

Tabernaemontana hystrix (APOCYNACEAE)

JUCIMAR JORGEANE DE SOUZA

UNIVERSIDADE ESTADULA DO NORTE FLUMINENSE

DARCY RIBEIRO – UENF

AGOSTO/2006

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CONSTITUINTES QUÍMICOS DAS CASCAS DAS RAÍZES DE

Tabernaemontana hystrix (APOCYNACEAE)

JUCIMAR JORGEANE DE SOUZA

“Dissertação apresentada ao Centro de Ciências e

Tecnologia da Universidade Estadual do Norte

Fluminense Darcy Ribeiro, como parte das

exigências para obtenção do título de Mestre em

Ciências Naturais”.

Aprovada em 17 de agosto de 2006.

Comissão Examinadora:

____________________________________________________________

Prof

o

Walter Luiz Brasil Medeiros (D. Sc.Química Orgânica) – CEFET-Campos

____________________________________________________________

Prof

o

Carlos Roberto Ribeiro Matos

(D. Sc., Química Orgânica) – UENF

____________________________________________________________

Prof

o

Edmilson josé Maria

(D. Sc., Química Orgânica) – UENF

____________________________________________________________

Prof

o

Ivo José Curcino Vieira (D. Sc., Química Orgânica) – UENF

(Orientador)

Entrega o teu caminho ao Senhor, confia Nele, e Ele tudo fará.

(Salmos, 22:1)

Dedico este trabalho aos meus pais, Lúcia Maria e Antônio Jorge,

aos meus irmãos, Patrícia (in memórian), Marcio e Marcelo

e aos meus sobrinhos.

AGRADECIMENTOS

Primeiramente a Deus, por tudo que conquistei e tenho conquistado.

A minha querida mãe, pelo amor, carinho e incentivo de não desistir nunca de

conquistar meus objetivos. Obrigada por acreditar em mim.

A minha madrinha, Maria José, por me ajudar e apoiar sempre.

A toda minha família pelo carinho e incentivo aos estudos.

As amigas Cássia, Renata, Tânia e Maristela que nas horas de desespero e tristeza

me socorreram e me apoiaram, ensinando-me o que é ser amigo.

A amiga Lara

As companheiras e amigas da República Blush: Érica, Lidiane, Patrícia e Priscilla

por estarem sempre me apoiando e me aturando, até nos momentos de mau-humor.

Acima de tudo nos tornamos uma família.

As companheiras e amigas da república do Caju: Isabela (TAnto!), Luana e Rita por

estarem sempre do meu lado e me apoiando em tudo.

Aos amigos da UENF: Débora, Marcelo e Vinicius, pelo companheirismo, pelos

estudos em grupo e pelo apoio.

As companheiras de laboratório: Cecília, Elaine, Raquel e Vilma.

Ao professor Ivo José Curcino Vieira pela orientação e ensinamento durante este

trabalho.

Aos professores do LCQUI, em especial a professora Leda Mathias e os

professores Carlos Matos e Raimundo Braz-Filho.

A todos,

obrigada por tudo.

FICHA CATALOGRÁFICA

Preparada pela Biblioteca do CCT / UENF 35/2006

Souza, Jucimar Jorgeane de

Constituintes químicos das cascas das raízes de Tabernaemontana

hystrix (Apocynaceae) / Jucimar Jorgeane de Souza. – Campos dos

Goytacazes, 2006.

2v. : il.

Dissertação (Mestrado em Ciências Naturais) --Universidade

Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. Centro de Ciência

e Tecnologia. Laboratório de Ciências Químicas. Campos dos

Goytacazes, 2006.

Orientador: Ivo José Curcino Vieira.

Área de concentração: Química de produtos naturais

Bibliografia: V. 1, f. 92-96

1. Alcalóides indólicos 2. Tabernaemontana 3. Apocynaceae l.

Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro.

Centro de Ciência e Tecnologia. Laboratório de Ciências

SUMÁRIO

Lista de Figuras

iii

Lista de Fluxogramas iii

Lista de Tabelas iv

Lista de Esquemas vi

Lista de Abreviaturas vii

Resumo ix

Abstract x

1. INTRODUÇÃO 1

2. OBJETIVOS 5

3. REVISÃO DE LITERATURA 6

3.1 – A Família Apocynaceae 6

3.2 – Alcalóides 7

3.3 – Taxonomia 11

3.4 – O Gênero Tabernaemontana

12

3.5 – A Espécie Tabernaemontana hystrix

13

3.6 – Considerações Farmacológicas 14

3.7 – Estudos Fitoquímicos 16

4. MATERIAIS E METODOLOGIA

19

4.1 – Materiais 19

4.1.1 – Reagentes e Solventes

19

4.1.2 – Equipamentos

19

4.2 – Metodologia 20

4.2.1 – Coleta do material vegetal e identificação botânica 20

4.2.2 – Secagem e moagem 20

4.2.3 – Isolamento e purificação das substâncias orgânicas por técnicas

cromatográficas

20

4.2.4 – Análises espectrométricas 21

4.2.5 – Análises de espectrometria de massas 21

4.2.6 – Preparação dos extratos brutos 21

4.2.7 – Descrição experimental do isolamento dos constituintes químicos iolados

23

4.2.7.1 – Resumo dos constituintes químicos isolados do extrato em diclorometano

23

4.2.7.2 – Análises das frações obtidas do extrato em diclorometano das cascas das

das raízes de Tabernaemontana hystrix

26

5. RESULTADOS E DISCUSSÕES 39

5.1 – Substâncias Identificadas de Tabernaemontana hystrix

39

5.1.1 – Esteróides isolados 39

5.1.2 – Alcalóides isolados

39

5.1.3 – Alcalóides inéditos isolados

41

5.2 – Determinação Estrutural 41

5.2.1 – Esteróides 41

5.2.2 – Alcalóides Indólicos Monoterpênicos 44

6. CONCLUSÃO 91

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

92

LISTA DE FIGURAS

Figura 01: Esquema de formação da Estrictosidina

Figura 02: Rearranjos na cadeia terpenoídica do esqueleto alcaloídico

Figura 03: Esquema biossintético da coronaridina

Figura 04: Esqueletos básicos dos alcalóides indólicos monoterpênicos

Figura 05: Fotografia da espécie Tabernaemontana hystrix (galhos em floração)

Figura 06: Estrutura da vimblastina, vincristina, colchicina, reserpina e vincamina

Figura 07: Alcalóides indólicos isolados da Tabernaemontana crassa

Figura 08: Alcalóides indólicos isolados de Peschiera fuchsiaefolia

Figura 09: Alcalóides indólicos monoterpênicos isolados de Tabernaemontana hystrix

LISTA DE FLUXOGRAMAS

Fluxograma 01: Estudo cromatográfico do extrato em diclorometano

Fluxograma 02: Estudo cromatográfico da fração BD5

Fluxograma 03: Estudo cromatográfico da fração BD8

LISTA DE TABELAS

Tabela 01: Quantidade de material vegetal colhido e suas respectivas extrações

Tabela 02: Estudo cromatográfico do extrato de diclorometano

Tabela 03: Estudo cromatográfico da fração BD4

Tabela 04: Estudo cromatográfico da fração BD4-5

Tabela 05: Estudo cromatográfico da fração BD5

Tabela 06: Estudo cromatográfico da fração BD5-1

Tabela 07: Estudo cromatográfico da fração BD5-4

Tabela 08: Estudo cromatográfico da fração BD5-5

Tabela 09: Estudo cromatográfico da fração BD5-8

Tabela 10: Estudo cromatográfico da fração BD7

Tabela 11: Estudo cromatográfico da fração BD7-3

Tabela 12: Estudo cromatográfico da fração BD7-3-4

Tabela 13: Estudo cromatográfico da fração BD7-3-4-4

Tabela 14: Estudo cromatográfico da fração BD8

Tabela 15: Estudo cromatográfico da fração BD-8-2

Tabela 16: Estudo cromatográfico da fração BD8-2-2

Tabela 17: Estudo cromatográfico da fração BD8-2-2-3

Tabela 18: Estudo cromatográfico da fração BD8-3

Tabela 19: Estudo cromatográfico da fração BD8-3-5

Tabela 20: Estudo cromatográfico da fração BD10

Tabela 21: Dados de RMN

13

C (100 MHz) dos esteróides 44 e 45

Tabela 22: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) do alcalóide 17

Tabela 23: Constantes de acoplamento observadas no mapa de correlação de

HMBC do alcalóide coronaridina (17)

Tabela 24: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) do alcalóide 43

Tabela 25: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) do alcalóide 46

Tabela 26: Dados de

1

H-

1

H NOESY (500 MHz) do alcalóide 46

Tabela 27: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) do alcalóide 48

Tabela 28: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e RMN

13

C (100 MHz) do alcalóide 48

Tabela 29: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) do alcalóide 47

Tabela 30: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) do alcalóide 21

Tabela 31: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) do alcalóide 49

Tabela 32: Dados de

1

H-

1

H NOESY (500 MHz) em CDCl

3

do alcalóide 49

Tabela 33: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) do alcalóide 16

Tabela 34. Dados de RMN

1

H (500 MHz) e

13

C (125 MHz) do alcalóide 41

Tabela 35: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) do alcalóide 50

LISTA DE ESQUEMAS

Esquema 01: Proposta mecanística dos principais fragmentos apresentados no

espectro de massas do alcalóide 17.

50

Esquema 02: Proposta dos principais fragmentos apresentados no espectro de

massas do alcalóide 21

70

Esquema 03: Proposta mecanística dos principais fragmentos apresentados no

espectro de massas do alcalóide 49.

76

Esquema 04: Proposta mecanística dos principais fragmentos apresentados no

espectro de massas do alcalóide 16

81

Esquema 05: Proposta mecanística dos principais fragmentos apresentados no

espectro de massas do alcalóide 50

90

LISTA DE ABREVIATURAS

δ - deslocamento químico

AcOEt – acetato de etila

APT – “Attached Proton Test”

CC – cromatografia em coluna

CCDP – cromatografia em camada delgada preparativa

CDCl

3

– clorofórmio deuterado

CG/EM – cromatografia de gás acoplado a espectrometria de massas

CH

2

Cl

2

– diclorometano

COSY – “Correlation Spectroscopy”

d – dupleto

dd – duplo dupleto

ddd – duplo, duplo dupleto

dl – dupleto largo

dt – duplo tripleto

ev - eletrovolts

Glu – glucose

Hex – hexano

HMBC –“Heteronuclear Multiple-Bond Connectivity”

HMQC – “Heteronuclear Multiple-Quantum Coherence”

Hz – Hertz

IV – infravermelho

J – constante de acoplamento

m – multipleto

m/z – relação massa/carga

MeOH – metanol

MeOH-d

4

– metanol deuterado

MHz – Megahertz

ppm – parte por milhão

q – quadrupleto

ql – quadrupleto largo

RMN

13

C – Ressonância Magnética Nuclear de carbono-13

RMN

1

H – Ressonância Magnética Nuclear de hidrogênio

s – singleto

sl – singleto largo

SNC – Sistema Nervoso Central

t – tripleto

tl – tripleto largo

TMS – tetrametilsilano

u.m.a. – unidade de massa atômica

UV – ultravioleta

v/v – volume por volume

RESUMO

SOUZA, Jucimar Jorgeane de; Universidade Estadual do Norte Fluminense

Darcy Ribeiro, agosto de 2006; Alcalóides indólicos de Tabernaemontana hystrix; Prof.

Orientador: Ivo José Curcino Vieira.

A química do gênero Tabernaemontana é conhecida pela bioprodução de

alcalóides indólicos, incluindo monoterpênicos, os quais apresentam diversas

atividades biológicas, atuando no tratamento de tumores, arritmias cardíacas e

antidepressivo. O isolamento das substâncias foi efetuado utilizando-se técnicas

clássicas de cromatografia. Do extrato em diclorometano foram isolados dois

esteróides: β-sitosterol (44) e estigmasterol (45) e 10 alcalóides indólicos

monoterpênicos: coronaridina (17), 7-hidroxiindoleninacoronaridina (43), 5-

oxocoronaridina (46), 7-hidroxiindolenina-3-oxocoronaridina (47), 3-oxocoronaridina

(48), vobasina (21), 5,6-dioxocoronaridina (49), ibogamina (16), olivacina (41) e 12-

metoxivoachalotina (50). Os alcalóides 49 e 50 são inéditos na literatura. A

determinação estrutural dessas substâncias foi efetuada com base em dados

espectroscópicos de RMN

1

H e

13

C, incluindo experimentos bidimensionais (HMQC e

HMBC) e a partir de informações obtidas dos espectros de massas e absorção na

região do IV e UV.

ABSTRACT

SOUZA, Jucimar Jorgeane de; Universidade Estadual do Norte Fluminense

Darcy Ribeiro, agosto de 2006; Alcalóides indólicos de Tabernaemontana hystrix; Prof.

Orientador: Ivo José Curcino Vieira.

The Tabernaemontana genus chemistry is known by its indole alkaloid

bioproduction, including monoterpenoids, which present several biological activities

acting in tumor, heart arrhythmia and antidepressant treatments. It was collected in

Varre-Sai city, Rio de Janeiro State. The compounds isolation were carried out using

classical chromatography techniques. From dichloromethane extract, two steroids were

isolated, sitosterol (44) and stigmasterol (45) and ten monoterpenoid indole alkaloids,

coronaridine (17), 7-hydroxyindoleninecoronaridine (43), 5-oxocoronaridine (46), 7-

hydroxyindolenine-3-oxocoronaridine (47), 3-oxocoronaridine (48), vobasine (21), 5,6-

dioxocoronaridine (49), ibogamine (16), olivacine (41) e 12-methoxyvoachalotine (50).

The alkaloids 49 and 50 are unpublish up to now. These structural compounds

determinations were carried out basead on spectral data of NMR

1

H and

13

C, including

bidimensional experiments (HMQC and HMBC) and on information obtained from mass

spectral and absorption in IR and UV data.

1. INTRODUÇÃO

A maioria das substâncias orgânicas conhecidas tem sido produzida pela

natureza, onde o reino vegetal destaca-se com a bioprodução de substâncias úteis ao

tratamento de doenças em seres humanos. Com o surgimento das plantas terrestres,

estima-se que cerca de 500.000 espécies ocupam todo o planeta, onde 50% são

constituídas pelas Angiospermas (MONTANARI & BOLZANI, 2001).

Centenas de espécies vegetais foram estudadas através da investigação da

composição química das substâncias produzidas pelo seu metabolismo secundário, e

mais de 100.000 substâncias naturais tiveram suas estruturas elucidadas. Estes

importantes acervos científicos, resultantes de atividades de pesquisa desenvolvidas

em instituições e empresas nacionais e estrangeiras, representam uma pequena

percentagem do conhecimento sobre a química adotada pelos vegetais, quando

avaliado em comparação com o número de espécies existentes na superfície terrestre

e nos meios aquáticos (CHADWICK & MARSH, 1990; BUCKINGHMAN, 1993).

Todos os processos químicos da vida (nascimento, crescimento, reprodução,

envelhecimento e morte) representam manifestações de biotransformações químicas.

Os constituintes químicos bioproduzidos pelo metabolismo secundário de organismos

vivos têm despertado interesse de instituições públicas e empresas privadas,

principalmente as indústrias farmacêuticas, instaladas nos países desenvolvidos.

Intensifica-se a procura de fontes de novos medicamentos para utilização direta bem

como de matéria prima adequada para preparação semi-sintética de produtos úteis, e

de novos modelos para síntese total de produtos com atividade biológica (BALADRIN &

KINGHOM, 1993).

O desenvolvimento tecnológico tem contribuído decisivamente para este

progresso, proporcionando a fabricação de equipamentos capazes de viabilizar a

descoberta de moléculas encontradas em pequenas concentrações, que antes

permaneceram praticamente desconhecidas, devido a limitações de técnicas e

metodologias usadas (COLETAGE & MOLYNEUX, 1993).

Nas últimas três décadas, com o desenvolvimento de técnicas analíticas de

separação e elucidação estrutural, pôde-se conhecer cerca de 50.000 metabólitos

secundários isolados de Angiospermas, onde muitos não tiveram avaliação do seu

potencial farmacológico. Com isto, os produtos naturais e seus derivados continuam

sendo de grande importância para a sociedade moderna, mesmo com os produtos

produzidos por síntese (MONTANARI & BOLZANI, 2001).

Com o avanço tecnológico na última década, as pesquisas de novos compostos

biologicamente ativos sofreram grandes mudanças. Para propiciar o surgimento de

novos medicamentos, a indústria farmacêutica teve um papel importante no

desenvolvimento de novos métodos (TREVISAN & MACEDO, 2003).

O interesse da indústria farmacêutica pelos produtos de origem vegetal

reacendeu devido aos fitofármacos como ginkgo, ginseng, etc, que se tornaram

detentores de um mercado lucrativo (MONTANARI & BOLZANI, 2001).

Esse interesse foi motivado pela descoberta de quimioterápicos eficazes e

principalmente pela busca de substâncias com estruturas moleculares complexas,

praticamente impossíveis de serem obtidas por um processo sintético de baixo custo

(MONTANARI & BOLZANI, 2001).

Apesar de saber que a pesquisa de novos fármacos é um mercado de alto risco,

a indústria farmacêutica tem aplicado investimentos em pesquisa de bioprospecção

(MONTANARI & BOLZANI, 2001).

Estimou-se, em torno de 1990, que cerca de 80% da população mundial tinha as

plantas como sua principal fonte de medicamentos. Está comprovado que,

principalmente, a população de países em desenvolvimento usa os medicamentos

providos de plantas, em forma de extratos ou poções (MONTANARI & BOLZANI,

2001).

O isolamento e a identificação de novas moléculas bioproduzidas pelo

metabolismo secundário e a avaliação biológica das substâncias tem proporcionado a

descoberta de produtos naturais bioativos (DEWICK, 1997).

A descoberta de substâncias abundantes merece também atenção especial,

mesmo nos casos de produtos já descritos na literatura. Modificações estruturais

seletivas de produtos abundantes através de reações químicas podem conduzir a

substâncias biologicamente ativas e com outras propriedades práticas (DIXON &

LAMB, 1990).

No desenvolvimento da química orgânica sintética moderna, os metabólitos

secundários tiveram um papel fundamental. Este desenvolvimento ocorreu

paralelamente ao estudo de plantas, a partir do século XIX, onde, com base científica,

foram registrados os primeiros estudos sobre as plantas, já então conhecidas como

medicinais. Com esses estudos foram obtidas algumas substâncias que se

consagraram como princípios ativos eficazes que até hoje são usados no tratamento de

determinadas doenças (MONTANARI & BOLZANI, 2001).

O isolamento e a determinação estrutural de substâncias biorgânicas advindas

do metabolismo secundário de organismos vivos assumem também importância

fundamental para o desenvolvimento de outras atividades científicas e tecnológicas.

Na área de produtos naturais, uma das mais significantes mudanças, nos

últimos anos, foi à avaliação biológica. O entendimento dos mecanismos de doenças,

acompanhado do aumento de testes com receptores e enzimas disponíveis, permitiram

o desenvolvimento de sistemas eficientes e rápidos de bioensaios, selecionando

milhares de amostras em poucos dias (TREVISAN & MACEDO, 2003).

O conhecimento da composição química de espécies vegetais também tem

papel fundamental no progresso de ciências correlatas, tais como a fisiologia,

sistemática química, evolução química e ecologia química. Além disso, contribui para a

implantação e o fortalecimento da interface entre a pesquisa básica e aplicada,

permitindo a manipulação de rotas biogenéticas e a produção controlada de

metabólitos secundários selecionados com base em critérios práticos, científicos e

tecnológicos (biotecnologia) (CHADWICK & MARSH, 1990).

O isolamento e a elucidação estrutural de substâncias naturais representam a

etapa inicial importante e decisiva para a descoberta de compostos bioativos,

permitindo posteriormente o desenvolvimento de trabalhos sintéticos e tecnológicos

para a produção de substâncias a nível comercial (TORSSEL, 1997; GEISSMAN &

CROUT, 1969).

A busca pelo aprimoramento das estratégias de identificação, aplicação e

bioprodução de metabólitos secundários estimulou o aparecimento de atividades

transdisciplinares, envolvendo pesquisadores na área de Química de Produtos Naturais

(Fitoquímica), Genética, Farmacologia e Biologia, promovendo pesquisas nos campos

da sistemática química, evolução química, ecologia química, atividade biológica,

biossíntese e mais recentemente, a biotecnologia.

No Brasil, a maioria das pesquisas com plantas ainda são feitas pelas

Universidades e Institutos de Pesquisa, onde se desenvolve basicamente a fitoquímica

tradicional. Apesar de muitos grupos nacionais já estarem envolvidos com a busca de

princípios bioativos das plantas, essa pesquisa é fundamentalmente acadêmica

(MONTANARI & BOLZANI, 2001).

Apesar da flora brasileira ser uma das principais fontes de recursos naturais, os

estudos sobre a química de compostos secundários das espécies que a compõem

ainda são insuficientes. A preocupação com a manutenção da biodiversidade no

planeta levou, nos últimos anos, as autoridades governamentais a voltar a sua atenção

para a manutenção dos refúgios naturais que se encontram ameaçados.

Em decorrência da ação antrópica uma atenção especial tem sido destinada às

áreas naturais em perigo de extinção. Entre elas a Mata Atlântica, reconhecida no

cenário mundial como uma das principais fontes de diversidade genética a ser

protegida, onde os recursos devem ser investigados, tendo como meta o equilíbrio

entre a proteção à natureza e o desenvolvimento. A maior parte do estado do Rio de

Janeiro é recoberta por este ecossistema, onde a vegetação remanescente é alvo de

investigações em diferentes áreas da ciência.

Na região Norte e Noroeste Fluminense a vegetação da Mata Atlântica possui

um dos principais refúgios de vida silvestre, abrigando espécies vegetais e animais em

extinção. O conhecimento prévio de organismos e seu habitat é importante para

adequação de métodos a serem utilizados em programas de manejo ecológico e de

melhoramento.

A flora regional apresenta uma fonte de informações para a ciência e de

recursos naturais de importância para a humanidade. Com isso, os estudos sobre a

química de metabólitos secundários para a sua exploração racional constituem

elemento importante para a geração de conhecimento.

A família Apocynaceae está entre as maiores famílias de Angiospermas e está

bem representada na flora brasileira. E por fornecer alcalóides com utilização na

medicina tradicional, os seus gêneros têm sido, cada vez mais, alvo para fonte de

pesquisas.

No gênero Tabernaemontana, algumas espécies foram largamente estudadas

tendo, assim, sua composição química bastante definida, além da realização de

diversos testes biológicos (HESSE, 1981).

Porém, algumas espécies do gênero Tabernaemontana, principalmente as

espécies nativas da Mata Atlântica, em especial a Tabernaemontana hystrix teve sua

constituição química pouco estudada, tornando-se o principal objetivo deste trabalho.

2. OBJETIVOS

OBJETIVO GERAL

O trabalho proposto tem por objetivo isolar, identificar e caracterizar compostos

do metabolismo secundário, do extrato em diclorometano das cascas das raízes, da

espécie Tabernaemontana hystrix, família Apocynaceae, coletada na Mata Atlântica

localizada na região Norte e Noroeste Fluminense, através de métodos fitoquímicos

clássicos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Aprendizado de técnicas cromatográficas clássicas (cromatografia em coluna,

cromatografia em camada delgada preparativa e cromatografia em camada delgada

analítica) no isolamento e purificação de substâncias orgânicas produzidas pelo

metabolismo secundário de espécies vegetais.

Aprendizado de técnicas espectroscópicas (RMN

1

H e

13

C, uni e bi-

dimensionais, espectrometria de massas) na identificação de compostos produzidos

pelo metabolismo secundário de espécies vegetais.

3. REVISÃO DE LITERATURA

3.1 A Família Apocynaceae

A família Apocynaceae pertence à ordem Gentianiales, classe Dicotiledoneae,

subclasse Asteridae, divisão Angiospermae (MABBERLEY, 1997). Ela está entre as

dez maiores famílias de Angiospermas e esta representada em todos os continentes,

exceto na Antártica. A maioria das espécies ocorre na região tropical. Crescem em

vários ambientes, desde florestas úmidas até regiões semi-áridas. Ocorrem desde ao

nível do mar até altas montanhas, principalmente em solos secos, mas também sobre

rochas ou em áreas alagadas, raramente submersas na beira de rios (RAPINI, 2000).

A família Apocynaceae possui cerca de 250 a 550 gêneros, e entre 3700 a 5100

espécies. Sendo que aproximadamente um terço das espécies ocorre no Novo Mundo.

As circunscrições genéricas são muito controversas, mas em torno de 100 gêneros são

aceitos na América tropical (RAPINI, 2000).

No Brasil ocorrem cerca de 376 espécies subordinadas a 41 gêneros habitando

diversas formações (MOREIRA et al., 2004). Ela é bem representada na flora brasileira

e, particularmente, no Rio de Janeiro; segundo levantamento realizado por Novaes e

Rapoporte (1996) são encontradas cerca de 80 espécies. As Apocynaceae têm como

características marcantes a presença de látex nos órgãos vegetativos e reprodutivos, e

flores com prefloração contorta (MOREIRA et al., 2004).

A família Apocynaceae é conhecida por fornecer, principalmente, alcalóides,

alguns deles com ampla utilização na medicina tradicional (NOGUEIRA et al., 2004).

Uma espécie desta família, Hancornia speciosa (mangabeira), ocorre

abundantemente em toda região Nordeste, em especial no Estado de Sergipe. Os seus

frutos são consumidos in natura ou usados como matéria-prima para doces, geléias,

sorvetes e sucos. O suco leitoso do fruto e o látex desta espécie são usados como

medicamento caseiro para tratamento de tuberculose e úlcera (NOGUEIRA et al.,

2004).

Desde os tempos antigos, algumas espécies do gênero Tabernaemontana, têm

sido utilizadas na África, como veneno de flechas, na medicina popular e em rituais

mágico-religiosos, tais como a Tabernaemontana crassa e Tabernanthe iboga

(NEUWINGER, 1998).

Na cultura indígena, Apocynum cannabinum é utilizada como fonte de fibras

para cordas e fios utilizados em artesanato. Os ramos fortes e flexíveis de

Sarcostemma clausum são usados como vara de pescar, e de algumas espécies de

Matelea são extraídos venenos para flechas de caça (RAPINI, 2000).

Algumas espécies arbóreas, em particular de Aspidosperma (peroba) fornecem

madeira para construção civil e produção de móveis e ferramentas; os caules tabulares

são especialmente utilizados como cabo de machado. Borracha e goma de mascar são

produzidas a partir de látex de Apocynum spp. (RAPINI, 2000).

As Apocynaceae também são cultivadas como plantas ornamentais, e algumas

espécies encontram-se naturalizadas em muitas regiões, por exemplo, Nerium

oleander, com mais de 400 cultivares, dentre os quais 175 são comercializados;

Catharanthus roseus de Madagascar; Vinca major e Vinca minor, espécies

mediterrâneas; Allamanda cathartica, Plumeria rubra e Thevetia peruviana, espécies

neotropicais cultivadas em jardins e ruas de cidades tropicais; e algumas plantas

suculentas paleotropicais, como Ceropegia e Hoya (RAPINI, 2000).

3.2 Alcalóides

Os alcalóides são encontrados em mais de 4000 espécies de plantas, sendo

mais freqüentes em Dicotiledôneas do que em Monocotiledôneas e Gimnospermas.

Podem ocorrer em diferentes partes do vegetal, como raiz (Symphitum spp.), folhas

(Passiflora sp., Agerantum conyzoides e Phyllanthus spp.), casca do fruto (Punica

granatum) e em sementes (Lupinus albus). O primeiro alcalóide isolado foi à morfina,

em 1805, do ópio (Papaver somniferum) (NEUWINGER, 1998).

Em 1848, no Rio de Janeiro, o farmacêutico Ezequiel Correia dos Santos isolou

o alcalóide pereirina, das cascas do pau-pereira (Geissospermum laeve). A pereirina foi

um dos primeiros alcalóides, senão o primeiro, a ser isolado puro no Brasil (PINTO et

al., 2002).

Outros alcalóides, bastante conhecidos, incluem a nicotina, presente em

variedades de fumos (Nicotiana tabacum), cuja biossíntese se dá nas raízes da

plantas, com armazenamento nas folhas para onde é translocado; a cocaína, presente

em folhas de Erythroxylon coca; a cafeína, encontrada em sementes de café, folhas de

chá, chocolate entre outros (NEUWINGER, 1998).

A maioria dos alcalóides é derivada do metabolismo dos aminoácidos alifáticos

(ornitina e lisina) e dos aminoácidos aromáticos (fenilalanina e tirosina). O triptofano é

um aminoácido aromático que contém um sistema de anel indólico, tendo sua origem

da rota do chiquimato via ácido antranílico. Os alcalóides indólicos são formados por

rearranjos dos precursores indólicos dando origem ao anel quinolínico, e esse sim é o

precursor dos alcalóides indólicos.

Dentre as várias classes de alcalóides indólicos, os monoterpênicos apresentam

uma grande variedade estrutural. Uma característica interessante deste grupo de

alcalóides é a origem biossintética comum (Figura 01, página 9): todos eles têm o

mesmo precursor, a estrictosidina, que é um glicosídeo formado pela condensação de

uma molécula de triptamina (advinda do triptofano por uma reação de descarboxilação)

com um aldeído monoterpênico denominado secologanina (BRUNETON, 1995).

O

H

O

H

O

OH

H

CO

2

Me

H

HO

O

OGlu

N

H

CO

2

H

NH

2

+

10-Oxogeranial

Iridodial

Loganina

Secologanina

Triptofano

Triptamina

O

H

3

4

5

6

7

8

9

10

11

O

MeO

2

C

OGlu

H

N

H

NH

H

13

14

15

16

17

18

19

20

21

2

12

O

MeO

2

C

OGlu

H

Estrictosidina

N

H

NH

2

1

Figura 01: Esquema de formação da Estrictosidina

Rearranjos na parte terpenoídica da estrictosidina leva a formação de diferentes

classes, apresentados na Figura 02, página 10 (BRUNETON, 1995). Baseado na

biogênese é possível classificar estes alcalóides em diferentes classes:

Classe I – Alcalóides em que a unidade monoterpênica não sofreu rearranjos

(esqueletos corinanteano e estriquinano);

Classe II – Alcalóides com rearranjo nos carbonos C-17→ C-20 da unidade

monoterpenoídica (esqueleto aspidospermano);

Classe III – Alcalóides com rearranjo nos carbonos C-17→C-14 da unidade

monoterpenoídica (esqueleto ibogano) (Figura 03, página 11).

C-17

C-14

C-20

C-17

21

20

19

18

17

16

15

14

3

14

15

16

17

18

19

20

21

3

14

15

16

17

18

19

20

21

Corinanteano

Aspidospermatano

Ibogano

3

4

5

6

7

8

9

10

11

O

MeO

2

C

OGlu

H

N

H

NH

H

13

14

15

16

17

18

19

20

21

2

12

Estrictosidina

1

Figura 02: Rearranjos na cadeia terpenoídica

N

NH

O

OGlu

HH

H

MeO

2

C

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

Estrictosidina

20

19

18

17

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

MeO

2

C

N

OH

H

21

N

CO

2

Me

CH

2

OH

N

CH

2

OH

CO

2

Me

N

H

N

H

CO

2

Me

N

CO

2

Me

N

H

N

H

CO

2

Me

N

1

8

1

9

2

0

2

1

6

1

7

1

5

1

4

6

5

3

1

3

1

2

9

8

7

2

N

H

10

11

Coronaridina (esqueleto ibogano)

MeO

2

C

dehidrogeissoschizina (forma enólica)

Intermediário hipotético

preakuammicinaestemmadenina

Ração de Diels-Alder

Redução

Catharanthina

Rearranjo de 3 unidades de C

Figura 03: Esquema biossintético da coronaridina (esqueleto ibogano)

Estas classes são subdivididas em nove subclasses principais: vincosano (1),

valesiacotamano (2), corinanteano (3), estriquinano (4), aspidospermatano (5),

plumerano (6), eburnano (7), ibogano (8) e tacamano (9) (Figura 04), e suas

subclasses, dependendo das características de seus esqueletos. Muitas das etapas e

mecanismos que levam a formação destes esqueletos são conhecidos (DANIELI &

PALMISANO, 1986).

N

O

H

vincosano (1)

N

H

valesiacotamano (2)

N

H

Corinanteano (3)

N

H

estriquinano (4)

N

H

aspidospermatano (5)

N

H

plumerano (6)

N

eburnano (7)

N

H

ibogano (8)

N

tacamano (9)

Figura 04: Esqueletos básicos dos alcalóides indólicos monoterpênicos.

3.3 – Taxonomia

A família Apocynaceae, juntamente com as famílias Rubiaceae e Loganiaceae,

produz alcalóides indólicos monoterpênicos, sendo que a família Apocynaceae contém

a maioria dos alcalóides isolados e comercializados (BRUNETON, 1995).

Os botânicos classificam a família Apocynaceae em três subfamílias:

Plumerioidae, Cerberoidae e Echitoidae. Alcalóides têm sido isolados de espécies de

todas essas subfamílias, mas alcalóides indólicos têm sido encontrados somente em

Plumerioidae. Esta subfamília é dividida em sete tribos, e destas, quatro produzem

alcalóides indólicos, são elas: Carisseae, Tabernaemontaneae, Alstonieae

(Plumerieae) e Rauvolfieae. Todos os gêneros destas tribos produzem alcalóides da

classe I, as Rauvolfieae produzem principalmente esqueletos do tipo corinanteano e

seus derivados (heteroioimbano, ioimbano), aspidospermano (classe II) são

encontrados nas espécies das tribos Plumerieae, Carisseae e Tabenaemontaneae. O

esqueleto ibogano (classe III), com poucas exceções (Catharanthus, entre outros), são

encontrados na tribo Tabernaemontaneae (BRUNETON, 1995; DANIELI &

PALMISANO, 1986).

Em termos evolutivos, das três famílias acima citadas, Apocynaceae é

considerada a mais evoluída, sendo Loganiaceae o ancestral comum das outras duas,

o que é corroborado pela complexidade dos alcalóides indólicos encontrados. Somente

em Apocynaceae encontramos alcalóides indólicos monoterpênicos das classes II e III

(BRUNETON, 1995).

As quatro tribos acima citadas são suficientemente diferenciadas

morfologicamente, porém os limites de gênero e nomenclatura da tribo

Tabernaemontaneae têm sido confusas, sendo objeto de discussões por mais de um

século (DANIELI & PALMISANO, 1986).

3.4 – O Gênero Tabernaemontana

Com relação ao gênero Tabernaemontana, por muitos anos este nome tem sido

restrito a espécies encontradas nas Antilhas, América Central e Noroeste da América

do Sul, enquanto que espécies encontradas no Brasil são classificadas como

pertencentes ao gênero Peschiera A. DC. Espécies do Sul da Ásia e Austrália são

agrupadas como Ervatamia (DANIELI & PALMISANO, 1986).

Leeuwenberg, em 1994, reviu estes gêneros, e por características morfológicas

reagrupou várias espécies do gênero Peschiera e Ervatamia, como Tabernaemontana,

sendo usado aqui esta classificação. Com isso, totalizou 100 espécies, das quais 27

são encontradas no Brasil, e destas, 6 são endêmicas, incluindo uma nova espécie

(Tabernaemontana cumata Leeuwenberg) (LEEUWENBERG, 1994).

O estudo fitoquímico de espécies destes gêneros tem contribuído para

diferenciá-los, principalmente na composição química dos alcalóides encontrados

nestas plantas (DANIELI & PALMISANO, 1986).

A presença de aproximadamente ¼ das espécies do gênero no Brasil, aliado a

um número relativamente pequeno de estudos fitoquímicos, demonstra a necessidade

de aprofundar os estudos fitoquímicos das espécies brasileiras deste gênero

(DANIELI

& PALMISANO, 1986).

Este gênero faz parte do estudo fitoquímico do grupo de trabalho do Setor de

Química de Produtos Naturais da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy

Ribeiro (UENF) coordenado pelo professor Ivo José Curcino Vieira com a colaboração

dos professores Raimundo Braz-Filho e Leda Mathias. Este estudo em questão foi

iniciado com a espécie Tabernaemontana laeta (Peschiera laeta) e Tabernaemontana

hystrix, classificada e identificada pela botânica Professora Luíza Sumiko Kinoshita da

Universidade de Campinas, Campinas-SP.

3.5 – A Espécie Tabernaemontana hystrix (Figura 05, página 15)

A espécie em questão é endêmica da região Sudeste do Brasil, e nas regiões

Norte e Noroeste Fluminense é conhecida como “esperta”, sendo considerada uma

planta venenosa para animais, segundo informações populares.

Apresenta-se sob a forma de arbusto ou árvore pequena de 1-7 m de altura.

Ramos pálidos à marrom escuro, lenticelados; râmulos cilíndricos, glabros. Folhas

pecioladas, com pecíolo glabro, de 2-10 mm de comprimento. Flores vistosas, abertas

durante o dia. Sépalas verde pálido, conadas na base, ovada, oblongas. Corola branca

ou amarela, com 11-16 mm de comprimento no botão maduro e formando uma cabeça

ovóide pequena. Frutos com 2 mericarpos separados, mericarpos amarelos,

obliquamente elipsóides, recurvados, arredondados no ápice; com paredes mais

espessas. Sementes pretas ou marrons, obliquamente elipsóides, cerca de 8-10 x 4-5

x 3-3,5 mm (LEEUWENBERG, 1994).

Figura 05: Fotografia da espécie Tabernaemontana hystrix (galho em floração)

3.6 – Considerações farmacológicas

Na medicina moderna, substâncias extraídas de Apocynaceae são de uso

corrente, citando a título de exemplo: a vimblastina (10) e vincristina (11) produzidos

pela vinca (Catharanthus roseus), possuem acentuada ação antitumoral. A ação

desses compostos se dá de forma semelhante à da colchicina (12), um alcalóide

extraído do açafrão do prado (Colchicum autumnale). A exposição da célula a esses

alcalóides causa o desaparecimento do fuso mitótico e, como o rompimento temporário

dos microtúbulos do fuso, mata preferencialmente células que se dividem de forma

anormal, essas drogas antimitóticas são amplamente utilizadas no tratamento do

câncer (ALBERTS, 1997), incluindo a doença de Hodgkin e a leucemia aguda (RAPINI,

2000).

A reserpina (13) (Rauvolfia serpentina) é usada como droga anti-hipertensiva e

tranqüilizante (SCHMELLER, 1998). Já a vincamina (14), extraída da Vinca minor,

aumenta o fluxo sangüíneo no cérebro e é utilizada no tratamento de problemas

cérebro-vasculares, especialmente em idosos (Figura 06, página 16) (RAPINI, 2000;

PEREIRA et al., 2003).

N

OA

c

MeO

R

H

OH

CO

2

Me

OH

H

MeO

2

C

(10) vimblastina:(R=CHO)

(11) vincristina: (R=CH

3

)

O

NH

O

OMe

MeO

H

(12) colchicina

N

O

OMe

MeO

2

C

H

OH

H

(13) reserpina

Figura 06: Estrutura da vimblastina, vincristina, colchicina, reserpina e vincamina.

O extrato do caule da Tabernaemontana crassa é usado na medicina tradicional

para acalmar “ataques epilépticos e insanidade mentais” (NEUWINGER, 1998).

Vários alcalóides indólicos isolados desta espécie têm sido investigados

farmacologicamente: ibogaina (15), ibogamina (16), coronaridina (17), voacangina (18),

isovoacangina (19), voacristina (20) e vobasina (21) apresentam atividade estimulante

do SNC. A decocção de folhas tem uso popular como anestésico local em

procedimentos ortopédicos, sendo que dois destes alcalóides são os responsáveis por

estes efeitos: a vobasina e perivina (22) (Figura 07), este possui uma atividade

anestésica duas vezes maior que a cocaína (NEUWINGER, 1998).

(14) vincamina

N

O

As cascas e raízes de Tabernaemontana carimbosa têm sido usadas em veneno

de flechas e de dardos na Tailândia e Malásia (NEUWINGER, 1998), e somente

recentemente tem sido investigada fitoquimicamente e farmacologicamente pelo grupo

Toh-Seok Kam (KAM et al., 2001).

N

R

2

H

R

1

R

3

H

ibogaina (15) R = MeO, R

1

= R

2

= R

3

= H

ibogamina (16) R = R

1

= R

2

= R

3

= H

coronaridina (17) R = R

1

= R

2

= H, R

3

= CO

2

Me

voacangina (18) R = MeO, R

1

= R

2

= H, R

3

= CO

2

Me

isovoacangina (19) R

1

= MeO, R = R

2

=H, R

3

= CO

2

Me

voacristina (20) R = MeO, R

2

= OH, R

1

= H, R

3

= CO

2

Me

N

H

N

R

O

H

MeO

2

C

vobasina (21) R = Me

perivina (22) R = H

Figura 07: Alcalóides indólicos isolados da Tabernaemontana crassa.

Os alcalóides acima citados são do tipo indólicos monoterpênicos, e são estes

os responsáveis pelas atividades farmacológicas das plantas desta família. Pela sua

importância, estes alcalóides e as plantas que os contém, têm sido objeto de estudos

fitoquímicos, biossintéticos, etnofarmacológicos, farmacológicos, farmacognósticos,

quimiotaxonômicos e biotecnológicos, além de servirem como modelo para síntese de

compostos biologicamente ativos. Dada a relevância destes alcalóides, considerações

sobres alguns dos aspectos citados são feitas, dando ênfase a fitoquímica do gênero

Tabernaemontana, principalmente das espécies brasileiras (DANIELI & PALMISANO,

1986).

3.7 – Estudos Fitoquímicos

Pelas razões expostas acima, o gênero Tabernaemontana tem sido alvo de

estudos fitoquímicos em todo o mundo com revisões da sua química, taxonomia,

etnobotânica e farmacologia do gênero, sendo descritos até o ano de 1984 mais de 250

alcalóides (DANIELI & PALMISANO, 1986).

A investigação fitoquímica das cascas do caule da espécie Tabernaemontana

hystrix com a sinonímia Peschiera fuchsiaefolia apresentou a identificação de 14

alcalóides: (BRAGA et al., 1984; BRAGA & REIS, 1987) 12-metoxi-4-metilvoachalotina

(23), 12-metoxi-4-metilvoachalotina etil éster (24), fuchsiaefolina (25), normacusina

(26), affinisina (27), voachalotina (28), 4-metilaffinisina (29), 4-metilvoachalotina (30),

voacangina (18, Figura 07, página 16), ibogaina (15, Figura 07, página 16), vobasinol

(31), perivina (22, Figura 07, página 16), 16-epiaffinina (32),

voacanginahidroxiindolenina (33), e 6 alcalóides bis-indólicos: voacamina (34),

decarbometoxivoacamina (35), demetilvoacamina (36), voacamidina (37),

diidrovoacamina (38) e demetildihidrovoacamina (39) (Figura 08, página 17).

+

16'

17'

14'

15'

18'

19'

20'

21'

3'

5'

6'

2'

7'

8'

13'

12'

11'

9'

10'

9

10

11

12

13

8

7

16

6

5

18

19

21

20

15

14

3

2

N

H

CH

3

OOC

R

1

N

R

2

OCH

3

(34) R

1

= CH

3

, R

2

=COOCH

3

(Ligado em C-11')

(35) R

1

= CH

3

, R

2

= H (Ligado em C-11')

(36) R

1

= H, R

2

= COOCH

3

(Ligado em C-11')

(37) R

1

= CH

3

, R

2

= H (Ligado em C-9')

(38) R

1

= CH

3

, R

2

= COOCH

3

, 19-20 diidro (Ligado em C-1

1

(39) R

1

= H, R

2

= COOCH

3

, 19-20 diidro (Ligado em C-11')

N

COOCH

3

CH

3

O

HO

(33)

N

CH

3

R

2

R

3

R

1

Z

(31) R

1

= CH

3

, Z = α−H, β−OH, R

2

= H, R

3

= COOCH

3

(32)R

1

= CH

3

, Z = O, R

2

= CH

2

OH, R

3

= H

(29) R

1

= H, R

2

= CH

2

OH

(30) R

1

= CH

2

OH, R

2

= CO

2

CH

3

N

CH

3

CH

3

R

1

R

2

H

28

N

CH

3

HOH

2

C

CO

2

CH

3

H

(26) R = H

(27) R = CH

3

N

R

CH

2

OH

25

N

CH

3

OCH

3

CH

3

CO

2

CH

2

CH

3

(23) R = CH

3

(24) R = CH

2

CH

3

N

CH

3

OCH

3

CH

3

HOH

2

C

CO

2

R

H

Figura 08: Alcalóides indólicos isolados de Peschiera fuchsiaefolia

O estudo fitoquímico do extrato em metanol das cascas das raízes de

Tabernaemontana hystrix, investigado pelo grupo de pesquisa do Laboratório de

Química de Produtos Naturais da UENF, identificou a presença de seis alcalóides

indólicos monoterpênicos: affinina (40), olivacina (41), affinisina (27, Figura 08), N

b

-

metilaffinisina (29, Figura 08), ibogamina (16, Figura 07, página 16) e histrixnina (42,

Figura 09, página 20) (MONNERAT, 2005).

21

20

19

18

16

15

14

13

12

11

10

9

8 7

6

5

4

3

2

1

N

CH

3

O

H

OCH

3

H

histrixnina (42)

olivacina (41)

20

19

18

17

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

21

3

2

1

N

CH

3

CH

3

H

affinina (40)

N

H

OH

O

Me

H

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

Figura 09: Alcalóides indólicos monoterpênicos isolados de Tabernaemontana hystrix

Dos nove tipos de esqueletos básicos dos alcalóides indólicos monoterpênicos,

nenhum alcalóide do tipo vincosano (1) foi encontrado em Tabernaemontana, poucas

substâncias dos tipos valesiacotamano (2), estriquinano (4), aspidospermatano (5),

eburnano (7) e tacamano (9) têm sido isoladas. A maioria dos compostos isolados

pertence aos esqueletos plumerano (6), corinanteano (3) e ibogano (8) (Figura 04,

página 11), este último é encontrado em todas as espécies de Tabernaemontana,

sendo característicos deste gênero (DANIELE & PALMISANO 1986).

4. MATERIAIS E METODOLOGIA

4.1 – Materiais

4.1.1 – Reagentes e Solventes

• Acetato de etila P.A.

• Alumina Neutra

• Clorofórmio deuterado

• Cromatofolhas de alumínio com sílica gel 60 F

254

• Diclorometano P.A.

• Hexano P.A.

• Metanol deuterado

• Metanol P.A.

• Sílica gel Merck Darmstadt 60 (0,063–0,200 mm)

• Solução de nitrato básico de bismuto II em ácido acético diluído com iodeto de

potássio (Reagente de Dragendorff) (MERCK, 1972)

• Solução de Vanilina a 2% em ácido sulfúrico concentrado

4.1.2 – Equipamentos

• Colunas cromatográficas de vidro de tamanhos variados

• Espectrômetro de massas acoplado ao cromatógrafo gasoso do modelo

CG/EM–QP–5050, marca SHIMADZU, utilizando impacto de elétrons a 70 eV.

• Espectrômetro de Ressonância Magnética da marca Brüker, modelo DRX-500

(500 MHz para

1

H e 125 MHz para

13

C)

• Espectrômetro de Ressonância Magnética da marca Jeol, modelo Elipse (400

MHz para

1

H e 100 MHz para

13

C)

• Evaporador rotativo Büchi modelo R-114

• Frascos de vidro

• Lâmpada ultravioleta (Aldrich) a 254 nm e 365 nm

• Moinho de martelos, da marca Tecnal

4.2 – Metodologia

A escolha da planta pode ser desenvolvida a partir dos objetivos do pesquisador,

como por exemplo, a seleção pode ser feita através da verificação da ocorrência de

uma determinada classe de constituinte químico (Alcalóides, Flavonóides, entre

outros), ou de um conjunto de constituintes de interesse para o estudo a ser

desenvolvido.

Um aspecto importante para a escolha da planta refere-se à informação popular

sobre o uso da planta quando se tem interesse em sua aplicação na medicina.

4.2.1 – Coleta do material vegetal e identificação botânica

As cascas das raízes de Tabernaemontana hystrix foram coletadas em março

de 2002, no município de Varre e Sai (RJ). A identificação botânica foi realizada pela

botânica Professora Luíza Sumiko Kinoshita da Universidade de Campinas, Campinas-

SP. A exsicata do espécime encontra-se depositada no herbário da Universidade de

Campinas-UNICAMP.

4.2.2 – Secagem e moagem

A secagem do material foi feita ao ar livre logo após a coleta, para evitar a

presença de fungos. Após secagem, o material foi convertido em pó usando moinho de

martelos.

4.2.3 – Isolamento e purificação das substâncias orgânicas por técnicas

cromatográficas

Foram utilizadas técnicas de cromatografia em coluna a pressão normal e

cromatografia em camada delgada preparativa (COLLINS, 1990; HARBORNE, 1998;

IKAN, 1991; PATITUCCI et al., 1995; POOLE, 1984).

Nas análises de cromatografia em coluna foram utilizadas sílica gel Merck

Darmstadt 60 (0,063–0,200 mm) e Alumina neutra.

As análises de cromatografia em camada delgada analítica foram realizadas em

cromatofolhas de Alumínio com sílica gel 60 F

254

Merck. As substâncias foram

visualizadas por irradiação com lâmpada ultravioleta (Aldrich) a 254 nm e 365 nm e/ou

pulverizadas com os seguintes reagentes cromogênicos:

• Dragendorff (solução de nitrato básico de bismuto II em ácido acético diluído com

iodeto de potássio).

• H

2

SO

4

conc./Vanilina, seguido de aquecimento.

4.2.4 – Análises espectrométricas

As análises espectrométricas foram realizadas em aparelhos do Laboratório de

Ciências Química da Universidade Estadual Norte Fluminense Darcy Ribeiro e na

Universidade Federal do Ceará.

Os espectros de ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN

1

H) e

carbono-13 (RMN

13

C) foram obtidos num espectrômetro Jeol (400 MHz para

1

H e 100

MHz para

13

C) e num Brüker (500 MHz para

1

H e 125 MHz para

13

C). Os solventes

utilizados foram clorofórmio deuterado (CDCl

3

) e metanol deuterado (MeOH-d

4

),

usando como padrão interno o tetrametilsilano (TMS). Os deslocamentos químicos (δ)

foram obtidos em parte por milhão (ppm) e as constantes de acoplamento (J) em Hertz

(Hz).

4.2.5 – Análises de espectrometria de massas

Os espectros de massas (EM) foram obtidos por CG/EM e por inserção direta

em um aparelho CG/EM–QP–5050 A SHIMADZU, utilizando impacto de elétrons (70

eV).

4.2.6 – Preparação dos Extratos Brutos

Os extratos brutos foram preparados a frio (maceração) por extrações

sucessivas com solventes orgânicos (hexano, diclorometano e metanol) em ordem

crescente de polaridade. As soluções obtidas foram destiladas a pressão reduzida em

evaporador rotativo, fornecendo os extratos brutos.

A quantidade de material colhido e suas respectiva extrações estão descritas na

Tabela 01.

Tabela 01: Quantidade de extratos brutos (g) obtidos das cascas das raízes de

Tabernaemontana hystrix:

Espécie

Botânica

Parte

Botânica

Peso do

Material (g)

Solventes Peso de

Extratos (g)

Tabernaemontana

Hystrix

Cascas das

raízes

920,0 a

b

c

17,4

17,8

43,6

a - Hexano

b - Diclorometano

c - Metanol

4.2.7 – Descrição experimental do isolamento dos constituintes químicos

isolados

4.2.7.1 – Resumo dos constituintes químicos isolados do Extrato em

Diclorometano das cascas das raízes de Tabernaemontana hystrix (18,50 g)

Fluxograma 01: Estudo cromatográfico do extrato em diclorometano

Fluxograma 02: Estudo cromatográfico da fração BD5

Fluxograma 03: Estudo cromatográfico da fração BD8

4.2.7.2 – Análises das frações obtidas do Extrato em Diclorometano (18,50 g) das

cascas das raízes de Tabernaemontana hystrix

Inicialmente o extrato em diclorometano foi submetido a uma cromatografia em

coluna empacotada com sílica gel, usando como eluente diclorometano puro, com

gradiente de eluição até metanol puro, sendo coletadas 45 frações, que posteriormente

foram reunidas em 10 novas frações, através de comparação por cromatografia em

camada delgada analítica. O estudo cromatográfico das frações está na Tabela 02.

Tabela 02: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos Quantidade (g)

1 BD1 1,06 *

2-3 BD2 4,16 *

4-5 BD3 0,17 *

6-9 BD4 0,86

10-15 BD5 2,25

16-17 BD6 1,51 *

18-20 BD7 0,71

21 BD8 5,90

22-36 BD9 0,11 *

37-45 BD10 1,54

* frações não estudadas por serem semelhantes as que foram estudadas

Análise da fração BD4 (0,86 g)

A fração BD4 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada com

sílica gel, utilizando como solvente hexano puro, com gradiente de eluição até

hexano:acetato de etila (7:3, v/v), sendo coletadas 28 frações, que posteriormente

foram reunidas em 07 novas frações, através de comparação por cromatografia em

camada delgada analítica. A Tabela 03 mostra o estudo cromatográfico das frações

coletadas.

Tabela 03: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos Quantidade (mg)

1 BD4-1 39,6 *

2 BD4-2 7,8 *

3-4 BD4-3 27,5 *

5-8 BD4-4 171,7 *

9-18 BD4-5 504,7

19-20 BD4-6 9,9 *

21-28 BD4-7 62,9 *

* frações não estudadas por estarem semelhantes à fração BD4-5

Análise da fração BD4-5 (504,7 mg)

Inicialmente a fração BD4-5 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, usando como eluente hexano puro, com gradiente de

eluição até acetato de etila puro, onde foram coletadas 43 frações que posteriormente,

através de comparação por cromatografia em camada delgada analítica, foram

reunidas em 04 novas frações. O estudo cromatográfico das frações está na Tabela

04.

Tabela 04: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos

Quantidade (mg)

1-12 BD4-5-1 8,9 *

13-14 BD4-5-2 15,6 *

15-38 BD4-5-3 361,9 *

39-43 BD4-5-4 29,8

* frações não estudadas por não apresentarem teste positivo para alcalóides

Análise da fração BD4-5-4 (29,8 mg)

A fração BD4-5-4 foi submetida a uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1mm de espessura), para ser purificada, sendo usado como

eluente hexano:acetato de etila (83:17, v/v), onde foi coletada a fração BD4-5-4-2 com

6,3 mg [coronaridina (17)].

Análise da fração BD5 (2,25 g)

Inicialmente a fração BD5 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, onde foi usado como eluente hexano puro, com gradiente

de eluição até acetato de etila puro, sendo coletadas 26 frações, que posteriormente

foram reunidas em 10 novas frações, através de comparação por cromatografia em

camada delgada analítica. O estudo cromatográfico destas frações está descrito na

Tabela 05.

Tabela 05: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos Quantidade (mg)

1-5 BD5-1 991,0

6-8 BD5-2 254,7 *

9-10 BD5-3 171,4 *

11-13 BD5-4 113,9

14-15 BD5-5 80,8

16-17 BD5-6 45,0

18-20 BD5-7 236,5 *

21-23 BD5-8 98,1

24-25 BD5-9 32,4

26 BD5-10 42,9

* frações não estudadas por estarem semelhantes às frações estudadas

Análise da fração BD5-1 (991,0 mg)

A fração BD5-1 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada com

sílica gel, sendo usado como eluente hexano:acetato de etila (85:15, v/v), com

gradiente de eluição até Acetato de etila puro, sendo coletadas 32 frações que através

de comparação por cromatografia em camada delgada analítica foram reunidas em 06

novas frações. A Tabela 06 mostra o estudo cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 06: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos Quantidade (mg)

1-2 BD5-1-1 346,8

3-10 BD5-1-2 228,0 *

11-16 BD5-1-3 8,2 *

17-27 BD5-1-4 25,5

28-32 BD5-1-5 82,5 *

* frações não estudadas por não apresentarem teste positivo para alcalóides

Análise da fração BD5-1-1 (346,8 mg)

Foram retiradas da fração BD5-1-1 54,6 mg que foi purificada através de

cromatografia em camada delgada preparativa (placa de 1 mm de espessura),

utilizando como eluente hexano:acetato de etila (8:2, v/v), sendo coletada a fração

BD5-1-1-4 com 25,9 mg [coronaridina (17)].

Análise da fração BD5-1-4 (25,5 mg)

A fração BD5-1-4 foi purificada em uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1 mm de espessura), utilizando como eluente hexano:acetato de

etila (8:2, v/v), sendo coletada a fração BD5-1-4-1 com 13,4 mg [7-hidroxiindolenina-

coronaridina (43)].

Análise da fração BD5-4 (113,9 mg)

A fração BD5-4 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada com

sílica gel, sendo usado como eluente hexano:acetato de etila (85:15, v/v), com

gradiente de eluição até acetato de etila puro, sendo coletadas 29 frações que através

de comparação por cromatografia em camada delgada analítica foram reunidas em 06

novas frações. A Tabela 07 mostra o estudo cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 07: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos

Quantidade (mg)

1-2 BD5-4-1 4,9

•

3 BD5-4-2 8,7

•

4 BD5-4-3 46,0

•

5-7 BD5-4-4 35,2

β-sitosterol (44)

estigmasterol (45)

8-12 BD5-4-5 9,0 *

13-29 BD5-4-6 5,6

•

* fração não estudada por ser semelhante à fração BD5-4-4

• foi feita uma comparação pôr cromatografia em camada delgada analítica com um

padrão do esteróide β-Sitosterol, e constatou-se a similaridade, sendo então, estas

reunidas em uma nova fração (BD5-4).

Análise da fração BD5-5 (80,8 mg)

A fração BD5-5 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada com

sílica gel, sendo usado como eluente hexano:acetato de etila (95:5, v/v), com gradiente

de eluição até acetato de etila puro, onde foram coletadas 16 frações, que

posteriormente foram reunidas em 03 novas frações, através de comparação por

cromatografia em camada delgada analítica. A Tabela 08 mostra o estudo

cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 08: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos Quantidade (mg)

1-2 BD5-5-1 11,3 *

3 BD5-5-2 13,1 *

4-5 BD5-5-3 34,6

* frações não estudadas por não apresentarem testes positivos para alcalóides

Análise da fração BD5-5-3 (34,6 mg)

A fração BD5-5-3 foi submetida a uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1mm de espessura), sendo usado como eluente hexano:acetato

de etila (75:25, v/v), onde foi coletada a fração BD5-5-3-2 com 21,5 mg [7-

hidroxiindolenina-coronaridina (43)].

Análise da fração BD5-6 (45,0 mg)

A fração BD5-6 foi submetida a uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1mm de espessura) eluída com hexano:acetato de etila (7:3, v/v)

onde foi coletada a fração BD5-6-1-2 com 16,4 mg [7-hidroxiindolenina-coronaridina

(43)].

Análise da fração BD5-8 (98,1 mg)

A fração BD5-8 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada com

sílica gel, sendo usado como eluente hexano puro, com gradiente de eluição até

hexano:acetato de etila (3:7, v/v), sendo coletadas 25 frações que através de

comparação por cromatografia em camada delgada analítica foram reunidas em 03

novas frações. A Tabela 09 mostra o estudo cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 09: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Códigos Quantidade (mg)

1-3 BD5-8-1 6,5 *

4-15 BD5-8-2 65,2 *

16-25 BD5-8-3 15,9

* frações não estudadas por não apresentarem teste positivo para alcalóides

Análise da fração BD5-8-3 (15,9 mg)

A fração BD5-8-3 foi purificada em uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1 mm de espessura), utilizando como eluente

diclorometano:metanol (98:2, v/v), sendo coletada duas frações BD5-8-3-1 e BD5-8-3-

4, que foram reunidas, ficando com 3,4 mg [5-oxocoronaridina (46)].

Análise da fração BD5-9 (32,4 mg)

A fração BD5-9 foi submetida a uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1mm de espessura), para purificação, onde foi usado como

eluente diclorometano:metanol (98:2, v/v), sendo coletada a fração BD5-9-1-1-1 com

3,7 mg [7-hidroxiindolenina-3-oxocoronaridina (47) e 3-oxocoronaridina (48)].

Análise da fração BD5-10 (42,9 mg)

A fração BD5-10 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada

com sílica gel, eluída com hexano:acetato de etila (7:3, v/v), com gradiente de eluição

até hexano:acetato de etila (4:6, v/v), onde foi coletada a fração BD5-10-2-2 com 8,0

mg [3-oxocoronaridina (48)].

Análise da fração BD7 (710,0 mg)

Inicialmente a fração BD7 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano com gradiente

de eluição até metanol puro, onde foram coletadas 51 frações que, através de

comparação por cromatografia em camada delgada analítica, foram reunias em 04

novas frações. A Tabela 10 descreve o estudo cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 10: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

1-8 BD7-1 28,1 *

9-17 BD7-2 78,5 *

18-27 BD7-3 547,1

28-51 BD7-4 40,1 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD7-3

Análise da fração BD7-3 (482,1 mg)

A fração BD7-3 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada com

sílica gel, utilizando como eluente diclorometano com gradiente de eluição até

diclorometano:metanol (8:2, v/v), sendo coletadas 50 frações que foram reunidas em

06 novas frações, através de comparação por cromatografia em camada delgada

analítica. O estudo cromatográfico das frações coletadas está descrito na Tabela 11.

Tabela 11: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

1 BD7-3-1 2,2 *

2-11 BD7-3-2 20,9 *

12-17 BD7-3-3 7,0 *

18-30 BD7-3-4 354,8

31-33 BD7-3-5 53,1 *

34-50 BD7-3-6 19,2 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD7-3-4

Análise da fração BD7-3-4 (354,8 mg)

A fração BD7-3-4 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada

com sílica gel, utilizando como eluente diclorometano com gradiente de eluição até

diclorometano:metanol (8:2, v/v), sendo coletadas 47 frações que foram reunidas em

04 novas frações, através de comparação por cromatografia em camada delgada

analítica. O estudo cromatográfico das frações coletadas está descrito na Tabela 12.

Tabela 12: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

0 BD7-3-4-1 8,2 *

1-14 BD7-3-4-2 225,7 *

15-21 BD7-3-4-3 146,5 *

22-24 BD7-3-4-4 18,0

25-45 BD7-3-4-5 25,5 *

* frações não estudadas por não apresentarem teste positivo para alcalóides

Análise da fração BD7-3-4-4 (146,5 mg)

Inicialmente a fração BD7-3-4-4 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano puro com

gradiente de eluição até diclorometano:metanol (1:1, v/v), onde foram coletadas 21

frações que, através de comparação por cromatografia em camada delgada analítica,

foram reunidas em 04 novas frações. A Tabela 13 mostra o estudo cromatográfico das

frações coletadas.

Tabela 13: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

0 BD7-3-4-4-1 10,8 *

1-2 BD7-3-4--4-2 42,6

3-20 BD7-3-4--4-3 17,5 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD7-3-4--4-2

Análise da fração BD7-3-4-4-2 (42,6 mg)

A fração BD7-3-4-4-2 foi submetida a uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1mm de espessura), para ser purificada, sendo utilizado como

eluente diclorometano:metanol (99:1, v/v), onde foi coletada a fração BD7-3-4-4-2-2

com 4,7 mg [vobasina (21)].

Análise da fração BD8 (5,9 g)

Inicialmente a fração BD8 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano puro com

gradiente de eluição até metanol puro, onde foram coletadas 47 frações que, através

de comparação por cromatografia em camada delgada analítica, foram reunidas em 06

novas frações. A Tabela 14 mostra o estudo cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 14: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (g)

1-11 BD8-1 0,076 *

12-20 BD8-2 1,63

21-35 BD8-3 1,91

36-40 BD8-4 0,67 *

41-44 BD8-5 0,83 *

45-47 BD8-6 0,17 *

* frações não estudadas por não apresentarem teste positivo para alcalóides

Análise da fração BD8-2 (1,6314 g)

Inicialmente a fração BD8-2 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano puro com

gradiente de eluição até diclorometano:metanol (4:1, v/v), onde foram coletadas 22

frações que, através de comparação por cromatografia em camada delgada analítica,

foram reunidas em 04 novas frações. A Tabela 15 mostra o estudo cromatográfico das

frações coletadas.

Tabela 15: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

1-2 BD8-2-1 12,9 *

3-10 BD8-2-2 843,5

11-19 BD8-2-3 645,6 *

20-22 BD8-2-4 23,5 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD8-2-2

Análise da fração BD8-2-2 (843,5 mg)

A fração BD8-2-2 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada

com sílica gel, utilizando como eluente diclorometano com gradiente de eluição até

diclorometano:metanol (1:1, v/v), sendo coletadas 24 frações que foram reunidas em

04 novas frações, através de comparação por cromatografia em camada delgada

analítica. O estudo cromatográfico das frações está descrito na Tabela 16.

Tabela 16: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

0-6 BD8-2-2-1 25,7 *

7-13 BD8-2-2-2 8,2 *

14-18 BD8-2-2-3 364,5

19-23 BD8-2-2-4 199,9 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD8-2-2-3

Análise da fração BD8-2-2-3 (364,5 mg)

A fração BD8-2-2-3 foi submetida a uma cromatografia em coluna empacotada

com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano puro com gradiente de

eluição até diclorometano:metanol (9:1, v/v), onde foram coletadas 27 frações que,

através de comparação por cromatografia em camada delgada analítica, foram

reunidas em 05 novas frações. A Tabela 17 mostra o estudo cromatográfico das

frações coletadas.

Tabela 17: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

1-5 BD8-2-2-3-1 14,1 *

6-17 BD8-2-2-3-2 65,1 *

18-23 BD8-2-2-3-3 107,2 *

18-23 BD8-2-2-3-4 53,7

24-27 BD8-2-2-3-5 78,1 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD8-2-2-3-4 e por se

apresentarem em misturas complexas

Análise da fração BD8-2-2-3-4 (53,7 mg)

A fração BD8-2-2-3-4 foi submetida a uma cromatografia em camada delgada

preparativa (placa de 1mm de espessura), para ser purificada, sendo utilizado como

eluente diclorometano:metanol (99:1, v/v), onde foi coletada a fração BD8-2-2-3-4-4 com

9,8 mg [5,6-dioxoibogamina (49)].

Análise da fração BD8-3 (1,91 g)

Inicialmente a fração BD8-3 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano puro com

gradiente de eluição até diclorometano:metanol (1:1, v/v), onde foram coletadas 73

frações que, através de comparação por cromatografia em camada delgada analítica,

foram reunidas em 06 novas frações. A Tabela 18 mostra o estudo cromatográfico das

frações coletadas.

Tabela 18: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código

Quantidade (mg)

1 BD8-3-1 204,4 Ibogamina (16)

2 BD8-3-2 22,6 *

3-29 BD8-3-3 894,2 *

30-32 BD8-3-4 21,4 *

33-38 BD8-3-5 81,4

39-73 BD8-3-6 221,8 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD8-3-5 e por se

apresentarem em misturas mais complexas

Análise da fração BD8-3-5 (81,4 mg)

Inicialmente a fração BD8-3-5 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com alumina neutra, sendo utilizado como eluente diclorometano puro

com gradiente de eluição até diclorometano:metanol (7:3, v/v), onde foram coletadas

21 frações que, através de comparação por cromatografia em camada delgada

analítica, foram reunidas em 03 novas frações. A Tabela 19 mostra o estudo

cromatográfico das frações coletadas.

Tabela 19: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade

(mg)

1-2 BD8-3-5-1 4,7 Olivacina (41)

3 BD8-3-5-2 12,8 *

12-21 BD8-3-5-3 49,4 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD8-3-5-1

Análise da fração BD10 (1,5 g)

Inicialmente a fração BD10 foi submetida a uma cromatografia em coluna

empacotada com sílica gel, sendo utilizado como eluente diclorometano puro com

gradiente de eluição até metanol puro, onde foram coletadas 58 frações que, através

de comparação por cromatografia em camada delgada analítica, foram reunidas em 05

novas frações, como mostra a Tabela 20.

Tabela 20: Estudo cromatográfico das frações coletadas:

Frações Reunidas Código Quantidade (mg)

1-21 BD10-1 62,7 *

22-31 BD10-2 57,0 *

32-36 BD10-3 26,2 *

37-50 BD10-4 661,7

51-58 BD10-5 603,8 *

* frações não estudadas por serem semelhantes à fração BD10-4

Análise da fração BD10-4 (661,7 mg)

A fração BD10-4 cristalizada foi submetida a várias lavagens com diclorometano,

onde foi coletada uma fração BD10-4-1 com 49,1 mg [12-metoxivoachalotina (50)].

5. RESULTADOS E DISCUSSÕES

5.1 – Substâncias identificadas de Tabernaemontana hystrix

O estudo fitoquímico do extrato em diclorometano das cascas das raízes de

Tabernaemontana hystrix permitiu o isolamento e a identificação de 12 substâncias: 2

esteróides e 10 alcalóides, sendo 2 inéditos na literatura até o presente momento.

Todos os alcalóides isolados deram teste positivo com o reagente de

Dragendorff (MERCK, 1972).

5.1.1 – Esteróides isolados

5.1.2 – Alcalóides isolados

17

22

18

19

2021

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

N

H

MeO

2

C

45

44

HO

3

6

5

24

23

22

N

MeO

2

C

HO

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

22

43

N

H

MeO

2

C

O

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

22

46

N

MeO

2

C

HO

O

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

22

47

N

H

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

16

N

CH

3

CH

3

H

1

2

3

21

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

41

N

H

MeO

2

C

O

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

22

48

17

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

16

21

20

19

Me

N

MeO

2

C

H

O

1

4

21

5.1.3 – Alcalóides inéditos isolados

5.2 – Determinação Estrutural

5.2.1 – Esteróides

Os esteróides são freqüentemente encontrados no reino vegetal, sendo que os

mais comuns desta classe de compostos são o β-sitosterol (44) e o estigmasterol (45).

No entanto, quase sempre estes compostos ocorrem em misturas devido às

suas semelhanças estruturais dificultando suas separações, por isso, na maioria das

vezes, suas identificações são feitas em misturas, através de RMN

13

C.

N

H

O

2

7

8

9

1

0

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

4

9

N

Me

H

O

H

OMe

O

OMe

4

1

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

22

50

Esteróides 44 e 45 (Mistura)

A análise dos espectros de RMN

1

H (Espectro 47 a 50, volume 2, páginas 109

a 112) mostra uma mistura dos esteróides β-sitosterol (44) e o estigmasterol (45), o

qual apresentou um dupleto de linhas largas em δ

H

5,35, relativo ao hidrogênio H-6;

um multipleto em δ

H

3,52 relativo ao hidrogênio H-3 e ainda um grande acúmulo de

sinais intensos na região de δ

H

2,28 a 0,68 do espectro, relativos aos vários grupos de

hidrogênios metílicos, metilênicos e metínicos do esqueleto esteroidal do β-sitosterol

(44).

Através da análise do espectro de RMN

1

H da mistura, pôde-se ainda confirmar

a presença do estigmasterol (45) notado pelas absorções dos hidrogênios vinílicos da

cadeia lateral em δ

H

5,03 (dd, J = 8,8 e 15,4 Hz, H-22) e 5,14 (dd, J = 8,8 e 15,2 Hz, H-

23).

A distinção entre o β-sitosterol (44) (SEO et al., 1988) e o estigmasterol (45),

pode ainda ser confirmada pelos sinais no espectro de RMN

13

C em δ

C

121,78 e

140,83 (C-6 e C-5) de ambas estruturas e δ

C

129,35 e 138,39 (C-23 e C-22), presente

apenas no estigmasterol (45) (Espectro 51 a 56, volume 2, páginas 109 a 118).

Os dados fornecidos pelos espectros de RMN

1

H e RMN

13

C (Espectros 47 a

56, volume 2, páginas 109 a 118), permitiram uma completa atribuição dos sinais de

cada esteróide com bastante coerência, além de comparação com os dados relatados

na literatura

para os dois esteróides (BREITEMEIER et al., 1987) o que colaborou para

a confirmação das propostas estruturais apresentadas.

45

44

HO

3

6

5

24

23

22

Tabela 24: Dados espectrais de RMN

13

C (100 MHz) dos esteróides β-sitosterol (44) e

estigmasterol (45), em CDCl

3

. Os valores dos deslocamentos químicos δ estão em

ppm.

C Sitosterol (44) Estigmasterol (45)

1 37,29 37,29

2 31,94 31,94

3 71,83 71,83

4 42,35 42,35

5 140,80 140,80

6 121,70 121,70

7 34,00 34,00

8 31,94 31,94

9 50,20 50,20

10 36,54 36,16

11 21,10 21,10

12 39,82 39,82

13 42,35 42,35

14 56,81 56,81

15 24,32 24,32

16 28,9 28,9

17 56,12 56,12

18 11,99 11,99

19 19,39 19,39

20 39,82 39,82

21 18,79 19,06

22 31,94 138,29

23 26,19 129,30

24 45,90 50,20

25 29,68 31,70

26 19,80 21,2

27 19,80 19,80

28 23,12 25,4

29 11,87 11,99

5.2.2 – Alcalóides Indólicos Monoterpênicos

Na determinação estrutural dos alcalóides indólicos presentes no gênero

Tabernaemontana levou-se em consideração informações sobre a quimiossistemática

sobre esta classe de substâncias que nos forneceram indícios sobre os esqueletos

carbônicos das substâncias isoladas neste gênero.

Como dito anteriormente os alcalóides indólicos monoterpênicos são derivados

da estrictosidina e grande parte destes apresentam um grupo carbometoxi. Outro dado

importante que se pode observar é que a maioria dos alcalóides isolados no gênero

Tabernaemontana pertence aos esqueletos do tipo plumerano, corinanteano

(principalmente do sub-tipo vobasina), ibogano (principalmente do sub-tipo

coronaridina) sendo este majoritário e característico do gênero, informações estas que

são de grande valia na determinação estrutural dos alcalóides isolados na espécie

Tabernaemontana hystrix.

Alcalóide 17

22

1

8

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

1

0

9

8

7

2

N

H

MeO

2

C

O alcalóide (17) foi isolado como um óleo amarelo claro.

A análise do espectro de RMN

13

C (APT, Espectro 18, volume 2, página ;

Tabela 21, página 62) do alcalóide (17) permitiu reconhecer a presença de vinte e um

(21) átomos de carbono, sendo dois carbonos metílicos (um ligado a heteroátomo),

seis carbonos metilênicos (todos sp

3

, e dois ligados a heteroátomo), sete carbonos

metínicos (quatro sp

2

aromáticos, e três sp

3

, sendo um ligado a heteroátomo) e seis

carbonos quaternários (um sp

3

e cinco sp

2

, dos quais um carbonílico) (SILVERSTEIN,

1998; FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro 27,

volume 2, página 82; Esquema 01, página 61), o qual apresentou o pico do íon

molecular em m/z= 338 Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

21

H

26

N

2

O

2

para o alcalóide (17).

O espectro de RMN

1

H do alcalóide (17) (Espectros 9 a 14, volume 2, páginas

64 a 69; Tabela 21, página 62) apresentou sinais de deslocamentos químicos (δ

H

)

característicos de grupos metila, metoxila, hidrogênios aromáticos, grupos metínicos,

grupos metilênicos

e ainda a presença de um hidrogênio referente a grupamento amina

(FRIEBOLIM, 1993). Apresentou também quatro sinais relativos a hidrogênios

aromáticos a δ

H

7,47 (1H, d, J= 7,7 Hz; H-9); 7,14 (1H, td, J= 7,0 e 1,1 Hz; H-11); 7,09

(1H, td, J= 7,0 e 1,1 Hz; H-10); 7,23 (1H, d, J= 7,7 Hz; H-12) característicos de um

núcleo indólico, indicando que o anel A encontra-se livre de substituintes

(LOUNASMAA, 1986), confirmado através das

correlações heteronucleares dos

átomos de carbono metínicos (HMQC, Espectro 21, volume 2, página) através das

correlações a

1

J

CH

entre CH-9 (δ

C

118,41)/H-9 (δ

H

7,47), CH-10 (δ

C

119,18)/H-10 (δ

H

7,09), CH-11 (

δ

C

121,89)/H-11 (δ

H

7,14), CH-12 (δ

C

110,31)/H-11 (δ

H

7,23), juntamente

com a presença de um sinal singleto largo a δ

H

7,86 referente a um hidrogênio de um

grupo H-N, confirmando a presença de um núcleo indólico livre de substituintes

(AZOUG et al., 1995).

A presença do núcleo indólico foi também corroborada pelas correlações

heteronucleares a longa distância (HMBC, Espectro 25, volume 2, página 80) através

das correlações a entre CH-9 (δ

C

118,41)/H-11 (δ

H

7,14), CH-10 (δ

C

119,18)/H-12 (δ

H

7,23), CH-11 (δ

C

121,89)/H-9 (δ

H

7,47)/H-12 (δ

H

7,23), CH-12 (δ

C

110,31)/H-10 (δ

H

7,09)/ HN-1 (δ

H

7,86), C-2 (δ

C

136,54)/HN-1 (δ

H

7,86) e C-13 (δ

C

135,54)/H-9 (δ

H

7,47)/H-11 (δ

H

7,14) as demais correlações estão descritas na Tabela 22, página 63.

A presença de um grupo carbometoxi ligado ao carbono C-16 comum no

esqueleto para alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK, 1980), foi confirmada pela

presença de um sinal singleto integrando para três hidrogênios em δ

H

3,71, relativo ao

grupo OCH

3

-22 (δ

c

52,54), juntamente com um sinal referente a um carbono

carbonílico em δ

c

175,73. A localização deste grupo foi apoiada nos aspectos

biossintéticos para os alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK, 1980), e também

corroborada pelas correlações heteronucleares a longa distância (HMBC, Espectro

23, volume 2, página 78) através das correlações entre C-22 (δ

C

175,73)/OMe-22 (δ

H

3,71)/H-21 (δ

H

3,56)/H-17b (δ

H

2,57).

A presença de quatro sinais multipletos relativos aos dois grupos metilênicos

acoplando entre si, 2H-5 [(δ

H

3,40, m, H-5b) e (δ

H

3,20, m, H-5a)] α ao átomo de

nitrogênio, com 2H-6 [(δ

H

3,17, m, H-6b) e (δ

H

3,02, H-6a)], juntamente com os

fragmentos com m/z= 253 e m/z= 214 (Esquema 01, página 61) corroboram na

confirmação da proposta de um núcleo indólico livre de substituintes e com um grupo

carbometoxi ligado ao átomo de carbono C-16.

A presença de dois sinais duplo dupletos largos foi inferida aos hidrogênios

ligados ao átomo de carbono C-3 ligado ao átomo de nitrogênio [comum no esqueleto

para alcalóides do tipo ibogano (ZENK, 1980)] em δ

H

2,90 (H-3b) e 2,80 (H-3a) com J ~

8,4 e 3,7 Hz, juntamente com um sinal tripleto integrando para três hidrogênios em δ

H

0,90 com J= 7,3 Hz relativo a um grupo metila apresentado no espectro de RMN

1

H

(Espectro 14, volume 2, página 69), corroborado ainda pelo fragmento m/z= 323 no

espectro de massas (Espectro 27, volume 2, página 82), indicando a perda de 15

u.m.a., confirmando a presença deste grupo (Esquema 01, página 61).

O conjunto destes dados permitiu definir um esqueleto ibogano e propor a

estrutura 17 para o alcalóide isolado. Prova final desta estrutura veio da comparação

dos dados de RMN

1

H e

13

C (APT) com dados da literatura para o alcalóide

coronaridina (LOUNASMAA, 1986; MEDEIROS, 2003; SHAMMA, 1979).

Tabela 21: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) para o alcalóide (17) e

comparação com os dados de literatura da coronaridina (LOUNASMAA, 1986;

MEDEIROS, 2003; SHAMMA, 1979), em CDCl

3

. Os deslocamentos químicos (

δ

) estão

ppm e as constantes de acoplamento (J, entre parênteses) estão em Hz.

17 Coronaridina

δ

C

δ

H

δ

C

2 135,54 - 136,5

7 110,26 - 110,3

8 128,77 - 128,8

13 136,54 - 135,6

16 55,06 - 55,1

22 175,73 - 175,9

CH

9 118,41 7,47 (d, 7,7) 118,3

10 119,18 7,09 (dt, 7,0 e 1,1) 119,0

11 121,89 7,14 (dt, 7,0 e 1,1) 121,8

12 110,31 7,23 (d, 7,7) 110,3

14 27,33 1,88 (m) 27,2

20 39,10 1,33 (m) 38,9

21 57,45 3,56 (sl) 57,2

CH

2

3 51,55 2,90 (dd, 8,4 e 3,7; H-3b)

2,80 (dd, 8,4 e 3,7; H-3a)

53,1

5 53,11 3,40 (m, H-5b); 3,20 (m, H-5a) 51,5

6 22,07 3,17 (m, H-6b); 3,02 (m, H-6a) 22,2

15 32,01 1,73 (m, H-15b); 1,13 (m, H-15a) 32,0

17 36,47 2,57 (d, 11,4; H-17b)

1,91 (m, H-17a)

36,3

19 26,71 1,57(dq, 7,0 e 7,0; H-19b)

1,45 (dq, 7,0 e 7,0; H-19a)

26,6

CH

3

18 11,63 0,90 (t, 7,3) 11,6

MeO-22 52,54 3,71 (s) 52,4

HN-1 - 7,86 (s) -

Tabela 22: Constantes de acoplamento a longa distância dos átomos de hidrogênio e

carbono observados no espectro de HMBC do alcalóide coronaridina (17), em CDCl

3

.

Os deslocamentos químicos (

δ

) estão ppm e as constantes de acoplamento (J, entre

parênteses) estão em Hz.

17

δ

C

2

J

CH

3

J

CH

C

2 136,54 HN-1 H-21, 2H-6, 2H-17

7 110,26 2H-6 2H-5, H-9, HN-1

8 128,77

H-9

H-12, H-10, HN-1, 2H-6

13 135,54 - H-11, H-9

16 55,06 H-21, 2H-17 H-20

22 175,73 - H-21, OMe-22, H-17b

CH

9 118,41 H-10 H-11

10 119,18 H-9 H-12

11 121,89 H-10, H-12 H-9

12 110,31 - H-10, HN-1

14 27,33 2H-3, H-17b, 2H-15 -

20 39,10 H-21, 2H-19 Me-18

21 57,45 - 2H-19, 2H-5, H-3b

CH

2

3 51,55 - H-17b, 2H-15, 2H-5

5 53,11 2H-6 2H-3

6 22,07 2H-5 -

15 32,01 H-3a, H-20 2H-19, 2H-17, H-21

17 36,47 - H-15a, 2H-3, H-21

19 26,71 Me-18, H-20 2H-15, H-21

CH

3

18 11,63 2H-19 H-20

MeO-11

52,54

MeO-22

-

m

/

z

1

3

6

N

3

4

56

14

15

18

19

20

21

m/z 124

N

3

4

5

14

15

18

19

20

21

m/z 214

1

2

6

7

8

9

10

11

12

13

16

17

N

CH

2

H

CO

2

Me

1

2

3

4

56

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

N

H

CO

2

Me

C

21

H

26

O

2

N

2

m/z 338

m/z 323

16

20

19

m/z 122

18

21

m/z 122

15

14

3

5

N

21

20

19

18

15

14

5

4

3

m/z 253

N

H

CO

2

Me

21

16

13

12

11

10

9

8

7

6 5

4

2

1

2

3

4

56

7

14

15

17

19

20

21

N

CH

2

CO

2

Me

2

3

4

56

7

14

15

17

19

20

21

N

CH

2

CO

2

Me

m/z 323

C

21

H

26

O

2

N

2

m/z 338

N

H

CO

2

Me

21

20

19

18

17

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

6 5

4

3

2

1

Esquema 01: Proposta mecanística dos principais fragmentos no espectro de massas

do alcalóide 17.

Alcalóide 43

N

MeO

2

C

HO

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

22

O alcalóide (43) apresentou-se como um sólido amorfo de cor castanha.

A análise do espectro de RMN

13

C (APT, Espectro 37, volume 2, página 96;

Tabela 23, página 86) do alcalóide (43) permitiu reconhecer a presença de vinte e um

(21) átomos de carbono, sendo dois carbonos metílicos (um ligado a heteroátomo),

seis carbonos metilênicos (todos sp

3

, e dois ligados a heteroátomo), sete carbonos

metínicos (quatro sp

2

aromáticos, e três sp

3

, sendo um ligado a heteroátomo) e seis

carbonos quaternários (dois sp

3

e quatro sp

2

, dos quais um carbonílico e um

carbinólico) (SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro 46,

volume 2, página 105), o qual apresentou o pico do íon molecular em m/z= 354

Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

21

H

26

N

2

O

3

para o alcalóide (43).

Os dados espectrais de RMN

1

H e

13

C do alcalóide 43 (Espectros 28 a 36,

volume 2, páginas 87 a 95 ; Tabela 23, p. 86), quando comparado com o alcalóide

(17) coronaridina, revelou que suas estruturas eram bastante semelhantes mostrando

diferenças nos carbonos relativos ao núcleo indólico (anel B).

Em relação a coronaridina (17), notou-se no espectro de RMN

1

H (Espectros

28 e 29, volume 2, páginas 87 e 88; Tabela 23, página 86) a ausência do sinal

singleto, relativo ao grupo HN-1 no alcalóide 43.

No espectro de massas, onde o fragmento de m/z= 337 [C

21

H

25

O

2

N

2

]

+

é obtido

através da eliminação de um fragmento de 17 u.m.a. (HO

•

)

(Espectro 46, volume 2,

página 105) vem corroborar com a proposta da presença de um grupo hidroxila ligado

a um átomo de carbono no núcleo indólico no anel B.

A localização deste grupo hidroxila na posição C-7 deve-se ao fato de que o

sinal relativo ao carbono C-7 localizado em δ

C

110,26 (sp

2

) para o alcalóide (17), agora

se encontra em

δ

C

88,32 (sp

3

) no alcalóide (43) no espectro de RMN

13

C (Espectro 34,

volume 2, página 93; Tabela 23, página 86), valor característico para átomos de

carbono quaternário carbinólico (NIELSEN et al., 1994; AZOUG et al., 1995).

A localização da hidroxila foi apoiada nas correlações à longa distância do

carbono C-7 (δ

C

88,32) com os hidrogênios H-6a (δ

H

1,86,

2

J), H-9 (δ

H

7,34,

3

J) e H-5b

(δ

H

3,51,

3

J), observadas no espectro de HMBC (Tabela 23, página 86; Espectro 40,

volume 2, página 99). As demais correlações encontram-se sumarizadas na Tabela

23, página 86.

Portanto, o conjunto destes dados permitiu definir um esqueleto ibogano e

propor a estrutura 43 para o alcalóide isolado. Prova final desta estrutura veio da

comparação dos dados de RMN

1

H e

13

C (Tabela 23, página 86; Espectros 28 e 34,

volume 2, páginas 87 e 93) com dados da literatura para o alcalóide 7-

hidroxiindolenina-coronaridina (NIELSEN et al., 1994; AZOUG et al., 1995).

Tabela 23: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) para o alcalóide (43) e

comparação com os dados de literatura para a 7-hidroxiindolenina-coronaridina (∗

∗∗

∗)

(NIELSEN et al., 1994; AZOUG et al., 1995), em CDCl

3

. Os deslocamentos químicos (

δ

)

estão ppm e as constantes de acoplamento (J, entre parênteses) estão em Hz.

HMQC

HMBC

∗

∗∗

∗

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

δ

C

2 189,25 - H-6a; 2H-17; H-21 189,7

7 88,32 - H-5b; H-6a; H-9 88,8

8 142,63 - H-10; H-12 143,1

13 151,28 - H-9; H-11 151,8

16 58,70 - H-17a; H-21 59,0

22 173,68 - H-17a; H-21; MeO-22 -

CH

9 121,41 7,34 (d, 7,7) H-11 121,3

10 126,77 7,23 (tl, 7,0) H-12 127,3

11 129,15 7,31 (dt, 7,7 e 1,6) H-9 129,9

12 120,81 7,46 (d, 7,7) H-10 121,7

14 26,98 1,95 (m) 2H-3; H-17a H-20 27,5

20 37,54 1,40 (m) H-15b; 2H-19; H-21

3H-18 38,0

21 58,36 3,81 H-5b; 2H-17, 2H-19 58,9

CH

2

3 48,67 2,74 (m) H-17a; H-21 49,2

5 49,04 3,51

(dt, 14,6, 2,9)

2,97

(dd, 14,6, 3,3)

H-6b 2H-3; H-21 49,5

6 33,84 2,00 (ddd)

1,86 (ddd)

H-5a 34,3

15 32,00 1,78 (m)

1,10 (m)

H-20 2H-3; 2H-17; 2H-19 32,5

17 34,76 2,75 (m)

2.48

(ddd, 11,4, 4,4 e 2,0)

2H-3; H-15b; H-21 35,3

19 26,49 1,45 (m)

1,40 (m)

3H-18 H-21 27,0

CH

3

18 11,53 0,87 (d, 7,0) 2H-19 12,1

MeO-22

53,18 3,70 (s) 53,7

Alcalóide 46

22

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

N

H

MeO

2

C

O

O alcalóide 46 foi isolado como um óleo amarelo claro.

A análise do espectro de RMN

13

C (DEPT 135°, Espectro 63, volume 2, página

132; Tabela 25, páginas 124) do alcalóide 46 permitiu reconhecer a presença de vinte

e um (21) átomos de carbono, sendo dois carbonos metílicos (um ligado a

heteroátomo), cinco carbonos metilênicos (todos sp

3

, e um ligado a heteroátomo), sete

carbonos metínicos (quatro sp

2

aromáticos, e três sp

3

, sendo um ligado a heteroátomo)

e sete carbonos quaternários (um sp

3

e cinco sp

2

, dos quais dois carbonílicos)

(SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro 86,

volume 2, páginas 154), o qual apresentou o pico do íon molecular em m/z= 352

Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

21

H

24

N

2

O

3

para o alcalóide 46.

O espectro de RMN

1

H do alcalóide 46 (Espectros 61 a 64, volume 2, páginas

130 a 133; Tabela 25, página 130) apresentou sinais de deslocamentos químicos (δ

H

)

característicos de grupos metila, metoxila, hidrogênios aromáticos, grupos metínicos,

grupos metilênicos,

e ainda a presença de um hidrogênio referente a grupamento

amina (FRIEBOLIM, 1993; SILVERSTEIN, 1998).

O espectro de RMN

1

H (Espectro 61, volume 2, página 130; Tabela 25,

página 124) e de

1

H-

1

H-COSY (Espectro 79, volume 2, página 148) do alcalóide 46

apresenta quatro sinais relativos a hidrogênios aromáticos acoplando entre si a δ

H

7,60

(1H, dl, J= 7,8 Hz; H-9); 7,22 (1H, dd, J= 7,8 e 7,6 Hz; H-11); 7,18 (1H, tl, J= 7,8 Hz; H-

10); 7,31 (1H, dl, J= 7,6 Hz; H-12) característicos de um núcleo indólico, indicando que

o anel A encontra-se livre de substituintes (LOUNASMAA, 1986), confirmado através

das correlações heteronucleares dos átomos de carbono metínicos através das

correlações a

1

J

CH

entre CH-9 (δ

C

119,09)/H-9 (δ

H

7,60), CH-10 (δ

C

120,48)/H-10 (δ

H

7,18), CH-11 (δ

C

122,83)/H-11 (δ

H

7,22), CH-12 (δ

C

111,15)/H-12 (δ

H

7,31),

apresentadas no espectro de HMQC (Espectro 65, volume 2, página 134; Tabela 25,

página 124), juntamente com a presença de um sinal singleto largo a δ

H

9,16 presente

no espectro de RMN

1

H (Espectro 57, volume 2, página 126; Tabela 25, página

124), referente a um hidrogênio de um grupo HN-1, confirmando a presença de um

núcleo indólico livre de substituintes (LOUNASMAA, 1986).

A presença do núcleo indólico foi também corroborada pelas correlações

heteronucleares a longa distância apresentadas no espectro de HMBC (Espectro 70,

volume 2, página 139; Tabela 25, página 124) através das correlações a entre CH-9

(δ

C

119,09)/H-11 (δ

H

7,22), CH-10 (δ

C

120,48)/H-12 (δ

H

7,31), CH-11 (δ

C

122,83)/H-9

(δ

H

7,60), C-12 (δ

C

111,15)/H-10 (δ

H

7,18), C-7 (δ

C

104,15)/HN-1 (δ

H

9,16)/H-9 (δ

H

7,60), e C-13 (δ

C

135,58)/H-9 (δ

H

7,60)/H-11 (δ

H

7,22) as demais correlações estão

descritas na Tabela 25, página 124.

A presença de um grupo carbometoxi ligado ao carbono C-16 comum no

esqueleto para alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK, 1980), foi confirmada pela

presença de um sinal singleto integrando para três hidrogênios em δ

H

3,76, relativo ao

grupo OCH

3

-22 (δ

c

53,29), juntamente com um sinal referente a um carbono

carbonílico em δ

c

174,51. A localização deste grupo foi apoiada nos aspectos

biossintéticos para os alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK, 1980), e também

corroborada pelas correlações heteronucleares a longa distância apresentadas no

espectro de HMBC (Espectro 76, volume 2, página 145; Tabela 25, página 124)

através das correlações a entre C-22 (δ

C

174,51)/OMe-22 (δ

H

3,76).

Análise dos espectros de RMN

13

C (Espectro 61, volume 2, página 130;

Tabela 25, página 124) permitiu reconhecer a presença de um sinal em δ

C

175,83 que

é coerente com o deslocamento químico de um grupo carbonila de éster

(posteriormente observado tratar-se de uma lactama).

A ausência de quatro sinais multipletos relativos aos dois grupos metilênicos

acoplando entre si, 2H-5 [(H-5b) e (H-5a)] α ao átomo de nitrogênio, com 2H-6 [(H-6b)

e (H-6a)] presente nos alcalóides 17 e 43, descritos anteriormente, sugere da proposta

de um núcleo indólico livre de substituintes, mas com a presença de uma grupo

carbonila ligado ao átomo de carbono C-5.

A posição da carbonila em δ

C

175,73 ligada ao átomo de carbono C-5, formando

uma lactama com N-4, foi confirmada pela suas correlações a longa distância

apresentadas no espectro de HMBC (Espectro 70, volume 2, página 138; Tabela 25,

página 124) com os hidrogênios H-6a (δ

H

3,82)/H-6b (δ

H

4,15) e com H-21 (δ

H

4,59), e

também principalmente pela correlação a três ligações (

3

J) entre o átomo de carbono

quaternário C-8 (δ

C

128,01) com os dois hidrogênios 2H-6 [H-6a (δ

H

3,82) e H-6b (δ

H

4,15)].

A presença de dois sinais dupletos largos foi inferida aos hidrogênios ligados ao

átomo de carbono C-3 ligado ao átomo de nitrogênio [comum no esqueleto para

alcalóides do tipo ibogano (ZENK, 1980)] em δ

H

3,67 (H-3b) e 3,19 (H-3a) com J ~ 11,9

Hz, confirmando que a posição C-3 está livre de substituintes.

A presença de um sinal tripleto integrando para três hidrogênios em δ

H

1,04 com

J= 7,3 Hz relativo a um grupo metila na parte alifática da molécula, apresentado no

espectro de RMN

1

H (Tabela 25, página 124; Espectro 60, volume 2, página 129)

corroborado ainda pelo fragmento m/z= 337 no espectro de massas (Espectro 86,

volume 2, página 155) indicando a perda de 15 u.m.a., confirmando a presença deste

grupo livre de oxidação.

Outros sinais referentes à cadeia alifática foram confirmados pelos espectros de

correlação heteronuclear citados na Tabela 25, página 124, e por comparação com os

dados observados para coronaridina (17).

O conjunto destes dados permitiu definir um esqueleto ibogano e propor a

estrutura (46) para o alcalóide isolado. Prova final desta estrutura veio da comparação

dos dados de RMN

1

H e

13

C (DEPT 135°) com dados da literatura (RASTOGI, 1980)

para o alcalóide 5-oxocoronaridina.

A estereoquímica relativa dos átomos de carbono estereogênicos proposta para

(46) foi feita com base em dados biogenéticos, visto que todos os alcalóides com

esqueleto do tipo ibogano isolados de espécies do gênero Tabernaemontana

apresentam as configurações dos carbonos estereogênicos como apresentadas em

(46) (DANIELI & PALMISANO, 1986), e confirmadas pelo espectro de

1

H-

1

H-NOESY

(Espectro 83, volume 2, página 152; Tabela 26, página 124).

Tabela 25: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) da substância 46, em

CDCl

3

. Deslocamentos químicos (δ) em ppm, constantes de acoplamento (J) entre

parênteses.

HMQC HMBC

C

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

2 136,78 - 2H-6; H-21

5 175,83 - 2H-6

7 104,15 - 2H-6 HN-1; H-9

8 128,01 - 2H-6

13 135,58 - H-9; H-11

16 50,75 - H-21

22 174,51 - MeO-22

CH

9 119,09 7,60 (dl, 7,8) H-11

10 120,48 7,18 (tl, 7,8) H-12

11 122,83 7,22 (dd, 7,8 e 7,6) H-9

12 111,15 7,31 (dl, 7,6) H-10

14 28,29 2,22 (sl)

20 35,85 1,85 (m) 2H-19 3H-18

21 53,46 4,59 (sl)

CH

2

3 48,63 3,67 (td, 11,9)

3,19 (dl, 11,9)

H-21

6 32,90 4,15 (d, 15,4)

3,82 (d, 15,4)

15 30,27 1,87 (m)

1,40 (dl, 11,9)

H-19a; H-21

17 34,81 2,96 (dl, 13,8)

1,72 (m)

H-3b; H-21

19 28,94 1,64 (m)

1,55 (m)

3H-18

CH

3

18 12,43 1,04 (t, 7,3)

MeO-22 53,29 3,76 (s)

HN-1 - 9,16 (sl)

Tabela 26: Dados de

1

H-

1

H NOESY (500 MHz), em CDCl

3

, do alcalóide 46.

Deslocamentos químicos (δ) em ppm.

H-3a H-14

H-17b

H-3b H-14

H-15b

H-19a

H-19b

H-15 H-14

3H-18

H-17a H-14

H-15a

H-21 3H-18

H-20

H-19a

H-15a

3H-18 H-19a

H-19b

Alcalóide 48

22

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

N

H

MeO

2

C

O

O alcalóide 48 foi isolado do como um óleo castanho claro.

A análise do espectro de RMN

13

C (APT, Espectro 116, volume 2, página 192;

Tabela 29, página 183) do alcalóide 48 permitiu reconhecer a presença de vinte e um

(21) átomos de carbono, sendo dois carbonos metílicos (um ligado a heteroátomo),

cinco carbonos metilênicos (todos sp

3

, e um ligado a heteroátomo), sete carbonos

metínicos (quatro sp

2

aromáticos, e três sp

3

, sendo um ligado a heteroátomo) e sete

carbonos quaternários (um sp

3

e cinco sp

2

, dos quais dois carbonílicos)

(SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro

127, volume 2, página 203), o qual apresentou o pico do íon molecular em m/z= 352

Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

21

H

24

N

2

O

3

para o alcalóide 48.

O espectro de RMN

1

H do alcalóide 48 (Espectros 108 a 112, volume 2,

páginas 184 a 188; Tabela 29, página 183) apresentou sinais de deslocamentos

químicos (δ

H

) característicos de grupos metila, metoxila, hidrogênios aromáticos,

grupos metínicos, grupos metilênicos,

e ainda a presença de um hidrogênio referente a

grupamento amina (FRIEBOLIM, 1993; SILVERSTEIN, 1998).

O espectro de RMN

1

H (Espectro 109, volume 2, página 185; Tabela 29,

página 183) e de

1

H-

1

H-COSY (Espectro 125, volume 2, página 201) do alcalóide 48

apresenta quatro sinais relativos a hidrogênios aromáticos acoplando entre si a δ

H

7,47

(1H, d, J= 8,0 Hz; H-9); 7,15 (1H, t, J= 8,0 Hz; H-11); 7,09 (1H, t, J= 8,0 Hz; H-10); 7,24

(1H, d, J= 8,0 Hz; H-12) característicos de um núcleo indólico, indicando que o anel A

encontra-se livre de substituintes (LOUNASMAA, 1986), confirmado através das

correlações heteronucleares dos átomos de carbono metínicos através das

correlações a

1

J

CH

entre CH-9 (δ

C

118,37)/H-9 (δ

H

7,47), CH-10 (δ

C

119,61)/H-10 (δ

H

7,09), CH-11 (δ

C

122,39)/H-11 (δ

H

7,15), CH-12 (δ

C

110,57)/H-12 (δ

H

7,24),

apresentadas no espectro de HMQC (Tabela 29, página 183; Espectro 119, volume

2, página 195), juntamente com a presença de um sinal singleto largo a

δ

H

8,00

presente no espectro de RMN

1

H (Espectro 109, volume 2, página 185; Tabela 29,

página 183), referente a um hidrogênio de um grupo HN-1, confirmando a presença de

um núcleo indólico livre de substituintes (LOUNASMAA, 1986).

A presença do núcleo indólico foi também corroborada pelas correlações

heteronucleares a longa distância apresentadas no espectro de HMBC (Tabela 29,

página 183; Espectro 122, volume 2, página 198) através das correlações a entre

CH-9 (δ

C

118,37)/H-11 (δ

H

7,15), CH-10 (δ

C

119,61)/H-12 (δ

H

7,24), CH-11 (δ

C

122,39)/H-9 (δ

H

7,47), C-12 (δ

C

110,57)/H-10 (δ

H

7,09), C-7 (δ

C

109,40)/HN-1 (δ

H

8,00)

e C-13 (δ

C

135,68)/H-9 (δ

H

7,47)/H-11 (δ

H

7,15) as demais correlações estão descritas

na Tabela 29, página 183.

A presença de um grupo carbometoxi ligado ao carbono C-16 comum no

esqueleto para alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK, 1980), foi confirmada pela

presença de um sinal singleto integrando para três hidrogênios em δ

H

3,73, relativo ao

grupo OCH

3

-22 (δ

c

53,01), juntamente com um sinal referente a um carbono

carbonílico em δ

c

173,05. A localização deste grupo foi apoiada nos aspectos

biossintéticos para os alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK, 1980), e também

corroborada pelas correlações heteronucleares a longa distância apresentadas no

espectro de HMBC (Tabela 29, página 183; Espectro 124, volume 2, página 200)

através das correlações entre C-22 (δ

C

173,05)/OMe-22 (δ

H

3,73).

Análise do espectro de RMN

13

C (Tabela 29, página 183; Espectro 114,

volume 2, página 190) permitiu reconhecer a presença de um sinal em δ

C

175,76

coerente com deslocamento químico de um grupo carbonila de éster (posteriormente

observado tratar-se de uma lactama).

O desaparecimento do sinal relativo aos dois hidrogênios ligados ao átomo de

carbono C-3, e a modificação no deslocamento químico do hidrogênio H-14, em

relação ao alcalóide coronaridina (17), juntamente com os dados obtidos do espectro

de massas (Espectro 127, volume 2, página 203), bem como a análise dos espectros

de RMN

13

C (APT, Espectro 116, volume 2, página 192; Tabela 29, página 183),

HMQC (Espectro 118, volume 2, página 194; Tabela 29, página 183) e

HMBC

(Espectro 121, volume 2, página 197; Tabela 29, página 183) (vide infra) levou à

proposta estrutural do alcalóide isolado, como 48.

A posição da carbonila a δ

C

175,76 no carbono C-3, formando uma lactama com

N-4, foi confirmada pela suas correlações a

3

J

CH

no espectro de HMBC (Espectro

124, volume 2, página 200; Tabela 29, página 183) com o hidrogênio H-21 (δ

H

4,52).

Outros sinais referentes à cadeia alifática e ao grupamento éster metílico foram

confirmados pelos espectros de correlação heteronuclear citados (Tabela 29, página

183), e comparação com os dados observados para coronaridina (17), e também com

os da literatura para 3-oxoisovoacangina (MEDEIROS, 2003).

O conjunto destes dados permitiu definir um esqueleto ibogano e propor a

estrutura 48 para o alcalóide isolado. Prova final desta estrutura veio da comparação

dos dados de RMN

1

H e

13

C com dados da literatura (LOUNASMAA, 1986; FENG,

1982) para o alcalóide 3-oxocoronaridina (48).

A estereoquímica relativa dos átomos de carbono estereogênicos proposta para

(48) foi feita com base em dados biogenéticos, visto que todos os alcalóides com

esqueleto do tipo ibogano isolados de espécies do gênero Tabernaemontana

apresentam as configurações dos carbonos estereogênicos como apresentadas em

(46) (DANIELI & PALMISANO, 1986).

Tabela 29: Dados de RMN

1

H (400 MHz) e RMN

13

C (100 MHz) da substância 48, em

CDCl

3

, e comparação com dados de RMN

13

C para o alcalóide 3-oxoisovoacangina (∗)

(MEDEIROS, 2003). Os deslocamentos químicos (δ) em ppm, constantes de

acoplamento (J) entre parênteses.

HMQC HMBC

∗

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

δ

C

2 133,83 - H-6a, H-17a 132,44

3 175,76 - H-21 175,74

7 109,40 - HN-1 109,13

8 127,82 - HN-1; H-10; H-12 122,17

13 135,68 - H-9; H-11 136,43

16 55,53 - 55,47

22 173,05 - H-17a; MeO-22 173,07

11 - - 156,67

CH

9 118,37 7,47 (d, 8,0) H-11 118,91

10 119,61 7,09 (t, 8,0) H-12 109,44

11 122,39 7,15 (t. 8,0) H-9 -

12 110,57 7,24 (d, 8,0) H-10 94,31

14 38,18 2,63 H-17a 38,17

20 35,47 1,75 3H-18 35,44

21 56,10 4,52 (s) H-5a 56,19

CH

2

5 42,68 4,48 (m)

3,21 (m)

H-21 42,70

6 21,04 3,25 – 3,19 (m) 21,11

15 30,98 2,00 (m)

1.40 (m)

H-17a; 3H-19; H-21 30,98

17 35,89 2,66 (m)

2,32 (dd, 12,4 e 3,0)

35,71

19 27,61 1,55 – 1,37 3H-18 H-21 27,57

CH

3

18 11,35 0,98 (t, 7,3) 2H-19

11,27

MeO-22

53,01 3,73 (s)

52,85

HN-1 - 8,00 -

Alcalóide 47

22

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

N

MeO

2

C

HO

O

O alcalóide 47 foi isolado em mistura como um óleo castanho claro.

Os dados espectrais de RMN

1

H e

13

C (Espectros 87 a 91, volume 2, páginas

159 a 163; Tabelas 27 e 28, páginas 158 e 159) do alcalóide 47 quando comparado

com o alcalóide 3-oxocoronaridina (48) revelaram que suas estruturas eram bastantes

semelhantes, mostrando diferenças nos carbonos relativos ao núcleo indólico (anel B).

Em relação ao alcalóide (47), notou-se no espectro de RMN

1

H (Espectro 87,

volume 2, página 159; Tabela 27, página 158) de um dos alcalóides presente na

mistura, a ausência do sinal singleto, relativo ao grupo HN-1 no alcalóide 47,

semelhante ao alcalóide 7-hidroxiindoleninacoronaridina (43), onde se observou a

presença de um grupo hidroxila ligado ao átomo de carbono C-7.

A localização deste grupo hidroxila na posição C-7, em dos componentes da

mistura, deve-se ao fato de que o sinal relativo ao carbono C-7 localizado em δ

C

109,42 (sp

2

) para o alcalóide (48), agora se encontra em δ

C

88,41 (sp

3

) no alcalóide

(47), valor característico para átomos de carbono quaternário carbinólico

(SUBHADHIRASAKUL et al., 1994).

A localização da hidroxila foi apoiada nas correlações à longa distância do

carbono C-7 (δ

C

88,41) com os hidrogênios H-6a (δ

H

1,73,

2

J) e H-5a (δ

H

3,35,

3

J),

observadas no espectro de HMBC (Espectro 96, volume 2, página 168; Tabela 27,

página 158). As demais correlações encontram-se sumarizadas na Tabela 27, página

158.

Observou-se através dos espectros de RMN

1

H,

13

C,

1

H-

1

H-COSY, HMQC e

HMBC (Tabelas 27 e 28, páginas 158 e 159; Espectros 87 a 107, volume 2,

páginas 159 a 179) que o alcalóide 47 encontra-se em mistura com o alcalóide 48.

Portanto, a estrutura do alcalóide (47) foi estabelecida como a 7-

hidroxiindolenina-3-oxocoronaridina (47) em mistura com a 3-oxocoronaridina (48).

Tabela 27: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) para o alcalóide 47,

em mistura em CDCl

3

. Os deslocamentos químicos (δ) em ppm, constantes de

acoplamento (J) entre parênteses.

HMQC HMBC

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

C

2 186,68 - H-6a; H-17a; H-21

3 175,70 - H-15a; 2H-17; H-21

7 88,41 - H-6a H-5a

8 141,24 - H-10; H-12

13 151,00 - H-9; H-11

16 59,56 - 2H-17; H-21

22 171,84 - H-17a; MeO-22

CH

9 121,72 7,40 (m) H-11

10 127,23 7,31 (t, 7,6) H-12

11 129,77 7,35 (t, 7,6) H-9

12 121,20 7,51 (m) H-10

14 38,17 2,60 (m)

20 34,81 1,70 (m) 3H-18

21 61,31 4,77 (s) H-5a

CH

2

5 43,67 4,37 (dd, 13,5 e 5,1)

3,35 (dd, 13,5 e 2,8)

H-21

6 37,57 2,30 (td, 13,4)

1,73 (m)

15 30,54 2,06 (m)

1,40 (m)

H-17a; 2H-19; H-21

17 35,12 3,00 (d, 13,5)

2,60 (m)

H-21

19 27,62 1,50 – 1,39 (m) 3H-18 H-21

CH

3

18 11,35 1,03 (t, 7,4) 2H-19

MeO-22

52,60 3,81 (s)

HN-1 -

Tabela 28: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) para o alcalóide 48,

em mistura em CDCl

3

. Os deslocamentos químicos (δ) em ppm, constantes de

acoplamento (J) entre parênteses.

HMQC HMBC

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

C

2 133,81 - H-6a, H-17a

3 175,77 - H-21

7 109,42 - HN-1

8 127,82 - HN-1; H-10; H-12

13 135,66 - H-9; H-11

16 55,53 -

22 173,04 - H-17a; MeO-22

CH

9 118,37 7,53 (m) H-11

10 119,62 7,14 (t, 7,6) H-12

11 122,40 7,20 (t, 7,6) H-9

12 110,37 7,30 (m) H-10

14 38,19 2,66 (m) H-17a

20 35,47 1,76 (m) 3H-18

21 56,10 4,57 (s) H-5a

CH

2

5 42,69 4,54 (m)

3,28 (m)

H-21

6 21,04 3,30 – 3,20 (m)

15 30,98 2,06 (m)

1,40 (m)

H-17a; 3H-19; H-21

17 35,90 2,70 (m)

2,35 (d, 12,9)

19 27,42 1,50 – 1,39 (m) 3H-18 H-21

CH

3

18 11,29 0,98 (t, 7,3) 2H-19

MeO-22

53,02 3,78 (s)

HN-1 - 8,03 (s)

Alcalóide 21

17

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

16

21

20

19

18

Me

N

MeO

2

C

H

O

1

4

O alcalóide 21 foi isolado, na forma de cristais incolores apresentando ponto de

fusão 109-110 °C.

A análise do espectro de RMN

13

C (APT, Espectros 139 a 141, volume 2,

páginas 221 a 223; Tabela 30, página 208) do alcalóide (21) permitiu reconhecer a

presença de vinte e um (21) átomos de carbono, sendo três carbonos metílicos (dois

ligados a heteroátomos e um alílico), três carbonos metilênicos (todos sp

3

, um ligado a

heteroátomo), oito carbonos metínicos (cinco sp

2

e três sp

3

, sendo um ligado a

heteroátomo) e sete carbonos quaternários (todos sp

2

, dos quais dois carbonílicos)

(SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro

151, volume 2, página 232; Esquema 02, página 209), o qual apresentou o pico do

íon molecular em m/z= 352 Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

21

H

24

N

2

O

3

para o alcalóide (21).

O espectro de RMN

1

H do alcalóide (21) (Espectros 128 a 133, volume 2,

páginas 210 a 215; Tabela 30, página 208) apresentou sinais de deslocamentos

químicos (δ

H

) característicos de grupos metila, metoxila, hidrogênios aromáticos,

grupos metínicos, grupos metilênicos,

e ainda a presença de um hidrogênio referente a

grupamento amina (SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

O espectro de massas (Espectro 151, volume 2, página 232; Esquema 02,

página 209) se apresenta relativamente com poucos picos intensos além do íon

molecular e alguns fragmentos significativos são observados a m/z= 337 [M-15], 293

[M-59], 194, e 122. Este espectro de massas é característico para alcalóides indólicos

do tipo vobasina (21) e derivados (BUDZIKIEWICZ, 1964), cujos dados são idênticos

ao alcalóide 21 isolado, e coerentemente com esta proposta a formação de

fragmentação descrita no Esquema 02, página 209.

Na análise do espectro de RMN

13

C (Espectro 134, volume 2, página 216;

Tabela 30, página 208), observou-se sinais a δ

C

134,16; 136,38 128,54; 126,77;

120,91; 120,47; 120,14 e 111,74, sugerindo a presença de um núcleo indólico, onde o

anel A encontra-se livre de substituintes (MEDEIROS, 2003; SHAMMA, 1979). Os

dados de RMN

13

C são resumidos na Tabela 30, página 208.

O espectro de RMN

1

H do alcalóide 21 (Espectro 129, volume 2, página 211;

Tabela 30, página 208) apresenta quatro sinais relativos a hidrogênios aromáticos a

δ

H

7,71 (1H, d, J= 8,0 Hz; H-9); 7,33 (1H, m; H-12); 7,34 (1H, m; H-11); 7,16 (1H, m; H-

10) característicos de um núcleo indólico, indicando que o anel A encontra-se livre de

substituintes (LOUNASMAA, 1986), confirmado através das

correlações

heteronucleares dos átomos de carbono metínicos apresentadas no espectro de

HMQC (Espectro 143, volume 2, página 225) através das correlações a

1

J

CH

entre

CH-9 (δ

C

120,47)/H-9 (δ

H

7,71), CH-10 (δ

C

120,91)/H-10 (δ

H

7,16), CH-11 (δ

C

126,77)/H-11 (δ

H

7,34), CH-12 (δ

C

111,74)/H-12 (δ

H

7,33), juntamente com a presença

de um sinal singleto largo a δ

H

8,96 referente a um hidrogênio de um grupo H-N,

confirmando a presença de um núcleo indólico livre de substituintes (AZOUG et al.,

1995).

A presença do núcleo indólico foi também corroborada pelas correlações

heteronucleares a longa distância apresentadas no espectro de HMBC (Espectro 146,

volume 2, página 228; Tabela 30, página 208) através das correlações a entre CH-9

(δ

C

120,47)/H-11 (δ

H

7,34), CH-10 (δ

C

120,91)/H-12 (δ

H

7,16), CH-11 (δ

C

126,77)/H-9

(δ

H

7,71), C-12 (δ

C

111,74)/H-10 (δ

H

7,16) e C-13 (δ

C

136,38)/H-9 (δ

H

7,71)/H-11 (δ

H

7,34) as demais correlações estão descritas na Tabela 30, página 208.

A presença de dois singletos integrando para três hidrogênios cada, no espectro

de RMN

1

H (Espectro 133, volume 2, página 215; Tabela 30, página 208), a δ

H

2,61

e δ

H

2,65 são referentes aos grupos MeN-4 da cadeia alifática, e um OMe-17 do

grupamento carbometoxi, respectivamente, confirmados pelos sinais apresentados no

espectro de RMN

13

C (Espectro 137, volume 2, página 219; Tabela 30, página 208),

a δ

C

42,27 (MeN-4) e 50,40 (MeO-17) (MEDEIROS, 2003; AZOUG et al., 1995;

SHAMMA, 1979).

A presença do grupamento etileno ligado ao C-sp

2

pode ser reconhecido pelo

sinal a δ

H

1,72 (3H, dd, J = 6,6 e 1,8 Hz) que se acopla ao quadrupleto largo a δ

H

5,48

(1H, J = 6,6 Hz). O espectro de RMN

13

C (Espectro 134, volume 2, página 216;

Tabela 30, página 208) confirma esta análise, sendo observado sinais à δ

C

136,38 e

121,13 referentes aos átomos de carbono sp

2

do grupo etileno, corroborado pela

correlação heteronuclear a longa distância apresentadas no espectro de HMBC

(Espectro 148, volume 2, página 230; Tabela 30, página 208) através da correlação

entre C-20 (δ

C

136,38)/Me-18 (δ

H

1,72) e CH-19 (δ

C

121,13)/Me-18 (δ

H

1,72).

Além destes são observados sinais de grupos, carbonila conjugada em C-3 (δ

C

190,08), e de carbonila de éster em C-17 (δ

C

171,23). As atribuições dos sinais

restantes da cadeia alifática apresentados nos espectros de RMN de

1

H e

13

C estão

descritos na Tabela 30, página 208 foram feitas com base nos parâmetros conhecidos

para deslocamentos químicos de hidrogênio e carbono, e comparação com dados da

literatura para vobasina (21) (MEDEIROS, 2003; AZOUG et al., 1995; SHAMMA,

1979).

A estereoquímica S do C-16 foi definida com base nos deslocamentos químicos

dos carbonos do grupamento carbometoxi ligado a este carbono, presente no espectro

de RMN

13

C. Quando este grupo encontra-se na posição equatorial, há uma

proximidade dos átomos de carbono deste, com o núcleo indólico, causando uma

proteção de aproximadamente 3 ppm (CH

3

-O) e 1,7 ppm (C=O), devido ao efeito

anisotrópico do anel aromático, em comparação com a posição axial deste grupo

(CLIVIO et al., 1990; MEDEIROS, 2003), que não possui esta proximidade (Tabela 30,

página 208), corroborada ainda, por uma proteção anisotrópica de aproximadamente

0,86 ppm dos hidrogênios da MeO-22, apresentada no espectro de RMN

1

H (Espectro

128, volume 2, página 210; Tabela 30, página 208).

A prova final da estrutura proposta 21 adveio das correlações heteronucleares

observadas nos experimentos de HMQC e HMBC (Espectros 142 e 145, volume 2,

páginas 224 e 227; Tabela 30, página 208), e comparação dos dados de RMN

1

H e

RMN

13

C com os relatados na literatura para vobasina (21) e seu epímero no átomo de

carbono CH-16 (MEDEIROS, 2003; AZOUG et al., 1995; SHAMMA, 1979; CLIVIO et

al., 1990).

Tabela 30: Dados espectrais de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) para o alcalóide

21, em CDCl

3

e comparação com dados de literatura para o alcalóide vobasina

(MEDEIROS, 2003). Os deslocamentos químicos estão em δ (δ

H

e δ

C

, ppm) e as

constantes de acoplamento (J, entre parênteses) em Hz.

HMQC HMBC

Vobasina

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

δ

C

2 134,16 - 2H-6; H-14b 134,16

3 190,08 - 2H-14 190,10

7 120,14 - 2H-6 120,17

8 128,54 - 2H-6 128,49

13 136,38 - H-9; H-11 136,52

17 171,23 - MeO-17 171,20

20 135,66 - H-21b H-14a; 3H-18 135,70

CH

5 57,31 3,99 (dt, 10,6 e 2,9) 2H-6 MeN-1; H-21b 57,28

9 120,47 7,71 (d, 8,0) H-11 120,83

10 120,91 7,16 (m) H-12 120,39

11 126,77 7,34 (m) H-9 126,70

12 111,74 7,33 (m) H-10 111,84

15 30,50 3,87 (m) 2H-14 H-19; H-21b 30,47

16 46,51 2,84 (t, 3,3) H-6b; H-14b 46,46

19 121,13 5,48 (q, 6,6) 3H-18 H-21b 121,07

CH

2

6 20,53 3,54 (dd, 147 e 1,3)

3,44 (dd, 14,7 e 8,1)

20,52

14 43,07 3,32 (dd, 13,2 e 11,7)

2,73 (dd, 13,2 e 7,0)

43,06

21 51,81 3,86 (dl, 14,3)

3,00 (d, 14,3)

MeN-1; H-19 51,78

CH

3

18 12,35 1,72 (dd, 6,6 e 1,8) H-19 12,28

MeN-4 42,27 2,61 (s) 42,22

MeO-17

50,40 2,65 (s) 50,37

HN-1 - 8,95 (s) -

m/z 194

m/z 122

m/z 180

M 352

m/z 294

CO

2

Me

N

CO

2

Me

CH

3

N

CO

2

Me

CH

3

Me

N

H

O

N CH

3

N

CO

2

Me

CH

3

N

CO

2

Me

CH

3

N

CH

2

H

O

N

CO

2

Me

CH

3

H

N

CH

2

H

O

N

CO

2

Me

H

CH

3

Me

N

MeO

2

C

H

O

Esquema 02: Proposta dos principais fragmentos apresentados no espectro de

massas do alcalóide 21, em comparação com dados de literatura do espectro de

massas para o alcalóide vobasina (BUDZIKIEWICZ, 1964).

Alcalóide 49

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

N

H

O

O alcalóide 49 foi isolado como um óleo amarelo claro.

No espectro da região do infravermelho do alcalóide 49 (Espectro 174, volume

2, página 262) pode se reconhecer absorções características de N-H (3217 cm

-1

), de

dois grupos carbonila (1636 e 1612 cm

-1

) e de anel benzênico (1219, 1177, 750 cm

-1

)

(SILVERSTEIN, 1998).

A análise do espectro de RMN

13

C (Espectro 155, volume 2, página 243;

Tabela 31, página 237) do alcalóide 49 permitiu reconhecer a presença de dezenove

(19) átomos de carbono, sendo um carbono metílico, quatro carbonos metilênicos

(todos sp

3

, e um ligado a heteroátomo), oito carbonos metínicos (quatro sp

2

aromáticos, e quatro sp

3

, sendo um ligado a heteroátomo) e seis carbonos

quaternários (todos sp

2

, dos quais dois são carbonílicos) (SILVERSTEIN, 1998;

FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro

173, volume 2, página 261; Esquema 03, página 239), o qual apresentou o pico do

íon molecular em m/z= 308 Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

19

H

20

N

2

O

2

para o alcalóide 49.

O espectro de RMN

1

H do alcalóide 49 (Espectro 152, volume 2, página 240;

Tabela 31, página 237) apresentou sinais de deslocamentos químicos (δ

H

)

característicos de grupos metila, hidrogênios aromáticos, grupos metínicos, grupos

metilênicos,

e ainda a presença de um hidrogênio referente a grupamento amina

(SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

O espectro de RMN

1

H (Espectro 153, volume 2, página 241; Tabela 31,

página 237) e de

1

H-

1

H-COSY (Espectro 166, volume 2, página 254) do alcalóide 49

apresenta quatro sinais relativos a hidrogênios aromáticos a

δ

H

8,19 (1H, m; H-9); 7,24

(1H, m; H-10); 7,24 (1H, m; H-11); 7,51 (1H, m; H-12) característicos de um núcleo

indólico, indicando que o anel A encontra-se livre de substituintes (LOUNASMAA,

1986), confirmado através das correlações heteronucleares dos átomos de carbono

metínicos apresentadas no espectro de HMQC (Espectro 161, volume 2, página 249;

Tabela 31, página 237) através das correlações a

1

J

CH

entre CH-9 (δ

C

121,03)/H-9 (δ

H

8,19), CH-10 (δ

C

123,02)/H-10 (δ

H

7,24), CH-11 (δ

C

124,06)/H-11 (δ

H

7,24), CH-12 (δ

C

112,28)/H-12 (δ

H

7,51), juntamente com a presença de um sinal singleto largo a δ

H

11,05 referente a um hidrogênio de um grupo H-N, confirmando a presença de um

núcleo indólico livre de substituintes (AZOUG et al., 1995).

A presença do núcleo indólico foi também corroborada pelas correlações

heteronucleares a longa distância apresentadas no espectro de HMBC (Espectro 165,

volume 2, página 253; Tabela 31, página 237), através das correlações a entre CH-9

(δ

C

121,03)/H-11 (δ

H

7,24), CH-10 (δ

C

123,02)/H-12 (δ

H

7,51), CH-11 (δ

C

124,06)/H-9

(δ

H

8,19), C-12 (δ

C

112,28)/H-10 (δ

H

7,24), C-7 (δ

C

110,83)/HN-1 (δ

H

11,05), C-8 (δ

C

126,68)/H-12 (δ

H

7,51)/HN-1 (δ

H

11,05) e C-13 (δ

C

136,13)/H-9 (δ

H

8,19)/HN-1 (δ

H

11,05) as demais correlações estão descritas na Tabela 31, página 237.

No alcalóide (49) nota-se a ausência de um grupo carbometoxi ligado ao

carbono C-16 comum no esqueleto para alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK,

1980), semelhante ao alcalóide ibogamina (43).

Análise do espectro de RMN

13

C (Espectro 155, volume 2, página 243; Tabela

31, página 237) permitiu reconhecer a presença de um sinal em δ

C

169,82, o qual é

coerente com o deslocamento químico de um grupo carbonila de uma lactama,

semelhante ao alcalóide 46, e ainda a presença de mais um sinal referente a um

carbono carbonílico em δ

C

184,91.

A ausência dos sinais relativos aos dois grupos metilênicos acoplando entre si,

2H-5 [(H-5b) e (H-5a)] α ao átomo de nitrogênio, com 2H-6 [(H-6b) e (H-6a)] presente

nos alcalóides 17, 43, 48 e 47, descritos anteriormente, sugere da proposta de um

núcleo indólico livre de substituintes, mas com a presença de dois grupos carbonila

ligados aos átomos de carbono C-5 e C-6, respectivamente.

A posição da carbonila a δ

C

169,82 ligada ao átomo de carbono C-5, formando

uma lactama com N-4, foi confirmada pela correlação

3

J a longa distância apresentada

no espectro de HMBC (Espectro 162, volume 2, página 250; Tabela 31, página 237)

entre C-5 (δ

C

169,82), com um sinal dupleto largo em δ

H

4,09, referente ao hidrogênio

H-21. A ausência dos sinais dupletos referentes aos dois hidrogênios 2H-6 presentes

no alcalóide 46, juntamente com a presença do sinal em

δ

C

184,91 apresentado no

espectro de RMN

13

C (Tabela 31, página 237; Espectro 155, volume 2, página 243),

confirmam a presença de um outro grupo carbonila ligado ao átomo de carbono C-6.

A presença de dois sinais dupletos largos foi inferida aos hidrogênios ligados ao

átomo de carbono C-3 ligado ao átomo de nitrogênio [comum no esqueleto para

alcalóides do tipo ibogano (ZENK, 1980)] em δ

H

3,92 (H-3b) e 3,36 (H-3a) com J ~ 10,9

Hz, confirmando que a posição C-3 está livre de substituintes.

A presença de um sinal tripleto integrando para três hidrogênios em δ

H

0,99 com

J= 7,3 Hz, relativo a um grupo metila na parte alifática da molécula, apresentado no

espectro de RMN

1

H (Tabela 31, página 237; Espectro 154, volume 2, página 242)

confirmando a presença de um grupo etila ligado ao átomo de carbono C-20.

Outros sinais referentes à cadeia alifática foram confirmados pelos espectros de

correlação heteronuclear citados na Tabela 31, página 237, e por comparação com os

dados observados para ibogamina (43), a 5-oxocoronaridina (46), e com a 5-hidroxi-6-

oxocoronaridina (RASTOGI, 1980), onde o conjunto destes dados permitiu definir um

esqueleto ibogano, e propor a estrutura 49 para o alcalóide isolado.

A estereoquímica relativa dos átomos de carbono estereogênicos proposta para

(49) foi feita com base em dados biogenéticos, visto que todos os alcalóides com

esqueleto do tipo ibogano isolados de espécies do gênero Tabernaemontana

apresentam as configurações dos carbonos estereogênicos como apresentadas em

(49) (DANIELI & PALMISANO, 1986), e confirmadas pelo espectro de

1

H-

1

H-NOESY

(Tabela 32, página 238; Espectro 168, volume 2, página 256).

Pelo melhor do nosso conhecimento, o conjunto de dados acima permitiu propor

a estrutura para este novo alcalóide como a 5,6-dioxoibogamina (49).

Tabela 31: Dados de RMN

1

H (500 MHz) e RMN

13

C (125 MHz) da substância 49, em

CDCl

3

. Deslocamentos químicos (δ) em ppm, constantes de acoplamento (J) entre

parênteses.

HMQC

HMBC

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

C

2 155,20 - HN-1; H-16 H-17b; H-21

5 169,58 - H-3a; H-21

6 184,73 -

7 110,66 - HN-1; H-16

8 126,46 - HN-1; H-10; H-12

13 135,87 - HN-1; H-12 H-9; H-11

CH

9 121,04 8,15 (m) H-11

10 122,79 7,18 (m) H-12

11 123,84 7,20 (m) H-9

12 111,99 7,45 (m) H-10

14 28,64 2,19 (m)

16 37,68 3,30 (m) H-17b

20 38,79 1,93 H-15a; 2H-19; H-21 H-16; 3H-18

21 55,36 4,04 (d, 2,2) 2H-3, H-15a; 2H-19

CH

2

3 49,65 3,89 (dl, 9,9)

3,29

2H-17; H-21

15 29,76 1,96 (m)

1,45 (m)

2H-3; 2H-19; H-21

17 31,07 2,39 (tl, 11,0)

1,71 (dd, 11,0 e 6.7)

H-15b

19 28,31 1,57 (m)

1,47 (m)

3H-18

CH

3

18 11,93 0,95 (t, 7,3) 2H-19

HN-1 - 10,85 (s)

Tabela 32: Dados de 1H-1H NOESY (500 MHz) em CDCl

3

do alcalóide 49.

Deslocamentos químicos (δ) em ppm.

H-N1 H-17a

H-3ª H-17a

H-14

H-15b

H-3b H-15b

H-19b

H-14

H-15ª H-15b

H-16 H-20

H-14

H-17a

H-17ª H-17b

H-21 H-15b

H-20

N

H

N

O O

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21 21

20

19

18

17

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

4

3

2

1

N

H

N

O

C

19

H

20

N

2

O

2

m/z 308

CO

C

18

H

20

N

2

O

m/z 280

N

H

C

O

1

2

7

8

9

10

11

12

13

m/z 170

3

4

14

16

17

21

N

C

O

m/z 108

3

4

14

15

16

17

19

20

21

N

m/z 121

Esquema 03: Proposta mecanística dos principais fragmentos no espectro de massas

do alcalóide 49.

Alcalóide 16

N

H

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

N

H

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

N

H

MeO

2

7

8

9

10

11

12

13

3

5

6

14

15

17

16

21

20

19

18

16

16-a

16-b

O alcalóide (16) foi isolado como um sólido amorfo, apresentando ponto de

fusão 165°C (HENRY, 1996).

A análise do espectro de RMN

13

C (Espectro 181, volume 2, página 274;

Tabela 33, página 267) do alcalóide (16) permitiu reconhecer a presença de dezenove

(19) átomos de carbono, sendo um metílico, seis metilênicos (todos sp

3

, e dois ligados

a um heteroátomo), oito metínicos (quatro sp

2

aromáticos, e quatro sp

3

, sendo dois

ligados a um heteroátomo) e quatro quaternários (todos sp

2

) (SILVERSTEIN, 1998;

FRIEBOLIM, 1993; LOUNASMAA, 1986; SHAMMA, 1979).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro

182, volume 2, página 275), o qual apresentou o pico do íon molecular em m/z= 280

Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

19

H

24

N

2

para o alcalóide (16).

O espectro de RMN

1

H do alcalóide (16) (Espectros 175 a 180, volume 2,

páginas 268 a 273; Tabela 33, página 267) apresentou sinais (δ

H

) correspondentes a

grupo metila, hidrogênios aromáticos, grupos metínicos, grupos metilênicos

e

hidrogênio ligado a nitrogênio referente a grupamento amina (SILVERSTEIN, 1998;

FRIEBOLIM, 1993; LOUNASMAA, 1986; SHAMMA, 1979).

O espectro de RMN

1

H do alcalóide (16) (Espectro 175, volume 2, página 268;

Tabela 33, página 267) apresenta quatro sinais relativos a hidrogênios aromáticos a

δ

H

7,46 (dd, J= 8,4 e 1,5 Hz; H-9); 7,09 (dt; J= 8,4 e 1,5 Hz, H-10); 7,10 (dt; J= 8,4 e

1,5 Hz, H-11); 7,24 (dd, J= 8,4 e 2,2 Hz; H-12) característicos do anel A (benzênico) de

um núcleo indólico livre de substituintes (AZOUG et al., 1995; LOUNASMAA, 1986),

confirmado pelos sinais observados no espectro de RMN

13

C (Espectro 181, volume

2, página 274; Tabela 33, página 267) em δ

C

117,89 (CH-9); δ

C

119,08 (CH-10); δ

C

120,92 (CH-11) e δ

C

110,06 (CH-12).

A presença do núcleo indólico livre de substituintes foi também corroborado pela

presença dos fragmentos m/z= 168 e 156 u.m.a. apresentado no espectro de massas

(Espectro 182, volume 2, página 275; Esquema 04, página 266).

No alcalóide (16) nota-se a ausência de um grupo carbometoxi ligado ao

carbono C-16 comum no esqueleto para alcalóides indólicos monoterpênicos (ZENK,

1980).

A presença de três sinais multipletos relativos aos dois grupos metilênicos do

núcleo indólico, 2H-5 [(δ

H

3,39, m, H-5b) e (δ

H

3,17, m, H-5a)] α ao átomo de

nitrogênio, com 2H-6 [(δ

H

3,17, m, H-6b) e (δ

H

2,69, H-6a)], juntamente com os

fragmentos com m/z= 168 (Espectro 182, volume 2, página 275; Esquema 04,

página 266) corroboram na confirmação da proposta de um núcleo indólico livre de

substituintes.

A presença de um sinal tripleto integrando para três hidrogênios em δ

H

0,90 com

J= 7,0 Hz relativo a um grupo metila apresentado no espectro de RMN

1

H (Espectro

180, volume 2, página 273; Tabela 33, página 267), sugere a presença de um grupo

etila livre de oxidação na cadeia lateral da porção terpênica do alcalóide (16)

(LOUNASMAA, 1986; SHAMMA, 1979).

O conjunto desses dados permite classificar o alcalóide (16) com um esqueleto

pertencente da classe ibogano, definindo o alcalóide (16) como sendo proposta a

estrutura semelhante a epi-ibogamina (16-a). A prova final desta proposta adveio da

comparação dos dados espectroscópicos do alcalóide (16) com os dados de literatura

para a epi-ibogamina (16-a) e a ibogamina (16-b) (LOUNASMAA, 1986; SHAMMA,

1979).

A estereoquímica relativa dos átomos de carbono estereogênicos proposta para

(16) foi feita com base em dados biogenéticos, visto que todos os alcalóides com

esqueleto do tipo ibogano isolados de espécies do gênero

Tabernaemontana

apresentam as configurações dos carbonos estereogênicos como apresentadas em

(16) (DANIELI & PALMISANO, 1986).

Em relação à configuração do grupo etila ligado ao átomo de carbono C-20,

sabe-se através de dados de literatura que o alcalóide ibogamina (16-a) apresenta

ponto de fusão 129-132 °C, e seu epímero a epi-ibogamina (16-b) de 193-197 °C

(HENRY, 1996), enquanto que o alcalóide 16 apresentou ponto de fusão de 163-165

°C, onde não se pode chegar a uma conclusão sobre a configuração do grupo etila.

Tabela 33: Dados de RMN

1

H (400 MHz),

13

C (100 MHz) do alcalóide (16), em CDCl

3

em comparação com dados de literatura (SHAMMA, 1979) para a epi-ibogamina (16-

a) e ibogamina (16-b) em CDCl

3

. Os deslocamentos químicos (δ) estão em ppm e a

constantes de acoplamento (J) estão em Hz.

Alcalóide 16

Epi-ibogamina

Ibogamina

δ

C

δ

H

δ

C

δ

C

2 141,83 - 141,9

7 109,22 - 109,7

8 129,73 - 129,8

13 134,65 - 134,2

CH

9 117,89 7,46 (dd, 8,4 e 1,5) 117,5

10 119,08 7,09 (dt, 8,4 e 1,5) 118,8

11 120,92 7,10 (dt, 8,4 e 1,5) 120,6

12 110,06 7,24 (dd, 8,4 e 2,2) 110,2

14 26,52 1,83 (m) 26,9 26,3

16 41,49 2,91 (m) 33,7 41,2

20 41,97 1,54 (m) 41,6 41,8

21 57,55 2,92 (sl) 57,0 57,3

CH

2

3 54,15 3,12 (m); 3,01 (m) 54,5 54,1

5 49,93 3,39 (m); 3,17 (m) 49,3 49,8

6 20,65 3,17 (m); 2,69 (m) 20,0 20,5

15 32,13 1,83 (m); 1,21 (m) 31,4 31,9

17 34,19 2,03 (m); 1,57 (m) 34,7 34,0

19 27,83 2,02 (m); 1,60 (m) 28,2 27,7

CH

3

18 11,90 0,90 (t, 7,0) 11,9 11,8

HN-1 - 7,61 (s)

m/z 136

N

H

3

4

14

15

16

17

18

19

20

21

N

21

20

19

17

16

15

14

5

4

3

m/z 168

1

2

5

6

7

8

9

10

11

12

13

16

17

N

CH

2

m/z 156

1

2

6

7

8

9

10

11

12

13

16

17

N

CH

2

H

Me

.

N

H

21

20

19

17

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

6 5

4

3

2

1

C

19

H

24

N

2

m/z 265

C

19

H

24

N

2

m/z 280

1

2

3

4

56

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

N

H

Esquema 04: Proposta mecanística dos principais fragmentos no espectro de massas

do alcalóide 16

Alcalóide 41

N

H

CH

3

N

CH

3

1

2

3

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

20

19

18

17

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

3

2

1

N

CH

3

CH

3

N

H

41

41-a

A

B

C D

A

B

C

D

O alcalóide 41 foi isolado como cristais amarelos claro, com ponto de fusão 243-

246 °C (decomposição).

A análise dos dados de RMN

13

C (Espectro 185, volume 2, página 282;

Tabela 34, página 279) mostrou que o alcalóide 41 apresenta dezessete (17) átomos

de carbono, sendo dois metílicos ligados a carbonos sp

2

, sete metínicos (todos sp

2

) e

oito átomos de carbono quaternário (todos sp

2

) (SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM,

1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro

195, volume 2, página 292), o qual apresentou o pico do íon molecular em m/z= 246

Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

17

H

14

N

2

para o alcalóide 41.

O espectro de RMN

1

H (Espectro 184, volume 2, página 281; Tabela 34,

página 279) apresenta quatro sinais relativos a hidrogênios do núcleo benzênico

acoplando entre si, mostrado no espectro de

1

H-

1

H-COSY (Espectro 194, volume 2,

página 291) em δ

H

8,29 (1H, d, J= 7,7 Hz; H-9), δ

H

7,28 (m; H-10), δ

H

7,54 (m; H-11),

δ

H

7,54 (m; H-12), característico de um núcleo indólico livre de substituintes no anel A

(AZOUG et al., 1995) confirmado pelas correlações heteronucleares apresentadas no

espectro de HSQC (Espectro 189, volume 2, página 286; Tabela 34, página 279)

onde se observam às correlações

1

J

CH

entre CH-9 (δ

C

122,48)/H-9 (δ

H

8,29), CH-10 (δ

C

121,23)/H-10 (δ

H

7,28), CH-11 (δ

C

129,62)/H-11 (δ

H

7,54) e CH-12 (δ

C

112,28)/H-12 (δ

H

7,54).

A presença do núcleo indólico livre de substituintes foi corroborada pelas

correlações heteronucleares a longa distância apresentadas no espectro de HMBC

(Espectro 192, volume 2, página 289; Tabela 34, página 279) onde se observam as

correlações

3

J

CH

entre CH-11 (δ

C

129,62)/H-9 (δ

H

8,29); CH-12 (δ

C

112,28)/H-10 (δ

H

7,28); C-2 (δ

C

144,08)/H-18 (δ

H

8,92)/3H-17 (δ

H

2,84); C-7 (δ

C

128,23)/H-9 (δ

H

8,29) e

C-8 (δ

C

124,11)/H-18 (δ

H

8,92).

A presença de dois singletos integrando para três hidrogênios cada um,

apresentados no espectro de RMN

1

H (Espectro 183, volume 2, página 280; Tabela

34, página 279), em δ

H

2,84 e δ

H

3,13 foi inferida aos hidrogênios de dois grupos

metila, apresentando correlações no espectro de HSQC (Espectro 189, volume 2,

página 286; Tabela 34, página 279)

1

J

CH

3

-21 (δ

C

21.14)/H-21 (δ

H

3,13) e CH

3

-17

(δ

C

12,60)/H-17 (δ

H

2,84).

A presença dos dois grupos metila e suas localizações na molécula foi

corroborada pelas correlações heteronucleares a longa distância apresentadas no

espectro de HMBC (Espectro 190, volume 2, página 257; Tabela 34, página 279)

entre os carbonos quaternários, a

2

J

CH

entre C-16 (δ

C

113,18)/3H-17 (δ

H

2,84); C-20

(δ

C

159,49)/3H-21 (δ

H

3,13) e a

3

J

CH

entre C-2 (δ

C

144,08)/3H-17 (δ

H

2,84); C-15 (δ

C

134,66)/3H-17 (δ

H

2,84) e C-19 (δ

C

122,83)/3H-21 (δ

H

3,13).

A presença de dois sinais dupletos no anel D do alcalóide 41, apresentados no

espectro de RMN

1

H (Espectro 184, volume 2, página 281; Tabela 34, página 279)

acoplando entre si, relativos aos hidrogênios H-3 em δ

H

8,14 e H-14 em δ

H

8,00,

ambos com J= 6,5 Hz confirmados no espectro de

1

H-

1

H-COSY (Espectro 194,

volume 2, página 291), juntamente com um sinal simples relativo a um hidrogênio em

δ

H

8,92 no anel C, confirmam o restante da molécula (AZOUG et al., 1995). As demais

correlações estão listadas na Tabela 34, página 279.

O conjunto de dados do alcalóide 41 em questão permitiu definir um esqueleto

semelhante ao alcalóide ellipticina (41-a) (LOUNASMAA, 1986).

A confirmação da estrutura do alcalóide (41) como sendo a olivacina (41) (Me-

21 ligada no C-20) e não a ellipticina (41-a) (Me-21 ligada no C-18) foi feita com base

no valor do deslocamento químico do sinal simples referente ao H-18 em δ

H

8,92 (41),

enquanto que na ellipticina (41-a) o H-20 encontra-se em δ

H

9,62 (LOUNASMAA, 1986;

AZOUG et al., 1995).

As correlações a longa distância apresentadas no espectro de HMBC (Espectro

190, volume 2, página 257; Tabela 34, página 279) como já mostrado anteriormente

confirmam a posição dos dois grupos metila, e a prova final adveio da comparação dos

dados espectroscópicos com dados de literatura para o alcalóide olivacina (41), isolado

do extrato das cascas das raízes em metanol de Tabernaemontana hystrix por

Monnerat (2005).

Tabela 34. Dados de RMN

1

H (500 MHz) e

13

C (125 MHz) para olivacina (41) e

ellipticina (41-a) (LOUNASMAA, 1986; AZOUG et al., 1995) em MeOH-d

4

, e as

correlações observadas no espectro de HSQC e HMBC da olivacina (41). Os

deslocamentos químicos (

δ

) estão ppm e as constantes de acoplamento (J, entre

parênteses) estão em Hz.

41 41a

HSQC HMBC

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

δ

H

C

2 144,08 - H-18; 3H-17

7 128,23 - H-9

8 124,11 - H-18

13 144,42 - H-9; H-11

15 134.66 - H-3; H-18; 3H-17

16 113,18 - 3H-17 H-14

19 122,83 - H-14; 3H-21

20 159,49 - 3H-21 H-3; H-18

CH

3 134,69 8,14 (d, 6,5) 8,18 (d, 7,6)

9 122,48 8,29 (d, 7,7) H-11 8,22 (d, 7,6)

10 121,23 7,28 (dt, 7,7 e 1,4) H-12 7,30 (ddd, 7,6; 5,1 e 3,2)

11 129,62 7,54 (m) H-9 7,52(m)

12 112,28 7,54 (m) H-10 7,52 (m)

14 117,83 8,00 (d, 6,5) H-3 7,80 (d, 6,3)

18 117,27 8,92 (s) 8,70 (s)

CH

3

17 12,60 2,84 (s) 3,20 (s)

21 21,14 3,13 (s) 2,90 (s)

Alcalóide 50

N

Me

H

OH

OMe

O

OMe

4

1

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

22

N

Me

H

OH

OMe

O

OMe

Me

4

1

18

19

20

21

16

17

15

14

6

5

3

13

12

11

10

9

8

7

2

22

50

50-a

O alcalóide (50) foi isolado como um cristal incolor com ponto de fusão de 251-

260

o

C (decomposição).

O espectro na região do infravermelho do alcalóide (50) (Espectro 221, volume

2, página 324) apresenta absorções importantes a 3300 (OH), 2955 (N-CH

3

), 1738

(C=O), e 1618, 1572 e 731 (C-H de anel benzênico).

A análise do espectro de RMN

13

C (APT, Espectros 208 a 210, volume 2,

páginas 311 a 313; Tabela 35, página 297) do alcalóide (50) permitiu reconhecer a

presença de vinte e um (21) átomos de carbono, sendo quatro carbonos metílicos (três

ligados a heteroátomos e um alílico), quatro carbonos metilênicos (todos sp

3

, dois

ligados a heteroátomo), sete carbonos metínicos (quatro sp

2

e três sp

3

, sendo dois

ligados a heteroátomo) e oito carbonos quaternários (sete sp

2

, um sp

3

,

dos quais um

carbonílico) (SILVERSTEIN, 1998; FRIEBOLIM, 1993).

Esses dados, em conjunto com os dados do espectro de massas (Espectro

320, volume 2, página 323; Esquema 05, página 298), o qual apresentou o pico do

íon molecular em m/z= 396 Dalton, permitiram propor a fórmula molecular C

23

H

28

N

2

O

4

para o alcalóide (50).

O espectro de RMN

1

H do alcalóide 50 (Espectros 196 a 203, volume 2,

páginas 299 a 306; Tabela 35, página 297) apresentou sinais de deslocamentos

químicos (δ

H

) característicos de grupos metila, metoxila, hidrogênios aromáticos,

grupos metínicos, grupos metilênicos

e ainda a presença de um grupo metila, referente

a grupamento amina (FRIEBOLIM, 1993; SILVERSTEIN, 1998).

O espectro de RMN

1

H (Espectro 197, volume 2, página 300; Tabela 35,

página 297) e de

1

H-

1

H-COSY (Espectro 219, volume 2, página 322) do alcalóide 50

apresenta três sinais relativos a hidrogênios aromáticos acoplando entre si a δ

H

7,10

(1H, d, J= 7,8 Hz; H-9); 7,01 (1H, t, J= 7,8 Hz; H-10); 6,75 (1H, d, J= 7,8 Hz; H-11),

característicos de um núcleo indólico, indicando que o anel A encontra-se substituído

(BRAGA, 1987; LOUNASMAA, 1986), confirmado através das correlações

heteronucleares dos átomos de carbono metínicos através das correlações a

1

J

CH

entre CH-9 (δ

C

112,61)/H-9 (δ

H

7,10), CH-10 (δ

C

121,85)/H-10 (δ

H

7,01), CH-11 (δ

C

105,26)/H-11 (δ

H

6,75), apresentadas no espectro de HMQC (Tabela 35, página 297;

Espectro 217, volume 2, página 320), juntamente com a presença de um sinal

singleto a δ

H

3,93 presente no espectro de RMN

1

H (Espectro 200, volume 2, página

303; Tabela 35, página 297), referente a três hidrogênios de um grupo OMe,

característico de OMe ligado a anel benzênico, correspondente ao sinal em δ

c

56,03 no

espectro de RMN

13

C (Tabela 35, página 297; Espectro 206, volume 2, página 309),

confirmando a presença deste grupo ligado ao anel A do núcleo indólico (BRAGA,

1987; LOUNASMAA, 1986).

A presença de um sinal simples integrando para três hidrogênios em δ

H

3,95 no

espectro de RMN

1

H (Espectro 200, volume 2, página 303; Tabela 35, página 297)

foi inferida a um grupo metila ligado ao átomo de nitrogênio N-1 do núcleo indólico,

correspondente ao sinal em δ

c

33,14 no espectro de RMN

13

C (Tabela 35, página 297;

Espectro 207, volume 2, página 310) (BRAGA, 1987).

A presença do núcleo indólico com um grupo MeN-1, substituído com um grupo

metoxila, e a localização deste no átomo de carbono C-12 foi corroborada pelas

correlações heteronucleares a longa distância apresentadas no espectro de HMBC

(Tabela 35, página 297; Espectros 216 e 217, volume 2, páginas 319 e 320) através

das correlações a entre CH-9 (δ

C

112,61)/H-11 (δ

H

6,75), CH-10 (δ

C

120,48)/H-12 (δ

H

7,31), C-7 (δ

C

103,25)/H-9 (δ

H

7,10), C-13 (δ

C

128,59)/H-9 (δ

H

7,10)/H-11 (δ

H

6,75)/MeN-1 (δ

H

3,95), C-2 (δ

C

133,25)/MeN-1 (δ

H

3,95) e C-12 (δ

C

149,29)/H-11 (δ

H

6,75)/H-10 (δ

H

7,01)/MeO-12 (δ

H

3,93), as demais correlações estão descritas na

Tabela 35, página 297.

A presença de um grupo metila ligado a um átomo de carbono sp

2

apresentada

no espectro de RMN

1

H (Espectro 203, volume 2, página 306; Tabela 35, página

297) pode ser reconhecida pelo sinal dupleto a

δ

H

1,68, relativo a três hidrogênios com

J= 7,0 Hz e pelo quadrupleto a δ

H

5,49 relativo a um hidrogênio com J= 7,0 Hz,

referentes aos hidrogênios 3H-18 e H-19, respectivamente. A confirmação da dupla

ligação e do grupo metila a ela ligada foi corroborada ainda pela presença das

correlações a longa distância apresentadas no espectro de HMBC (Espectro 216,

volume 2, página 319; Tabela 35, página 297) onde se observam às correlações

2

J

CH

entre CH-19 (δ

C

120,96)/3H-18 (δ

H

1,68), e pelas correlações a

3

J

CH

entre C-20 (δ

C

128,22)/3H-18 (δ

H

1,68) (BRAGA, 1987).

A presença de um sinal em δ

C

63,91 apresentado no espectro de RMN

13

C

(APT, Espectro 210, volume 2, página 313; Tabela 35, página 297), característico

de carbono carbinólico (BRAGA, 1987) e de dois dupletos integrando para um

hidrogênio cada, em δ

H

3,71 e δ

H

3,59 com J= 10,8 Hz apresentado no espectro de

RMN

1

H (Espectro 200, volume 2, página 303; Tabela 35, página 297), confirmam a

presença de um carbono metilênico carbinólico CH

2

-17.

Análise do espectro de correlação heteronuclear, HMBC (Espectro 216,

volume 2, página 319; Tabela 35, página 297), permitiu ainda o reconhecimento de

uma função carbometoxi, característica em vários esqueletos de alcalóides indólicos

monoterpênicos, como dito anteriormente (ZENK, 1980), através das correlações de

um carbono carbonílico C-22 (δ

C

174,21) com MeO-22 (δ

H

3,75) e os dois hidrogênios

carbinólicos 2H-17 (δ

H

3,71 e 3,59).

A presença dos fragmentos em m/z= 366 e 365 no espectro de massas

(Espectro 320, volume 2, página 323; Esquema 05, página 298), corroboram na

confirmação da existência da função carbometoxi e de um grupo hidroxila ligado ao

átomo de carbono CH

2

-17.

A atribuição dos deslocamentos químicos dos hidrogênios metilênicos e

metínicos restantes da cadeia alifática (Tabela 35, página 297), foi feita com base nos

dados obtidos na literatura para alcalóides com esqueletos semelhantes (BRAGA,

1987; LOUNASMAA, 1986, SHAMMA, 1979) e com o alcalóide 12-metoxi-4-

metilvoachalotina (50-a), isolado de Peschiera fuchsiaefolia (BRAGA, 1987), sinonímia

de Tabernaemontana hystrix e em combinação com analise completa dos espectros de

correlações homo e heteronucleares nos experimentos de

1

H-

1

H COSY (Espectro

219, volume 2, página 322), HMQC (Espectro 212, volume 2, página 315) e HMBC

(Espectro 214, volume 2, página 317), apresentados na Tabela 35, página 297.

Pelo melhor do nosso conhecimento, o conjunto de dados acima permitiu propor

a estrutura para este novo alcalóide como a 12-metoxivoachalotina (50).

Tabela 35: Dados espectrais de RMN

1

H (400 MHz) e

13

C (100 MHz) para o alcalóide

50, em MeOH-d

3

e TMS como padrão interno. Os deslocamentos químicos (δ) estão

em ppm, e as constantes de acoplamento (J) em Hz.

HMQC HMBC

δ

C

δ

H

2

J

CH

3

J

CH

C -

2 133,25 - H-3 2H-6; MeN-1

7 103,25 - 2H-6 H-5, H-9

8 129,02 - H-6a; H-10

12 149,29 - H-11 H-10; MeO-12

13 128,59 - H-9, H-11, MeN-1

16 56,56 - 2H-6; H-14a

20 128,22 2H-21 3H-18

22 174,21 H-5; 2H-17; MeO-22

CH

3 59,42 5,05 (d, 10,0) H-5; 2H-21

5 65,87 4,99 (d, 6,2) H-3; 2H-17

9 112,61 7,10 (d, 7,8) H-11

10 121,85 7,01 (t, 7,8)

11 105,26 6,75 (d, 7,8)

15 31,09 3,36 (sl) H-19

19 120,96 5,49 (q, 7,0) 3H-18

CH

2

6 20,13 3,79 (d, 18,3)

3,29 (dd, 18,3 e 6,7)

14 29,34 2,49 (d, 13,7)

2,06 (dd, 13,7)

17 63,91 3,71 (d, 10,8)

3,59 (d, 10,8)

21 65,80 4,41 (m)

3,59 (m)

H-19

CH

3

18 12,79 1,68 (d, 7,0)

MeN-1 33,14 3,95 (s)

MeO-12

56,03 3,93 (s)

MeO-22

53,24 3,75 (s)

m/z 365

MeO

.

CH

2

O

o

N

Me

C

O

OH

OMe

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

21

20

19

18

16

15

14

13

12

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

N

Me

OMeO

OMe

m/z 366

C

23

H

28

N

2

O

4

m/z 396

N

Me

OMeO

OH

OMe

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

13

12

11

10

9

8

7

2

1

m/z 351

N

MeO

Me

.

21

20

19

18

16

15

14

5

4

3

N

m/z 307

.

CO

2

Me

m/z 323

CO

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

N

MeOMe

m/z 212

m/z 197

N

MeO

14

13

12

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

Me

.

Esquema 05: Proposta mecanística dos principais fragmentos no espectro de massas

do alcalóide 50

6. CONCLUSÃO

Este trabalho com o extrato em diclorometano da casca da raiz de

Tabernaemontana hystrix, resultou no isolamento de dois esteróides: β-sitosterol (44) e

estigmasterol (45) e 10 alcalóides indólicos monoterpênicos: coronaridina (17), 7-

hidroxiindolenina-coronaridina (43), 5-oxocoronaridina (46), 3-oxocoronaridina (48), 7-

hidroxiindolenina-3-oxocoronaridina (47), vobasina (21), 5,6-dioxocoronaridina (49),

ibogamina (16), olivacina (41) e 12-metoxivoachalotina (50). Os alcalóides 49 e 50 se

apresentaram inéditos na literatura.

Os alcalóides indólicos monoterpênicos isolados são promissores, pois estes se

apresentam estruturalmente muito semelhantes a outros já descritos em literatura com

atividades biológicas já definidas. A análise de dados espectrais, bem como o uso de

técnicas modernas de RMN em termos de elucidação estrutural dos metabólitos

secundários isolados, fornecerão dados que facilitarão futuramente a determinação

estrutural de substâncias afins.

Vários alcalóides de plantas têm sido testados contra a doença de Alzheimer, no

qual seu tratamento farmacológico é baseado com o uso de inibidores da enzima

acetilcolinesterase. Diante disto, alguns testes preliminares, com o extrato de

diclorometano das cascas da raiz de Tabernaemontana hystrix serão realizados

visando a inibição desta enzima.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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