SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO........................................................................................................ 15
2. REVISÃO DE LITERATURA ............................................................................... 16
2.1 AGENTE ETIOLÓGICO ........................................................................................ 16
2.1.1 Características Morfológicas ................................................................................ 16
2.1.2 Classificação ......................................................................................................... 18
2.1.3 Ciclo de Replicação Viral ..................................................................................... 18
2.2 ENTRADA DO VÍRUS E MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS.................................. 20
2.3 RESPOSTA IMUNOLÓGICA................................................................................ 21
2.4 ANTICORPOS MONOCLONAIS ......................................................................... 23
2.4.1 Definição .............................................................................................................. 23
2.4.2 Anticorpos Policlonais versus AcM...................................................................... 24
2.4.3 Caracterização de AcM: Propriedades.................................................................. 24
2.4.4 Aplicações dos AcM ............................................................................................ 25
2.4.5 Aplicações no Estudo do Rotavírus....................................................................... 26
3.OBJETIVO GERAL ................................................................................................ 28
3.1 OBJETIVOS ESPECÍFICOS................................................................................... 28
3.1.1 Caracterização imunoquímica dos AcM .............................................................. 28
3.1.2 Aplicação dos AcM em testes diagnósticos ......................................................... 28
4. MATERIAIS E MÉTODOS .................................................................................. 29
4.1 CULTIVOS CELULARES ..................................................................................... 29
4.2 VÍRUS ..................................................................................................................... 29
4.2.1 Produção do vírus ................................................................................................. 29
4.2.2 Titulação do vírus ................................................................................................. 30
4.2.3 Concentração do vírus .......................................................................................... 30
4.2.4 Dosagem Protéica Viral ........................................................................................ 31
4.2.5 Padrão eletroforético das proteínas virais ............................................................. 31
4.2.6 Microscopia eletrônica por contrastação negativa ............................................... 32
4.2.7 Padrão eletroforético do RNA viral ...................................................................... 32
4.3 CARACTERIZAÇÃO IMUNOQUÍMICA DOS AcM .......................................... 35
4.3.1 Isotipificação ........................................................................................................ 35
4.3.2 Detecção do RTV em diferentes concentrações: Dot-blot ................................... 36
4.3.3 Caracterização das proteínas virais: Western-blot ................................................ 36
4.3.4 Avaliação dos AcM na detecção do Rotavírus bovino em cultura de células:
Imunofluorescência indireta (IFI) ........................................................................ 37
4.3.5 Avaliação da Capacidade Neutralizante ............................................................... 38
4.3.6 Avaliação da Capacidade de Inibição da Hemaglutinação ................................... 38
4.4 APLICAÇÃO DOS AcM EM TESTES DIAGNÓSTICO..................................... 39
4.4.1 ELISA de captura ................................................................................................. 39
4.4.2 Dot-blot ............................................................................................................... 40