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Universidade Federal de Goiás
Faculdade de Farmácia
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
Validação do processo de esterilização por óxido de etileno para determinar o
tempo de aeração em frascos enterais
Hugo Campos Oliveira Santos
Orientador: Prof. Dr. Luiz Carlos da Cunha
GOIÂNIA - GO
2010
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2
HUGO CAMPOS OLIVEIRA SANTOS
Validação do processo de esterilização por óxido de etileno para determinar o
tempo de aeração em frascos enterais
Dissertação apresentada ao Programa
de Pós-Graduação em Ciências
Farmacêuticas da Faculdade de
Farmácia da Universidade Federal de
Goiás como requisito para obtenção do
Título de Mestre.
Área de Concentração:
Fármacos e Medicamentos
Orientador:
Prof. Dr. Luiz Carlos da Cunha
GOIÂNIA-GO
2010
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3
OFEREÇO
Ofereço a Deus minha eterna gratidão pelo dom da vida, saúde e pela oportunidade
de compartilhar com pessoas tão especiais, essa importante etapa da minha vida.
DEDICO
A minha esposa Kelly Tacon, que com muito amor e carinho me incentivou e me
auxiliou durante a execução deste trabalho e sem a qual eu não teria conseguido
chegar até o fim.
Aos meus pais, Magda e Ildeu, pelo amor incondicional, por suas orações que me
fortaleceram e seus ensinamentos os quais guardarei para o resto da vida.
Aos meus irmãos, Marthius e Mynéia, pelo carinho, torcida e pensamentos positivos.
Em especial dedico este trabalho a Leandro Rosa, químico que me auxiliou na
utilização de equipamentos do controle de qualidade e ao senhor Marcelo Perillo
sócio-proprietário da FBMFARMA.
4
AGRADECIMENTOS
O autor expressa os seus agradecimentos:
Aos integrantes da banca examinadora e a Universidade Federal de Goiás, pelos
conhecimentos adquiridos e notável sabedoria;
Ao Professor Dr. Luiz Carlos da Cunha pela orientação, amizade, apoio e tolerância;
Aos docentes e funcionários da Faculdade de Farmácia, que direta ou indiretamente
colaboraram na realização deste estudo.
5
“Deus mandará que os seus anjos cuidem de você para
protegê-lo em todos os momentos de sua vida”
Salmo 91
6
RESUMO
Para estabelecer a segurança da esterilidade nos frascos enterais faz-se necessário a validação do
processo de esterilização. O objetivo deste estudo foi determinar o tempo de aeração residual em
frascos enterais esterilizados por óxido de etileno. Foram utilizados 120 frascos enterais para realizar
da qualificação física, microbiológica e química residual em três ciclos consecutivos 534, 535 e 536.
Sensores e integradores químicos foram instalados na autoclave para monitorar os parâmetros de
umidade relativa (UR≥35%), temperatura (55ºC±10), pressão (0,750kgf/cm²±50) e tempo de
esterilização (6h). Testes de esterilidade e ensaios de endotoxina avaliaram o resultado do
bioindicador rápido, leitura em 4h. Realizou-se a validação do método analítico por cromatografia a
gás (GCFID) como técnica para determinar a concentração de óxido de etileno residual. O uso do
Bioindicador (Bacillus atrophaeus) foi aprovado pelos testes de esterilidade (14 dias), ensaio de
endotoxina (<0,5EU/ml) e eliminação microbiana de 12 ciclos logarítmicos (SAL10
-6
). A técnica de
análise (GCFID) apresentou linearidade no intervalo de 1 a 50 µg/ml de EtO, exatidão média 100,4%,
precisão e robustez: DPR <5% (RE 899/2003, ANVISA). A dissipação residual foi significativa p<0,05
para todos os tempos de aeração avaliados. A partir de 6h de aeração obteve-se 7,77±0,97µg/ml de
EtO residual nos frascos enterais. Esta concentração foi aprovada no limite de 10 µg/ml, aceitável
para produtos farmacêuticos. A validação permitiu aprovar os parâmetros de esterilização, introduzir a
esterilidade nos frascos enterais e determinar o tempo mínimo de 6 h de aeração.
PALAVRAS - CHAVE: Validação. Esterilização. Óxido de Etileno. Enteral
7
ABSTRACT
To enter the safety and sterility in enteral feeding bottles is necessary to validate the sterilization
process. The aim of this study was to determine the aeration time residual enteral bottles sterilized by
ethylene oxide. Enteral bottles 120 to achieve the qualification physical, microbiological and chemical
in three consecutive cycles 534, 535 and 536. Physicals sensors and chemical integrators in the
autoclave were installed to monitor the parameters of relative humidity (RH ≥ 35%), temperature
(55ºC±10), pressure (0.750 kgf/cm²±50) and sterilization time (6h). Tests for sterility and endotoxin
tests evaluated the result of rapid bioindicator for reading on 4h. We performed the validation of
analytical method by gas chromatography (GCFID), as a technique to determine the concentration of
ethylene oxide residue. The use of rapid bioindicator (Bacillus atrophaeus) was approved for sterility
testing (14 days), test for endotoxin <0.5 EU/ml and elimination of microbial 12 logarithmic cycles
(SAL10
-6
). The analysis technique (GCFID) was linearity in the range 1-50 µg/ml of EtO, 100.4%
average accuracy, precision and robustness: RSD <5% (RE 899/2003, ANVISA). The residual
dissipation was significant p<0.05 for all time aeration evaluated. After time 6h aeration was obtained
7.77±0.97 µg/ml of the EtO residual enteral bottles. This concentration was approved a limited of 10
µg/ml, acceptable for pharmaceutical products. The validation allowed approving the parameters of
sterilization; the enteral bottles enter the sterile and determine the minimum time of 6h of aeration
process.
KEY WORD: Validation. Sterilization. Ethylene Oxide. Enteral
8
SUMÁRIO
CONTEÚDO
Página
1 INTRODUÇÃO
13
2 REVISÃO DE LITERATURA
15
3 OBJETIVOS
20
3.1 OBJETIVO GERAL
20
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
20
4 MATERIAIS E MÉTODOS
21
4.1 MATERIAIS
21
4.1.1 AMOSTRA
21
4.1.2 EQUIPAMENTO
21
4.1.3 OUTROS MATERIAIS
21
4.2 MÉTODOS
22
4.2.1 DESCRIÇÃO DO ESTUDO E ANÁLISE ESTATÍSTICA
22
4.2.2 AMOSTRAGEM
22
4.2.3 PRÉ-QUALIFICAÇÃO
24
4.2.3 QUALIFICAÇÃO FÍSICA
24
4.2.3.1 USO DOS SENSORES FÍSICOS COMPETEC®.
24
4.2.3.2 USO DOS INTEGRADORES QUÍMICOS - CLASSE IV
25
4.2.3 QUALIFICAÇÃO MICROBIOLÓGICA
25
4.2.3.1 TESTE DE ESTERILIDADE
25
4.2.3.2 ENSAIO DE ENDOTOXINA
25
4.2.3.3 USO DO BIOINDICADOR RÁPIDO 3M®-1264
26
4.2.4 QUALIFICAÇÃO QUÍMICA RESIDUAL
26
4.2.4.1 ANÁLISE DE SUBPRODUTOS DO ÓXIDO DE ETILENO
26
4.2.4.2 VALIDAÇÃO DO MÉTODO
27
4.2.4.3 CONDIÇÕES CROMATOGRÁFICAS
27
4.2.4.4 CATEGORIA DO MÉTODO ANALÍTICO
28
4.2.4.5 SELETIVIDADE
28
4.2.4.6 LINEARIDADE
29
4.2.4.7 PRECISÃO INTRA-CORRIDA (REPETIBILIDADE)
30
4.2.4.8 PRECISÃO INTER-CORRIDA (PRECISÃO INTERMEDIÁRIA)
30
4.2.4.9 EXATIDÃO
30
4.2.4.10 ROBUSTEZ
30
4.2.4.11 LIMITE DE DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO
31
4.2.4.12 INTERVALO
32
4.2.4.13 DETERMINAÇÃO DO TEMPO DE AERAÇÃO
32
5 – RESULTADOS
33
5.1 PRÉ-QUALIFICAÇÃO
33
5.2 QUALIFICAÇÃO FÍSICA
33
5.2.1 USO DOS SENSORES FÍSICOS COMPETEC®.
33
5.2.2 USO DOS INTEGRADORES QUÍMICOS - CLASSE IV
34
5.3 QUALIFICAÇÃO MICROBIOLÓGICA
34
5.3.1 TESTE DE ESTERILIDADE
34
5.3.2 ENSAIO DE ENDOTOXINA
35
5.3.3 BIOINDICADOR RÁPIDO 1294
35
5.4 QUALIFICAÇÃO QUÍMICA
35
5.4.1 VALIDAÇÃO DO MÉTODO ANALÍTICO
35
5.4.2 SELETIVIDADE
36
5.4.3 LINEARIDADE
37
5.4.4 PRECISÃO INTRA-CORRIDA
39
5.4.5 PRECISÃO INTER-CORRIDAS
39
5.4.6 EXATIDÃO
40
9
5.4.7 LIMITE DE DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO
40
5.4.8 INTERVALO
40
5.4.9 ROBUSTEZ
41
5.4.10 DETERMINAÇÃO DO TEMPO DE AERAÇÃO
41
5.4.11 APROVAÇÃO RESIDUAL A PARTIR DO TEMPO DE 6 HORAS
42
6 - DISCUSSÃO
44
7 - CONCLUSÃO
47
8 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
48
9 - APÊNDICES
53
10
Lista de Figuras
17
23
24
33
35
36
37
38
38
42
43
11
Lista de Quadros
Quadro 1. Teste de seletividade através de testes de degradação do EtO
28
Quadro 2. Teste de linearidade, diluição para curva de calibração.
29
Quadro 3. Variação nos parâmetros nominais para determinar a robustez
31
Quadro 4. Metodologias (R1 a R8) obtidas da variação dos parâmetros
nominais.
31
Lista de Tabelas
Tabela 1. Resultado para testes do integrador químico para os ciclos 534,
535 e 536
34
Tabela 2. Resultado do teste de esterilidade 14 dias – ciclos: 534, 535 e
536.
34
Tabela 3: Avaliação da degradação forçada de Óxido de Etileno
36
Tabela 4: Área obtida para linearidade nos diversos níveis de
concentração EtO
37
Tabela 6: Resultados de repetibilidade (Precisão intra-corrida).
39
Tabela 7: Avaliação e aprovação da precisão inter-corrida.
39
Tabela 8: Resultados de exatidão nos diversos níveis de concentração de
óxido de etileno avaliados
40
Tabela 9. Combinação ensaiada por conveniência para determinar a
concentração do padrão de trabalho nas mEtOdologias: R1, R2, R3, R4,
R5, R6, R7 e R8.
41
Tabela 10: Resultados das análises cromatográficas dos frascos enterais
aerados nos tempos 0, 4, 6, 12, 24 e 48 horas para o limite residual de 10
µg/ml.
41
12
Lista de Abreviaturas
Aa
Área da amostra
a
Inclinação da curva
Ap
Área do pico
ANVISA
Agência Nacional de Vigilância Sanitária
b
Interseção
BPF
Boas Práticas de Fabricação
CMD
Concentração Média Determinada
CME
Concentração Média Experimental
CLP
Controle Lógico Programado
DP
Desvio Padrão
DPR%
Desvio Padrão Relativo
E%
Exatidão
EtC
Etilenocloridrina
EtG
Etilenoglicol
EtO
Óxido de etileno
FID
Flame Ionization Detector
IHM
Interface Homem Máquina
LAL
Reagente de Lisado para Peptídeo Específico
LIQ
Limite de quantificação
MRC
Material de Referência Certificado
Vd
Valor Determinado
Vt
Valor Teórico
R%
Recuperação
UFC
Unidade Formadora de Colônia
USP
The United States Pharmacopeia
SAL
Sterility Assurance Level
13
1 - INTRODUÇÃO
A nutrição enteral é um método seguro para prover nutrientes e fornecer
suporte nutricional a indivíduos que não têm condições de se alimentar por via oral,
mas que tenham um trato gastrintestinal funcionante (OLIVEIRA et al., 2001).
O frasco enteral estéril é um produto farmacêutico de polietileno, classificado
como de uso único, ou seja, descartável. A nutrição enteral utiliza estes frascos para
a alimentação de pacientes através de uma dieta especificamente elaborada com
nutrientes. A administração da dieta ou do produto contaminado por microrganismos
pode causar distúrbios gastrintestinais como náuseas, vômitos ou diarréias severas
(OKUMA et al., 2000; BRASIL, 2004).
As Boas Práticas de Fabricação (BPF) determinam que a empresa
fabricante de produtos farmacêuticos estéreis deve comprovar que todos os
aspectos críticos do processo de produção e esterilização sejam controlados,
certificando a esterilidade através de validação. Os processos foram validados
através de atos documentados que atestam a consistência e a confiança dos
resultados de acordo com a legislação e os critérios de aceitação para qualidade
(BRASIL, 2003; Brasil, 2004; ABNT NBR 15245, 2005).
A esterilização utiliza-se de agentes químicos ou físicos para destruir todas
as formas de vida microbiana. A esterilidade pode ser introduzida nos produtos
mediante a aplicação de calor seco (estufa), calor úmido (vapor saturado sob
pressão), imersão química (glutaraldeído), retenção física (filtração) ou através de
agentes gasosos, como o óxido de etileno (RUTALA et al., 1997).
O gás óxido de etileno (EtO) é um composto conhecido como éter cíclico
utilizado desde a década de cinquenta para esterilizar materiais médico-hospitalares
sensíveis ao calor (GOVEIA et al., 2007). O EtO atua como método de esterilização
química, altamente viruscida, esporicida e fungicida. Sua ação é depende dos
parâmetros de concentração, temperatura, umidade relativa e tempo de exposição
ao gás (BERTANI et al., 2008).
Para o controle dos parâmetros de esterilização e a ação biológica do óxido
de etileno são utilizados bioindicadores (FERRAZ, 1988). O microrganismo Bacillus
atrophaeus, é uma bactéria formadora de esporos, altamente resistente ao óxido de
etileno, por isso é empregado em seu controle biológico. O bioindicador de 1ª
14
geração era constituído de esporos depositados em tiras de papel e embalados
individualmente em envelope (PINTO e SAITO, 1992), o bioindicador de 2ª geração,
denominado convencional foi desenvolvido por método de mudança de pH e
coloração do substrato fermentado (Attest 1294), com resultado em 48 horas. O
bioindicador de 3ª geração (Attest rapid 1294) permite obter resultado de
esterilização em 4 horas. A resposta consiste em reação enzimática do
microrganismo sobre o substrato com marcador fluorescente, detectável na luz
ultravioleta da incubadora rápida, o que representa ganho de tempo na análise
quando comparado ao bioindicador convencional (3M, 2008).
Para retirar o óxido de etileno residual da autoclave realiza-se vácuo e
pulsos de ar denominados de remoção mecânica, o que reduz o tempo de aeração
(THOMAS, 1971; TOCK e CHEN, 1974; VINK et al., 1986; POSSARI, 2003). Após a
esterilização e remoção mecânica de EtO, retiram-se os bioindicadores para controle
de processo e os produtos esterilizados foram submetidos à aeração ambiental e
quantificação residual por cromatografia a gás para determinar o tempo de aeração
(BRASIL, 1999; POSSARI, 2003).
Para determinar o tempo de aeração o presente estudo propôs desenvolver
a validação da esterilização por óxido de etileno em frasco enteral através de
técnicas de qualificação física, microbiológica e química, utilizando a tecnologia do
bioindicador rápido e cromatografia a gás.
15
2 - REVISÃO DE LITERATURA
A nutrição enteral preserva a imunidade e os mecanismos de defesa dos
pacientes, sendo segura, econômica e é amplamente utilizada, quando comparada
com a nutrição parenteral (OKUMA et al., 2000). É um suporte nutricional sendo
importante ferramenta terapêutica para pacientes que apresentam distúrbios
gastrintestinais graves, lesões do sistema nervoso, depressão, câncer ou foram
submetidos a procedimentos cirúrgicos (RIBEIRO, 2000).
As dietas enterais, realizadas através de frascos enterais, equipos e sondas
são ricas em macro e micronutrientes, sendo, portanto, excelentes meios para
crescimento de microrganismos (OLIVEIRA e WAITZBERG, 2001). Devemos seguir
procedimentos criteriosos para controlar a produção relacionada à fabricação e
esterilização de produtos para torná-los isentos de contaminações biológicas,
químicas e físicas (SIMON et al., 2007).
A presença de qualquer microrganismo indica que o produto não está estéril.
Convencionalmente considera-se que a probabilidade de sobrevivência dos
microrganismos contaminantes seja 1:1.000.000, carga microbiana 10
6
(BERTANI
et al., 2008). Porém, para atingir a segurança de esterilidade é necessária a redução
de 12 vezes da carga de microrganismos contaminantes iniciais (10
6
), ou seja, 12
ciclos logarítmicos para atingir o Sterility Assurance Level (SAL 10
-6
) (PADOVEZE,
2003).
Estudos realizados confirmam que a carga de microrganismos em produtos
farmacêuticos e médico-hospitalares não é eliminada toda de uma vez, e sim
gradativamente. A carga microbiana (bioburden) é eliminada em curva exponencial
pelo tempo, sendo um importante parâmetro para avaliar a eficácia dos métodos de
esterilização (GRAZIANO, 2000; GRAHAM, 1997).
Estudo realizado no Canadá avaliou a eficácia dos métodos de esterilização
à baixa temperatura como o óxido de etileno, plasma de peróxido de hidrogênio e
vapor de peróxido de hidrogênio. Todos os métodos apresentaram resultados
efetivos, apresentando eficácia na redução das cepas microbianas testadas (ALFA
et al., 1996).
Outros estudos avaliaram o processo de esterilização por óxido de etileno
comparando sua eficiência com processos de esterilização por ácido peracético e
16
plasma peróxido de hidrogênio. Os produtos médicos avaliados apresentavam a
extensão de 40 cm e lúmen menor que 3 mm de diâmetro. Todos os métodos
apresentaram resultados satisfatórios referente à esterilidade (RUTALA, GERGEN E
WEBER, 1998).
Segundo Bathina et al. (1998) que estudaram a reutilização de cateteres
eletrofisiológicos de uso único e de alto custo esterilizados em baixa temperatura
nos testes de esterilidade realizados não se encontrou fontes de contaminação. Os
autores concluem que para um reuso seguro é necessário maiores estudos,
principalmente referentes à dificuldade de testar todas as marcas comerciais
existentes no mercado.
Outro estudo referente à reutilização de produtos considerados de uso único
foi conduzido por pesquisadores do FDA. Este estudo avaliou o efeito de diferentes
processos de esterilização em baixas temperaturas sobre os materiais utilizados
para a fabricação destes artigos. Materiais como o látex, silicone, poliuretano, nylon
e o polietileno foram avaliados quanto à força tênsil. Os resultados demonstraram
que o silicone é minimamente afetado enquanto o látex, o polietileno e o nylon
utilizados na maioria dos produtos farmacêuticos tiveram a força tênsil reduzida. O
poliuretano apresentou alterações, fragilizando a força tênsil. Este estudo
demonstrou limitações e falta de segurança relacionada à reutilização de produtos
farmacêuticos (BROWN et al., 2002).
Em muitas cirurgias ortopédicas são utilizados perfuradores elétricos e
pneumáticos de uso doméstico, existindo o risco de contaminação por sangue ou
resíduos orgânicos derivados destes procedimentos. Um estudo avaliou a eficácia
da esterilização por óxido de etileno de furadeiras novas intencionalmente
contaminadas com esporo de Bacillus atrophaeus e obteve o resultado de 99,99%
de eficiência, comprovando a eficácia da esterilização por óxido de etileno em
materiais sensíveis a outros métodos de esterilização (GOUVEIA et al, 2009).
Em alguns experimentos, o óxido de etileno (EtO) foi considerado padrão
ouro para esterilização de equipamentos termossensíveis e elétricos. Concluiu-se
que, produtos farmacêuticos e equipamentos médicos utilizados em procedimentos
cirúrgicos foram totalmente livres de microrganismos e a esterilização por óxido de
etileno constitui um importante papel no controle de infecções, seja na reutilização
17
segura ou em produtos de uso único (MUSA, 2002; CAMPOCCIA et al., 2006; D´LIA
et al., 2007).
O óxido de etileno, internacionalmente conhecido como EtO (Figura 1) foi
sintetizado por Wurtz em 1859 (DEMARZO, 1997) e produzido comercialmente em
1921, onde foi utilizado na pulverização de produtos têxteis, livros e na agricultura
como inseticida (COTTON e ROARK, 1928). Indústrias passaram a utilizá-lo como
esterilizante de alimentos e condimentos importados em 1949. Após a 2ª Guerra
Mundial, cientistas iniciaram pesquisas com o óxido de etileno em busca de um gás
esterilizante para produtos hospitalares (NOGUEIRA, et al., 1984). A partir de 1962
foi adotado como método de esterilização para materiais sensíveis ao calor, devido
às características bactericidas e esporicida, eficácia em temperatura baixa e alto
poder de penetração (HERANCE et al., 1990).
Figura 1. Estrutura molecular do óxido de etileno - C
2
H
4
O (DEMARZO, 1997).
O EtO dissolve-se prontamente em água e em solventes orgânicos e não é
corrosivo para a maior parte dos artigos, com exceção de algumas borrachas. É
obtido em escala industrial através da oxidação catalítica direta do etileno (RIBEIRO,
2000; LONGHI, 1994), sendo capaz de esterilizar de uma grande variedade de
produtos médico-hospitalares, os quais seriam danificados através do calor seco ou
vapor saturado sob pressão (POSSARI, 2003). O EtO é um gás altamente explosivo
e facilmente inflamável, devendo ser utilizado em equipamentos especiais
denominados autoclaves. Sua ação letal é atribuída à alquilação (reação da
substituição de átomos de H por radicais C
n
H
2n+1
dos grupos sulfidril (SH
-
) e hidroxil
(OH
-
), existentes em proteínas, ácidos nucléicos, peptídeos, aminoácidos e enzimas,
impedindo a síntese de proteínas específicas (ZANON, 1987).
Estudos com animais expostos ao vapor residual de óxido de etileno por
mais de dois anos demonstraram aumento de certos tumores malignos como
leucemia e câncer de estômago (MARÍN e GALLÉN, 1987). Outros estudos
comprovaram a fototoxicidade e embriotoxicidade para níveis acima de 125 ppm
(THIESS et al, 1981; MORGAN et al, 1981). Cuidados foram tomados em função da
18
sua toxicidade, pois pesquisas indicam que o gás óxido de etileno também pode ser
carcinogênico, mutagênico e neurotóxico. Seus resíduos podem causar queimaduras
das mucosas e lesões graves aos pacientes, podendo ainda levar a riscos ocupacionais,
caso não se respeitem as condições de segurança e aeração (MARTINS, 2003;
POSSARI, 2003; BERTANI et al., 2008).
A aeração é um sistema de renovação de ar e retirada de óxido de etileno
residual. Este processo é realizado em sala controlada, independente, de uso
restrito, sob pressão negativa e deve garantir no mínimo 25 trocas de ar/h (BRASIL,
1999). A eficiência do fluxo de ar quente (55°C) na sala de aeração foi estudada e
permitiu reduzir os resíduos de óxido de etileno em menor tempo quando comparado
a aeração em temperatura ambiente (MATTHEWS et al., 1989).
De acordo com a Portaria Interministerial 482 (BRASIL, 2003) o Limite de
tolerância de EtO máximo permitido em artigos médico-hospitalares é de 25 ppm
para correlatos que contatam com o sangue. A Farmacopéia Americana (USP 30,
2007) determina que o limite residual de óxido de etileno em produtos farmacêuticos
como o frasco enteral devem estar abaixo do limite de 10 ppm. A validação do
processo de esterilização deve comprovar a esterilidade através de qualificação
física, microbiológica e química (BRASIL, 1999; BRASIL 2003; ABNT NBR 15245,
2005).
A qualificação física deve ser usada para identificar características críticas
para a investigação dos parâmetros de umidade relativa, temperatura, tempo de
exposição ao óxido de etileno e pressão através do uso de sensores que permitam
verificar as condições dentro da autoclave e fornecer um perfil completo das
condições da carga esterilizada. Deve-se utilizar 10 sensores para 5m
3
de autoclave
e no mínimo um sensor adicional por 1m
3
adicional (ABNT NBR 13849, 1997; ABNT
NBR 15245, 2005).
A qualificação microbiológica deve utilizar o controle biológico de processo,
este controle deve ser realizado com organismos-teste, resistentes ao óxido de
etileno como o Bacillus subitilis ou Bacillus atropheaus (ABNT NBR 11138-2, 2004) e
para acompanhar testes farmacopéicos como esterilidade e ensaios de endotoxina
para confirmar a segurança do processo de esterilização (COOPER e JORDAN,
2000; MARTINS et al., 2003; ABNT NBR 11138-2, 2004; SILVA e PINTO, 2005;
USP 30, 2007).
19
A qualificação química deve determinar o tempo de aeração através do
método de análise cromatografia a gás (GCFID), utilizado para a quantificação
residual de óxido de etileno no produto farmacêutico frasco enteral (USP 30, 2007).
A utilização de método validado demonstra que os resultados são confiáveis e
adequados à finalidade pretendida, sendo uma condição essencial para a avaliação
da qualidade de produtos farmacêuticos. Na sua utilização destes produtos espera-
se que sua ação esteja preservada e que a toxicidade mantenha-se em níveis
aceitáveis (MARTINS et al., 2003; NAGAROTO e VESSONI, 2006; SILVA et al.,
2010).
Cromatografia a gás é uma técnica para separação e análise de misturas de
substâncias voláteis. A amostra é vaporizada e introduzida em um fluxo de um gás
denominado de fase móvel ou gás de arraste. Este fluxo de gás com a amostra
vaporizada passa por um tubo contendo a fase estacionária (coluna cromatográfica)
onde ocorre a separação da mistura. As substâncias que têm a maior interação com
a fase estacionária são retidas por mais tempo e, por tanto, separadas daquelas de
menor interação, posteriormente detectadas e quantificadas através do detector de
ionização de chama (FID). Este detector consiste em uma chama de hidrogênio (H
2
)
e ar sintético. O efluente passa da coluna do CG através da chama, a qual divide em
moléculas orgânicas e produz íons (PEREIRA e NETO, 2000; MARTINS et al., 2003;
OHASHI, 2006; NAGAROTO e VESSONI, 2006).
A validação do método de análise (GC) através de detector (FID) é
recomendada pela RE 899 da ANVISA (BRASIL, 2003) à qual se reporta para
metodologia de quantificação de fármacos em medicamentos que sejam avaliados
na categoria 2 para os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão intra-dia
e inter-dias, exatidão, robustez, limite de detecção, limite de quantificação e
intervalo. A validação da metodologia analítica deve utilizar análises em triplicata
para elaborar resultados confiáveis com pontos médios, cálculo do desvio padrão e
desvio padrão relativo para aprovação conforme critérios de aceitação (USP 30,
2007; SILVA et al., 2010) para quantificar o óxido de etileno residual e determinar o
tempo de aeração em frascos enterais esterilizados.
20
3 - OBJETIVO
3.1 – OBJETIVO GERAL
Determinar do tempo de aeração residual em frascos enterais esterilizados
por óxido de etileno.
3.2 – OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Validar o processo de esterilização em frascos enterais para avaliar a
eficiência do bioindicador rápido (4h) através da qualificação física e microbiológica.
- Realizar a qualificação química residual através da validação do método de
análise (GCFID) para determinar o tempo de aeração em frasco enteral no limite de
10 ppm.
21
4 - MATERIAIS E MÉTODOS
4.1- MATERIAIS
4.1.1 - Amostra
- Frascos Enterais de 300 ml, fabricados em polietileno de baixa densidade pela
FBMFARMA indústria farmacêutica, lotes 80334, 80335, 80336.
4.1.2 – Equipamento
- Autoclave: câmara para esterilização produzida em aço inoxidável 316, de
fronteira (duas portas), volume 6,0 m
3
, fabricante FBMFARMA® (ABNT NBR 13849,
1997).
- Cromatógrafo Gasoso YOUNG LIN®, modelo: 6100 Series, com software de
controle e aquisição de dados Windows Vista®, composto por: forno para coluna,
injetor capilar Split/Splitless e injetor automático para 110 amostras com detector de
chama por ionização (FID).
- Coluna: Zebron ZB Wax®: capilar, polietilenoglicol, referência: 7HG -G007-11,
code: 080949301, número: 148285, dimensões: 30m x 0,25mm x 0,25 µm (filme).
- Incubadora rápida 3M®: leitura por luz ultravioleta, resultado em 4 horas.
4.1.3 – Outros materiais
- Água Milli-Q: ultra pura, filtro 0,22 µm.
- Balão volumétrico: volume de 50 ml e 100 ml.
- Béquer: volume 1000 ml, 500 ml e 250 ml.
- Bioindicador Rápido 1294: Bacillus atrophaeus, ATCC 9372, 3M®.
- Caixas de papelão: medidas 430mm x 285mm x 370mm.
- Clipador: modelo WHEATON E-Z CRIMPER®.
22
- Declipador: KEBBY DECAPPER®.
- Filme oclusivo elástico: Parafilm “M” – LAVORATORY FILM®.
- Fluxo laminar: capela exaustão, classe 100 – TROX®.
- Integrador químico BROWNE®: monitoramento multiparamétrico.
- Luvas nitrílicas 3M®.
- Máscara facial 3M®: 6899-B, com Filtro para vapor orgânico.
- Padrão óxido de etileno: solvente acetona, volume 25 ml, concentração 0,5% pv.
(SOLUTECH®), lote: 2695/09 e 2696/09
- Papel grau cirúrgico REXAN®: conforme ABNT NBR 14990-3, 2003.
- Pipeta Automática: LABMATE 100 e 300 µL.
- Ponteira descartável.
- Proveta de 100 ml e 200 ml.
- Seringas descartáveis: com agulhas, volume de 5 ml.
- Vial 1 ml: FLOW SUPPLY®, tampa, 11 mm, ACC CAPTIS®.
4.2 – MÉTODOS
4.2.1- Descrição do estudo e análise estatística
Trata-se de estudo descritivo e quantitativo realizado na FBMFARMA
indústria farmacêutica LTDA. em Anápolis-GO, Brasil.
Foram realizados estudos de validação do processo de esterilização através
da qualificação de instalação, operação e Desempenho física, microbiológica e
química residual. Os resultados foram expressos em média ±DP e DPR% através do
Programa Microsoft Office Excel (2007) e analisados estatisticamente pelos
Programas GRAPHPAD INSTAT 3.0 (teste Turkey-Kramer) e BIOSTAT 4.0 (teste
Shapiro-Wilk), considerado significativo valores de p <0,05.
4.2.2 - Amostragem
Para a qualificação física e microbiológica foram utilizados Sensores,
integradores químicos e bioindicadores colocados juntamente com as 66 amostras
para testes de esterilidade e ensaios de endotoxina, conforme figura 2 parte A, nas
posições: 1DA, 1AD, 2AA, 2DD, 3AC, 3CC, 3DC, 4AD, 4DA, 5AA e 5DD. Para a
qualificação química foram utilizados 54 Frascos Enterais para determinar o tempo
23
de aeração nos intervalos de 0, 4, 6, 12, 24 e 48 horas conforme Figura 2, parte B,
nas posições: 1 – Porta de entrada, 2 – Centro e 3 – Porta de saída da autoclave.
Figura 2. Amostragem (Parte A) para qualificação física e microbiológica em onze
posições: 1DA, 1AD, 2AA, 2DD, 3AC, 3CC, 3DC, 4AD, 4DA, 5AA, 5DD e
amostragem (Parte B) para qualificação química em três posições: 1 (Porta de
entrada), 2 (Centro) e 3 (Porta de saída), Software AUTOCAD 5.0
24
4.2.3 - Pré-Qualificação
A manutenção e calibração dos equipamentos foram estabelecidas e
documentadas para os sistemas de funcionamento da autoclave. As qualificações de
instalação e operação foram realizadas conforme figura 3, através de empresa
terceirizada, COMPETEC® de acordo com as Boas Práticas de Esterilização e
organograma da Figura 3 (BRASIL, 1999; ABNT-NBR 15245, 2005)
Figura 3: Qualificação de instalação e operação para ciclo de esterilização (BRASIL,
1999; ABNT-NBR 15245, 2005).
4.2.3 - Qualificação Física
A autoclave foi carregada utilizando 90% do volume com 80 caixas, sendo
4.000 frascos enteral de 300 ml, embalados em papel grau cirúrgico (ABNT-
NBR12946, 2001), para cada ciclo de esterilização monitorado através dos sensores
físicos e integradores químicos multiparamétricos.
4.2.3.1 - Uso dos Sensores Físicos COMPETEC®.
Para a qualificação física foi avaliado o desempenho do processo de
esterilização monitorando através de onze sensores de temperatura, umidade,
pressão e concentração do óxido de etileno para os critérios de aceitação:
temperatura de 55ºC ±10ºC, umidade relativa ≥35 UR%, pressão EtO 0,700 Kgf/cm²
a 0,800 Kgf/cm², concentração 430 mg/L ±10%.
Ciclo de Esterilização
por óxido de etileno
ETO
Remoção de ar
Condicionamento
Temperatura
Umidade UR%
Injeção do
gás
ETO
Tempo de
Exposição
(Esterilização)
Remoção do
ETO
Aeração
Mecânica
e
Ambiental
25
Os sensores foram implantados na autoclave nas posições: 1DA, 1AD, 2AA,
2DD, 3AC, 3CC, 3DC, 4AD, 4DA, 5AA e 5DD e registraram todos os parâmetros
durante todo o período de 06 horas de exposição para três ciclos consecutivos
monitorados pela COMPETEC®.
4.2.3.2 - Uso dos Integradores Químicos - Classe IV
Para avaliar a qualificação dos parâmetros de esterilização foram utilizados
por ciclo onze integradores físico-químicos (BROWNE®), classe IV para avaliar a
concentração do gás, temperatura, umidade e tempo de exposição da carga.
Os integradores físico-químicos foram posicionados juntamente com os
sensores físicos e os critérios de aceitação foram os mesmos utilizados pelos
sensores físicos.
4.2.3 - Qualificação Microbiológica
4.2.3.1 - Teste de Esterilidade
A metodologia consistiu de 11 amostras de frascos enterais por ciclo,
totalizando 33 amostras para os ciclos: 534, 535 e 536. Os testes de esterilidade
foram realizados conforme metodologia (USP 30, 2007).
Os frascos foram cortados com tesouras estéreis e os fragmentos obtidos
transferidos para tubos de ensaios de 80 ml através da filtração por membrana
asséptica. Posteriormente submetidos conforme testes farmacopéicos (USP 30,
2007) ao meio de cultura caldo tioglicolato (OXOID
®
), para detecção de bactérias
aeróbias e anaeróbias na temperatura de 30-35
o
C e caldo de caseína de soja (TSB)
na temperatura de 20-25
o
C para detecção de bolores e levedura (AZEVEDO e
CRUZ, 2006). A incubação foi realizada por 14 dias através do Laboratório
MEDLAB®, credenciado rede REBLAS.
4.2.3.2 - Ensaio de Endotoxina
Esta metodologia utilizou 11 amostras para ensaio de endotoxina,
totalizando 33 amostras para os ciclos 534, 535 e 536. Os testes foram realizados
conforme metodologia descrita (USP 30, 2007) em método quantitativo a partir de
26
cromóforos liberados pela reação da endotoxina com o reagente de LAL (lote:
GL088V) empregado para determinação quantitativa de endotoxina pelo método de
análise cinética turbidimétrica com sensibilidade λ = 0,5 UE/ml (COOPER,
JORDAN, 2000; SILVA e PINTO, 2005).
O método cinético turbidimétrico empregado utilizou endotoxina bacteriana
(Lote: GL0799). As análises foram realizadas pelo Laboratório MEDLAB®, e seguem
o critério de aprovação: λ < 0,5 EU/ml.
4.2.3.3 - Uso do Bioindicador Rápido 3M®-1264
Avaliação da eficiência para os 33 Bioindicadores de terceira geração (ATCC
9372) foi realizada através do método do fornecedor (3M, 2008); incubadora rápida
que executa a leitura em 4 horas do substrato fluorescente fermentado pelos
esporos do Bacillus atropheaus detectável através da luz ultravioleta na temperatura
de 37ºC conforme metodologia (3M, 2008; ISO 11138, 2004; ISO 11135, 2007).
O critério de aceitação define que todos os bioindicadores esterilizados nos
ciclos 534, 535 e 536, juntamente com os frascos enterais devem ter sido
eliminados, ou seja, o teste deve apresentar resultado letal positivo. Comprovando a
eliminação de toda a carga microbiana inicial 10
6
para o nível de esterilidade segura
(SAL 10
-6
), ou seja, redução de 12 ciclos logaritmos pós para a exposição de 6 horas
ao agente esterilizante óxido de etileno.
4.2.4 - Qualificação Química Residual
4.2.4.1- Análise de subprodutos do óxido de etileno
O limite para o subproduto etilenoglicol (EtG) não foi determinado, pois a
avaliação de risco indica que quando resíduos de EtO são controlados conforme
requerido (10 ppm) é pouco provável que resíduos biologicamente significantes de
(EtG), estejam presentes (ISO 10993-7, 2001).
O subproduto etilenocloridrina (EtCH) é formado através de reação química
do EtO na presença de íons cloreto. A avaliação de risco indica que, se não houver
íons cloreto, não haverá a formação significativa deste subproduto, ou seja,
27
utilizando água de osmose reversa não é necessário o controle de etilenocloridrina
(USP, 2007).
4.2.4.2 - Validação do Método
Validação do método analítico por cromatografia a gás com detector (FID)
Utilizou-se como substância química de referência (SQR) o óxido de etileno padrão
(SOLUTECH®), pureza 100 %. Para os testes de eficiência cromatográfica e
análises de validação do método utilizou como padrão de trabalho o óxido de etileno
(10µg/ml) na faixa de aplicação para limite. O padrão primário foi dissolvido em
acetona. A análise em GCFID utilizou como fase móvel o gás de arraste Nitrogênio e
como gases de queima foram utilizados o hidrogênio e ar sintético (AIR LIQUIDE®).
O método analítico fundamenta-se na metodologia descrita por Nagaroto e
Vessoni (2006)
e foi validado seguindo as recomendações da ANVISA, resolução
nº899 (BRASIL, 2003), faixa de aplicação conforme limite da (USP 30, 2007)
utilizando EtO como padrão de trabalho no limite de 10 µg/ml.
4.2.4.3 - Condições Cromatográficas
Utilizou-se o sistema de cromatografia a gás YOUNG LIN® 6100 series;
software Windows alta vista e condições cromatográficas conforme condições
abaixo: Forno com temperatura inicial de 60ºC, com tempo de equilíbrio de 1 minuto,
Rampa de 20,00°C por minuto, temperatura final de 230°C e tempo de análise de 11
minutos; coluna (ZBWax): fluxo constante arraste de 1,8 ml/ min., pressão inicial: 18
psi e velocidade de 40 cm/s, dimensões de 30mx0,25mmx0,25µm (filme); volume de
injeção para 1 µl; integração rampa de sensibilidade de 4,000 inicial, área de injeção
de 0,100 inicial e área de rejeição até 0,010 inicial; calibração com relação de
diferença de 3%, tipo de curva: linear, injetor modelo split, fluxo constante volume de
injeção de 2 µl, temperatura de 220ºC, pressão de 18,0 psi, fluxo de separação de
16,2 ml/minuto e fluxo total de 21,0 ml/min para gás de arraste nitrogênio na razão
do split 10:1, detector de chama por ionização (FID) em temperatura de 250ºC, fluxo
de hidrogênio de 30 ml/min e fluxo de ar sintético de 300 ml/min.
28
4.2.4.4 - Categoria do método analítico
A validação do método GCFID foi estabelecida seguindo as recomendações da
RE 899 da ANVISA para categoria II, à qual reporta para metodologia de
quantificação de fármaco em medicamentos que sejam avaliados os parâmetros de
seletividade, linearidade, precisão intra-corrida e inter-corridas, exatidão, robustez,
limite de detecção, limite de quantificação e intervalo.
4.2.4.5 - Seletividade
A seletividade foi demonstrada preparando-se possíveis produtos de degradação
através de hidrólise básica: padrão submetido à solução alcalina (pH > 10,0) por 24
horas; hidrólise ácida: padrão submetido em solução ácida (pH< 2,0) por 24 horas;
oxidação: padrão submetido em meio oxidante (H
2
O
2
2%) por 24 horas; temperatura:
padrão exposto a temperatura de 60 ºC por 24 horas, exposição à luz: padrão
exposto em câmara de fotoestabilidade por 1,2 milhões de lux.hora conforme
Quadro 1.
Quadro 1. Teste de seletividade através de testes de degradação do EtO.
TESTE SELETIVIDADE - PRODUTOS DE DEGRADAÇÃO
1. Hidrólise básica
2. Hidrólise ácida
3. Oxidação: meio oxidante
4. Temperatura
5. Exposição à luz
Solução alcalina (pH > 10,0) por 24 h; (NaOH)
Solução ácida (pH< 2,0) por 24 h; (HCl)
Oxidação por 24 h; (H
2
O
2
2%)
Estufa: 60 ºC por 24 h
Câmara de fotoestabilidade (1,2 milhão de lux/h)
Além destas análises, para o teste de seletividade foram calculados os
parâmetros cromatográficos. Estes parâmetros avaliaram a qualidade e a eficiência
da separação do pico de óxido de etileno e do diluente acetona, garantindo que não
houve qualquer interferência advinda de outro analito ou excipiente.
A Resolução (R), e fator de simetria (Tailing Factor - TF) foram calculados a
partir dos cromatogramas através das fórmulas:
29
Onde: t
1
e t
2
representam os tempos de retenção, em unidade de tempo (minutos) e
W
1
e W
2
: largura do 1º e do 2º pico
Onde: W
0,05
é a largura do pico a 5% de altura e d é a distância entre o início do pico
até seu ponto de inflexão.
Para se obter um pico com simetria adequada, o fator de simetria deve ser
menor que 2,0 e resolução maior que 2,0 conforme RE 899 da ANVISA (BRASIL,
2003).
4.2.4.6 - Linearidade
Foram avaliadas as médias ± DP (desvio padrão) das áreas dos
cromatogramas obtidos em triplicata e elaboradas a curva de calibração das
análises de óxido de etileno em diferentes concentrações nos intervalos: 10-50-100-
200-300-400-500% nas concentrações de análise (1, 5, 10, 20, 30, 40 e 50 µg/ml).
Em seguida deve-se calcular o valor do coeficiente de correlação (R) utilizando-se
planilha de cálculo Excel (Office 2007), fórmula:
Onde: y: resposta medida; x: concentração; a: inclinação da curva de calibração =
sensibilidade; b = interseção com o eixo y quando x = 0. Os critérios de aceitação: R
≥ 0,99 e Desvio Padrão Relativo (DPR ≤ 5,0), conforme Quadro 2 (BRASIL, 2003)
Quadro 2. Teste de linearidade, diluição para curva de calibração.
TESTE LINEARIDADE – CURVA DE CALIBRAÇÃO
Diluição
Observação
1,0 µg/ml (20 µL ) EtO – balão (completa: 100 ml água) - 10%
5,0 µg/ml (100 µL ) EtO – balão (completa: 100 ml água) - 50%
10,0 µg/ml (100 µL ) EtO – balão (completa: 50 ml água) - LIMITE
20,0 µg/ml (200 µL ) EtO – balão (completa: 50 ml água) - 200%
30,0 µg/ml (300 µL ) EtO – balão (completa: 50 ml água) - 300%
40,0 µg/ml (400 µL ) EtO – balão (completa: 50 ml água) - 400%
50,00 µg/ml (500 µL ) EtO – balão (completa: 50 ml água) – 500%
EtO Padrão 0,5%
5000 µg/ml SOLUTECH®
Aprovação da Curva:
R ≥ 0,99 e DPR < 5,0%
30
4.2.4.7 - Precisão intra-corrida (repetibilidade)
Para a precisão intra-corrida verificou-se a concordância entre os resultados
obtidos dentro de um curto período de tempo através do mesmo analista, mesma
instrumentação e no mesmo dia. Foram preparadas 9 amostras a 100% da
concentração de trabalho (10µg/ml) e realizadas as análise para determinar o desvio
padrão relativo (DPR%) dos resultados. O critério de aceitação define-se por DPR%
≤5,0% para cromatografia a gás (BRASIL, 2003).
4.2.4.8 - Precisão inter-corrida (precisão intermediária)
A precisão intermediária refere-se à precisão avaliada sobre o padrão,
utilizando o mesmo método, em dia e com analista diferentes da análise da precisão
intra-corrida. Prepara-se 9 amostras a 100% da concentração de trabalho e realiza a
análise, agrupando-se estes resultados com os resultados da precisão intra-corrida
para determinar o desvio padrão relativo (DPR%) total. O critério de aceitação
define-se por DPR% ≤ 5,0% para cromatografia a gás (BRASIL, 2003).
4.2.4.9 - Exatidão
O parâmetro de exatidão foi avaliado através 3 Determinações para
concentração baixa, média e alta em triplicata. Prepara-se três soluções de
amostras de óxido de etileno nas concentrações de 80, 100, e 120 % da
concentração de trabalho para verificar a proximidade dos resultados no critério
aceitável da RE 899 da ANVISA (BRASIL, 2003), faixa de 98,0 a 102,0%. Obtidos
pela técnica (GCFID) em relação ao valor verdadeiro do analito na amostra através
da equação:
Onde: E%: Exatidão, Vd: Valor Determinado e Vt: Valor Teórico (BRASIL, 2003).
4.2.4.10 - Robustez
O método original foi denominado pela letra maiúscula para os parâmetros
cromatográficos nominais iniciais (NAGAROTO e VESSONI, 2006). Para a análise
de robustez foram realizadas pequenas alterações deliberadas no método inicial
31
nominal. Estas alterações foram elaboradas por conveniência, denominadas pelas
letras minúsculas, para os novos parâmetros cromatográficos conforme Quadro 3.
Quadro 3. Variação nos parâmetros nominais para determinar a robustez
VARIAÇÃO PARA DETERMINAR A ROBUSTEZ (CONVENIÊNCIA)
Metodologia
Parâmetro
Fator Nominal
Variação
Cromatografia a gás
Temperatura inicial do forno
A
60 °C
a
70 ºC
Temperatura final do forno
B
230 °C
b
250 °C
Fluxo da fase móvel
C
1,8 ml/min
c
2,0 ml/min
Razão/Rampa
D
10:1
d
8:1
Temperatura do detector
E
250 °C
e
240 °C
Temperatura do injetor
F
220 °C
f
210 °C
Volume de injeção
G
2 µL
g
1 µL
Para determinar a robustez foram realizadas análise em triplicata do EtO
(concentração limite de trabalho), através de oito novas metodologias (R1 a R8)
obtidas no quadro 4. Os resultados das novas metodologias foram avaliados
(média±dp) no critério de aceitação: DPR% <5,0% para determinar a robustez do
método, Quadro 4 (BRASIL, 2003).
Quadro 4. Metodologias (R1 a R8) obtidas da variação dos parâmetros nominais
Fator
Métodos da matriz de fatores para determinação da robustez
R1
R2
R3
R4
R5
R6
R7
R8
A/a
a
A
A
a
A
A
A
a
B/b
b
b
B
B
B
b
B
b
C/c
C
c
C
c
c
C
C
C
D/d
D
D
D
D
D
d
D
d
E/e
E
e
E
E
E
E
e
E
F/f
f
F
f
f
f
f
F
F
G/g
g
G
G
g
G
G
g
g
DPR%
≤ 5,0
[ ] EtO
[ ] EtO
[ ] EtO
[ ] EtO
[ ] EtO
[ ] EtO
[ ] EtO
[ ] EtO
.
4.2.4.11 - Limite de detecção e quantificação
Foi preparado grupos de amostras com concentrações decrescentes até um
valor não mais detectável pelo equipamento de forma segura, o que foi determinado
como a concentração do ruído de linha de base, este valor foi multiplicado por 3,
para se determinar o limite de detecção (BRASIL, 2003)
As mesmas amostras utilizadas para o limite de detecção foi multiplicado
pelo fator de 10, gerando o limite de quantificação (BRASIL, 2003).
32
4.2.4.12 - Intervalo
Determinado pela concentração de trabalho com linearidade, precisão e
exatidão adequados para verificação segura da determinação da concentração de
Óxido de Etileno na faixa de 80 a 120% da concentração de trabalho (BRASIL,
2003).
4.2.4.13 - Determinação do tempo de aeração
O tempo de aeração que permitir a dissipação residual do EtO nos frascos
enterais no limite de 10 µg/ml (USP 30, 2007) em relação ao menor tempo,
estabelecido na concentração analisada e calculada através dos cromatogramas
obtidos (ISO 11135, 2007).
As cinqüenta e quatro amostras de frasco enteral foram esterilizados com
430 mg/L de óxido de etileno (Carbetil® 20%) durante 6 horas na temperatura de
55ºC, UR%≥35 e remoção mecânica residual de 14 pulsos de ar/vácuo na autoclave
nos ciclos: 534, 535 e 536 de acordo com as diretrizes da ISO 11.135, 2007.
Após a esterilização, as amostras foram colocadas em sala de aeração a
55°C e 27 trocas de ar por hora onde foram retiradas nos tempos: 0, 4, 6, 12, 24 e
48 horas.
Cada amostra foi preparada completando o volume de 300 ml do frasco
enteral com água .cm). Considerando o uso simulado de
exposição foi realizada a extração de óxido de etileno através do contato de 24
horas (ISO 10.993-7, 2001).
Foram injetados no cromatógrafo separadamente 1 µL de solução branco
(Diluentes água e acetona), solução padrão de trabalho EtO e soluções das
amostras preparadas.
Através das áreas dos picos referentes aos cromatogramas foi calculado o
EtO residual, conforme fórmula:
Onde: EtO: valor obtido de óxido de etileno (ppm); Aa: área do pico referente ao EtO
obtido na amostra; Ap: área do pico da solução padrão de EtO; Cp: concentração
padrão de EtO; V: volume de solução do frasco; P: peso do frasco (gramas).
33
5 - RESULTADOS
5.1 - Pré-Qualificação
A manutenção verificou e garantiu o correto funcionamento dos terminais de
computadores, portas, válvulas, linhas de ar, monitores, sensores, termostatos,
filtros, umidificadores, reguladores e equipamentos.
A calibração foi realizada através de empresa terceirizada Competec® e
todos os itens que foram verificados, calibrados e aprovados.
Para a qualificação de operação foram verificados todos os documentos de
montagem, instalação, manuais, listas de equipamentos, especificações técnicas e
livros de registro.
Os sistemas de utilidades, suporte e segurança foram verificados, revisados,
testados e aprovados para os parâmetros: temperatura 55ºC ±10ºC, umidade
relativa ≥35 UR%, pressão EtO (0,700 Kgf/cm² a 0,800 Kgf/cm²), concentração 430
mg/L ±10%.
5.2 - Qualificação física
5.2.1 - Uso dos sensores físicos COMPETEC®.
A qualificação física foi realizada e aprovada através de onze sensores
COMPETEC® para 6h de exposição ao EtO nos critérios: temperatura de 55ºC±5ºC,
umidade relativa ≥35 UR%, pressão EtO 0,750±50, concentração 430 mg/L±10%, 2
pulsos de nitrogênio e 14 pulsos de ar/vácuo, conforme Figura 4 (ISO 11135, 2007).
Figura 4. Gráfico dos parâmetros de esterilização – COMPETEC®, 2009.
34
5.2.2 - Uso dos integradores químicos - classe IV
Foram utilizados e aprovados o uso de onze integradores químicos por ciclo
de esterilização, totalizando trinta e três integradores para os três ciclos
consecutivos: 534, 535 e 536, conforme Tabela 1 (ISO 11135, 2007).
Tabela 1. Resultado para testes do integrador químico para os ciclos 534, 535 e 536
INTEGRADOR QUÍMICO MULTIPARAMÉTRICO – Classe IV - BROWNE®
Corrida
Critério de aceitação
Resultado
Ciclo 534
Todos os Integradores Químicos aceitos
Aprovado
Ciclo 535
Aprovado
Ciclo 536
Aprovado
Parâmetros Monitorados e Integrados: temperatura, UR%, concentração e tempo de exposição (EtO)
5.3 - Qualificação microbiológica
5.3.1- Teste de esterilidade
Os testes de esterilidade foram aprovados pelas análises executadas para os
ciclos: 534, 535 e 536. No meio de cultura tioglicolato (OXOID
®
) não foi detectado
bactérias aeróbias e anaeróbias na temperatura de 30-35
o
C. Não foram detectados
bolores e leveduras no meio de cultura caldo de caseína de soja (TSB) na
temperatura de 20-25
o
C, Tabela 2 (USP 30, 2007).
Tabela 2. Resultado do teste de esterilidade 14 dias - ciclos: 534, 535 e 536.
Tioglicolato (Thio)
(30°C – 35°C)
Caseína de soja (TSB)
(20°C – 25°C)
+C = Crescimento
-C = Não houve Crescimento
Dia
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
Ciclo534
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
Ciclo535
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
Ciclo536
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
-C
Resultado
Estéril
35
5.3.2 - Ensaio de endotoxina
Todas as 33 amostras foram aprovadas no ensaio de endotoxina com
resultados abaixo de < 0,5 EU/ml conforme USP 30 (2007)
para os ciclos: 534, 535 e
536 (USP 30, 2007).
5.3.3 - Bioindicador rápido - 1294
As análises dos Bioindicadores rápidos (1294) avaliaram a leitura de 4 horas e
os resultados foram aprovados para os ciclos de esterilização 534, 535 e 536. Pois,
não ocorreu crescimento dos microrganismos autocontidos nos Bioindicadores
rápidos, carga inicial de 1.000.000 esporos (10
6
), verificando assim, a eficiência para
o controle biológico do processo. O tempo de 6 h de esterilização foi suficiente para
eliminar a carga inicial e reduzir 12 ciclos logarítmicos atingindo-se o SAL 10
-6
conforme Figura 5 (ISO 11138-2, 2004).
Figura 5. Curva de morte microbiana, Bacillus atropheaus (esporo) para o tempo
total de esterilização 360 min. ou 6 h de exposição ao agente esterilizante EtO.
5.4 - Qualificação química
5.4.1 - Validação do método analítico
36
5.4.2 - Seletividade
Ocorreu degradações do EtO em meio básico (-40,07%), ácido (-43,68%),
oxidante (-23,28%) e sob temperaturas elevadas (-14,77%) conforme Tabela 3.
Tabela 3: Avaliação da degradação forçada de Óxido de Etileno
DEGRADAÇÃO FORÇADA (EtO)
Meio de degradação
Concentração inicial
Concentração final (µg/ml)
pH > 10,0 (NaOH 5N)
10,0 µg/ml
6,0045
pH < 2,0 (HCl 5N)
5,6430
Peróxido (H
2
O
2
3,0%)
7,6167
Temperatura (60 °C)
8,5395
Fotodegradação
(1,2 x 10
6
Lux.hora)
9,9694 (Controle)
10,0 (Amostra)
Não ocorreu interferência advinda de produtos de degradação na qualidade e
eficiência de separação cromatográfica do analito de interesse (EtO). A comparação
dos cromatogramas do padrão e do diluente acetona demonstrou fator de simetria
1,3, resolução 2,5 e ausência de interferentes, Figura 6 (BRASIL, 2003).
Figura 6. Cromatogramas (A) padrão de trabalho EtO 10µg/ml, (B) do diluente
Acetona.
37
5.4.3 - Linearidade
A análise das amostras apresentou desvio padrão relativo <5 e coeficiente
de correlação (R) calculado através as médias das triplicatas foi de 0,999, Figura 7.
Figura 7. Linearidade calculada das áreas médias em triplicata dos cromatogramas:
2,729 ±0,073, 6,044 ±0,257, 13,585 ±0,495, 23,762 ±0,609, 37,572 ±0,303, 47,905
±0,362 e 61,272 ±0,203.
Avaliação da linearidade das amostras apresentou desvio padrão relativo
<5% e coeficiente de correlação (r) calculado com as médias das triplicatas de 0,999
conforme Tabela 4 e Figuras 8 e 9 (BRASIL, 2003).
Tabela 4: Área obtida para linearidade nos diversos níveis de concentração EtO.
LINEARIDADE
Resultados de área obtidos nos diversos níveis de concentração
Nível
(%)
[ ]
µg/ml
ppm
Área (mV*s)
Corridas
1 2 3
Área (mV*s)
Média ± DP
DPR%
1
1,00
2,763
2,645
2,779
2,729 ± 0,073
2,7
50
5,00
5,999
6,321
5,812
6,044 ± 0,257
4,2542
100
10,00
13,881
13,013
13,860
13,585 ± 0,495
3,6484
200
20,00
24,465
23,441
23,380
23,762 ± 0,609
2,5658
300
30,00
37,834
37,642
37,240
37,572 ± 0,303
0,80711
400
40,00
48,324
47,693
47,699
47,905 ± 0,362
0,75598
500
50,00
61,254
61,079
61,484
61,272 ± 0,203
0,3314
y = 1,1944x + 0,8814
r = 0,999
0
10
20
30
40
50
60
70
0 10 20 30 40 50 60
Area
mV*s
[ ]EO µg/mL
Linearidade
38
Figura 8: Representação gráfica da correlação entre a área e concentração das
soluções de Óxido de Etileno nos níveis de concentração testados de 1, 5, 10, 20,
30, 40 e 50 µg/ml para aprovação da linearidade do método analítico (Programa
Microsoft Offfice Excel, 2007).
Figura 9: Cromatogramas da linearidade dos padrões de óxido de etileno nas
concentrações respectivas de 1 µg/ml, 10 µg/ml e 50 µg/ml.
39
5.4.4 - Precisão intra-corrida
Análise da Precisão intra-corrida para 9 amostras na concentração de
trabalho, no mesmo dia e mesmo analista, (DPR%) das amostras consideradas foi
menor que 5,0%, o que indica repetibilidade satisfatória para a aplicação pretendida
conforme Tabela 6 (BRASIL, 2003).
Tabela 6: Resultados de repetibilidade (Precisão intra-corrida).
Amostra
Concentração (µg/ml)
Média (A1-A9) ± SD
*DPR %
A1
10,45
10,74 ± 0,17
1,6
A2
10,82
A3
10,63
A4
10,94
A5
10,86
A6
10,67
A7
10,99
A8
10,69
A9
10,65
Critério de aceitação: DPR < 5,0%
Repetibilidade Satisfatória
5.4.5 - Precisão inter-corridas
O grau de concordância dos resultados obtidos com a análise do padrão EtO
de trabalho tanto nos ensaios intra-corrida como inter-corrida, encontram-se na
Tabela 7. O valor do DPR % em ambos os casos foi menor que 5% (BRASIL, 2003).
Tabela 7: Avaliação e aprovação da precisão inter-corrida.
PRECISÃO INTER-CORRIDA
Dia 1- intra-corrida
Dia 2 - inter-corrida
Amostras
[ ] µg/ml
Amostras
[ ] µg/ml
A1
10,45
A1
10,24
A2
10,82
A2
10,26
A3
10,63
A3
10,14
A4
10,94
A4
10,12
A5
10,86
A5
10,35
A6
10,67
A6
10,30
A7
10,99
A7
10,29
A8
10,69
A8
10,28
A9
10,65
A9
10,29
[ ] µg/ml
10,50 ±0,35 DPR 3,4%
40
5.4.6 - Exatidão
A avaliação da exatidão foi realizada pela recuperação de óxido de etileno
nas concentrações de 80, 100 e 120% da concentração de trabalho para 100,4,
101,2 e 99,6 dentro do critério aceitação: 98,0 a 102,0% Tabela 8 (BRASIL, 2003).
Tabela 8: Resultados de exatidão nos diversos níveis de concentração de óxido de
etileno avaliados
ENSAIO DE EXATIDÃO %; µg/ml
Teórica
80%
Obtida
Teórica
100%
Obtida
Teórica
120%
Obtida
(8 µg/ml)
7,9964
(10 µg/ml)
10,0241
(12 µg/ml)
11,1413
(8 µg/ml)
8,0785
(10 µg/ml)
10,2324
(12 µg/ml)
11,7226
(8 µg/ml)
8,0692
(10 µg/ml)
10,1537
(12 µg/ml)
12,0767
Média ± DP
8,0480 ± 0,045
Média ± DP
10,1367 ± 0,105
Média ± DP
11,9802 ± 0,472
DPR%
0,6
DPR%
1,0
DPR%
1,9
Vd
8,0480
Vd
10,1367
Vd
11,9802
Vt
8,0160
Vt
10,0200
Vt
12,0240
E%
100,4
E%
101,2
E%
99,6
EXATIDÃO
100,4 % ±0,8
5.4.7 - Limite de detecção e quantificação
O menor nível detectado foi 0,3 µg/ml, o ruído 0,1 µg/ml foi obtido na área
obtida de 0,9599 mv*s. O limite de quantificação foi 1,0 µg/ml, nesta concentração o
método apresentou linearidade, precisão e exatidão aceitáveis nos valores mínimos
de 80 a 120% da concentração de trabalho (BRASIL, 2003).
5.4.8 - Intervalo
O método apresentou linearidade satisfatória para a faixa de 80 a 120%
da concentração de trabalho, precisão e exatidão adequados para esta faixa, o
intervalo de trabalho em que se tem uma verificação segura da determinação da
concentração de Óxido de Etileno encontra-se na faixa de 80 a 120% da
concentração de trabalho (BRASIL, 2003).
41
5.4.9 - Robustez
As alterações deliberadas nos parâmetros cromatográficos proporcionaram
resultados dentro do critério de aceitação DPR% <5 para as 8 metodologias
propostas (R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8), ensaiadas em triplicata para o EtO na
concentração do padrão de trabalho EtO 10 µg/ml, demonstrando boa separação e
simetria dos picos conforme Tabela 9.
Tabela 9. Combinação ensaiada por conveniência para determinar a concentração
do padrão de trabalho nas metodologias: R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8.
Fator
Robustez – Novas Metodologias (R1 to R8)
R1
R2
R3
R4
R5
R6
R7
R8
A/a
A
A
A
a
A
A
A
a
B/b
B
b
B
B
B
b
B
b
C/c
C
c
C
c
c
C
C
C
D/d
D
D
D
D
D
d
D
d
E/e
E
e
E
E
E
E
e
E
F/f
F
F
f
f
f
f
F
F
G/g
G
G
G
g
G
G
g
g
[ ]EO µg/ml
10,0±0,7
10,0±0,9
9,94±1
9,97±0,6
10,02±0,9
10,04±1,1
9,93±1,2
9,99±0,8
DPR <5,0%
5.4.10- Determinação do tempo de aeração e resultado das análises
cromatográficas
Análise dos cromatogramas das amostras avaliados nos tempos: 0, 4, 6, 12, 24
e 48h conforme Tabela 10.
Tabela 10: Resultados das análises cromatográficas dos frascos enterais aerados
nos tempos 0, 4, 6, 12, 24 e 48 horas para o limite residual de 10 µg/ml.
Ciclo
Tempos de Aeração VS Concentração EtO
0 h
4 h
*6 h
12 h
24 h
48 h
534
14±1µg/ml
11±1 µg/ml
8±1 µg/ml
4,7±0,5 µg/ml
2,3±0,5 µg/ml
1±0 µg/ml
535
14±1µg/ml
12,0±1 µg/ml
8,0±1 µg/ml
5,0±1 µg/ml
2,7±1,1 µg/ml
1±0 µg/ml
536
13,3±0,5µg/ml
10,6±0,5 µg/ml
7,3±1,1 µg/ml
3,6±1,1 µg/ml
1,7±0,5 µg/ml
1±0 µg/ml
Limite Residual de Eto 10 µg/ml
42
5.4.11 - Aprovação residual a partir do tempo de 6 horas
A avaliação do processo de aeração demonstrou que quanto maior o tempo
de aeração, maior será a redução residual. Considerada significativa (p<0,05) para
todos os tempos avaliados pelo Teste (Turkey-Kramer), Programa GRAPHPAD
INSTAT 3.0, o que aprovou a reprodutibilidade para os ciclos 534, 535 e 536
conforme Figura 10.
Figura 10: Regressão residual significativa para todos os tempos analisados * P
<0,05.
A concentração residual das amostras analisadas para o limite de 10 µg/ml
demonstrou significativa redução residual (p<0,05) a partir do tempo de 6 horas de
aeração quando comparado aos tempos 0 e 4 horas através do Teste (Shapiro-
Wilk), Programa BIOSTAT 4.0 conforme Figura 11.
43
Figura 11. A partir do tempo de aeração 6 horas a concentração residual nos
frascos ficaram abaixo do limite 10 µg/ml, sendo o tempo mais próximo ao resultado
do Bioindicador Rápido de 4 horas, * p <0,05.
44
6 - DISCUSSÃO
Reutilizar ou não reutilizar um produto médico-hospitalar fabricado para uso
único tem sido um questionamento mundial (SILVA e PINTO, 2005). Vários estudos
realizaram comparativos da eficiência, riscos e custo - benefício do óxido de etileno
em relação a outros métodos de esterilização a baixa temperatura como plasma
peróxido de hidrogênio, formaldeído e ácido peracético, concluindo que não houve
evidências de que algum desses métodos pudesse ser melhor que o óxido de etileno
(ALFA et al., 1996; RUTALA, GERGEN e WEBER, 1998; GOUVEIA et al, 2009;
BATISTA et al., 2010)
Existe um consenso que produtos médicos ou farmacêuticos utilizados em
procedimentos cirúrgicos devem ser totalmente livres de microrganismos e que são
necessários maiores estudos sobre a reutilização segura de produtos considerados
inicialmente de uso único, principalmente em relação à limpeza de resíduos
orgânicos, resistência dos materiais e maiores estudos clínicos (BATHINA et al.,
1998).
Estudos realizados por Brown et al., (2002) demonstraram limitações
relacionadas à reutilização em materiais utilizados para a fabricação de produtos
médico-hospitalares como o látex, silicone, poliuretano, nylon e o polietileno em
relação a força tênsil reduzida, afetando a segurança.
A esterilização por óxido de etileno constitui um importante papel no controle
de infecções, seja para a reutilização segura ou em produtos de uso único. A
validação do processo permitiu introduzir a esterilidade nos frascos enterais,
obtendo-se excelentes resultados referente aos parâmetros físicos, ensaios de
endotoxina, testes de esterilidade e aplicação do bioindicador rápido com esporos de
Bacillus atropheaus. A eficácia da esterilização por óxido de etileno (EtO) para
artigos médicos foi confirmada em vários estudos (MUSA, 2002; CAMPOCCIA et al.,
2006).
Estudo realizado para verificar a eficiência do óxido de etileno em furadeiras
intencionalmente contaminadas com esporo de Bacillus atrophaeus obteve 99,99%
de eficácia do método utilizado (GOUVEIA et al, 2009). Em outro experimento
utilizando o EtO como método de esterilização para equipamentos termossensíveis
e elétricos, também foi considerado satisfatório (D´LIA et al., 2007).
45
A metodologia e os parâmetros cromatográficos utilizados por Nagaroto e
Vessoni (2006) foram essenciais para a validação do método analítico (GCFID)
aprovado em todos os parâmetros analisados (BRASIL, 2003).
Esta metodologia permitiu quantificar o óxido de etileno residual em frascos
enterais, determinando que a partir de 6h de aeração os produtos podem ser
liberados para comercialização e uso em níveis seguros de 10 ppm (USP 30, 2007).
Porém, no Brasil a Portaria 482 de 1999 da ANVISA, determina que para produtos
médico-hospitalares que contatam o sangue o limite residual é de 25 ppm.
Por outro lado alguns estudos analisados por Cardoso (2003) verificou-se
que o uso de dialisadores virgens esterilizados por óxido de etileno levou a
ocorrência de manifestações indesejáveis em alguns pacientes, como a ocorrência
de dispnéia, broncoespasmo, urticária, náuseas, vômitos, câimbras, hipotensão e
cefaléia em especial quando empregado na fabricação resina que tem capacidade
de retenção do óxido de etileno confirmando assim, a necessidade de reduzir os
níveis de óxido de etileno residual para níveis cada vez menores como o que foi
realizado neste estudo.
O tempo de 6h para aeração em 10 ppm representa ganho de tempo e
segurança quando comparado ao estudo realizado por Martins et al. (2003) que
determinou os níveis de EtO em cânulas de perfusão e obteve o tempo de 19h de
aeração no limite de 25 ppm.
O tempo para que cada material fosse aerado foi apresentado por Tock e
Chen (1974) e pode ser adaptado para cada situação, o que pode confirmar as
diferenças para o frasco enteral e as cânulas de perfusão. Esta diferença de tempo
pode ser justificada pela temperatura de 55°C utilizada neste estudo em relação a
temperatura de 35ºC utilizada no estudo das cânulas (MATTHEWS et al., 1989).
Além disso, neste estudo foi utilizada a remoção mecânica dentro da
autoclave através de 14 pulsos ar/vácuo (pré-aeração) conforme estudo realizado
(THOMAS e LONGMORE, 1971). Estes pulsos fizeram que a concentração de EtO
inicial fosse reduzida na autoclave, aumentando a eficiência do processo da sala de
aeração (VINK e PLEIJSIER, 1986). Outro fator de ganho de tempo pode ser
justificado pela configuração do artigo (POSSARI, 2003), baixo peso, grande volume
e ausência de resistência a aeração como válvulas, conexões de PVC, aço, alumínio
ou borrachas que podem estar presentes nas cânulas de perfusão.
46
Os principais riscos da utilização do óxido de etileno em materiais médico-
hospitalares foram estudados por Marin e Gallén, (1987) que enfatizam medidas
preventivas e de proteção para o controle de risco ocupacional. Estudos realizados
em trabalhadores expostos ao EtO, demonstraram maior incidência de câncer de
estômago, câncer de pulmão, leucemia, fototoxicidade, propriedades teratogênicas e
irritantes do óxido de etileno (THIESS et al., 1981; MORGAN et al., 1981). Estes
estudos ressaltam a toxicidade do EtO tanto para trabalhadores como para usuários
dos produtos esterilizados confirmando a necessidade de validação da esterilização
e principalmente a comprovação de segurança residual.
A validação do processo de esterilização através da qualificação física,
microbiológica e química residual. Incluindo a validação do método analítico (GCFID)
confirmou a eficiência e reprodutibilidade dos parâmetros utilizados para determinar
o tempo de aeração em frascos enterais conforme ISO 10993-7 (2001), ISO 11135
(2007), ANVISA Portaria 482 (BRASIL, 1999), ANVISA RE 899 (BRASIL, 2003) e
USP 30 (2007).
Embora o resultado do bioindicador rápido proporcione a aprovação do ciclo
de esterilização em 4 horas, o produto somente poderá ser liberado a partir de 6
horas de aeração em limites residuais seguros, o que proporcionou ganho de
produtividade quando comparado ao tempo anterior de 48 horas do bioindicador
convencional 1264.
47
7 - CONCLUSÃO
Todas as etapas de validação para esterilização de frascos enterais por
óxido de etileno foram alcançadas para as qualificações física, microbiológica e
química.
As qualificações físicas e microbiológicas comprovaram a eficiência do
bioindicador rápido através de sensores físicos, integrador químico, testes de
esterilidade e endotoxina.
A qualificação química através das análises por cromatografia a gás permitiu
determinar o tempo mínimo de 6 h de aeração residual para frascos enterais nos
níveis seguros de 10 ppm ao invés de 25 ppm preconizados pela Portaria 482 da
ANVISA (BRASIL, 1999).
A redução do tempo de aeração de 48 h para 6h deverá proporcionar maior
rapidez, segurança e economia no processo de esterilização por óxido de etileno em
produtos farmacêuticos e médico-hospitalares.
Antes de estender esta metodologia a outros produtos que não sejam os
frascos enterais estéreis, deverá haver pelo menos co-validação dependendo do tipo
de material do produto e exigências legais de qualidade.
48
8 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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53
9 - APÊNDICES
9.1 - APÊNDICE I
SISTEMAS DE UTILIDADES VERIFICADOS PELA MANUTENÇÃO
Capacitor de Fase
Capacitor de Partida
Funcionamento do compressor
Limpeza da casa de máquinas
Limpeza do condensador
Limpeza da serpentina
Hélice do motor
Painel elétrico
Limpeza da bandeja e dreno
Limpeza das grelhas e difusores
Limpeza dos filtros de ar
Limpeza externa do equipamento
Limpeza interna do equipamento
Isolamento do compressor
Isolamento do evaporador
Isolamento do condensador
Óleo do compressor
Nível do óleo lubrificante
Aperto dos terminais elétricos
Sub-resfriamento
Superaquecimento
Vazamento de gás
Filtros de gás
Focos de ferrugem
Vibração anormal
Resistência do Carter
Lubrificação dos mancais
Disjuntores
Chave geral
Alinhamento das polias
Correias
Válvulas de serviço
Funcionamento da(s) válvula(s)
Funcionamento do termostato
Isolamento termoacústico
Rolamento(s) da(s) Turbina(s)
Resultado para Manutenção
Aprovada
54
9.2 - APÊNDICE II
CALIBRAÇÃO DOS INSTRUMENTOS
Item
STATUS
Malha de temperatura
(PME-EST-SES-AUT03-STE01)
Calibrado
Malha de temperatura
(PME-EST-SES-AUT03-STE02)
Calibrado
Malha de temperatura
(PME-EST-SES-AUT03-STE04)
Calibrado
Malha de temperatura
(PME-EST-SES-AUT03-STE04)
Calibrado
Malha de umidade
(PME-EST-SES-AUT03-SUM1)
Calibrado
Manovacuômetro
(PME-EST-SES-AUT03-MVC01)
Calibrado
Válvula de segurança.
(PME-EST-SES-AUT03-VSE01)
Calibrado
Indicador de pressão
(PME-EST-SES-AUT03-MAN01)
Calibrado
Indicador de pressão
(PME-EST-SES-AUT03-MAN02)
Calibrado
Indicador de pressão
(PME-EST-UTI-AUT03-MAN01)
Calibrado
Indicador de pressão
(PME-EST-UTI-AUT03-MAN02)
Calibrado
55
9.3 - APÊNDICE III
VERIFICAÇÃO DE DOCUMENTAÇÃO DA AUTOCLAVE
Item
Critério de
Aceitação
Resultado
Manual de Operação
Descrito
Aprovado
Manual de Manutenção Preventiva
Descrito
Aprovado
Lista de Peças Sobressalentes
Descrito
Aprovado
Especificação Técnica
Descrito
Aprovado
Livro de registro
Descrito
Aprovado
Layout Construtivo
Descrito
Aprovado
Layout Hidráulico
Descrito
Aprovado
Layout Elétrico
Descrito
Aprovado
Layout tubulação gás
Descrito
Aprovado
Diagrama do Comando
Descrito
Aprovado
Fluxograma do Processo
Descrito
Aprovado
Requerimento do usuário
Descrito
Aprovado
Procedimento operacional
Descrito
Aprovado
Procedimento de segurança
Descrito
Aprovado
Procedimento de emergência
Descrito
Aprovado
Procedimento do Scrubber
Descrito
Aprovado
56
9.4 - APÊNDICE IV
GRÁFICOS DA QUALIFICAÇÃO FÍSICA – AUTOCLAVE VAZIA
Gráfico de temperatura: ciclo 533
Gráfico de umidade relativa: ciclo 533
57
9.5 - APÊNDICE V
GRÁFICOS DA QUALIFICAÇÃO FÍSICA – Corrida 1
AUTOCLAVE CARREGADA – 90% (Frasco Enteral): 80 caixas
Gráfico de temperatura: ciclo 534
Gráfico de umidade relativa: ciclo 534
58
9.6 - APÊNDICE VI
GRÁFICOS DA QUALIFICAÇÃO FÍSICA – Corrida 2
AUTOCLAVE CARREGADA – 90% (Frasco Enteral): 80 caixas
Gráfico de temperatura: ciclo 535
Gráfico de umidade relativa: ciclo 535
59
9.7 - APÊNDICE VII
GRÁFICOS DA QUALIFICAÇÃO FÍSICA – Corrida 3
AUTOCLAVE CARREGADA – 90% (Frasco Enteral): 80 caixas
Gráfico de temperatura: ciclo 536
Gráfico de umidade relativa: ciclo 536
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