glucosidases distintas produzidas por um mesmo organismo, e com propriedades
diferentes das β-glucosidases do Humicola grisea var. thermoidea, que anteriormente
acreditava-se ser o Scytalidium thermophilum ( Straastma & Samson, 1993).
No que se refere a determinação dos parâmetros cinéticos, observou-se que
ambas enzimas possuem maior afinidade para o substrato sintético PNP-glu com K
m
e
V
máx
de 0,345mM e 2,0 μmoles/mg prot
-1
e 0,29mM e 5,37 μmoles/mg prot
-1
para as
atividades β-glucosidase extra e micelial, respectivamente. Observa-se também que a
β-glucosidase micelial hidrolisou eficientemente os substrato sintético PNP-fuc com K
m
e
V
máx
de 0,5mM e 7,25 μmoles/mg prot
-1
. Quando a β-glucosidase micelial foi ensaiada
com PNP-glu na presença de glicose ou xilose, observou-se um K
m
e V
máx
de 1,26mM e
40,04 μmoles/mg prot
-1
e 1,33mM e 30,49 μmoles/mg prot
-1
. Com base nesses
resultados, conclui-se que a enzima perde certa especificidade pelo substrato PNP-glu
embora tenha um aumento na sua velocidade de hidrólise. Esses resultados são dados
com base na eficiência catalítica (V
máx
/K
m
) (Tabela 14). O valor de K
0,5
obtido para a β-
glucosidase micelial foi de 36,69 e 43,29mM, para glicose e xilose, respectivamente.
Dentre as glucosidases estudadas observa-se uma maior preferência por substratos
sintéticos com K
ms
variando de 0,05 a 2mM (Bathia, 2002). As β-glucosidases de H.
grisea e C. thermophilum, parentes próximos do Scytalidium apresentaram K
m
e V
max
de 0,12 e 3,24mM, 0,76 e 3,13mM e para os substratos PNP-glu e celobiose,
respectivamente (Peralta et al, 1997; Venturi et al, 2002).
Em estudos realizados utilizando-se misturas dos substratos PNP-Glu e PNP-fuc
(Figura 25) para β-D-glucosidase micelial observou-se que os valores não foram
interacionais. Esse é um dado importante para confirmar a eficiência no processo de
purificação e a total ausência de contaminantes na amostra.
No estudo das enzimas como transglucosidases, observou-se (Figuras 26, 27 e
28) que as enzimas são capazes de sintetizar novos glicosídeos em altas concentrações
de celobiose, e hidrolise em baixas concentrações . Contudo, na presença de xilose ou