( PDF ) Avaliação do balanço autonômico cardíaco de ratos submetidos a uma dieta hipoprotéica

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE OURO PRETO

DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

LABORATÓRIO DE FISIOLOGIA CARDIOVASCULAR – NUPEB

Avaliação do Balanço Autonômico Cardíaco de Ratos

Submetidos a uma Dieta Hipoproteica

AUTOR: Carlito D’Angelo Drumond Martins

ORIENTADOR: Prof. Dr. Deoclécio Alves Chianca Júnior

CO-ORIENTADOR: Prof. Dr. Luciano Fernandes Gonçalves

Ouro Preto, novembro de 2007

Dissertação apresentada ao programa de Pós-Graduação do

Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas da

Universidade Federal de Ouro Preto, como parte integrante

dos requisitos para obtenção do título de Mestre, em

Ciências Biológicas, área de concentração: Bioquímica

Estrutural e Fisiológica.

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Este trabalho foi realizado no Laboratório de Fisiologia Cardiovascular

Laboratório de Fisiologia CardiovascularLaboratório de Fisiologia Cardiovascular

Laboratório de Fisiologia Cardiovascular do

Departamento de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Ouro Preto, com o auxílio

do CNPq, FAPEMIG e UFOP.

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Há pessoas que desejam saber só

por saber, e isso é curiosidade; outras,

para alcançarem fama, e isso é vaidade;

outras, para enriquecerem com a sua

ciência, e isso é um negócio torpe;

outras, para serem edificadas, e isso é

prudência; outras, para edificarem os

outros, e isso é caridade.

(S. Tomás de Aquino)

iii

Dedicatória

À minha família, José Antônio, Célia e

José Antônio, Célia e José Antônio, Célia e

José Antônio, Célia e

Angelita

AngelitaAngelita

Angelita,

que sempre me apoiou e lutou junto

comigo para que esse sonho se realizasse.

Amo vocês.

Agradecimentos

A Deus,

Deus, Deus,

Deus, pelo dom da vida.

Aos Meus Pais,

, José Antônio e Célia,

José Antônio e Célia, José Antônio e Célia,

José Antônio e Célia,

obrigado pelo amor incondicional e pela boa educação

que me proporcionaram.

À minha irmã, Angelita

AngelitaAngelita

Angelita, pelo amor, amizade e companheirismo.

À Juliana

JulianaJuliana

Juliana, obrigado por estar sempre ao meu lado e por me fazer tão feliz.

À madrinha Lia

LiaLia

Lia, que sempre me incentivou e apoiou durante esta jornada.

Aos irmãos da República Kome Keto

República Kome KetoRepública Kome Keto

República Kome Keto, minha segunda família.

Ao meu orientador Prof. Dr. Deoclécio Alves Chianca Júnior

Prof. Dr. Deoclécio Alves Chianca JúniorProf. Dr. Deoclécio Alves Chianca Júnior

Prof. Dr. Deoclécio Alves Chianca Júnior, pelas oportunidades

proporcionadas, pela confiança, pelos ensinamentos e acima de tudo pela amizade.

Ao Prof. Dr. Luciano Gonçalves Fernandes

Prof. Dr. Luciano Gonçalves FernandesProf. Dr. Luciano Gonçalves Fernandes

Prof. Dr. Luciano Gonçalves Fernandes,

, ,

, pelos ensinamentos e pela amizade.

todos do Laborat

LaboratLaborat

Laborató

óó

ório de Fisio

rio de Fisiorio de Fisio

rio de Fisiologia Cardiovascular

logia Cardiovascularlogia Cardiovascular

logia Cardiovascular

pela amizade, incentivo, apoio,

companheirismo, ensinamentos e diversão.

À Universidade Federal de Ouro Preto

Universidade Federal de Ouro PretoUniversidade Federal de Ouro Preto

Universidade Federal de Ouro Preto, gratuita e de qualidade, por todos os ensinamentos.

Às instituições de apoio à pesquisa, que proporcionaram condições para que este trabalho

fosse realizado.

Ao Prof. Dr

Prof. DrProf. Dr

Prof. Dr. Márcio Flávio Dutra Moraes,

Márcio Flávio Dutra Moraes, Márcio Flávio Dutra Moraes,

Márcio Flávio Dutra Moraes, pelo exemplo, amizade, paciência, simplicidade,

prontidão, nobreza e presteza de seus ensinamentos.

Ao Prof. Dr.

Prof. Dr.Prof. Dr.

Prof. Dr. Marcelo Eustáquio Silva,

Marcelo Eustáquio Silva,Marcelo Eustáquio Silva,

Marcelo Eustáquio Silva, pelo apoio e pela prontidão.

Ao Miltinho

Miltinho Miltinho

Miltinho pela contribuição nas tarefas do Laboratório, pelo exemplo de esperança e

amizade.

À Cida

Cida Cida

Cida,

, ,

, pela amizade e por toda a assistência prestada.

Aos colegas de mestrado,

colegas de mestrado, colegas de mestrado,

colegas de mestrado, professores e colegas do NUPEB

professores e colegas do NUPEB professores e colegas do NUPEB

professores e colegas do NUPEB pelo convívio, auxílio e

companheirismo.

Resumo

Estudos anteriores do nosso laboratório demonstraram, em ratos, que a

desnutrição protéica pós desmame promove aumento dos níveis basais de

freqüência cardíaca (FC) e pressão arterial média, além de aumentar a

variabilidade destes parâmetros. Foram demonstrados também aumento na

sensibilidade do reflexo baroreceptor e aumento da atividade do sistema renina-

angiotensina nesses animais. No presente estudo avaliamos o balanço

autonômico cardíaco, assim como o tônus simpático e parassimpático para o

coração de ratos desnutridos. Foram utilizados 30 ratos Fischer, machos, divididos

em 2 grupos: controle (n=16) que recebeu dieta com 15% de proteína e desnutrido

(n=14), 6% de proteína. Os animais desnutridos apresentaram FC elevada em

relação ao grupo controle (432±16 vs. 367±5 bpm). Após administração de

atropina (anticolinérgico antimuscarínico) observamos um aumento da FC do

grupo controle (371±6 vs. 427±15 bpm), enquanto a FC do grupo desnutrido não

se alterou (438±24 vs. 472±38 bpm). A administração de metoprolol (bloqueador

β1-adrenérgico) promoveu uma redução da FC no grupo desnutrido (428±24 vs.

355±16 bpm) mas não alterou a FC do grupo controle (363±8 vs. 363±8 bpm). O

duplo bloqueio promoveu redução da FC no grupo desnutrido (342±14 bpm) sem

alterar a FC no grupo controle (382±6 bpm). Além disso, a FC intrínseca (após o

duplo bloqueio) do grupo desnutrido se mostrou menor que o grupo controle. A

avaliação do tônus simpático e parassimpático fornece informações sobre a

capacidade de cada um desses braços em alterar a FC intrínseca. O tônus

simpático está aumentado nos animais submetidos à dieta hipoproteica quando

comparado ao grupo controle (131±17 vs. 41±11 bpm). Já a participação

parassimpática encontra-se diminuída nos animais desnutridos quando

comparada ao controle (8±5 vs. -22±9 bpm). A análise da variabilidade da FC no

domínio da freqüência demonstrou um predomínio do braço simpático sobre o

parassimpático. A relação LF/HF dos animais desnutridos se mostrou aumentada

em relação ao controle (0,43±0,03 vs. 0,34±0,02). Os resultados apresentados

indicam que a restrição protéica foi capaz de promover uma disfunção autonômica

cardíaca em ratos. Tal disfunção envolve tanto o aumento da atividade simpática

cardíaca quanto uma redução da atividade vagal.

vii

Abstract

Previous studies from our laboratory showed that protein malnutrition

promoted an increase in basal levels of heart rate (HR), mean arterial pressure,

and in the variability of these parameters. It was also demonstrated an increasing

in the sensitivity of the baroreceptor reflex and in the activity of the renin-

angiotensin system of this animals. In the present study, we evaluated the cardiac

autonomic balance, as well as the sympathetic and parasympathetic tonus to the

heart of malnourished rats. Male Fischer rats were divided in 2 groups. The control

group (n=16) received 15% of protein and the low protein (LP) group (n=14)

received 6% of protein in diet. The HR was increased in LP group when compared

with control (432±16 vs. 367±5 bpm). After atropinergic blockade we observed an

increasing in HR in the control group (371±6 vs. 427±15 bpm), albeit it was not

observed in LP group (438±24 vs. 472±38 bpm). Metoprolol administration

promoted a reduction in HR levels of LP animals (428±24 vs. 355±16 bpm), but

wasn’t able to alter control levels of HR (363±8 vs. 363±8 bpm). The autonomic

blockade reduced HR in LP (342±14 bpm) with no effect on control HR levels

(382±6 bpm). We also observed that the intrinsic heart rate of rats submitted to low

protein diet was lower than in control rats. The evaluation of sympathetic and

parasympathetic tonus provides information about the capacity of each of these

branches in modifying intrinsic hear rate. The sympathetic tonus is augmented in

LP animals when compared to controls (131±17 vs. 41±11 bpm) and the

parasympathetic is diminished in those animals (8±5 vs. -22±9 bpm). The heart

rate variability analysis demonstrated a predominance of sympathetic over

parasympathetic activity to the heart. The LF/HF ratio of malnourished rats was

increased when compared to animals submitted to normal protein diet (0,43±0,03

vs. 0,34±0,02). The results presented in this study indicate that the protein

restriction was able to promote cardiac autonomic dysfunction in rats. Such

dysfunction involves both, increasing in sympathetic cardiac activity and reduced

vagal activity.

viii

Sumário

1- INTRODUÇÃO.................................................................................................... 1

1.1 – DESNUTRIÇÃO..................................................................................................................................1

1.2 – EFEITOS DA DESNUTRIÇÃO SOBRE OS SISTEMAS FISIOLÓGICOS ............................................................3

1.3 – CONTROLE NEURAL DA FREQÜÊNCIA CARDÍACA ..............................................................................6

2 – OBJETIVOS.................................................................................................... 11

2.1 – OBJETIVO GERAL...........................................................................................................................11

2.2 – OBJETIVOS ESPECÍFICOS.................................................................................................................11

3 – MATERIAIS E MÉTODOS .............................................................................. 12

3.1 - MODELO ANIMAL...........................................................................................................................12

3.2 – METODOLOGIA DA DESNUTRIÇÃO..................................................................................................12

3.3 – COMPOSIÇÃO QUÍMICA DAS DIETAS..............................................................................................13

3.4 – PREPARAÇÃO DAS DROGAS ..........................................................................................................14

3.5 – CONFECÇÃO DE CÂNULAS ARTERIAIS E VENOSAS...........................................................................15

3.6 – CONFECÇÃO DE ELETRODOS PARA REGISTRO ELETROCARDIOGRÁFICO ...........................................15

3.7 – IMPLANTE DOS ELETRODOS E DAS CÂNULAS ARTERIAIS E VENOSAS....................................................16

3.8 – REGISTRO DA PRESSÃO ARTERIAL E DO ECG...................................................................................17

3.9 – PROTOCOLO EXPERIMENTAL...........................................................................................................18

3.10 – ANÁLISE DOS DADOS...................................................................................................................19

3.10.1 – Análise da Freqüência Cardíaca e Pressão Arterial Média ............................... 19

3.10.2 – Análise do Índice Autonômico Cardíaco............................................................. 19

3.10.3 – Análise do Tônus Autonômico Cardíaco .............................................................. 20

3.10.4 – Análise da Variabilidade da FC no Domínio da Freqüência ............................. 20

3.10.5 – Análise Estatística ..................................................................................................... 20

4 - RESULTADOS ................................................................................................ 21

4.1 – EFEITO DA DESNUTRIÇÃO SOBRE O PESO CORPORAL DOS RATOS.....................................................21

4.2 – EFEITO DA DESNUTRIÇÃO SOBRE A FC E PAM BASAIS......................................................................22

4.3 – EFEITO DO BLOQUEIO VAGAL SOBRE OS NÍVEIS DE FC E PAM .........................................................23

4.4 – EFEITO DO BLOQUEIO BETA-ADRENÉRGICO SOBRE OS NÍVEIS DE FC E PAM.....................................24

4.5 – EFEITO DO DUPLO BLOQUEIO (VAGAL E BETA-ADRENÉRGICO) SOBRE OS NÍVEIS DE FC E PAM ........25

4.6 – EFEITO DA DESNUTRIÇÃO SOBRE O ÍNDICE AUTONÔMICO CARDÍACO..............................................27

4.7 – EFEITO DA DESNUTRIÇÃO SOBRE O TÔNUS SIMPÁTICO E PARASSIMPÁTICO ..........................................27

4.8 – EFEITO DA DESNUTRIÇÃO SOBRE A RELAÇÃO LF/HF E A PORCENTAGEM DE PARTICIPAÇÃO DE CADA

UMA DESSAS FREQÜÊNCIAS SOBRE O PODER TOTAL...................................................................................29

5 – DISCUSSÃO................................................................................................... 31

6 – REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................... 38

7 – APÊNDICE...................................................................................................... 45

8 – PRODUÇÃO CIENTÍFICA .............................................................................. 51

8.1 – RESUMOS EM CONGRESSOS ...........................................................................................................51

8.2 – ARTIGO COMPLETO PUBLICADO EM PERIÓDICO...............................................................................53

Lista de Figuras

Figura 1 - Cronograma da metodologia de desnutrição protéica.....................................1

Figura 2 - Modelo do Conector utilizado para registro de ECG .....................................15

Figura 3 – Representação da janela de visualização do software Kananda®

durante um experimento........................................................................................................17

Figura 4 - Esquema dos protocolos experimentais..........................................................19

Figura 5 - Efeito da restrição protéica sobre o peso corporal dos ratos .......................21

Figura 6 - Níveis Basais de FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido ......22

Figura 7 - FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido após bloqueio vagal.23

Figura 8 - FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido após bloqueio beta-

adrenérgico..............................................................................................................................24

Figura 9 - FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido após bloqueio duplo 26

Figura 10 - Variação da FC dos grupos controle e desnutrido após bloqueio duplo..26

Figura 11 - Tônus simpático (A) e parassimpático (B) dos grupos controle e

desnutrido ................................................................................................................................28

Figura 12 - Relação LF/HF dos grupos controle e desnutrido........................................29

Figura 13 - Percentual de participação de cada uma das bandas de freqüência

analisadas nos grupos controle (A) e desnutrido (B)........................................................30

Lista de Tabelas

Tabela I - Composição química das dietas (g/100g de ração).................................. 14

Tabela II - Índice Autonômico Cardíaco dos grupos controle e desnutrido............... 27

Tabela III - Efeito da restrição protéica sobre o peso corporal dos ratos .................. 45

Tabela IV - Níveis basais de FC e PAM dos grupos controle e desnutrido............... 46

Tabela V - FC e PAM antes e após bloqueio vagal .................................................. 47

Tabela VI – FC e PAM antes e após bloqueio adrenérgico ...................................... 48

Tabela VII – FC e PAM dos grupos controle e desnutrido após bloqueio dos

braços simpático e parassimpático ........................................................................... 49

Tabela VIII – LF e HF basais e a relação LF/HF dos grupos controle e desnutrido.. 50

INTRODUÇÃO

1- Introdução

1.1 – Desnutrição

A fome e a desnutrição, apesar de estarem intimamente ligadas,

representam duas situações muito distintas. Pode-se dizer que têm fome aqueles

cuja alimentação diária não aporta a energia requerida para a manutenção e

funcionamento do organismo e para as atividades ordinárias do ser humano, e que

sofrem de desnutrição aqueles que manifestam sinais e sintomas provenientes da

insuficiência quantitativa ou qualitativa da dieta ou de doenças que determinem o

mau aproveitamento biológico dos alimentos ingeridos

(OMS/OPAS/UNICEF/FAO).

A desnutrição por carência de energia (calorias) e proteínas é a forma mais

letal de má nutrição e tem um papel importante em pelo menos metade das

mortes anuais de crianças no mundo em desenvolvimento. De acordo com a

Organização Mundial de Saúde a desnutrição energético-protéica afeta uma em

cada quatro crianças em todo o mundo: 150 milhões (26,7%) estão com baixo

peso e 182 milhões (32,5%) têm o desenvolvimento retardado. Reconhece-se que

6,6 milhões das 12,2 milhões de mortes anuais entre crianças menores de cinco

anos, ou seja, 54% das mortes infantis em países em desenvolvimento estão

associadas à desnutrição. Além do sofrimento, a perda em termos de potencial

humano traduz-se em custos sociais e econômicos que se tornam insustentáveis

para esses países. Ainda de acordo com a OMS, a alimentação inapropriada de

recém nascidos e crianças é responsável por um terço dos casos de desnutrição

(World Health Organization, 2007). De acordo com o Programa Mundial de

Alimentos das Nações Unidas, o Brasil é o país da América do Sul com o maior

número de subnutridos, 15,6 milhões de pessoas. Apesar de esse número

representar apenas cerca de 8% da população, a situação brasileira é considerada

das mais críticas e paradoxais, uma vez que nosso país é um dos maiores

produtores de alimentos do mundo.

INTRODUÇÃO

A desnutrição pode se instalar na vida fetal ou após o nascimento. A

avaliação da condição nutricional das mães de desnutridos mostrou que mais de

84% delas não apresentavam quadro de desnutrição, com um grande percentual

de mães apresentando sobrepeso e até mesmo obesidade, sugerindo portanto,

que em 84% das famílias, o alimento chega à mesa, mas este pode não estar

sendo utilizado, preparado e nem ofertado de maneira eficiente (Nóbrega e cols.,

1992).

Embora as taxas de obesidade infantil tenham aumentado

significativamente nos últimos anos, o número de crianças desnutridas ainda é

consideravelmente grande (Mondini & Monteiro, 1997; Sawaya e cols., 1995).

Ainda hoje a desnutrição é considerada a doença que mais mata crianças abaixo

de cinco anos (Sawaya, 2006). No Brasil, 10,5% das crianças com idade abaixo

de 5 anos apresentam desnutrição moderada ou severa. A maior prevalência de

desnutrição é na região nordeste, equivalendo a 18%, enquanto que a menor

prevalência é na região sul, com 5% das crianças consideradas desnutridas

(BENFAM - Sociedade Civil Bem-Estar Familiar no Brasil, 1997).

Em 1995, em um estudo desenvolvido em favelas de São Paulo, Sawaya e

colaboradores demonstraram uma prevalência de 30% de desnutrição e 15% de

obesidade dentro da mesma comunidade. Neste mesmo estudo também foi

demonstrado que 9% das casas possuíam pelo menos 01 membro que estava

abaixo do peso e 01 que era obeso (Sawaya e cols., 1995).

A desnutrição causada por deficiência protéica é altamente prejudicial ao

organismo uma vez que as proteínas são os maiores componentes estruturais das

células, têm função de enzimas, componentes de membranas, hormônios, entre

outros (Lehninger, 2005). Dos 20 aminoácidos que constituem as proteínas, 9 são

considerados essenciais, ou seja, não são sintetizados pelo organismo e devem

ser adquiridos através da alimentação. O suprimento de proteína dietética é

essencial para manutenção da função e integridade celular, além da saúde e

reprodução. A composição de proteínas da dieta é um fator importante a se

considerar, visto que é a única fonte dos aminoácidos essenciais necessários ao

bom funcionamento do organismo.

INTRODUÇÃO

Várias são as formas de se induzir a desnutrição em animais de laboratório.

Por exemplo, ela pode ser induzida durante a gestação, diminuindo o teor protéico

da dieta das fêmeas grávidas (Tonkiss e cols., 1998) ou após o nascimento,

aumentando-se o número de filhotes por ninhada durante a amamentação, o que

leva à competição pelo leite materno (Bell & Slotkin, 1988). Pode-se também

reduzir o conteúdo de proteínas da dieta oferecida à fêmea que está

amamentando (Pedrosa & Moraes-Santos, 1987), ou aos filhotes logo após o

desmame (Agarwal e cols., 1981). A dieta hipoprotéica pode ainda ser oferecida

para o animal em outras fases da vida (Ferreira e cols., 2003; Lukoyanov &

Andrade, 2000). O rato é o animal mais utilizado nestes estudos, pois além de ser

de fácil manuseio e se adequar às diferentes metodologias de desnutrição, ele

possui metabolismo acelerado. Esta última característica possui relevância

especial porque permite investigações experimentais rápidas, principalmente

daqueles distúrbios promovidos apenas tardiamente pela desnutrição no ser

humano.

1.2 – Efeitos da Desnutrição sobre os Sistemas Fisiológicos

Diversos sistemas são afetados pela desnutrição, o que pode levar ao mau

funcionamento de órgãos e conseqüentemente ao desenvolvimento de doenças. A

gravidade dessas alterações é dependente do tempo de exposição e da fase da

vida em que o indivíduo é submetido à desnutrição.

Vários autores já demonstraram em humanos que a desnutrição nas fases

iniciais da vida leva a um crescimento deficiente, ou seja, crianças desnutridas são

mais baixas e pesam menos que deveriam para a sua idade. Em animais também

se observa um prejuízo no desenvolvimento, com depleção de massa muscular e

diminuição do peso (Winick & Noble, 1966).

Diversos estudos têm demonstrado que doenças cardiovasculares e

condições associadas a elas, como hipertensão e diabetes não insulino-

dependente, podem se originar devido a um desenvolvimento debilitado durante a

vida fetal e infância. Essas doenças seriam conseqüências de um quadro de

INTRODUÇÃO

“programação”, onde um estímulo ou insulto em período crítico ou sensível no

início da vida resulta em alterações fisiológicas e metabólicas a longo prazo.

Existem janelas de tempo críticas durante as quais a maturação deve ocorrer e a

falha nesse processo de maturação pode ser irrecuperável (Barker & Clark, 1997).

Já foi visto que a desnutrição intra-uterina leva a uma redução da

expectativa de vida em ratos (Langley-Evans & Sculley, 2006). Em 1990, Barker e

colaboradores demonstraram que o ambiente intra-uterino possui um efeito

importante sobre a pressão sanguínea e o desenvolvimento de hipertensão em

humanos. Nesse estudo ficou evidente que os níveis de pressão sanguínea e o

risco de se desenvolver hipertensão na vida adulta estão fortemente relacionados

com o peso ao nascer (Barker e cols., 1990; Franco e cols., 2006). Além disso, o

desenvolvimento de outras condições patológicas como o diabetes tipo II (Phillips

e cols., 1994), doenças renais (Hoy e cols., 1999) e doenças coronarianas (Barker

e cols., 1993) têm sido associado ao baixo peso ao nascer.

Em ratos foi demonstrado que a desnutrição protéica leva a alterações na

hemodinâmica renal. Esses animais apresentaram redução na atividade de renina

plasmática, diminuição na produção de prostaglandinas, aumento na resistência

vascular intra-renal e diminuição do fluxo renal plasmático e da taxa de filtração

glomerular (Benabe e cols., 1993). Ainda nesse trabalho foi observado um

aumento do número de receptores do tipo AT1 tanto no córtex quanto na medula

do rim dos animais desnutridos. Já foi demonstrado também um aumento da

expressão de renina e mRNA para enzima conversora de angiotensina (ECA) em

animais submetidos à dieta hipoprotéica, o que segundo o autor pode ser

responsável pelas alterações na hemodinâmica renal observada nesses animais

(Martinez-Maldonado e cols., 1993). Em outros trabalhos foi observada uma

redução no número total de néfrons provocando uma alteração na função renal

(do Carmo Pinho e cols., 2003). Observou-se também em ratos desnutridos

durante a gestação, uma significativa redução do peso renal, tanto absoluto

quanto relativo e prejuízo na glomerulogênese, mesmo após o nascimento (Lucas

e cols., 1997).

INTRODUÇÃO

Vários estudos epidemiológicos também têm associado a desnutrição em

alguma fase da vida ao desenvolvimento de doenças. Sawaya e colaboradores já

demonstraram em diversos estudos que indivíduos desnutridos apresentam maior

risco de se tornarem obesos, hipertensos e de desenvolverem diabetes tipo II e

doenças cardiovasculares na vida adulta (Sawaya e cols., 1995; Sawaya e cols.,

2003; Sawaya & Roberts, 2003; Sawaya e cols., 2005).

O sistema nervoso também é afetado pela desnutrição. Sabe-se que a

desnutrição protéica ou protéico-calórica ocorrida nos primeiros anos de vida está

associada a alterações neuro-anatômicas, neuro-químicas e comportamentais

tanto em animais quanto em seres humanos (Almeida e cols., 1996). A

mielinização (Reddy e cols., 1979), assim como a formação da mielina e de seus

constituintes (colesterol, galactolipídeos e fosfolipídeos) em cérebros de ratos

desnutridos também são reduzidos (Egwim e cols., 1986). Em 2000, Lukoyanov e

colaboradores demonstraram que a manutenção de uma dieta hipoprotéica por um

período prolongado leva à perda de neurônios e sinapses do hipocampo,

acompanhado de um prejuízo substancial de comportamentos hipocampo-

dependentes (Lukoyanov & Andrade, 2000).

Ratos alimentados com uma dieta contendo 7% de proteína apresentaram

aumento da atividade do sistema nervoso simpático quando comparados a

animais que receberam dieta contendo 22% de proteína (Young e cols., 1985).

Nesse estudo verificou-se que a restrição protéica levou a um aumento do

processo de “turnover” de norepinefrina, e que esse aumento é independente da

diminuição da tirosina oferecida na dieta. Esse mesmo estudo evidenciou que a

acentuação da atividade simpática periférica observada nos animais desnutridos é

conseqüência de um aumento da descarga simpática central. A desnutrição

protéico-calórica imposta durante o período de amamentação causou um prejuízo

no mecanismo de regulação da liberação central de noradrenalina, o que leva ao

aumento da concentração desse neurotransmissor no córtex cerebral desses

animais (Belmar e cols., 1996).

Ratos submetidos a uma dieta hipoproteica logo após o período de

amamentação apresentaram prejuízo do potencial secretório das células β

INTRODUÇÃO

pancreáticas, o que pode ser atribuído a um aumento da atividade simpática e

diminuição da atividade parassimpática nesses animais (Leon-quinto e cols.,

1998).

Dados do nosso laboratório também demonstram efeitos deletérios da

desnutrição após o período de amamentação sobre o sistema cardiovascular.

Tropia e colaboradores em 2001 demonstraram um aumento da sensibilidade do

barorreflexo e do reflexo Bezold-Jarisch em animais submetidos a uma dieta

contendo 6% de proteína. Ainda nesse trabalho foi observado aumento do tônus

vasomotor simpático nesses animais (Tropia e cols., 2001). Utilizando o mesmo

modelo animal, Oliveira e colaboradores observaram aumento dos níveis basais

de freqüência cardíaca (FC) e pressão arterial (PA), além do aumento da

variabilidade desses parâmetros quando analisados no domínio do tempo (Oliveira

e cols., 2004). Loss e colaboradores demonstraram uma perturbação da

homeostase cardiovascular decorrente da desnutrição protéica. Nesse trabalho

foram demonstradas alterações no ganho do barorreflexo antes e após bloqueios

autonômicos além de alteração no período de latência da resposta barorreflexa.

Ainda segundo o autor essas alterações na modulação da atividade autonômica

eferente seriam responsáveis pela manutenção dos altos valores de FC e PAM

basais (Loss e cols., 2007). Trabalho realizado por Gomide e colaboradores

(2007) demonstrou uma importante interação entre o sistema renina-angiotensina

e o sistema simpático vasomotor. Esses autores mostraram uma hiperatividade do

eixo renina-angiotensina na gênese da pressão arterial em animais desnutridos

(Gomide, 2007).

1.3 – Controle Neural da Freqüência Cardíaca

O sistema nervoso autonômico é formado por uma coleção de neurônios

aferentes e eferentes que ligam o sistema nervoso central (SNC) aos órgãos

efetores. Os dois braços eferentes do sistema nervoso autonômico – simpático e

parassimpático – consistem de vias paralelas e diferencialmente reguladas

constituídas de neurônios colinérgicos (neurônios pré-ganglionares) localizadas no

INTRODUÇÃO

SNC que inervam gânglios (por exemplo, gânglio simpático para- ou pré-

vertebral), glândulas (glândula adrenal) ou redes neurais de complexidade variada

(rede ganglionar entérica ou cardíaca) localizadas fora do SNC. Esses gânglios e

redes periféricas contêm os neurônios motores (neurônios ganglionares) que

controlam o músculo liso e outros alvos viscerais. Os neurônios ganglionares

simpáticos que controlam alvos cardiovasculares são primariamente

noradrenérgicos (Guyenet, 2006).

O controle neural da circulação opera via neurônios parassimpáticos que

inervam o coração e via eferências simpáticas que inervam vasos sanguíneos,

coração, rins e adrenais (Guyenet, 2006). Na maioria das condições fisiológicas, a

ativação tanto do braço simpático quanto parassimpático é acompanhada de

inibição do outro braço, razão que deu origem ao conceito de “balanço simpato-

vagal” ou “balanço autonômico”. Isso é verdade não apenas para os reflexos

surgidos predominantemente de áreas barorreceptoras, mas também para os

surgidos a partir do coração (Malliani, 1999).

A atividade das células marca-passo do nódulo sino-atrial, portanto, está

sob regulação contínua e é principalmente afetada por mecanismos neurais

(Lombardi e cols., 1996). Na ausência tanto do sistema nervoso simpático quanto

parassimpático o nódulo sino-atrial possui uma freqüência de disparo intrínseca.

Ao se induzir essa situação, através de bloqueios farmacológicos, por exemplo,

obtém-se a freqüência cardíaca intrínseca ou o intervalo R-R intrínseco. Quando a

influência vagal é predominante sobre o coração, a freqüência cardíaca é menor

que a freqüência cardíaca intrínseca. Já quando o braço simpático é o

predominante, o que se observa é uma freqüência cardíaca maior que a

freqüência cardíaca intrínseca (Goldberger, 1999).

As últimas décadas têm testemunhado o reconhecimento de uma

significante relação entre o sistema nervoso autonômico e mortalidade devido a

problemas cardiovasculares, incluindo morte súbita. Evidências experimentais

mostrando uma associação entre o risco de se desenvolver arritmias letais e sinais

de aumento da atividade simpática e/ou diminuição da atividade parassimpática

encorajaram pesquisadores a desenvolverem marcadores quantitativos da

INTRODUÇÃO

atividade autonômica (Task Force of the European Society of Cardiology and the

North American Society of Pacing and Electrophysiology, 1996).

É difícil se estabelecer qual o melhor índice para se caracterizar o balanço

simpato-vagal. Montano e colaboradores acessaram as alterações sobre o

balanço autonômico durante alterações graduadas do ângulo de inclinação (tilt) ao

qual o paciente era submetido, utilizando o ângulo de inclinação como índice do

balanço simpato-vagal (Montano e cols., 1994). Bootsma e colaboradores também

relataram a relação entre alguns parâmetros do balanço simpato-vagal e o ângulo

de inclinação (Bootsma e cols., 1994). Considerando conhecimentos já

estabelecidos de que o aumento progressivo do ângulo de inclinação leva a

alterações progressivas do balanço simpato-vagal no sentido de aumento da

atividade simpática, torna-se claro que o ângulo de inclinação é uma medida sub-

ótima desse balanço, particularmente porque ela não pode ser generalizada.

Medições do ângulo de inclinação são aplicáveis apenas em situações onde o

indivíduo pode ser submetido a esta situação e não levam em consideração as

diferenças interindividuais no tônus autonômico. É improvável que um indivíduo

com insuficiência cardíaca congestiva, inclinado a 30°, tenha o mesmo balanço

simpato-vagal que indivíduo controle de mesma idade também submetido a essa

inclinação (Goldberger, 1999).

Para se explorar este assunto mais detalhadamente, é necessário se ter um

índice do balanço simpato-vagal que seja amplamente aceito e que obedeça

alguns critérios como: 1) o índice deve variar similarmente entre indivíduos em

resposta a diferentes estímulos autonômicos; 2) indivíduos submetidos às

mesmas condições autonômicas devem apresentar uma variabilidade mínima do

índice entre si; e 3) a resposta do índice às várias condições autonômicas devem

refletir as alterações do estado fisiológico e ter uma interpretação significativa. De

maneira mais específica, o índice deve fornecer informações do efeito resultante

do sistema nervoso simpático e parassimpático (Goldberger, 1999).

Em 1999, Goldberger propôs a utilização de um índice para se acessar a

influência do sistema nervoso simpático e parassimpático sobre o coração. Esse

índice, conhecido na língua inglesa por Vagal-Sympathetic Effect, será aqui

INTRODUÇÃO

traduzido por Índice Autonômico Cardíaco (IAC). Segundo o pesquisador o IAC é

definido pela razão entre o intervalo R-R basal e o intervalo R-R intrínseco, ou

seja, após o duplo bloqueio autonômico. Valores de IAC maiores que 1 refletem

um predomínio vagal, enquanto valores menores que 1 refletem predomínio

simpático (Goldberger, 1999). Segundo o autor o IAC é um índice bastante

robusto do efeito do sistema nervoso simpático e parassimpático sobre o nódulo

sino-atrial. Apesar de este não ser o único índice com potencial para se avaliar o

balanço autonômico sobre o coração, ele certamente fornece uma descrição

fisiologicamente apropriada desse balanço, além de poder ser aplicado em todas

as condições de estímulos autonômicos testados. Apesar disso, essa metodologia

apresenta limitações que impedem sua utilização como rotina na clínica, como por

exemplo, a necessidade de se promover o bloqueio farmacológico dos braços

simpático e parassimpático sobre o coração.

As possibilidades oferecidas por novas técnicas computadorizadas para

quantificar as pequenas oscilações espontâneas das variáveis cardiovasculares

(batimento-a-batimento) e em particular, em relação à eletrocardiografia (intervalo

R-R) aumentaram a visão de que essas oscilações rítmicas poderiam gerar alguns

discernimentos dentro dos mecanismos regulatórios neurais que operam em

organismos íntegros, os quais estão submetidos a grandes variações na vida

cotidiana.

Empregando o algoritmo da transformada rápida de Fourrier (FFT),

Akselrod e colaboradores (1981) provaram que a técnica de análise espectral da

variabilidade da FC poderia ser utilizada como um método quantitativo para avaliar

as flutuações na FC (Akselrod e cols., 1981). Vários métodos espectrais para

análise do tacograma têm sido aplicados nas últimas décadas. A análise da

densidade do “poder” espectral (Power spectral density) fornece informações

básicas de como o “poder” (variância) se distribui em função da freqüência.

Geralmente dois grandes componentes presentes na variabilidade da FC são

reconhecidos: um de alta freqüência (High frequency - HF) relacionado à

respiração e outro de baixa freqüência (Low frequency - LF). O componente de

alta freqüência (HF) é aceito como um marcador da modulação vagal enquanto LF

INTRODUÇÃO

pode ser considerado um marcador da modulação simpática. Além disso, pode-se

também observar um componente menos expressivo de freqüência muito baixa

(VLF). Em humanos, os principais componentes são encontrados nas freqüências

de aproximadamente 0,1 Hz (LF) e 0,25 Hz (HF) (Malliani, 1999; Pagani e cols.,

1986). Já em ratos esses mesmos componentes são encontrados nas freqüências

que variam de 0,20 - 0,75 Hz (LF) e 0,75 – 2,5 Hz (HF) (Dias da Silva e cols.,

2001).

O “poder” de cada componente espectral é expressado graficamente pela

sua área em valores absolutos (ms

). Entretanto, como os valores absolutos de

componentes espectrais são altamente relacionados à variância, alguns outros

índices que focassem principalmente na distribuição fracionária do “poder” se

tornaram necessários. Isso pode ser conseguido calculando-se a razão LF/HF ou

ainda transformando os valores absolutos de LF e HF em unidades normalizadas.

As unidades normalizadas são obtidas dividindo-se o componente LF ou HF pelo

“poder” total do qual o componente VLF foi previamente subtraído e multiplicando

por 100 (Malliani, 1999). Em outras palavras, é feito o cálculo percentual de cada

componente em relação ao “poder” total.

A variabilidade da FC representa um dos mais promissores marcadores da

atividade autonômica. A importância clínica do estudo deste parâmetro no domínio

da freqüência se tornou evidente no final da década de 1980 quando ficou

confirmado que a variabilidade da freqüência cardíaca era um forte e

independente prognosticador de mortalidade após o infarto agudo do miocárdio

(Task Force of the European Society of Cardiology and the North American

Society of Pacing and Electrophysiology, 1996).

Como a determinação da FC depende da interação entre a atividade

eferente simpática e parassimpática e de propriedades das células marca-passo

cardíacas, a utilização dessa técnica pode levar à determinação da regulação

autonômica tônica de uma maneira não invasiva (Pagani e cols., 1986).

OBJETIVOS

2 – OBJETIVOS

2.1 – Objetivo Geral

Avaliar a influência da desnutrição protéica pós-desmame sobre o balanço

autonômico cardíaco de ratos.

2.2 – Objetivos Específicos

• Avaliar a participação do componente simpático sobre a manutenção dos

níveis basais de freqüência cardíaca de ratos desnutridos;

• Avaliar a participação do componente parassimpático sobre a manutenção

dos níveis basais de freqüência cardíaca de ratos desnutridos;

MATERIAL E MÉTODOS

3 – MATERIAL E MÉTODOS

3.1 - Modelo Animal

Neste trabalho foram utilizados ratos Fischer, machos, fornecidos pelo

Laboratório de Nutrição Experimental, Escola de Nutrição, UFOP-MG de acordo

com o Guide to the Care and Use of Experimental Animals (Olfert E.D. & Cross,

1993).

No acasalamento, duas fêmeas e um macho foram colocados em gaiolas

plásticas de 47 x 33 x 15 cm. Após dez dias de acasalamento, os machos foram

retirados e as fêmeas colocadas em gaiolas individuais. Durante o período de

gestação os animais receberam ração comercial Socil ® e água filtrada ad libidum.

Após o nascimento, as ninhadas foram manipuladas aleatoriamente de maneira a

manter oito filhotes por fêmea. As fêmeas continuaram recebendo ração comercial

e água ad libidum e os filhotes foram amamentados durante 28 dias.

Os procedimentos complementares tais como higienização dos materiais

que entraram em contato com os animais e preparo das camas (remoção de pó e

esterilização) foram definidos por protocolos validados e em uso no nosso

laboratório.

3.2 – Metodologia da Desnutrição

Após o desmame os machos da ninhada foram divididos em dois grupos:

• Controle: receberam dieta comercial contendo 15% de proteína (dieta

controle) por 35 dias

• Desnutrido: receberam dieta semi-purificada com 6% de proteína (dieta

de desnutrição) durante 35 dias.

Após o período de 35 dias recebendo dieta específica, os animais foram

utilizados nos experimentos em no máximo 7 dias. Durante esse prazo os ratos

continuaram recebendo a mesma dieta a qual haviam sido submetidos no período

anterior e água à vontade. Estes animais foram submetidos a um ciclo

MATERIAL E MÉTODOS

claro/escuro de 12 horas e mantidos à temperatura média de 22°C. Os

cronogramas da metodologia de desnutrição estão representados na Figura 1 (A e

B).

3.3 – Composição Química das Dietas

As dietas utilizadas nos modelos experimentais diferiram quanto ao teor

protéico. A dieta do grupo controle foi ração comercial Socil® que apresentava

15% de proteína. A dieta para induzir a desnutrição apresentava 6% de proteína e

foi preparada com elementos semi-purificados. A composição química das dietas

está representada na Tabela I.

21 dias

28 dias

35 dias

Gestação

Amamentação

Dieta de Desnutrição

(6% proteína)

7 dias

Experimentos

21 dias

28 dias

35 dias

Gestação

Amamentação

Dieta Controle

(15% proteína)

7 dias

Experimentos

Figura 1 - Cronograma da metodologia de desnutrição protéica

MATERIAL E MÉTODOS

Tabela I - Composição química das dietas (g/100g de ração).

Controle Desnutrido

Proteína (caseína) 15 6

Amido de Milho 70 79

Óleo de Soja 8 8

Mistura de Sais 5 5

Mistura de Vitaminas 1 1

Fibra (Celulose) 1 1

Teor Calórico 422 Kcal 422 Kcal

3.4 – Preparação das Drogas

Solução Salina 0,9%: A solução veículo foi preparada dissolvendo-se 9,0 g

de NaCl em q.s.p. 1000,0 mL de água destilada.

Tribromoetanol 2,5%: A solução foi preparada na concentração de 25 g/L

utilizando-se 2,2,2-tribromoetanol 99% (Aldrich Chemical Co. Milwaukee, WI, USA)

e salina. O recipiente utilizado na preparação do anestésico foi completamente

envolvido em papel alumínio para evitar degradação da substância por ação da

luz. Foi utilizado um agitador termomagnético até total diluição, sob aquecimento

não superior a 40°C. Já em volume final, a solução foi acondicionada em frasco

âmbar e mantida à temperatura ambiente, conforme protocolos em uso no nosso

Laboratório.

Metil-atropina: a solução foi preparada dissolvendo-se 50,0 mg de metil

atropina em q.s.p. 10,0 mL de salina, de modo que a concentração de atropina na

solução fosse de 5,0 mg/mL. A solução foi protegida da luz para evitar

degradação, acondicionada em tubos de polietileno Eppendorf e armazenadas a -

20ºC até o momento do uso.

Metoprolol: A solução de metoprolol foi preparada dissolvendo-se 20,0 mg

de tartarato de metoprolol em q.s.p. 10,0 mL de salina, de modo que a

MATERIAL E MÉTODOS

concentração de metoprolol na solução fosse de 2,0 mg/mL. A solução foi

protegida da luz para evitar degradação, acondicionada em tubos de polietileno

Eppendorf e estocada em freezer a –20º C.

3.5 – Confecção de Cânulas Arteriais e Venosas

Para a confecção das cânulas foram utilizados tubos de polietileno PE-50

previamente soldados a tubos de polietileno PE-10. As dimensões dos tubos

foram ajustadas de acordo com o peso do animal. Para o animal desnutrido foi

utilizado aproximadamente 12 cm de PE50 soldado a 2 cm de PE10 para a artéria

e 1,5 cm de PE 10 para a veia. Para o animal controle foi utilizado

aproximadamente 16 cm de PE50 soldado a 4 cm de PE10 para a artéria e 2 cm

de PE10 para a veia.

3.6 – Confecção de Eletrodos para Registro Eletrocardiográfico

Para a confecção dos eletrodos foram utilizados conectores de 4 pinos,

sendo que cada um desses pinos foram soldados a fios de cobre finos, flexíveis e

encapados. O esquema do conector utilizado está representado na Figura 2.

Figura 2 - Modelo do Conector utilizado para registro de ECG

MATERIAL E MÉTODOS

3.7 – Implante dos Eletrodos e das Cânulas Arteriais e Venosas

Depois de anestesiados com tribromoetanol (250 mg/Kg, i.p.), os animais

foram submetidos a uma incisão no dorso, próximo ao pescoço, e outra incisão na

região torácica, próximo ao osso externo. Os fios de números 2, 3 e 4 do eletrodo

foram passados subcutâneamente a partir do dorso até o peito do animal e

suturados à musculatura peitoral formando o Triângulo de Einthoven. O fio de

número 2 foi suturado próximo ao membro superior direito do animal, o fio de

número 3 foi suturado próximo ao membro superior esquerdo e o fio de número 4

foi suturado próximo ao osso externo. O fio de número 1 foi suturado na

musculatura do dorso do animal, funcionando como terra.

Ainda sob anestesia do tribromoetanol os animais foram submetidos a uma

incisão na face ventral da pata traseira direita. A artéria e a veia femorais foram

dissecadas, expostas e cateterizadas com as cânulas previamente descritas. As

porções de PE-50 foram conduzidas subcutaneamente até o dorso do animal.

Os animais tiveram todas as incisões suturadas de forma que o conector

para registro eletrocardiográfico e as cânulas arterial e venosa permaneceram

fixadas no dorso do animal permitindo que os registros de pressão arterial e

eletrocardiografia fossem realizados com o animal acordado e com livre

movimentação.

Após a cirurgia e antes que fossem instrumentados para realização dos

registros, os animais foram acondicionados em gaiolas individuais mantidas na

sala de experimentos sob condições de temperatura, luminosidade e níveis de

ruído controlados durante 24 horas para recuperação. Durante este período

continuaram recebendo água e ração ad libidum. Todos os experimentos foram

realizados em ratos acordados e em livre movimentação dentro de uma gaiola

apropriada para a realização dos mesmos (gaiola de Faraday).

MATERIAL E MÉTODOS

3.8 – Registro da Pressão Arterial e do ECG

Antes de iniciar o registro, foi administrada salina heparinizada (1:40) na

cânula implantada na artéria femoral do animal com o intuito de impedir a

formação de coágulos durante o experimento. Essa cânula foi conectada a um

transdutor de pressão (STATHAM P23DB®) que por sua vez foi conectada à placa

de aquisição Akilah 4. O conector do ECG também foi conectado ao mesmo

sistema de aquisição que por sua vez foi conectado ao computador através de um

cabo USB. O registro dos dados foi feito pelo software de aquisição Kananda® em

uma freqüência de amostragem de 1000 Hz. A partir do registro da pressão

arterial pulsátil foi calculado on-line a pressão arterial média e a partir do registro

do ECG foi calculada, também on-line, a freqüência cardíaca. A janela de exibição

do software Kananda® está representada pela Figura 3.

Figura 3 – Representação da janela de visualização do software Kananda® durante um

experimento

MATERIAL E MÉTODOS

3.9 – Protocolo Experimental

Após a instrumentação, os animais passaram por um período de adaptação

de aproximadamente 45 minutos. Ao término desse período foram tomados 30

minutos do registro para avaliação dos parâmetros cardiovasculares basais.

Em seguida, iniciaram-se os ensaios no intuito de avaliar a atividade tônica

autonômica cardíaca através de bloqueios farmacológicos dos componentes

autonômicos simpático e/ou parassimpáticos cardíacos. Para tanto, parte dos

animais receberam após o período de registro basal, injeção endovenosa de

atropina (5,0 mg/kg) para bloqueio do braço parassimpático para o coração. 15

minutos após a primeira injeção foi administrado metoprolol (2,0 mg/kg) com o

intuito de bloquear o braço simpático para o coração. O registro prosseguiu por

mais 15 minutos onde se obteve os dados para a avaliação dos parâmetros

cardiovasculares sem a interferência do sistema autonômico sobre o coração. A

outra parte dos animais receberam as mesmas drogas acima citadas, porém em

ordem inversa, ou seja, primeiramente foi administrado metoprolol (2,0 mg/kg) e

em seguida a atropina (5,0 mg/kg). Com isso pode-se também avaliar os

parâmetros cardiovasculares sob bloqueio simpático ou parassimpático

separadamente. Os esquemas dos protocolos experimentais estão representados

na Figura 4 (A e B).

30 minutos

15 minutos

Basal

Bloqueio

Parassimpático

Bloqueio

Duplo

Início do registro Atropina

Metoprolol

30 minutos

15 minutos

Basal

Bloqueio

Parassimpático

Bloqueio

Duplo

Início do registro Atropina

Metoprolol

MATERIAL E MÉTODOS

30 minutos

15 minutos

Basal

Bloqueio

Simpático

Bloqueio

Duplo

Início do registro Metoprolol

Atropina

30 minutos

15 minutos

Basal

Bloqueio

Simpático

Bloqueio

Duplo

Início do registro Metoprolol

Atropina

Figura 4 - Esquema dos protocolos experimentais

3.10 – Análise dos Dados

O software Kananda®, além de ser utilizado para o registro dos dados, foi

também utilizado para converter os mesmos do formato “.knd” (originalmente

gerado pelo Kananda®) para o formato “.txt” (arquivos de texto). Após conversão,

os dados foram carregados no software AcqKnowledge v 3.5.7®, onde foram

feitas as análises.

3.10.1 – Análise da Freqüência Cardíaca e Pressão Arterial Média

Para análise da freqüência cardíaca, do intervalo R-R basal e da PAM basal

foi feito uma média de 5 minutos do registro antes da injeção de qualquer droga.

Após a injeção da primeira droga (atropina ou metoprolol) foi feita outra média de

5 minutos do registro e por fim mais um segmento de 5 minutos foi analisado após

a injeção da segunda droga (metoprolol ou atropina), onde foi obtido o valor de FC

intrínseca ou intervalo R-R intrínseco.

3.10.2 – Análise do Índice Autonômico Cardíaco

O índice autonômico cardíaco foi calculado dividindo-se o valor da média de

um período de 5 do intervalo RR basal pelo valor da média de 5 minutos do

intervalo RR após bloqueio duplo.

MATERIAL E MÉTODOS

3.10.3 – Análise do Tônus Autonômico Cardíaco

O tônus simpático foi quantificado subtraindo-se o valor de FC intrínseca do

valor de FC pós atropina. Já o tônus vagal foi quantificado subtraindo-se o valor de

FC pós metoprolol do valor de FC intrínseca.

3.10.4 – Análise da Variabilidade da FC no Domínio da Freqüência

O algoritmo da transformada rápida de Fourier foi aplicado diretamente

sobre segmentos de 5 minutos de registro de intervalo R-R. A janela de Hamming

foi utilizada para se evitar o “vazamento espectral”. O espectro foi dividido em

baixa freqüência (LF 0,20 – 0,75 Hz) e alta freqüência (HF 0,75 – 2,50 Hz) de

acordo com a literatura (Dias da Silva e cols., 2001). Para melhor comparação de

dados entre diferentes animais foram calculados a razão LF/HF e a porcentagem

com que cada uma das bandas de freqüência contribui para o poder total sem se

levar em conta a banda de VLF.

3.10.5 – Análise Estatística

A análise estatística dos dados foi feita através do teste t de Student para

comparação entre 2 grupos considerando-se diferença significativa quando

P<0,05 (95% de confiança). Os resultados são mostrados como média ± erro

padrão.

RESULTADOS

4 - RESULTADOS

4.1 – Efeito da Desnutrição sobre o Peso Corporal dos Ratos

A restrição protéica imposta fez com que os animais desnutridos

apresentassem peso significativamente menor que os animais do grupo controle

ao final dos 35 dias de desnutrição (68±3g vs. 198±4g). Estes resultados são

mostrados na Figura 5 e Tabela III.

100

150

200

250

(

)

Controle (n=16) Desnutrido (n=14)

Figura 5 - Efeito da restrição protéica sobre o peso corporal dos ratos

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

RESULTADOS

4.2 – Efeito da Desnutrição sobre a FC e PAM Basais

Os níveis basais de FC do grupo desnutrido (432±16 bpm) apresentaram

um aumento significativo em relação ao grupo controle (367±5 bpm). Já sobre a

PAM não observamos diferença entre os grupos (111±4 mmHg desnutrido vs.

113±1 mmHg controle). Estes resultados podem ser observados na Figura 6 (A e

B) e Tabela IV.

100

200

300

400

500

600

FC (bpm)

Controle Basal (n=16)

Desnutrido Basal (n=14)

120

150

PAM (mmHg)

Controle (n=16) Desnutrido (n=14)

Figura 6 - Níveis Basais de FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

RESULTADOS

4.3 – Efeito do Bloqueio Vagal sobre os Níveis de FC e PAM

A injeção de atropina promoveu um aumento significativo sobre a FC do

grupo controle (371 ± 6 vs. 427 ± 15 bpm). Já sobre a FC do grupo desnutrido não

observamos alterações significativas decorrentes da administração dessa droga

(438 ± 24 vs. 472 ± 38 bpm). Sobre a PAM não observamos nenhuma alteração

em nenhum dos dois grupos, controle (115 ± 1 vs. 117 ± 2 mmHg) e desnutrido

(108 ± 7 vs. 110 ± 8 mmHg). Esses resultados podem ser visualizados na Figura 7

(A e B) e Tabela V.

100

200

300

400

500

600

FC (bpm)

Controle Basal (n=8) Controle Atropina (n=8)

Desnutrido Basal (n=6) Desnutrido Atropina (n=6)

120

150

PAM (mmHg)

Controle Basal (n=8) Controle Atropina (n=8)

Desnutrido Basal (n=6)

Desnutrido Atropina (n=6)

Figura 7 - FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido após bloqueio vagal

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

Diferença significativa comparado ao basal (P<0,05).

RESULTADOS

4.4 – Efeito do Bloqueio Beta-Adrenérgico sobre os Níveis de FC e

PAM

A administração endovenosa de metoprolol promoveu uma diminuição

significativa da FC no grupo desnutrido (428 ± 24 vs. 355 ± 16 bpm) enquanto no

grupo controle não foram observadas alterações (363 ± 8 vs. 363 ± 8 bpm). A

PAM novamente não se alterou significativamente nesses grupos, controle (111 ±

2 vs. 113 ± 2 mmHg) e desnutrido (114 ± 6 vs. 109 ± 5 mmHg). Esses resultados

podem ser visualizados na Figura 8 (A e B) e na Tabela VI.

100

200

300

400

500

600

FC (bpm)

Controle Basal (n=8) Controle Metoprolol (n=8)

Desnutrido Basal (n=8) Desnutrido Metoprolol (n=8)

†

120

150

PAM (mmHg)

Controle Basal (n=8) Controle Metoprolol (n=8)

Desnutrido Basal (n=8) Desnutrido Metoprolol (n=8)

Figura 8 - FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido após bloqueio beta-adrenérgico

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05)

† Diferença significativa comparada ao basal (P<0,05)

RESULTADOS

4.5 – Efeito do Duplo Bloqueio (Vagal e Beta-Adrenérgico) sobre

os Níveis de FC e PAM

O duplo bloqueio promoveu uma redução significativa da FC nos animais do

grupo desnutrido (432 ± 16 vs. 342 ± 14 bpm), mas não alterou significativamente

a FC nos animais do grupo controle (367 ± 5 vs. 382 ± 6 bpm). A PAM não se

alterou em nenhum dos grupos estudados, controle (113 ± 1 vs. 114 ± 2 mmHg) e

desnutrido (111 ± 4 vs. 106 ± 5 mmHg). Além disso, a freqüência cardíaca

intrínseca do grupo desnutrido é menor que a freqüência cardíaca intrínseca do

grupo controle. Estes dados podem ser visualizados nas Figuras 9 (A e B) e na

Tabela VII.

A análise do perfil de variação da FC após este bloqueio mostrou uma

diferença significativa entre os grupos controle (15 ± 7 bpm) e desnutrido

(-91±9bpm). Estes dados podem ser visualizados na Figura 10.

100

200

300

400

500

FC (bpm)

Controle Basal (n=16) Controle Intrínseco (n=16)

Desnutrido Basal (n=14)

Desnutrido Intrínseco (n=14)

†

RESULTADOS

120

150

PAM (mmHg)

Controle Basal (n=16) Controle Intrínseco (n=16)

Desnutrido Basal (n=14)

Desnutrido Intrínseco (n=14)

Figura 9 - FC (A) e PAM (B) dos grupos controle e desnutrido após bloqueio duplo

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05)

† Diferença significativa comparado ao basal (P<0,05)

-100

-75

-50

-25

100

∆

∆FC (bpm)

Controle (n=16) Desnutrido (n=14)

Figura 10 - Variação da FC dos grupos controle e desnutrido após bloqueio duplo

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

RESULTADOS

4.6 – Efeito da Desnutrição sobre o Índice Autonômico Cardíaco

O índice autonômico cardíaco se mostrou diferente entre os grupos

estudados. Para o grupo controle o valor obtido foi de 1,04 ± 0,2. Já o grupo

desnutrido apresentou IAC de 0,79 ± 0,2. Os resultados estão representados na

Tabela II.

Tabela II - Índice Autonômico Cardíaco dos grupos controle e desnutrido

GRUPO IAC

CONTROLE (n=16) 1,04 ± 0,2

DESNUTRIDO (n=14) 0,79 ± 0,2 *

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

4.7 – Efeito da desnutrição sobre o tônus simpático e

parassimpático

Os animais do grupo desnutrido apresentaram alterações tanto sobre o

tônus simpático quanto parassimpático quando comparados ao grupo controle. A

análise do tônus nos permite inferir sobre a capacidade de cada um dos braços

autonômicos em determinar a FC intrínseca. O tônus simpático está aumentado

nos animais submetidos à dieta hipoproteica quando comparado ao grupo controle

(131 ± 17 vs. 41 ± 11 bpm respectivamente). Já a participação parassimpática

encontra-se diminuída nos animais desnutridos quando comparada ao controle

(-4 ± 4 vs. 22 ± 9 bpm respectivamente). Estes resultados estão explicitados na

Figura 11(A e B).

RESULTADOS

100

120

140

160

∆

∆FC (bpm)

Controle (n=8) Desnutrido (n=6)

-25

∆

∆FC (bpm)

Controle (n=7) Desnutrido (n=6)

Figura 11 - Tônus simpático (A) e parassimpático (B) dos grupos controle e desnutrido

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

RESULTADOS

4.8 – Efeito da Desnutrição sobre a Relação LF/HF e a

Porcentagem de Participação de cada uma dessas Freqüências

sobre o Poder Total.

Os animais do grupo desnutrido apresentaram relação LF/HF

aumentada em relação ao grupo controle (0,43 ± 0,03 vs. 0,34 ± 0,02

respectivamente). Conseqüentemente a participação percentual de cada uma das

freqüências analisada foi diferente entre os grupos (Controle: 24% LF e 76% HF

vs. Desnutrido: 31% LF e 69% HF). Os dados podem ser melhor visualizados nas

Figuras 12 e 13 (A e B) e na Tabela VIII.

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

0,35

0,40

0,45

0,50

LF/HF

Controle (n=16)

Desnutrido (n=14)

Figura 12 - Relação LF/HF dos grupos controle e desnutrido

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

RESULTADOS

24%

76%

31%

69%

Figura 13 - Percentual de participação de cada uma das bandas de freqüência analisadas nos

grupos controle (A) e desnutrido (B)

DISCUSSÃO

5 – DISCUSSÃO

A desnutrição ainda hoje é considerada um dos problemas mais sérios de

saúde pública no mundo. Estudos realizados tanto em humanos quanto em

animais têm relatado efeitos adversos sobre a homeostase de diversos sistemas

fisiológicos, dentre eles o cardiovascular. Porém ainda estamos longe de entender

por completo os danos causados por essa condição patológica, o que torna

necessário a realização de novos estudos que ajudem a desvendar os malefícios

causados pela desnutrição sobre o organismo.

Neste intuito, o desenvolvimento de modelos experimentais que se

aproximem das condições encontradas em humanos é de fundamental

importância. Experimentos com animais têm permitido cada vez mais

esclarecimentos e são muito importantes para se verificar fisiopatologias

específicas da desnutrição.

A desnutrição intra-uterina, induzida por alteração na dieta das fêmeas

grávidas, envolve fases de crescimento rápido e pode causar alterações

irreversíveis em vários sistemas, incluindo o cardiovascular. Várias linhas de

pesquisa adotam a hipótese de que a desnutrição intra-uterina leva a uma

programação fetal, o que predispõe ao desenvolvimento de doenças crônico-

degenerativas. Hipertensão, doenças coronarianas, diabetes tipo II e doenças

renais são algumas das desordens relacionadas ao baixo peso ao nascer (Barker

e cols., 1990; Barker e cols., 1993; Hoy e cols., 1999; Phillips e cols., 1994).

Em nosso laboratório utilizamos o rato como modelo animal por apresentar

metabolismo acelerado, ciclo reprodutivo curto e ser de fácil manuseio. O modelo

de desnutrição proposto foi baseado na redução do conteúdo protéico da dieta

oferecida após o desmame de 15% para 6%, o que representa uma redução de

60% da proteína dietética. Esta metodologia já vem sendo utilizada em nosso

laboratório (Loss e cols., 2007; Oliveira e cols., 2004; Tropia e cols., 2001) e

assemelha-se aos métodos utilizados em outros trabalhos da literatura (Agarwal e

cols., 1981; Ferreira e cols., 2003; Lukoyanov & Andrade, 2000).

DISCUSSÃO

Após o período de 35 dias observamos uma redução de aproximadamente

65% sobre o peso corporal dos animais do grupo desnutrido quando comparados

ao grupo controle (Fig. 5). A diferença de peso entre os dois grupos foi

estatisticamente diferente e garante que a dieta oferecida a esse grupo foi

eficiente em promover a desnutrição, uma vez que a redução do peso corporal

pode ser utilizada como um indicador básico dessa condição (Lucas, 1998).

Comparações qualitativas entre os grupos experimentais indicaram que os

animais submetidos à desnutrição apresentaram queda de pêlos, menor estatura e

quantidade de tecido adiposo reduzida. Além disso, outros fatores característicos

do quadro de desnutrição já foram descritos em nosso laboratório e incluem

menores níveis de proteína total e albumina plasmática (Oliveira e cols., 2004).

A literatura vem demonstrando que a desnutrição protéica em fases iniciais

da vida do animal pode afetar tanto o processo de proliferação celular quanto o

tamanho desses ratos, pois ocorre um prejuízo no desenvolvimento corporal

através da depleção da massa muscular e diminuição de peso (Benabe e cols.,

1993; Martinez-Maldonado e cols., 1993). Outros estudos demonstraram também

que a desnutrição pode interromper o processo de divisão celular, uma resposta

adaptativa do organismo a este insulto alimentar (Srivastava e cols., 1974;

Widdowson & MCCANCE, 1963; Widdowson, 1963). Diversos outros trabalhos

que utilizaram o rato como modelo experimental também têm relatado o déficit no

peso corporal promovido pela desnutrição (Kim e cols., 1994; Oliveira e cols.,

2004; Zucoloto e cols., 1975). Os dados obtidos em nosso estudo são, portanto,

compatíveis com dados encontrados na literatura que descrevem os fatos

observados como uma adaptação promovida pelo organismo para se ajustar às

condições nutricionais adversas e manter a vida do animal.

Em nosso trabalho os valores de FC dos animais desnutridos encontram-se

aumentados em relação ao grupo controle. Já a PAM não se mostrou diferente

entre os grupos (Fig. 6). Os resultados de Tropia e cols. (2001) mostraram que a

desnutrição protéica provocada após a amamentação por um período de 35 dias

não altera os níveis basais de PAM e FC de ratos, no entanto tais dados

apontaram um aumento da atividade simpática vasomotora naqueles animais.

DISCUSSÃO

Neste trabalho foi observada uma maior queda da PAM decorrente da

administração de prazosin, bloqueador α-adrenérgico, no grupo desnutrido quando

comparado ao grupo controle (Tropia e cols., 2001). Posteriormente, neste mesmo

modelo experimental, mas utilizando uma metodologia que envolve maior tempo

de registro e análise de um número maior de pontos Oliveira e colaboradores

observaram níveis maiores de PAM e FC basais. No que diz respeito à FC nossos

resultados assemelham-se àqueles reportados por esses últimos autores, apesar

da metodologia utilizada na coleta de dados do presente trabalho se aproximar da

realizada por Tropia e cols. (2001). Já quanto à PAM o fato de não encontrarmos

diferença entre os grupos pode ser atribuído ao emprego de uma metodologia

menos precisa do que a utilizada por Oliveira e colaboradores.

Dados mais recentes do nosso laboratório utilizando um maior número de

animais e também com uma análise mais voltada para a avaliação dos níveis de

pressão arterial demonstraram não só o aumento dos níveis basais de PAM mas

também aumento da atividade do sistema renina-angiotensina (SRA) nos animais

submetidos ao mesmo protocolo de desnutrição que os utilizados em nosso

trabalho (Gomide, 2007). Normalmente considera-se que o sistema renina-

angiotensina exerce seu efeito sobre a pressão arterial de uma maneira

independente, porém alguns trabalhos têm mostrado uma interação entre o

sistema renina-angiotensina e outros sistemas de controle da pressão arterial, em

particular, o sistema nervoso simpático (Grisk & Rettig, 2004; Grisk, 2005; Heusser

e cols., 2003). Diante de dados anteriores do nosso laboratório que descrevem

aumento da FC e PAM basais, atividade simpática vasomotora e atividade do SRA

aumentados e de dados da literatura mostrando alterações autonômicas

decorrentes de uma situação de desnutrição em diferentes fases do

desenvolvimento do animal, avaliamos o balanço autonômico cardíaco em nossos

animais.

Vários estudos têm utilizado protocolos que empregam o bloqueio

farmacológico na tentativa de melhor avaliar o controle autonômico sobre o

coração (Ahmed e cols., 1994; Convertino & Sather, 2000; Diz & Jacobowitz,

DISCUSSÃO

1984; Goldberger, 1999; Machado & Brody, 1989), o que valida a metodologia

utilizada em nosso estudo.

Após administração de metoprolol, bloqueador β1-adrenérgico, observamos

uma redução significativa da FC nos animais desnutridos. Já no grupo controle a

FC não variou em decorrência dessa droga. Outro dado interessante observado

em nosso estudo foi que a FC do grupo desnutrido após a administração de

metoprolol se aproximava da FC do grupo controle, o que sugere fortemente que

os animais tratados com a dieta hipoproteica apresentam um aumento da

atividade eferente simpática para o coração (Fig. 8). Esses resultados corroboram

dados da literatura que também demonstram aumento da atividade simpática em

animais submetidos a diferentes protocolos de desnutrição (Phillips & Barker,

1997; Young e cols., 1985)

Bloqueando o braço parassimpático com atropina observamos um maior

aumento da FC no grupo controle quando comparado com o grupo desnutrido

(Fig. 7) indicando um prejuízo da participação vagal sobre o cronotropismo

cardíaco em nosso grupo experimental.

Avaliamos também a freqüência cardíaca intrínseca, ou seja, após bloqueio

de ambas as divisões do sistema nervoso autônomo. Após o duplo bloqueio foi

observado uma redução da FC no grupo desnutrido enquanto a FC do grupo

controle não se alterou significativamente. A Figura 10 demonstra claramente a

diferença no perfil de variação da FC após o duplo bloqueio farmacológico.

Machado e Brody em 1989 demonstraram que tanto o aumento da atividade

simpática quanto a diminuição da atividade vagal levam à diminuição da FCI

(Machado & Brody, 1989). Em nosso estudo observamos que os animais do grupo

desnutrido apresentam FCI menores que os animais controle, mais uma vez

corroborando dados da literatura e fortalecendo nossa hipótese de que a

desnutrição, mesmo quando induzida após o desmame, é capaz de promover

alterações no sistema de controle cardiovascular.

O índice autonômico cardíaco proposto por Goldberger em 1999 utiliza um

simples artifício matemático para se avaliar o balanço autonômico para o coração.

Dividindo-se a média dos intervalos RR basal pela média dos intervalos RR após

DISCUSSÃO

bloqueio autonômico podemos ter uma boa idéia de qual é a resultante da

interação entre os braços simpático e parassimpático para o coração. Como já era

esperado o resultado de IAC para o grupo desnutrido foi menor que 1 indicando

predomínio simpático enquanto o IAC encontrado para o grupo controle foi maior

que 1, demonstrando o predomínio parassimpático sobre a FC desses animais

(Tabela II). Vale lembrar que esse índice fornece dados sobre qual o braço

predominante na determinação da FC, sem a menor pretensão de avaliar os níveis

individuais do tônus simpático e parassimpático

Sabe-se que a ativação simpática crônica para o coração aumenta o risco

de morte súbita tanto em humanos quanto em ratos (Fletcher, 2001; Judy e cols.,

1976; Schultz e cols., 2007; Schultz & Li, 2007). Além disso, vários pesquisadores

vêm demonstrando o desenvolvimento de disfunções cardiovasculares

decorrentes de um quadro de desnutrição (Sawaya e cols., 2003; Young e cols.,

1985), ressaltando a importância em se desenvolver estudos relacionados com a

gênese do desbalanço autonômico em indivíduos submetidos cronicamente a uma

dieta hipoproteica.

Vários pesquisadores vêm se empenhando em desenvolver índices

capazes de quantificar de forma cada vez mais precisa a contribuição de cada um

dos braços do sistema nervoso autonômico para a manutenção da FC. A análise

da variabilidade da FC no domínio da freqüência tem se mostrado um dos mais

promissores métodos de análise do balanço autonômico cardíaco, inclusive com

grande aplicação na clínica médica. Porém, deve-se ter muito cuidado ao se

analisar estes dados isoladamente, uma vez que já foram descritas situações em

que a utilização desta metodologia não é indicada para se avaliar a atividade

simpática e/ou parassimpática para o coração (Notarius & Floras, 2001). Por isso

é interessante que a análise espectral não seja utilizada como única fonte de

dados para avaliação de balanço autonômico cardíaco, pelo menos em modelos

experimentais ainda não avaliados com essa metodologia.

Em nosso trabalho avaliamos a relação LF/HF assim como o percentual

com que de cada uma das freqüências (LF ou HF) contribuem para o poder total,

de onde foi subtraído a região de baixíssima freqüência (VLF). Mais uma vez os

DISCUSSÃO

resultados encontrados apontaram para um predomínio da atividade simpática

sobre a parassimpática nos animais submetidos à dieta composta de 6% de

proteína. Nesses animais a relação LF/HF foi de 0,43, a participação de LF foi de

31% enquanto HF participa com 69%. Já o grupo controle apresentou relação

LF/HF de 0,34, 24% de participação de LF e 76% de HF. Esses resultados não só

confirmam os dados obtidos através de manobras farmacológicas, discutidos

anteriormente, como também validam a utilização da análise da variabilidade da

FC no domínio da freqüência como método de avaliação do balanço autonômico

cardíaco em nosso modelo experimental.

Com o intuito de elucidar a participação individual de cada um dos

componentes do sistema nervoso autonômico para o coração nos propusemos a

avaliar o tônus simpático e parassimpático de cada um dos grupos estudados.

Como demonstrado na Figura 11A, a participação simpática sobre a manutenção

da FC basal se mostrou significativamente aumentada nos animais desnutridos

quando comparados aos controles. Além disto, o sistema nervoso parassimpático

dos animais desnutridos se mostrou ineficiente na tentativa de manter os níveis de

FC basais dentro dos limites normais (Figura 11B).

O prejuízo do componente eferente vagal aliado a evidências de aumento

na atividade simpática, aproximam as disfunções autonômicas observadas na

desnutrição, não apenas àquelas apontadas na hipertensão arterial, mas também

ao quadro autonômico encontrado na insuficiência cardíaca. Esta última patologia

leva a uma série de alterações fisiológicas que podem influir diretamente no

estado nutricional. Indivíduos acometidos de insuficiência cardíaca apresentam,

freqüentemente, perda de peso de modo progressivo podendo chegar ao quadro

de caquexia cardíaca (Costa & Silva, 2002). Pertinentemente, nossos resultados

reforçam a importância do cuidado nutricional nessa patologia no intuito de

prevenir efeitos sinérgicos das disfunções autonômicas desencadeadas em ambas

as morbidades, desnutrição e insuficiência cardíaca, uma vez que, apenas

recentemente, foi descrita na literatura a ocorrência de falência cardíaca em

conseqüência de uma desnutrição protéica (Cheema e cols., 2005). Vale lembrar

que a metodologia de desnutrição utilizada por aqueles autores é gestacional e

DISCUSSÃO

difere da empregada em nossos trabalhos, especialmente, pela reversibilidade dos

danos promovidos no organismo dos animais. Estudos preliminares do nosso

laboratório vêm demonstrando um prejuízo da função cardíaca nos animais

anestesiados submetidos à desnutrição protéica pós-desmame (Alves e cols.,

2007).

Vários possíveis mecanismos têm sido propostos na tentativa de explicar as

observações aqui relatadas e é válido destacar alguns deles. A desnutrição

durante o período crítico de desenvolvimento pode levar ao desbalanço

autonômico através de alterações morfológicas em várias áreas do sistema

nervoso central (SNC) envolvidas na geração e/ou modulação da atividade

simpática, como o hipotálamo (Plagemann e cols., 2000). Pode-se ainda observar

alterações na liberação de neurotransmissores no SNC (Agarwal e cols., 1981;

Kim e cols., 1994). Belmar e colaboradores demonstraram que a desnutrição

energético-protéica imposta durante a fase de amamentação afeta o mecanismo

através do qual os receptores α-2 regulam a liberação de noradrenalina central,

levando a um aumento da liberação desse neurotransmissor no cérebro. Os

autores justificam esse fato por uma provável alteração, durante o

desenvolvimento, da quantidade e/ou qualidade da população desses adreno-

receptores (Belmar e cols., 1996).

Tomados em conjunto nossos dados revelam que a desnutrição protéica

pós desmame interfere negativamente sobre a homeostase cardiovascular

levando a um aumento da atividade eferente simpática e diminuição da atividade

vagal para o coração.

Sabemos que muito ainda deve ser feito na tentativa de se elucidar os

mecanismos pato-fisiológicos responsáveis pelas alterações acima mencionadas.

Tal conhecimento poderia fornecer informações cruciais que levariam ao

aperfeiçoamento de métodos de tratamento de distúrbios homeostáticos em

pessoas submetidas à desnutrição protéica, além de contribuir com os governos

de países subdesenvolvidos na adoção de políticas de saúde mais adequadas.

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6 – REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Ref Type: Electronic Citation

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intake in rats. Morphological changes]. Arch.Latinoam.Nutr. 25, 385-400.

APÊNDICE

7 – APÊNDICE

Tabela III - Efeito da restrição protéica sobre o peso corporal dos ratos

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL PESO (g) ANIMAL PESO (g)

220

190

180

215

230

200

190

180

204

190

180

195

230

190

180

MÉDIA

198 ± 4

MÉDIA 68 ± 3*

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

APÊNDICE

Tabela IV - Níveis basais de FC e PAM dos grupos controle e desnutrido

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL

FC basal

(bpm)

PAM basal

(mmHg)

FC basal

(bpm)

PAM basal

(mmHg)

1 361

116

382

108

2 357

113

467

3 359

119

351

4 378

108

500

109

5 378

117

453

6 401

112

477

7 353

119

454

108

8 379

114

560

136

9 346

114

408

115

10 390

112

428

116

11 348

108

382

116

12 368

109

400

144

13 332

105

459

108

14 390

107

331

122

15 382

114

16 351

122

MÉDIA 357 ± 5 113 ± 1 432 ± 16* 111 ± 4

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

APÊNDICE

Tabela V - FC e PAM antes e após bloqueio vagal

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL

FC basal

(bpm)

FC atropina

(bpm)

FC basal

(bpm)

FC atropina

(bpm)

361 451 382 354

357 419 467 560

359 400 351 360

378 405 500 549

378 513 453 479

401 444 477 527

353 392

379 388

MÉDIA 371 ± 6 427 ± 15* 438 ± 24 472 ± 38

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL

PAM basal

(mmHg)

PAM atropina

(mmHg)

PAM basal

(mmHg)

PAM atropina

(mmHg)

116 120 108 104

113 114 86 94

119 111 109 106

108 114 98 98

117 124 108 112

112 111 136 147

119 124

114 116

MÉDIA 115 ± 1 117 ± 2 108 ± 7 110 ± 8

* Diferença significativa comparado aos valores anteriores à administração da droga (P<0,05).

APÊNDICE

Tabela VI – FC e PAM antes e após bloqueio adrenérgico

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL

FC basal

(bpm)

FC metoprolol

(bpm)

FC basal

(bpm)

FC metoprolol

(bpm)

346 368 454 377

390 365 560 416

348 332 408 319

368 352 428 370

332 385 382 347

390 349 400 366

382 398 459 377

351 351 331 269

MÉDIA 363 ± 8 363 ± 8 428 ± 24 355 ± 16

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL

PAM basal

(bpm)

PAM metoprolol

(bpm)

PAM basal

(bpm)

PAM metoprolol

(bpm)

114 114 115 120

112 109 116 98

108 120 116 118

109 106 144 129

105 108 108 100

107 107 122 117

114 119 98 97

122 121 91 92

MÉDIA 111 ± 2 113 ± 2 114 ± 6 109 ± 5

* Diferença significativa comparado aos valores anteriores à administração da droga (P<0,05).

APÊNDICE

Tabela VII – FC e PAM dos grupos controle e desnutrido após bloqueio dos braços

simpático e parassimpático

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL

FC após

bloqueio duplo

(bpm)

PAM após

bloqueio duplo

(mmHg)

FC após

bloqueio duplo

(bpm)

PAM após

bloqueio duplo

(mmHg)

356

120

265

383

114

361

106

267

391

119

425

100

449

128

360

387

108

363

393

118

389

364

117

397

142

396

111

274

130

376

114

367

393

126

342

116

388

103

352

132

360

110

348

375

103

274

116

386

115

352

119

MÉDIA 382 ± 6 114 ± 2 342 ± 14* 106 ± 5

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

APÊNDICE

Tabela VIII – LF e HF basais e a relação LF/HF dos grupos controle e desnutrido

CONTROLE DESNUTRIDO

ANIMAL LF HF LF/HF LF HF LF/HF

1 8,16 20,30 0,40 1,91 5,14 0,37

2 14,50 43,90 0,33 11,50 15,80 0,73

3 7,47 41,70 0,18 2,25 7,05 0,32

4 18,80 38,70 0,49 5,30 10,70 0,50

5 3,85 8,63 0,45 2,34 5,43 0,43

6 6,70 19,70 0,34 5,68 12,20 0,47

7 4,97 13,90 0,36 8,96 19,40 0,46

8 8,16 19,90 0,41 2,76 6,90 0,40

9 13,20 43,40 0,30 4,57 12,00 0,38

10 5,71 19,00 0,30 7,23 12,10 0,60

11 9,32 26,50 0,35 7,17 20,60 0,35

12 13,50 68,10 0,20 2,22 6,39 0,35

13 7,77 21,60 0,36 4,14 9,71 0,43

14 4,43 13,00 0,34 3,29 10,40 0,32

15 3,11 9,58 0,32

16 1,48 6,00 0,25

MÉDIA 8,2 ± 1,2 25,9 ± 4,2

0,34 ± 0,02

5,0 ± 0,8

11,0 ± 1,3

0,43 ± 0,03*

* Diferença significativa comparado ao grupo controle (P<0,05).

PRODUÇÃO CIENTÍFICA

8 – Produção Científica

8.1 – Resumos em Congressos

MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; SILVA, Antônio Leite; RODRIGUES,

Fabiana Aparecida; MORAES, Márcio Flávio Dutra; SILVA, Marcelo Eustáquio;

FERNANDES, Luciano Gonçalves; CHIANCA JR, Deoclécio Alves. ANÁLISE

ESPECTRAL E AVALIAÇÃO DO TÔNUS SIMPÁTICO E PARASSIMPÁTICO

SOBRE A FREQUÊNCIA CARDÍACA DE RATOS DESNUTRIDOS. In: FESBE,

Águas de Lindóia. 2007.

RODRIGUES, Fabiana Aparecida; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; SILVA,

Fernanda Cacilda dos Santos; MOURA JR, Manoel Ramos; MORAES, Márcio

Flávio Dutra; SILVA, Marcelo Eustáquio; FERNANDES, Luciano Gonçalves;

CHIANCA JR, Deoclécio Alves. RESPOSTA PRESSORA À MICROINJEÇÃO DE

L-GLUTAMATO NO RVLM DE RATOS SUBMETIDOS À DESNUTRIÇÃO

PROTÉICA. In: FESBE, Águas de Lindóia. 2007.

LOSS, Igor de Oliveira; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; MOURA JR, Manoel

Ramos; TOSTES, Maria das Graças Vaz; GOMIDE, Joelma Maria Cardoso;

SILVA, Antônio Leite; CARDOSO, Leonardo Máximo; SILVA, Marcelo Eustáquio;

MORAES, Márcio Flávio Dutra; CHIANCA JR, Deoclécio Alves. CARDIAC

AUTONOMIC DYSFUNCTION IN CHRONOTROPIC BAROREFLEX RESPONSE

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ALVES, Arthur Moreira; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; LOSS, Igor de

Oliveira; MORAES, Vanessa Bezerra; CARDOSO, Leonardo Máximo; SILVA,

Marcelo Eustáquio; MORAES, Márcio Flávio Dutra; CHIANCA JR, Deoclécio

Alves. EVALUATION OF THE LET VENTRICULAR dP/dT IN ANESTHETIZED

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CONGRESS OF THE

BRAZILIAN PHYSIOLOGICAL SOCIETY & JOINT MEETING WITH THE

PHYSIOLOGICAL SOCIETY, Ribeirão Preto. 2006.

MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; OLIVEIRA, Eduardo Luiz de; SILVA,

Antônio Leite; CARDOSO, Leonardo Máximo; MOURA JR, Manoel Ramos;

MORAES, Márcio Flávio Dutra; SILVA, Marcelo Eustáquio; PEDROSA, Maria

Lúcia; CHIANCA JR, Deoclécio Alves. BALANÇO AUTONÔMICO CARDÍACO DE

RATOS SUBMETIDOS À RESTRIÇÃO PROTÉICA. In: FESBE, Águas de Lindóia.

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SILVA, Antônio Leite; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; OLIVEIRA, Eduardo

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Flávio Dutra; CHIANCA JR, Deoclécio Alves. AVALIAÇÃO DO BARORREFLEXO

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OLIVEIRA, Eduardo Luiz de; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; SILVA,

Antônio Leite; CARDOSO, Leonardo Máximo; PEDROSA, Maria Lúcia; SILVA,

Marcelo Eustáquio; MORAES, Márcio Flávio Dutra; CHIANCA JR, Deoclécio

Alves. AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS BASAIS E VARIABILIDADE DA PRESSÃO

ARTERIAL MÉDIA E FREQUÊNCIA CARDÍACA APÓS TRATAMENTO AGUDO

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AMARAL, Daniela Almeida; TOSTES, Maria das Graças Vaz; MARTINS, Carlito

D'Angelo Drumond; PENITENTE, Arlete Rita; SILVA, Marcelo Eustáquio;

PEDROSA, Maria Lúcia; MORAES, Márcio Flávio Dutra; CHIANCA JR, Deoclécio

Alves. PARÂMETROS BIOQUÍMICOS E NUTRICIONAIS DE RATOS

RECUPERADOS DE UMA DESNUTRIÇÃO PROTÉICA. In: FESBE, Águas de

Lindóia. 2004.

MOURA JR, Manoel Ramos; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; AMARAL,

Daniela Almeida; TOSTES, Maria das Graças Vaz; LOSS, Igor de Oliveira;

CHIANCA JR, Deoclécio Alves. PLETISMOGRAFIA DE CAUDA COMO MÉTODO

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SEMINÁRIO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA, Ouro Preto. 2004.

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CARDOSO, Leonardo Máximo; MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; CHIANCA

JR, Deoclécio Alves. CARDIAC BAROREFLEX IN IRON-OVERLOAD AWAKED

RATS. In: XXI CONGRESS OF THE LATIN AMERICAN ASSOCIATION OF

PHYSIOLOGICAL SCIENCES, Ribeirão Preto. 2003.

MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; CARDOSO, Leonardo Máximo; OLIVEIRA,

Eduardo Luiz de;

PRODUÇÃO CIENTÍFICA

CHIANCA JR, Deoclécio Alves. AVALIAÇÃO DA FREQÜÊNCIA CARDÍACA

INTRÍNSECA DE RATOS SUBMETIDOS A UMA DESNUTRIÇÃO PROTÉICA. In:

VII SIMPÓSIO DE FISIOLOGIA CARDIO VASCULAR, Araraquara - SP. 2003.

MARTINS, Carlito D'angelo Drumond; OLIVEIRA, Eduardo Luiz de; CARDOSO,

Leonardo Máximo;

CHIANCA JR, Deoclécio Alves. AVALIAÇÃO DO ÍNDICE AUTONÔMICO

CARDÍACO DE RATOS SUBMETIDOS À DESNUTRIÇÃO PROTÉICA. In: XI

SEMINÁRIO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE

OURO PRETO, Ouro Preto. 2003

8.2 – Artigos completos publicados em periódicos

LOSS, Igor de Oliveira; FERNANDES, Luciano Gonçalves; MARTINS, Carlito

D'Angelo Drumond; CARDOSO, Leonardo Máximo; SILVA, Marcelo Eustáquio;

SILVA, Valdo José Dias da; MORAES, Márcio Flávio Dutra; CHIANCA JR,

Deoclécio Alves. BAROREFLEX DYSFUNCTION IN RATS SUBMITTED TO

PROTEIN RESTRICTION. Life Sciences, v. 81, n. 11, p. 944-950, 2007.

MARTINS, Carlito D'Angelo Drumond; LOSS, Igor de Oliveira; CARDOSO,

Leonardo Máximo; OLIVEIRA, Eduardo Luiz de; PEDROSA, Maria Lúcia; SILVA,

Marcelo Eustáquio; CHIANCA JR, Deoclécio Alves. SERIA A DESNUTRIÇÃO

PROTÉICA CAUSA DO AUMENTO DO RISCO DE MORTE SÚBITA? Revista da

Pesquisa e Pós-Graduação, v. 4, p. 45-49, 2004.

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