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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO
DEPARTAMENTO DE MEDICINA VETERINÁRIA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA VETERINÁRIA
FLÁVIA FERREIRA DE MENEZES
AVALIAÇÃO DA Calendula officinalis L. NA CICATRIZAÇÃO CUTÂNEA DE
CÃES. ASPECTOS CLÍNICOS, HISTOPATOLÓGICOS E HISTOQUÍMICOS
RECIFE-PE
2006
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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO
DEPARTAMENTO DE MEDICINA VETERINÁRIA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA VETERINÁRIA
FLÁVIA FERREIRA DE MENEZES
AVALIAÇÃO DA Calendula officinalis L. NA CICATRIZAÇÃO CUTÂNEA DE
CÃES. ASPECTOS CLÍNICOS, HISTOPATOLÓGICOS E HISTOQUÍMICOS
Tese apresentada ao Programa de Pós-
Graduação em Ciência Veterinária da
Universidade Federal Rural de Pernambuco,
como requisito parcial para obtenção do
grau de
DOUTOR
em Ciência Veterinária.
RECIFE-PE
2006
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Catalogação na fonte
Setor de Processos Técnicos da Biblioteca Central – UFRPE
Suely Manzi
Bibliotecária
CRB 809
M543a
Menezes, Flávia Ferreira de
Avaliação da Calendula officinalis L.na cicatrização
cutânea de cães. Aspectos clínicos, histopatológicos e
histoquímicos.
/ Flávia Ferreira de Menezes - 2006.
82 f. : il.
Orientadora Maria Cristina de Oliveira Cardoso
Coelho. Tese (Doutorado em Ciência
Veterinária) – Universidade Federal Rural de
Pernambuco. Departamento de Medicina
Veterinária.
Inclui bibliografia.
CDD 636.708 96
1. Cão
2. Aspectos histoquímicos
3. Aspectos histopatológicos
4. Aspectos clínicos
5. Cicatrização
6. Calendula officinalis
7. Clínica veterinária
I. Coelho, Maria Cristina de Oliveira Cardoso
II. Título
UNIVERSIDADE DEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA VETERINÁRIA
AVALIAÇÃO DA Calendula officinalis L. NA CICATRIZAÇÃO CUTÂNEA DE
CÃES. ASPECTOS CLÍNICOS, HISTOPATOLÓGICOS E HISTOQUÍMICOS
Tese de Doutorado elaborada por
FLÁVIA FEREIRA DE MENEZES
Aprovada pela
COMISSÃO EXAMINADORA
_________________________________________________________
Profa. Dra Maria Cristina de Oliveira Cardoso Coelho - Orientadora (UFRPE)
___________________________________________________________________
Profa. Dra Maria do Carmo Batista (UFPI)
___________________________________________________________________
Profa. Dra Ana Maria dos Anjos Carneiro Leão – Co-orientadora (UFRPE)
__________________________________________________________________
Profa. Dra Ana Paula Monteiro Tenório (UFRPE)
___________________________________________________________________
Prof. Dr. Almir Gonçalves Wanderley (UFPE)
_____________________________________________________________________
Profa. Dra Miriam Nogueira Teixeira (UFRPE)
Recife-PE
Março de 2006
“Felicidade é o caminho que trilhamos
todos os dias até alcançarmos nossos
desejos.”
Mike George.
AGRADECIMENTOS
Meus sinceros agradecimentos,
A DEUS, acima de tudo e de todos.
Ao meu pai Jarbas e irmãos Fábio e Fabiana pelo apoio e incentivo. E aos meus
sobrinhos Caio e Danilo pelos momentos de descontração durante os períodos mais
críticos.
A você mamãe, que mesmo não estando mais entre nós, continua nos iluminando.
À minha Orientadora Professora Maria Cristina Oliveira Cardoso Coelho, pela lição de
vida, alegria, carinho, incentivo e ensinamentos dispensados em todos esses anos de
amizade. E toda sua família Giliate, Giliatinho, André, Felipe e Maria Helena pelo
carinho e ajuda dispensada na finalização do trabalho.
À Co-orientadora Professora Ana Maria dos Anjos Carneiro Leão, pelo carinho e
amizade que sempre dedicou.
Ao querido, estimado, admirável e inseparável Júlio Rodrigues Pereira Júnior,
companheiro de longas datas, não há como agradecer, definir ou medir seu carinho.
Ao Laboratório Simões, pela contribuição com o desenvolvimento do experimento.
Ao amigo, companheiro de curso e conselheiro Ernesto Rodriguez Sallas, obrigada por
sua presença marcante, espírito guerreiro e incentivo que muito me inspiraram nos
momentos mais difíceis.
Aos amigos Fábio Brito e Marco Granja, pelo companheirismo e momentos de
descontração repletos de puro “besteirol”, essenciais nas fases mais críticas.
Ao professor Dr. José Lamartine Aguiar do Hospital das Clínicas da Universidade
Federal de Pernambuco (HC/UFPE), pela ajuda imprescindível com as fotografias e pelo
carinho e atenção dispensada.
Aos professores da Área de Patologia, por confiar o laboratório durante o processamento
do material nos finais de semana.
Aos funcionários do Hospital Veterinário, Ilma, Josi, Vera e Sr. Benedito, que muito
ajudaram durante o desenvolvimento do experimento.
À amiga Grazielle Anahy de Sousa Aleixo pela ajuda com a tradução dos textos.
Á secretária da Pós-graduação Edna Chérias, pelos momentos de descontração e atenção
dispensada.
Ao Centro de Vigilância Ambiental da Prefeitura da Cidade do Recife (CVA/PCR)
pelo empenho no envio dos cães para realização do experimento.
Aos cães, que contribuíram de forma singular para o desenvolvimento do experimento, sem
os quais não seria possível desenvolver este trabalho.
A todas as pessoas que adotaram os cães e lhes deram uma nova oportunidade de vida,
SUMÁRIO
RESUMO...................................................................................................
x
ABSTRACT.............................................................................................. xii
LISTA DE FIGURAS................................................................................
xiv
LISTA DE ABREVIATURAS..................................................................
xviii
1 INTRODUÇÃO.........................................................................................
1
2 REVISÃO DE LITERATURA................................................................. 4
3 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS......................................................
11
4 EXPERIMENTO 1 16
Avaliação da pomada de Calendula officinalis L. durante o processo
cicatricial de feridas cutâneas em cães...............................................
17
Resumo......................................................................................................
17
Abstract......................................................................................................
18
Introdução..................................................................................................
18
Material e Métodos....................................................................................
20
Resultados e Discussão..............................................................................
23
Conclusão................................................................................................. 36
Referências Bibliográficas.........................................................................
36
5 EXPERIMENTO 2 40
Efeito da Calendula officinalis L. sobre a colagenogênese e
diferenciação do colágeno na cicatrização cutânea de cães.................
41
Resumo......................................................................................................
41
Abstract......................................................................................................
42
Introdução..................................................................................................
42
Material e Métodos....................................................................................
46
Resultados e Discussão..............................................................................
Resumo......................................................................................................
57
Abstract......................................................................................................
57
Introdução..................................................................................................
58
Material e Métodos....................................................................................
60
Resultados e Discussão..............................................................................
61
Conclusão.................................................................................................. 64
Referências Bibliográficas.........................................................................
64
RESUMO
Título:
Avaliação Calendula officinalis L. na cicatrização cutânea de cães. Aspectos
clínicos, histopatológicos e histoquímicos.
Autor: Flávia Ferreira de Menezes
Orientadora: Maria Cristina de Oliveira Cardoso Coelho
A pesquisa e a aplicação de medicamentos com princípios naturais vêm sendo cada vez
mais desenvolvidas e procuradas a fim de tratar diversas patologias, tanto para os seres
humanos como para os animais. Na rotina veterinária se observa que os traumas
envolvendo cães ocorrem com um alto percentual desencadeando perdas cutâneas de
diferentes graus. Em vista disso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o processo
de cicatrização de feridas cutâneas tratadas topicamente com uma pomada teste composta
de calêndula e vaselina, através de estudos clínicos, histopatológicos e histoquímicos. Para
o estudo foram utilizados18 cães machos, adultos, peso médio de 10,9±2,8 Kg, sem raça
definida que compuseram três grupos (A, B e C) com seis animais cada e diferindo apenas
no tempo experimental, ou seja, no grupo A, a avaliação transcorreu durante sete dias, no
do grupo B, em 14 dias e os do grupo C, em 28 dias. Em cada animal foram produzidas três
lesões separadas entre si por aproximadamente 5 cm, na região torácica lateral as quais
foram submetidas ao seguinte protocolo de tratamento: pomada de calêndula, de vaselina e
solução de cloreto de sódio 0,9%. A troca dos curativos das feridas e a avaliação clínica
ocorreram diariamente até o dia estipulado para da biopsia, ou seja, ao 7º, 14º e ao 28º dia.
Os parâmetros clínicos observados foram: estado geral do animal, eriçamento dos pêlos,
edema, eritema, dor ao toque, secreção, crosta, tecido de granulação, tecido cicatricial,
contração da ferida, reações de sensibilidade cutânea, facilidade de aplicação e aderência do
curativo. Exames histopatológicos foram realizados pela coloração Hematoxilina e Eosina
e os histoquímicos através do Masson e picrosírius. Nos resultados se observou que ao 7
0
dia as feridas tratadas com cloreto de sódio apresentaram aderência da compressa de gaze a
área cruenta, crostas ressecadas e espessas e coloração vermelha escura e fosca; as dos
demais grupos mostravam-se com uma intensidade de cor e brilho. As tratadas com pomada
de calêndula e vaselina demonstraram presença discreta de tecido de granulação na área
central da lesão e tecido cicatricial nas bordas. Ao 14º dia as feridas que receberam
calêndula e vaselina caracterizavam-se pela presença de crosta, tecido de granulação
preenchendo a área cruenta e tecido cicatricial; as tratadas com solução de cloreto de sódio
0,9% apresentavam uma maior quantidade de exsudato considerado inflamatório. As
avaliações clínicas das feridas estudadas no grupo 28º dias ocorreram até o 18º dia, pois a
partir deste momento todas feridas encontravam-se cicatrizadas. No 7º dia de tratamento a
avaliação histopatológica se constatou que nas feridas tratadas com pomada de calêndula
não houve reepitelização total, o epitélio nas margens da ferida estava hiperplásico, com
cristas epidérmicas profundas e início de proliferação epitelial O tecido de granulação
apresentou-se bem diferenciado com grande quantidade de fibroblastos ativos na síntese de
colágeno, macrófagos e vasos neoformados. Neste mesmo período nas feridas tratadas com
vaselina e solução de cloreto de sódio 0,9% não foram observadas reepitelização. No 14º
dia as feridas, independente do tratamento instituído, apresentaram o epitélio hiperplásico
na borda da lesão e com formação de cristas epidérmicas, além da presença de crosta no
leito da ferida. Nas feridas tratadas com cloreto de sódio 0,9% no 14º dia observou-se a
presença de vasos congestos no tecido de granulação e ainda exsudato inflamatório intenso
determinando um retardo na evolução do processo cicatricial em relação às feridas tratadas
com pomada de calêndula e vaselina. O aspecto clínico e a organização das estruturas
celulares se mostraram mais evidentes em feridas cutâneas tratadas com a pomada de
Calendula officinalis L. o que torna o produto uma opção para aplicação tópica nos
processos cicatriciais de pele.
Palavras-chave: cicatrização; feridas, calêndula, cães.
ABSTRACT
Title: Calendula officinalis L. evaluation on cutaneous cicatrization in dogs. Clinical,
histopathological and histochemistry aspects.
Author: Flávia Ferreira de Menezes
Adviser: Maria Cristina de Oliveira Cardoso Coelho
The research and the application of medicines with natural origin are being more
developed and searched in order to treat several pathologies, such as for human beings as
for animals. In the veterinary routine it is observed that the traumas involving dogs happens
with a high percentual resulting in cutaneous losses of different degrees. In view of that, the
present work had as objective evaluate the cicatrization process of cutaneous wounds
treated topically with an test pomade composed with calendula and vaseline, through
clinical, histopathological and histochemistry studies. For the study 18 male dogs, adults,
medium weight of 10,9±2,8 Kg, without defined breed were used. They composed three
groups (A, B and C) with six animals each and just differing in the experimental time, in
other words, in group A, the evaluation lasted for seven days, in group B, 14 days and in
group C, 28 days. In each animal were produced three lesions separated amongst
themselves for approximately 5 cm, in the lateral thoracic area which were submitted to the
following protocol treatment: calendula pomade, vaseline pomade and sodium chloride
solution 0,9% (SF). The change in the wounds curatives and the clinical evaluation
happened daily until the day stipulated for the biopsy, in other words, at the 7th, 14th and
28th day. The clinical parameters observed were: general state of the animal, bristling of
the hair2366(t)-9.838.96262(l7t)0.442343(i)0.44230432(o)-5(d)-3.71568( )-68.67.( )-6.99806(p)-3.71568(e)1.96513(r)-20.1181 tviod pa(a)1.96388(n)6.96327( )-68.6767(a)1.96262(t)01.96325( )-78.9579(t)0.441715((d)6.56299(u)-3.71693t)-9.83821(e)1.96262(,)-6.96325((a)12.2425(s)-1.63635c)-17.2771(a)6.56299(r)-6.23672(a)1.96262(t)0.441715(i)0.441715(o)
reepithelization were not observed. In the 14th day the wounds, independent on the
instituted treatment, presented the hyperplasic epithelium in the border of the lesion and
with formation of epidermic crests, besides the presence of crust in the bed of the wound. In
the wounds treated with SF on the 14th day was observed the presence of congests vessels
in the granulation tissue and still intense inflammatory exsudate determining a retard in the
evolution of the cicatricial process in relation to the wounds treated with calendula and
vaseline pomade. In the histopathological qualitative analyses staining with picrosirius the
wounds evaluated to the 70 day, independent of the treatment, demonstrated the presence of
collagen’s fibers with greenish coloration, considered as type III collagen fibers. In the
evaluations accomplished at the 14
0
day was observed the presence of fibers with greenish
coloration in smaller amount and red coloration in larger amount, besides presenting a more
defined and evident organization pattern in the wounds treated with calendula, when
compared with the ones treated with vaseline and SF, suggesting the presence of type I and
III fibers collagens. To the 28 days, the lesions had predominance of collagens fibers of red
coloration in the center of the lesion, suggesting the presence of type I collagen, the
organization pattern was more defined characterizing a steady fiber, and the wounds treated
with calendula pomade the ones that presented more organized structures. The clinical
aspect and the organization of the cellular structures were shown more evident in cutaneous
wounds treated with the Calendula officinalis L. pomade that turns the product an option
for topical application in the cicatricial processes of the skin.
Key-word: Cicatrization, wounds, calendula, dogs
LISTA DE FIGURAS
Página
Figura 1
Calendula officinalis conhecida popularmente como malmequer,
maravilha e margarida dourada.
Figura 1A
Observar a utilização do paquímetro para verificação da distância entre
as falhas cutâneas; B, feridas cutâneas antes da aplicação dos
tratamentos; C (aplicação dos tratamentos), C1-ferida recoberta com
pomada de calêndula, C2-ferida recoberta com vaselina, C3-ferida
umedecida com solução de cloreto de sódio.
Figura 2 A
Ferida tratada com pomada de calêndula. Observar presenç
a de crosta
delgada no leito da lesão (seta); B-ferida do grupo vaselina. Crosta
delgada em toda a área cruenta (seta). C – Ferida tratada com solução de
cloreto de sódio. Observar crosta escura e aderida no centro da lesão
(seta)
Figura 3 Aspecto macroscópico das feridas ao 14
0
dia. A- ferida tratada com
solução de cloreto de sódio.Observar coloração da área cruenta (seta)
B– ferida do grupo vaselina. Observar margens arredondadas
e
granulação. C– ferida do grupo calêndula. Observar coloração do tecido
de granulação (seta).
Figura 4
Média das áreas das feridas tratadas com pomada de Calendula officinalis L.,
vaselina e solução de cloreto de sódio no dia inicial, ao terceiro e sexto dia de
pós-operatório
.
Figura 5
Média das áreas das feridas tratadas com pomada de Calendula officinalis L.,
vaselina e solução de cloreto de sódio no dia inicial, ao 3
0,
6
0
, 9
0
e 12
0
dia de
pós-operatório.
Figura 6
Média das áreas das feridas tratadas com pomada de Calendula officinalis L.,
vaselina e solução de cloreto de sódio no dia inicial, ao 3
0,
6
0
, 9
0,
12
0
, 15
0
e 18
0
dia de pós-operatório.
Figura 7
Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula aos sete dias. Observar
crosta (estrela) e epitélio hiperplásico com cristas epidérmicas (seta).
(Masson, obj 10x).
Figura 8
Fotomicrografia de ferida tratada com vaselina aos sete dias. Observar
processo inflamatório intenso (setas). (HE, obj.10 x).
Figura 9
Fotomicrografia de ferida tratada com solução fisiológica aos sete dias
Observar presença de processo inflamatório intenso (seta) abaixo da
crosta (estrela). (Masson, obj.10 x).
Figura 10 Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula após 14 dias.
Observar presença de vasos congestos (seta). (Masson, obj.10x).
Figura 11 Ferida tratada com vaselina após 14 dias. Observar presença de crosta
espessa (estrela), infiltrado inflamatório (seta fina) e presença de vasos
congestos (seta grossa). (Masson, obj.10x).
Figura 12
Fotomicrografia de ferida tratada com solução fisiológica após 14 dias.
Observar presença de vasos congestos e fibroblastos ativos (ampliação).
Masson, obj.10x/(ampliação 40x).
Figura 13
Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula, após 28 dias. Observar
diferenciação das camadas epiteliais da pele (estrela). Presença de vasos
neoformados (seta larga) e fibras colágenas na derme (seta). (HE, obj. 40x).
Figura 14
Fotomicrografia de ferida tratada com vaselina aos 28 dias. Observar epitélio
reconstituído com aspecto delgado (seta fina). Presença de vasos
remanescentes do tecido de granulação (seta grossa), presença de fibras
colágenas. (Masson, obj: 10x)
Figura 15
Fotomicrografia ferida tratada com solução fisiológica após 28 dias.
Observa-se reepitelização com epitélio hiperplásico e com cristas
epidérmicas (setas) (HE, obj 10x).
LISTA DE ABREVIATURAS
ALT: Alanina aminotransferase
AST: Aspartato aminotransferase
SF: Solução Fisiológica
TS: Tempo de sangria
TC: Tempo de coagulação
1 INTRODUÇÃO
A pele é o maior órgão do corpo e apresenta importância clínica por refletir uma
variedade de processos patológicos externos e internos. Trata-se de uma barreira de
proteção do organismo, individualizando o meio interno, mas permitindo uma interação
controlada frente ao meio ambiente, favorecendo a manutenção da temperatura,
minimizando perdas de água e o ingresso de agentes físicos, químicos e microbianos
(BANKS, 1992). Histologicamente duas camadas são identificadas: um epitélio superficial
(epiderme), organizada em cinco camadas (basal, granulosa, espinhosa, lúcida e
queratinosa) que é renovada continuamente; e uma camada fibrosa (derme), a qual repousa
sobre um estrato de tecido conjuntivo. A derme é separada da epiderme por uma membrana
basal, sendo composta principalmente por uma matriz extracelular rica em fibras colágenas,
apresentando-se bastante vascularizada e inervada, apresentando também glândulas
sebáceas e sudoríparas e folículos pilosos (DYCE et al., 1990).
A cicatrização de feridas pode ser compreendida como uma seqüência regulada de
eventos celulares e bioquímicos, organizada para recuperar a integridade do tecido após
uma injúria (PARK e BARBUL, 2004), e muitos fatores podem influenciar a progressão do
processo cicatricial (GOGIA, 1992; SPENCE e WONG, 1997, PRATHIBA e GUPTA,
2000). Trata-se de um processo dinâmico, contínuo e complexo, em que diferentes fases se
superpõem e se relacionam reciprocamente (TOGNINI et al., 1998; BECKERT et al.,
2005). Este processo se inicia logo após uma lesão tecidual (SPENCE e WONG, 1997),
compreendendo uma série de eventos biológicos que começam com a coagulação
sanguínea no sítio da lesão, e terminam com remodelação (BARBOSA e SOUZA, 1986;
MADDEN e AREM, 1991; ZACHARIAS et al., 1991; MODOLIN, 1992; HUNT e HOPF,
1997; ROBSON, 1997; STEED, 1997, CALVIN, 1998, BELLO e PHILLIPS, 2000). Cada
fase da cicatrização apresenta eventos e aspectos celulares característicos, como
proliferação, diferenciação e migração celular, sem os quais o processo pode não evoluir
(BECKERT, et al., 2005).
Muitos fatores influenciam a progressão da cicatrização das feridas, principalmente o
fato da ferida ser aberta ou fechada (SPENCE e WONG, 1997). As feridas abertas, com ou
sem perda de tecido, apresentam problemas clínicos diferentes daqueles das feridas
incisadas e suturadas. Embora os processos morfológicos e químicos básicos atuantes nas
feridas fechadas participem nas feridas abertas, a contração torna-se um aspecto importante
nestas feridas, e a epitelização assume um papel proeminente (MADDEN e AREM, 1991;
MEDEIROS, 1992).
Segundo ALISON (1992) e MODOLIN (1992), a cicatrização por primeira intenção
(ou união primária) refere-se à cicatrização de feridas limpas, passíveis de terem suas
margens suturadas, sendo observada nas feridas cirúrgicas, que ocorrem sem contaminação
bacteriana significante e com o mínimo prejuízo tecidual. A cicatrização que ocorre em
ferimentos abertos e que dependem exclusivamente da contração, são denominadas de
cicatrização por segunda intenção (ou união secundária) Assim, preparar adequadamente o
leito de uma ferida é essencial para sua adequada evolução, no sentido de favorecer os
processos endógenos e fisiológicos de cicatrização. Este preparo está baseado na
compreensão crescente dos processos moleculares relacionados e em um estado contínuo,
em que a compreensão destas novas informações possam efetivamente favorecer a prática
clínico e cirúrgica (SCHULTZ et al., 2005).
A ferida aberta é afetada por uma série de influências externas que podem prolongar o
processo de cicatrização resultando em mais inflamação, edema e fibrose do que a
cicatrização das feridas fechadas (SPENCE e WONG, 1997, KILIÇ et al., 2002).
Nos últimos 20 anos, têm sido relatados vários estudos etnofarmacológicos,
objetivando melhores resultados cicatriciais. Produtos naturais ou secundários de plantas,
microrganismos ou animais continuam a ser um importante segmento de pesquisa em
drogas de uso clínico, a despeito das descobertas relevantes feitas através da química
orgânica sintética. Tal segmento tem sido considerado tão importante, que a Organização
Mundial de Saúde tem considerado programas básicos de desenvolvimento e validação de
medicamentos de origem natural, especialmente em países em desenvolvimento (PRYIA et
al., 2004).
A Calendula officinalis pertence à família Asteraceae (Compositae) e é cultivada
como planta ornamental e medicinal. É uma planta cultivada desde a idade Média originária
da Europa, sendo usada como estimulante da atividade hepática, secreção biliar e atenuante
de espasmos gástricos ou intestinais. Em aplicações externas, produtos obtidos por
decocção, tinturas ou pomadas de calêndula são aconselhados para o tratamento de feridas
em geral, inclusive lesões crônicas como escaras e úlceras. Considerando ainda sua
atividade antimicrobiana, a calêndula tem sido empregada na cicatrização do pós-
operatório, queimaduras e feridas infectadas. A aplicação tópica de tinturas, em feridas tem
promovido sua contração, reepitelização, diminuição na formação de granulomas e redução
da área cruenta, além de restaurar a vitalidade dos tecidos (GURUMAVHVA et al., 1991).
Dessa forma, a pesquisa voltada para o desenvolvimento e aplicação de princípios
ativos usados rotineiramente, justifica novas análises para avaliar os fatores que podem
interferir no processo cicatricial clínico de feridas, especialmente considerando a freqüência
de lesões causadas por traumatismos que desencadeiam perdas de pele na rotina da clínica
veterinária.
Em vista disso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o processo de
cicatrização de feridas cutâneas de cães tratadas topicamente com uma pomada teste
composta de Calendula officinalis L. e vaselina, através de estudos clínicos,
histopatológicos e histoquímicos.
2 REVISÃO DE LITERATURA
O estudo da cicatrização da pele envolve eventos e situações especiais, como
conhecimentos básicos de anatomia, histologia, bioquímica, imunologia, farmacologia,
entre outras ciências. As tentativas de intervir no processo de cicatrização das feridas,
acidentais ou experimentais, remontam à antiguidade, demonstrando que desde então já se
reconhecia à importância de protegê-las de forma a evitar complicações e danos locais ou
gerais ao paciente (MANDELBAUM, DI SANTIS E MANDELBAUM, 2003).
A função primária da pele é servir como barreira protetora contra agressões que
desencadeiam perdas da integridade, podendo levar a disfunção ou morte do paciente. A
dinâmica da cicatrização de feridas é um processo interativo que envolve mediadores,
células sanguíneas, matriz extracelular e células parenquimais. O processo envolve três
fases: Inflamatória, formação de tecido ou fibroplasia e remodelação (SINGER e CLARK,
1999).
Representando a primeira fase, a inflamação é a reação biológica que ocorre logo
após a injúria. Esta fase compreende a ruptur761(e)1.96388(n)-3.716(é)-8.3171(m)7.00596(p)Tj/R7 1T(a)12.2438(.)-6(6.56299)6.56424(a)1.96388(s)-31.4417196388(n)uuós 3(e)12.2(e)-8.31605(g)27.1241(r)4.041956.5655(u)-3.71443(e)12.2m417196388(n1715)4.0432(e)-8.3.-1.63635(,)499(u)-3.7115(ó)-13.94t42.2m417196388(n171559(E)-11.4746299(p)-371693(r)4.0435(õ)6.56299(e)1.9626-3.741.55432(e)-8.3173262(i)-9.815(á)1.96265(,)3.28275.)-6.99843í1.96513( )-150.91[(d)-3.71631(i)0.55156441(a)12.2438(é2.2438(a)1.96388(ç)-8.31605(ã)-c1.96325(s))-1.63698(f)4.04195(l)0.45156441-9.83821(â9(l)0.441715(a)1.998(q6262(42.2m5( )250]TJ(a)1.96388n)6.56424(j)-9.83821((e)1.96388(i)0741.5543o)6.56299(l)04515643u)-3.71693(n)6.56299t(u)-3.71693(e)1.96(p)-3.71693(l).71568( )-222.876(d)-34515643u1.96388(n)-3.71568(t)0.4515643ug)6.56299(i)0.4411693( )-212.59gi(e)12.2438( )-89.2378ç,ãemol6.56299(q)O12.2425(l)P3.71693(d)( )-6.99717(S)0.8834312.2425(l)N.56299(q)-3.4515643uJ-3.71693(-3.71443(e))0.441715(i)-9515643u18(A)2.4944(8(A)2.416935n171559((R).7144923(r)4.0432(e)1-11.47462271568371693(r)4.04C6 -20.16 T15(á)1.96261(t)-9.83821(a)1.96262(,)3.2827l)0.442343(a)1.96325(-20.16 Td[()-6.23798(m)1(9)-3.71631())4.c)1.96325(oe)1.96325(3( )-161.196(r)4.325(q)0.442343(5( )250]TJí0.441715(a)1.96388(n8.31605(ã)-c1.96325(s)6(r)4.325()-3.71693(e)1.96262798(m)1(9)-3.)1.96325(cc1.96325(s)a)1.96325(2(t)-9.838.96262(4]TJ(e)12.2438( )-89.2378-3.71693(l).71568( )-224.0432( )-8.1181(t)-3.71693(e9( )-161.196(é)-8.3173( 8.1181(t(e)12.2438((e)1.96262(c)1.96262(i(a)-8.3173(ç)12.24232(l)0.441(ã)1.96388(o)-3.71568( )-222.8763( 8.1181(te)1.96255.744202.316(c)1.96262(é)12.2425)-1.6369517g -1.63635( ).441715)6.56299(t)-9.83821(o)6(a)1.96262()6.56299( )-161.196(é)-8.3173( 8.1181(tn)1.96262(i(a.71568( )-222.876(d(r)4.0432(m)-3.27522(7g -1.63635f3.71443(e)12.2m41719)-3.71568(a)12.2438( )-58.3943(q)-371568( )-222.876(d(r)4.0432(m)0.441715(a)1.963Td[(u)-3.7169(e)12.2438( )-89.2378n(A)2.4944(d17196388(nA)2.41693)-58.3943(q(nA)2.41693)-a)1.96262(5.7442635(s)-1.63635(õ)6.56299(e)1.96262(s)-1.63635( )-222.876(q)6.5655v1(a)1.96262(,)3.2827)-3.71693( )-233.325(3( )-161.19(.)3.2827504257(.)3.28186( )]TJ27.6156 -25(a)1.96388(,)-31.274(e)1.96388(p)-)1.96388(,)-31.274(21(a)1.96388( )-58.398(nA)2.41693)0.441715(r)-6.2821((e)1.96388((e)1.96388(p)-)1.96388(,)-31.274()1.96513( )-150.917(f)-6.23798(a)12.2425(s)--89.2378( )-202.316(p)]TJ6388)-1.63698(:)0.4423568(d)-13.99699)6.56424(a)1.96388(s(,)-26798d[(s)-1.6363ai)0.441715(s)-1.6363(,)-31.27715(s)-1.6363-9.83821(obo)-3.71568( )-22268(a)12.2438( -9.8382(o)12202.316(ü-233.155(q)6.56299(r)-6.23672(o)6.56299(c)-8.3173(e5(s)-1.6363(,)-31.2771)-3.71693(n)6.56299( )-22268(a)12.96262( )]TJ275.195 741.55d[(s)-1.6363ai6.56299(l)0431.2771o)-3.71693(r)4.0432(t)Tj/R7 1T(a).441715)6.56299(t)d)-13.99699)6.56424(z1.96262(o)-3.71693(62()6.56299( )-161.196(é)-841693(c)1.96262(o)12271693(r)4.04(m)2(i)-9.8( )-6.9971O1.96388(i)0.44175(l)O1.96388(i))-9.39649(I( )-58.398)1.96388(i)(s)8.64231(a)8.642311)-)1.963889)-)1.963889)1.96388(2)-)1.96388(R)-11.195(.s)8.64231(a).0419032(,)3.28275( )250]TJ-240.90.44175(l)u1(a)1.96388(4.04195(i)-9.83821-20.16 Td[(c)1.963258(f)4.04195(o)901693(-3.71631(i)0.50c)1v)-3.7169195(i)-9.83821(a)12.2438(.)-6.99843( ))901693()1.96513( )-150.9196380.16 Td[(f)6.56424(j)-9.83821(t)0.441715(ó)-3.7.962)-1.63698(:)0.442343( )-58.3)9)4.0432(e)-8.3.-1.636( ))901694968(s)-11363áce8.3.-1.636( )rt-3.71443(e)o és at qroc1639.8.636( )a8322856299(g)g-233.155(q)6.56299(r)96388(n)-3.71568(t(ç)12.24232(l)0.44162()6.56299( )-161.196(é)-8.3173( )-3.754)g-233.155(i)0.441715(c)-8.3173aua(l)-9.8382196388(n) 1639.8.636( )vi a ,v(832285262(i)0.44178(j)0.441715(á)1.96262( )-58.39f)-3.71693( )-58.396o
Os neutrófilos mortos nos tecidos, bem como os debris são removidos por
macrófagos e tem-se sugerido que estas células podem atuar como estímulo para a
resolução da resposta inflamatória (TURNER, 1992).
Os monócitos no tecido inflamatório apresentam modificações que caracterizam uma
célula específica que é o macrófago, cuja arquitetura citoplasmática conta com um conjunto
de organelas que lhe permitem modular o processo cicatricial (MODOLIN, 1992;
TURNER, 1992). Os monócitos são recrutados da corrente sanguínea sendo responsáveis
por mudanças moleculares na superfície das células endoteliais do epitélio capilar até o
leito da ferida (MARTIN, 1997). Estás células predominam entre o 3º e 5º dia após a lesão
e tem papel primordial na transição entre a fase inflamatória e a fase de fibroplasia (CORSI
et al 1994). As células de linhagem monócito-macrófago têm função essencial de defesa,
não apenas pela sua habilidade de fagocitose de material estranho, além de microrganismos
patogênicos, mas também como suporte para proliferação de linfócitos e apresentação de
antígenos (TURNER, 1992), produz ainda fatores de crescimento que estimulam
fibroblastos, fibronectina e angiogênese (neovascularização) (KOOPMANN Jr., 1995),
sintetizam protease que digere fibrina e colágeno desvitalizado e remove os neutrófilos para
dar lugar a proliferação celular (CORSI et al., 1994).
A fase proliferativa ocorre três a quatro dias após a injúria e está caracterizada pelo
rápido aumento do número de fibroblastos e mitose das células epiteliais, bem como o
aumento da síntese de colágeno extracelular e proteoglicanos (KOOPMANN Jr, 1995).
MANDELBAUM, DI SANTIS e MANDELBAUM, 2003, dividem em três subfases:
reepitelização, fibroplasia e angiogênese. Na fase de fibroplasia e formação da matriz
surgem os brotos endoteliais cujas células multiplicam-se com grande velocidade
constituindo cordões sólidos que intermeiam com os fibroblastos formando o tecido de
granulação caracterizado por uma coleção de elementos celulares, incluindo fibroblasto,
células inflamatórias e componentes neovasculares e da matriz, como fibronectina, os
glicosaminoglicanos e colágeno (MANDELBAUM, DI SANTIS e MANDELBAUM,
2003; TRAN, GRIFFITH e WELLS, 2004).
Os fibroblastos caracterizam-se por ser uma célula fusiforme com núcleos ovais e que
proliferam intensamente, devido a grande capacidade mitótica. A sua origem está
relacionada à fase evolutiva de células mesenquimais, que circulam no interior dos vasos ou
presente na adventícia dos vasos ou ainda originam de fibrócitos presentes no tecido
conjuntivo circunjacente a lesão. Como a fibroplasia é acompanhada de proliferação
vascular, as células endoteliais produzem um fator de ativação do plasminogênio que reduz
a quantidade de fibrina, permitindo a deposição de fibroblastos que se multiplicam e
passam a secretar os componentes protéicos do tecido cicatricial; a angiogênese é essencial
para o suprimento de oxigênio e nutrientes para a cicatrização (MODOLIN, 1992).
Ao estudar o tecido de granulação, constatou-se que ele tinha a capacidade de se
contrair. Devido a esta propriedade, à modificação bioquímica e física, as feridas abertas
diminuem a área da superfície cruenta, favorecendo nas lesões cutâneas a epitelização
(MODOLIN, 1992). Tanto a contração das feridas, bem como a epitelização são eventos
importantes na cicatrização, quando há perda de substância (MEDEIROS, 1992).
A fase de contração e remodelação ocorre relacionada ao colágeno e a matriz, sendo
responsável pela tensão e diminuição do tamanho da cicatriz (MANDELBAUM, DI
SANTIS e MANDELBAUM, 2003). Durante esta fase a vascularização começa a sofrer
involução e a celularidade é reorganizada. Tal fenômeno ocorre devido à inibição por
contato sofrida pelas células quando as margens da lesão se justapõem (LORENA et al.,
2002). Esta remodelação pode durar meses e até anos, com a diminuição da vascularização,
e remodelação das fibras colágenas que aumentam a força tensão da cicatriz diminuindo
sua espessura (MANDELBAUM, DI SANTIS e MANDELBAUM, 2003). Nessa fase
também ocorre um equilíbrio entre a síntese e degradação do colágeno e tardiamente a
cicatriz é considerada avascular (DE NARDI et al., 2004).
A contração é a aproximação das bordas da ferida, enquanto a contratura é o
encurtamento da própria cicatriz (BARBUL, 1997). A contração de feridas envolve uma
interação entre células, matriz extracelular e citocina. Durante a segunda semana de
cicatrização os fibroblatos assumem um fenótipo de miofibroblastos caracterizado por
longos filamentos de ação de contato depositado ao longo da membrana plasmática e
superfície citoplasmática das células e por ligações de célula-célula e célula-matriz
(SINGER e CLARK, 1999; TRAN, GRIFFITH e WELLS, 2004).
Após quatro semanas se admite que as células sofrem apoptose transformando o
tecido de granulação rico em vasos e fibroblastos em tecido cicatricial (BARBUL, 1997).
No decorrer do processo de contração os miofibroblastos através da sua capacidade de
contrair o músculo liso, tracionam as bordas periféricas da lesão em direção a seu centro,
contraindo, assim, a ferida (ROSSI, 1991). A contração provavelmente requer estimulação
pelos fatores de crescimento beta 1 e beta 2, fatores de crescimento derivados de plaquetas,
ação fibroblástica na matriz colágena através de receptores e ligações individuais entre os
colágenos. O seu mecanismo se inicia durante a colagenização e evolui durante a maturação
da cicatriz (SINGER e CLARK, 1999). A fase de remodelação é lenta, levando tempo para
se desenvolver a força tênsil da cicatriz, aumentando progressivamente e durando até anos
para recuperação estrutural da área lesada onde se forma a cicatriz (CORSI et al., 1994).
As informações sobre o uso de plantas medicinais e suas virtudes terapêuticas foram
acumuladas durante séculos e muito desses conhecimentos populares se encontram
cientificamente disponível. (BUFFON et al., 2001).
A fitoterapia está sendo cada vez mais utilizada entre os povos de todo o mundo. Os
medicamentos à base de plantas são usados para os mais diferentes fins: acalmar, cicatrizar,
expectorar, engordar, emagrecer e muitos outros. É essa utilização das plantas para o
tratamento de doenças que constitui, hoje, um ramo da medicina conhecido como
fitoterapia. Apesar de ser considerada por muitos como uma terapia alternativa, não é uma
especialidade médica, como a homeopatia ou a acupuntura, e se enquadra dentro da
chamada medicina natural (CÂNDIDO, 2001).
Considera-se fitoterápico toda preparação farmacêutica (extratos, tinturas, pomadas e
cápsulas) que utiliza como matéria-prima parte de plantas, como folhas, caules, raízes,
flores e sementes, com conhecido efeito farmacológico. Associado às suas atividades
terapêuticas está o seu baixo custo, a disponibilidade de matéria-prima, principalmente nos
países tropicais e a cultura relacionada ao seu uso (CÂNDIDO, 2001).
A Calendula officinalis é uma das plantas mais versáteis e populares, apresentando
indicação para uso fitoterápico e homeopático. Sua ação cicatrizante é uma das diversas
atividades farmacológicas que lhe tem sido atribuída. É conhecida popularmente também
por “malmequer, margarida dourada, maravilha”, entre outros nomes, sendo cultivada em
todo mundo. Tem como constituintes químicos ácidos orgânicos, calendina, pró-vitamina
B, xantofilas, flavonóides, polissacarídeos e carotenóides. Propriedades terapêuticas lhe são
atribuídas como atividade antinflamatória, adstringente, antialérgica, antiespasmódica,
bactericida, calmante, antifúngica e anti-séptica (PLANTAMED, 2006) sendo a atividade
antiinflamatória da planta atribuída aos seus terpenos, que prevalecem nas flores
(AKIHISA et al., 1996).
Figura 1 – Calendula officinalis L.conhecida popularmente
conhecida como malmequer, maravilha e margarida dourada.
Aprovada pela comissão científica alemã como anti-septica e cicatrizante (BEDI e
SHENFELT, 2002; MARTINS et al, 2003) o uso da calêndula no Brasil está
regulamentado pela RE n
0
89/04 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária –ANVISA-
com as mesmas indicações supracitadas (BRASIL, 2004).
Apesar de ser amplamente cultivada e comercializada, quando se realiza um
levantamento bibliográfico da utilização da calêndula em feridas se observa uma escassez
de trabalhos.
Assim, JORGE NETO et al., (1996) realizando avaliações clínicas o gel e a tintura de
calêndula para tratamento de queimaduras de diferentes origens e feridas de difícil
cicatrização observaram que ocorreu um incremento na cicatrização principalmente quando
esta foi associada ao barbatimão (Stryphnodendron barbatiman).
MARTINS et al. (2003) estudando os aspectos macroscópicos e histológicos da
cicatrização de pele por segunda intenção em eqüinos concluíram que o barbatimão revelou
efeito benéfico no processo de cicatrização, seguido pela calêndula.
Utilizando como modelo experimental os ratos, RAO (1991) conclui que a aplicação
externa do extrato de calêndula incrementou a reepitelização de feridas cirúrgicas.
Resultados semelhantes obtidos com o mesmo modelo foram verificados por PATRICK et
al., (1996) com a aplicação local da pomada associada a alantoína.
Em trabalho realizado por MONTEIRO et al., (1992) com aplicação tópica de
calêndula, arnica e nitrofurazona em feridas incisiva e observações clínicas da evolução
cicatricial, os autores concluíram que o padrão macroscópico não variou entre os grupos,
porém as lesões tratadas com arnica apresentaram um menor espaço de tempo para
cicatrizar.
CAMPOS et al., (2000) avaliando treze casos de feridas infectadas em cães, de
diversas causas, e tratadas com solução de cloreto de sódio a 0,9%, desbridamento,
aplicação tópica com pomada de Calendula officinalis e administração oral Calendula
officinalis 12CH observaram que a associação da pomada e sua administração oral
beneficiaram a cicatrização das feridas.
Com o objetivo avaliar a atividade antibacteriana de Calendula officinalis L.
cultivada no Brasil, nas condições de extração etanólica à 50º C com partições sucessivas
em solventes de polaridade crescente para as estirpes de Escherichia coli ATCC 25922,
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Staphylococcus epidermidis ATCC12228 e Bacillus cereus, VOLPANO et al. (2001)
concluíram que os extratos de hexano, diclorometano e acetato de etila de Calendula
officinalis demonstraram atividade inibitória contra bactérias Gram positivas e foram
inativos contra as bactérias Gram-negativas.
Devido às atividades e princípios ativos que lhe são atribuídas, a Calendula
officinalis tem sido empregada em estudos nos processos de cicatrização em diversos ramos
da Medicina Veterinária, visto que o tratamento de uma ferida é um procedimento
complexo e dinâmico, que requer uma avaliação detalhada e estruturada no que diz respeito
ao tratamento imposto e ao processo cicatricial das feridas.
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Avaliação da pomada de Calendula officinalis L. durante o processo cicatricial de
feridas cutâneas em cães
Experimento 1
Trabalho formatado de acordo com as normas do
Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e
Zootecnia – ISSN 0102-0935
Belo Horizonte, Minas Gerais.
Avaliação da pomada de Calendula officinalis L. durante o processo cicatricial
de feridas cutâneas em cães.
Evaluation of the Calendula officinalis L. pomade during the cicatricial process
of cutaneous wounds in dogs.
F. F. Menezes
1
, M.C.O.C. Coelho
2
, A. M A. Carneiro-Leão
3
, J. R. Pereira-
Júnior
4
, Wanderley, A. G.
5
,G. A. S. Aleixo
VI
RESUMO
Para a avaliação da aplicação da pomada de calêndula em feridas cutâneas em cães três grupos
foram formados com seis animais, sendo produzidas três falhas cutâneas na região torácica-lateral
com 4 cm
2
cada. A seguir, foram tratadas com pomada de calêndula, vaselina e solução de cloreto
de sódio 0,9%. As avaliações demonstraram que as feridas que receberam calêndula e vaselina aos
setes dias apresentaram presença discreta de tecido de granulação na área central da lesão e tecido
cicatricial nas bordas e ao 14º dia se observou presença de crosta, intensa granulação e tecido
cicatricial. As lesões com solução de cloreto de sódio apresentaram uma maior quantidade de
exsudato inflamatório e ausência de crostas. As avaliações macroscópicas percorreram até o 18º dia,
pois a partir deste momento todas feridas encontravam-se cicatrizadas. Biopsias foram realizadas
aos 7º, 14º e 28 dias. Nas avaliações histopatológicas aos setes dias se verificou que não ocorreu
reepitelização e as tratadas com vaselina e solução fisiológica apresentaram infiltrado inflamatório
intenso com produção de exsudato quando comparadas com as tratadas com calêndula. Aos 14 dias
a síntese de colágeno e a presença de fibroblastos estavam mais expressivas em todas as feridas,
porém, focos inflamatórios ao redor dos vasos foram visualizados principalmente nas feridas
tratadas com solução fisiológica. Concluindo-se que a calêndula contribuiu com a cicatrização
sendo indicada para o tratamento tópico de feridas cutâneas em cães.
Palavras-chave: calêndula, cicatrização, cão, ferida.
1
Médica Veterinária, Doutoranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da Universidade
Federal Rural de Pernambuco (UFRPE). R. Valdemar Falcão, 215. Engº do Meio, 50730-020, Recife-PE. E-
mail: flaviafmenezes@yahoo.com.br. Autor para correspondência
2
Médica Veterinária. Doutora, Professora Adjunto, Departamento Medicina Veterinária, UFRPE.
3
Médica, Doutora, Professora Adjunto, Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, UFRPE.
4
Médico Veterinário, Mestre do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE.
5
Farmacêutico-Bioquímico, Doutor, Professor Adjunto, Departamento de Ciências Farmacêuticas, UFPE.
VI
Médica Veterinária, Doutoranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da Universidade
Federal Rural de Pernambuco (UFRPE)
ABSTRACT
For the evaluation of the application of the calendula pomade in cutaneous wounds in dogs three
groups were formed with six animals, being produced three cutaneous flaws in the thoracic-lateral
area with 4 cm
2
each. Afterwards, they were treated with calendula pomade, vaseline and sodium
chloride solution 0,9%. The evaluations demonstrated that the wounds that received calendula and
vaseline at the seventh day presented discreet presence of granulation tissue in the central area of
the lesion and cicatricial tissue in the borders and to the 14th day was observed presence of crust,
intense granulation and cicatricial tissue. The lesions with sodium chloride solution presented a
larger amount of inflammatory exsudate and absence of crusts. The macroscopic evaluations were
accomplished until the 18th day, because at that moment all wounds were scarred. Biopsies were
made at the 7th, 14th and 28th days. In the histopathological evaluations at the seventh days it was
verified that the reepithelization did not happen and the ones treated with vaseline and physiologic
solution presented intense inflammatory infiltrated with exsudate production when compared with
the ones treated with calendula. To the 14 day the synthesis of collagen and the presence of
fibroblasts were more expressive in all the wounds, however, inflammatory focuses around of the
vessels were visualized mainly in the wounds treated with physiologic solution. It was concluded
that the calendula contributed with the cicatrization being indicated for the topical treatment of
cutaneous wounds in dogs.
Key-words: Calendula, cicatrization, dog, wound.
INTRODUÇÃO
Várias pesquisas na área de medicamentos vêm sendo utilizadas com o objetivo de
minimizar os custos e efeitos colaterais das drogas comumente empregadas na cicatrização
de feridas. Dentre elas, os tratamentos alternativos têm sido uma opção por apresentarem
facilidade de posologia terapêutica, poucos efeitos colaterais e ausência de resquício
medicamentoso.
Apesar dos recentes avanços em modelos de drogas, a química sintética e a biotecnologia
promoverem o desenvolvimento de drogas novas e potentes, os produtos naturais como
plantas e minerais continuam sendo a maior fonte de obtenção de medicamentos para os
mais diversos fins (Oliveira et al., 2000, Phillipson, 2000).
As plantas medicinais têm seu uso descrito por praticamente todos os povos desde os
tempos mais remotos. A partir dos conhecimentos populares e tradicionais do uso das
mesmas na busca de soluções ou cura das doenças, surgiram interesses medicinais e
científicos.
Dentre os fitoterápicos destaca-se Calendula officinalis (Roslindo et al., 1999; Martins et
al., 2003). Por sua ação anti-séptica, antiinflamatória e cicatrizante a Calêndula é
empregada como coadjuvante na cicatrização do pós-operatório, queimaduras e feridas
infectadas, tendo ação efetiva em feridas abertas e dilaceradas (Roslindo et al., 1999).
Possue em sua composição ésteres de triterpenóides, carotenóides, flavonóides,
carboidratos, polissacarídeos, tocoferol e ácidos graxos (Hamburger et al., 2003).
Diante de ferimentos cutâneos simples que sejam limpos e sem grandes perdas de pele, a
cicatrização por primeira intenção, através da aproximação das bordas da ferida, deve ser
primeiramente considerada. Feridas cutâneas extensas, que apresentem grandes danos
teciduais e/ou estejam infectadas, constitui-se em ferimentos que são comumente deixados
que cicatrizem por granulação e processos de contração e epitelização (Swaim, 1996).
Quando ocorrem agressões ou fatores irritantes, desencadeia-se nos tecidos a reação
inflamatória (Prandi Filho et al., 1988). Nas lesões de pele essa fase inicia-se
imediatamente após a injúria ocorrendo uma liberação de substâncias vasoativas
(mediadores químicos), proteínas, fatores de crescimento, proteases, leucócitos
polimorfonucleares (PMN), macrófagos e linfócitos (Singer e Clark, 1999; Mandelbaum et
al., 2003).
Passadas 48 horas as plaquetas assumem papel determinante no processo de quimiotaxia
para mediadores inflamatórios, entre eles: as prostaglandinas, histamina e leucotrienos,
sendo ainda responsáveis pela ativação de complemento. Concomitantemente, os
monócitos que se diferenciam em macrófagos quando migram para o espaço extravascular
devido a presença de fibronectina insolúvel, baixa tensão de oxigênio e lipopolissacarídeos,
atuam no debridamento da ferida, na proliferação de fibroblastos, neoangiogênese,
estimulação da epitelização e fibrose (Calvin, 1998). Os macrófagos são primordiais para a
transição da fase inflamatória para a proliferativa (Witte e Barbul 1997; Singer e Clark,
1999).
A segunda fase da cicatrização ocorre 3 a 4 dias após a injúria, e é caracterizada pela
proliferação, fibroplasia e angiogênese(Mandelbaum et al., 2003). Esta é marcada pelo
crescimento rápido no número de fibroblastos e células epiteliais, bem como síntese de
colágeno e proteoglicanos (Montandon et al., 1977). Durante a formação do tecido de
granulação os macrófagos, fibroblastos e vasos neoformados crescem no espaço da lesão
sendo os macrófagos responsáveis por estimular os fibroblastos a sintetizar a matriz
extracelular, que tem como componentes a fibronectina, glicosaminoglicanos e o colágeno
(Badylak, 2002; Mandelbaum et al., 2003). A maioria das fibras colágenas nesta fase é do
tipo III, que é um colágeno mais jovem e menos estável (Coelho, 1998), com o transcorrer
do processo de cicatrização o colágeno tipo I será predominante (Standelmann et al., 1998).
A fase de contração e remodelação, considerada a terceira fase, ocorre no colágeno e na
matriz, sendo responsável pela tensão e diminuição do tamanho da cicatriz (Mandelbaum et
al., 2003). Durante esta fase a vascularização começa a sofrer involução e a celularidade é
reorganizada. Tal fenômeno ocorre devido à inibição por contato sofrida pelas células
quando as margens da lesão se justapõem (Lorena et al., 2002). Esta remodelação dura
meses e até anos, com a diminuição da vascularização. Tardiamente a cicatriz é considerada
avascular e a remodelação nas fibras colágenas aumenta a força da cicatriz diminuindo sua
espessura (Mandelbaum et al., 2003). Nessa fase também ocorre um equilíbrio entre a
síntese e degradação do colágeno (De Nardi et al., 2004).
Este trabalho teve por objetivo avaliar a evolução do processo de cicatrização de feridas
cutâneas em cães tratadas com pomada de Calendula officinalis L. através de avaliações
clínicas e histopatológicas.
MATERIAL E MÉTODOS
A pesquisa foi encaminhada a Comissão de ética do Departamento de Medicina Veterinária
da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) através do processo de nº
3963/2002 recebendo parecer favorável para sua execução. Após a realização do referido
trabalho todos os animais foram doados para famílias de conhecida procedência.
O experimento foi desenvolvido no canil do Departamento de Medicina Veterinária (DMV)
da UFRPE com 18 cães machos, adultos, peso médio de 10,9±2,8 Kg, sem raça definida,
provenientes do Centro de Vigilância Ambiental da Prefeitura da Cidade do Recife
(CVA/PCR). Os animais foram mantidos em boxes contendo dois cães/box.
Quinze dias antes do experimento os animais foram desverminados, vacinados com vacina
polivalente, avaliados clínico e laboratorialmente e mantidos nas mesmas condições de
alojamento, manejo e regime alimentar durante todo o período de adaptação.
Após o exame clínico, amostras de sangue foram coletadas através de venopunção da
cefálica do úmero, femoral ou jugular e acondicionadas em dois frascos contendo, o
primeiro, solução anticoagulante de etileno-diamino-tetracetato de sódio (EDTA)
1
a 10% e
o segundo sem EDTA para obtenção do soro e realização das provas bioquímicas.
Os exames complementares incluíram hemograma, pesquisa de hemoparasitas, perfil
bioquímico com provas de função hepática e renal, coagulograma, parasitológico de fezes e
urinálise. Os exames supracitados, com exceção de parasitológico de fezes, foram
realizados em todos os animais em dois momentos distintos. O primeiro 15 dias antes do
início do experimento, e o segundo, momentos antes da realização dos procedimentos
cirúrgicos.
Os cães compuseram três grupos (A, B e C) com seis animais cada e diferindo apenas no
tempo experimental, ou seja, no grupo A, a avaliação transcorreu durante sete dias, no do
grupo B, em 14 dias e os do grupo C, em 28 dias.
Procedimento Cirúrgico
Após jejum hídrico de seis horas e alimentar de 12 horas, os cães foram encaminhados à
sala de tricotomia, pesados e pré-anestesiados com sulfato de atropina
2
na dose de
0,044mg/kg por via subcutânea, recebendo, 15 minutos após, cloridrato de xilazina
3
na dose
de 2mg/kg por via intramuscular. Após tricotomia da região torácica lateral direita, os
animais foram mantidos em venóclise com solução fisiológica de cloreto de sódio 0,9%
4
(solução fisiológica) e administrado cloridrato de quetamina
5
na dose de 7,5mg/kg por via
1
Hemstab. Labtest, MG
2
Sulfato de atropina 0,25. Lafepe, PE
3
Virbaxyl 2%. Virbac, SP
4
Solução de cloreto de sódio. Lafepe, PE
5
Francotar. Virbac, SP
endovenosa. Os cães foram posicionados em decúbito esternal e submetidos à anti-sepsia
do campo cirúrgico com clorexidina
6
2%.
Os campos operatórios foram posicionados de forma rotineira e moldes previamente
autoclavados medindo 4cm
2
foram utilizados para demarcar a área a ser incidida. A tela
subcutânea foi divulsionada e as falhas cutâneas foram obtidas.
Em cada animal foram produzidas três lesões separadas entre si por aproximadamente 5
cm, na região torácica lateral direita (Fig. 1A e 1B). Considerando o sentido crânio-caudal,
as lesões craniais foram tratadas com pomada de calêndula
7
, as mediais com vaselina
8
e as
caudais receberam solução fisiológica de cloreto de sódio 0,9% (Fig. 1C). Após a produção
das falhas cutâneas, estas foram novamente mensuradas no sentido crânio-caudal e dorso-
ventral com auxílio de um paquímetro para obtenção de suas medidas finais. Ato contínuo,
todas as falhas foram cobertas com curativos secundários de compressa de gaze e o tórax
envolvido com atadura de crepom
9
seguido de curativo em malha
10
.
Figura 1-A, Observar a utilização do paquímetro para verificação da distância entre as
falhas cutâneas; B, feridas cutâneas antes da aplicação dos tratamentos; C (aplicação dos
tratamentos), C1-ferida recoberta com pomada de calêndula, C2-ferida recoberta com
vaselina, C3-ferida umedecida com solução fisiológica
.
6
Digluconato de clorexidina. Indústria Farmacêutica Rioquímica, SP
7
Pomada de Calêndula Concreta. Laboratório Simões, RJ.
8
Veículo da Pomada de Calêndula Concreta (q.s.p.) Laboratório Simões, RJ.
9
Atadura de crepom. Cremer, SC
10
Surgifix. Kors do Brasil, MG
A
B
C
C
1
C2
C3
tecido de granulação, o epitélio, por sua localização anatômina, provavelmente, deve
também sofrer danos, o que invariavelmente, deve contribuir com o retardo cicatricial.
Achados semelhantes foram citados por Rahal et al., (2001) em seu experimento durante
avaliação de feridas em ratos tratadas com solução isotônica e por De Nardi et al., (2004)
em feridas de cães tratadas com iodo polivinilpirrolidona quando estes foram os únicos
tratamentos impostos. Resultados também descritos por Oliveira et al., (2000) em seus
experimentos com feridas cutâneas em ratos com diferentes formulações de Confrei,
relataram um melhor evento cicatricial nas feridas tratadas com Confrei em forma de gel
em contraste com as formulações contendo água destilada.
Tais achados não foram observados nos grupos que receberam a pomada de calêndula e a
vaselina. Acredita-se que isso ocorreu pelas características lubrificantes da vaselina, haja
vista que a mesma foi aplicada nos dois grupos por ser o veículo da pomada em teste.
Considerando a coloração das feridas, um parâmetro importante da rotina clínica, observou-
se que as falhas cutâneas que receberam solução fisiológica apresentaram uma cor
vermelha escura e fosca enquanto que as dos demais grupos mostravam-se com uma
intensidade de cor e brilho. Resultados também descritos por Rahal et al., (2001) em seus
estudos com pomada orgânica e solução salina em feridas induzidas em ratos. Entretanto,
em relação à coloração, os achados obtidos por Oliveira et al., (2000) mostram uma
coloração menos rosada, com bordas mais avermelhadas e edemaciadas nas feridas tratadas
com veículos líquidos quando comparadas com veículos em forma de gel. Apesar de
considerarmos um dado subjetivo, a coloração das feridas é um parâmetro que orienta o
clínico para os procedimentos a serem adotados no momento do tratamento. Feridas pálidas
e sem brilho demonstram que a granulação, tecido importante na fase de fibroplasia do
processo cicatricial, pode não estar sendo estimulada o suficiente para a sua evolução ou
existe um fator que está interferindo no processo, provocando, consequentemente, uma
neoangiogênese menos intensa. Neste trabalho, acreditamos que o curativo por não ser
aderente foi determinante para o aparecimento de tais achados.
As feridas tratadas com pomada de calêndula e vaselina no grupo de sete dias
apresentaram, presença discreta de tecido de granulação na área central da lesão e tecido
cicatricial nas bordas, contudo, as que receberam a pomada teste foram as únicas que
apresentaram crosta delgada (Fig. 2) em 6/6 dos animais estudados, resultado também
comentado por Martins et al., (2003) em seu experimento com feridas de eqüinos tratadas
com calêndula, onde observaram crostas serosas, lisas e delgadas comparado aos demais
grupos de tratamentos. A crosta pode ser considerada benéfica por ser uma barreira
mecânica que protege a ferida, porém, quando esta se torna muita espessa pode dificultar a
cicatrização, haja vista que para sua liberação é necessário que o epitélio, que se encontra
sob ela, libere enzimas proteolíticas capazes de provocar o seu desprendimento. Outra
ressalva se deve possivelmente pela ação antinflamatória e cicatrizante atribuída a essa
planta (Zitterl-Eglseer et al., 1997 e Martins et al., 2003). As feridas tratadas até o sétimo
dia com vaselina e as tratadas com solução fisiológica de cloreto de sódio apresentaram
crostas mais espessas e secreção serosa.
Figura 2-A–ferida tratada com pomada de calêndula. Observar
presença de crosta delgada no leito da lesão (seta); B-ferida do grupo
vaselina. Crosta delgada em toda a área cruenta (seta). C–Ferida
tratada com solução de cloreto de sódio. Observar crosta escura e
aderida no centro da lesão (seta).
Ao 14º dia as feridas que receberam aplicação tópica de calêndula e a vaselina
caracterizavam-se pela presença de crosta, tecido de granulação preenchendo a área cruenta
e tecido cicatricial evidente em suas margens demonstrando uma evolução cicatricial, já
que as demais tratadas com solução fisiológica apresentavam uma maior quantidade de
exsudato considerado inflamatório e ausência de crostas. A presença deste exudato foi
observada ao 14ºdia no grupo controle em trabalho realizado por Eurides et al., (1996), com
feridas em camundongos, visto que, neste estudo também não houve presença de crosta nas
feridas controle. A presença do tecido cicatricial e de granulação nas feridas durante este
momento propiciou uma margem mais arredondadas nas bordas das lesões (Fig. 3), como
B
C
A
citado por Martin, (1997), devido à retração centrí
Figura 4-Média das áreas das feridas tratadas com pomada de Calendula officinalis
L., vaselina e solução de cloreto de sódio no dia inicial, ao terceiro e sexto dia de
pós-operatório
.
Figura 5-Média das áreas das feridas tratadas com pomada de Calendula
officinalis L., vaselina e solução de cloreto de sódio no dia inicial, ao 3
0,
6
0
, 9
0
e 12
0
dia de pós-operatório.
0
1
2
3
4
5
6
1 2 3
Tempo
Área
CALENDULA
VASILINA
SOL FIS
0
1
2
3
4
5
6
1 2 3 4 5
Tempo
Área
CALENDULA
VASILINA
SOL FIS
VASELINA
1
3
6
VASELINA
.
Figura 6-Média das áreas das feridas tratadas com pomada de Calendula
officinalis L., vaselina e solução de cloreto de sódio no dia inicial, ao 3
0
, 6
0
, 9
0,
12
0
,
15
0
e 18
0
dia de pós-operatório.
Avaliação Histopatológica
No 7º dia de tratamento a avaliação histopatológica se constatou que nas feridas tratadas
com pomada de calêndula não houve reepitelização total, o epitélio nas margens da ferida
estava hiperplásico, com cristas epidérmicas profundas e início de proliferação epitelial
(Fig. 7). Em seus achados, Perri de Carvalho et al., (1991) observaram proliferação epitelial
mais intensa e reeepitelização de todas as feridas tratadas ao 10º dia com creme de
calêndula em ratos. O revestimento epitelial tem papel importante no processo de
cicatrização por apresentar células com finalidade proliferativa e reparadora principalmente
nas feridas onde há perda de substância e ainda por participar na contração nas feridas por
segunda intenção (Medeiros, 1992). O fato de o epitélio encontrar-se hiperplásico neste
período sugere que a chalona, mediador bioquímico liberado no momento do trauma e
0
1
2
3
4
5
6
7
1 2 3 4 5 6 7
Tempo
Área
CALENDULA
VASILINA
SOL FIS
VASELINA
responsável pelo estímulo as células basais, provavelmente, encontrava-se em grande
quantidade, comprovado pela proliferação do epitélio, como citado por Modolin, (1992).
No presente trabalho verificou-se delgada camada de crosta fibrino leucocitária, além de
quantidade reduzida de secreção nas feridas tratadas com pomada de calêndula no 7º dia,
coincidindo com as afirmações feitas por Perri de Carvalho et al., (1991) segundo o mesmo
autor, a calêndula tem capacidade de reduzir exsudato purulento agindo efetivamente em
feridas abertas e dilaceradas, favorecendo o processo cicatricial. Silva, (1992) observou a
presença de crosta em feridas cutâneas de ratos tratados com calêndula apenas no 10ºdia o
que sugere diferenças entre as espécies quanto à reação cicatricial.
O tecido de granulação apresentou-se bem diferenciado com grande quantidade de
fibroblastos ativos na síntese de colágeno, macrófagos e vasos neoformados, de acordo com
as citações de Mandelbaum et al., (2003). Estes fibroblastos organizavam-se
perpendicularmente próximos a superfície da ferida e longitudinalmente na camada mais
profunda, formando os miofibroblastos. Este achado é importante para a evolução do
processo cicatricial, pois estas células apresentam capacidade de contração (Witte e Barbul,
1997; Badylak, 2002 e Mandelbaum et al., 2003) o que determina uma participação
essencial na contração da ferida, diminuindo assim, a área cruenta. Observações
semelhantes foram relatadas por Perri de Carvalho et al., (1991). Entretanto, na área mais
profunda estes autores notaram discreta proliferação fibroblástica ao lado de capilares
neoformados, o que difere do nosso estudo onde se verificou grande quantidade dessas
células. A área de tração foi bastante desenvolvida próxima à superfície da ferida, como
também infiltrados inflamatórios constituídos basicamente por macrófagos e
polimorfonucleares estavam presentes corroborando com citações de Tatarunas et al.,
(1998) e Rahal et al., (2001). Martins et al., (2003) também observaram material necrótico,
debris celulares e infiltrados polimorfonucleares em grau acentuado, durante o tratamento
de feridas em eqüinos com solução hidro-alcóolica de calêndula, o que também foi
observado no grupo controle com solução salina ao 7
0
dia de análise histopatológica,
conforme citações de Calvin, (1998) que descreve a importância dos polimorfonucleares
como agentes quimiotáticos para continuidade das fases subseqüentes da cicatrização.
Neste mesmo período nas feridas tratadas com vaselina e solução de cloreto de sódio 0,9%
não foram observadas reepitelização. Por outro lado, foi constatada a presença de crosta
espessa, infiltrado inflamatório mais intenso, quando comparados às tratadas com pomada
de calêndula (Fig. 8 e 9). A crosta composta basicamente por proteínas desnaturadas e
células mortas é considerada uma barreira de proteção nas feridas (Madden e Arem, 1991),
quando se encontra muito espessa, pode dificultar a migração das células epiteliais que
ocorre abaixo desta cobertura, exigindo conseqüentemente, uma maior produção de
colagenase para dissolvê-la. A área de tração nestas feridas foi discreta, entretanto, os
fibroblastos estavam em grande atividade.
Os vasos de tecido de granulação ao 7º dia estavam
Figura 8-Fotomicrografia de ferida tratada com vaselina aos sete dias.
Observar processo inflamatório intenso (setas). (HE, Obj.10 x).
Figura 9-Fotomicrografia de ferida tratada com solução fisiológica aos
sete dias Observar presença de processo inflamatório intenso (seta)
abaixo da crosta (estrela). (Masson, Obj.10 x).
No 14º dia as feridas, independente do tratamento instituído, apresentaram o epitélio
bastante hiperplásico na borda da lesão e com formação de cristas epidérmicas, além da
presença de crosta no leito da ferida. A síntese de colágeno foi mais intensa na área mais
profunda (área de tração), reduzida na área superficial, contrastando com abundante
substância fundamental nessa área. Notou-se ainda intensa atividade fibroblástica o que não
condiz com os estudos de Modolin, (1992) que descreveu a diminuição da atividade
fibroblástica no tecido de granulação a partir do 8º dia, desaparecendo por volta do 15º dia.
Porém estes achados são respaldados por Tatarunas et al., (1998) em seus estudos com
cicatrização cutânea em gatos domésticos, onde observaram neste período
neovascularização, abundante matriz extracelular, predomínio de fibroblastos e fibras
colágenas dispostos paralelamente ao epitélio. Um maior número de fibras colágenas e
proliferação de fibroblastos foram relatados por Rahal et al., (2001) em seu trabalho com
pomada orgânica natural em feridas induzidas em ratos. Tais elementos celulares são
fundamentais nesta fase de cicatrização por segunda intenção, segundo Witte e Barbul,
(1997).
Nas feridas tratadas com cloreto de sódio 0,9% no 14º dia observou-se a presença de vasos
congestos no tecido de granulação e ainda exsudato inflamatório intenso determinando um
retardo na evolução do processo cicatricial em relação às feridas tratadas com pomada de
calêndula e vaselina (Fig.10,11 e 12), já que estes achados são mais marcantes no início do
processo de cicatização (Prandi Filho et al., 1988). Este resultado sugere que nas feridas
tratadas com solução de cloreto de sódio 0,9% ainda encontrava-se em período de transição
entre a fase inflamatória e fibroplasia do processo de cicatrização, já que neste momento os
vasos estavam congestos. Entretanto, estes vasos são essenciais para o suprimento de
oxigênio e nutrientes para o leito da lesão (Corsi et al., 1994 e Calvin, 1998). O fato dos
vasos neoformados estarem congestos e a presença de secreção pode sugerir que o manejo
diário utilizado nas feridas caudais com compressas de gaze influenciou no aparecimento
destas características histopatológicas, desencadeando um maior afluxo sanguíneo e
concomitantemente induzindo um carreamento de células do processo inflamatório, já que a
solução fisiológica isotônica praticamente não é lesiva aos tecidos.
Figura 10-Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula após 14 dias.
Observar presença de vasos congestos (seta). (Masson, obj.10x).
Figura 11-Ferida tratada com vaselina após 14 dias. Observar presença de
crosta espessa (estrela), infiltrado inflamatório (seta fina) e presença de
vasos congestos (seta grossa). (Masson, obj.10x).
Figura 12-Fotomicrografia de ferida tratada com solução fisiológica após
14 dias. Observar presença de vasos congestos e fibroblastos ativos
(ampliação). Masson, obj.10x/(ampliação 40x).
Nos tratamentos acompanhados até o 28º dia observou-se reepitelização, caracterizada pela
presença de epitélio, entretanto, as feridas tratadas com solução fisiológica este ainda
encontrava-se espessado. Todas as feridas estavam em processo de remodelação e redução
do infiltrado inflamatório, sendo observado pequenos focos inflamatórios em camadas mais
profunda da derme e ao redor dos vasos. As feridas tratada com solução de cloreto de sódio
0,9% possuíam um infiltrado inflamatório mais evidente do que as feridas tratadas com a
pomada de calêndula e vaselina, além da presença de vasos remanescentes do tecido de
granulação. Nessas lesões os fibroblastos ainda apareciam em grande quantidade e em
atividade, o que caracterizaria um retardo na evolução do processo de remodelação em
comparação aos outros dois tratamentos (Fig. 13, 14 e 15). Os resultados referentes à
aplicação da pomada de calêndula aos 28 dias em cães estão de acordo com os relatados por
Perri de Carvalho et al., (1991), onde os autores constataram melhor definição do tecido
conjuntivo e não observaram vasos remanescentes do tecido de granulação aos 25 dias em
feridas cutâneas de camundongo tratadas com creme de calêndula. Corroborando ainda com
as citações de Roslindo et al., (1999) que ressaltam o poder anti-séptico, cicatrizante e
antiinflamatório da calêndula quando aplicada em feridas abertas.
Figura 13-Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula, após 28
dias. Observar diferenciação das camadas epiteliais da pele (estrela).
Presença de vasos neoformados (seta larga) e fibras colágenas na derme
(seta). (HE, Obj. 40x).
Figura 14-Fotomicrografia de ferida tratada com vaselina aos 28 dias.
Observar epitélio reconstituído com aspecto delgado (seta fina). Presença
de vasos remanescentes do tecido de granulação (seta grossa), presença
de fibras colágenas. (Masson, obj: 10x)
Figura 15-Fotomicrografia ferida tratada com solução fisiológica após 28
dias. Observa-se reepitelização com epitélio hiperplásico e com cristas
epidérmicas (setas) (HE, Obj 10x).
CONCLUSÃO
O aspecto clínico e a organização das estruturas celulares se mostraram mais
evidentes em feridas cutâneas tratadas com a pomada de Calendula officinalis L. o que
torna o produto uma opção para aplicação tópica nos processos cicatriciais de pele.
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As Referências bibliográficas deste trabalho estão de acordo com as normas da Associação
Brasileira de Normas Técnicas - ABNT-NBR-6023 – fevereiro de 2000.
Efeito da Calendula officinalis L. sobre a colagenogênese e diferenciação do
colágeno na cicatrização cutânea de cães
Experimento 2
Trabalho formatado de acordo com as normas da
Revista Ciência Rural
ISSN 0103-8478
Santa Maria – Rio Grande do Sul.
Efeito da Calendula officinalis L. sobre a colagenogênese e diferenciação do
colágeno na cicatrização cutânea de cães.
Effect of Calendula officinalis L. in collagenogenesis and collagen diferentation
in wound healing in dogs
Flávia Ferreira de Menezes
1
, Maria Cristina de Oliveira Cardoso Coelho
2
, Ana Maria
dos Anjos Carneiro-Leão
3
, Júlio Rodrigues Pereira-Júnior
4
, Almir Gonçalves Wanderley,.
5
,
José Lamartine Aguiar
6
Grazielle Anahy Souza Aleixo
7
RESUMO
Devido às propriedades anisotrópicas ópticas que o colágeno possui, a avaliação da
birrefringência através da microscopia de polarização permitiu a diferenciação dos tipos
de colágenos em feridas tratadas com pomada de calêndula, vaselina e solução de cloreto
de sódio 0,9% (SF), através de avaliações qualitativas, após sete, 14 e 28 dias de análises
histopatológicas. Observou-se nas feridas tratadas com calêndula aos sete dias de
avaliação presença de fibras colágenas com coloração esverdeada, caracterizadas como
colágeno tipo III e em menor quantidade fibras coradas em vermelho, caracterizadas
como colágeno tipo I; quando comparadas com as tratadas com vaselina e SF, estas
apresentaram uma maior quantidade de fibras tipo III. coradas em verde. Aos 14 dias, as
feridas com calêndula apresentaram um padrão de organização mais definido e maior
quantidade de fibras avermelhadas. As tratadas com vaselina apresentaram fibras com
coloração avermelhada, entretanto, com um padrão de organização menos evidente. As
tratadas com SF demonstraram uma menor quantidade de fibras avermelhadas e
desorganizadas, caracterizando um processo cicatricial menos evoluído. Aos 28 dias todas
as feridas apresentavam coloração avermelhada, sugerindo colágeno tipo I e um padrão de
orientação das fibras mais nítido. O método de coloração por picrosírius demonstrou ser
viável para identificação dos tipos de colágeno durante evolução do processo cicatricial
em feridas cutâneas de cães.
Palavras-chave: colágeno, picrosírius, ferida, cão.
1
Médica Veterinária, Doutoranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da Universidade
Federal Rural de Pernambuco (UFRPE). R. Valdemar Falcão, 215. Engº do Meio, 50730-020, Recife-PE. E-
mail: flaviafmenezes@yahoo.com.br. Autor para correspondência.
2
Médica Veterinária. Doutora, Professora Adjunto, Departamento Medicina Veterinária, UFRPE.
3
Médica, Doutora, Professora Adjunto, Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, UFRPE.
4
Médico Veterinário, Mestre do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE.
5
Farmacêutico-Bioquímico, Doutor, Professor Adjunto, Departamento de Ciências Farmacológicas, UFPE.
6
Médico, Doutor, Professor Adjunto, Departamento de Cirurgia, UFPE.
7
Médica Veterinária, Doutoranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da Universidade
Federal Rural de Pernambuco (UFRPE).
ABSTRACT
Due to the optical anisotropic properties that the collagen has, the evaluation of the
birefringence through the polarization microscopy allowed the differentiation of the types
of collagens in wounds treated with calendula pomade, vaseline and sodium chloride
solution 0,9% (SF), through qualitative evaluations, after seven, 14 and 28 days of
histopathologic analyses. It was observed in the wounds treated with calendula in the
seventh day of evaluation presence of collagens fibers with greenish coloration,
characterized as type III collagen and in smaller amount fibers staining in red,
characterized as type I collagen; when compared with the ones treated with vaseline and
SF, these, presented a larger amount of type III fibers staining in green. To the 14 days,
the wounds with calendula presented a more defined organization pattern and larger
amount of red fibers. The ones treated with vaseline presented fibers with red coloration,
however, with a pattern of less evident organization. The ones treated with SF
demonstrated a smaller amount of red and disorganized fibers, characterizing a less
developed cicatricial process. To the 28 days all the wounds presented red coloration,
suggesting type I collagen and a pattern of orientation of clearest fibers. The picrosirius
coloration method demonstrated to be viable for identification of the collagen types
during evolution of the cicatricial process in cutaneous wounds of dogs.
Key-words: collagen, picrosirius, wound, dog.
INTRODUÇÃO
A derme, localizada imediatamente sob a epiderme, é um tecido conjuntivo que
contém fibras protéicas, vasos sangüíneos, terminações nervosas, órgãos sensoriais e
glândulas. As principais células da derme são os fibroblastos, responsáveis pela produção
de fibras e de uma substância gelatinosa, a substância amorfa, na qual os elementos
dérmicos estão mergulhados. Na derme encontramos ainda: músculo eretor de pêlo, fibras
elásticas (elasticidade), fibras colágenas (resistência), vasos sangüíneos e nervos
(JUNQUEIRA & CARNEIRO, 1999).
O fibroblasto é o tipo de célula mais comum e mais numerosa de todas as variedades
dos tecidos conjuntivos propriamente ditos, cabendo-lhe o papel de sintetizar a maioria
dos componentes extracelulares; as fibras colágenas, reticulares e provavelmente as
elásticas. Em linhas gerais, os fibroblastos formam os precursores das fibras colágenas, as
moléculas de tropocolágeno, cuja polimerização irá dar origem ao colágeno propriamente
dito (SIQUEIRA JR. & DANTAS, 2000).
As proteínas colagênicas são os constituintes mais abundantes da matriz extracelular
da maioria dos tecidos. Existem 24 tipos de colágenos, e cada um deles apresenta
características próprias, tanto em sua natureza química como na organização estrutural.
As moléculas do colágeno estão envolvidas direta e indiretamente, na adesão e
diferenciação celulares, quimiotaxia e outras funções importantes para o desenvolvimento
e funcionamento do organismo. Outra função importante do colágeno é a sua atuação na
agregação, aderência e ativação das plaquetas, ou seja, tem ação na primeira etapa da
formação do coágulo, agindo ainda como fator do mecanismo intrínseco para o sangue
coagular (PIMENTEL, 2001).
A cicatrização de feridas está representada por uma série de eventos celulares e
bioquímicos direcionados para o processo cicatricial, objetivando o reparo tecidual.
Decorre de uma seqüência complexa e organizada de eventos celulares, envolvendo uma
modificação consecutiva nas proteínas da matriz extracelular (MEC) designados para
restaurar a função e a integridade dos tecidos. Os principais componentes do tecido
conjuntivo propriamente dito são os colágenos, as proteínas não colágenas, entre elas
(fibronectina, e fibras elástica), glicosaminoglicanas e proteoglicanas (SIQUEIRA JR. &
DANTAS, 2000; TAS et al., 2003).
A reação inflamatória é um fenômeno ainda não totalmente elucidado, constituído
por vários processos encadeados (bioquímicos, celulares, vasculares) que se situam dentro
de um objetivo comum de reparar a agressão e o dano produzido. Entretanto, a reação
inflamatória inclui outros fenômenos que não são considerados elementos de resposta
inflamatória, como agregação plaquetária, ativação do complemento e ativação das
prostaglandinas (SINGER & CLARK, 1999; NATHAN, 2002).
Os fibroblastos do tecido conjuntivo das margens da lesão tornam-se ativos e
iniciam a síntese dos componentes da MEC, que é uma rede complexa de macromoléculas
que secretam colágeno, elastina, glicoproteínas e proteoglicanos. Tais elementos
localizados no espaço extracelular desempenham papel central no controle dos processos
celulares básicos, como proliferação, diferenciação, migração e interação celular. Durante
este processo, no caso da cicatrização da pele, a migração de queratinócitos ocorre de tal
forma que uma nova camada e um leito provisório são construídos, por meio de síntese de
proteínas da matriz extracelular (BELLO & PHILLIPS, 2000; DIEGELMANN &
EVANS, 2004).
A matriz inicial da ferida é provisória, sendo composta de fibrina e ácido
hialurônico, que é um glicosaminoglicano (GAG). Em virtude de sua camada aquosa ou
de hidratação, o ácido hialurônico fornece uma matriz que estimula a migração celular. Os
proteoglicanos (PGs) compreendem uma parte da matriz extracelular (MEC) onde
participam desses eventos moléculas que regulam a proliferação, migração e adesão
celular. As glicoproteínas de aderência, como a fibronectina, laminina e tenascina estão
presentes por toda a matriz inicial, facilitando a união e a migração celular. À medida que
os fibroblastos chegam e se difundem na ferida promovem a deposição de colágenos,
numa base de fibronectina e GAGs de maneira desorganizada. O termo colágeno refere-se
a uma família de macromoléculas geneticamente distintas, composta por aminoácidos
estruturalmente semelhantes, cuja distribuição e freqüência são características: glicina
(33,5%), prolina (12%) e hidroxiprolina (10%), segundo BARRCO et al. (1998). Os
colágenos tipo I e III são os principais colágenos fibrilares comprometidos na matriz
cutânea extracelular. O colágeno tipo III é predominante nas feridas, em comparação com
a pele normal, mas à medida que o ferimento amadurece o colágeno tipo I é depositado
em quantidades crescentes. A maior parte do colágeno é do tipo I, tanto na pele normal
quanto nos ferimentos (SABISTON & LYERLY, 1996; PRATHIBA & GUPTA, 2000).
Sendo o principal componente do tecido cicatricial é o colágeno que se substitui o
tecido após o dano cutâneo, sua síntese inicia-se logo no terceiro dia e atinge seu pico
máximo entre três e seis semanas seguindo-se para um período de remodelação. Esses
colágenos podem ser classificados em dois tipos, os colágenos formadores de fibrilas e os
não formadores. A derme é constituída por fibrilas colagenosas, sendo o colágeno tipo I o
mais abundante, fornecendo resistência à pele. Durante o processo cicatricial a quantidade
de colágeno aumenta com o tempo e em média após duas semanas passam a predominar
na MEC. O colágeno tipo III é inicialmente sintetizado e depositado, sendo substituído
por tipo I à medida que ocorre maturação do tecido cicatricial (CARNEIRO et al., 2005).
O método da picrossírius-polarização tem sido contribuído significativamente para a
identificação e compreensão do colágeno e de suas funções. A especificidade do método é
baseada na presença de aminoácidos básicos nas moléculas do colágeno que reagem
fortemente com o corante ácido (Sírius-red). Essa reação aumenta a birrefringência do
colágeno, composto por moléculas agregadas. A diferenciação dos tipos do colágeno
também é possível, sendo o tipo I fortemente birrefringente, fibras espessas amarelas ou
vermelhas e o tipo III pouco refringente (CARNEIRO et al., 2005).
A microscopia polarizada é um método especialmente aplicado para investigar a
síntese de colágeno, no aspecto qualitativo e quantitativo, permitindo a observação da
birrefringência exibida por essas fibras (VIZIOLI et al; 2003). Na polimerização do
colágeno, os PGs estão envolvidos na formação da fibra colágena, sendo a condroitina
sulfato-4 responsável por acelerar a polimerização do colágeno tipo I (PRATHIBA &
GUPTA, 2000).
Embora os efeitos dos fitoterápicos na cicatrização cutânea ainda não tenham sido
investigados completamente, segundo MOGHBEL et al. (2005), as flores de Calendula
officinalis têm sido usadas em formas terapêuticas e em cosmética, as quais apresentam
principalmente: saponinas, triterpenos, triterpenos alcóois e ésteres de ácidos graxos,
carotenóides, flavonóides, cumarinas, óleos essenciais, hidrocarbonetos e ácidos graxos
(HAMBURGER et al., 2003). Tendo origem de área do Mediterrâneo, sua adaptação ao
Brasil pode ter afetado de diferentes formas a qualidade e quantidade dos princípios ativos
(PARENTE et al., 2004).
O extrato da calêndula tem sido usado topicamente para promover a cicatrização de
feridas, sendo reportado em vários estudos com efeitos mensuráveis em experimentos
laboratoriais com pomada contendo 5% de fração extraída da flor de calêndula, onde foi
descrito estimulação no processo de regeneração no leito da ferida, suportado por
metabolismo mais intenso de glicoproteínas, nucleoproteínas e proteínas do colágeno
durante o período de regeneração dos tecidos (BROWN & DATTNER, 1998).
Seu efeito antiinflamatório está associado a uma porção lipofílica em um de seus
constituintes, os triterpenóides, sendo demonstrado em estudos com animais que a
calêndula estimula o tecido de granulação e incrementa a síntese de glicoproteínas e
colágeno no leito da ferida (BEDI & SHENEFELT, 2002; HAMBURGER et al., 2003).
Possui ainda em sua composição carotenóides, flavoníodes, carboidratos, ácidos graxos e
polissacarídeos, que lhe conferem ação epitelizante e imunoestimulante, segundo BEDI &
SHENEFELT (2002).
Em vista dos efeitos cicatrizantes atribuídos a calêndula, este trabalho foi realizado
com o objetivo de estudar o efeito da aplicação da pomada de Calendula officinalis L.em
feridas cutâneas de cães sobre a diferenciação do colágeno através da observação da sua
birrefringência.
MATERIAL E MÉTODOS
A pesquisa foi encaminhada a Comissão de ética do Departamento de Medicina
Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) através do processo de
nº 3963/2002 recebendo parecer favorável para sua execução. Após a realização do referido
trabalho todos os animais foram doados para famílias de conhecida procedência.
Para realização do estudo18 cães machos, adultos, sem raça definida e peso médio de
10,9±2,8 Kg, compuseram três grupos com seis animais. Considerando o tempo, cada
grupo recebeu um protocolo diferenciado para o estudo do colágeno, ou seja, sete, 14 e 28
dias de pós-operatório.
Para avaliação da higidez todos os cães foram avaliados clínica e laboratorialmente
através do hemograma, pesquisa de hemoparasitas, perfil bioquímico com função renal
cloridrato de xilazina
2
na dose de 2mg/kg por via intramuscular. Após tricotomia da região
torácica lateral direita, os animais foram mantidos em venóclise com solução fisiológica de
cloreto de sódio
3
0,9% e administrado cloridrato de quetamina
4
na dose de 7,5mg/kg por
via endovenosa. Os cães foram posicionados em decúbito esternal e submetidos à anti-
sepsia do campo cirúrgico com clorexidina
5
2% .
Para delimitar a área a ser incidida moldes previamente autoclavados medindo 4cm
2
foram utilizados e separados entre si por 5cm. A tela subcutânea foi divulsionada em cada
área demarcada na região torácica lateral direita e as falhas cutâneas foram produzidas. Ato
contínuo e considerando o sentido crânio-caudal, as feridas localizadas cranialmente foram
recobertas com pomada de Calendula officinalis
6
, as mediais com vaselina
7
e as lesões
caudais foram irrigadas com solução fisiológica de cloreto de sódio
1
0,9%
8
. Todas as
falhas foram recobertas com curativos secundários de compressa de gaze e o tórax
envolvido com atadura de crepom
9
seguido de curativo em malha
10
.
Diariamente os tratamentos terapêuticos supracitados foram realizados até o momento
da biopsia que ocorreu ao 7
0
, 14
0
e 28
0
dia de pós-operatório nas mesmas condições
anestésica descritas.
Os fragmentos para biopsia foram fixados em formalina a 10%, neutra e tamponada, e
posteriormente em Bouin. Em seguida processados pelas técnicas rotineiras de
desidratação, diafanização e inclusão em parafina; cortados em micrótomo a 5µ e as
lâminas coradas pelo método de Picrosírius-red, segundo (BANCROFT & COOK, 1994).
3
Solução de cloreto de sódio. Lafepe, PE
4
Francotar. Virbac, SP
5
Digluconato de clorexidina. Indústria Farmacêutica Rioquímica, SP
6
Pomada de Calêndula Concreta. Laboratório Simões, RJ
7
Veículo da Pomada de Calêndula Concreta (q.s.p.) Laboratório Simões, RJ
8
Solução de cloreto de sódio. Lafepe, PE
9
Atadura de crepom. Cremer, SC
10
Surgifix. Kors do Brasil, MG
RESULTADOS E DISCUSSÃO
A análise de colágeno foi realizada utilizando para isso uma de suas propriedades
anisotrópicas ópticas, a birrefringência através da microscopia de polarização, e área
estabelecida como região de investigação correspondeu à área circunjacente (tecido
íntegro) e área lesada onde foi possível observar, através da análise qualitativa, o brilho de
birrefringência e organização das fibras colágenas.
As feridas avaliadas aos sete dias de pós-operatório dos grupos vaselina e solução de
cloreto de sódio apresentavam fibras mais desorganizadas e maior evidência do colágeno
tipo III, caracterizado histologicamente por sua propriedade de birrefringência como
fibras que se coram em verde. Essas fibras, caracterizadas como fibras colágenas
imaturas, traduzem um processo de reorganização para preenchimento da área lesada,
com colágeno imaturo e sem organização definida. Nestes grupos poucas fibras colágenas
do tipo I, caracterizada pela coloração vermelha, apresentavam-se visíveis (Fig. 1, 2 e 3).
Vale ressaltar que segundo CARNEIRO et al., (2005) o colágeno tipo III é
inicialmente sintetizado e depositado, sendo substituído por tipo I à medida que ocorre
maturação do tecido cicatricial. Considerando o tempo da biopsia (sete dias) esses
achados podem ser considerados esperados, porém, quando analisamos os fragmentos de
pele dos animais que foram tratados com a pomada de calêndula verificamos a presença
de fibras colágenas mais maduras, tipo I, no centro da lesão e periferia das feridas,
demonstrando uma evolução da cicatrização em relação aos demais grupos.
Conforme descrições de BARRCO et al. (1998) a diferença de coloração observada
neste estudo do colágeno tipo III, considerado mais imaturo e instável, e apresentar
coloração verde e o tipo I, mais estável e resistente, e apresentar coloração vermelha se
deve, provavelmente, ao fato das fibras colágenas do tipo I serem fibras grossas e
densamente agrupadas e, consequentemente, apresentarem intensa birrefringência
corando-se em vermelho; já o colágeno tipo III forma fibras finas (fibras reticulares) que
se dispõem frouxamente mostrando dessa forma fraca birrefringência.
Nas lesões avaliadas aos 14 dias de pós-operatório, o padrão de organização das
fibras colágenas se mostrava mais evidente em todos os grupos (Fig. 4,5 e 6). Como o
processo cicatricial é dinâmico e o colágeno se encontra em processo de polarização, os
resultados nesse nosso trabalho são de cunho comparativo entre os tratamentos. Como
Figura 2
-
Fotomicrografia de ferida tratada
com vaselina
aos sete dias de pós-operatório.
Observar fibras colágenas
tipo III coradas em verde (seta). Picrosírius, obj. 40x.
Figura 1
-
Fotomicrografia de ferida tratada com solução de
cloreto de sódio aos sete dias de pós-operatório. Observar
presença de fibras colágenas tipo III, coradas em verde.
Picrosírius, obj. 40x.
Figura 3
-
Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula
aos sete dias de pós-
operatório. Observar fibras colágenas
tipo III coradas em verde e tipo I coradas em verde.
Picrosírius, obj.40x
ressaltado por CARNEIRO et al., (2005) o principal componente do tecido cicatricial é o
colágeno que substitui o tecido após a perda cutâneo, sua síntese inicia-se logo no terceiro
dia e atinge seu pico máximo entre três e seis semanas seguindo-se para um período de
remodelação. Como descrito na literatura, esta pode ser considerada como a segunda fase
da cicatrização e é caracterizada pela proliferação, fibroplasia e angiogênese
(MANDELBAUM et al., 2003), marcada pelo crescimento rápido no número de
fibroblastos e células epiteliais, bem como síntese de colágeno e proteoglicanos
(MONTANDON et al., 1977).
Os achados histopatológicos de todas as feridas estudadas aos 28 dias demonstraram
um padrão de organização e uma maior concentração de fibras com coloração
avermelhada (Fig 7, 8 e 9), caracterizando colágeno tipo I, tais achados estão de acordo
com SABISTON & LYERLY, (1996); PRATHIBA & GUPTA, (2000) e RICH &
WHITTAKER, (2005), onde descrevem que feridas imaturas normalmente coram-se de
verde e com o amadurecimento coram-se de vermelho, sendo o colágeno tipo III o mais
predominante no início da cicatrização, e o tipo I depositado em quantidades crescentes
de acordo com a evolução cicatricial. Achados semelhantes foram descritos por
PEREIRA et al., (1998), em seus experimentos com miocárdio de ratos hipertensos, onde
relatam no endomísio e perimísio aos 40 dias no grupo controle um aumento na
concentração de fibras colágenas desencadeando coloração vermelho alaranjada, sendo
categorizada como provável colágeno do tipo I e em menor quantidade fibras colágenas
de cor verde, sendo provavelmente colágeno tipo III.
Figura 4
-
Fotomicrografia de ferida tratada com calêndula
aos 14 dias. Observar organização de feixes de fibras
colágenas tipo III com coloração esverdeada (seta grossa) e
presença de fibras colágenas tipo I com coloração
avermelhada (estrela). Picrosírius, obj. 40x.
Figura 5
-
Fotomicrografia de fer
ida tratada com vaselina
aos 14 dias. Observar organização de feixes de fibras
colágenas tipo III com coloração esverdeada (seta grossa) e
presença de fibras colágenas tipo I com coloração
avermelhada (estrela). Picrosírius, obj. 40x.
Figura 6
-
Fotomicrogr
afia de ferida tratada com
SF aos 14 dias. Observar presença de fibras
colágenas tipo III com coloração esverdeada
(estrela) e fibras colágenas tipo I com coloração
avermelhada (seta). Picrosírius, obj. 10x.
Figura 8
-
Fotomicrografia de ferida tratada com
calêndula aos 28 dias. Observar fibras colágenas tipo I
de coloração avermelhada (estrela). Picrosírius, obj.
40x.
Figura 7
-
Fotomicrografia de ferida tratada com vaselina
aos 28 dias. Notar presença de fibras colágenas tipo I de
coloração avermelhada (estrela) e fibras esverdeadas
(seta). Picrosírius, obj. 40x.
Figura 9
-
Fotomicrografia de ferida tratada com SF aos 28 dias.
Notar presença de fibras colágenas do tipo I com coloração
avermelhada (seta) e colágeno tipo III (estrela). Picrosírius, obj.
40x
CONCLUSÕES
O método de coloração por picrosírius demonstrou ser viável para avaliar
comparativamente a quantidade de colágenos em feridas submetidas a diferentes
tratamentos e permite a identificação dos tipos de colágeno durante evolução do processo
cicatricial em feridas cutâneas de cães.
A pomada de Calendula officinalis L.pode ser utilizada no arsenal terapêutico para feridas
cutâneas em cães por contribuir com a cicatrização e promover uma estrutura
organizacional das fibras colágenas.
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA
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Avaliação da contração primária após produçao de falhas cutâneas na pele de cães.
Experimento 3
Trabalho formatado de acordo com as normas do
Archives of Veterinay Science
ISSN 1517-784X
Universidade Federal do Paraná-PR
Avaliação da contração primária após produção de falhas cutâneas na pele de cães.
Evaluation of the primary contraction after production of cutaneous flaws in the
skin of dogs.
MENEZES, F. F.
1
, COELHO, M.C.O.C
2
, CARNEIRO-LEÃO, A.M.A.
3
, PEREIRA-
JÚNIOR, J.R.
4
, WANDERLEY, A. G.
5
, ALEIXO, G.A.S
6
RESUMO-Foram avaliadas 54 feridas cutâneas induzidas experimentalmente em cães,
adultos, sem raça definida, machos com o objetivo de avaliar a contração primária da pele
após a produção de uma área cruenta resultante de um molde de 4cm
2
A região torácica
lateral direita foi padronizada como campo operatório, sendo mensurada a área das lesões
com paquímetro imediatamente após a ressecção da pele. Houve um aumento na área de 5,4
cm
2
+ 0,3 estimado percentualmente em de 35% da área inicial proposta. Dessa forma
podemos concluir que o tamanho dos moldes utilizados para produção de falhas cutâneas
não correspondem ao tamanho real da área da lesão, visto que, as fibras elásticas quando
incididas determinam um aumento da área devido sua retração e capacidade de elasticidade
Palavras-chave: Tecido conjuntivo, fibras elásticas, ferida, cão.
ABSTRACT-Were evaluated 54 cutaneous wounds induced experimentally in adults,
males dogs without defined breed, with the objective of evaluating the primary contraction
of the skin after the production of an wound area resulting from a mold of 4cm
2
. The right
lateral thoracic area was standardized as the surgery field, being the area of the lesions
measured with a paquimeter immediately after the resseccion of the skin. There was an
1
Médica Veterinária, Doutoranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da Universidade
Federal Rural de Pernambuco (UFRPE). R. Valdemar Falcão, 215. Engº do Meio, 50730-020, Recife-PE. E-
mail: flaviafmenezes@yahoo.com.br. Autor para correspondência
2
Médica Veterinária. Doutora, Professora Adjunto, Departamento Medicina Veterinária, UFRPE.
3
Médica, Doutora, Professora Adjunto, Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, UFRPE.
4
Médico Veterinário, Mestre do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE.
5
Farmacêutico-Bioquímico, Doutor, Professor Adjunto, Departamento de Ciências Farmacológicas, UFPE.
6
Médica Veterinária, Doutoranda do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da Universidade
Federal Rural de Pernambuco (UFRPE).
increase in the area of 5,4 cm
2
+ 0,3 percentualy estimated in 35% of the initial proposed
area. In that way we can conclude that the size of the molds used for production of
cutaneous flaws do not correspond to the real size of the area of the lesion, because, the
elastic fibers, when incided, determine an increase of the area because of it’s retraction and
elastic capacity.
Key-words: Conjunctive tissue, elastic fibers, wound, dog.
INTRODUÇÃO
O tecido conjuntivo propriamente dito caracteriza-se por possuir vários tipos celulares
e uma abundante matriz extracelular (MEC) composta por glicosaminoglicanas e proteínas,
além dos constituintes vasculares. Esta matriz não constitui apenas um suporte estrutural,
mas também, uma fonte de sistema capaz de influenciar o crescimento e diferenciação de
diferentes tipos celulares, incluindo células endoteliais, células musculares lisas,
fibroblastos, entre outras células. Dentre os grupos de proteínas que constituem a MEC,
ressaltam-se as proteínas glicoproteicas estruturais fibrosas que são o colágeno e a elastina.
Esta é representada pelas fibras elaunínicas, oxitalâmicas e elásticas formando assim o
sistema elástico, sendo este o principal componente estrutural dos tecidos encontrado em
todo corpo (ALTER, 1999; JUNQUEIRA e CARNEIRO, 1999; SIQUEIRA JR. e
DANTAS, 2000).
A elastina é a proteina do tecido conjuntivo responsável pelas propriedades de
extensibilidade e elasticidade dos tecidos. Está presente em grande quantidade
particularmente nos tecidos que requerem propriedades físicas como: artérias e ligamentos.
Em menor quantidade encontra-se também na pele, cartilagem auricular e em outros
tecidos. (MURRAY e KEELEY, 1996; SANTOS et al., 2004). É constituída por dois
aminoácidos (desmosina e isodesmosina) que formam correntes de tropoelastina
(precursor), a qual confere propriedade elástica. O mecanismo exato de suas extensibilidade
ainda não foi claramente compreendido, mas a quantidade de elastina no tecido reflete sua
força mecânica e o grau de necessidade para reverter à deformação (CULAV et al., 1999).
A formação das fibras elásticas está relacionada à deposição da elastina nas
microfibrilas onde estas formam arcabouços, entretanto, parece também haver um controle
celular sobre a estrutura final da fibra elástica, já que são observados prolongamentos
celulares que contornam essas fibras definindo a sua forma e provavelmente a sua
espessura (PIMENTEL, 2001). São sempre encontradas em associação com os tecidos
colágenos e são responsáveis pelo que pode ser chamado de elasticidade reversa. Em
associação com a rede de colágeno as forças rígidas que limitam as deformações dos
elementos elásticos e que são largamente responsáveis pelas propriedades finais (força de
tração e inextensibilidade relativa) ALTER, (1999).
A dificuldade mais comum quando se trata do processo de cicatrização é o aspecto
final da cicatriz, visto que, há necessidade de apreciação das linhas de tensão ou linhas de
Langerhans existentes na pele (ANDERSON, 1997). Para que o processo cicatricial ocorra
sem complicações de ordem anatômica e funcional, as incisões devem respeitar as linhas de
tensão (Fig. 1), no cão estas linhas já foram mapeadas de acordo com SWAIM, (1980).
Figura 1: Diagrama das linhas de tensão no cão. (Anderson, 1997).
Em consideração as propriedades de elasticidade e inextensibilidade das fibras
elástica, este trabalho teve por objetivo avaliar a contração primária após produção de
falhas cutâneas na pele de cães.
MATERIAL E MÉTODOS
A presente pesquisa foi aprovada pela Comissão de Ética do Departamento de
Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco de acordo com as
normas éticas através do processo nº 3963/2002 recebendo parecer favorável para sua
execução. Todos os animais ao fim do trabalho foram adotados por famílias de reconhecida
procedência.
Para a realização do estudo moldes de papel autocolante medindo 4cm
2
foram
previamente confeccionados, autoclavados e aplicados na região torácica-lateral direita em
18 cães adultos, machos e sem raça definida para produção de 54 falhas cutâneas.
Após jejum hídrico e alimentar de seis e 12 horas, respectivamente, os animais foram
submetidos a um protocolo anestésico com sulfato de atropina
1
(0,044mg/kg,via
subcutânea), cloridrato de xilazina
2
(2mg/kg,via intramuscular) seguido de cloridrato de
quetamina
3
( 7,5mg/kg,via endovenosa). Os cães foram posicionados em decúbito esternal e
submetidos à anti-sepsia do campo cirúrgico com clorexidina
4
2%.
Após estes procedimentos os moldes foram posicionados na região torácica lateral
direita para a demarcação da área a ser incidida, (Fig. 2A) as falhas cutâneas foram obtidas
incidindo a pele com lâmina de bisturi número 15, seguida de divulsionamento da tela
subcutânea com auxílio de pinça de dissecção e tesoura romba (Fig. 2B). Ato contínuo,
após a confecção das falhas cutâneas, estas foram mensuradas no sentido crânio-caudal e
dorso-ventral (Fig. 2C e 2D) com auxílio de um paquímetro
5
para obtenção de suas
medidas. Para a produção das falhas cutâneas se considerou uma distância de 5cm entre
cada (Fig.3).
Para o estudo da contração primária inicial a fórmula utilizada para o delineamento
dos cálculos da área final foi A= b x h.
1
Sulfato de atropina 0,25. Lafepe, PE
2
Virbaxyl 2%. Virbac, SP
3
Francotar. Virbac, SP
4
Digluconato de clorexidina. Indústria Farmacêutica Rioquímica, SP
5
Paquímetro: 0,05mm. N. 505.633-50, Japão
SWAIN, (1980) e ANDERSON, (1997) e observado por COELHO (1998) em seu
experimento com feridas cutâneas de cães.
A opção pela produção de feridas geometricamente quadradas também foi escolhida
por OLIVEIRA et al., (2000) em seus estudos com feridas cutâneas em ratos, entretanto,
RAHAL et al., (2001), RAHAL et al., (2003) e De NARDI et al., (2004), empregaram
moldes retangulares para confecção de falhas cutâneas. Uma outra metodologia foi adotada
por EURIDES et al., (1996), BARBUDO et al., (2001), VILLA et al., (2003) e MARTINS
et al., (2003), onde descreveram a utilização de “punch” para realização de feridas com
formas circulares em seus experimentos com lesões de pele produzidas cirurgicamente. Em
nosso estudo a escolha por feridas quadradas nos permitiu avaliar o mecanismo de retração
das linhas de tensão sobre a área proposta e a área obtida após a incisão. Contudo, a escolha
da forma geométrica para as feridas de pele realizadas experimentalmente está de acordo
com o que se quer avaliar e qual o modelo experimental a ser estudado.
A fórmula utilizada para o delineamento dos cálculos da área final foi A= b x h (área
do retângulo), mesmo que o molde inicial tenha apresentando 2x2 cm (quadrado), isto se
deve a conformação observada após a incisão da pele e a formação da área cruenta. PRATA
et al., (1988), EURIDES et al., (1996), BARBUDO et al., (2001) em seus estudos sugerem
o emprego da fórmula matemática: A= п.R.r, visto que a forma geométrica empregada foi
circular. Entretanto, FALCÃO et al., (2001) e MARTINS et al., (2003) relataram em seus
trabalhos o uso da planimetria para obtenção da área. Uma outra descrição para mensuração
Figura
4
-
Visualização das
bordas da falha cutânea
onde se observa diferença
na altura em relação à
largura.
Figura 3
-
Aplicação dos moldes
adesivos e medição da distância
para produção das falhas
cutâneas.
da área de feridas foi sugerida por SCHULTZ et al., (2005), onde as fórmulas A= l x w
(A=comprimento x largura) foi proposta para feridas retangulares e A=l x w x п/4 (A=
comprimento x largura x п/4) para feridas elípticas, ou seja, vários modelos têm sidos
utilizados para o estudo da área cruenta e suas avaliações dependeram do desenho
geométrico obtido.
No presente estudo obteve-se uma média da área de 5,4 cm
2
após a produção da falha
cutânea, estimada inicialmente em 4cm
2
(Fig. 5), considerando em valores percentuais um
aumento de 35 % da área proposta. Achados semelhantes foram descritos por OLIVEIRA
et al., (2000), onde obtiveram um aumento médio de 39% da área das feridas
imediatamente após a cirurgia. Tais resultados devem-se provavelmente a retração das
fibras elásticas desencadeado pela incisão da pele no sentido transversal das linhas de
tensão, acarretando um aumento na área total da ferida.
Figura 5-Aumento médio das áreas das feridas após confecção das falhas cutâneas a
partir de molde de 4cm
2
.
CONCLUSÃO
A elasticidade da pele em decorrência da presença das fibras elásticas promove o aumento
da área cruenta quando a pele é incidida, ocasionando um aumento na ordem de 35% em
feridas localizadas na região torácica lateral.
4
4
4
1,12
1,47
1,61
0
1
2
3
4
5
6
CALENDULA
VASELINA
SOL FIS
Área
Após
produção
Área
demarcada
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