( PDF ) Desenvolvimento do androceu e gineceu em três espécies de Potamogeton L. (Potamogetonaceae, Alismatales)

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ

ELAINE LOPES PEREIRA NUNES

DESENVOLVIMENTO DO ANDROCEU E GINECEU EM TRÊS ESPÉCIES DE

Potamogeton L. (POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES)

CURITIBA

2009

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ELAINE LOPES PEREIRA NUNES

DESENVOLVIMENTO DO ANDROCEU E GINECEU EM TRÊS ESPÉCIES DE

Potamogeton L. (POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES)

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Botânica, Área de Concentração

em Estrutura e Fisiologia do Desenvolvimento

Vegetal, Departamento de Botânica, Setor de

Ciências Biológicas, Universidade Federal do

Paraná, como parte dos requisitos necessários

para a obtenção do título de Mestre em Botânica.

Orientadora: Profa. Dra. Alessandra Ike Coan

Co-orientadora: Profa. Dra.Cleusa Bona

Co-orientadora: Profa. Dra. Maria Cecília de Chiara

Moço

CURITIBA

2009

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Ao Gustavo, meu esposo, companheiro e amigo.

Aos meus pais, Leila e Licinio.

Aos meus irmãos, Alexandre, Jéssica e Emmanuel.

Por todo o amor, apoio, por tudo o sou e pelo que alcancei.

AGRADECIMENTOS

A Deus, por toda proteção, força e sorte.

A Alessandra, que apesar de pouco me conhecer e ao projeto, assumiu

minha orientação no último semestre do curso. Sob sua orientação, com extrema

dedicação, confiança e amizade, dados e idéias foram transformados em

dissertação.

A Cleusa, pela co-orientação, amizade e prontidão em resolver os pequenos

problemas que surgiram ao longo do curso.

A Cecília, pela co-orientação, amizade, treinamento e suporte no

desenvolvimento deste trabalho.

A Mariana Cortes de Lima, pelo auxílio no processamento de parte do

material, pela compreensão com a minha inexperiência em orientá-la e amizade.

A professora Edna Scremin-Dias, pelo auxílio na coleta de P. illinoensis,

hospedagem e conselhos.

Aos professores Armando Cervi e Rodrigo Schütz Rodrigues, pela

identificação das espécies.

Ao Prof. Dr. Ciro Alberto de Oliveira Ribeiro e Dra. Monika Barth, pelo

auxílio nas técnicas de microscopia eletrônica de transmissão.

A Makeli, pela amizade, companheirismo e cumplicidade, no laboratório e

fora dele.

A Jenifer, pela amizade, pelos almoços e conversas na cozinha do anexo e

ajuda com a microscopia eletrônica de transmissão.

A todos os amigos, que me apoiaram e acreditaram, às vezes sem

compreender bem do que se tratava este trabalho ou a sua importância.

A Elizabeth, secretária do Programa, por todo o seu auxílio e amizade.

Ao Nilson, por compartilhar sua experiência com os iniciantes no laboratório

e.pelas conversas que amenizaram as atividades diárias.

Aos colegas do curso, pela colaboração e a todos que de alguma forma

contribuíram para a realização deste trabalho.

À CAPES, pelo auxílio financeiro.

Viva como se fosse morrer amanhã, aprenda

como se fosse viver para sempre.

Mahatma Ghandi

RESUMO

Potamogetonaceae (Alismatales) compreende cerca de três gêneros, dos quais

Potamogeton se destaca, com 80-100 espécies e distribuição quase cosmopolita.

Neste gênero, há controvérsias em relação à natureza da sua unidade floral,

interpretada como uma inflorescência reduzida ou como uma flor verdadeira. As

informações embriológicas de Potamogeton, na circunscrição atual da família, são

escassas, necessitando complementação. Dentre elas, sabe-se que.o pólen é

inaperturado e foi sugerido que neste tipo de pólen, não haveria restrição no formato

das tétrades de micrósporos, assim como em outros grupos de Monocotiledôneas. O

objetivo deste estudo foi investigar o desenvolvimento do androceu e gineceu em

três espécies de Potamogeton, procurando: relacionar a microsporogênese à

formação do grão de pólen inaperturado; esclarecer a natureza da unidade floral;

verificar se há padrões de iniciação dos órgãos florais, e complementar as lacunas

de informações embriológicas. Para tanto, foram coletadas inflorescências em

diversos estágios de desenvolvimento e as amostras destinadas à microscopia de

luz (ML) e microscopia eletrônica varredura (MEV) foram fixadas em glutaraldeído

1% e formaldeído 4%, em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,2. Para a ML, o

material foi incluído em hidroxietilmetacrilato, seccionado e corado segundo técnicas

usuais. Para a microscopia eletrônica de transmissão, anteras foram fixadas em

glutaraldeído 2,5% e paraformaldeído 2% em tampão fosfato de sódio 0,1M em pH

7,2, incluídas em resina epóxi, seccionadas e contrastadas. Amostras também foram

processadas para MEV segundo técnicas usuais. Na microsporogênese a citocinese

meiótica é sucessiva, com formação de placas celulares centrifugas e deposição de

calose adicional nestas, simultaneamente, resultando em tétrades de formatos

variados. Durante o desenvolvimento floral, as inflorescências das três espécies

apresentaram características semelhantes, diferindo em número de flores e formato

dos órgãos. A ordem de iniciação dos verticilos florais foi semelhante: tépalas

laterais, tépalas medianas, seguidas dos estames laterais, estames medianos e

finalmente, dos carpelos. Em P. illinoensis, a formação do carpelo ocorre de maneira

distinta das demais espécies. Os caracteres embriológicos mantiveram-se

constantes entre as espécies estudadas, ressaltando-se: a parede da antera do tipo

monocotiledôneo e os carpelos ascidiados, com apenas um óvulo campilótropo, que

origina um saco embrionário do tipo Polygonum. Os dados levantados indicam,

como provável motivo para a ausência de aberturas no pólen de Potamogeton, a

ausência de pontos específicos de término de deposição de calose adicional nas

placas celulares. A unidade reprodutiva de Potamogeton deve ser interpretada como

uma flor verdadeira, e foram levantados dois padrões de iniciação dos órgãos florais

no gênero, que não se relacionam a clados específicos. Como caracteres potenciais

para a taxonomia de Potamogeton foram identificados a forma do estigma e a

posição e forma da abertura carpelar. Informações inéditas e complementares

acerca da embriologia de Potamogeton foram fornecidas, contribuindo para um

melhor conhecimento da embriologia de Potamogetonaceae como um todo,

podendo auxiliar no esclarecimento de divergências ocasionadas pela utilização de

circunscrições antigas da família.

Palavras-chave: Desenvolvimento floral. Microsporogênese. Pólen. P. illinoensis. P.

polygonus. P. pusillus.

ABSTRACT

Potamogetonaceae (Alismatales) comprises about three genera, including

Potamogeton, a near cosmopolitan genus of about 80-100 species. The

understanding of its floral unit is quite controversial, being interpreted as a reduced

inflorescence or a true flower. In the current circumscription of Potamogetonaceae

there is scarce embryological information of Potamogeton and complementation of

data is needed. It is known that the pollen in this genus is inaperturate and it has

been suggested by some authors that in this type of pollen there is a release of

constraint on tetrad shape, as in other Monocotyledons. The aims of the present

study were to investigate the development of the androecium and the gynoecium in

three Potamogeton species in order to: understand the relationship between

microsporogenesis features and inaperturate pollen formation; elucidate the nature of

the floral unit; verify whether organ initiation patterns occur in the flower or not; and

complement the embryological data. Inflorescences at various developmental stages

were collected and fixed in 1% glutaraldehyde and 4% formaldehyde in 0.1 M sodium

phosphate buffer, pH 7.2. for both light (LM) and scanning electron microscopy

(SEM). The samples for LM were embedded in hydroxyethyl methacrylate, then

sectioned, stained and mounted according to standard procedures. Samples for SEM

were also processed according standard procedures. For TEM examination, anthers

were fixed in 2.5% glutaraldehyde and 2% paraformaldehyde in 0.1 M sodium

phosphate buffer, pH 7.2, then embedded in epoxy resin, sectioned and stained. At

microsporogenesis, cytokinesis is successive and the callosic cell wall formation was

achieved by centrifugal cell plates, with simultaneous deposition of additional callose.

The resulting tetrads were of various shapes. The inflorescences of the three species

studied were similar, varying only in flower number and shape of the floral organs.

The initiation order of floral organs was similar: lateral tepals, median tepals, followed

by lateral stamens, median stamens and carpels. The carpels of P. illinoensis

developed in a different way compared to the other species. The embryological

characters were constant among the three species and some of them are as follows:

anther wall of the monocotyledonous-type, and ascidiate carpels with a single

campylotropous ovule that develop a Polygonum type of embryo sac. The present

data indicate that the lack of specific points of additional callose deposition during

microsporogenesis is the probable reason to the lack of apertures in the

Potamogeton pollen. The floral unit of Potamogeton should be interpreted as a true

flower. Moreover, two patterns of floral organ initiation were pointed out, which are

not correlated to specific clades. The stigma shape, and both position and shape of

carpel opening were identified as potential characters to taxonomy. This study

presented some new and complementary information for the embryology of

Potamogeton. The data also contribute to a better understanding of the embryology

of Potamogetonaceae as a whole and shed light on conflicting information caused by

the use of old circumscription of the family.

Key words: Flower development. Microsporogenesis. Pollen. P. illinoensis. P.

polygonus. P. pusillus.

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO.....................................................................................................8

2. CAPÍTULO I - MICROSPOROGÊNESE EM Potamogeton

(POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES) E CONSIDERAÇÕES SOBRE A

AUSÊNCIA DE ABERTURAS NO PÓLEN...............................................................13

2.1. INTRODUÇÃO............................................................................................13

2.2. MATERIAL E MÉTODOS............................................................................15

2.3. RESULTADOS............................................................................................16

2.4. DISCUSSÃO...............................................................................................20

3. CAPÍTULO II - DESENVOLVIMENTO FLORAL E MORFOLOGIA DO

ANDROCEU E GINECEU EM TRÊS ESPÉCIES DE Potamogeton

(POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES)............................................................23

3.1. INTRODUÇÃO............................................................................................23

3.2. MATERIAL E MÉTODOS............................................................................25

3.3. RESULTADOS............................................................................................26

3.4. DISCUSSÃO...............................................................................................32

4. CAPÍTULO III - CONTRIBUIÇÃO À EMBRIOLOGIA DE Potamogeton

(POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES)............................................................36

4.1. INTRODUÇÃO............................................................................................36

4.2. MATERIAL E MÉTODOS............................................................................37

4.3. RESULTADOS............................................................................................38

4.3.1. Organogênese da antera, microsporogênese e microgametogênese .38

4.3.2. Organogênese do óvulo, megasporogênese e megagametogênese...43

4.4. DISCUSSÃO...............................................................................................46

5. CONCLUSÃO....................................................................................................49

REFERÊNCIAS.........................................................................................................51

DOCUMENTOS CONSULTADOS............................................................................57

1. INTRODUÇÃO

Potamogetonaceae Reichenbach está atualmente incluída em Alismatales,

ordem considerada basal dentre as Monocotiledôneas (APG II, 2003; CHASE,

2004). As Alismatales representam o maior grupo monofilético de angiospermas

aquáticas (LES; HAYNES, 1995), atualmente com 14 famílias (APG II, 2003;

CHASE, 2004): Alismataceae Vent., Aponogetonaceae J. Agardh, Araceae Juss.,

Butomaceae Mirb., Cymodoceaceae N. Taylor, Hydrocharitaceae Juss.,

Juncaginaceae Rich., Limnocharitaceae Takht. ex Cronquist, Posidoniaceae Hutch.,

Potamogetonaceae Rchb., Ruppiaceae Horan., Scheuchzeriaceae F. Rudolphi,

Tofieldiaceae Takht. e Zosteraceae Dumort.

Segundo Haynes e Holm-Nielsen (2003), Potamogetonaceae é

subcosmopolita, com a maioria das espécies distribuídas em regiões temperadas,

especialmente no Hemisfério Norte. Atualmente, compreende os gêneros

Groenlandia J. Gay, Stuckenia Börner e Potamogeton L., totalizando cerca de 100

espécies (HAYNES E HOLM-NIELSEN, 2003). Além desses três gêneros,

Zannichellia L. é também incluída na família segundo alguns autores, com suporte

molecular (LES; CLELAND; WAYCOT, 1997; APG II, 2003; LINDQVIST et al., 2006).

Groenlandia possui apenas uma espécie e distribuição restrita ao

Hemisfério Norte. Stuckenia, com distribuição quase cosmopolita e seis espécies,

era considerado até recentemente como subgênero Coleogeton de Potamogeton,

mas sua elevação à categoria genérica recebeu suporte morfológico (LES;

HAYNES, 1996) e molecular (LES; CLELAND; WAYCOT, 1997; LINDQVIST et al.,

2006). Potamogeton compreende cerca de 95 espécies, com distribuição quase

cosmopolita (HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003). Este gênero é considerado um dos

mais importantes no ambiente aquático, especialmente como alimento ou habitat

para animais aquáticos (HAYNES, 1974; RODRIGUES; IRGANG, 2001), ocorrendo

em águas tropicais à temperadas (WIEGLEB; KAPLAN, 1998).

Potamogeton é herbáceo, propagado por sementes, turions ou rizomas,

com caule cilíndrico ou comprimido (HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003); pode

apresentar folhas homófilas submersas ou heterófilas submersas e flutuantes

(RODRIGUES; IRGANG, 2001); suas inflorescências são espigas capitadas ou

cilíndricas ou ainda panículas de espigas, com 1-20 verticilos de flores, formados por

1-4 flores em cada (HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003); as flores são imersas ou

emersas, com quatro tépalas livres, quatro estames livres, um ou quatro carpelos

livres (HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003); os frutos são drupas abaxialmente

arredondadas ou quilhadas (HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003).

No tratamento da família feito por Haynes e Holm-Nielsen (2003) na Flora

Neotropica são citadas oito espécies para o Brasil, todas de Potamogeton.

Rodrigues e Irgang (2001), em seu tratamento sobre Potamogetonaceae no Rio

Grande do Sul, encontraram nove espécies de Potamogeton: P. illinoensis Morong,

P. pectinatus L., P. pusillus L., P. gayi A. Benn., P. polygonus Cham. e Schltdl, P.

spirilliformis Hagstr., P. ulei K. Schum., P. montevidensis A. Benn. e P. ferrugineus

Hagstr. Dentre estas, Potamogeton pectinatus atualmente encontra-se circunscrita

em Stuckenia (S. pectinata Börner) e P. ulei foi sinonimizada com P. polygonus

(HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003).

Devido à plasticidade fenotípica (geográfica e sazonal), hibridização,

poliploidia e aneuploidia, a delimitação de Potamogeton s.l. tem sido discutida

(HAYNES, 1974; KAPLAN, 2002; LINDQVIST et al., 2006), o que resultou em uma

classificação infragenérica complexa (LINDQVIST et al., 2006). Tradicionalmente, o

gênero foi dividido nos subgêneros Coleogeton (atualmente gênero Stuckenia) e

Potamogeton, dos quais, o segundo foi separado em dois grupos morfológicos: o

das espécies de folhas largas e o das espécies de folhas lineares (RAUNKIÆR,

1896). Diversas hipóteses tentam explicar o surgimento destes dois grupos no

subgênero Potamogeton, bem como a homofilia e heterofilia apresentada por grande

parte das espécies de folhas largas (HAGSTRÖM, 1916; LES, 1983; LES;

SHERIDAN, 1990).

Recentemente, análises filogenéticas moleculares têm corroborado, em

grande parte, a tradicional divisão do subgênero Potamogeton nos dois grupos

morfológicos, bem como a hipótese de que o seu ancestral era provavelmente

homófilo com folhas lineares (IIDA; KOSUGE; KADONO, 2004; LINDQVIST et al.,

2006; ZHANG et al., 2008). Desta forma, as espécies homófilas de folhas largas

teriam surgido uma única vez e a heterofilia diversas vezes por paralelismo (IIDA,

2004; LINDQVIST et al., 2006; ZHANG et al., 2008). Mas, apesar dos recentes

esforços, as relações inter e infragenérica ainda carecem de melhor resolução

(LINDQVIST et al., 2006).

Dentre as espécies que ocorrem no Brasil, foram selecionadas três

utilizando-se como critérios sua distribuição (endêmica da América do Sul,

cosmopolita e endêmica da América, respectivamente), tipo de inflorescência

(emersa ou imersa e apenas emersa), e inclusão em análises filogenéticas

moleculares (duas inclusas e outra não). Potamogeton polygonus, endêmica na

América do Sul, e P. pusillus, cosmopolita, apresentam inflorescências emersas ou

imersas (RODRIGUES; IRGANG, 2001), enquanto que P. illinoensis, encontrada em

todo o continente americano, emite suas inflorescências em ambiente aéreo

(RODRIGUES; IRGANG, 2001).

Em diversos grupos de angiospermas, inúmeros trabalhos associaram

caracteres florais a estudos filogenéticos para inferir a evolução dos mesmos. No

caso das monocotiledôneas basais, tais estudos morfológicos com enfoque evolutivo

têm se mostrado importantes inclusive na compreensão da evolução das

angiospermas em geral (ENDRESS, 2005). Para Potamogeton, o único estudo que

aborda a evolução desses caracteres foi o de Posluszny e Charlton (1993), baseado

apenas em estudos morfológicos clássicos, sem análise filogenética.

Os demais estudos sobre desenvolvimento e morfologia floral em

Potamogeton ficaram restritos às tentativas em esclarecer a natureza da unidade

floral e da inflorescência do gênero (SATTLER, 1965; SINGH, 1965; POSLUSZNY;

SATTLER, 1973, 1974; POSLUSZNY, 1981; POSLUSZNY; CHARLTON, 1986). Tais

estudos discutiram a hipótese de que a unidade floral seria o resultado da redução

de uma inflorescência composta por quatro flores pistiladas circundadas por quatro

flores estaminadas (KUNTH, 1841). Porém, enquanto alguns trabalhos sustentaram

a hipótese de inflorescência reduzida (MIKI, 1937; UHL, 1947; POSLUSZNY;

SATTLER, 1973), outros consideraram a unidade floral como uma flor simples

(SINGH, 1965; SATTLER, 1965; POSLUSZNY; SATTLER, 1974; POSLUSZNY;

CHARLTON, 1986).

Recentemente, têm-se demonstrado a relação entre o tipo de citocinese, o

tipo de tétrade de micrósporos que se forma ao final da microsporogênese, e a

determinação dos padrões de abertura no grão de pólen (FURNESS; RUDALL,

1999a; FURNESS; RUDALL; SAMPSON, 2002; PENET et al., 2005; NADOT et al.,

2006; SANNIER et al., 2006). Nadot et al. (2006), estudando diversas

monocotiledôneas, observaram que em espécies de Strelitzia (Strelitziaceae) que

também apresentam pólen inaperturado, ocorrem tipos variados de tétrades e estes

autores lançaram a hipótese de que para este tipo de pólen não há restrição do tipo

de tétrade.

Potamogeton possui pólen inaperturado (SORSA, 1988; FURNESS;

RUDALL, 1999b), caráter este que surgiu diversas vezes independentemente nas

Monocotiledôneas (FURNESS; RUDALL, 1999b), relacionando-se principalmente a

táxons hidrófilos (ZAVADA, 1983; FURNESS; RUDALL, 1999b) e a grupos com

polinização altamente especializada (ZAVADA, 1983).

A formação da parede do grão de pólen ocorre em três etapas: pré-meiótica,

durante o estágio de tétrade e na fase de micrósporos livres (HESLOP-HARRISON,

1971). Esta parede divide-se em intina, a camada interna, formada por

polissacarídeos, e exina, a camada externa, formada por esporopolenina (KNOX,

1984). Com base em caracteres morfológicos, a exina pode ser adicionalmente

dividida em nexinas 1 e 2, que são camadas mais internas sem ornamentação, e

sexinas 1, 2 e 3, que são camadas mais externas correspondentes à camada de

columelas, teto e elementos do teto, respectivamente (ERDTMAN, 1952, 1966).

Durante o estágio de tétrade, uma parede precursora da sexina é depositada entre o

protoplasto do micrósporo e a parede de calose, a primexina (FAHN, 1990).

Subsequentemente, precursores da esporopolenina são acumulados em locais

específicos da primexina, formando os principais componentes da sexina (HESLOP-

HARRISON, 1968).

As informações embriológicas para Potamogeton são fragmentadas

(HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003), muitas vezes levantadas de estudos muito

antigos (por exemplo WIEGAND, 1899; WIEGAND, 1900). Tal afirmação pode ser

verificada ao se consultar à bibliografia clássica de embriologia (JOHRI;

AMBEGAOKAR; SRIVASTAVA, 1992), em que os autores baseiam diversas

descrições em gêneros que foram reposicionados em outras famílias (por exemplo

Syringodium - Cymodoceaceae, Zostera - Zosteraceae e Ruppia - Ruppiaceae) e

fornecem poucas informações sobre Potamogeton.

Com base no exposto, este trabalho teve por objetivo esclarecer as

seguintes perguntas a partir das três espécies amostradas: 1) Há relação entre o

tipo de tétrade formada na microsporogênese e o pólen inaperturado? 2) A unidade

floral de Potamogeton representa uma inflorescência reduzida? 3) Há padrões na

iniciação dos órgãos florais no gênero? 4) Há uniformidade nos caracteres

embriológicos no gênero, independente do posicionamento em diferentes clados?

Para uma melhor compreensão dos assuntos abordados e clareza nas

discussões, este trabalho foi dividido em três capítulos: o primeiro tratando da

microsporogênese e sua relação com o pólen inaperturado; o segundo tratando do

desenvolvimento floral, e o terceiro da embriologia do gênero.

2. CAPÍTULO I - MICROSPOROGÊNESE EM Potamogeton

(POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES) E CONSIDERAÇÕES SOBRE A

AUSÊNCIA DE ABERTURAS NO PÓLEN

2.1. INTRODUÇÃO

A microsporogênese pode ser definida como o processo que resulta na

produção de quatro micrósporos haplóides a partir de um microsporócito diplóide,

através de meiose e citocinese (FURNESS; RUDALL; SAMPSON, 2002). Dois tipos

de citocinese são tradicionalmente caracterizados - sucessiva e simultânea. No

primeiro tipo, uma placa celular é formada imediatamente após a meiose I e outra é

formada em cada um dos micrósporos após a meiose II. Por outro lado, na

citocinese simultânea, as placas celulares que separam os micrósporos são

formadas apenas ao final da segunda divisão meiótica (MAHESHWARI, 1950). Nas

monocotiledôneas, a citocinese é predominantemente do tipo sucessiva (FURNESS;

RUDALL, 1999a; FURNESS; RUDALL; SAMPSON, 2002; RESSAYRE, 2001;

FURNESS; RUDALL; SAMPSON, 2002; PENET et al., 2005; NADOT et al., 2006)

através de placas celulares centrífugas (PENET et al., 2005; NADOT et al., 2006).

Caracteres como o tipo de citocinese e a formação das placas celulares têm

apresentado significado sistemático em alguns grupos de monocotiledôneas, como

Dioscoreales, Asparagales e Poales (FURNESS; RUDALL, 1999a). Além disso,

sabe-se que o tipo de citocinese influencia o tipo de tétrade que se forma ao final da

meiose e que estas características podem determinar os padrões de abertura no

grão de pólen (FURNESS; RUDALL, 1999a; FURNESS; RUDALL; SAMPSON, 2002;

PENET et al., 2005; NADOT et al., 2006; SANNIER et al., 2006).

As Angiospermas apresentam grande diversidade de padrões de abertura

polínica (WALKER; DOYLE, 1975), definidos pela forma, estrutura, número e

distribuição das aberturas (RESSAYRE et al., 2002). Nas Monocotiledôneas, o

padrão básico é o de uma única abertura distal, enquanto nas Eudicotiledôneas, o

padrão mais comum é o de três aberturas equatoriais (RESSAYRE et al., 2002).

Em Monocotiledôneas, não é rara a ocorrência de pólen do tipo

inaperturado, tendo surgido diversas vezes, independentemente, na história do

grupo (FURNESS; RUDALL, 1999b). A ausência de abertura é geralmente

acompanhada pela redução na espessura e complexidade da exina (ZAVADA,

1983), podendo ser apenas uma fina camada sem estruturação e ornamentação ou

estar ausente (PETTITT; JERMY, 1975; ZAVADA,1983; FURNESS; RUDALL,

1999b). São reconhecidos dois tipos de pólen inaperturado nas Monocotiledôneas:

omniaperturado (THANIKAIMONI, 1984), em que qualquer local da parede pode

funcionar como abertura para a germinação do tubo polínico; e funcionalmente

monoaperturado (FURNESS; RUDALL, 1999b), em que há uma região claramente

definida para o crescimento do tubo, marcada por um espessamento localizado da

intina.

Para explicar a ontogenia do padrão de abertura polínica, Ressayre et al.

(2002) propuseram que, para espécies de Angiospermas com seis ou menos

aberturas, o progresso na citocinese durante a microsporogênese define os locais

em que as aberturas irão se localizar nas tétrades de micrósporos. Em muitos casos,

a redução ou perda de aberturas no pólen e redução na espessura e complexidade

da exina ocorre em táxons hidrófilos (ZAVADA, 1983; FURNESS; RUDALL, 1999b)

ou em grupos com polinização altamente especializada (ZAVADA, 1983). Nestes

grupos, fatores ambientais que influenciem as relações hídricas do pólen são

reduzidos e reduções na exina podem ser esperadas (ZAVADA, 1983).

Nas Alismatales, o pólen inaperturado caracteriza Potamogetonaceae e as

demais famílias, particularmente aquáticas, onde está associado à hidrofilia

(FURNESS; RUDALL, 1999b). Em Potamogeton, o pólen é inaperturado (PETTITT;

JERMY, 1975; FURNESS; RUDALL, 1999b) e as espécies foram descritas como

anemófilas ou hidrófilas (polinização) e hidroautogâmicas (sistema em que a

polinização é mediada por uma bolha de ar sob a água) (PROCTOR; YEO, 1973;

PHILBRICK, 1988; GUO; COOK, 1989).

Dentre as espécies de Potamogeton ocorrentes no Brasil foram

selecionadas três: Potamogeton pusillus L., que apresenta inflorescências emersas

ou imersas (RODRIGUES; IRGANG, 2001) e polinização hidroautogâmica

(PHILBRICK; ANDERSON, 1987), Potamogeton illinoensis Morong, com

inflorescências exclusivamente emersas (RODRIGUES; IRGANG, 2001) e modo de

polinização desconhecido, e Potamogeton polygonus Cham. et Schltdl, com

inflorescências emersas ou imersas (RODRIGUES; IRGANG, 2001) e polinização

também desconhecida. O objetivo deste estudo foi investigar a microsporogênese, a

microgametogênese e a estrutura da parede do grão de pólen nessas três espécies

de Potamogeton, para entender a formação do pólen e contribuir para a biologia da

família em Alismatales.

2.2. MATERIAL E MÉTODOS

As amostras de cada espécie foram coletadas nos municípios de Iretama

(Potamogeton. pusillus L), General Carneiro e Palmas (P. polygonus Cham. et

Schltdl.), no Estado do Paraná, e Bonito (P. illinoensis Morong), no Estado do Mato

Grosso do Sul. O material testemunho encontra-se depositado no Herbário do

Departamento de Botânica da Universidade Federal do Paraná (UPCB), aguardando

número de registro.

Inflorescências em diversos estágios de desenvolvimento foram fixadas em

glutaraldeído 1% e formaldeído 4%, em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,2

(MCDOWELL; TRUMP, 1976), para processamento e análise em microscopia de luz

(ML) e eletrônica de varredura (MEV). O material destinado à microscopia de luz foi

incluído em hidroxietilmetacrilato (GERRITS; SMID, 1983) e seccionado com

espessura de 2-5 m. As secções foram coradas com Azul de Toluidina O 0,05% 0,1

M em tampão fosfato de sódio pH 6,8 (O´BRIEN; FEDER; MCCULLY, 1965).

Para a microscopia de epifluorescência, anteras fixadas foram selecionadas

e lavadas em tampão fosfato (cinco vezes de 15 minutos). Em seguida, cada antera

foi aberta sobre lâmina e coberta com uma gota de azul de anilina 0,05%. Após

cinco minutos, o excesso do reagente foi retirado e a antera foi coberta por uma gota

de gelatina glicerinada e lamínula. As lâminas foram deixadas em repouso, por uma

noite, em refrigerador. As análises foram realizadas no microscópio de fluorescência

Zeiss Axiophot.

Para a análise em microscopia eletrônica de varredura, as amostras foram

lavadas em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,2 e desidratadas em série etílica

até etanol 70%. As inflorescências foram dissecadas, desidratadas em série de

propanona e então submetidas a ponto crítico, no aparelho BAL-TEC CPD 030 e

metalizadas com ouro no equipamento SCD 030 Balzers Union FL 9496. As

observações foram realizadas em microscópio eletrônico de varredura Jeol JSM

6360LV.

O material destinado à microscopia eletrônica de transmissão (MET) foi

fixado sob vácuo em glutaraldeído 2,5% e paraformaldeído 2% em tampão fosfato

de sódio 0,1M em pH 7,2 por 12-24 horas (KARNOVSKY, 1965, com modificação).

Após a fixação, as amostras foram pós-fixadas em tetróxido de ósmio 0,2%,

infiltradas e incluídas em resina epóxi (SPURR, 1969). Foram obtidas secções ultra-

finas em ultramicrótomo Leica Ultracut. As análises das amostras e os registros

eletromicrográficos foram efetuados no microscópio eletrônico de transmissão JEOL

JEM-1200EXII.

2.3. RESULTADOS

Durante a microsporogênese em Potamogeton illinoensis, P. polygonus e P.

pusillus, a epiderme da antera é unisseriada, com células alongadas em corte

transversal, apresenta cutícula fina e armazena amido até a fase de micrósporos

livres (Fig. 1a). O endotécio apresenta células grandes, poliédricas e também

armazena amido na forma de grandes grânulos até a fase de micrósporos livres (Fig.

1a). As camadas médias, em número de dois ou três, são constituídas por células

alongadas e justapostas, que são obliteradas ao longo do processo (Fig. 1a). É

também durante a microsporogênese que as células do tapete tornam-se

binucleadas, perdem sua parede celular, e seus protoplastos migram para o interior

do lóculo, unindo-se em um sincício, característico do tapete plasmodial (Fig. 1a).

Em Potamogeton polygonus, os microsporócitos apresentam depósito

pequeno de calose em seus vértices (Fig. 1b), característica não observada nas

demais espécies. A citocinese meiótica é sucessiva (Fig. 1c-m). Após a meiose I,

uma parede delgada de calose é formada através de placas celulares centrífugas,

originando díades de micrósporos (Fig. 1c-e). Ao final da meiose II, são formadas

tétrades predominantemente tetragonais (regulares e irregulares) (Fig. 1f-g) e

decussadas (Fig. 1h), ocorrendo em menor proporção tétrades em “T” (Fig. 1i),

lineares (Fig. 1j) e em outras formas não definidas. Em Potamogeton pusillus, não foi

possível caracterizar a formação das paredes entre os micrósporos, nem foram

observadas díades de micrósporos, entretanto, os microsporócitos apresentaram um

anel de calose conspícuo (Fig. 1k). Nesta mesma espécie, as paredes de calose são

mais finas (Fig. 1k-n) e houve predomínio de tétrades decussadas (Fig. 1l) e

tetragonais (Fig. 1m), com ocorrência esporádica de tétrades de formas não

definidas (Fig. 1n).

A microgametogênese ocorre através de duas divisões mitóticas sucessivas

(Fig. 1o-p), resultando em grãos de pólen tricelulares. O grão de pólen é apolar,

esférico a oval, inaperturado, com exina reticulada (Figs 1q, 2a-b) e intina pécto-

celulósica. O padrão de reticulação da exina é diferente nas três espécies, sendo

compacto em P. illinoensis (Fig. 1q), aberto em P. pusillus (Fig. 2a) e intermediário

em P. polygonus (Fig. 2b). Em anteras que ainda não tinham sofrido deiscência,

eventualmente, foi observada uma estrutura semelhante a tubo polínico na

superfície do grão de pólen, com ruptura da exina. Tais estruturas podem ser

ramificadas e formar redes complexas que interconectam grãos de pólen (Fig. 2c),

não correspondendo a tubos polínicos verdadeiros, mas provavelmente a hifas de

fungos aquáticos.

A exina é formada pela sexina, de estrutura tectada (sexina 2) e columelada

(sexina 1) e com uma camada fina de nexina 1 (Fig. 2d-i). Em P. illinoensis a

densidade de elementos da sexina 1 é superior às das demais espécies (Fig. 2d-e);

P. pusillus, por sua vez, apresenta a menor densidade de sexina 1 (Fig. 2f-g) e P.

polygonus apresenta densidade intermediária (Fig. 2h-i). A intina não foi observada

em P. illinoensis, mas é relativamente espessa e apresenta estrutura fibrilar nas

demais espécies (Fig. 2g-i). A intina eventualmente parece mais espessa em uma

porção do grão de pólen (Fig. 2h-i).

FIGURA 1 - Microsporogênese, microgametogênese e morfologia do pólen em (a)

Antera em corte transversal com microsporócitos em fase pré-meiótica. (b) Microsporócitos com

depósitos de calose em seus vértices. (c) Primeira divisão meiótica, através de placas celulares

centrífugas. (d) Placa celular centrífuga em microsporócito com depósitos de calose nos vértices. (e)

Microsporócitos com placa celular centrífuga e sem depósitos de calose nos vértices. (f) Tétrade

tetragonal regular. (g) Tétrades tetragonais irregulares. (h) Tétrade decussada. (i) Tétrade em “T”. (j)

Tétrade linear. (k) Microsporócito com anel de calose. (l) Tétrade decussada. (m) Tétrade tetragonal.

(n) Tétrade em forma não definida. (o) Início da microgametogênese. (p) Grão de pólen em estágio

bicelular. (q) Grãos de pólen com exina reticulada.

cm. camadas médias; cg. célula generativa; ei. epiderme; ed. endotécio; MC.

microsporócito; nv. núcleo da célula vegetativa; tp. tapete. Barras de escala= 10 m.

Potamogeton.

P. polygonus P. illinoensis

P. pusillus

em a-d, f , i,o-p; em e, g, h,

j e q; em k-n.

2.4. DISCUSSÃO

Em Potamogeton polygonus e P. illinoensis aqui estudadas, a citocinese é

sucessiva com placas celulares centrífugas. Esta é a seqüência de desenvolvimento

mais difundida nas monocotiledôneas (FURNESS; RUDALL, 1999a; FURNESS;

RUDALL; SAMPSON, 2002; PENET et al., 2005; NADOT et al., 2006). Entretanto,

variações nesses padrões pré-estabelecidos têm sido observadas, como a co-

ocorrência de citocinese simultânea e sucessiva em microsporócitos de lóculos

diferentes de um mesmo estame (SANNIER et al., 2006), ocorrência de citocinese

intermediária - em que há formação de uma parede celular efêmera (FURNESS;

RUDALL; SAMPSON, 2002), formação da parede interespórica centripetamente

(PENET et al., 2005; NADOT et al., 2006), bem como a ocorrência de mais de um

tipo de tétrade de micrósporos (PETTITT, 1981; HARDY; STEVENSON, 2000;

HARDY; STEVENSON; KISS, 2000; RESSAYRE, 2001; PENET et al., 2005; NADOT

et al., 2006; SANNIER et al., 2006).

Em P. pusillus, não foram observadas díades de micrósporos, nem foi

possível caracterizar a formação das placas celulares, indicando que talvez a

citocinese pudesse ser simultânea. Além disso, foi observado um anel de calose no

microsporócito, e menor variabilidade no tipo de tétrades (tetragonal, decussado e

poucas formas não definidas), característica também observada em algumas

Iridaceae (PENET et al., 2005), e relacionadas à citocinese simultânea. Uma das

hipóteses para explicar tal fenômeno é que esta seria uma forma de restringir os

tipos de tétrades àqueles semelhantes aos da citocinese sucessiva, canalizando,

dessa forma, a morfologia do pólen (PENET et al., 2005).

A variação no tipo de tétrades de Potamogeton está sendo descrita pela

primeira vez neste trabalho, com tétrades: tetragonais, decussadas, lineares, em “T”

e em formas não definidas. Variabilidade semelhante relacionada à formação de

pólen inaperturado foi relatada em espécies de Strelitzia (Strelitziaceae) por Nadot et

al. (2006), e nossos dados corroboram a hipótese desses autores de que em

espécies com pólen inaperturado ocorre a liberação da restrição no tipo de tétrade

formada, uma vez que nenhuma abertura será formada.

Em Potamogeton, como aqui verificado, a microsporogênese é um processo

muito rápido, o que dificulta a visualização de todas as suas etapas. Entretanto, a

formação das paredes entre os micrósporos parece ser um processo único, no qual

tanto a formação das placas celulares quanto a deposição de calose adicional

nestas ocorre simultaneamente, não sendo, portanto, observados pontos específicos

em que a deposição de calose é completada. Se esta observação se confirmar em

outras espécies, seria uma possível explicação para a ausência de aberturas no

pólen de Potamogeton.

A irregularidade na espessura da intina eventualmente observada no pólen

de Potamogeton polygonus e P. pusillus permitiria classificá-lo em funcionalmente

monoaperturado, como proposto por Furness e Rudall (1999b), e observado por

Wodehouse (1935) e Cranwell (1953) em outras espécies do gênero. Porém, Pettitt

e Jermy (1975), ao estudar a ultraestrutura da parede polínica de P. natans e P.

pectinatus não relatam tal espessamento. Nas espécies aqui estudadas, acredita-se

que esta característica seja um artefato de processamento, que causa a

desestruturação da estrutura fibrilar da intina.

Ainda que tal espessamento seja legítimo, este parece ocorrer em uma

grande área da intina e não apenas em um determinado ponto, de modo que talvez

o tubo polínico tenha uma ampla área de germinação. Esta observação indica que o

pólen de Potamogeton não se enquadra em nenhum dos subtipos atuais -

funcionalmente monoaperturado e omniaperturado -, e reforça a afirmação de

Furness e Rudall (1999b), de que o pólen inaperturado parece representar mais de

um caráter. Outra hipótese a ser explorada em relação a esta característica é a

possibilidade de que o espessamento ocorra em algumas espécies e em outras não,

relacionando-se aos diferentes modos de polinização.

A causa, durante o desenvolvimento, para a ausência de aberturas no grão

de pólen permanece desconhecida, e as hipóteses levantadas sugerem que seria

devido à redução ou ausência de exina (ZAVADA, 1983; FURNESS; RUDALL,

1999b). Como a formação de aberturas pode relacionar-se a mecanismos que

interrompem a deposição da primexina (HESLOP-HARRISON, 1963; WATERKEYN;

BIENFAIT, 1970; ROWLEY, 1975), é provável que estes mecanismos estejam

ausentes na formação da parede dos grãos de pólen inaperturados. Além disso, o

fato de o pólen inaperturado ter surgido várias vezes independentemente nas

Monocotiledôneas (FURNESS; RUDALL, 1999b) indica que a maneira como ele é

formado pode ser diferente em cada grupo e talvez esta seja a dificuldade em se

discutir o caráter inaperturado.

Os dados aqui apresentados para Potamogeton polygonus, P. pusillus e P.

illinoensis, sustentam a hipótese de que em grãos de pólen inaperturados há uma

liberação na restrição ao tipo de tétrade. Além disso, os dados sugerem que a

ausência de aberturas no pólen de Potamogeton deve-se à deposição de calose

como um processo de apenas um passo nas paredes dos micrósporos durante a

microsporogênese, contribuindo para o conhecimento deste processo em

Potamogetonaceae e também para as demais Alismatales e monocotiledôneas.

3. CAPÍTULO II - DESENVOLVIMENTO FLORAL E MORFOLOGIA DO

ANDROCEU E GINECEU EM TRÊS ESPÉCIES DE Potamogeton

(POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES)

3.1. INTRODUÇÃO

Potamogetonaceae Reichenbach está atualmente incluída em Alismatales,

ordem considerada basal dentre as Monocotiledôneas e que agrega a maior parte

das angiospermas aquáticas (APG II, 2003). Dentre as sinapomorfias florais que

sustentam a ordem, destacam-se: anteras extrorsas, carpelos com canais

completamente não fusionados e estiletes separados (STEVENS, 2008).

Tradicionalmente, a família compreende dois gêneros: Groenlandia J. Gay.,

monotípico, e Potamogeton L., com 80-100 espécies (LINDQVIST et al., 2006). Mais

recentemente, a inclusão dos gêneros Stuckenia Börner - antes considerado

subgênero Coleogeton de Potamogeton - e Zannichellia L. tem recebido suporte

morfológico (LES; HAYNES, 1996) e molecular (LES; CLELAND; WAYCOTT, 1997;

APG II, 2003; LINDQVIST et al., 2006). Outros gêneros, tradicionalmente inclusos

em Zannichelliaceae também são citados como representantes de

Potamogetonaceae (por exemplo APG II, 2003; LES; CLELAND; WAYCOTT, 1997).

Segundo Endress (2005), estudos morfológicos nas monocotiledôneas

basais têm se mostrado importantes na compreensão da evolução das

angiospermas em geral. Para Potamogetonaceae, foram realizados diversos

estudos do desenvolvimento floral em espécies de Potamogeton na tentativa de

esclarecer a natureza da unidade floral e da inflorescência do gênero (SATTLER,

1965; SINGH, 1965; POSLUSZNY; SATTLER, 1973, 1974, 1986; POSLUSZNY,

1981). A discussão foi iniciada por Kunth (1841), que considerou a unidade floral de

Potamogeton como resultado da redução de uma inflorescência composta por

quatro flores pistiladas circundadas por quatro flores estaminadas. Esta

interpretação recebeu suporte de alguns autores que consideraram como

evidências: a natureza das tépalas (interpretadas como apêndices do conectivo), os

estames opostos às tépalas, a grande distância entre as tecas da antera e a origem

bi-primordial dos estames laterais em algumas espécies - cada estame é iniciado

como dois primórdios separados, que se fundem durante o desenvolvimento

(KUNTH, 1841; MIKI, 1937; UHL, 1947; SINGH, 1965; POSLUSZNY; SATTLER,

1973).

Por outro lado, outros autores interpretaram a unidade floral como uma flor

simples (SINGH, 1965; SATTLER, 1965; POSLUSZNY; SATTLER; 1974;

POSLUSZNY; CHARLTON, 1986), devido ao surgimento do perianto anterior ao do

androceu, ausência de modificações na vascularização floral e origem uni -

primordial dos estames nas espécies estudadas - cada estame é iniciado com um

único primórdio.

Em Potamogeton, o androceu é constituído por quatro estames sésseis,

opostos às tépalas e com anteras extrorsas (POSLUSZNY; SATTLER, 1974;

POSLUSZNY, 1981; SUN et al., 2000). O gineceu é formado por quatro (um ou dois

em algumas espécies) carpelos livres e ascidiados, irrigados por um feixe vascular

dorsal e um ventral, e apresentando um único óvulo por carpelo (HEGELMAIER,

1870; POSLUSZNY; SATTLER, 1974; POSLUSZNY, 1981; CHARLTON;

POSLUSZNY, 1991; SUN et al., 2000). Os óvulos foram descritos como anátropos

(POSLUSZNY; SATTLER, 1974; POSLUZNY, 1981), ortótropos (IGERSHEIM;

BUZGO; ENDRESS, 2001) ou orto-campilótropos (TAKASO; BOUMAN, 1984).

O objetivo deste estudo foi estudar o desenvolvimento floral e a morfologia do

androceu e gineceu em três espécies de Potamogeton, procurando levantar

características que possam auxiliar na definição da unidade floral no gênero e na

sua taxonomia. Dentre as espécies que ocorrem no Brasil, foram selecionadas três,

utilizando-se como critérios sua distribuição e inclusão ou não em análises

filogenéticas moleculares disponíveis: Potamogeton pusillus L. é cosmopolita, P.

illinoensis Morong é endêmica do continente americano e P. polygonus Cham. et

Schltdl. é endêmica da América do Sul . Destas, apenas P. pusillus e P. illinoensis

foram incluídas nas análises filogenéticas de Lindqvist et al. (2006).

3.2. MATERIAL E MÉTODOS

As amostras de cada espécie foram coletadas nos municípios de Iretama

(Potamogeton. pusillus L), General Carneiro e Palmas (P. polygonus Cham. et

Schltdl.), no Estado do Paraná, e Bonito (P. illinoensis Morong), no Estado do Mato

Grosso do Sul. O material testemunho encontra-se depositado no Herbário do

Departamento de Botânica da Universidade Federal do Paraná (UPCB), aguardando

número de registro.

Inflorescências em diversos estágios de desenvolvimento foram fixadas em

glutaraldeído 1% e formaldeído 4%, em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,2

(MCDOWELL; TRUMP, 1976), para processamento e análise em microscopia de luz

e eletrônica de varredura.

O material destinado à microscopia de luz (ML) foi incluído em

hidroxietilmetacrilato (GERRITS; SMID, 1983) e seccionado com espessura de 2-5

m. As secções foram coradas em Azul de Toluidina O 0,05% 0,1 M em tampão

fosfato de sódio pH 6,8 (O´BRIEN; FEDER; MCCULLY, 1965).

Para a análise em microscopia eletrônica de varredura (MEV), as amostras

foram lavadas em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,2 e desidratadas em série

etílica até etanol 70%. Em seguida, as inflorescências foram dissecadas sob

estereomicroscópio e desidratadas em série de propanona e então submetidas a

ponto crítico, no aparelho BAL-TEC CPD 030. As amostras foram montadas em

suporte metálico e metalizadas com ouro no equipamento SCD 030 Balzers Union

FL 9496. As observações foram realizadas em microscópio eletrônico de varredura

Jeol JSM 6360LV.

Para a determinação do número médio de flores por inflorescência de cada

espécie foram selecionadas cinco inflorescências de cada, das quais o número de

flores foi contado com auxílio de estereomicroscópio.

3.3. RESULTADOS

Será apresentada uma única descrição para as três espécies estudadas,

uma vez que, em linhas gerais, estas seguiram o mesmo padrão de

desenvolvimento floral. As diferenças existentes serão salientadas ao longo do texto.

Cada inflorescência, do tipo espiga, pode apresentar número variável de

flores, em média três em Potamogeton pusillus (Fig. 1a), sete em P. polygonus (Fig.

1b) e mais de 40 em P. illinoensis (Fig. 1c). As flores são sésseis e arranjadas

compactamente, não precedidas por estruturas similares a brácteas (Fig. 1a-d), com

exceção da flor proximal, que eventualmente apresenta um primórdio diminuto, com

não mais que três camadas de células (Fig. 1a, e – seta). O eixo da inflorescência e

as tépalas são preenchidos por aerênquima (Fig. 1d-e).

No eixo da inflorescência, os primórdios florais surgem de maneira acrópeta

e espiralada (Fig. 1f-h). No meristema floral, simultaneamente surgem os dois

primórdios de tépalas laterais, seguidos dos dois primórdios de tépalas medianas

(Fig. 1i-j). Apesar do atraso na iniciação das tépalas medianas, estas passam a

apresentar tamanho semelhante àquele das laterais ao longo do desenvolvimento

(Figs. 1k-l, 2a-c). Cada tépala é irrigada por um único feixe vascular (Fig. 2d) e se

abre na antese, expondo o androceu e gineceu (Fig. 2e).

A ordem de surgimento dos primórdios de estames segue a mesma ordem

das tépalas (Fig. 1i-j). Os estames surgem de primórdios individualizados, opostos

aos primórdios de tépalas (Fig. 1j-l), em dois verticilos. O verticilo externo é oposto

às tépalas laterais e, o interno oposto às tépalas medianas. Inicialmente, cada

estame uni-primordial apresenta formato alongado (Fig. 1j-k) e, posteriormente,

adquire formato bilobado (Figs 1k – seta, l, 2a).

No estágio seguinte, inicia-se a diferenciação dos microsporângios (Fig. 2a,

c). Cada estame apresenta um único feixe vascular, derivado daquele que irriga a

tépala (Fig. 2d – seta). Quando maduros, os estames possuem anteras bitecas e

tetrasporangiadas, que atingem seu tamanho final antes da completa formação dos

carpelos (Fig. 2f-g). Cada estame é adnato à tépala oposta, suas anteras são

extrorsas e as tecas unidas apenas pela região mediano-basal do conectivo (Fig.

2g).

Após a iniciação dos estames, o ápice floral torna-se quadrangular e, em

seguida, são iniciados os primórdios carpelares em cada vértice (Figs 1l, 2a). Os

primórdios são individualizados, circulares e alternados aos primórdios estaminais

(Fig. 2a-b). Um único óvulo é formado em cada carpelo, na parede ventral, antes da

delimitação do lóculo do ovário (Fig. 2b – seta). O carpelo é ascidiado, uma vez que

o primórdio surge como uma concavidade no meristema floral e com as margens

congenitamente fusionadas; sua parede cresce e forma a cavidade do lóculo, o

estilete curto e o estigma, sem fusão pós-genital (Fig. 2b-c, e-f, h). Após o

fechamento do carpelo, resta uma abertura em forma de fenda, mais apical em P.

pusillus e mais voltada para a porção ventral em P. polygonus (Fig. 2c, e-f, h-i).

Os carpelos maduros são livres, com estigma papiloso, que começa a

formar-se nas margens da fenda e estende-se dorsalmente (Fig. 2i-j). O tecido de

transmissão conecta a abertura em fenda do estilete ao lóculo do ovário e é pouco

diferenciado (Figs 2j, 3a). Um único feixe irriga o carpelo, bifurcando-se e originando

um ventral e outro dorsal (Fig. 2j – seta). O feixe ventral irriga o óvulo, enquanto que

o dorsal termina abaixo da região estigmática (Fig. 2 j).

As papilas estigmáticas apresentam conteúdo, mas não foi observada

secreção externamente ao estigma. O estigma apresenta formato diferente em cada

espécie: em P. pusillus apresenta uma superfície ampla, com a maior razão

largura/comprimento e abertura carpelar apical e localizada no centro de uma

depressão (Fig. 3b); em P. polygonus a área superficial tem razão

largura/comprimento intermediária, com o maior diâmetro no sentido dorso-ventral e

abertura carpelar ventral localizada no centro de uma depressão profunda (Fig. 3c).

Em ambas as espécies, os estigmas são fendidos (Fig. 3d). Em P. illinoensis, no

entanto, o estigma é estreito e alongado do ápice em direção à porção ventral do

carpelo, e seu desenvolvimento será detalhado a seguir.

O desenvolvimento carpelar de P. illinoensis é similar ao das outras

espécies até o momento em que o óvulo é iniciado. O fechamento do carpelo e a

formação do estigma ocorrem de maneira distinta. A parede ventral altera-se pouco

em forma e dimensão (Fig. 3e). Por outro lado, a parede dorsal, desenvolve-se

pronunciadamente, sobrepondo-se à ventral, sendo a responsável pelo formato final

do carpelo (Fig. 3e). Como resultado desta sobreposição, a maior parte da porção

ventral do carpelo é formada pela parede dorsal (Fig. 3e). Em MEV é possível

observar que uma abertura circular é delimitada nesta região (Fig. 3f-g – seta). Em

corte longitudinal do carpelo, esta abertura localiza-se logo acima da placenta (Fig.

3e).

A formação do estigma de P. illinoensis é iniciada no ápice do carpelo (Fig.

3f), com a diferenciação das células desta região em papilas. Tal diferenciação se

estende do ápice até a abertura, resultando em um estigma em forma de crista,

posicionado ventralmente e formado exclusivamente pela parede dorsal do carpelo

(Fig. 3g-h).

A flor das espécies de Potamogeton estudadas apresenta uma organização

simples, com filotaxia verticilada, perigônio e androceu dímeros e carpelos

tetrâmeros. Os carpelos são alternados aos estames, que por sua vez são opostos e

adnatos às tépalas (Fig. 3i). Não foi observada variação de número e posição no

perigônio ou androceu. Porém, os carpelos surgiram eventualmente opostos aos

estames e apresentaram alguma variação em número, especialmente em flores

distais na inflorescência. Em P. polygonus, apenas uma flor com cinco carpelos foi

observada e em P. pusillus, flores com três e cinco carpelos foram observadas com

baixa freqüência. Potamogeton illinoensis apresentou maior freqüência de variações

na ordem e no número dos carpelos, variando de um a cinco; por vezes uma mesma

inflorescência apresentou flores com um a quatro carpelos.

Os carpelos encontram-se próximos uns aos outros (Figs 2e, 3j), de modo

que seus estigmas podem tornar-se contíguos. Logo após a antese, os carpelos

divergem e tal contato é desfeito (Fig. 3c). Em P. illinoensis, devido à proximidade

dos carpelos (Fig. 3j) e a forma dos estigmas o contato entre os últimos é maior e se

dá na porção mais ventral de cada carpelo.

Foram observados grãos de pólen nos estigmas de flores em antese, com

tubos polínicos desenvolvidos, indicando a receptividade do estigma (Fig. 3k). A

deiscência das anteras é longitudinal e ocorre concomitante à receptividade dos

estigmas (Fig. 3c).

3.4. DISCUSSÃO

Nas inflorescências de Potamogeton illinoensis, P. polygonus e P. pusillus

aqui estudadas, a ordem de iniciação dos primórdios nas flores foi a mesma: tépalas

laterais simultaneamente, seguidas das tépalas medianas, estames laterais,

estames medianos e finalmente, quatro primórdios carpelares. Este padrão foi

também observado em Potamogeton richardsonii, P. zosteriformis e P. distinctus

(POSLUSZNY; SATTLER, 1974; POSLUSZNY, 1981; SUN et al., 2000). Segundo

Charlton e Posluszny (1991), em P. berchtoldi, P. compressus, P. epihydrus e P.

lucens, após o surgimento simultâneo dos primórdios laterais, a tépala adaxial surge

antes da abaxial, bem como o estame adaxial surge antes do abaxial. Esta variação

é resultante de atraso na iniciação dos órgãos abaxiais e também pode estar

relacionada à organização compacta das flores no eixo da inflorescência.

Em Potamogeton, apesar de os dados moleculares (LINDQVIST et al.,

2006) mostrarem que o gênero se divide em dois clados maiores, que correspondem

em grande parte às espécies de folhas lineares e às de folhas largas de Raunkiær

(1896), as relações dentro desses grupos ainda não estão bem resolvidas. Uma vez

que ambos os padrões de iniciação dos órgãos florais já descritos em Potamogeton

encontram-se distribuídos tanto no clado I como no II de Lindqvist et al. (2006), não

foi possível correlacionar nenhum dos padrões a quaisquer subgrupos dentro do

gênero, indicando que ambos são conservados . Porém, o número de espécies de

que se têm disponíveis dados de desenvolvimento floral é reduzido se comparado

ao número que compõe o gênero. Potamogeton polygonus e P. berchtoldii

(CHARLTON; POSLUSZNY, 1991), de que se têm disponíveis tais dados, não foram

incluídas em análises moleculares até o momento, o que dificulta uma comparação

mais acurada.

Em Groenlandia densa (L.) Fourr. (=Potamogeton densus, POSLUSZNY;

SATTLER, 1973) também foi observado o surgimento simultâneo dos primórdios de

tépalas laterais, bem como dos estames laterais, mas o padrão de iniciação difere

dos relatados para os demais representantes de Potamogetonaceae. Em

Groenlandia, o primeiro órgão a surgir é a tépala abaxial, seguida das duas laterais

e, finalmente da adaxial; os estames seguem a mesma ordem. Uma vez que G.

densa apresenta uma posição ancestral em relação à Potamogeton (LINDQVIST et

al., 2006), o surgimento simultâneo das tépalas laterais e dos estames laterais nos

dois gêneros é uma característica interessante e aparentemente conservada na

família. Isto também foi observado nas espécies do presente estudo e em P. crispus,

P. richardsonii, P. zosteriformis, P. berchtoldi, P. compressus, P. epihydrus, P.

lucens e P. distinctus (HEGELMAIER, 1870; POSLUSZNY; SATTLER, 1974;

POSLUSZNY, 1981; CHARLTON; POSLUSZNY, 1991; SUN et al., 2000). A ordem

diferente de iniciação dos órgãos florais em Potamogeton e Groenlandia fornece

suporte morfológico adicional à separação de ambos em gêneros diferentes.

Dentre os gêneros que podem ser incluídos em Potamogetonaceae,

destaca-se Zannichellia, que têm sido incluído na família principalmente com base

em análises moleculares (LES; CLELAND; WAYCOTT, 1997; APG II, 2003;

LINDQVIST et al., 2006), mas sua morfologia floral difere muito da apresentada por

Potamogeton e Groenlandia, de modo que os dados de desenvolvimento floral

disponíveis ainda são insuficientes para subsidiar comparações.

A interpretação da filotaxia floral de Potamogeton aqui descrita, com

perigônio e androceu formado por dois verticilos dímeros e gineceu formado um

verticilo tetrâmero implica na possibilidade de Potamogeton possuir primariamente

uma flor completa, hipótese aparentemente não levantada por autores anteriores

para este gênero. Dessa forma, cada verticilo surge alternadamente ao anterior. O

primeiro verticilo de tépalas corresponderia ao cálice dímero e alternado a este, o

segundo verticilo de tépalas corresponderia à corola dímera. Na seqüência,

alternado à corola, surge o verticilo de estames externos, e alternadamente a este,

surge o verticilo de estames internos. A adnação entre os estames e tépalas ocorre

pós-genitalmente. Interpretação semelhante foi dada por Chen et al. (2007) para o

merisma de Tetracentron sinense (Trochodendraceae), em que a flor apresenta

morfologia e ordem de iniciação dos verticilos semelhante à apresentada por

Potamogeton, entretanto estes autores não especularam a natureza das tépalas

naquela espécie.

A filotaxia floral observada no presente estudo favorece a interpretação da

unidade floral de Potamogeton como uma flor (SATTLER, 1965; POSLUSZNY;

SATTLER, 1973, 1974; CHARLTON; POSLUSZNY, 1991). Vale ressaltar como

outras características observadas também em favor desta hipótese: a origem uni-

primordial de todos os estames, a ausência de apêndices iniciados antes dos

carpelos (bractéolas) e a vascularização de tépalas e estames. Estes dados somam-

se aos de outros estudos de desenvolvimento floral que também levantaram fortes

evidências de que a unidade floral de Potamogeton é realmente uma flor. Por

exemplo, Singh (1965), em estudo realizado com oito espécies de Potamogeton,

observou que a vascularização floral é a de uma flor, com as tépalas recebendo um

único e exclusivo feixe, como um membro de perianto.

Em Groenlandia densa (POSLUSZNY; SATTLER, 1973) e P. zosteriformis

Fern. (POSLUSZNY, 1981) os estames laterais surgem como dois primórdios

independentes que se fundem rapidamente, originando um primórdio alongado como

nas demais espécies. Este fenômeno também foi relatado por Hegelmaier (1870) em

Potamogeton crispus, porém Posluszny e Sattler (1973) afirmaram que os estames

não eram claramente bi-primordiais nas imagens apresentadas por Hegelmaier

(1870). Posluszny e Sattler (1973) consideraram que os estames bi-primordiais

poderiam ser uma evidência para corroborar a hipótese de que o estame seria uma

flor estaminada reduzida. Entretanto, a vascularização de P. densus e P.

zosteriformis é semelhante àquela das demais espécies. E, nas demais espécies já

estudadas, todos os estames são iniciados como primórdios individualizados

(POSLUSZNY; SATTLER 1974; CHARLTON; POSLUSZNY, 1991; SUN et al.,

2000).

Potamogeton illinoensis apresenta características que o distinguem das

duas outras espécies estudadas, tais como maior número de inflorescências por flor,

maior freqüência de variação no número e posição dos carpelos, bem como

fechamento do carpelo e formação do estigma de maneira distinta. Vale ressaltar

que a forma como o carpelo se fecha, a posição da abertura carpelar e formação do

estigma não foram relatadas nas demais espécies de Potamogeton estudadas até o

presente. Estas características assemelham-se às apresentadas por Troll (1932)

para Thalictrum flavum (Ranunculaceae), mas em P. illinoensis, a posição da

abertura carpelar é tal que a distância da abertura até o óvulo é muito reduzida.

No presente estudo foi constatada uma contigüidade entre os estigmas de

cada carpelo na flor, que pode ocorrer com maior (P. illinoensis) ou menor

freqüência (P. pusillus e P. polygonus). Esta organização assemelha-se ao

compitum extragynoecial, definido por Endress (1980) como uma zona externa ao

carpelo onde os tubos polínicos podem cruzar de um carpelo ao outro. Esta

estrutura é relativamente comum nas Angiospermas basais (Amborellaceae,

Austrobaileyaceae, Schisandraceae, Illiciaceae e algumas Nympheaceae;

ENDRESS; IGERSHEIM, 2000) e se diferencia de maneiras variadas. Ainda que tal

continuidade entre os estigmas ocorra eventualmente em P. polygonus e P. pusillus,

a proximidade entre eles e a maior área estigmática, em comparação à P. illinoensis,

provavelmente favorecem a captura de um maior número de grãos de pólen,

refletindo estratégias diferentes de potencializar a polinização.

A partir dos resultados aqui apresentados para Potamogeton pusillus, P.

illinoensis e P. polygonus, foram identificados como caracteres potenciais para a

taxonomia de Potamogeton: a forma do estigma e a posição e forma da abertura

carpelar. Além disso, a posição da abertura carpelar e interação entre os estigmas

em Potamogeton illinoensis são dados inéditos para a família que podem auxiliar no

conhecimento e futuros estudos de biologia reprodutiva da espécie. Os resultados

também corroboram e aprofundam a hipótese de que a unidade floral de

Potamogeton é uma flor.

4. CAPÍTULO III - CONTRIBUIÇÃO À EMBRIOLOGIA DE Potamogeton

(POTAMOGETONACEAE, ALISMATALES)

4.1. INTRODUÇÃO

Alismatales é uma ordem de Monocotiledôneas que contem a maior parte

das angiospermas aquáticas (LES; HAYNES, 1995). É constituída por 14 famílias

(APG II, 2003; CHASE, 2004) e como sinapomorfias embriológicas destacam-se:

tapete do tipo plasmodial formado por células uninucleadas, endosperma do tipo

helobial e embrião grande e clorofilado (JUDD et al., 2008; STEVENS, 2008).

Dentre as Alismatales, destaca-se Potamogetonaceae Reinchenbach,

família subcosmopolita, constituída pelos gêneros Groenlandia J. Gay, Stuckenia

Börner e Potamogeton L., que juntos somam cerca de 100 espécies distribuídas

principalmente em regiões temperadas do Hemisfério Norte (HAYNES; HOLM-

NIELSEN, 2003). A família é tradicionalmente associada à Ruppiaceae Horan.,

Zannichelliaceae Dumort., e Zosteraceae Dumort. (HAYNES; HOLM-NIELSEN,

2003).

Potamogeton L. contém aproximadamente 95 espécies, das quais oito

(HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003) são citadas para o Brasil. São características

florais do gênero: flores emersas ou imersas com quatro tépalas, quatro estames e

um ou quatro carpelos (HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003).

Segundo a circunscrição de Potamogetonaceae adotada na compilação de

Johri, Ambegaokar e Srivastava (1992), foram descritas como características

embriológicas da família: parede da antera constituída por epiderme persistente e

com taninos, endotécio com ou sem espessamentos fibrosos e tapete

periplasmodial; a microsporogênese é sucessiva e resulta em tétrades lineares; os

grãos de pólen são inaperturados ou tricolpados, podendo ser filiformes,

aparentemente sem exina e dispersos com duas ou três células; o óvulo é anátropo,

ortótropo, campilótropo ou ainda orto-campilótropo, bitégmico e crassinucelado, e o

saco embrionário é do tipo Polygonum. No entanto, nesta circunscrição estavam

incluídos gêneros atualmente posicionados em Cymodoceaceae e Zosteraceae.

Haynes e Holm-Nielsen (2003) acrescentaram ainda que o tipo de formação da

parede da antera é aparentemente desconhecido.

Como caracteres embriológicos de Potamogeton, são citados: endotécio

com espessamentos fibrosos (JOHRI; AMBEGAOKAR; SRIVASTAVA, 1992);

células do tapete predominantemente uninucleadas (HAYNES; HOLM-NIELSEN,

2003); microsporogênese sucessiva, com tétrades geralmente isobilaterais

(HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003); pólen tricelular (HAYNES; HOLM-NIELSEN,

2003); primórdio ovular trizonado (TAKASO; BOUMAN, 1984); óvulo orto-

campilótropo (TAKASO; BOUMAN, 1984), ortótropo (DAVIS, 1966; IGERSHEIM;

BUZGO, 2001) ou anátropo (POSLUSZNY; SATTLER, 1974; POSLUZNY, 1981),

bitegumentados e crassinucelados (TAKASO; BOUMAN, 1984; JOHRI;

AMBEGAOKAR; SRIVASTAVA, 1992); megásporos arranjados em tétrades lineares

ou em “T” (JOHRI; AMBEGAOKAR; SRIVASTAVA, 1992); saco embrionário

Polygonum (TAKASO; BOUMAN, 1984); e endosperma do tipo helobial (JOHRI;

AMBEGAOKAR; SRIVASTAVA, 1992).

O presente estudo teve por objetivo acompanhar a organogênese da antera

e do óvulo, com ênfase na microsporogênese e microgametogênese e na

megasporogênese e megagametogênese de três espécies de Potamogeton

ocorrentes no Brasil: Potamogeton illinoensis, P. polygonus e P. pusillus. Espera-se,

com isso, contribuir para o conhecimento da embriologia do gênero e da família

como um todo.

4.2. MATERIAL E MÉTODOS

As amostras de cada espécie foram coletadas nos municípios de Iretama

(Potamogeton. pusillus L), General Carneiro e Palmas (P. polygonus Cham. et

Schltdl.), no Estado do Paraná, e Bonito (P. illinoensis Morong), no Estado do Mato

Grosso do Sul. O material testemunho encontra-se depositado no Herbário do

Departamento de Botânica da Universidade Federal do Paraná (UPCB), aguardando

número de registro.

Inflorescências em diversos estágios de desenvolvimento foram fixadas em

glutaraldeído 1% e formaldeído 4%, em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,2

(MCDOWELL; TRUMP, 1976), para processamento e análise em microscopia de luz

e eletrônica de varredura.

O material destinado à microscopia de luz (ML) foi incluído em

hidroxietilmetacrilato (GERRITS; SMID, 1983) e seccionado com espessura de 2-5

m. As secções foram coradas em Azul de Toluidina O 0,05% 0,1 M em tampão

fosfato de sódio pH 6,8 (O´BRIEN; FEDER; MCCULLY, 1965).

Foram realizados os seguintes testes histoquímicos em secções de anteras

maduras: reação com IKI, para amido (JOHANSEN, 1940); Coomassie Brilliant Blue

0,25% em ácido acético 7%, para detecção de proteínas totais (SOUTHWORTH,

1973); Vermelho de Rutênio, para detecção de ácidos pécticos (JENSEN, 1962);

Calcofluor White, sob fluorescência, para identificação de celulose (RUZIN, 1999);

Azul de Anilina, sob fluorescência, para identificação de calose. As observações em

microscópio de epifluorescência foram realizadas no equipamento Zeiss Axiophot,

com filtro Dapi (excitação em 365 nm, emissão em 420 nm).

Para os testes com Sudan III, para a identificação de lipídeos totais

(O´BRIEN; MCCULLY, 1981), e com Floroglucinol acidificado, para identificação de

lignina (JOHANSEN,1940), as anteras fixadas foram lavadas em tampão fosfato 0,1

M, pH 7,2 e maceradas entre lâmina e lamínula com o reagente.

4.3. RESULTADOS

4.3.1. Organogênese da antera, microsporogênese e microgametogênese

Em corte longitudinal da flor das espécies de Potamogeton estudadas,

observa-se que o primórdio de estame surge como uma pequena expansão de

células indiferenciadas, logo acima da tépala (Fig. 1a-b). A protoderme sofre

divisões anticlinais acompanhando o crescimento do órgão e suas células se

diferenciam, diretamente, na epiderme (Fig. 1b–e). O meristema fundamental origina

o tecido parenquimático do conectivo da antera e a células arquesporiais (Fig. 1b-d),

enquanto o procâmbio fica limitado a um grupo de células de citoplasma mais denso

na região central do primórdio e dará origem a um feixe vascular no conectivo (Fig.

1c).

A diferenciação do tecido do conectivo inicia nas células centrais, mais

próximas ao procâmbio, com a formação de vacúolos e o aumento em seu volume

(Fig. 1c). Neste mesmo estágio, ocorre a vacuolação das células medianas para a

formação dos septos que separam os microsporângios de cada teca (Fig. 1c-e). A

formação das camadas da parede de cada microsporângio inicia-se com a

diferenciação das células arquesporiais em camada esporogênica e camada parietal

primária (Fig. 1d-e). As células da camada parietal primária dividem-se

periclinalmente, originando duas camadas parietais secundárias (Fig. 1f-g); a

externa diferencia-se em endotécio, e a interna divide-se periclinalmente, originando

duas camadas (Fig. 1g), das quais a interna diferencia-se em tapete (Figs 1h, 2a) e

a externa divide-se novamente para formar duas a três camadas médias (Figs 1h,

2a). As células do tecido esporogênico, após alguns ciclos de divisões mitóticas,

diferenciam-se nos microsporócitos (Figs 1e-h, 2a).

Durante a meiose dos microsporócitos, as camadas médias, que

inicialmente, possuíam células alongadas e justapostas, são obliteradas (Fig. 2a-b).

O tapete é predominantemente uniestratificado, com células de formato irregular e

uninucleadas (Fig. 2a), podendo apresentar dois núcleos (P. polygonus). As células

do tapete desprendem-se umas das outras, adquirem forma amebóide e migram

para o interior do lóculo, caracterizando o tapete do tipo plasmodial (Fig. 2a-d). Em

P. illinoensis, algumas células do tapete sofrem divisões mitóticas adicionais,

formando até quatro camadas celulares em algumas regiões do tecido. Notou-se,

durante a meiose e também na fase de micrósporos livres, a presença de uma

matriz na periferia de cada microsporângio, derivada das células do tapete - o

periplasmódio - que desaparece antes da primeira divisão mitótica do micrósporo

(Fig. 2e).

No início da meiose, os microsporócitos assumem formato arredondado

(Fig. 2a). Dentre as fases da meiose dos microsporócitos, foram observadas prófase

I, anáfase I, telófase I e telófase II (Fig. 2b-d). A citocinese meiótica é sucessiva,

formando, inicialmente, díades com uma parede delgada de calose e após a meiose

II, tétrades predominantemente tetragonais e decussadas e, com menor freqüência

tétrades em “T”, lineares em formatos irregulares (Fig. 2c-e).

Durante a microgametogênese, o endotécio apresenta células grandes,

poliédricas, com espessamentos celulósicos em bandas nas paredes celulares (Fig.

2f). O início da microgametogênese é marcado pela formação de um grande vacúolo

no micrósporo, empurrando o núcleo em direção à parede (Fig. 2f-g). A primeira

divisão mitótica é desigual, originando uma célula generativa lenticular, periférica e

menor que a célula vegetativa, ambas separadas por suas paredes celulares (Fig.

2h). Em um estágio posterior, observa-se que a célula vegetativa engloba a

generativa e, finalmente, a célula generativa sofre divisão mitótica, resultando em

duas células espermáticas (Fig. 2i). O grão de pólen é apolar, esférico a oval,

inaperturado (Fig. 2i-j), com exina reticulada e intina pécto-celulósica. Antes da

deiscência, os microsporângios de cada teca coalescem, após a degeneração do

septo (Fig. 2j).

FIGURA 2 -

(a)

. (b) .

. (e)

. (f) Micrósporos livres. (g)

. (h) Grão de pólen imaturo bicelular. (i) G

. (j)

Barras de escala = 20 m em a; 30

Potamogeton.

m em j; 10 m nas

demais imagens.

m m m

Microsporogênese e microgametogênese em em a, f;

em e, g, j; nas demais imagens Antera antes da meiose apresentando as

camadas parietais já diferenciadas Microsporócitos em anáfase I, células do tapete uninucleadas

Telófase 1, díades de micrósporos separados por parede de calose fina (seta). Tétrades de

micrósporos em telófase II, tapete com células binucleadas migrando para interior do lóculo

Tétrades de micrósporos em intérfase, com perisplamódio derivado das células do tapete ao seu

redor Início da microgametogênese, núcleo do micrósporo foi deslocado

para junto da parede por um vacúolo grande rão de pólen

tricelular, com células espermáticas próximas ao núcleo da célula vegetativa Antera antes da

deiscência, septo entre os esporângios ausente e endotécio com espessamentos em banda cg.

célula generativa; cm. camada média; cv. célula vegetativa; ed. endotécio; ei. epiderme; esp. células

espermáticas; MC. microsporócito; nv. núcleo da célula vegetativa; pr. periplasmódio; td. tétrade

decussada; tp. tapete; tt. tétrade tetragonal.

P. iilinoensis P.

pusillus P. polygonus

4.3.2. Organogênese do óvulo, megasporogênese e megagametogênese

O gineceu é tetracarpelar, apocárpico e um único óvulo é iniciado na parede

ventral de cada carpelo (Fig. 3a). O óvulo se inicia como um primórdio trizonado, que

cresce inicialmente no sentido horizontal, preenchendo todo o lóculo (Fig. 3a-c). São

formados dois tegumentos, constituídos por duas camadas de células,

eventualmente três, especialmente na região próxima à calaza (Fig. 3b-d).

À medida que o óvulo se desenvolve, observa-se uma acentuação em sua

curvatura (Fig. 3c-f). Esta curvatura ocorre devido a um maior desenvolvimento da

porção superior do óvulo, bem como devido ao desenvolvimento do carpelo, que, à

medida que cresce, libera espaço na porção superior do lóculo, o que permite que o

óvulo se acomode (Fig. 3c-f). A micrópila é delimitada apenas pelo tegumento

interno, que sofre um espessamento nessa região (Fig. 3g). Em estágios posteriores

observou-se a proliferação do tecido na região mediana da parede ventral do

carpelo, na interface entre a parede e o funículo (Fig. 3h). Esta proliferação

pressiona a região funicular, acentuando a curvatura do óvulo. O óvulo maduro é

campilótropo, crassinucelado e bitegumentado (Fig. 3f-h).

O megasporócito diferencia-se após o início da divisão dos tegumentos e

apresenta um núcleo grande e conspícuo (Fig. 3c). A meiose I resulta em uma díade

de células. A meiose II ocorre normalmente na célula calazal, produzindo dois

megásporos (Fig. 4a). Na díade micropilar, a meiose II é interrompida antes de a

divisão ser completada (Fig. 4a), esta célula degenera-se rapidamente, seguida do

megásporo adjacente (Fig. 4b). O megásporo funcional é o calazal (Fig. 4b).

A megagametogênese constitui-se de três ciclos de divisões mitóticas

sucessivas, que resultam na formação de um saco embrionário do tipo Polygonum

(Fig. 4c-f), com sete células: duas sinérgides (Fig. 4f) e uma oosfera (Fig. 4g) no pólo

micropilar, três antípodas efêmeras no pólo calazal (Fig. 4g) e a célula central, com

dois núcleos polares, que se fundem antes da fertilização (Fig. 4f-g). Devido à

curvatura do óvulo, os núcleos e consequentemente as células do megagametófito

ficam em níveis diferentes, dificultando sua visualização.

Foram observados grãos de pólen germinando na região periférica do

estigma, mas não foi acompanhada a fertilização (Fig. 4i).

4.4. DISCUSSÃO

As características da formação da parede da antera nas espécies de

Potamogeton aqui estudadas permitem classificá-la como tipo monocotiledôneo, ou

seja, modelo em que a camada parietal secundária interna divide-se e origina a(s)

camada(s) média(s) e o tapete (DAVIS, 1966). Apesar de Haynes e Holm-Nielsen

(2003) afirmarem que o tipo de parede da antera é desconhecido em Potamogeton,

em 1899, Wiegand descreveu o desenvolvimento desta em P. foliosus, de maneira

distinta da apresentadas aqui: a partir de dois ciclos de divisão em apenas uma

célula hipodermal em cada microsporângio, a partir das quais se originariam, através

de divisões periclinais, três camadas: endotécio, uma camada média e tapete.

No presente estudo foi constatada a formação de espessamentos em

bandas, de origem pécto-celulósica, nas células do endotécio na fase de

micrósporos livres. Apesar da presença e forma dos espessamentos corroborarem

os dados disponíveis para Potamogeton (JOHRI; AMBEGAOKAR;

SRIVASTAVA,1992; HAYNES; HOLM-NIELSEN, 2003), sua natureza não havia sido

esclarecida até o momento.

Devido à perda das paredes celulares e à fusão dos protoplastos, o tapete

nas espécies de Potamogeton aqui estudadas foi classificado como plasmodial, em

concordância com Furness e Rudall (2001). Esse dado corrobora a afirmação de

que todas as Alismatales estudadas apresentam esse tipo de tapete, com exceção

de Tofieldia (Toelfidiaceae Takht.) (FURNESS; RUDALL, 1999a).

As células do tapete de P. polygonus aqui estudadas são binucleadas,

característica também relatada para P. natans por Haynes e Holm-Nielsen (2003).

Estes mesmos autores também afirmam que tapete com células uninucleadas é o

predominante em Potamogeton. Vale ressaltar que Stevens (2008) considera a

presença de células uninucleadas no tapete uma sinapomorfia de Alismatales.

A muito discutida curvatura do óvulo em Potamogeton, aqui foi interpretada

no presente estudo como campilótropa, tendo em vista que o saco embrionário é

curvado no óvulo maduro (CORNER, 1976) e que o tegumento externo desenvolve-

se de maneira semelhante nas regiões da rafe e da anti-rafe. Davis (1966) e

Igersheim, Buzgo e Endress (2001) interpretaram o óvulo de Potamogeton como

ortótropo, mas uma vez que neste tipo de óvulo o funículo, a calaza, o nucelo e a

micrópila encontram-se alinhados em uma reta, esta classificação não é adequada

(BOUMAN, 1984). Da mesma forma, a classificação do óvulo de Potamogeton em

anátropo (POSLUSZNY; SATTLER, 1974; POSLUZNY, 1981) não é consistente,

considerando que neste tipo de óvulo, a inversão de 180° do nucelo e conseqüente

curvatura do óvulo é ocasionada apenas pelo crescimento intercalar do funículo, não

afetando o saco embrionário e que o tegumento externo é menos desenvolvido na

região da rafe. Takaso e Bouman (1984) propuseram, para P. natans, classificar o

óvulo como orto-campilótropo, por considerá-lo inicialmente ortótropo e orientado

quase horizontalmente e somente após a megasporogênese curvar-se em direção à

base do carpelo, apesar de recomendar o uso facultativo do prefixo orto-. Nas três

espécies aqui estudadas, a curvatura inicia-se antes da meiose do megasporócito,

com um maior desenvolvimento da porção funicular e calazal.

Na megasporogênese das três espécies de Potamogeton aqui estudadas foi

constatada uma falha da célula micropilar da díade em se dividir, resultando em uma

tríade de megásporos, de modo que a observação de tétrades em “T” relatada por

Johri, Ambegaokar e Srivastava (1992) parece pouco provável. Fenômeno

semelhante também foi relatado em P. natans por Takaso e Bouman (1984) e em

Tofieldia glutinosa (Tofieldiaceae) (HOLLOWAY E FRIEDMAN, 2008), recentemente

posicionada próxima às Alismatales por análises filogenéticas moleculares (APG II,

2003; SOLTIS; GITZENDANNER; SOLTIS, 2007).

Dentre os dados aqui apresentados, os seguintes diferem das informações

fornecidas por Johri, Ambegaokar e Srivastava (1992) para Potamogetonaceae:

endotécio com espessamentos pécto-celulósicos; presença de tétrades

predominantemente tetragonais e decussadas ao final da microsporogênese; grãos

de pólen inaperturados, esféricos a ovais, com exina reticulada e dispersos com três

células; óvulo campilótropo. Tais diferenças se devem à utilização de uma

circunscrição antiga naquele trabalho e a informações embriológicas fragmentadas

para a família após as modificações na circunscrição desta propiciadas por análises

filogenéticas moleculares. Mas ainda não se tem informações sobre aspectos

embriológicos para os demais gêneros de Potamogetonaceae.

Os dados aqui apresentados foram uniformes para as três espécies de

Potamogeton estudadas, podendo-se concluir que os caracteres estudados são

conservados nestas espécies, independente de sua segregação em diferentes

clados nas análises filogenéticas moleculares de Lindqvist et al. (2006). Além disso,

uma descrição detalhada da formação da parede antera de Potamogeton é fornecida

pela primeira vez.

5. CONCLUSÃO

No capítulo I foi possível verificar que, em Potamogeton, a ocorrência de

tétrades de micrósporos em formatos variados após a microsporogênese, indicando

uma liberação na restrição do formato possivelmente relacionada à ausência de

aberturas no grão de pólen. Além disso, a formação das placas celulares e

deposição de calose adicional nestas ocorre simultaneamente, não deixando pontos

específicos de término de deposição de calose adicional, um provável motivo para a

ausência de aberturas no pólen de nos representantes deste gênero.

Eventualmente, foram observados pontos de espessamento na intina do

pólen das espécies de Potamogeton aqui estudadas, mas este fenômeno foi

interpretado como artefato de processamento, devido a sua baixa ocorrência. Para

verificar os possíveis locais em que o tubo polínico pode germinar em Potamogeton,

análises em MET de grãos de pólen germinados seriam muito úteis. Uma vez que

outras características também apresentam um papel importante no desenvolvimento

de aberturas e ainda se sabe pouco sobre a ausência de aberturas, e este caráter

surgiu diversas vezes na história das Angiospermas, estudos de desenvolvimento e

MET no grupo poderiam fornecer evidências importantes sobre este processo.

No capítulo II, verificou-se que a unidade floral de Potamogeton

corresponde mais provavelmente a uma flor, com filotaxia verticilada: perigônio

dímero, androceu dímero e gineceu tetrâmero. Ao se comparar a ordem de iniciação

dos órgãos florais das três espécies aqui estudadas, com os dados disponíveis na

bibliografia, foi possível distinguir dois padrões e concluir que o surgimento

simultâneo das tépalas laterais é conservado no gênero e em Groenlandia, porém

nenhum dos padrões pôde ser correlacionado a clados específicos dentro de

Potamogeton. Seria interessante estudar a ordem de iniciação dos órgãos florais em

espécies de Stuckenia (anteriormente subgênero Coleogeton de Potamogeton), para

verificar se existem diferenças que possam oferecer suporte morfológico à elevação

deste grupo à categoria de gênero, conforme proposto por alguns autores. Além

disso, a forma do estigma e a posição e forma da abertura carpelar foram

identificados como caracteres potenciais para a taxonomia do gênero.

No capítulo III, foram fornecidas informações inéditas sobre a embriologia

de Potamogeton, como parede da antera do tipo monocotiledôneo; espessamentos

do endotécio de natureza pécto-celulósica; presença de tétrades

predominantemente tetragonais e decussadas ao final da microsporogênese; óvulo

campilótropo; falha da célula micropilar da díade de megásporos em se dividir,

resultando em uma tríade. Estas informações foram uniformes para as três espécies

e contribuem para um melhor conhecimento da embriologia de Potamogetonaceae

como um todo e auxiliam no esclarecimento de divergências ocasionadas pela

utilização de circunscrições antigas da família. Contudo, dados sobre a embriologia

dos demais gêneros desta família permanecem incompletos ou desconhecidos.

REFERÊNCIAS

ANGIOSPERM PHYLOGENY GROUP. An update of the angiosperm phylogeny

group classification for the orders and families of flowering plants: APG II. Botanical

Journal of the Linnean Society, London, v. 141, p. 399-436, 2003.

BOUMAN, F. The ovule. In: JOHRI, B. M (Ed.). Embriology of Angiosperms.

Berlin: Springer-Verlag, 1984. p. 123-153.

CHARLTON, W. A.; POSLUSZNY, U. Meristic variation in Potamogeton flowers.

Botanical Journal of the Linnean Society, London, v. 106, p. 265-293, 1991.

CHASE, M. W. Monocot relationships: an overview. American Journal of Botany,

Saint Louis, v. 91, p. 1645–1655, 2004.

CHEN, L. et al. Floral organogenesis in Tetracentron sinense (Trochodendraceae)

and its systematic significance. Plant Systematics and Evolution, New York, v.

264, p. 183-193, 2007.

CORNER, E. J. H. The seeds of dicotyledons. London: Cambridge University

Press, 1976.

CRANWELL, L. M. New Zealand pollen studies: The monocotyledons. Bulletin of

the Auckland Institute and Museum, Auckland, v. 3, p. 1-91, 1953.

DAVIS, G. L. Systematic Embryology of the Angiosperms. New York: John Wiley

and Sons Inc., 1966.

ENDRESS, P. K. Ontogeny, function and evolution of extreme floral construction in

Monimiaceae. Plant Systematics and Evolution, New York, v. 134, p. 79-120,

1980.

ENDRESS, P. K.; IGERSHEIM, A. Gynoecium structure and evolution in basal

angiosperms. International Journal of Plant Sciences, Chicago, v. 161, p. 211-

223, 2000.

ENDRESS, P. K. Links between embryology and evolutionary floral morphology.

Current Science, Bangalore, v. 89, p. 749-754, 2005.

ERDTMAN, G. Pollen Morphology and Plant Taxonomy. Angiosperms. Stockholm:

Almqvist and Wiksell,1952.

ERDTMAN, G. Pollen morphology and plant taxonomy. Angiosperms. 2

ed. New

York: Hafner Publishing Company, 1966.

FAHN, A. Plant Anatomy. New York: Pergamon Press, 1990.

FURNESS, C. A.; RUDALL, P. J. Microsporogenesis in Monocotyledons. Annals of

Botany, Oxford, v. 84, p. 475-499, 1999a.

FURNESS, C.A.; RUDALL, P. J. Inaperturate pollen in Monocotyledons.

International Journal of Plant Sciences, Chicago, v. 160, p. 395-414, 1999b.

FURNESS, C. A; RUDALL, P. J. Pollen and anther characters in monocot

systematics. Grana, Stockholm, v. 40, p. 17-25, 2001.

FURNESS, C. A.; RUDALL, P. J.; SAMPSON, F. B. Evolution of microsporogenesis

in Angiosperms. International Journal of Plant Sciences, Chicago, v. 163, p. 235-

260, 2002.

GERRITS, P. O.; SMID, L. A new, less toxic polymerization system form the

embedding of soft tissues in glycol methacrylate and subsequent preparing of serial

sections. Journal of Microscopy, Oxford, v. 132, p. 81-85, 1983.

GUO, Y. H.; COOK, C. D. K. Pollination efficiency of Potamogeton-pectinatus L.

Aquatic Botany, Amsterdam, v. 34, p. 381-384, 1989.

HAGSTRÖM, J.O. Critical researches on the Potamogetons. Kungliga Svenska

Vetenskapsakademiens Handlingar, Stockholm, v. 55, p.1–281, 1916.

HARDY, C. R.; STEVENSON, D. W. Development of gametophytes, flower, and

floral vasculature in Cochliostema odoratissimum (Commelinaceae). Botanical

Journal of the Linnean Society, London, v. 134, p. 131-157, 2000.

HARDY, C. R.; STEVENSON, D. W.; KISS, H. G. Development of gametophytes,

flower, and floral vasculature in Dichorisandra thyrsiflora (Commelinaceae).

American Journal of Botany, Saint Louis, v. 87, p. 1228-1239, 2000.

HAYNES, R. R. A revision of North American Potamogeton subsection pusilli

(Potamogetonaceae). Rhodora, Cambridge, v. 76, p. 564-649, 1974.

HAYNES, R. R.; HOLM-NIELSEN, L. B. Potamogetonaceae. Flora Neotropica, New

York, n. 85, p. 1-52, 2003.

HEGELMAIER, F. Über die Entwicklung der Blüthentheile von Potamogeton.

Botanische Zeitung, Berlin, v. 28, p. 283-320, 1870.

HESLOP-HARRISON, J. An ultraestrutural study of pollen wall ontogeny in Silene

pendula. Grana Palynologica, Stockholm, v. 4, p. 7-24, 1963.

HESLOP-HARRISON, J. The pollen grain wall. Science, Washington, v. 161, p. 230-

237, 1968.

HESLOP-HARRISON, J. The pollen wall: structure and development. In: HESLOP-

HARRISON, J (Ed.). Pollen: development and physiology. London: Butterworths,

1971.

HOLLOWAY, S. J.; FRIEDMAN, W. E. Embryological features of Tofieldia glutinosa

and their bearing on the early diversification of monocotyledonous plants. Annals of

Botany, Oxford, v. 102, p. 167-182, 2008.

IGERSHEIM, A.; BUZGO, M.; ENDRESS, P. K. Gynoecium diversity and systematics

in basal monocots. Botanical Journal of the Linnean Society, London, v. 136, p.1-

65, 2001.

IIDA, S.; KOSUGE, K.; KADONO, Y. Molecular phylogeny of Japanese Potamogeton

species in light of noncoding chloroplast sequences. Aquatic Botany, Amsterdam, v.

80, p. 115-127, 2004.

JENSEN, W. A. Botanical histochemistry: principles and practice. San Francisco:

W.H. Freeman and Company, 1962.

JOHANSEN, D. A. Plant microtechnique. 2nd edn. New York: McGraw-Hill, 1940.

JOHRI, B. M. AMBEGAOKAR, K. B.; SRIVASTAVA, P. S. Comparative

embryology of angiosperms. Berlin: Springer-Verlag, 1992.

JUDD, W. S. et al. Plant Systematics. A phylogenetic approach. 3

ed. Sunderland:

Sinauer Associates, 2008.

KAPLAN, Z. Phenotypic plasticity in Potamogeton (Potamogetonaceae). Folia

Geobotanica, Praha, v.37, p.141-170, 2002.

KARNOVSKY, M. J. A formaldehyde-glutaraldehyde fixative of high osmolality for

use in electron microscopy. Journal of Cell Biology, New York, v. 27, p. 137A-

138A, 1965.

KNOX, R. B. The pollen grain. In: JOHRI, B. M. Embriology of angiosperms. Berlin:

Springer-Verlag, 1984. p. 197-261.

KUNTH, C. S. Enumeratio plantarum. Sttutgart: J. G. Cotta, 1841. v. 3.

LES, D. H.. Taxonomic implications of aneuploidy and polyploidy in Potamogeton

(Potamogetonaceae). Rhodora, Cambridge, v. 85, p. 301-323, 1983.

LES, D. H.; SHERIDAN, D. J. Hagström’s concept of phylogenetic relationships in

Potamogeton L. (Potamogetonaceae). Taxon, Utrecht, v. 39, p. 41-58, 1990.

LES, D. H.; HAYNES, R. R. Systematics of subclass Alismatidae.A synthesis of

approaches. In: Monocotyledons: Systematics and Evolution, 1993, Kew.

Proceedings of the Monocotyledons: Systematics and Evolution ,Kew: Royal

Botanic Gardens, 1995. p. 353-377.

LES, D. H; HAYNES, R. R. Coleogeton (Potamogetonaceae), a new genus of

pondweeds. Novon, Saint Louis, v. 6, p. 389-391, 1996.

LES, D. H; CLELAND, M. A; WAYCOTT, M. Phylogentic studies in Alismatidae, II:

evolution of marine angiosperms (seagrasses) and hydrophily. Systematic Botany,

Kent, v. 22, p. 443-463, 1997.

LINDQVIST, C. et al. Molecular phylogenetics of an aquatic plant lineage,

Potamogetonaceae. Cladistics, Westport, v. 22, p. 568-588, 2006.

MAHESHWARI, P. An Introduction to the Embryology of Angiosperms. New

York: McGraw-Hill, 1950.

MCDOWELL, E. M.; TRUMP, B. Histological fixatives for diagnostic light and eletron

microscopy. Archives of Pathology e Laboratory Medicine, Chicago, v. 100,

p.405-414, 1976.

MIKI, S. The origin of Najas and Potamogeton. Botanical Magazine, London, v. 51,

p. 472-480, 1937.

NADOT, S. et al. Links between early pollen development and aperture pattern in

monocots. Protoplasma, New York, v. 228, p. 55-64, 2006.

O’BRIEN, T. P.; FEDER, N.; MCCULLY, M. E. Polychromatic staining of plant cell

walls by toluidine blue O. Protoplasma, New York, v. 59, p. 368-373, 1965.

O´BRIEN, T. P.; MCCULLY, M. E. The study of plant structure: principles and

selected methods. Melbourne: Thermacarphi Pty, 1981.

PENET, L. et al. Multiple developmental pathways leading to a single morph:

monosulcate pollen (examples from the Asparagales). Annals of Botany, Oxford, v.

95, p. 331–343, 2005.

PETTITT, J. M.; JERMY, A. C.. Pollen in hydrophilous angiosperms. Micron, New

York, v. 5, p. 377-405, 1975.

PETTITT, J. M. Reproduction in seagrasses: pollen development in Thalassia

hemprichii, Halophila stipulaceae and Thalassodendron ciliatum. Annals of Botany,

Oxford, v. 48, p. 609-622, 1981.

PHILBRICK, C. T.; ANDERSON, G. J. Implications of pollen/ovule ratios and pollen

size for the reproductive biology of Potamogeton and autogamy in aquatic

angiosperms. Systematic Botany, Kent, v. 12, p. 98-105, 1987.

PHILBRICK, C. T. Evolution of underwater outcrossing from aerial pollination

systems: a hypotesis. Annals of the Missouri Botanical Garden, Saint Louis, v. 75,

p. 836-841, 1988.

POSLUSZNY, U.; SATTLER, R. Floral development of Potamogeton densus.

Canadian Journal of Botany. Ottawa, v. 51, p. 647-656, 1973.

POSLUSZNY, U.; SATTLER, R. Floral development of Potamogeton richardsonii.

American Journal of Botany, Saint Louis, v. 61, p. 209-216, 1974.

POSLUSZNY, U. Unicarpellate floral development in Potamogeton zosteriformis.

Canadian Journal of Botany, Ottawa, v. 59, p. 495-504, 1981.

POSLUSZNY, U.; CHARLTON, W. A. Inflorescence in the Helobiae (Alismatidae) -

convergences and divergences. American Journal of Botany, Saint Louis, v. 73, p.

617, 1986.

POSLUSZNY, U.; CHARLTON, W. A. Evolution of the helobial flower. Aquatic

Botany, Amsterdam, v. 44, p. 303-324, 1993.

PROCTOR, M.; YEO, P. The pollination of flowers. London: Collins, 1973.

RAUNKIÆR, C. De Danske Blomsterplanters Naturhistorie I. Helobieae.

København: Gyldendalske Boghandels Forlag, 1896.

RESSAYRE, A. Equatorial aperture pattern in monocots: same definition rules as in

eudicots? The example of two species of Pontederiaceae. International Journal of

Plant Sciences, Chicago, v. 162, p. 1219–1224, 2001.

RESSAYRE, A. et al.. Aperture pattern ontogeny in angiosperms. Journal of

Experimental Zoology (Molecular and Developmental Evolution), New York, v.

294, p.122-135, 2002.

RODRIGUES, R. S.; IRGANG, B. E. Potamogetonaceae Dumort., no Rio Grande do

Sul, Brasil. Iheringia série Botânica, Porto Alegre, v. 56, p. 3-49, 2001.

ROWLEY, J.R. Germinal aperture formation in pollen. Taxon, Utrecht, v. 24, p. 17-

25, 1975.

RUZIN, S. E. Plant microtechnique and microscopy. Oxford: Oxford University

Press, 1999.

SANNIER, J. et al. Variations in the microsporogenesis of monosulcate palm pollen.

Botanical Journal of the Linnean Society, London, v. 151, p. 93-102, 2006.

SATTLER, R. Perianth development of Potamogeton richardsonii. American Journal

of Botany. Saint Louis, v. 52, p. 35-41, 1965.

SINGH, V. Morphological and anatomical studies in Helobiae II: vascular anatomy of

the flower of Potamogetonaceae. Botanical Gazette, Chicago, v. 126, p. 137-144,

1965.

SOLTIS, D. E.; GITZENDANNER, M. A.; SOLTIS, P. S. A 567-taxon data set for

angiosperms: the challenges posed by Baysian analyses of large data sets.

International Journal of Plant Sciences, Chicago, v. 168, p. 137-157, 2007.

SORSA, P. Pollen Morphology of Potamogeton and Groenlandia

(Potamogetonaceae) and its taxonomic significance. Annales Botanici Fennici,

Helsinki, v. 25, p. 179-199,1988.

SOUTHWORTH, D. Cytochemical reactivity of pollen walls. Journal of

Histochemistry and Cytochemistry, Baltimore, v. 21, p. 73-80, 1973.

SPURR, A. R. A low-viscosity epoxy resin embedding medium for electron

microscopy. Journal of Ultrastructural Research, New York, v. 26, p. 31-43, 1969.

STEVENS, P. F. Angiosperm phylogeny website. Disponível em:

<http://www.mobot.org/MOBOT /research/APweb/welcome.html>. Acesso

em:15/10/2008.

SUN, K. et al., Floral organogenesis of Potamogeton distinctus A. Benn.

(Potamogetonaceae). Acta Phytotaxonomica Sinica, Peiping, v. 38, p. 528-531,

2000.

TAKASO, T.; BOUMAN, F. Ovule ontogeny and seed development in Potamogeton

natans L. (Potamogetonaceae) with a note on the campylotropous ovule. Acta

Botanica Neerlandica, Amsterdam v. 33, p. 519-533, 1984.

THANIKAIMONI, G. Omniaperturate Euphorbiaceae pollen with striate spines.

Bulletin du Jardin Botanique National de Belgique, Meise, v. 54, p. 305-325,

1984.

TROLL, W. Morphologie der schildformigen Blätter. Planta, [S. l]v. 17, p. 153-314,

1932.

UHL, N. W. Studies in the floral morphology and anatomy of certain members

of the Helobiae. Não paginado. Tese (Doutorado em Botânica), - Cornell University,

Ithaca, 1947.

WALKER, J. W.; DOYLE, J. A. The bases of Angiosperm phylogeny, palinology.

Annals of the Missouri Botanical Garden, Saint Louis, v. 62, p. 664-723, 1975.

WATERKEYN, L.; BIENFAIT, A. On the possible function of the callosic special wall

in Ipomea purpurea (L.) Roth. Grana, Stockholm, v. 10, p. 13-20, 1970.

WIEGAND, K. M. The development of the microsporangium and microspores in

Convallaria and Potamogeton. Botanical Gazette, Chicago, v. 28, p. 328-368, 1899.

WIEGAND K. M. The development of the embryo-sac in some monocotyledonous

plants. Botanical Gazzete, Chicago, v. 30, p. 25-47, 1900.

WIEGLEB, G.; KAPLAN, Z. An account of the species of Potamogeton L.

(Potamogetonaceae). Folia Geobotanica, Praha, v. 33,p. 241-316, 1998.

WODEHOUSE, R. P. Pollen grains. Their structure, identification and significance in

science and medicine. New York: McGraw-Hill, 1935.

ZAVADA, M. Comparative morphology of monocot pollen and evolutionary trends of

apertures and wall structure. The Botanical Review, New York, v. 49, p. 331-

379,1983.

ZHANG, T. et al. Analysis of phylogenetic relationships of Potamogeton species in

China based on chloroplast trnT-trnF sequences. Aquatic Botany, Amsterdam. v.

89, p. 34-42, 2008.

DOCUMENTOS CONSULTADOS

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ (UFPR). Sistema de Bibliotecas. Citações

e notas de rodapé. In: Normas para apresentação de documentos científicos. 2.

ed. Curitiba: Editora UFPR, 2007.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ (UFPR). Sistema de Bibliotecas. Redação

e editoração. In: Normas para apresentação de documentos científicos. 2. ed.

Curitiba: Editora UFPR, 2007.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ (UFPR). Sistema de Bibliotecas.

Referências. In: Normas para apresentação de documentos científicos. 2. ed.

Curitiba: Editora UFPR, 2007.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ (UFPR) Sistema de Bibliotecas. Teses,

dissertações, monografias e trabalhos acadêmicos. In: Normas para apresentação

de documentos científicos. 2. ed. Curitiba: Editora UFPR, 2007.

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