Nesse estudo, foi utilizado o detector por arranjo de diodos (DAD), o qual é o segundo
tipo de detector espectrofotométrico mais comum. De modo simplificado, um arranjo de
diodos consiste em uma série de detectores fotodiodo posicionado lado a lado em um cristal
de silício, de modo que cada comprimento de onda, difratado pela grade, atinge um ponto
desse arranjo, e conseqüentemente um detector. Deste modo, a radiação que atravessa a
amostra é integral e, instantaneamente, analisada determinando-se, portanto, a absorvância em
todos os comprimentos de onda, de modo simultâneo (ATVARS; MARTELLI, 1996).
Um fator importante é que os detectores por arranjo de diodos têm sensibilidades
diferentes, aos diversos comprimentos de onda, de modo que é necessário que se especifique a
região de trabalho do espectro. Além disso, a qualidade do instrumento, em termos de sua
resolução espectral, depende do tipo e do número de diodos que compõe o arranjo (ATVARS;
MARTELLI, 1996).
Esse detector associado à CLAE permite a leitura de uma mesma amostra, em vários
comprimentos de onda, simultaneamente, com prévia separação cromatográfica dos analitos.
Os componentes de uma mistura podem ser identificados pelo espectro de absorção, quando
se analisa padrão puro, nas mesmas condições cromatográficas otimizadas, associado ao
tempo de retenção e à pureza dos picos, o que fornece confiança nos resultados analíticos.
As condições cromatográficas inicialmente testadas foram: coluna C18 com
comprimento de 150 mm, fase móvel constituída de tampão fosfato pH 6,0: acetonitrila
(77,25: 22,75v/v) na vazão de 1 mL min
-1
, na tentativa de reproduzir o estudo realizado por
Larson; Khazaeli; Dilon (2003). Esses autores publicaram um método para determinação
simultânea de cinco antineoplásicos: 5-FU, IFO, CF, DOX e PAC por CLAE-UV, nas
seguintes condições: comprimento de onda de 195 nm, coluna C18 (150 x 4,6 mm, 3,5
µ
m) e
fase móvel constituída de tampão fosfato pH 6,0: acetonitrila (77,25: 22,75, v/v), para a
eluição da 5-FU, IFO, CF e DOX e, reversão da fase (22,75: 77,25, v/v), para a eluição do
PAC. De acordo com os autores, por esse último analito ser extremamente apolar, a fase
móvel deveria conter maior proporção de solventes orgânicos apolares. Os tempos de retenção
foram: 2,89 minutos para a 5-FU, 8,64 minutos para a IFO, 9,70 minutos para a CF, 17,50
minutos para a DOX e 39,47 minutos para o PAC. Ressalta-se que esses autores não
avaliaram o MTX.
No presente estudo, nas condições semelhantes às de Larson; Khazaeli; Dilon (2003),
com a coluna cromatográfica de comprimento de 150 mm, não foi possível separar o MTX e a