( PDF ) Densidade populacional de aedes aegypti (diptera: culicidae) e taxa de infecção por vírus dengue em São Luís, Maranhão

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO

PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE MATERNO-INFANTIL

MESTRADO ACADÊMICO

JULIANA MARIA TRINDADE BEZERRA

DENSIDADE POPULACIONAL DE Aedes aegypti (DIPTERA: CULICIDAE) E

TAXA DE INFECÇÃO POR VÍRUS DENGUE EM SÃO LUÍS, MARANHÃO

São Luís, 2010

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JULIANA MARIA TRINDADE BEZERRA

DENSIDADE POPULACIONAL DE Aedes aegypti (DIPTERA: CULICIDAE) E

TAXA DE INFECÇÃO POR VÍRUS DENGUE EM SÃO LUÍS, MARANHÃO

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Saúde Materno-Infantil da

Universidade Federal do Maranhão para

obtenção do Título de Mestre em Saúde

Materno-Infantil.

Orientadora: Dra. Valéria Cristina Soares

Pinheiro

Co-orientador: Prof. Dr. Wanderli Pedro Tadei

São Luís, 2010

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Bezerra, Juliana Maria Trindade.

Densidade populacional de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) e taxa

de infecção por vírus dengue em São Luís, Maranhão / Juliana Maria

Trindade Bezerra. – São Luís, 2010.

97 f.

Impresso por computador (fotocópia).

Orientadora: Valéria Cristina Soares Pinheiro.

Co-orientador: Wanderli Pedro Tadei.

Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Maranhão.

Programa de Pós-Graduação em Saúde Materno-Infantil, 2010.

1. Aedes aegypti – Variáveis climáticas – São Luís – MA. 2. Dengue. 3.

Vírus. I. Título.

CDU 578.42 (812.1)

JULIANA MARIA TRINDADE BEZERRA

DENSIDADE POPULACIONAL DE Aedes aegypti (DIPTERA: CULICIDAE) E

TAXA DE INFECÇÃO POR VÍRUS DENGUE EM SÃO LUÍS, MARANHÃO

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Saúde Materno-Infantil da

Universidade Federal do Maranhão para

obtenção do Título de Mestre em Saúde

Materno-Infantil.

Aprovada em: ____ / ____ / ____

BANCA EXAMINADORA

______________________________________________________________

Profa. Dra. Valéria Cristina Soares Pinheiro (Orientadora)

Universidade Estadual do Maranhão – UEMA

______________________________________________________________

Profa. Dra. Ana Cecília Ribeiro Cruz

Universidade Estadual do Pará – UEPA

______________________________________________________________

Prof. Dr. Elmary da Costa Fraga

Universidade Estadual do Maranhão – UEMA

______________________________________________________________

Profa. Dra. Emygdia Rosa do Rego Barros Pires Leal Mesquita

Universidade Federal do Maranhão – UFMA

Aos meus maiores incentivadores,

meus pais José e Lucimar.

AGRADECIMENTOS

A realização desta pesquisa contou com a colaboração de amigos, colegas de

laboratório e instituições, aos quais agradeço sinceramente.

À Universidade Federal do Maranhão e ao Programa de Pós-Graduação em

Saúde Materno-Infantil pelos conhecimentos adquiridos nesses dois anos de vivência

como pós-graduanda.

À Coordenação e aos professores do Programa de Pós-Graduação em Saúde

Materno-Infantil, em especial à Doutora Luciane Maria Oliveira Brito e à secretária

Helena Ribeiro.

À Fundação de Amparo ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do

Maranhão (FAPEMA) pela concessão da Bolsa de Mestrado.

À Professora Doutora Valéria Cristina Soares Pinheiro, pela oportunidade

oferecida, pelo incentivo ao ingresso no mundo científico, pela confiança em mim

depositada, por ser uma amiga, pela paciência, pelas correções e sugestões, pelos

ensinamentos e por tudo que não consigo descrever em palavras.

Ao Professor Doutor Wanderli Pedro Tadei, que apesar da distância sempre

esteve presente em todos os momentos desta pesquisa ao me orientar, pelo apoio

financeiro, pelos bons momentos, pelas conversas de incentivo nos encontros

científicos, e por ser um exemplo de profissional e pessoa a ser seguido.

À Professora Doutora Ana Cecília Ribeiro Cruz pelo precioso auxílio nas

análises moleculares e por proporcionar meu estágio no Instituto Evandro Chagas (IEC)

em Ananindeua (PA). Por ser esta pessoa humilde que me acolheu com muito carinho e

muito me ensinou sobre ciência e vida.

Aos profissionais dos Laboratórios de Entomologia, Cultura de Células e

Biologia Molecular do IEC pela colaboração, ensinamentos e paciência durante meu

período de estágio.

Ao Professor Doutor Jivanildo Pinheiro Miranda pela realização das análises

estatísticas e pelas contribuições na escrita desta dissertação.

Ao amigo João Alberto Santos Porto, pela formatação dos bairros de coleta.

À Secretaria Municipal de Saúde, em especial a Pedro Souza Tavares,

Verônica de Sousa Lopes, Raqueline de Jesus Barreto, pelo apoio material na cessão de

transporte, e à disponibilização dos agentes de endemias e supervisores que me

acompanharam durante as coletas de alados e contribuíram grandemente para a

realização desta pesquisa.

A todos do Laboratório de Entomologia Médica do Centro de Estudos

Superiores de Caxias – Universidade Estadual do Maranhão (CESC-UEMA), em

especial aos meus amigos Meiriany Araújo Lucena, Sebastiana Silva Ibiapina, Janaína

Kelly Pinho Bezerra Silva, Joelma Soares da Silva, Francisco das Chagas Santana e

Irene Alves da Silva Neres, por terem feito parte desta pesquisa, ao me auxiliarem nas

coletas, pelo incentivo, e pelos momentos de descontração nestes anos de convivência.

Ao técnico em entomologia da Fundação Nacional de Saúde (FUNASA),

Francisco Santos Leonardo, pelo auxílio nas coletas, pela atenção, ensinamentos e pela

amizade que firmamos.

Aos moradores dos imóveis visitados por permitirem a entrada da equipe e a

realização das coletas.

Aos membros das bancas de qualificação e defesa por participarem da

avaliação deste trabalho.

Aos amigos e colegas de turma do mestrado, pelos bons momentos vividos

nesta etapa de nossas vidas e especialmente à Elda Pereira Noronha e à Heliana

Trindade Marinho pela amizade, pelas caronas, pelos trabalhos e conversas jogadas

fora.

De modo particular agradeço à amiga Lila Isabel Câmara de Paula e a toda sua

família, pela atenção, carinho e amizade durante minha estada em São Luís, por sempre

me auxiliar nos trabalhos de mestrado, pelos passeios, pelos conselhos e por ser alguém

tão abençoada que tanto amo e um exemplo de vida.

À Zélia Xeres, que também foi como uma mãe, nesse período de estada na

capital do Estado.

Ao casal Tomás e Antonia Melo, e à Bruna Melo por terem me acolhido

durante quatro meses em seu lar.

Às pessoas mais importantes da minha vida. Ao meu pai José Rodrigues

Bezerra Filho e a minha mãe Lucimar Trindade Bezerra que não mediram esforços

físicos ou financeiros para a realização desta meta, por terem se transformado em

biólogos por minha causa, por me ampararem, por me amarem. Agradeço pela vida.

Acima de tudo a Deus, pela vida, pela força, pela coragem, por me iluminar e

me fazer acreditar que se lutar posso realizar um sonho.

“A nossa maior glória não reside no fato de nunca cairmos,

mas sim em levantarmo-nos sempre depois de cada queda”.

Confúcio

RESUMO

Este estudo objetivou obter a densidade populacional de Aedes aegypti e identificar a

presença de vírus dengue em formas aladas do vetor coletadas em diferentes períodos

do ano no município de São Luís, Maranhão. Foram coletados mosquitos em três

períodos: seco (novembro e dezembro de 2008), chuvoso (março e abril de 2009), e

intermediário (julho e agosto de 2009). Foram visitados 320 imóveis em oito bairros

previamente sorteados de dois distritos: Coréia de Baixo, Lira, Goiabal e João Paulo

(Distrito Centro); e Itapiracó, Residencial Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão

(Distrito Cohab). Utilizou-se aspirador mecânico ligado a bateria para captura dos

alados. Após contagem, identificação e armazenamento, os espécimes foram

encaminhados ao Instituto Evandro Chagas, em Ananindeua, Estado do Pará, para

realização das análises viral e molecular por isolamento viral e Transcrição Reversa

seguida pela Reação em Cadeia da Polimerase (RT-PCR). Também foram obtidos os

dados climatológicos referentes ao período de estudo. Foram coletados 563 mosquitos

A. aegypti, com predominância de alados no período chuvoso, não havendo diferença

significativa na quantidade de espécimes por período. Também não foi observada

correlação positiva e negativa entre os fatores abióticos e o número de alados. Em

relação aos bairros, o João Paulo e o Goiabal obtiveram densidades estatisticamente

significantes. Os exemplares de A. aegypti foram divididos em lotes, considerando-se os

bairros de coleta, sendo formados 13 no período seco, 23 no chuvoso e 15 no

intermediário. O isolamento viral e a RT-PCR das amostras não atestaram positividade

para os vírus dengue. Esses resultados mostram que a densidade do A. aegypti aumentou

no período chuvoso e os bairros João Paulo e Goiabal apresentaram a maior quantidade

de exemplares, evidenciando que em São Luís, os fatores climáticos influenciam a

flutuação sazonal do vetor.

Palavras-chave: A. aegypti. Variáveis climáticas. Dengue. Vírus.

ABSTRACT

This study aimed to obtain Aedes aegypti density population and to identify the

presence of dengue virus in adults vector collected at different periods of the year in São

Luís, Maranhão. Mosquitoes were collected in three periods: dry (November and

December 2008), rainy (March and April 2009) and intermediate (July and August

2009). Were visited 320 properties in eight neighborhoods previously drawn from two

districts: “Coréia de Baixo”, “Lira”, “Goiabal” and “João Paulo” (“Distrito Centro”) and

“Itapiracó”, “Residential Canudos”, “Conjunto Cohatrac I” and “Vila Luisão” (“Distrito

COHAB”). We used mechanical vacuum on the battery to catch A. aegypti adults. After

counting, identification and storage, the specimens were sent to the “Instituto Evandro

Chagas”, in Ananindeua, State of Pará, to carry out the molecular and viral analysis for

virus isolation and Reverse Transcription followed by Polymerase Chain Reaction (RT-

PCR). Also obtained climatological data for the period of study. We collected 563

mosquitoes A. aegypti, with predominance of adults in the rainy season, but not have

significant difference in the amount of specimens of A. aegypti per period. There was

also no positive and negative correlation between the factors and the number of A.

aegypti adults. About the neighborhoods, “João Paulo” and “Goiabal” were obtained

statistically significant densities. Specimens of A. aegypti were divided into pools,

considering the neighborhoods of collection, with 13 formed in the dry season, 23 in the

rainy season and 15 in the intermediate period. Viral isolation and RT-PCR of samples

were not positive for the attested dengue virus. These results show that A. aegypti

density increased during the rainy season and the “João Paulo” and “Goiabal”

neighborhoods had the largest number of specimens, showing that in São Luís, the

climatic factors may to influence the vector seasonal fluctuation.

Key Words: A. aegypti. Climatic variables. Dengue. Virus.

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Estrutura molecular do vírus dengue........................................................... ..............26

Figura 2. Mapa dos bairros de realização das coletas, município de São Luís, Maranhão.......33

Figura 3. Aspirador mecânico acoplado à bateria, utilizado na captura de alados de A.

aegypti ........................................................................................................ ................38

Figura 4. Coleta de alados de A. aegypti no intradomicílio em imóvel do bairro Coréia

de Baixo, São Luís, Maranhão.................................................................... ................38

Figura 5. Coleta de alados de A. aegypti no peridomicílio em imóvel do bairro Coréia

de Baixo, São Luís, Maranhão.................................................................... ................38

Figura 6. Adultos de A. aegypti registrados nos períodos seco, chuvoso e intermediário,

em bairros do município de São Luís, Maranhão. Teste Kruskal-Wallis =

3,253983; p = 0,1965.................................................................................. ................46

Figura 7. Adultos de A. aegypti registrados entre os meses de novembro de 2008 e

agosto de 2009, nos períodos seco, chuvoso e intermediário em bairros do

município de São Luís, Maranhão. Teste Kruskal-Wallis = 6,719955; p =

0,2423......................................................................................................... ................47

Figura 8. Adultos de A. aegypti registrados por bairro, no município de São Luís,

Maranhão. Teste Kruskal-Wallis = 18,63852; p = 0,0094 ......................... ................52

Figura 9. Amostras de A. aegypti, referentes ao período seco, visualizadas em gel de

agarose a 2%, após coloração com brometo de etídio................................ ................53

Figura 10. Amostras de A. aegypti, referentes ao período chuvoso, visualizadas em gel

de agarose a 2%, após coloração com brometo de etídio........................... ................55

LISTA DE TABELAS

Tabela 1. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados nos períodos seco, chuvoso

e intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão, 2008-2009.......45

Tabela 2. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados mensalmente nos períodos

seco, chuvoso e intermediário, em bairros do município de São Luís,

Maranhão, 2008-2009.............................................................................. ................46

Tabela 3. Médias mensais de temperatura registradas no município de São Luís,

Maranhão, no período de novembro de 2008 a agosto de 2009.............. ................48

Tabela 4. Médias mensais relativas à umidade relativa do ar, registradas no município

de São Luís, Maranhão, no período de novembro de 2008 a agosto de 2009..........48

Tabela 5. Precipitação pluviométrica mensal registrada no município de São Luís,

Maranhão, no período de novembro de 2008 a agosto de 2009.............. ................48

Tabela 6. Associação entre quantidade de alados de A. aegypti e fatores abióticos nos

períodos seco, chuvoso e intermediário, em bairros do município de São

Luís, Maranhão........................................................................................ ................49

Tabela 7. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados por bairro, em São Luís,

Maranhão, no período de novembro e dezembro de 2008 ...................... ................50

Tabela 8. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados por bairro em São Luís,

Maranhão, no período de março e abril de 2009..................................... ................50

Tabela 9. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados por bairro em São Luís,

Maranhão, no período de julho e agosto de 2009.................................... ................51

Tabela 10. Relação de lotes de mosquitos A. aegypti por bairro, referente ao período

seco (novembro e dezembro de 2008)..................................................... ................53

Tabela 11. Relação de lotes de mosquitos A. aegypti por bairro, referente ao período

chuvoso (março e abril de 2009) ............................................................. ................54

Tabela 12. Relação de lotes de mosquitos A. aegypti por bairro, referente ao período

intermediário (julho e agosto de 2009).................................................... ................56

LISTA DE QUADROS

Quadro 1. Oligonucleotídeos usados na RT-Semi-Nested-PCR.............................. ................42

Quadro 2. Tamanho dos amplicons do VDEN produzido na RT-Semi-Nested-PCR...............43

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

% – Percentagem

µg – Micrograma

Abr. – Abril

Ago. – Agosto

AR – Artrópode

C6/36 – Clone de células de mosquito Aedes albopictus

cDNA – Ácido Desoxirribonucléico complementar ou DNA complementar

– Centímetro quadrado

D1 – Ciclina 1

D2 – Ciclina 2

DC – Dengue Clássico

Dez. – Dezembro

DNAse – Desoxirribonuclease

dNTPs – Deoxinucleotídeos

DS – Distrito Sanitário

DTT – Ditiotreitol

Fc – Receptor de superfície

FD – Febre do Dengue

FHD – Febre Hemorrágica do Dengue

FNS – Fundação Nacional de Saúde

IBGE – Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística

IEC – Instituto Evandro Chagas

IgG – Imunoglobulina G

Jul. – Julho

– Quilômetro quadrado

m – Metro

Mar. – Março

Máx. – Máxima

MgCl

– Cloreto de Magnésio

Mín. – Mínima

mL – Mililitro

mm – Milímetro

mRNA – Ácido Ribonucléico mensageiro ou RNA mensageiro

MS – Ministério da Saúde

Nov. – Novembro

NS – Proteína não estrutural (non-structural protein)

NS1 – Proteína não estrutural 1

NS2a – Proteína não estrutural 2a

NS2b – Proteína não estrutural 2b

NS3 – Proteína não estrutural 3

NS4a – Proteína não estrutural 4a

NS4b – Proteína não estrutural 4b

NS5 – Proteína não estrutural 5

ºC – Grau Celsius

OPAS – Organização Pan-Americana de Saúde

p – Valor de p ou p-level

PBS – Solução Salina Fosfato Tamponada (Phosphate Buffered Saline solution)

pC – Proteína do Capsídeo

PCR – Reação em Cadeia da Polimerase (Polimerase Chain Reaction)

pE – Proteína do Envelope

pH – Potencial de hidrogênio

pM – Proteína da Membrana

PP – Precipitação Pluviométrica

prM – Proteína precursora da Proteína da Membrana

PVC – Policloreto de Vinila

R – Correlação de Spearman

RNA – Ácido Ribonucléico

RNAse – Ribonuclease

RT – Transcriptase Reversa ou ARN polimerase dependente

SBF – Soro Bovino Fetal

SCD – Síndrome de Choque por Dengue

SEBRAE – Serviço Brasileiro de Apoio às Micro e Pequenas Empresas

SINAN – Sistema de Informação de Agravos de Notificação

SMS – Secretaria Municipal de Saúde

T – Temperatura

TAQ DNA polimerase – Thermus aquaticus DNA polimerase

UI – Unidade Internacional

URA – Umidade Relativa do Ar

VDEN1 – Vírus Dengue 1

VDEN2 – Vírus Dengue 2

VDEN3 – Vírus Dengue 3

VDEN4 – Vírus Dengue 4

WHO – World Health Organization (Organização Mundial da Saúde)

SUMÁRIO

RESUMO .................................................................................................................. ............... viii

ABSTRACT .............................................................................................................. .................ix

LISTA DE FIGURAS ............................................................................................... .................x

LISTA DE TABELAS .............................................................................................. .................xi

LISTA DE QUADROS............................................................................................. ............... xiii

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS............................................................... ................xiv

1 INTRODUÇÃO...................................................................................................... ................19

2 FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA ......................................................................... ................22

2.1 Histórico do Dengue............................................................................................ ................22

2.2 Dengue no Brasil................................................................................................. ................23

2.3 Dengue no Maranhão........................................................................................... ................24

2.4 Dengue em crianças e mulheres .......................................................................... ................24

2.5 Vírus dengue........................................................................................................ ................25

2.6 Incubação intrínseca e extrínseca do vírus dengue.............................................. ................27

2.7 Transmissão transovariana do vírus dengue........................................................ ................27

2.8 Vetores do dengue e dinâmica da transmissão.................................................... ................28

3 OBJETIVOS........................................................................................................... ................30

3.1 Objetivo Geral ..................................................................................................... ................30

3.2 Objetivos Específicos.......................................................................................... ................30

4 MATERIAL E MÉTODOS.................................................................................... ................31

4.1 Área de estudo..................................................................................................... ................31

4.2 Amostragem ........................................................................................................ ................31

4.2.1 Cálculo do Tamanho da Amostra..................................................................... ................34

4.2.2 Critérios de Não Inclusão e Exclusão............................................................... ................35

4.3 Caracterização das áreas de coleta....................................................................... ................35

4.4 Coleta dos alados................................................................................................. ................36

4.4.1 Período de coleta .............................................................................................. ................36

4.4.2 Técnica de captura de A. aegypti...................................................................... ................36

4.5 Registro de material e Análises Viral e Molecular.............................................. ................39

4.5.1 Preparação dos espécimes para as análises....................................................... ................39

4.5.2 Manutenção de cultura de células clone da linhagem C6/36 de A. albopictus..................39

4.5.3 Inoculações em cultura de células.................................................................... ................40

4.5.4 Técnica de Imunofluorescência Indireta........................................................... ................40

4.5.5 Extrações do RNA viral.................................................................................... ................41

4.5.6 RT-Semi-Nested-PCR...................................................................................... ................41

4.6 Análise estatística................................................................................................ ................43

5 RESULTADOS...................................................................................................... ................45

5.1 Densidade populacional de A. aegypti e variáveis climáticas............................. ................45

5.2 Densidade populacional de A. aegypti por bairros.............................................. ................49

5.3 Análises Viral e Molecular.................................................................................. ................52

6 CONCLUSÕES...................................................................................................... ................57

REFERÊNCIAS ........................................................................................................ ................58

APÊNDICES............................................................................................................. ................64

1 Apêndice 1.............................................................................................................. ................65

1.1 Primeiro Artigo Científico................................................................................... ................65

1.1.1 Classificação do Qualis do Periódico na Área de Medicina II......................... ................65

1.1.2 Normais Editoriais............................................................................................ ................65

1.1.3 Artigo Completo............................................................................................... ................69

2. Apêndice 2............................................................................................................. ................83

2.1 Segundo Artigo Científico................................................................................... ................83

2.1.1 Classificação do Qualis do Periódico na Área de Medicina II......................... ................83

2.1.2 Normais Editoriais............................................................................................ ................83

2.1.3 Artigo Completo............................................................................................... ................86

1 INTRODUÇÃO

O dengue é considerado a doença de transmissão vetorial com maior

crescimento no mundo. Essa enfermidade tem como agente etiológico tipos de vírus do

Gênero Flavivirus, caracterizados por apresentarem quatro sorotipos antigenicamente

distintos: Vírus Dengue 1 (VDEN1), Vírus Dengue 2 (VDEN2), Vírus Dengue 3

(VDEN3) e Vírus Dengue 4 (VDEN4) (RICO-HESSE, 1990; BENTE; RICO-HESSE,

2006).

A doença é transmitida por mosquitos do Gênero Aedes – Aedes (Stegomyia)

aegypti (Linnaeus, 1762) e Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse, 1894) e a transmissão

é feita pela picada de fêmeas infectadas (MARZOCHI, 1994). Após alimentar-se do

sangue de um indivíduo doente e se tornar um vetor potencial, a fêmea está apta a

transmitir o vírus, depois de oito a doze dias de incubação extrínseca. A doença se

manifesta clinicamente em quinze dias após a picada do mosquito infectado. Humanos e

mosquitos são os principais hospedeiros do vírus dengue, sendo que o vetor permanece

infectado por toda a sua vida (GUBLER, 1997; WHO, 2001).

As características clínicas do dengue dependem da idade do paciente. Os

lactentes e as crianças podem apresentar uma doença febril inespecífica, geralmente

com uma erupção cutânea maculopapular. Adolescentes e adultos podem apresentar um

sintoma febril discreto ou a doença incapacitante clássica, Dengue Clássico (DC) ou

Febre do Dengue (FD) com febre alta de início abrupto, cefaléia intensa, dor

retroorbital, mialgia e artralgia, náusea e vômitos, e erupção cutânea (WHO, 1997).

Em casos mais graves, o dengue pode ser acompanhado de epistaxe,

hemorragia gengival e gastrointestinal, hematúria e metrorragia, caracterizando casos

típicos de Febre Hemorrágica do Dengue (FHD), sendo a principal alteração

fisiopatológica que determina a gravidade da doença, o extravasamento de plasma

(WHO, 2006).

Na Síndrome de Choque por Dengue (SCD), a condição física dos pacientes

deprime repentinamente, depois de uma febre que dura de dois a sete dias. Há sinais

típicos de insuficiência respiratória: a pele se torna fria, manchada e congestionada, e,

além disso, a frequência do pulso torna-se mais rápida. Os pacientes em estado de

choque podem morrer se um tratamento adequado não for aplicado imediatamente

(WHO, 2007).

O dengue é hoje a mais importante arbovirose (termo derivado do idioma

inglês, como abreviatura da expressão arthropod borne virus, criada para designar os

tipos de agentes virais veiculados por artrópodes) que afeta o homem e constitui um

problema de saúde pública no mundo, ocorrendo principalmente em países tropicais.

Cerca de 50 a 100 milhões de pessoas são infectadas anualmente por vírus dengue, em

mais de 100 países, e estima-se que destas, 400.000 sejam acometidas pela FHD, 550

mil doentes precisam de hospitalização e 20 mil morrem em consequência da doença

(WHO, 2007; MACIEL et al., 2008).

O Brasil permaneceu por mais de 20 anos sem ocorrência da doença, desde a

erradicação do A. aegypti, principal vetor do dengue, do território brasileiro em 1955

(TAUIL, 1986). A dispersão dos vírus dengue pelos países vizinhos levou a

reintrodução do dengue no Brasil em 1981 com a epidemia ocasionada por VDEN1, em

Boa Vista, Estado de Roraima (OSANAI, 1983; TRAVASSOS-DA-ROSA et al., 1998).

Em 1986, o dengue apareceu no Estado do Rio de Janeiro, iniciando a grande epidemia

causada por VDEN1 (SCHATZMAYR et al., 1986), que atingiu cerca de 95.000 casos

até 1987 (FIGUEIREDO et al., 1998).

O problema da transmissão do dengue no Brasil tem se agravado nos últimos

anos. O maior número de casos ocorreu em 1998, sendo registradas cerca de 560 mil

notificações. Nos dois anos seguintes houve uma redução acentuada, chegando a 238

mil em 2000 (MS, 2001). Em 2009, o país registrou 387.158 casos no período de janeiro

a junho (MS, 2009).

O aumento de casos do dengue é resultante da recente reinfestação do país

pelo mosquito A. aegypti, também responsável pela transmissão da febre amarela

urbana (FORATTINI, 2002). A expansão das áreas de ocorrência da doença associa-se

ainda à urbanização, sem a devida estrutura de saneamento (COSTA et al., 2008). Tais

fatores contribuem tanto para a dispersão ativa do mosquito como também para a

disseminação dos quatro sorotipos da doença.

Considerando-se o dengue como problema de saúde pública e pelo fato de não

existir vacina, a detecção e a sorotipagem de vírus dengue por Transcrição Reversa

seguida pela Reação em Cadeia da Polimerase (RT-PCR), utilizando amostras do vetor

são uma poderosa ferramenta para a vigilância epidemiológica. A presença do vírus em

mosquitos coletados no campo permite a detecção de epidemias em um período anterior

à explosão dos casos (ZEIDLER et al., 2008).

O presente estudo objetiva identificar a presença do vírus dengue em

mosquitos A. aegypti, coletados no município de São Luís, Estado do Maranhão e

relacionar a densidade dos vetores com dados climatológicos, nas estações seca e

chuvosa da região.

2 FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA

2.1 Histórico do Dengue

Os primeiros relatos de uma epidemia semelhante ao DC aconteceram em

1779 e 1780, quando casos ocorreram em Batávia (Jacarta), no Cairo e na Filadélfia.

Essa ocorrência simultânea de casos em três continentes indica que o vírus dengue,

assim como o mosquito vetor, apresentava uma distribuição mundial nos trópicos há

mais de 200 anos (HENCHAL; PUTNAK, 1990).

Após uma epidemia de dengue em Brisbane (Austrália) em 1905, na qual se

estimou que um terço da mão-de-obra ficou incapacitada de trabalhar, Bancroft, um

médico clínico geral que trabalhava na área rural de Brisbane, demonstrou que os

mosquitos da espécie A. aegypti que se alimentaram em pacientes com dengue, foram

capazes de transmitir o dengue para pessoas sadias (AASKOV, 2003). Em 1944, Sabin

fez o primeiro isolamento do vírus dengue, tendo identificado dois sorotipos conhecidos

como VDEN1 e VDEN2 (SABIN, 1952 apud. RUDNIK, 1967).

Até a II Guerra Mundial, as epidemias de dengue aconteciam em intervalos de

10 a 30 anos. Durante esse período, o dengue era considerado uma doença benigna de

curso não fatal, proveniente dos visitantes dos trópicos. No referido período, ocorreu a

co-circulação de sorotipos do vírus dengue no Sudeste Asiático com um aumento da

atividade epidêmica. A primeira descrição de uma epidemia de FHD, foi em Manila, no

ano de 1953 (GUBLER, 1998), quando foram isolados em pacientes com esta nova

síndrome, os vírus dengue tipos 3 e 4 (SABIN, 1952 apud. RUDNIK, 1967).

Juntamente com o crescimento descontrolado das cidades, epidemias de FHD se

tornaram grandes problemas de saúde pública em vários países desta região (RIGAU-

PÉREZ et al., 1998).

No período de 1950 até meados de 1970 era rara a ocorrência de epidemias de

dengue no continente americano, uma vez que o principal vetor da doença, o A. aegypti

havia sido erradicado na maioria dos países da América Central e do Sul, devido à

campanha realizada pela Organização Pan-Americana de Saúde (OPAS). No final da

década de 70, o programa perdeu forças e o mosquito voltou a ocupar os lugares dos

quais havia sido eliminado. Durante o século XX, a transmissão urbana do vírus tornou-

se problema de saúde pública de relevância e não há mais a necessidade de transmissão

enzoótica (exclusivamente entre animais) (GUBLER, 2002; GUZMÁN; KOURI, 2002).

2.2 Dengue no Brasil

No Brasil o dengue é hoje objeto da maior campanha de saúde pública, que se

concentra no controle do A. aegypti, único vetor reconhecido como transmissor do vírus

do dengue no país. Este mosquito está adaptado a se reproduzir nos ambientes

doméstico e peridoméstico, utilizando-se de recipientes descartáveis e / ou que

armazenam água potável e que acumulam água de chuvas, comumente encontrados nos

lixos das cidades

(TAUIL, 2001)

A primeira epidemia de dengue no país, com casos confirmados

laboratorialmente, foi ocasionada pelos sorotipos 1 e 4 na cidade de Boa Vista, Estado

de Roraima, e

pós um silêncio epidemiológico, o sorotipo VDEN1 invadiu o Sudeste

(Rio de Janeiro) e o Nordeste (Alagoas, Ceará, Pernambuco, Bahia, Minas Gerais) em

1986-1987, espalhando-se pelo país desde então, com a entrada dos sorotipos VDEN2

em 1990-1991, e VDEN3 em 2001-2002. O dengue encontra-se presente em 3.794

municípios brasileiros, sendo responsável por cerca de 60% das notificações nas

Américas. Além disso, os três sorotipos do dengue estão circulando em 25 dos 27

Estados brasileiros, contribuindo para a incidência das formas graves do dengue (FHD e

SCD) nas cidades onde se registraram epidemias sequenciais por pelo menos dois

sorotipos diferentes (SCHATZMAYR et al., 1986; HALSTEAD, 1990; NOGUEIRA et

al., 1991;

DONALISIO, 1999; NOGUEIRA et al., 2001;

MIAGOSTOVICH et al., 2002; MS, 2008

A região Nordeste sempre apresentou incidência elevada de casos de dengue.

No período decorrido entre 1998 e 2001, chegou-se a 652.448 registros, correspondendo

a 46,30% dos casos nacionais (FNS, 2002). Em 2006, foram registrados 83.365 casos, e

em 2007, 148.303 ocorrências na mesma região do país (MS, 2007). No período de

janeiro a junho de 2008, houve 242.740 casos confirmados na região, e em 2009, no

mesmo período verificou-se uma redução para 128.322 casos (MS, 2009).

2.3 Dengue no Maranhão

No Estado do Maranhão, o A. aegypti foi introduzido em São Luís, capital do

Estado, em 1969, mas só chamou a atenção dos órgãos de saúde no ano de 1995,

quando se detectaram os primeiros casos de DC no setor da Cohab-Anil. Em 1996

ocorreu a primeira epidemia na ilha de São Luís, com 4.641 casos notificados, que

prosseguiu até 1998, havendo dificuldade para confirmação dos casos em laboratório.

Em 2001 foi isolado o sorotipo VDEN2, e até julho de 2006, os sorotipos VDEN1,

VDEN2 e VDEN3 foram detectados como circulantes no Maranhão (MS, 2006). Em

2006 e em 2007 ocorreram 6.540 e 14.616 notificações, respectivamente (MS, 2006;

2007). Além disso, verifica-se o aumento da forma de FHD e a ocorrência de óbitos:

foram registrados 163 casos durante o ano de 2007, sendo que destes, 7,97% evoluíram

para óbito. O Maranhão também foi o terceiro Estado com o maior número de registros

de FHD da região Nordeste e segunda posição em número de mortes pela doença em

2007, abaixo apenas do Piauí (MS, 2007).

Em 2008, foram notificados 1.256 casos suspeitos de dengue em São Luís.

Destes, 608 foram confirmados para o DC e 82 para a FHD (SINAN, 2008). De janeiro

a junho de 2009, foram notificados três casos de FHD no Estado e nenhum óbito (MS,

2009).

2.4 Dengue em crianças e mulheres

Os primeiros relatos de FHD no Sudeste Asiático, foram registrados

principalmente em crianças, pois nessa fase concentravam-se 95% dos casos, o que se

considerou devido à imunidade existente na população adulta (CHAN, 1987). No

entanto, algumas epidemias na Índia e em ilhas do Pacífico têm afetado em sua maioria,

adultos (BHARAJ et al., 2008). Nos países da América conforme o local e a época, ora

predomina em crianças, ora em adultos. Em alguns casos como na epidemia de Santiago

de Cuba de 1997 por VDEN2 todos os pacientes que tiveram FHD eram adultos, pois a

infecção precedente por VDEN1 havia ocorrido 20 anos antes (GUZMÁN et al., 2002).

O estudo cuidadoso da epidemia de 1981 em Cuba, causada por VDEN2,

permitiu comparar adultos e crianças quanto à ocorrência das formas mais graves da

doença, e verificou-se que as taxas de letalidade em crianças de três a quatro anos

corresponderam a 25,4 por 10 mil infecções secundárias por VDEN2, taxas bem mais

altas do que nas crianças acima de cinco anos. Esses dados estabelecem uma poderosa

associação entre a idade do indivíduo e o risco de morrer por uma síndrome de

permeabilidade vascular durante uma segunda infecção por VDEN2 (GUZMÁN et al.,

2002).

No Brasil, vários autores têm demonstrado a predominância dos casos de

dengue em mulheres e crianças. Um estudo feito no município de Caxias, Estado do

Maranhão, revelou que dos 905 casos da doença registrados na cidade entre os anos de

2000 a 2006, 53,48% corresponderam ao sexo feminino (FREITAS, 2007). Resultados

semelhantes foram encontrados por Vasconcelos (1993) em Araguaína, Estado do

Tocantins; e Nascimento et al. (2003) em Belém, Estado do Pará. Uma das explicações

para esta diferença entre os sexos seria a maior permanência da mulher no

intradomicílio ou peridomicílio, locais onde predominantemente ocorre a transmissão

do dengue (FORATTINI, 2002).

Ainda, em decorrência do processo de endemização do dengue no Brasil, após

sua reermegência há 26 anos, vem ocorrendo uma mudança na sua distribuição etária,

havendo um progressivo aumento da incidência e da gravidade em menores de 15 anos.

No Maranhão, conforme dados da Secretaria Municipal de Saúde de São Luís, entre

2003 e 2007, foram notificados 9.046 casos de dengue na capital maranhense. Destes,

33% foram em crianças menores de 15 anos e a taxa de mortalidade foi de 74% nessa

faixa etária, o que tem comprovado a maior agressividade do dengue em pessoas de

menor idade (SMS, 2007). O mesmo quadro epidemiológico foi verificado em Manaus,

Estado do Amazonas, entre 2006 e 2007, com aumento significativo da proporção de

casos de dengue em menores de 15 anos e da proporção de casos graves neste grupo

etário (ROCHA; TAUIL, 2009).

2.5 Vírus dengue

O vírus dengue é classificado em 04 sorotipos como um complexo dentro da

Família Flaviviridae. A partícula viral madura é esférica com um diâmetro de cerca de

50 nanômetros, contendo uma única fita de mRNA (Ácido Ribonucléico mensageiro),

com polaridade positiva e de aproximadamente 11.000 nucleotídeos (JONES et al.,

2003) (Figura 1). O genoma apresenta uma pequena região 5’ capeada e não

codificadora, uma região aberta de leitura contendo mais de 10.000 nucleotídeos, e a

região não codificadora terminal 3’, que é desprovida de cadeia poli-A. A janela aberta

de leitura codifica três proteínas estruturais na terminação 5’, que são as proteínas do

capsídeo (pC), da membrana (pM) e do envelope (pE). A forma imatura do vírus

contém a proteína precursora da proteína de membrana M (prM) (HENCHAL;

PUTNAK, 1990; MONATH; HEINZ, 1996). A proteína C é a primeira a ser traduzida e

se associa com o RNA para formar o nucleocapsídeo. A proteína prM é clivada após a

saída do vírus da célula, deixando uma pequena proteína estrutural M ancorada no

envelope do vírus e abandonando a maior parte, o segmento pr no meio extracelular. A

formação da proteína M parece ser crucial, finalizando o evento da morfogênese do

vírion (HENCHAL; PUTNAK, 1990). A glicoproteína do envelope é responsável por

um grande espectro de atividades biológicas incluindo: ligação aos receptores celulares

do hospedeiro, fusão à membrana e entrada nestas células, além do mais, ela estimula o

sistema imune do hospedeiro através da indução de proteção (SAEJUNG et al., 2006).

O genoma do vírus dengue apresenta ainda sete proteínas NS (não

estruturais): NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b e NS5, cujas funções ainda não estão

totalmente identificadas. O vírus se acopla às células susceptíveis por dois mecanismos:

o complexo vírus-anticorpo (não neutralizante tipo Imunoglobulina IgG) une-se ao

receptor Fc dos macrófagos e monócitos; ou ainda pela união aos monócitos por via de

um receptor viral sensível à tripsina (LEITMEYER et al., 1999).

Imagem disponível em: http://ww2.prefeitura.sp.gov.br

Figura 1. Estrutura molecular do vírus dengue.

2.6. Incubação intrínseca e extrínseca do vírus dengue

A transmissão do vírus dengue compreende dois ciclos: o intrínseco, que

ocorre no organismo humano durante a viremia, que vai de um dia antes do

aparecimento da febre até o sexto dia da doença; e o extrínseco que ocorre no mosquito

que após realizar repasto sanguíneo em indivíduo infectado na fase aguda aguda da

doença, adquire juntaente com o sangue o vírus que se multiplica, por um período de

oito a doze dias e, a seguir, migra para as glândulas salivares do inseto. A partir de

então, o vetor torna-se competente para transmitir a doença, até o final da vida, que é de

seis a oito semanas para o A. aegypti (GUBLER, 1997; WHO, 2001).

Assim como outros arbovírus, a dinâmica de replicação do VDEN em

mosquitos infectados oralmente, depende da temperatura nas quais os mosquitos são

mantidos, a cepa, quantidade de vírus ingerido e possivelmente a espécie e cepa do

mosquito. Todavia, o tempo entre a ingestão do VDEN pelo mosquito e sua habilidade

de transmitir a infecção (período de incubação extrínseco) é altamente dependente da

temperatura ambiental e da quantidade de vírus ingerido (RICO-HESSE, 1990;

CONSOLI; LOURENÇO-DE-OLIVEIRA 1994; FORATTINI, 2002).

2.7 Transmissão transovariana do vírus dengue

A transmissão transovariana do vírus dengue, onde a fêmea passa o patógeno

para sua descendência, ocorre em laboratório e na natureza. Tipicamente, a fêmea do

artrópode infecta seus descendentes em taxas bem reduzidas (BEATY; MARQUARDT,

1996). Rosen et al. (1983)

observaram maior taxa de transmissão vertical em A.

albopictus em comparação com A. aegypti, tendo sido detectada a transmissão do

sorotipo 1 por esta espécie. Em outros trabalhos, a transmissão transovariana dos

sorotipos 2, 3 e 4 também foi detectada em A. aegypti (KHIN; THAN, 1983; HULL et

al., 1984). Segundo Joshi et al. (2002) a transmissão transovariana permite ao vírus

dengue persistir em gerações sucessivas de mosquitos, a taxas de 5% a 26% em

laboratório, embora na natureza não deva ocorrer taxa maior que 20%.

2.8 Vetores do dengue e dinâmica da transmissão

O A. aegypti, vetor do dengue e também da febre amarela urbana, é um

mosquito altamente doméstico. Esta espécie pertence à Ordem Diptera, Família

Culicidae. Os Dípteros se desenvolvem através de metamorfose completa

(holometabolia), e o ciclo de vida compreende quatro fases: ovo, larva (quatro estádios

larvários), pupa e adulto (CONSOLI; LOURENÇO-DE-OLIVEIRA 1994;

FORATTINI, 2002).

O A. aegypti foi importado da África para a América durante a colonização e o

tráfico de escravos, disseminou-se para toda a faixa tropical em vista de seu peculiar

modo de reprodução e hoje é considerado cosmopolita (EIRAS, 2000). No Hemisfério

Ocidental a espécie está inteiramente relacionada com a população humana. Depósitos

artificiais utilizados em abundância pela sociedade moderna, constituem os mais

importantes criadouros responsáveis pela produção e manutenção de grandes

populações do vetor. Esse mosquito costuma picar durante o dia e tem preferência

acentuada por sangue humano (GADELHA; TODA, 1985; FORATTINI 2002).

A circulação dos vírus dengue depende da forma em que se organiza o espaço

geográfico dos centros urbanos, a migração humana, o modo de vida de suas populações

e os seus reflexos no ambiente. Esses fatores criam condições para a proliferação dos

vetores, bem como a circulação e introdução de cepas virais (TEIXEIRA et al., 1999).

Em muitas regiões tropicais as deficiências no abastecimento de água encanada fazem

com que muitos habitantes passem a armazenar o líquido nos domicílios. Por sua vez, a

aglomeração humana propicia condições para o aumento do número de mosquitos que

entram em contato com a população. Outro hábito encontrado nas comunidades pobres

vem a ser o acúmulo do lixo, no qual é possível encontrar recipientes passíveis de servir

como criadouros (FORATTINI, 2002; PINHEIRO; TADEI, 2002).

Além disso, a propagação dos vírus causadores do dengue é facilitada pelo

aumento da intensidade e velocidade do tráfego aéreo e terrestre. Esses agentes podem

ser rapidamente transportados no sangue de pessoas portadoras da infecção, e, como o

período de viremia é de aproximadamente oito dias, facilita sua disseminação pelo

mosquito vetor (GUBLER, 1997).

Atualmente o eixo dos programas de controle do dengue tem sido o combate

aos mosquitos vetores mediante a vigilância vetorial e a aplicação de inseticidas, que

vem apresentando baixa eficácia e altos custos (PENNA, 2003; MACIEL et al., 2008).

O desenvolvimento de uma vacina contra os vírus do dengue, com eficácia e

segurança, permitiria o controle da doença, de maneira semelhante ao controle da febre

amarela. Entretanto, antes da disponibilização de uma vacina, recomenda-se estudos de

soroincidência e/ou prevalência para avaliação epidemiológica de base populacional.

Esta situação representa um desafio, pois grande parte dos municípios brasileiros não

apresenta estrutura física, como a existência de laboratórios para a realização de análises

moleculares que agilizem a diagnose em pacientes (MACIEL et al., 2008).

Considerando-se esta realidade, a detecção e a sorotipagem dos vírus dengue

por RT-PCR, em mosquitos vetores vem se mostrando uma importante ferramenta na

vigilância epidemiológica. A presença de vírus em mosquitos coletados em campo

permite sua detecção de seis a oito semanas antes do início da epidemia (PINHEIRO et

al., 2005; URDANETA et al., 2005; ZEIDLER et al., 2008). Vários protocolos de RT-

PCR em amostras clínicas para detecção e identificação de sorotipos dengue têm sido

utilizados para a detecção dos sorotipos do dengue em vários países (LANCIOTTI et

al., 1992; HOUNG et al. 2001).

No Estado do Maranhão, foram iniciadas pesquisas para detectar e monitorar a

circulação dos sorotipos do dengue em mosquitos na cidade de Caxias (LUCENA et al.,

2007) e em São Luís (LUCENA et al., 2008). No entanto, estudos mais abrangentes

tornam-se necessários, com coletas de mosquitos em diversas áreas da cidade e em

diferentes períodos do ano para se obter informações do comportamento do vírus

dengue de acordo com a sazonalidade e com os índices de densidade do vetor nos

bairros do município de São Luís, Maranhão.

3 OBJETIVOS

3.1 Geral

• Estimar a densidade populacional de A. aegypti e a taxa de infecção por vírus

dengue em diferentes períodos no município de São Luís, Maranhão.

3.2 Específicos

• Calcular o índice de densidade populacional de alados de A. aegypti nos bairros

de São Luís em diferentes períodos do ano;

• Correlacionar o índice populacional de A. aegypti com os fatores climáticos de

precipitação pluviométrica, umidade relativa do ar e temperatura;

• Detectar os sorotipos do vírus dengue em A. aegypti coletados em diferentes

bairros, usando as técnicas de RT-PCR e Isolamento Viral;

• Mapear as áreas das cidades de São Luís, com maior densidade de A. aegypti

para subsidiar os Programas de Controle.

4 MATERIAL E MÉTODOS

4.1 Área de estudo

Trata-se de um estudo descritivo transversal, realizado no município de São

Luís, situado na Ilha de São Luís, ao norte do Estado do Maranhão (02º 31’ 47” Sul e

44º 18’ 10” Oeste), altitude de 24,391 m e área de 827 Km

que corresponde

aproximadamente a 0,24% do território do Estado. O município ocupa mais da metade

da Ilha (57%) e a população se distribui entre centro urbano, com 122 bairros (que

constituem a região semi-urbana) e em 122 povoados (que formam a zona rural). A

cidade está dividida em 15 setores fiscais e 233 bairros, loteamentos e conjuntos

residenciais (FUNDAÇÃO IBGE, 2002).

Atualmente o município encontra-se dividido em sete distritos sanitários (DS):

Centro, Itaqui-Bacanga, Coroadinho, Cohab, Bequimão, Tirirical e Vila Esperança. Em

2000, a população era de 855.442 habitantes, dos quais 822.935 urbanos (381.019

masculinos; 441.916 femininos) e 32.507 rurais (16.676 masculinos e 15.831

femininos). A contagem da população em 2007 apontou 957.515 habitantes no Estado

(IBGE, 2008).

O clima é tropical quente e úmido, com duas estações: a chuvosa (janeiro a

junho), com precipitação pluviométrica média de 1.954 mm; e a de estiagem (julho a

dezembro). A temperatura varia entre 28 a 30ºC, em média. A umidade relativa do ar

apresenta valor máximo em abril, quando a região encontra-se no período chuvoso e

temperaturas mais amenas, chegando a 79% em novembro, quando a região encontra-se

na época seca e com temperaturas mais elevadas. O município de São Luís é cortado por

diversos rios e estuários, entre eles pode-se citar: Anil, Bacanga, Tibiri, Mosquito,

Mocajituba, Antônio Neves, São João e Paciência (SEBRAE-LEGAL, 2008).

4.2 Amostragem

Foram selecionados aleatoriamente dois distritos do município de São Luís e

em cada um destes, sorteados quatro bairros, totalizando oito bairros: Distrito Centro –

Coréia de Baixo, Lira, Goiabal e João Paulo; e Distrito Cohab – Itapiracó, Residencial

Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão (Figura 1). Em cada um dos bairros foram

sorteados quatro quarteirões e dez imóveis por quarteirão, perfazendo um total de 32

quarteirões e 320 imóveis. As visitas foram feitas juntamente com supervisores e

agentes de controle do dengue da Secretaria Municipal de Saúde de São Luís.

Foram obtidos os níveis de precipitação pluviométrica, umidade relativa do ar e

temperatura no Laboratório de Meteorologia da Universidade Estadual do Maranhão.

João Paulo

Coréia de Baixo

Lira

Goiabal

Itapiracó

Residencial Canudos

Con

junto Cohatrac I

Vila Luisão

Bairros de Coleta

Fonte: http://www.scielo.br/pdf/rsbmt/v41n4/a07v41n4.pdf. Modificado por: PORTO, J. A. S., 2010.

Figura 2

Mapa dos bairros de realização das coletas, município de São Luís, Maranhão.

4.2.1 Cálculo do Tamanho da Amostra

Os oito bairros pesquisados apresentam um total de 11.640 imóveis, segundo

a listagem de Distritos e Bairros fornecida pela Vigilância Epidemiológica de São Luís.

Considerando-se um erro amostral tolerável de 6% (E

= 0,06), o número representativo

de imóveis para a realização das coletas, segundo Barbetta (2002), foi obtido pelas

fórmulas:

Onde:

= Primeira aproximação do tamanho da

amostra;

= Erro amostral tolerável.

Onde:

n = Tamanho da amostra;

N = Número de elementos da população;

= Primeira aproximação do tamanho da

amostra.

Sendo:

= 0,06.

Temos:

Sendo:

= 277,7;

N = 11.640.

Temos:

N x n

N + n

(0,06)

0,0036

277,7

N x n

N + n

11.640 x 277,7

11.640 + 277,7

3.232.428

11.917,7

271, 2 imóveis

O número obtido no cálculo amostral (271,2 imóveis) fora arredondado para

272 imóveis, e dividido pela quantidade de bairros, ou seja, oito, resultando em 34

imóveis por bairro. Para que o número de imóveis fosse exato e distribuído de forma

igual em cada quarteirão (ou seja, quatro quarteirões por bairro), preferiu-se aumentar

em seis o número de imóveis para cada bairro, totalizando 40 imóveis visitados por

bairro, sendo dez por quarteirão. No total foram pesquisados 320 imóveis.

4.2.2 Critérios de Não Inclusão e Exclusão

Não foram incluídos nesta pesquisa os imóveis sorteados que no momento da

visita, encontravam-se abandonados, ou aqueles em que os proprietários estavam

ausentes ou ainda nos que estivessem apenas menores de idade. Foram excluídos e

substituídos na pesquisa, os imóveis que na segunda ou terceira coletas, houve recusa

dos proprietários à entrada da equipe, ou que estivessem fechados.

4.3 Caracterização das áreas de coletas

No Distrito Centro os bairros de realização das coletas foram Coréia de Baixo,

Lira, Goiabal e João Paulo. Estes se caracterizam pela existência de esgoto a céu aberto

ou mesmo córregos próximos às residências, o que favorece o acúmulo de lixo jogado

pela população. Nos imóveis é frequente o encontro de recipientes utilizados para

armazenar água por falha no sistema de abastecimento público, o que propicia locais

para o desenvolvimento de formas imaturas do A. aegypti. Apresentam pouca

vegetação, grande parte das ruas é asfaltada e a maioria das casas possui terrenos

extensos onde é comum a criação de animais domésticos.

No Distrito Cohab as coletas foram realizadas nos bairros Itapiracó,

Residencial Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão. Com exceção do Conjunto

Cohatrac I, os demais bairros apresentam extensa área de vegetação, o que contribui

para a criação de insetos, e algumas ruas sem asfaltamento. No entanto, em todos, é

possível observar lixo jogado em terrenos baldios, reservatórios para armazenamento de

água e sistema de saneamento básico deficiente.

4.4 Coleta dos alados

4.4.1 Período de Coleta

As coletas foram feitas de novembro de 2008 a agosto de 2009, e eram

realizadas de segunda-feira à sexta-feira, das 08h00 às 12h00 e das 14h00 às 18h00,

sendo realizadas em três períodos: seco (de 20 de novembro ao dia 12 de dezembro de

2008), chuvoso (de 23 de março a 03 de abril de 2009), e intermediário (término do

chuvoso e início do seco) (de 23 de julho a 05 de agosto de 2009). Os bairros foram

visitados de forma alternada, sendo feitas coletas diárias em 20 imóveis por bairro

(seguindo-se a sequência: Coréia de Baixo, Lira, Goiabal, João Paulo, Itapiracó,

Residencial Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão) e ao término dos quatro dias

de visita no último bairro, retornava-se ao primeiro, repetindo-se a seqüência, em mais

20 imóveis, totalizando 40 imóveis por bairro e 320 imóveis no total.

Nos três períodos, tanto nos quarteirões como nos imóveis, quando ocorria

algum imprevisto pelo imóvel estar fechado ou haver recusa, fazia-se a visita no imóvel

mais próximo. Adotou-se este procedimento em todos os bairros, para manter constante

o número de 10 imóveis visitados por quarteirão (em 10), e permitir as análises

comparativas da densidade de mosquitos entre os bairros, além de minimizar os efeitos

de variação dos fatores climáticos, como chuvas e mudanças de temperatura.

Do primeiro para o segundo ciclo de coletas, houve apenas 02 recusas de

moradores (0,62% do total de imóveis visitados) e 23 imóveis fechados (7,18% do total

de imóveis visitados). Após a substituição dos referidos imóveis, do segundo para o

terceiro ciclo de coletas obteve-se 03 recusas (0,93% do total de imóveis visitados) e 29

imóveis fechados (9,06% do total de imóveis visitados).

4.4.2 Técnica de captura de A. aegypti

A captura dos alados foi feita utilizando-se aspirador mecânico movimentado

embaixo dos móveis e nas partes mais elevadas da residência para aspiração dos

mosquitos que estivessem em repouso. O aspirador constituiu-se de um tubo de material

PVC de cerca de um metro de comprimento contendo uma hélice no seu interior

(movimentada por bateria de 12 volts), que provoca uma corrente de ar que puxa os

mosquitos (NASCI, 1981) (Figura 2). Realizou-se a aspiração em todos os cômodos do

imóvel (Figura 3) e na área peridomiciliar (Figura 4) em que havia a possibilidade de

abrigar mosquitos. O esforço de coleta foi padronizado em 15 minutos para cada

residência.

Os espécimes capturados foram anestesiados com algodão embebido em

acetato de etila no interior do tubo vedado e em seguida, foram transferidos para gaiolas

entomológicas, colocadas no interior de caixas de isopor, para manter a umidade

necessária para mantê-los vivos durante o transporte até o laboratório onde foi feita a

identificação em nível de espécie, com chaves de identificação (FORATTINI, 2002), no

microscópio estereoscópico. A seguir, os espécimes foram separados por sexo, contados

e acondicionados em microtubos, numerados sequencialmente e identificados com

informações do bairro, local e data da coleta, quantidade de espécimes e sexo dos

indivíduos, e mantidos em freezer a -86ºC no Centro de Pesquisa Clínica do Hospital

Universitário da Universidade Federal do Maranhão (CEPEC/UFMA).

Foto: IBIAPINA, S. S. 2008

Figura 4

Coleta de alados de A. aegypti no

intradomicílio em imóvel do bairro

Coréia de Baixo, São Luís, Maranhão.

Figura

Aspirador mecânico acoplado à

bateria, utilizado na captura de

alados do A. aegypti.

Foto: BEZERRA, J. M. T. 2009

Figura 5

Coleta de alados de A. aegypti no

peridomicílio em imóvel do bairro

Coréia de Baixo, São Luís, Maranhão.

Foto: IBIAPINA, S. S. 2008

4.5 Registro de material e Análises Viral e Molecular

Essa fase da pesquisa foi realizada no Instituto Evandro Chagas (IEC) em

Ananindeua, Estado do Pará. Os espécimes coletados foram encaminhados ao

Laboratório de Entomologia onde foi feita a confirmação da identificação dos

exemplares e aos Laboratórios de Cultura de Células e Biologia Molecular para o

isolamento viral e a realização da RT-PCR, respectivamente.

Os exemplares de A. aegypti foram divididos em lotes que continham de 1 a 37

mosquitos para as análises viral e molecular, considerando-se os bairros e os períodos

de coleta. Os exemplares machos e fêmeas foram analisados separadamente, para

verificação de transmissão transovariana do vírus dengue. Quando houve o encontro de

apenas um mosquito A. aegypti macho ou fêmea durante as coletas, o exemplar único

constituía um lote.

Os lotes foram registrados no Livro de Identificação de Amostras da Seção de

Arbovirologia e Febres Hemorrágicas do IEC. O número de lotes diferiu em cada

período: 13 no seco, 23 no chuvoso e 15 no intermediário.

4.5.1 Preparação dos espécimes para as análises

Os espécimes de A. aegypti foram macerados em solução de PBS (tampão

salino fosfato pH 7,4) contendo albumina bovina a 0,75%, penicilina (100 UI/mL) e

estreptomicina (100 µg/mL), de acordo com o Protocolo de Reynes (1995). O

sobrenadante foi filtrado e a solução resultante armazenada a -86ºC até a realização da

extração do RNA.

4.5.2 Manutenção de cultura de células clone da linhagem C6/36 de A.

albopictus

As técnicas para o isolamento viral foram a propagação e a manutenção das

células clone C6/36 de A. albopictus (American Type Culture Cell Colection/ATCC),

utilizando-se o meio Leibowitz modificado com glutamina (L-15), acrescido de triptose,

aminoácidos não essenciais, penicilina (100 UI/mL), estreptomicina (100 µg/mL), soro

bovino fetal (SBF) a 5% para meio de crescimento e a 2% para o de manutenção. As

células foram mantidas à temperatura ambiente (em torno de 28ºC) com repiques

semanais em garrafas plásticas de 25 cm

com 10 mL de meio de crescimento. A

suspensão de células foi utilizada na proporção de 1:30 de meio de crescimento, sendo

distribuídos 10 mL por garrafa de 25 cm

e 1 mL por tubo de 16 X 125 mm que se

desejasse preparar para a inoculação.

4.5.3 Inoculações em culturas de células

A inoculação foi realizada em tubos de 16 X 125 mm com monocamadas

celulares semiconfluentes, três a quatro dias após o repique. A suspensão de mosquitos

foi filtrada e inoculada em tubos contendo células clone C6/36. Os tubos foram

deixados à temperatura ambiente (em torno de 28ºC), e observados diariamente em

microscópio óptico invertido até a verificação de efeito citopático ou até o 14º dia.

Nesse ponto as suspensões de células foram coletadas, preparadas lâminas para

confirmação da infecção viral por imunofluorescência indireta e extração de RNA para

preparação do DNA complementar (cDNA) por RT-PCR ou armazenada em freezer -

80ºC até o uso.

4.5.4 Técnica de Imunofluorescência Indireta

O método utilizado foi o descrito previamente por Gubler et al. (1984). Foram

usadas células clone C6/36 inoculadas com suspensão de mosquitos e como controle

negativo foram usadas células não infectadas. Os materiais contidos nas lâminas (20 µL

em cada orifício) foram secos e fixados com acetona durante 10 minutos à temperatura

de -20ºC. Em seguida, foram acrescidos 10 µL de anticorpos policlonais antiflavivirus

na diluição de 1:20 em PBS (pH 7,4) e as lâminas incubadas a 37ºC em câmara úmida

durante 30 minutos. A seguir, as lâminas foram lavadas em PBS por dez minutos, e uma

vez, rapidamente, em água destilada e, secas à temperatura ambiente. Em seguida,

foram adicionados 10 µL de conjugado (antianticorpo de camundongo ligado a

isotiocianato de fluoresceína) na diluição de 1:900 em PBS pH 7,4, sendo então, as

lâminas incubadas a 37ºC em câmara úmida durante 30 minutos. Foi repetido o

processo de lavagem com PBS e água destilada. Para as amostras positivas na triagem

com anticorpos policlonais, foi feito um segundo procedimento desta vez utilizando

anticorpos monoclonais para identificar o sorotipo viral (VDEN1, VDEN2, VDEN3 e

VDEN4). Finalmente, as lâminas foram secas à temperatura ambiente, montadas com

glicerina tamponada pH 8,2 e lamínulas de vidro.

4.5.5 Extrações do RNA viral

O método usado para extração do RNA viral foi o do reagente Trizol LS

(Invitrogen/San Diego/USA), seguindo orientações do fabricante. Para extração do

RNA foi utilizado 0,25 mL de cada amostra e adicionado 0,75 mL de Trizol LS. Em

seguida foi adicionado 0,2 mL de clorofórmio para cada 0,75 mL de Trizol LS. Após

centrifugação a fase aquosa foi retirada cuidadosamente evitando perturbar as outras

fases e colocadas em microtubos novos. Para precipitação do RNA, foi acrescido 0,5

mL de álcool isopropílico (essa quantidade é para cada 0,75 mL de Trizol LS), seguida

de centrifugação e descarte do sobrenadante. Após o sobrenadante ser desprezado e o

microtubo seco à temperatura ambiente (em torno de 28ºC), adicionou-se ao precipitado

de RNA total 20 µL de água livre de RNase, e incubou-se 5 min a 65 °C, e resfriou-se

por 5 min a temperatura ambiente. O RNA foi utilizado imediatamente, ou estocado a -

86 °C até o momento do uso.

4.5.6 RT-Semi-Nested-PCR

O RNA extraído foi eluído em água livre de RNAse. A Reação em Cadeia da

Polimerase – Transcrição Reversa – Semi-Nested (RT-Semi-Nested-PCR) foi realizada

de acordo com o Protocolo de Lanciotti et al. (1992), que inclui o gene proteína prM/M,

onde a região amplificada neste teste corresponde a este gene proteína. Esta reação foi

feita em duas etapas, iniciando com a síntese de cDNA a partir de RNA viral extraído.

O RNA viral passou pelo processo de desnaturação inicial (90ºC por dois minutos mais

cinco minutos no gelo), depois foi preparada a mistura de reação contendo água (livre

de RNAse e DNAse), Tampão 10X, MgCl

, dNTPs, DTT, oligonucleotídeos (D1+D2)

(Quadro 1), Inibidor de Ribonuclease (5 U), TAQ DNA polimerase (1,25 U), enzima

RT-MMLV (1,125 U) adicionada a mesma para ser levada ao termociclador com o

seguinte programa: 1 ciclo a 45ºC por 65 minutos, a 94ºC por dois minutos; 35 ciclos

com oscilação de tempo e temperatura: 94ºC por 60 segundos, 55ºC por dois minutos,

72ºC por três minutos; 72ºC por 10 minutos.

A partir do produto da primeira PCR, foi realizada a segunda PCR, diluindo-a

em água livre de RNAse e DNAse (1:100). Em seguida, foi retirada uma alíquota de 5

µL e preparada a mistura e reação: água livre de RNAse e DNAse, Tampão 10X,

MgCl

, dNTPs, oligonucleotídeos (D1+TS 1-4) (Quadro 1), TAQ DNA polimerase

(1,25 U), para ser adicionada a esta e levada ao termociclador com o seguinte programa:

18 ciclos a 94ºC por 30 segundos; 55ºC por um minuto; 72ºC por dois minutos. O

produto final foi analisado em gel de agarose a 2%, após coloração com brometo de

etídio e a seguir exposto à luz ultravioleta, sendo fotografado, para análise comparativa

do produto do RT-PCR com o marcador de peso molecular e controles (Quadro 2).

Quadro 1. Oligonucleotídeos usados na RT-Semi-Nested-PCR.

Oligo Sequência

Posição no genoma

(prM/M)

D1 5’-TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG -3’ 134-161

D2 5’-TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC -3’ 616-644

TS1 5’-CGTCTCAGTGATCCGGGGG-3’ 568-586

TS2 5’-CGCCACAAGGGCCATGAACAG-3 232-252

TS3 5’-TAACATCATCATGAGACAGAGC-3’ 400-421

TS4 5’-CTCTGTTGTCTAAAACAAGAGA-3’ 506-527

Fonte: Lanciotti et al. (1992).

Quadro 2. Tamanho dos amplicons do VDEN

produzido na RT-Semi-Nested-PCR.

Tamanho do Amplicon

Vírus

1°PCR (pb)

Dengue 511

Vírus 2°PCR (pb)

VDEN1 482

VDEN2 119

VDEN3 290

VDEN4 395

Fonte: Lanciotti et al. (1992).

4.6 Análise estatística

Os dados referentes à quantidade de alados de A. aegypti registrados por

bairro, mês e períodos do ano, bem como os climáticos (temperatura, umidade relativa

do ar e precipitação pluviométrica) foram avaliados quanto ao ajuste à distribuição

normal, por meio do teste de Lilliefors e à homocedasticidade, por meio do teste de

Levene (ZAR, 1999; STATSOFT, 2001). Sempre que os dados não se ajustaram à

distribuição normal ou não tiveram variâncias homogêneas, estes foram transformados

(ZAR, 1999) e, novamente, submetidos ao exame de ajuste à normalidade e à

homocedasticidade. Sempre que as premissas relativas à utilização de testes

paramétricos não puderam ser observadas, análises não-paramétricas correspondentes

foram utilizadas.

Para examinar a variação da quantidade de alados de A. aegypti ao longo do

período de amostragem foi utilizado o Teste de Kruskal-Wallis (ZAR, 1999). Para

examinar a relação entre quantidade de alados A. aegypti e as variáveis climáticas de

umidade relativa do ar, precipitação pluviométrica e temperatura do ar, foi utilizada a

Correlação por postos de Spearman (ZAR, 1999). O nível de significância adotado para

se rejeitar a hipótese nula foi 5%. O banco dados deste estudo foi elaborado utilizando-

se o software Microsoft Excel 2007 e as análises de dados foram realizadas por meio do

pacote estatístico STATISTICA 6.0 (STATSOFT, 2001).

5 RESULTADOS

5.1 Densidade populacional de A. aegypti e variáveis climáticas

Foram coletados 563 mosquitos A. aegypti, nos oito bairros do município de

São Luís em três períodos de realização da pesquisa: 141 no seco (novembro e

dezembro de 2008), 272 no chuvoso (março e abril de 2009) e 150 no intermediário

(julho e agosto de 2009). Destes 368 eram fêmeas (65,37%) e 195 machos (34,63%). O

período chuvoso foi o que obteve a maior frequência de alados com 48,32% dos

mosquitos coletados e o seco a manor, com 25,04% (Tabela 1), no entanto os testes

estatísticos do número de espécimes em relação aos períodos de coleta, não mostraram

diferença significativa (p = 0,1965) (Figura 5).

Na comparação entre os meses, observou-se que em março de 2009 foi obtido

o maior percentual de alados, com 30,75% e o mês de dezembro de 2008 o menor

índice, com 9,41% (Tabela 2). A análise da densidade de A. aegypti por mês também

não mostrou significância (p = 0,2423) (Figura 6).

Tabela 1. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados nos períodos seco, chuvoso e

intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão, 2008-2009.

Mosquitos A. aegypti

Período

Fêmeas (♀) Machos (♂)

Total

Seco

94 47 141 (25,04%)

Chuvoso

182 90 272 (48,32%)

Intermediário

92 58 150 (26,64%)

Total

368 (65,37%) 195 (34,63%) 563 (100,00%)

Tabela 2. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados mensalmente nos períodos seco,

chuvoso e intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão, 2008-

2009.

Mosquitos A. aegypti

Mês e Ano

Fêmeas (♀) Machos (♂)

Total

Novembro de 2008

51 37 88 (15,63%)

Dezembro de 2008

43 10 53 (9,41%)

Março de 2009

122 51 173 (30,75%)

Abril de 2009

60 39 99 (17,58%)

Julho de 2009

58 35 93 (16,51%)

Agosto de 2009

34 23 57 (10,12%)

Total

368 (65,37%) 195 (34,63%) 563 (100,00%)

Figura 6

Adultos de A. aegypti registrados nos períodos seco, chuvoso e

intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão. Teste

Kruskal-Wallis = 3,253983; p = 0,1965.

Em relação aos dados climatológicos, observou-se que o mês de novembro de

2008 registrou a maior temperatura média mensal, com 29,14ºC, e o mês de abril de

2009 a menor do período de estudo, com 26,22ºC (Tabela 3). Quanto à umidade relativa

do ar média mensal, o mês de abril apresentou maior percentual com 87,43% e o mês de

novembro a menor, com 68,16% (Tabela 4). Na comparação entre os meses em relação

à precipitação pluviométrica mensal, novamente os meses de novembro e abril tiveram

destaque. No primeiro não houve o registro de chuvas e no segundo, a maior incidência

com o acumulado de 537,6 mm (Tabela 5). Os dados climatológicos foram fornecidos

pelo Laboratório de Meteorologia do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual

do Maranhão, no município de São Luís, Maranhão.

Figura 7

Adultos de A. aegypti registrados entre os meses de novembro de 2008 e

agosto de 2009, nos períodos seco, chuvoso e intermediário em bairros do

município de São Luís, Maranhão. Teste Kruskal-Wallis = 6,719955; p =

0,2423.

Tabela 3. Médias mensais de temperatura registradas no município de São Luís, Maranhão, no

período de novembro de 2008 a agosto de 2009.

Mês / Ano

Temperatura Média

Máxima Mensal

(ºC)

Temperatura Média

Mínima Mensal

(ºC)

Temperatura Média

Mensal

(ºC)

Nov. / 2008 32,88 25,40 29,14

Dez. / 2008 32,05 25,17 28,61

Mar. / 2009 29,90 23,46 26,68

Abr. / 2009 29,24 23,21 26,22

Jul. / 2009 32,16 22,30 27,23

Ago. / 2009 32,70 23,06 27,88

Fonte: Laboratório de Meteorologia do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão, São Luís,

Maranhão.

Tabela 4. Médias mensais relativas à umidade relativa do ar, registradas no município de São

Luís, Maranhão, no período de novembro de 2008 a agosto de 2009.

Mês / Ano

Umidade Relativa do

Ar Média Máxima

Mensal

(%)

Umidade Relativa do

Ar Média Mínima

Mensal

(%)

Umidade Relativa do

Ar Média Mensal

(%)

Nov. / 2008 82,26 54,06 68,16

Dez. / 2008 88,83 57,03 72,93

Mar. / 2009 97,93 72,45 85,19

Abr. / 2009 98,70 76,16 87,43

Jul. / 2009 99,41 65,29 82,35

Ago. / 2009 96,70 60,64 78,67

Fonte: Laboratório de Meteorologia do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão, São Luís,

Maranhão.

Tabela 5. Precipitação pluviométrica mensal registrada no município de São Luís, Maranhão,

no período de novembro de 2008 a agosto de 2009.

Mês / Ano

Precipitação Pluviométrica Mensal

(mm)

Nov. / 2008 0

Dez. / 2008 40,6

Mar. / 2009 442,2

Abr. / 2009 537,6

Jul. / 2009 82,4

Ago. / 2009 23,2

Fonte: Laboratório de Meteorologia do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão, São Luís,

Maranhão.

Os resultados da correlação entre a quantidade de exemplares de A. aegypti e

variáveis climáticas encontram-se na Tabela 6. Em relação aos fatores abióticos (médias

de temperatura, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica) e o número de

alados não foi observada correlação positiva e negativa. Os maiores valores de

Correlação de Spearman referiram-se à associação entre número total de alados e a

umidade relativa do ar média mensal, e número total de alados e a umidade relativa do

ar média mensal mínima com 0,771429 (p = 0,072397). A Correlação de Spearman

mostrou menor valor de associação, em relação a número de alados e temperatura média

mensal mínima, com - 0,771429 (p = 0,072397).

Tabela 6. Associação entre quantidade de alados de A. aegypti e fatores abióticos nos períodos

seco, chuvoso e intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão.

Pares de Variáveis N R t p-level

Alados x PP 6 0,714286

2,04124 0,110787

Alados x URA Média Mensal 6 0,771429

2,42467 0,072397

Alados x URA Média Mensal Máx. 6 0,6 1,5 0,208

Alados x URA Média Mensal Min. 6 0,771429

2,42467 0,072397

Alados x T Média Mensal 6 -0,2 -0,40825 0,704

Alados x T Média Mensal Máx. 6 -0,542857

-1,29279 0,265703

Alados x T Média Mensal Min. 6 -0,771429

-2,42467 0,072397

PP = Precipitação Pluviométrica; URA = Umidade Relativa do Ar; T = Temperatura; Máx. = máxima; Min. =

mínima; R = Correlação de Spearman.

Fonte: Laboratório de Meteorologia do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão , São Luís,

Maranhão.

5.2 Densidade populacional de A. aegypti por bairros

Os espécimes foram coletados nos bairros previamente sorteados nos distritos

Centro e Cohab. No período seco, o bairro João Paulo (Distrito Centro) apresentou

maior percentual de alados, com 39,75%, (56 exemplares, sendo 37 fêmeas e 19

machos), sendo seguido pelo Goiabal (Distrito Centro) com 27,66% (39 espécimes,

sendo 23 fêmeas e 16 machos). No mesmo período, o Coréia de Baixo (Distrito Centro)

registrou a menor incidência de A.aegypti, com apenas 2,12% (3 exemplares fêmeas),

sendo seguido pelos bairros Residencial Canudos (Distrito Cohab) (4 mosquitos, sendo

3 fêmeas e 1 macho) e Conjunto Cohatrac I (Distrito Cohab) (4 fêmeas) com 2,83%

cada (Tabela 7).

Tabela 7. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados por bairro, em São Luís, Maranhão, no

período de novembro e dezembro de 2008.

Formas adultas Bairros Número de

exemplares (%)

Fêmeas (♀) Machos (♂)

Coréia de Baixo 3 (2,12) 3 -

Lira 6 (4,25) 6 -

Goiabal 39 (27,66) 23 16

João Paulo 56 (39,75) 37 19

Itapiracó 8 (5,67) 4 4

Residencial Canudos 4 (2,83) 3 1

Conjunto Cohatrac I 4 (2,83) 4 -

Vila Luisão 21 (14,89) 14 7

Total 141 (100) 94 (72,86%) 47 (27,14%)

Em relação ao período chuvoso, o bairro com maior quantidade de espécimes

coletados também foi o João Paulo, com 84 exemplares (51 fêmeas e 33 machos), o

equivalente a 30,91%. O segundo com maior densidade de alados de A. aegypti foi o

Lira com 21,32% (58 exemplares, com 43 fêmeas e 15 machos). Os bairros com

menores valores foram o Residencial Canudos, com 1,83% (5 alados, sendo 3 fêmeas e

2 machos) e o Itapiracó com 4,41% (12 exemplares, sendo 7 fêmeas e 5 machos)

(Tabela 8).

Tabela 8. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados por bairro em São Luís, Maranhão, no

período de março e abril de 2009.

Formas adultas Bairros Número de

exemplares (%)

Fêmeas (♀) Machos (♂)

Coréia de Baixo 21 (7,72) 13 8

Lira 58 (21,32) 43 15

Goiabal 42 (15,44) 29 13

João Paulo 84 (30,91) 51 33

Itapiracó 12 (4,41) 7 5

Residencial Canudos 5 (1,83) 3 2

Conjunto Cohatrac I 36 (13,23) 30 6

Vila Luisão 14 (5,14) 6 8

Total 272 (100) 182 (66,91%) 90 (33,09%)

No período intermediário, os bairros com maior quantidade de espécimes

coletados foram o Goiabal (Distrito Centro) com 33,35% (50 exemplares, sendo 33

fêmeas e 17 machos) e novamente o João Paulo com 23,33% (35 alados, com 22 fêmeas

e 13 machos). Os menores valores foram registrados no Conjunto Cohatrac I com

2,00% (3 fêmeas) e Residencial Canudos com 3,33% (5 espécimes, sendo 2 fêmeas e 3

machos) (Tabela 9).

Tabela 9. Frequência de exemplares de A. aegypti coletados por bairro em São Luís, Maranhão, no

período de julho e agosto de 2009.

Formas adultas Bairros Número de

exemplares (%)

Fêmeas (♀) Machos (♂)

Coréia de Baixo 12 (8,00) 9 3

Lira 21 (14,00) 9 12

Goiabal 50 (33,35) 33 17

João Paulo 35 (23,33) 22 13

Itapiracó 10 (6,66) 7 3

Residencial Canudos 5 (3,33) 2 3

Conjunto Cohatrac I 3 (2,00) 3 -

Vila Luisão 14 (9,33) 7 7

Total 150 (100) 92 (61,33%) 58 (38,67%)

O Teste de Kruskal-Wallis mostrou que a quantidade de alados variou

significativamente entre os bairros (p = 0,0094), sendo o João Paulo e o Goiabal os que

apresentaram as densidades mais elevadas considerando-se o total de espécimes

coletados nos três períodos (Figura 7).

5.3 Análises Viral e Molecular

Foi realizado o isolamento viral de todas as amostras, porém não foi

constatada positividade para os vírus dengue. Também se utilizou a RT-PCR para

detecção do vírus dengue em todas as amostras com exceção da AR757003 (4 fêmeas

de A. aegypti do Conjunto Cohatrac I), devido à reduzida quantidade de material

sobrenadante. A Tabela 10 mostra a relação dos A. aegypti coletados no período seco,

com os resultados das análises viral e molecular. Não se encontrou positividade em

nenhum dos lotes (Figura 8).

Figura 8

Adultos de A. aegypti registrados por bairro, no município de São Luís,

Maranhão. Teste Kruskal-Wallis = 18,63852; p = 0,0094.

Tabela 10. Relação de lotes de mosquitos A. aegypti por bairro, referente ao período seco (novembro e

dezembro de 2008).

Número de

registro

Mosquitos

/lote

Bairro Resultado do

Isolamento Viral

Resultado da

RT-PCR

AR756993 3 ♀ Coréia de Baixo Negativo Negativo

AR756994 6 ♀ Lira Negativo Negativo

AR756995 23 ♀ Goiabal Negativo Negativo

AR756996 16 ♂ Goiabal Negativo Negativo

AR756997 37 ♀ João Paulo Negativo Negativo

AR756998 19 ♂ João Paulo Negativo Negativo

AR756999 4 ♀ Itapiracó Negativo Negativo

AR757000 4 ♂ Itapiracó Negativo Negativo

AR757001 3 ♀ Residencial Canudos Negativo Negativo

AR757002 1 ♂ Residencial Canudos Negativo Negativo

AR757003 4

♀

Conjunto Cohatrac I Negativo Não realizado

AR757004 14

♀

Vila Luisão Negativo Negativo

AR757005 7 ♂ Vila Luisão Negativo Negativo

Legenda

1. AR756993

2. AR756994

3. AR756995

4. AR756996

5. AR756997

6. AR756998

7. AR756999

8. AR757000

9. AR757001

10. AR757002

11. AR757004

12. AR757005

13. C + VDEN1 (482 pb)

14. C + VDEN2 (119 pb)

15. C + VDEN3 (290 pb)

16. C + VDEN4 (392 pb)

17. C - Água (H

18. Peso Molecular (Low DNA

Mass Ladder)

Figura 9

Amostras de A. aegypti, referentes ao período seco, visualizadas em gel de agarose a 2%,

após coloração com brometo de etídio.

Em relação ao período chuvoso, a tentativa de isolamento viral e a RT-PCR

das amostras também não atestaram positividade para os vírus dengue (Tabela 11 e

Figura 9).

Tabela 11. Relação de lotes de mosquitos A. aegypti por bairro, referente ao período chuvoso (março e

abril de 2009).

Número de

registro

Mosquitos

/lote

Bairro Resultado do

Isolamento Viral

Resultado da

RT-PCR

AR759640 13 ♀ Coréia de Baixo Negativo Negativo

AR759641 8 ♂ Coréia de Baixo Negativo Negativo

AR759642 33 ♀ Lira Negativo Negativo

AR759643 10 ♀ Lira Negativo Negativo

AR759544 15 ♂ Lira Negativo Negativo

AR759645 16 ♀ Goiabal Negativo Negativo

AR759646 13 ♀ Goiabal Negativo Negativo

AR759647 13 ♂ Goiabal Negativo Negativo

AR759648 21 ♀ João Paulo Negativo Negativo

AR759649 20 ♀ João Paulo Negativo Negativo

AR759650 9 ♀ João Paulo Negativo Negativo

AR759651 25 ♂ João Paulo Negativo Negativo

AR759652 8 ♂ João Paulo Negativo Negativo

AR759653 1 ♀ João Paulo Negativo Negativo

AR759654 7 ♀ Itapiracó Negativo Negativo

AR759655 5 ♂ Itapiracó Negativo Negativo

AR759656 3 ♀ Residencial Canudos Negativo Negativo

AR759657 2 ♂ Residencial Canudos Negativo Negativo

AR759658 13 ♀ Conjunto Cohatrac I Negativo Negativo

AR759659 17 ♀ Conjunto Cohatrac I Negativo Negativo

AR759660 6 ♂ Conjunto Cohatrac I Negativo Negativo

AR759661 6 ♀ Vila Luisão Negativo Negativo

AR759662 8

♂ Vila Luisão Negativo Negativo

Legenda

1. AR759640

2. AR759641

3. AR759642

4. AR759643

5. AR759644

6. AR759645

7. AR 759646

8. AR759647

9. AR759648

10. AR759649

11. AR759650

12. AR759651

13. AR759652

14. AR759653

15. AR759654

16. AR759655

17. AR759656

18. AR759657

19. AR759658

20. AR759659

21. AR759660

22. AR759661

23. AR759662

24. C+ D1 (482 pb)

25. C + VDEN2 (119 pb)

26. C + VDEN3 (290 pb)

27. C + VDEN4 (392 pb)

28. C - Água (H

29. Peso Molecular (Low DNA

Mass Ladder)

Figura 10

Amostras de A. aegypti referentes ao período chuvoso, visualizadas em gel de agarose a 2%, após

coloração com brometo de etídio.

Quanto ao período intermediário, a tentativa de isolamento viral e a RT-PCR

das amostras mais uma vez não mostraram positividade para os vírus dengue (Tabela

12).

Tabela 12. Relação de lotes de mosquitos A. aegypti por bairro, referente ao período intermediário

(julho e agosto de 2009).

Número de

registro

Mosquitos

/lote

Bairro Resultado do

Isolamento Viral

Resultado da

RT-PCR

AR765222 9 ♀ Coréia de Baixo Negativo Negativo

AR765223 3 ♂ Coréia de Baixo Negativo Negativo

AR765226 9 ♀ Lira Negativo Negativo

AR765227 12 ♂ Lira Negativo Negativo

AR765230 33 ♀ Goiabal Negativo Negativo

AR765231 17 ♂ Goiabal Negativo Negativo

AR765234 22 ♀ João Paulo Negativo Negativo

AR765235 13 ♂ João Paulo Negativo Negativo

AR765238 7 ♀ Itapiracó Negativo Negativo

AR765239 3 ♂ Itapiracó Negativo Negativo

AR765256 2

♀

Residencial Canudos Negativo Negativo

AR765257 3 ♂ Residencial Canudos Negativo Negativo

AR765269 3

♀

Conjunto Cohatrac I Negativo Negativo

AR765271 7

♀

Vila Luisão Negativo Negativo

AR765272 7 ♂ Vila Luisão Negativo Negativo

6 CONCLUSÕES

- A maior densidade de alados de A. aegypti foi registrada no período chuvoso, no

município de São Luís, Maranhão;

- Não foi verificada correlação positiva e/ou negativa entre os fatores climáticos

(precipitação pluviométrica, umidade relativa do ar e temperatura) e quantidade de

alados de A. aegypti coletados;

- Todas as amostras de A. aegypti coletadas no município de São Luís foram negativas

para o vírus dengue;

- O Distrito Centro apresentou os bairros com maior índice de infestação por A. aegypti,

sendo o João Paulo e o Goiabal os que obtiveram densidade significativa em relação aos

outros bairros no período de estudo.

REFERÊNCIAS

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WHO – WORLD HEALTH ORGANIZATION. Dengue and dengue hemorrhagic

fever: Diagnosis, Treatment, Prevention and Control. 2 ed. Genebra: WHO, 1997.

APÊNDICES

1 Apêndice 1

1.1 Primeiro Artigo Científico

1.1.1 Classificação do Qualis do Periódico na área de Medicina II:

ISSN Título Estrato Área de Avaliação

0034-8910

Revista de Saúde Pública

(USP. Impresso)

B2 MEDICINA II

1.1.2 Normas Editoriais:

Artigos Originais. Incluem estudos observacionais, estudos experimentais

ou quase-experimentais, avaliação de programas, análises de custo-efetividade, análises

de decisão e estudos sobre avaliação de desempenho de testes diagnósticos para triagem

populacional. Cada artigo deve conter objetivos e hipóteses claras, desenho e métodos

utilizados, resultados, discussão e conclusões. Incluem também ensaios teóricos (críticas

e formulação de conhecimentos teóricos relevantes) e artigos dedicados à apresentação

e discussão de aspectos metodológicos e técnicas utilizadas na pesquisa em saúde

pública. Neste caso, o texto deve ser organizado em tópicos para guiar os leitores quanto

aos elementos essenciais do argumento desenvolvido.

Preparação do Manuscrito. Devem ser digitados em extensão .doc, .txt ou

.rtf, com letras Arial, corpo 12, página em tamanho A-4, incluindo resumos,

agradecimentos, referências e tabelas. Todas as páginas devem ser numeradas. Deve-se

evitar no texto o uso indiscriminado de siglas, excetuando as já conhecidas. Os critérios

éticos da pesquisa devem ser respeitados. Para tanto os autores devem explicitar em

Métodos que a pesquisa foi conduzida dentro dos padrões exigidos pela Declaração de

Helsinque e aprovada pela comissão de ética da instituição onde a pesquisa foi

realizada. Aceitam-se manuscritos nos idiomas português, espanhol e inglês. Para

aqueles submetidos em português oferece-se a opção de tradução do texto completo

para o inglês e a publicação adicional da versão em inglês em meio eletrônico.

Independentemente do idioma empregado, todos manuscritos devem apresentar dois

resumos, sendo um em português e outro em inglês. Quando o manuscrito for escrito em

espanhol, deve ser acrescentado um terceiro resumo nesse idioma.

Dados de identificação:

a) Título do artigo - deve ser conciso e completo, limitando-se a 93 caracteres, incluindo

espaços. Deve ser apresentada a versão do título em inglês.

b) Título resumido - com até 45 caracteres, para fins de legenda nas páginas impressas.

c) Nome e sobrenome de cada autor, seguindo formato pelo qual é indexado.

d) Instituição a que cada autor está afiliado, acompanhado do respectivo endereço (uma

instituição por autor).

e) Nome e endereço do autor responsável para troca de correspondência.

f) Se foi subvencionado, indicar o tipo de auxílio, o nome da agência financiadora e o

respectivo número do processo.

g) Se foi baseado em tese, indicar o nome do autor, título, ano e instituição onde foi

apresentada.

h) Se foi apresentado em reunião científica, indicar o nome do evento, local e data da

realização.

Descritores. Devem ser indicados entre 3 e 10, extraídos do vocabulário

"Descritores em Ciências da Saúde" (DeCS), quando acompanharem os resumos em

português, e do Medical Subject Headings (MeSH), para os resumos em inglês. Se não

forem encontrados descritores disponíveis para cobrirem a temática do manuscrito,

poderão ser indicados termos ou expressões de uso conhecido.

Agradecimentos. Devem ser mencionados nomes de pessoas que prestaram

colaboração intelectual ao trabalho, desde que não preencham os requisitos para

participar da autoria. Deve haver permissão expressa dos nomeados (ver documento

Responsabilidade pelos Agradecimentos). Também podem constar desta parte

agradecimentos a instituições quanto ao apoio financeiro ou logístico.

Referências. As referências devem ser ordenadas alfabeticamente,

numeradas e normalizadas de acordo com o estilo Vancouver. Os títulos de periódicos

devem ser referidos de forma abreviada, de acordo com o Index Medicus, e grafados no

formato itálico. No caso de publicações com até 6 autores, citam-se todos; acima de 6,

citam-se os seis primeiros, seguidos da expressão latina "et al". Exemplos:

Fernandes LS, Peres MA. Associação entre atenção básica em saúde bucal e indicadores

socioeconômicos municipais. Rev Saude Publica. 2005;39(6):930-6.

Forattini OP. Conceitos básicos de epidemiologia molecular. São Paulo: Edusp; 2005.

Karlsen S, Nazroo JY. Measuring and analyzing "race", racism, and racial

discrimination. In: Oakes JM, Kaufman JS, editores. Methods in social epidemiology.

San Francisco: Jossey-Bass; 2006. p. 86-111.

Zinn-Souza LC, Nagai R, Teixeira LR, Latorre MRDO, Roberts R, Cooper SP, et al .

Fatores associados a sintomas depressivos em estudantes do ensino médio de São Paulo,

Brasil. Rev Saude Publica. 2009; 42(1):34-40.

Para outros exemplos recomendamos consultar o documento "Uniform

Requirements for Manuscripts Submitted to Biomedical Journals: Writing and Editing

for Medical Publication" (http://www.icmje.org). Comunicação pessoal, não é

considerada referência bibliográfica. Quando essencial, pode ser citada no texto,

explicitando em rodapé os dados necessários. Devem ser evitadas citações de

documentos não indexados na literatura científica mundial e de difícil acesso aos

leitores, em geral de divulgação circunscrita a uma instituição ou a um evento; quando

relevantes, devem figurar no rodapé das páginas que as citam. Da mesma forma,

informações citadas no texto, extraídas de documentos eletrônicos, não mantidas

permanentemente em sites, não devem fazer parte da lista de referências, mas podem ser

citadas no rodapé das páginas que as citam.

Citação no texto. Deve ser indicado em expoente o número correspondente

à referência listada. Deve ser colocado após a pontuação, nos casos em que se aplique.

Não devem ser utilizados parênteses, colchetes e similares. O número da citação pode

ser acompanhado ou não do (s) nome (s) do (s) autor (es) e ano de publicação. Se forem

citados dois autores, ambos são ligados pela conjunção "e"; se forem mais de dois, cita-

se o primeiro autor seguido da expressão "et al". Exemplos:

Segundo Lima et al

(2006), a prevalência se transtornos mentais em estudantes de

medicina é maior do que na população em geral.

Parece evidente o fracasso do movimento de saúde comunitária, artificial e distanciado

do sistema de saúde predominante.

12,15

A exatidão das referências constantes da listagem e a correta citação no texto

são de responsabilidade do (s) autor (es) do manuscrito.

Tabelas. Devem ser apresentadas separadas do texto, numeradas

consecutivamente com algarismos arábicos, na ordem em que foram citadas no texto. A

cada uma deve-se atribuir um título breve, não se utilizando traços internos horizontais

ou verticais. As notas explicativas devem ser colocadas no rodapé das tabelas e não no

cabeçalho ou título. Se houver tabela extraída de outro trabalho, previamente publicado,

os autores devem solicitar autorização da revista que a publicou, por escrito, para sua

reprodução. Esta autorização deve acompanhar o manuscrito submetido à publicação.

Quadros são identificados como Tabelas, seguindo uma única numeração em todo o

texto.

Figuras. As ilustrações (fotografias, desenhos, gráficos, etc.), devem ser

citadas como figuras. Devem ser numeradas consecutivamente com algarismos

arábicos, na ordem em que foram citadas no texto; devem ser identificadas fora do

texto, por número e título abreviado do trabalho; as legendas devem ser apresentadas ao

final da figura; as ilustrações devem ser suficientemente claras para permitir sua

reprodução, com resolução mínima de 300 dpi. Não se permite que figuras representem

os mesmos dados de Tabela. Não se aceitam gráficos apresentados com as linhas de

grade, e os elementos (barras, círculos) não podem apresentar volume (3-D). Figuras

coloridas são publicadas excepcionalmente. Nas legendas das figuras, os símbolos,

flechas, números, letras e outros sinais devem ser identificados e seu significado

esclarecido. Se houver figura extraída de outro trabalho, previamente publicado, os

autores devem solicitar autorização, por escrito, para sua reprodução. Estas autorizações

devem acompanhar os manuscritos submetidos à publicação.

1.1.3 Artigo Completo:

Título original: Estudo da circulação de vírus dengue em Aedes aegypti

(Diptera: Culicidae) no município de São Luís, Maranhão.

Título em inglês: Study of the circulation of virus dengue in Aedes aegypti

(Diptera: Culicidae) in São Luís, Maranhão.

Título corrido: Sorotipos do dengue em São Luís, Maranhão.

Juliana Maria Trindade Bezerra

1,4

Ana Cecília Ribeiro Cruz

Mayra de Oliveira e Silva

Eliana Vieira Pinto da Silva

Wanderli Pedro Tadei

Valéria Cristina Soares Pinheiro

1. Programa de Pós Graduação em Saúde Materno-Infantil da Universidade

Federal do Maranhão – Mestrado Acadêmico. A correspondência deve ser

dirigida a: Juliana Maria Trindade Bezerra. Curso de Ciências Biológicas,

Laboratório de Entomologia Médica, Universidade Estadual do Maranhão –

Centro de Estudos Superiores de Caxias. Praça Duque de Caxias s/n Morro do

Alecrim, Caxias – MA, 65600-000, Brasil. E-mails: [email protected];

[email protected].

2. Instituto Evandro Chagas – Seção de Arbovirologia e Febres Hemorrágicas.

Rodovia BR-316 km 7 s/n Levilândia, Ananindeua – PA, 67030-000, Brasil.

3. Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia. Laboratório de Malária e

Dengue. Avenida André Araújo 2936 Aleixo, Manaus – AM, 69060-001, Brasil.

4. Universidade Estadual do Maranhão – Centro de Estudos Superiores de

Caxias. Curso de Ciências Biológicas, Laboratório de Entomologia Médica,

Universidade Estadual do Maranhão – Centro de Estudos Superiores de

Caxias. Praça Duque de Caxias s/n Morro do Alecrim, Caxias – MA, 65600-

000, Brasil.

Parte da dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Saúde Materno-Infantil da Universidade Federal do Maranhão

em 2010.

RESUMO

OBJETIVO: Detectar a presença do vírus dengue em alados de Aedes aegypti.

MÉTODOS: Oito bairros foram selecionados aleatoriamente para coleta de

alados de Aedes aegypti no município de São Luís Maranhão, no Nordeste do

Brasil. Foram visitados 320 imóveis, sendo 40 por bairro, em três períodos:

seco (novembro e dezembro de 2008), chuvoso (março e abril de 2009) e

intermediário (julho e agosto de 2009), tanto no intradomicílio quanto no

peridomicílio. Para coleta dos alados, utilizou-se aspirador mecânico acoplado

a uma bateria. Após contagem, identificação e armazenamento a – 86ºC, os

espécimes foram submetidos a análises de detecção viral por métodos

moleculares (RT-PCR) e Isolamento Viral em cultura de células de Aedes

albopictus, linhagem C6/36.

RESULTADOS: Foram coletados 563 mosquitos Aedes aegypti, com maior

frequência de alados no período chuvoso, 272 espécimes (48,32%). Os testes

estatísticos do número de alados em relação aos períodos e meses de coleta,

não mostraram diferença significativa. Os exemplares de Aedes aegypti foram

divididos em lotes para as análises moleculares, considerando-se os bairros de

coleta. O número de lotes diferiu em cada período: 13 no seco, 23 no chuvoso

e 15 no intermediário. O isolamento viral e a RT-PCR dos mosquitos foram

negativos.

CONCLUSÕES: A não detecção de vírus dengue em mosquitos pode estar

relacionada ao reduzido número de casos de dengue registrados no município

de São Luís no período de estudo, indicando baixa endemicidade, o que

dificulta a detecção viral em vetores artrópodes.

DESCRITORES: Aedes aegypti. Vírus Dengue. Isolamento viral. RT-PCR.

ABSTRACT

OBJECTIVE: To detect the presence of dengue virus in winged Aedes aegypti.

METHODS: Eight districts were selected randomly for collection of winged Aedes aegypti in the

municipality of São Luís, Maranhão, in northeastern Brazil. 320 properties were visited, with 40

per quarter, in three periods: dry (November-December 2008), rainy (March-April 2009) and

intermediate (July / August 2009), both indoors and outside the home. For collection of winged

insects, we used mechanical vacuum attached to a battery. After counting, identification and

storage at - 86 ° C, the specimens were submitted t o analysis of viruses by molecular methods

(RT-PCR) and viral isolation in cell cultures of Aedes albopictus, C6/36 strain.

RESULTS: We collected 563 mosquitoes Aedes aegypti, with higher frequency of winged in the

rainy season, 272 specimens (48.32%). Statistical tests of the number of winged individuals in

respect of periods and months of collection, showed no significant difference. Copies of Aedes

aegypti were divided into pools for molecular analysis, considering the neighborhoods of

collection. The number of pools differed in each period: 13 in the dry, 23 in rainy and 15 in the

intermediate. The virus isolation and RT-PCR of mosquitoes were negative.

CONCLUSIONS: The failure to detect dengue virus in mosquitoes may be related to the low

number of reported dengue cases in the city of São Luís during the study period, indicating low

endemic, making it difficult to detect viral vector arthropods.

KEY WORDS: Aedes aegypti. Dengue Virus Dengue.

Viral isolation

. RT-PCR.

INTRODUÇÃO

No Brasil o dengue é hoje objeto da maior campanha de saúde

pública, que se concentra no controle do Aedes aegypti, único vetor

reconhecido como transmissor do vírus do dengue no continente americano.

Este mosquito está adaptado a se reproduzir nos ambientes doméstico e

peridoméstico, utilizando-se de recipientes descartáveis e / ou que armazenam

água potável e que acumulam água de chuvas, comumente encontrados nos

lixos das cidades

No Estado do Maranhão, o Aedes aegypti foi introduzido em São Luís,

capital do Estado, em 1969, mas só chamou a atenção dos órgãos de saúde

pública no ano de 1995, quando foram notificados os primeiros casos de

dengue clássico (DC). Em 2001 foi isolado o vírus dengue sorotipo 2 (VDEN2),

e até julho de 2006, os sorotipos VDEN1, VDEN2 e VDEN3 foram detectados

como circulantes no Estado

. Nos anos de 2006 e 2007 ocorreram 6.540 e

14.616 notificações, respectivamente

2,3

. Além disso, foi observado o aumento

da forma hemorrágica do Dengue (FHD) e a ocorrência de óbitos. durante o

ano de 2007 foram notificados 163 casos, sendo que destes, 7,97% evoluíram

para óbito

. Em 2008, foram notificados 1.256 casos suspeitos de dengue em

São Luís, destes, 608 foram confirmados para DC e 82 evoluíram para a FHD

De janeiro a julho de 2009, o Estado registrou 291 casos suspeitos da doença,

com apenas três casos confirmados para a FHD e nenhum óbito

Considerando-se o dengue como problema de saúde pública e pelo

fato de não existir vacina, a detecção e a sorotipagem do vírus dengue por

Transcriptase Reversa seguida por Reação em Cadeia da Polimerase (RT-

PCR) são uma poderosa ferramenta para a vigilância epidemiológica, utilizando

amostras do vetor, pois a presença do vírus em mosquitos coletados no campo

permite a detecção de sorotipos de seis a oito semanas antes do início das

epidemias

6,7

O objetivo do presente estudo foi identificar a presença do vírus

dengue em adultos de Aedes aegypti em diversas áreas do município de São

Luís, Maranhão, e em diferentes períodos do ano para se obter informações do

comportamento do vírus dengue de acordo com as estações seca e chuvosa.

MÉTODOS

Área de Coleta

A pesquisa foi realizada no Município de São Luís, situado na Ilha de

São Luís, ao norte do Estado do Maranhão (02º 31’ 47” Sul e 44º 18’ 10”

Oeste), altitude de 24,391 m e área de 827 Km

que corresponde

aproximadamente a 0,24% do território do Estado, e com população de

957.515 habitantes

. O clima é tropical quente e úmido, com duas estações: a

chuvosa (janeiro a junho), com precipitação pluviométrica média de 1.954 mm;

e a de estiagem (julho a dezembro). A temperatura varia entre 28 a 30ºC, em

média

Foram selecionados aleatoriamente dois distritos do município de São

Luís e em cada um destes, sorteados quatro bairros, totalizando oito bairros:

Distrito Centro – Coréia de Baixo, Lira, Goiabal e João Paulo; e Distrito Cohab

– Itapiracó, Residencial Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão. As coletas

foram realizadas em quatro quarteirões e dez imóveis por quarteirão,

perfazendo um total de 32 quarteirões e 320 imóveis visitados. As visitas foram

feitas juntamente com supervisores e agentes de controle do dengue da

Secretaria Municipal de Saúde de São Luís.

Coleta dos Alados

As coletas foram realizadas em três períodos: seco (novembro e

dezembro de 2008), chuvoso (março e abril de 2009) e intermediário,

caracterizando o término do chuvoso e início do seco (julho e agosto de 2009).

A captura dos alados foi feita utilizando-se aspirador mecânico segundo Nasci

(1981). Os espécimes foram anestesiados com acetato de etila e transportados

ao Centro de Pesquisa Clínica do Hospital Universitário da Universidade

Federal do Maranhão, para realização da identificação usando as chaves de

identificação de Forattini

(2002) e posterior armazenamento em freezer a –

86º C.

Detecção e sorotipagem do vírus dengue (VDEN)

Os espécimes coletados foram encaminhados ao Laboratório de

Entomologia onde foi feita a confirmação da identificação dos exemplares e aos

Laboratórios de Cultura de Células e Biologia Molecular para tentativa de

isolamento viral e realização da RT-PCR, da Seção de Arbovirologia e Febres

Hemorrágicas, do Instituto Evandro Chagas, em Ananindeua, Pará.

Os espécimes de Aedes aegypti foram divididos em lotes que

continham de 1 a 37 mosquitos e foram macerados em solução de PBS

(tampão salino fosfato pH 7,4) contendo albumina bovina a 0,75%, penicilina

(100 UI/mL) e estreptomicina (100 µg/mL), de acordo com o Protocolo de

Reynes (1995)

O sobrenadante foi filtrado para ser utilizado na extração de RNA e

isolamento viral. As suspensões de mosquitos adultos foram inoculadas em

cultura de células de Aedes albopictus, linhagem C6/36 (American Type

Culture Cell Colection/ATCC), e observadas para verificação de efeito

citopatogênico (ECP) durante 14 dias e analisadas quanto à presença do

VDEN por imunofluorescência indireta utilizando-se anticorpos monoclonais. O

método utilizado foi o descrito previamente por Gubler et al.

(1984)..

. O método de extração de RNA usado foi o do reagente Trizol LS

(Invitrogen/San Diego/USA), seguindo orientações do fabricante. O RNA

extraído foi eluído em água livre de RNAse. O teste de RT-Semi-Nested-PCR

de acordo com Lanciotti et al.

(1992), inclui o gene proteína prM/M. A reação

foi feita em duas etapas, iniciando com a síntese de cDNA a partir de RNA viral

extraído

Análise estatística

Para examinar diferenças entre os períodos e bairros de coleta, foi

utilizado o Teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado para se

rejeitar a hipótese de nulidade foi de 5%. As análises estatísticas foram

realizadas no software System Analysis Statistical

(2001).

RESULTADOS

Foram coletados 563 mosquitos Aedes aegypti, sendo 368 fêmeas

(65,37%) e 195 machos (34,63%). Quanto à distribuição de alados por período,

141 foram coletados no período seco, 272 no chuvoso e 150 no intermediário.

O período chuvoso foi o mais produtivo com 48,32% dos mosquitos coletados e

o seco o menos, com 25,04% (Tabela 1), no entanto os testes estatísticos do

número de espécimes em relação aos períodos de coleta, não mostraram

diferença significativa (p = 0,1965).

Os espécimes foram coletados nos bairros previamente sorteados nos

distritos Centro e Cohab. A quantidade de alados variou significativamente

entre os bairros, sendo o João Paulo e o Goiabal os que apresentaram as

densidades mais elevadas considerando-se o total de espécimes coletados nos

três períodos (p = 0,0094) (Tabela 2). Em relação aos períodos de coleta, no

período seco, o bairro João Paulo (Distrito Centro) apresentou maior percentual

de alados, com 39,75%, (56 exemplares), sendo seguido pelo Vila Luisão

(Distrito Cohab) com 14,89% (21 espécimes). No período chuvoso, o bairro

com maior quantidade de espécimes coletados também foi o João Paulo, com

84 exemplares, o equivalente a 30,91%. O segundo com maior densidade de

alados de Aedes aegypti no mesmo período foi o Lira com 21,32% (58

exemplares). Em relação ao período intermediário, os bairros com maior

quantidade de espécimes coletados foram o Goiabal (Distrito Centro) com

33,35% (50 exemplares) e novamente o João Paulo com 23,33% (35 alados).

Os exemplares de Aedes aegypti foram divididos em lotes que

continham de 1 a 37 mosquitos para as análises moleculares, considerando-se

os bairros de coleta. O número de lotes diferiu em cada período: 13 no seco, 23

no chuvoso e 15 no intermediário. Foi realizado o isolamento viral em todos os

lotes, porém não foi constatada positividade para os vírus dengue. Também se

utilizou a RT-PCR para detecção do vírus dengue em todas as amostras. Não

se encontrou positividade em nenhum dos lotes.

DISCUSSÃO

Os espécimes de Aedes aegypti coletados foram analisados para

detecção e identificação dos sorotipos do dengue circulantes utilizando

técnicas de isolamento viral e análise molecular por RT-PCR. No entanto, não

se registrou positividade em nenhum dos lotes de mosquitos. Este resultado

deve estar relacionado pela redução acentuada de notificações da doença no

município de São Luís, durante o período de estudo. Houve uma baixa

endemicidade no ano de 2008, quando comparado a 2007, e esta situação se

repetiu devendo-se destacar que de janeiro a junho de 2009, não houve

registro de isolamento de VDEN no Estado

, o que atesta a baixa circulação

viral, em comparação ao ano anterior em que se notificou 5.699 casos de

dengue notificados no mesmo período

No Maranhão, na cidade de Caxias e em São Luís Lucena et al.

(2008) realizaram coletas de Aedes aegypti e detectaram a circulação de dois

sorotipos do dengue, o VDEN2 e o VDEN3, respectivamente. Os bairros com

positividade em Caxias foram Castelo Branco e Cangalheiro, e em São Luís,

Pirapora. Os resultados do referido trabalho foram corroborados pelos exames

positivos de pacientes diagnosticados com dengue, confirmando a circulação

dos sorotipos nas duas cidades. Deve-se enfatizar que essas coletas foram

direcionadas aos bairros com ocorrência de casos de dengue em humanos

O isolamento viral e a RT-PCR são alternativas para se conhecer as

taxas de infecção em vetores e monitorar a introdução de novos sorotipos em

áreas com circulação prévia de outros sorotipos

. Pinheiro et al.

(2005) em

estudo feito na cidade de Manaus, Estado do Amazonas, encontraram o

sorotipo VDEN3 em 15 grupos de fêmeas de Aedes aegypti no período anterior

a maior ocorrência de casos de dengue. Em Porto Triunfo, na Colômbia,

Romero-Vivas et al.

(2000) isolaram os sorotipos VDEN1 e VDEN2 em

fêmeas de Aedes aegypti. Outros estudos também têm demonstrado a

importância do isolamento de vírus dengue em mosquitos antes da

disseminação do agente etiológico para a população humana

19,20

Estudos utilizando fêmeas adultas coletadas no campo, obtiveram

altas taxas de infecção, como os 8,52% detectados por Lourenço-de-Oliveira et

al.

(2002) no Rio de Janeiro, e 16% detectados por Urdaneta et al.

(2005),

que coletaram adultos de Aedes aegypti em casas de pessoas infectadas na

Venezuela. Kow et al.

(2001), encontraram uma taxa de 0,133% ao isolar

vírus dengue de machos adultos de Aedes aegypti coletados no campo. Estes

resultados sugerem que a transmissão transovariana do vírus dengue em

Aedes aegypti pode ocorrer com uma freqüência muito baixa na natureza, e

seu papel na persistência viral em áreas urbanas pode não ser muito extensa

Zeidler et al.

(2008) em tentativa de isolamento de vírus dengue em

44 lotes de larvas de Aedes aegypti, coletadas em um bairro com alta

incidência de dengue e alta infestação do vetor, na cidade de Boa Vista, Estado

de Roraima, também não conseguiram detectar positividade nas amostras. O

método para triagem de vírus dengue em larvas de Aedes aegypti não é o mais

adequado para predição de epidemias, dada a sua baixa taxa de infecção

quando comparada com a seleção de fêmeas adultas. Isto pode estar

relacionada ao fato de que as fêmeas, que necessitam de repastos

sanguíneos, têm muito mais probabilidade de se infectar com vírus dengue

No entanto, no Brasil, ainda existem poucos estudos voltados para a

detecção viral do dengue em mosquitos

. Muitas pesquisas se restringem a

apenas analisar dados epidemiológicos, por meio da coleta de soro de

pacientes quando a epidemia já está estabelecida.

Para Pinheiro et al.

(2005) a investigação das taxas de infecção em

mosquitos fornece informações sobre o sorotipo circulante numa localidade,

antes que a doença seja transmitida em níveis elevados, possibilitando a

implementação de medidas preventivas evitando assim epidemias de grandes

proporções.

Em conclusão, a realização de análises de mosquitos pode dar

respostas sobre o período de início da circulação viral e também em que

períodos do ano há intensificação da presença dos vírus dengue, o que permite

o combate ao vetor de forma antecipada à ocorrência de casos de dengue na

população. Sugere-se, portanto, a realização da pesquisa de alados em um

período de tempo mais prolongado, ininterruptamente e de forma simultânea

em diferentes áreas de uma localidade, para aumentar as chances do encontro

de espécimes infectados. O conhecimento do sorotipo que está circulando é

uma informação fundamental para alertar a população da possibilidade de

ocorrência de formas mais graves da doença.

Agradecimentos

Ao Centro de Pesquisa Clínica do Hospital Universitário da Universidade

Federal do Maranhão pelo armazenamento dos espécimes após a

identificação. À Secretaria Municipal de Saúde de São Luís pela

disponibilização dos agentes de controle do dengue e do transporte para

deslocamento aos bairros. Ao Laboratório de Meteorologia do Núcleo

Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão pelo fornecimento dos

dados climatológicos.

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Tabela 1. Percentual de exemplares de A. aegypti coletados nos períodos seco,

chuvoso e intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão.

Mosquitos A. aegypti

Período

Fêmeas (♀) Machos (♂)

Total

Seco 94 47 141 (25,04%)

Chuvoso 182 90 272 (48,32%)

Intermediário 92 58 150 (26,64%)

Total 368 (65,37%) 195 (34,63%) 563 (100,00%)

Teste Kruskal-Wallis = 3,253983; p = 0,1965

Tabela 2. Número de alados coletados por período em bairros de São Luís,

Maranhão, 2008-2009.

Número de alados (%)

Período Seco

Período

Chuvoso

Período

Intermediário

Bairros

Nov. e Dez. /

2008

Mar. e Abr. /

2009

Jul. e Ago. / 2009

Total

Coréia de Baixo

3 (2,12) 21 (7,72) 12 (8,00)

36 (6,39)

Lira 6 (4,25) 58 (21,32) 21 (14,00)

85 (15,09)

Goiabal

39 (27,66) 42 (15,44) 50 (33,35)

131 (23,26)*

João Paulo 56 (39,75) 84 (30,91) 35 (23,33)

175 (31,13)*

Itapiracó

8 (5,67) 12 (4,41) 10 (6,66)

30 (5,32)

Residencial

Canudos

4 (2,83) 5 (1,83) 5 (3,33)

14 (2,48)

Conjunto

Cohatrac I

4 (2,83) 36 (13,23) 3 (2,00)

43 (7,63)

Vila Luisão 21 (14,89) 14 (5,14) 14 (9,33)

49 (8,70)

Total 141 (100,00)

272 (100,00)

150 (100,00)

563 (100,00)

Teste Kruskal-Wallis = 18,63852; p = 0,0094

Significativo a nível de 5%.

Tabela 3. Resultados das análises moleculares por Isolamento Viral e RT-

PCR em mosquitos Aedes aegypti coletados por período em bairros de São

Luís, Maranhão, 2008-2009.

Período Número de

pools

Resultado do

Isolamento Viral

Resultado da

RT-PCR

Seco 13 Negativo Negativo

Chuvoso 23 Negativo Negativo

Intermediário 15 Negativo Negativo

2 Apêndice 2

2.1 Segundo Artigo Científico

2.1.1 Classificação do Qualis do Periódico na área de Medicina II:

ISSN Título Estrato Área de Avaliação

0001-706X Acta Tropica B1 MEDICINA II

2.1.2 Normas Editoriais:

Acta Tropica publica artigos originais, comunicações breves e artigos de

revisão. Trabalhos originais normalmente não devem exceder 10 páginas impressas,

incluindo tabelas e figuras. Comunicações curtas não deve exceder 4 páginas impressas,

incluindo tabelas e figuras. Os manuscritos devem ser acompanhados de uma carta

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Pacientes) e Métodos – Resultados – Discussões – Agradecimentos – Referências.

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(e) Palavras-chave (termos de indexação), normalmente 3-6 itens, devem ser

fornecidos.

As referências devem ser reunidas em ordem alfabética em uma folha

separada. No texto devem ser referidas pelo nome e ano (Sistema de Harvard), o ano

deve ser colocado entre parênteses, por exemplo, (Jones, 1970). Mais do que um artigo

do mesmo autor no mesmo ano devem ser identificados pelas letras A, B, C, etc,

colocado após o ano de publicação. No texto, quando se refere a um trabalho de mais de

dois autores, o nome do primeiro autor deve ser seguido de et al. Referências

bibliográficas devem consistir em nomes e iniciais de todos os autores, ano, título do

documento referido, o título abreviado do periódico, número do volume e da primeira e

última páginas do jornal. Periódicos, livros e vários livros do autor deve estar em

conformidade com os seguintes exemplos:

- Musaka, RA, Nayambati, VM, Nantulya, VM, Majiwa, PAO, Moloo, SK,

Musoke, AJ, 1988. Os perfis de cromossomo Trypanosomacongolese isolados de Kilifi,

Quênia e sua relação com a serodema identidade. Mol. Biochem. Parasitol. 30, 105-112.

- Garcia, L.S., Bruckner, D.A., 1988. Diagnostic Medical Parasitology.

Histológica identificação dos parasitas. Elsevier Sci. Publ. Co. Inc., New York, NY, pp.

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- Scorza, JV, Medina, R., Pérez, H., Hernandez, AG, 1985. Leishmaniose na

Venezuela. In: K.-P. Chang e R.S. Bray (Eds.), Human Doenças Parasitárias, vol. 1,

leishmaniose, Elsevier, Amsterdam, pp. 283-296.

- Títulos das revistas devem ser abreviados de acordo com theList de Serial

Title Word Abbreviations (disponível a partir International Serials Data System, 20 rue

Bachaumont, 75002 Paris, França. ISBN 2-904938-02-8). Referências relativas a dados

não publicados não devem ser citados na lista de referência; trabalhos aceitos para

publicação devem ser referidos como na imprensa. Referências incompleta pode resultar

em atraso da publicação.

2.1.3 Artigo Completo:

Variação sazonal de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) no município de São Luís,

Maranhão, Brasil.

Seasonal variation of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) in São Luís, Maranhão,

Brazil.

Juliana Maria Trindade Bezerra

Jivanildo Pinheiro Miranda

Joaquim Pinto Nunes Neto

Ana Cecília Ribeiro Cruz

Wanderli Pedro Tadei

Valéria Cristina Soares Pinheiro

1. Programa de Pós Graduação em Saúde Materno-Infantil da Universidade Federal do

Maranhão – Mestrado Acadêmico. A correspondência deve ser dirigida a: Juliana Maria

Trindade Bezerra. Curso de Ciências Biológicas, Laboratório de Entomologia Médica,

Universidade Estadual do Maranhão – Centro de Estudos Superiores de Caxias. Praça

Duque de Caxias s/n Morro do Alecrim, Caxias – MA, 65600-000, Brasil. E-mails:

[email protected]; [email protected].

2. Universidade Federal do Maranhão – Centro de Ciências Agrárias e Ambientais.

Rodovia BR-222 km 74 s/n Boa Vista, Chapadinha – MA, 65500-000, Brasil.

3. Instituto Evandro Chagas – Seção de Arbovirologia e Febres Hemorrágicas. Rodovia

BR-316 km 7 s/n Levilândia, Ananindeua – PA, 67030-000, Brasil.

4. Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia. Laboratório de Malária e Dengue.

Avenida André Araújo 2936 Aleixo, Manaus – AM, 69060-001, Brasil.

5. Universidade Estadual do Maranhão – Centro de Estudos Superiores de Caxias.

Curso de Ciências Biológicas, Laboratório de Entomologia Médica, Universidade

Estadual do Maranhão – Centro de Estudos Superiores de Caxias. Praça Duque de

Caxias s/n Morro do Alecrim, Caxias – MA, 65600-000, Brasil.

Resumo: Este estudo objetivou estimar a densidade populacional sazonal do Aedes

aegypti em bairros do município de São Luís, Estado do Maranhão, e analisar a

influência da temperatura, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica na

distribuição dessa espécie. Foram visitados 320 imóveis em oito bairros previamente

sorteados do município: Coréia de Baixo, Lira, Goiabal, João Paulo, Itapiracó,

Residencial Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão. As coletas foram realizadas

em três períodos: seco (novembro e dezembro de 2008), chuvoso (março e abril de

2009) e intermediário (julho e agosto de 2009), nos turnos matutino (08h00 às 12h00) e

vespertino (14h00 às 18h00). Foram coletados 563 mosquitos Aedes aegypti, sendo 141

no seco, 272 no chuvoso e 150 no intermediário. O período chuvoso foi considerado o

mais produtivo em número de mosquitos, sendo no mês de março coletada a maior

quantidade de alados, com 173 espécimes. A análise da quantidade de adultos de Aedes

aegypti em relação aos períodos (p = 0,1965) e meses (p = 0,2423) de coleta, não

mostrou diferenças significantes. Os testes mostraram que a quantidade de alados variou

significativamente entre os bairros, sendo o João Paulo e o Goiabal, localizados na Zona

Central de São Luís, os que apresentaram as densidades mais elevadas considerando-se

o total de espécimes coletados nos três períodos (p = 0,0094). Os dados expostos neste

trabalho demonstram que em São Luís, os fatores climáticos apesar de influenciarem o

desenvolvimento do Aedes aegypti não foram apontados como os principais

responsáveis pela flutuação sazonal desse vetor, o que deve estar relacionado a fatores

sociais, culturais e outros fatores como a concentração populacional e problemas de

saneamento.

Palavras-chave: Aedes aegypti, sazonalidade, densidade populacional.

Abstract: This study aimed to estimate the seasonal population density of Aedes

aegypti in districts of São Luís, Maranhão, and to analyze the influence of temperature,

relative humidity and rainfall distribution of this species. 320 properties were visited in

eight districts previously drawn of the city: “Coréia de Baixo”, “Lira”, “Goiabal”, “João

Paulo”, “Itapiracó”, “Residencial Canudos”, “Conjunto Cohatrac I” and “Vila Luisão”.

Samples were collected in three periods: dry (November-December 2008), rainy

(March-April 2009) and intermediate (July / August 2009), shifts in the morning (08h00

to 12h00) and afternoon (14h00 to 18h00). We collected 563 mosquitoes Aedes aegypti,

with 141 in the dry season, 272 in the rainy and 150 in the intermediate. The rainy

season was considered the most productive in the number of mosquitoes, and in March

collected the largest amount of winged, with 173 specimens. The analysis of the number

of Aedes aegypti adults in relation to periods (p = 0.1965) and months (p = 0.2423)

collection, showed no significant differences. Tests showed that the quantity of winged

varied significantly between districts, and the “João Paulo” and “Goiabal”, located in

the Central Zone of São Luís who had higher densities considering the total of

specimens collected in three periods (p = 0.0094). The data presented in this paper show

that in São Luís despite the climatic factors influence the development of Aedes aegypti

were not indicated as the main responsible for the seasonal fluctuation of this vector,

which should be related to social, cultural and other factors such as population density

and poor sanitation.

Introdução

O Aedes aegypti é o principal vetor do Dengue Clássico (DC) e da Febre

Hemorrágica do Dengue (FHD) nas Américas (Forattini, 2002). A prevenção de

epidemias do dengue depende fundamentalmente da redução populacional do vetor no

domicílio e peridomicílio – principais locais nos quais ocorre a transmissão (Tauil,

2002). Aliado a isso, a eliminação dos recipientes que acumulam água e servem de

habitat para as larvas do Aedes aegypti se constitui no modo mais efetivo de reduzir sua

reprodução e dispersão nos centros urbanos brasileiros, em especial nos municípios da

Região Nordeste do país, que apresentam deficiência nos sistemas de abastecimento

(Gubler, 2002; Caprara et al., 2009).

A expansão geográfica de populações de Aedes aegypti sofre influência de

vários fatores, dentre os quais estão os climáticos (Glasser e Gomes, 2002). A

precipitação pluviométrica é um fator importante na abundância de Aedes aegypti, a

qual influi principalmente na densidade de criadouros devido ao aumento de recipientes

artificiais e naturais com acúmulo de água no extradomicílio, nos períodos e locais com

mais frequência e intensidade de chuva (Costa et al., 2008). Além disso, são cada vez

maiores as evidências de que a ampliação das áreas de disseminação do vetor, e

consequente transmissão da doença, deve-se ao aumento da temperatura do planeta,

especialmente nos últimos 100 anos (Hurtado-Díaz et al., 2007).

No Estado do Maranhão, o Aedes aegypti foi introduzido em 1969, mas só

chamou a atenção dos órgãos de saúde pública no ano de 1995, quando se detectaram os

primeiros casos de DC. No município de São Luís verifica-se alta densidade de imóveis

infestados, o que se deve, entre outros fatores, à grande concentração populacional em

aglomerados de habitações sem saneamento básico na periferia da capital (Rebêlo et al.,

1999). É possível observar acúmulo de lixo nos quintais das residências e em terrenos

baldios, especialmente em áreas de ocupação irregular com condições de vida mais

desfavoráveis onde é limitado o alcance das políticas públicas de saneamento

(Gonçalves Neto et al., 2006).

Esta situação favorece a manutenção do vetor, além da circulação simultânea

de vários sorotipos do dengue no município, o que propicia a ocorrência de casos de

dengue. Em 2008, foram notificados 1.256 casos suspeitos em São Luís, sendo 608

confirmados para o DC e 82 para a FHD (SINAN, 2008). Em 2009, até junho houve

redução acentuada das notificações, com o registro de apenas três casos de FHD e

nenhum óbito (MS, 2009). No entanto, considerando-se a curva epidemiológica do

dengue, as medidas de controle tornaram-se constantes para evitar ou minimizar os

casos anualmente.

Dessa forma, considerando a importância das condições climáticas na dispersão

das populações de Aedes aegypti e a localização do município de São Luís numa área de

transição geográfica, o presente trabalho objetivou estimar a densidade populacional do

vetor em bairros do município nos diferentes períodos do ano, e analisar a influência da

temperatura, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica na distribuição dessa

espécie.

Material e Métodos

A pesquisa foi realizada no município de São Luís, situado na Ilha de São Luís,

ao norte do Estado do Maranhão (02º 31’ 47” Sul e 44º 18’ 10” Oeste), altitude de

24,391 m e área de 827 Km

que corresponde aproximadamente a 0,24% do território

do Estado, e com população de 957.515 habitantes (IBGE-Cid@des, 2008). O clima é

tropical quente e úmido, com duas estações: a chuvosa (janeiro a junho), com

precipitação pluviométrica média de 1.954 mm; e a de estiagem (julho a dezembro). A

temperatura varia entre 28 a 30ºC, em média (GEPLAN, 2002).

Foram selecionados aleatoriamente dois distritos do município de São Luís e

em cada um destes, sorteados quatro bairros, totalizando oito bairros: Distrito Centro –

Coréia de Baixo, Lira, Goiabal e João Paulo; e Distrito Cohab – Itapiracó, Residencial

Canudos, Conjunto Cohatrac I e Vila Luisão. As coletas foram realizadas em 320

imóveis, sendo visitados 40 por bairro. As visitas foram feitas juntamente com

supervisores e agentes de controle do dengue da Secretaria Municipal de Saúde de São

Luís.

O Distrito Centro localizado na área central do município, caracteriza-se por

apresentar casarões antigos, alguns inclusive abandonados, com bairros possuindo

esgoto a céu aberto ou mesmo córregos próximos às residências, o que favorece o

acúmulo de lixo jogado pela população. O Distrito Cohab, situado mais à periferia do

município compreende uma área com extensa vegetação, o que contribui para a criação

de insetos, e nos bairros algumas ruas não possuem asfaltamento, além de apresentarem

sistema de saneamento básico deficiente.

As coletas foram realizadas em três períodos: seco (novembro e dezembro de

2008), chuvoso (março e abril de 2009) e intermediário, caracterizando o término do

chuvoso e início do seco (julho e agosto de 2009). A captura dos alados foi feita

utilizando-se aspirador mecânico acoplado a uma bateria de 12 volts (Nasci, 1981)

movimentado embaixo dos móveis e nas partes mais elevadas dos imóveis para

aspiração dos mosquitos que estivessem em repouso tanto no intradomicílio quanto no

peridomicílio. Os espécimes foram anestesiados e transportados ao Centro de Pesquisa

Clínica do Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão, para realização

da identificação em nível de espécie, com chaves de identificação de Forattini (2002) e

posterior armazenamento em freezer a – 86º C.

Para o tratamento estatístico, foram utilizados os dados da quantidade de

alados coletados por bairro, mês e período (seco, chuvoso e intermediário), bem como

os climáticos (temperatura, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica). Para

examinar diferenças entre os períodos de coleta foi utilizado o Teste de Kruskal-Wallis,

e para examinar as relações entre quantidade de mosquitos adultos e dados climáticos,

foi utilizada a Correlação de Spearman. O nível de significância adotado para se rejeitar

a hipótese de nulidade foi de 5%. As análises estatísticas foram realizadas no software

System Analysis Statistical (Statsoft, 2001).

Resultados

Foram coletados 563 mosquitos Aedes aegypti, em oito bairros do município de

São Luís, nos três períodos de realização da pesquisa: 141 no seco (novembro e

dezembro de 2008), 272 no chuvoso (março e abril de 2009) e 150 no intermediário

(julho e agosto de 2009). Do total de alados, 368 eram fêmeas (65,37%) e 195 (34,63%)

eram machos. O período chuvoso foi o mais produtivo em número de mosquitos e no

mês de março foi coletada a maior quantidade de alados, com 30,75% (173 espécimes)

(Tabela 1). No entanto, a análise da quantidade de adultos de Aedes aegypti em relação

aos períodos (p = 0,1965) e meses (p = 0,2423) de coleta, não mostrou diferenças

significantes.

A pesquisa revelou que o mês com maior índice acumulado de chuvas foi abril

de 2009, alcançando o registro de 537,6 mm, sendo este o que apresentava o segundo

maior número de alados (17,58%). Registrou a temperatura média máxima, o mês de

novembro de 2008, com 32,88 ºC, sendo o mês mais quente, e também foi o período

sem ocorrência de chuvas. Neste mês foram coletados 15,63% dos espécimes. Em

relação à umidade relativa do ar, observou-se o maior registro médio mensal no mês de

julho de 2009, quando foram coletados 93 alados (Tabela 1).

Os resultados da correlação entre a quantidade de exemplares de Aedes aegypti

e variáveis climáticas encontram-se na Tabela 2. Em relação aos fatores abióticos

(médias de temperatura, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica) e o

número de alados não foi observada correlação positiva e negativa. Os maiores valores

de Correlação de Spearman referiram-se à associação entre número total de alados e a

umidade relativa do ar média mensal, e número total de alados e a umidade relativa do

ar média mensal mínima com 0,771429 (p = 0,072397). A Correlação de Spearman

mostrou menor valor de associação, em relação a número de alados e temperatura média

mensal mínima, com - 0,771429 (p = 0,072397).

Os espécimes foram coletados nos bairros previamente sorteados nos distritos

Centro e Cohab. A quantidade de alados variou significativamente entre os bairros,

sendo o João Paulo e o Goiabal os que apresentaram as densidades mais elevadas

considerando-se o total de espécimes coletados nos três períodos (p = 0,0094). Em

relação aos períodos de coleta, no período seco, o bairro João Paulo (Distrito Centro)

apresentou maior percentual de alados, com 39,75%, (56 exemplares), sendo seguido

pelo Vila Luisão (Distrito Cohab) com 14,89% (21 espécimes). No período chuvoso, o

bairro com maior quantidade de espécimes coletados também foi o João Paulo, com 84

exemplares, o equivalente a 30,91%. O segundo com maior densidade de alados de

Aedes aegypti no mesmo período foi o Lira com 21,32% (58 exemplares). Em relação

ao período intermediário, os bairros com maior quantidade de espécimes coletados

foram o Goiabal (Distrito Centro) com 33,35% (50 exemplares) e novamente o João

Paulo com 23,33% (35 alados) (Tabela 3).

Discussão

A abundância de populações de mosquitos Aedes aegypti pode sofrer

influência de fatores bióticos e abióticos, potencialmente envolvidos com flutuações das

populações. No presente trabalho, foram realizadas coletas de Aedes aegypti em três

períodos: seco, chuvoso e intermediário, obtendo-se um total de 563 mosquitos, sendo

que a maioria dos espécimes foi coletada no período chuvoso. Os resultados de

correlação entre quantidade de exemplares de Aedes aegypti e variáveis climáticas não

mostrou associação entre os fatores abióticos (médias de temperatura, umidade relativa

do ar e precipitação pluviométrica) e número de alados em cada estação e mês de coleta.

No entanto, observou-se variação no número de exemplares coletados, com 141 no

período seco, 272 no chuvoso e 150 no período intermediário. Esse resultado mostra

que os fatores climáticos podem influenciar na densidade de mosquitos nos diferentes

períodos do ano, com aumento do número de espécies na época das chuvas.

Estudos têm mostrado associações entre a variação sazonal e a densidade de

mosquitos do gênero Aedes. Serpa et al. (2006) constataram no município de Potim, São

Paulo, a associação entre o Aedes aegypti e temperatura máxima, e entre Aedes

albopictus e pluviosidade. Na pesquisa realizada por Glasser e Gomes (2002) para

identificar a influência de fatores climáticos e a distribuição das populações de Aedes

aegypti e Aedes albopictus no Estado de São Paulo, observou-se a influência dos índices

pluviométricos nos padrões de expansão geográfica somente para o Aedes aegypti.

No presente estudo observou-se uma densidade significativamente elevada de

alados de Aedes aegypti nos bairros João Paulo e Goiabal. Estes bairros estão situados

no Distrito Centro e apresentam saneamento básico deficiente e esgoto a céu aberto. O

João Paulo é um dos bairros mais populosos de São Luís, e apresenta muitos

estabelecimentos comerciais e feiras, o que certamente propicia grande quantidade de

criadouros para o Aedes aegypti. O Goiabal possui algumas áreas com ampla vegetação,

grande parte das ruas é asfaltada e a maioria das casas possui terrenos extensos onde é

comum a criação de animais domésticos como galinhas e porcos, locais também

considerados estratégicos para o desenvolvimento de vetores.

Nos imóveis do João Paulo e do Goiabal foi comum o encontro de recipientes

utilizados para o armazenamento de água, o que também pode favorecer essa infestação.

Esse aspecto foi apontado por um estudo realizado na Ilha de São Luís, no qual a alta

densidade de imóveis infestados devia-se, entre outros motivos, à grande concentração

populacional em habitações aglomeradas sem saneamento básico na periferia da capital,

situação ainda observada atualmente (Rêbelo et al., 1999). Gonçalves Neto et al. (2006)

em estudo na capital maranhense também detectaram que a maioria da população dispõe

de água do sistema público, entretanto, a descontinuidade no abastecimento desencadeia

a estocagem, já que em muitas ocasiões a água somente chega nas torneiras no período

da madrugada, obrigando a população a armazená-la em depósitos de grande porte.

Nesse contexto, a caixa d’água como criadouro merece atenção especial, uma vez que é

encontrada na maioria das residências como reservatório permanente. Esses depósitos e

outros usados para armazenar podem se transformar em locais ideais para a proliferação

de mosquitos, favorecendo a manutenção de sua população, mesmo em períodos com

baixas precipitações (Forattini e Brito, 2003; Penna, 2003; Caprara et al., 2009). Os

achados de Almeida et al. (2009) em pesquisa feita no Rio de Janeiro, também apontam

que problemas relacionados ao saneamento básico contribuem decisivamente para o

aumento do risco de dengue, devido a constante presença do Aedes aegypti.

Entretanto, embora os mecanismos de dispersão passiva de Aedes aegypti

sejam conhecidos, é importante que se estude a influência de diversos fatores na

expansão geográfica de suas populações, para subsidiar a formulação de estratégias de

vigilância entomológica (Glasser e Gomes, 2000). Os índices de infestação Predial, de

Breteau e de Tipo de Recipiente são ferramentas utilizadas pelos programas de controle

do dengue para medir o nível de infestação vetorial, referentes ao Levantamento de

Índice Rápido para Aedes aegypti – LIRAa (MS, 2007). No entanto, não avaliam a

produtividade dos habitats de Aedes aegypti e não são considerados seguros e

suficientes para mensurar a distribuição e a intensidade dessa infestação (Kuno, 1995).

Quanto ao ambiente do imóvel no qual se encontrou mosquitos em São Luís, a

maioria dos alados foi coletada no intradomicílio, o que demonstra o comportamento

endofílico e endofágico desse mosquito. O ambiente interno do imóvel com

características próprias de temperatura, sombra, locais para repouso, e oferta de sangue

humano, mostra-se bastante propício para esse inseto que está adaptado às condições

antrópicas. Resultado semelhante foi encontrado em estudo realizado em São José do

Rio Preto, São Paulo, que demonstrou que mais de 80% dos adultos de Aedes aegypti

coletados estavam no intradomicílio. Essa permanência no intradomicílio diminui a

eficácia de uma das medidas de controle químico do vetor, a nebulização e o ultra baixo

volume com máquinas acopladas a veículos motorizados. Nesse caso, o inseticida é

aspergido de viaturas que circundam os quarteirões, e a entrada do produto no interior

das residências é dificultada por barreiras físicas como árvores, portas e janelas

fechadas (Barata et al., 2001). Deve-se ressaltar ainda que muitas vezes os agentes de

endemias têm dificuldades para inspecionar o ambiente interno das residências, por

resistência dos moradores, o que possibilita a permanência do vetor na habitação.

Embora os dados expostos neste trabalho não tenham comprovado a influência

dos fatores climáticos temperatura, umidade relativa do ar e precipitação pluviométrica

isoladamente como responsáveis pela flutuação sazonal deste vetor, deve-se ressaltar

que o período de coleta foi restrito a um ano, com amostras para cada estação, sendo

ideal, coletas mensais e repetições anuais. As análises mostraram uma tendência ao

desenvolvimento do mosquito em períodos do ano com aumento da temperatura e

ocorrência de chuvas, pois estes fatores abióticos podem interferir na sua dinâmica

populacional potencializando o aumento do número de criadouros e permitindo o

crescimento da população do mosquito. Deve-se ressaltar que vários outros fatores

precisam ser considerados nos estudos sobre densidade do Aedes aegypti como

criadouros, imóveis, frequência de aplicação de inseticidas, entre outros, pois são tipos

de condições dos fatores que influenciam na densidade populacional do vetor. Além

disso, a urbanização não planejada, com a existência de um sistema deficiente de

abastecimento de água e de saneamento básico nos bairros de São Luís, tem criado

novas oportunidades para reprodução de insetos.

Agradecimentos

Ao Centro de Pesquisa Clínica do Hospital Universitário da Universidade Federal do

Maranhão pelo armazenamento dos espécimes após a identificação. À Secretaria

Municipal de Saúde de São Luís pela disponibilização dos agentes de controle do

dengue e do transporte para deslocamento aos bairros. Ao Laboratório de Meteorologia

do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão pelo fornecimento dos

dados climatológicos.

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Tabela 1. Número de alados de Aedes aegypti e informação relativa aos fatores abióticos no município de São Luís,

Maranhão, 2008-2009.

Temperatura Média Mensal

(ºC)

Umidade Relativa do Ar

Média Mensal (%)

Mês / Ano

Número de

alados (%)

Precipitação

pluviométrica

(mm)

Máxima Mínima Máxima Mínima

Nov. /

2008

88 (15,63) 0 32,88 25,40 82,26 54,06

Dez. /

2008

53 (9,41) 40,6 32,05 25,17 88,83 57,03

Mar. /

2009

173 (30,75) 442,2 29,90 23,46 97,93 72,45

Abr. /

2009

99 (17,58) 537,6 29,24 23,21 98,70 76,16

Jul. / 2009 93 (16,51) 82,4 32,16 22,30 99,41 65,29

Ago. /

2009

57 (10,12) 23,2 32,70 23,06 96,70 60,64

Tabela 2. Associação entre quantidade de alados de Aedes aegypti e fatores abióticos nos períodos seco, chuvoso e

intermediário, em bairros do município de São Luís, Maranhão.

Pares de Variáveis N R t p-level

Alados x PP 6 0,714286 2,04124 0,110787

Alados x URA Média Mensal 6 0,771429 2,42467 0,072397

Alados x URA Média Mensal Máx. 6 0,6 1,5 0,208

Alados x URA Média Mensal Min. 6 0,771429 2,42467 0,072397

Alados x T Média Mensal

6 -0,2 -0,40825 0,704

Alados x T Média Mensal Máx.

6 -0,542857 -1,29279 0,265703

Alados x T Média Mensal Min.

6 -0,771429 -2,42467 0,072397

PP = Precipitação Pluviométrica; URA = Umidade Relativa do Ar; T = Temperatura; máx. = máxima; min. =

mínima; R = Correlação de Spearman.

Fonte: Laboratório de Meteorologia do Núcleo Geoambiental da Universidade Estadual do Maranhão , São Luís,

Maranhão.

Tabela 3. Número de alados coletados por período em bairros de São Luís, Maranhão, 2008-2009.

Número de alados (%)

Período Seco Período Chuvoso

Período

Intermediário

Bairros

Nov. e Dez. / 2008

Mar. e Abr. / 2009

Jul. e Ago. / 2009

Total

Coréia de Baixo 3 (2,12) 21 (7,72) 12 (8,00) 36 (6,39)

Lira 6 (4,25) 58 (21,32) 21 (14,00) 85 (15,09)

Goiabal 39 (27,66) 42 (15,44) 50 (33,35) 131 (23,26)

João Paulo 56 (39,75) 84 (30,91) 35 (23,33) 175 (31,13)

Itapiracó 8 (5,67) 12 (4,41) 10 (6,66) 30 (5,32)

Residencial

Canudos

4 (2,83) 5 (1,83) 5 (3,33) 14 (2,48)

Conjunto Cohatrac

4 (2,83) 36 (13,23) 3 (2,00) 43 (7,63)

Vila Luisão 21 (14,89) 14 (5,14) 14 (9,33) 49 (8,70)

Total 141 (100,00) 272 (100,00) 150 (100,00) 563 (100,00)

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